JPH078238B2 - 組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法 - Google Patents
組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法Info
- Publication number
- JPH078238B2 JPH078238B2 JP60191818A JP19181885A JPH078238B2 JP H078238 B2 JPH078238 B2 JP H078238B2 JP 60191818 A JP60191818 A JP 60191818A JP 19181885 A JP19181885 A JP 19181885A JP H078238 B2 JPH078238 B2 JP H078238B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acid
- bacterial cells
- biomass
- recombinant bacterium
- interferon
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/555—Interferons [IFN]
- C07K14/56—IFN-alpha
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical processes
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 ヨーロツパ特許第Ａ−0,052,861号には、組換え操作に
よつて製造されたインターフエロン、とくにIFN−αを
単離するために細菌細胞を化学的に破壊する方法が記載
されている。その方法は以下の工程を特徴とするもので
ある。
よつて製造されたインターフエロン、とくにIFN−αを
単離するために細菌細胞を化学的に破壊する方法が記載
されている。その方法は以下の工程を特徴とするもので
ある。
（１） 遺伝子工学によつて製造されたIFNを含有する
細菌の懸濁液、とくに大腸菌懸濁液を、無機酸によつて
pH2.0〜2.5に調整し、細菌を死滅させる。
細菌の懸濁液、とくに大腸菌懸濁液を、無機酸によつて
pH2.0〜2.5に調整し、細菌を死滅させる。
（２） 死滅した細菌の細胞を除去する。
（３） 得られたバイオマスを緩衝液、たとえばトリス
（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−1,3−プロパン
ジオール）＋食塩中に再懸濁し、水酸化ナトリウム溶液
でpH7.3に調整して細菌の細胞壁を破壊する。
（２−アミノ−２−ヒドロキシメチル−1,3−プロパン
ジオール）＋食塩中に再懸濁し、水酸化ナトリウム溶液
でpH7.3に調整して細菌の細胞壁を破壊する。
（４） 細菌細胞を除去したのち、溶液中に含まれてい
るインターフエロンを分離し、公知方法でさらに精製す
る。
るインターフエロンを分離し、公知方法でさらに精製す
る。
インターフエロンのようなポリペプチドが機械的影響下
に置いたとき、不安定であることも知られている〔プロ
シーデイングズ・オブ・ザ・ソサイアテイ・フオア・エ
クスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メデイシン
（Proc.Soc.Exp.Biol.Med.）、第146巻、249〜253頁参
照〕。しかも、このような機械的影響が、細菌細胞の機
械的破壊時に発生する剪断力の結果として生じる。この
ような理由から、遺伝子工学によつて形成されたポリペ
プチド、たとえばインターフエロンを単離する方法とし
て、このポリペプチドを高収率に単離できる細菌細胞壁
の機械的破壊はこれまで知られていなかつた。
に置いたとき、不安定であることも知られている〔プロ
シーデイングズ・オブ・ザ・ソサイアテイ・フオア・エ
クスペリメンタル・バイオロジー・アンド・メデイシン
（Proc.Soc.Exp.Biol.Med.）、第146巻、249〜253頁参
照〕。しかも、このような機械的影響が、細菌細胞の機
械的破壊時に発生する剪断力の結果として生じる。この
ような理由から、遺伝子工学によつて形成されたポリペ
プチド、たとえばインターフエロンを単離する方法とし
て、このポリペプチドを高収率に単離できる細菌細胞壁
の機械的破壊はこれまで知られていなかつた。
したがつて、本発明の目的は、組換え操作によつて製造
されたポリペプチドを細菌細胞の機械的破壊によつて細
菌細胞から抽出する改良方法の探究にあつた。
されたポリペプチドを細菌細胞の機械的破壊によつて細
菌細胞から抽出する改良方法の探究にあつた。
