JPH0787799B2 - モノクローナル抗体生産増強法 - Google Patents
モノクローナル抗体生産増強法Info
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- JPH0787799B2 JPH0787799B2 JP63077043A JP7704388A JPH0787799B2 JP H0787799 B2 JPH0787799 B2 JP H0787799B2 JP 63077043 A JP63077043 A JP 63077043A JP 7704388 A JP7704388 A JP 7704388A JP H0787799 B2 JPH0787799 B2 JP H0787799B2
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- Japan
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- antibody
- monoclonal antibody
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- antibody production
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、抗体生産細胞によるモノクローナル抗体の生
産を増強する方法に関するものである。
産を増強する方法に関するものである。
従来の技術及び発明が解決しようとする課題 従来抗体生産細胞をペトリ皿、又は培養槽などを用いて
培養し抗体を生産する場合、生産効率が悪く大量に入手
することが困難であった。特にヒト−ヒトハイブリドー
マを用いてヒト型モノクローナル抗体を生産しようとす
る場合には、生産量が極端に少なく、その利用に限界が
あった。
培養し抗体を生産する場合、生産効率が悪く大量に入手
することが困難であった。特にヒト−ヒトハイブリドー
マを用いてヒト型モノクローナル抗体を生産しようとす
る場合には、生産量が極端に少なく、その利用に限界が
あった。
この発明は、このような問題点を解決しようとして行わ
れたものである。
れたものである。
課題を解決するための手段 本発明者らは、モノクローナル抗体の生産を上昇させる
培養方法の検討を行った結果、抗体生産細胞の増殖速度
又は生存率を調節することがこの目的に適合することを
見いだし、これに基づいて本発明を完成するに至つた。
培養方法の検討を行った結果、抗体生産細胞の増殖速度
又は生存率を調節することがこの目的に適合することを
見いだし、これに基づいて本発明を完成するに至つた。
以下に本発明について詳細に説明する。
（１）抗体生産細胞 ヒト−ヒトハイブリドーマ、マウス−マウスハイブリド
ーマ、EBウィルスで形質転換した細胞等が利用できる。
特に、ヒト−ヒトハイブリドーマに有効である。
ーマ、EBウィルスで形質転換した細胞等が利用できる。
特に、ヒト−ヒトハイブリドーマに有効である。
（２）細胞培養に用いられる培地 通常用いられる無血清培地又は血清培地が利用できる。
血清培地としては10％牛胎児血清を添加した培地が例示
できるが、モノクローナル抗体生産用培地としては、抗
体の精製が容易であること、培地が安価であること等の
理由から無血清培地が望ましい。無血清培地としては、
基本合成培地に血清アルブミン、インシュリン、トラン
スフェリン、エタノールアミン、セレニウム等の因子を
添加した培地が用いられる。基本合成培地としてはダル
ベッコMEM培地（DME）、ハムF-12培地、RDF培地（PRMI
1640、DME及びハムＦ−12培地を2:1:1で混合した培地）
等が用いられるが、好ましくはRDF培地が用いられる。
血清培地としては10％牛胎児血清を添加した培地が例示
できるが、モノクローナル抗体生産用培地としては、抗
体の精製が容易であること、培地が安価であること等の
理由から無血清培地が望ましい。無血清培地としては、
基本合成培地に血清アルブミン、インシュリン、トラン
スフェリン、エタノールアミン、セレニウム等の因子を
添加した培地が用いられる。基本合成培地としてはダル
ベッコMEM培地（DME）、ハムF-12培地、RDF培地（PRMI
1640、DME及びハムＦ−12培地を2:1:1で混合した培地）
等が用いられるが、好ましくはRDF培地が用いられる。
（３）培養法 ペトリ皿、灌流型連続培養装置、又はホローファイバー
型の培養装置が利用できる。
型の培養装置が利用できる。
（４）抗体生産細胞の増殖速度及び生存率の調節 増殖速度及び生存率を調節する方法としては、25−60mM
塩化カリウムを（２）に示した培地に添加する方法、灌
流型培養装置で培養する際に灌流速度を調節する方法、
培養温度を低下又は上昇させる方法等がある。好ましく
は30mM塩化カリウムの添加により行う。
塩化カリウムを（２）に示した培地に添加する方法、灌
流型培養装置で培養する際に灌流速度を調節する方法、
培養温度を低下又は上昇させる方法等がある。好ましく
は30mM塩化カリウムの添加により行う。
発明の効果 塩化カリウムを培地へ添加して、抗体生産細胞の増殖速
度及び生存率を低下させることにより、抗体生産量が1.
5倍に上昇した。このことから、モノクローナル抗体の
生産には、細胞が旺盛に増殖している状態より、細胞の
増殖速度が低下し生存率の低下しつつある状態の方が有
利と考えられる。
度及び生存率を低下させることにより、抗体生産量が1.
5倍に上昇した。このことから、モノクローナル抗体の
生産には、細胞が旺盛に増殖している状態より、細胞の
増殖速度が低下し生存率の低下しつつある状態の方が有
利と考えられる。
以下本発明の実施例を示す。
実施例１ IgM型抗体生産性ヒト−ヒトハイブリドーマHB4C5〔イン
・ビトロ・セルラー・アンド・ディベロップメンタル・
バイオロジー（In Vitoro Cell.Develop.Biol.）、21、
593（1985）〕を、35mmプラスチックペトリ皿に5x105細
胞/mlになるように下記の培地中に植え込んだ。
・ビトロ・セルラー・アンド・ディベロップメンタル・
バイオロジー（In Vitoro Cell.Develop.Biol.）、21、
593（1985）〕を、35mmプラスチックペトリ皿に5x105細
胞/mlになるように下記の培地中に植え込んだ。
非添加培地 RDFに下記のものを添加する。
血清アルブミン （ヒト） 2mg/ml インシュリン （ウシ） 5μg/ml トランスフェリン（ヒト） 35μg/ml エタノールアミン 20μＭ セレニウム 2.5nM 塩化カリウム添加培地 に塩化カリウムを30mMになるように添加する。
２日間培養して抗体濃度、細胞密度及び生存率を測定し
たとこ、第１表に示したように非添加培地に比べ塩化カ
リウム添加培地は細胞増殖速度及び生存率を低下させる
傾向が認められ、抗体生産を1.5倍に増強した。
たとこ、第１表に示したように非添加培地に比べ塩化カ
リウム添加培地は細胞増殖速度及び生存率を低下させる
傾向が認められ、抗体生産を1.5倍に増強した。
Claims (1)
- 【請求項１】培地中に塩化カリウムを終濃度で25-60mM
となるように添加することを特徴とするモノクローナル
抗体生産増強法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63077043A JPH0787799B2 (ja) | 1988-03-30 | 1988-03-30 | モノクローナル抗体生産増強法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63077043A JPH0787799B2 (ja) | 1988-03-30 | 1988-03-30 | モノクローナル抗体生産増強法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH01247097A JPH01247097A (ja) | 1989-10-02 |
| JPH0787799B2 true JPH0787799B2 (ja) | 1995-09-27 |