本発明は、この目的が、組換え操作によつて得られたポ
リペプチド、たとえば酸安定性インターフエロンを含有
する細菌を無機酸を用い公知方法で死滅させ〔たとえ
ば、ワルロイサーほか（K.H.Wallausser ＆ H.Schmid
t）：殺菌、消毒、貯蔵、化学療法−方法、活性物質、
試験方法（Sterilisation,Desinfektion,Konservierun
g,Chemotherapie−Verfahren,Wirkstoffe,Prufungsverf
ahren）、ゲオルク・テイーメ・フエルラーク（Georg T
hieme Verlag）、シユトウトガルト（Stuttgart）、196
7年、145〜161頁参照〕、これを分離したのち、得られ
たバイオマスをpH2.0〜4.0の酸の水溶液、たとえば希塩
酸のような無機酸または酢酸もしくはプロピオン酸のよ
うなアルカン酸の水溶液に再懸濁し、細菌の細胞壁を発
生させた剪断力により、たとえばホモゲナイザー好まし
くはウルトラ−タラツクス（Ultra-Turrax）型ホモゲナ
イザーを用いて機械的に破壊し、ついで得られた懸濁液
を中和したのち、細胞屑を除去し、溶液中に存在するポ
リペプチドを分離し、公知方法でさらに精製することに
より達成されることを発見し、完成されたものである。
リペプチド、たとえば酸安定性インターフエロンを含有
する細菌を無機酸を用い公知方法で死滅させ〔たとえ
ば、ワルロイサーほか（K.H.Wallausser ＆ H.Schmid
t）：殺菌、消毒、貯蔵、化学療法−方法、活性物質、
試験方法（Sterilisation,Desinfektion,Konservierun
g,Chemotherapie−Verfahren,Wirkstoffe,Prufungsverf
ahren）、ゲオルク・テイーメ・フエルラーク（Georg T
hieme Verlag）、シユトウトガルト（Stuttgart）、196
7年、145〜161頁参照〕、これを分離したのち、得られ
たバイオマスをpH2.0〜4.0の酸の水溶液、たとえば希塩
酸のような無機酸または酢酸もしくはプロピオン酸のよ
うなアルカン酸の水溶液に再懸濁し、細菌の細胞壁を発
生させた剪断力により、たとえばホモゲナイザー好まし
くはウルトラ−タラツクス（Ultra-Turrax）型ホモゲナ
イザーを用いて機械的に破壊し、ついで得られた懸濁液
を中和したのち、細胞屑を除去し、溶液中に存在するポ
リペプチドを分離し、公知方法でさらに精製することに
より達成されることを発見し、完成されたものである。
組換え操作によつて製造された酸安定性インターフエロ
ン、たとえばIFN−α（arg）のようなα−インターフエ
ロンを単離するためには、本発明の方法をpH2.5〜3.5、
好ましくはpH2.5の希塩酸中または１％酢酸中で行うの
がとくに有利である。
ン、たとえばIFN−α（arg）のようなα−インターフエ
ロンを単離するためには、本発明の方法をpH2.5〜3.5、
好ましくはpH2.5の希塩酸中または１％酢酸中で行うの
がとくに有利である。
細菌細胞壁を溶解するのに十分なホモゲナイザーの速度
および時間の長さはバイオマスの密度による。代表的な
バイオマス密度は約1.03〜約1.05である。細菌細胞壁を
溶解するには代表的にはホモゲナイザーの速度は約5000
〜約10000rpmで、かつ時間は約１分〜約10分間である。
而して、たとえば、バイオマス密度1.04の場合、ホモゲ
ナイザーの速度は望ましくは約7000〜8000rpmで、時間
は約２分間である。
および時間の長さはバイオマスの密度による。代表的な
バイオマス密度は約1.03〜約1.05である。細菌細胞壁を
溶解するには代表的にはホモゲナイザーの速度は約5000
〜約10000rpmで、かつ時間は約１分〜約10分間である。
而して、たとえば、バイオマス密度1.04の場合、ホモゲ
ナイザーの速度は望ましくは約7000〜8000rpmで、時間
は約２分間である。
また、場合によつては、沈殿剤たとえばポリエチレンイ
ミンを0.1〜0.5％の濃度で、ホモゲネーシヨン後、中和
前に添加するのが有利である。
ミンを0.1〜0.5％の濃度で、ホモゲネーシヨン後、中和
前に添加するのが有利である。
本発明の方法は、何よりも、実験室的的規模の場合はIK
A−ウルトラ−タラツクス（Ultra-Turrax）T45を用い
て、大規模の場合にはデイスパツクス・リアクター（Di
spax Reactor）３−6/6を用いて実施するのが好ましい
〔いずれもヤンケ・ウント・クンケル・ケージー（Jank
e ＆ Kunkel KG、Ｄ−7831スタウフエン（Staufen）
製〕。
A−ウルトラ−タラツクス（Ultra-Turrax）T45を用い
て、大規模の場合にはデイスパツクス・リアクター（Di
spax Reactor）３−6/6を用いて実施するのが好ましい
〔いずれもヤンケ・ウント・クンケル・ケージー（Jank
e ＆ Kunkel KG、Ｄ−7831スタウフエン（Staufen）
製〕。
ウルトラ・タラツクスT45は分散装置で、羽根が環状に
配置されたスロツトに対しして高速で回転し、この著し
い乱流領域でバクテリアの細胞が押しつぶされる。バク
テリアの細胞を破壊するためには、ホモジナイズするメ
ジウムをとつたビーカー内にこの装置を保持し、ポンプ
作用でメジウムを循環させる。
配置されたスロツトに対しして高速で回転し、この著し
い乱流領域でバクテリアの細胞が押しつぶされる。バク
テリアの細胞を破壊するためには、ホモジナイズするメ
ジウムをとつたビーカー内にこの装置を保持し、ポンプ
作用でメジウムを循環させる。
この装置の速度は約5000〜約10000rpmであり、約１〜10
分後に溶解が完了する。
分後に溶解が完了する。
これに対し、デイスパツクス・リアクター３−6/6ホモ
ジナイザーは、自動誘導式の三段ウルトラ・タラツクス
であり、バクテリア細胞はすべて、一定の流速でホモジ
ナイズ室を通過させられる。その結果、均一に粉砕、ホ
モジナイズされたバクテリアのプレパレーシヨンが得ら
れる。このデイスパツクス・リアクターの回転速度は3,
000〜8,000rpmで、供給圧力は排出口部で大きくて約２
バールである。
ジナイザーは、自動誘導式の三段ウルトラ・タラツクス
であり、バクテリア細胞はすべて、一定の流速でホモジ
ナイズ室を通過させられる。その結果、均一に粉砕、ホ
モジナイズされたバクテリアのプレパレーシヨンが得ら
れる。このデイスパツクス・リアクターの回転速度は3,
000〜8,000rpmで、供給圧力は排出口部で大きくて約２
バールである。
約50の使用バイオマスを完全に溶解する時間は約１〜
10分間である。
10分間である。
第１図にデイスパツクス・リアクター３−6/6型ホモジ
ナイザー全体の横断面を示す。図中、Ｆはホモジナイズ
する材料供給室であり、Ｅは駆動シヤフトＨ上スライデ
イング環状シールであり、Ｇはこの駆動シヤフトの主要
ベアリングである。駆動シヤフト上には３個の円筒状ロ
ーターＣが一列に配置され、これは、ホモジナイザーの
外被壁内側に固定され、相当する形状に作られた静止翼
Ｄとたがいにかみ合つている。駆動シヤフトの末端には
らせん状コンベヤーＢが固定され、これは排出口部Ａに
突出している。静止翼を冷却するためには、冷却水の通
路として導入口Ｌと排出口Ｋをもち、静止翼の周囲に拡
がる冷却室が設けられている。主要ベアリング上のスラ
イデイング環状シールには、水導入口Ｊから冷却水が、
好ましくは加圧下たとえば1.5バールで供給される。円
筒状のローターは、二重ドラムもしくは三重ドラムまた
は多重ドラムとして構築され、ドラムの壁部は相当する
静止翼の相対するドラム壁内の隙間に突出している。ら
せん状コンベヤーＢが駆動されると、ホモジナイズされ
る液体がローターと静止翼の間の隙間を通つて流れ、ロ
ーターの高速回転の結果、生じた剪断力によつてバクテ
リアの細胞壁が破壊され、ホモジナイズされた物質は排
出口部Ａを通つてホモジナイザー外に出る。
ナイザー全体の横断面を示す。図中、Ｆはホモジナイズ
する材料供給室であり、Ｅは駆動シヤフトＨ上スライデ
イング環状シールであり、Ｇはこの駆動シヤフトの主要
ベアリングである。駆動シヤフト上には３個の円筒状ロ
ーターＣが一列に配置され、これは、ホモジナイザーの
外被壁内側に固定され、相当する形状に作られた静止翼
Ｄとたがいにかみ合つている。駆動シヤフトの末端には
らせん状コンベヤーＢが固定され、これは排出口部Ａに
突出している。静止翼を冷却するためには、冷却水の通
路として導入口Ｌと排出口Ｋをもち、静止翼の周囲に拡
がる冷却室が設けられている。主要ベアリング上のスラ
イデイング環状シールには、水導入口Ｊから冷却水が、
好ましくは加圧下たとえば1.5バールで供給される。円
筒状のローターは、二重ドラムもしくは三重ドラムまた
は多重ドラムとして構築され、ドラムの壁部は相当する
静止翼の相対するドラム壁内の隙間に突出している。ら
せん状コンベヤーＢが駆動されると、ホモジナイズされ
る液体がローターと静止翼の間の隙間を通つて流れ、ロ
ーターの高速回転の結果、生じた剪断力によつてバクテ
リアの細胞壁が破壊され、ホモジナイズされた物質は排
出口部Ａを通つてホモジナイザー外に出る。
原理的には、この方法は、細胞崩壊用の他の公知の機械
的方法、たとえば、生化学技術（Biochemical Engineer
ing）358ff頁〔第２版、アカデミツクプレス（Academic
Press）1973〕に記載された方法でも実施できる。しか
しながら、収率は低く、本発明の方法により、ウルトラ
・タラツクスT45またはデイスパツクス・リアクター３
−6/6を使用すれば、供給したバイオマスに対して、こ
れまで知られた方法によるよりも高い収率で、たとえば
インターフエロンが得られる。これは、これまで報告さ
れている従来技術からは、全く予期できないものであつ
た。
的方法、たとえば、生化学技術（Biochemical Engineer
ing）358ff頁〔第２版、アカデミツクプレス（Academic
Press）1973〕に記載された方法でも実施できる。しか
しながら、収率は低く、本発明の方法により、ウルトラ
・タラツクスT45またはデイスパツクス・リアクター３
−6/6を使用すれば、供給したバイオマスに対して、こ
れまで知られた方法によるよりも高い収率で、たとえば
インターフエロンが得られる。これは、これまで報告さ
れている従来技術からは、全く予期できないものであつ
た。
次に、本発明を実施例によつてさらに詳細に説明する
が、これはいかなる意味でも、本発明を限定するもので
はない。
が、これはいかなる意味でも、本発明を限定するもので
はない。
例１ ヒトインターフエロンα−２を含有する大腸菌クローン
HB101/pER33（ヨーロツパ特許出願第Ａ−0,115,613号参
照）のバクテリア懸濁液のpHを無機酸で2.0〜2.5に調整
し、バクテリアを死滅させる。バクテリアの死滅細胞を
懸濁液から分離し、−20℃で低温凍結する。
HB101/pER33（ヨーロツパ特許出願第Ａ−0,115,613号参
照）のバクテリア懸濁液のpHを無機酸で2.0〜2.5に調整
し、バクテリアを死滅させる。バクテリアの死滅細胞を
懸濁液から分離し、−20℃で低温凍結する。
低温凍結したバイオマス20Kg、バツチＡを８℃で１％酢
酸250に懸濁した。バイオマスが完全に融解したの
ち、三段ホモジナイザー（デイスパツクス３−6/6）で
分散させた。完全に分散された分解液に0.1％ポリエチ
レンイミンを沈殿補助剤として加えた。ついで、5N水酸
化ナトリウム溶液を用いてpHを7.5に調整した。２時間
抽出したのち、浸出されたバイオマスを、プレートセパ
レーター〔ウエストフアリア（Westfalia）〕を用いて
通過速度1.5／分で分離した。澄明な液体からサンプ
ルを採取し、インターフエロンおよび蛋白質の含量の定
量試験を行つた。収量:46.9×106I.U./バイオマス1g。
酸250に懸濁した。バイオマスが完全に融解したの
ち、三段ホモジナイザー（デイスパツクス３−6/6）で
分散させた。完全に分散された分解液に0.1％ポリエチ
レンイミンを沈殿補助剤として加えた。ついで、5N水酸
化ナトリウム溶液を用いてpHを7.5に調整した。２時間
抽出したのち、浸出されたバイオマスを、プレートセパ
レーター〔ウエストフアリア（Westfalia）〕を用いて
通過速度1.5／分で分離した。澄明な液体からサンプ
ルを採取し、インターフエロンおよび蛋白質の含量の定
量試験を行つた。収量:46.9×106I.U./バイオマス1g。
ホモジナイザーのインターフエロ収量に対する影響を評
価するため、懸濁したバイオマスを分散前に採取し、ヨ
ーロツパ特許出願第Ａ−0,052,861号に従つて、ホモジ
ネーシヨン工程を行わずに抽出した。3N水酸化ナトリウ
ム溶液でpH7.3に調整した。１時間抽出したのち、実験
室的遠心分離によつて浸出バイオマスから分解液を分離
した。上述したと同様にして、上澄液からサンプルを採
取し、インターフエロンおよび蛋白質含量の定量試験を
行つた。
価するため、懸濁したバイオマスを分散前に採取し、ヨ
ーロツパ特許出願第Ａ−0,052,861号に従つて、ホモジ
ネーシヨン工程を行わずに抽出した。3N水酸化ナトリウ
ム溶液でpH7.3に調整した。１時間抽出したのち、実験
室的遠心分離によつて浸出バイオマスから分解液を分離
した。上述したと同様にして、上澄液からサンプルを採
取し、インターフエロンおよび蛋白質含量の定量試験を
行つた。
ヨーロツパ特許出願第Ａ−0,052,861号に従つた場合の
収量:25.3×106I.U./バイオマス1g。
収量:25.3×106I.U./バイオマス1g。
例２ バツチＢのバイオマスを用い、例１と同様に処理した。
収量:21.3×106I.U./バイオマス1g ヨーロツパ特許出願第Ａ−0,052,861号に従つた場合の
収量:9.7×106I.U./バイオマス1g。
収量:9.7×106I.U./バイオマス1g。
例３ バツチＣのバイオマスを用い、例１と同様に処理した。
収量:13.8×106I.U./バイオマス1g ヨーロツパ特許出願第Ａ−0,052,861号に従つた場合の
収量:5.1×106I.U./バイオマス1g 例４ バツチBC24のバイオマス1,000gを用い、これを希塩酸
（pH2.5;37％塩酸4mlを水で10,000mlとした）10,000ml
中にとり、IKAウルトラ・タラツクスT45を用いて分散さ
せ、例１と同様に処理した。
収量:5.1×106I.U./バイオマス1g 例４ バツチBC24のバイオマス1,000gを用い、これを希塩酸
（pH2.5;37％塩酸4mlを水で10,000mlとした）10,000ml
中にとり、IKAウルトラ・タラツクスT45を用いて分散さ
せ、例１と同様に処理した。
収量:50×106I.U./バイオマス1g
第１図は、本発明によるバクテリア細胞の機械的破壊に
使用できる装置の一例、デイスパツクス・リアクター
（Dispax-Reactor）３−6/6型のホモジナイザーの断面
図を示し、A:供給液体の排出口部、B:らせん状コンベヤ
ー、C:円筒状ローター、D:静止翼、E:スライデイング環
状シール、F:供給液体導入部、G:主要ベアリング、H:駆
動シヤフト、J:冷却用水導入口、ＫおよびL:静止翼用冷
却水のそれぞれ導入口、排出口である。
使用できる装置の一例、デイスパツクス・リアクター
（Dispax-Reactor）３−6/6型のホモジナイザーの断面
図を示し、A:供給液体の排出口部、B:らせん状コンベヤ
ー、C:円筒状ローター、D:静止翼、E:スライデイング環
状シール、F:供給液体導入部、G:主要ベアリング、H:駆
動シヤフト、J:冷却用水導入口、ＫおよびL:静止翼用冷
却水のそれぞれ導入口、排出口である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 ウオルフガング ギブリイ オーストリア国ヴアムペルズドルフ，ダム ストラーセ 20 (72)発明者 クルト コノピトズキイ オーストリア国ウイーン，フツテルドルフ エルストラーセ 141 (56)参考文献 特開 昭57−118798（ＪＰ，Ａ) 特公 昭55−30834（ＪＰ，Ｂ２) 欧州特許110044（ＥＰ，Ａ)
Claims (8)
- 【請求項１】組換え細菌をpH2.0〜4.0の酸の水溶液に懸
濁し、この細菌を剪断力にかけてその細胞壁を破壊し、
そして組換え細菌に含まれる酸安定ポリペプチドを採取
することからなる、組換え細菌に含まれる酸安定ポリペ
プチドの採取方法。 - 【請求項２】剪断力を約5,000〜約10,000rpmの速度での
ホモゲナイゼーションによりつくる特許請求の範囲第１
項の方法。 - 【請求項３】組換え細菌が酸安定インタフェロンを含有
する特許請求の範囲第１項の方法。 - 【請求項４】組換え細菌がα‐インタフェロンを含有す
る特許請求の範囲第１項の方法。 - 【請求項５】組換え細菌がIFN-α２（Arg）を含有する
特許請求の範囲第１項の方法。 - 【請求項６】pH2.5〜3.5で行う特許請求の範囲第１項〜
第５項のいずれか一つの方法。 - 【請求項７】酸の水溶液として無機酸またはアルカン酸
を用いる特許請求の範囲第１項〜第６項のいずれか一つ
の方法。 - 【請求項８】酸の水溶液として希塩酸（pH2.5）または
１％酢酸を用いる特許請求の範囲第１項〜第６項のいず
れか一つの方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE3432196.9 | 1984-09-01 | ||
| DE19843432196 DE3432196A1 (de) | 1984-09-01 | 1984-09-01 | Neues mechanisches aufschlussverfahren von bakterienzellen zur isolierung von rekombinant hergestellten peptiden |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6170984A JPS6170984A (ja) | 1986-04-11 |
| JPH078238B2 true JPH078238B2 (ja) | 1995-02-01 |
Family
ID=6244436
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60191818A Expired - Lifetime JPH078238B2 (ja) | 1984-09-01 | 1985-08-30 | 組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0173924B1 (ja) |
| JP (1) | JPH078238B2 (ja) |
| KR (1) | KR930002886B1 (ja) |
| AT (1) | ATE49231T1 (ja) |
| DE (2) | DE3432196A1 (ja) |
| DK (1) | DK165748C (ja) |
| ES (1) | ES8608038A1 (ja) |
| FI (1) | FI85979C (ja) |
| HU (1) | HU193806B (ja) |
| IE (1) | IE58521B1 (ja) |
| IL (1) | IL76264A (ja) |
| ZA (1) | ZA856640B (ja) |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5196323A (en) * | 1985-04-27 | 1993-03-23 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Process for preparing and purifying alpha-interferon |
| US4675387A (en) * | 1985-07-26 | 1987-06-23 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Method for extracting protein with organic acid |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| US5831022A (en) * | 1986-02-18 | 1998-11-03 | Hoffmann-La Roche Inc. | Purification of recombinant human IL-1α |
| US4801686A (en) * | 1986-09-04 | 1989-01-31 | Immunex Corporation | Purification of recombinant interleukin-1 |
| US5179199A (en) * | 1986-10-20 | 1993-01-12 | Genzyme Corporation | Protein purification |
| US4912200A (en) * | 1987-05-11 | 1990-03-27 | Schering Corporation | Extraction of granulocyte macrophage colony stimulating factor from bacteria |
| US4958007A (en) * | 1988-05-17 | 1990-09-18 | Schering-Plough Corp. | Extraction of human interleukin-4- from bacteria |
| AU2003270380B2 (en) | 2002-09-06 | 2010-07-01 | Genentech, Inc. | Process for protein extraction |
| JP4779537B2 (ja) * | 2005-09-28 | 2011-09-28 | パナソニック株式会社 | 電気掃除機 |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB1432039A (en) * | 1972-11-10 | 1976-04-14 | Dai Nippon Sugar Mfg Co Ltd | Method of treating microorganisms |
| JPS5530834A (en) * | 1978-08-25 | 1980-03-04 | Nec Corp | Method of forming ohmic contact in semiconductor pellet |
| JPS57118798A (en) * | 1980-11-26 | 1982-07-23 | Schering Plough Corp | Obtaining of interferon solution |
| US4315852A (en) * | 1980-11-26 | 1982-02-16 | Schering Corporation | Extraction of interferon from bacteria |
| WO1983002461A1 (en) * | 1982-01-19 | 1983-07-21 | Cetus Corp | Multiclass hybrid interferons |
| WO1984002129A1 (fr) * | 1982-11-22 | 1984-06-07 | Takeda Chemical Industries Ltd | Proteine de l'interferon immun humain et son procede de preparation |
-
1984
- 1984-09-01 DE DE19843432196 patent/DE3432196A1/de not_active Withdrawn
-
1985
- 1985-08-23 DE DE8585110599T patent/DE3575162D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-08-23 AT AT85110599T patent/ATE49231T1/de not_active IP Right Cessation
- 1985-08-23 EP EP85110599A patent/EP0173924B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-29 ES ES546528A patent/ES8608038A1/es not_active Expired
- 1985-08-30 JP JP60191818A patent/JPH078238B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1985-08-30 IE IE214185A patent/IE58521B1/en not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 HU HU853309A patent/HU193806B/hu not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 ZA ZA856640A patent/ZA856640B/xx unknown
- 1985-08-30 IL IL76264A patent/IL76264A/xx not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 DK DK396685A patent/DK165748C/da not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 FI FI853324A patent/FI85979C/fi not_active IP Right Cessation
- 1985-08-30 KR KR1019850006323A patent/KR930002886B1/ko not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR860002571A (ko) | 1986-04-26 |
| ES546528A0 (es) | 1986-06-01 |
| ATE49231T1 (de) | 1990-01-15 |
| HUT39471A (en) | 1986-09-29 |
| DK165748C (da) | 1993-06-14 |
| ES8608038A1 (es) | 1986-06-01 |
| IL76264A (en) | 1990-02-09 |
| DE3575162D1 (de) | 1990-02-08 |
| FI85979B (fi) | 1992-03-13 |
| JPS6170984A (ja) | 1986-04-11 |
| DK165748B (da) | 1993-01-11 |
| EP0173924B1 (de) | 1990-01-03 |
| DK396685D0 (da) | 1985-08-30 |
| IL76264A0 (en) | 1986-01-31 |
| FI853324L (fi) | 1986-03-02 |
| DE3432196A1 (de) | 1986-03-06 |
| FI853324A0 (fi) | 1985-08-30 |
| IE852141L (en) | 1986-03-01 |
| IE58521B1 (en) | 1993-10-06 |
| HU193806B (en) | 1987-12-28 |
| ZA856640B (en) | 1987-05-27 |
| EP0173924A2 (de) | 1986-03-12 |
| FI85979C (fi) | 1992-06-25 |
| KR930002886B1 (ko) | 1993-04-12 |
| DK396685A (da) | 1986-03-02 |
| EP0173924A3 (en) | 1988-02-03 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH078238B2 (ja) | 組換え操作によつて製造されたペプチドを単離するための細菌細胞の機械的破壊方法 | |
| EP0052861B1 (en) | Extraction of interferon from bacteria | |
| SALMON JR et al. | A serum fraction with “sulfation factor activity” stimulates in vitro incorporation of leucine and sulfate into protein-polysaccharide complexes, uridine into RNA, and thymidine into DNA of costal cartilage from hypophysectomized rats | |
| CS752987A2 (en) | Method of lipophilic proteins extraction | |
| Bowen et al. | Cell autolysis and deletion in the planarian Polycelis tenuis Iijima | |
| SU1423002A3 (ru) | Способ получени белка,понижающего содержание холестерина в крови млекопитающих животных | |
| EP0422124A1 (en) | Thermal release of recombinant protein into culture media | |
| AU632753B2 (en) | Extraction of human interleukin-4 from bacteria | |
| US3000787A (en) | Heparinoid anticholestrolemic factor | |
| JPH07177894A (ja) | ポリ−３−ヒドロキシ酪酸の分離精製方法 | |
| KR100212770B1 (ko) | 세균으로부터 이종성의 불용성 단백질의 추출방법 | |
| Srivastava | BIOCHEMICAL CHANGES IN PROGRESSIVE MUSCULAR DYSTROPHY: VI. INCORPORATION OF URIDINE-2-14C INTO RNA OF VARIOUS TISSUE OF NORMAL AND DYSTROPHIC MICE | |
| Ab et al. | Metabolism of ribosomal precursor ribonucleic acid in kidney | |
| NO820943L (no) | Fremgangsmaate ved gjenvinning av produkter produsert av vertsorganismer. | |
| Montie et al. | The anatomical distribution of murine toxin in spheroplasts of Pasteurella pestis | |
| Perucho et al. | An improved method for the preparation of undegraded polysomes and active messenger RNA from immature chicken erythrocytes | |
| JPS6251990A (ja) | 微生物菌体の処理方法 | |
| JPH02501707A (ja) | 細菌からの顆粒球・マクロファージ・コロニー刺激因子の抽出 | |
| KR960013392B1 (ko) | 대장균에서 발현된 단백질 봉입체의 회수 방법 | |
| US3060102A (en) | Method of purifying streptokinase | |
| JPS63501613A (ja) | 生細胞中に巨大分子を場誘発によって潜入させる方法及びその媒体 | |
| CN1156481A (zh) | 从细菌中提取异源不溶性蛋白质 | |
| BUSCH et al. | Part A. Isolation of Nuclei and Preparation | |
| US2778770A (en) | Process for obtaining epinephrine free adrenal cortical hormones | |
| OHKUMA et al. | Turnover of ribosomal RNA of mouse peritoneal macrophages in cell culture |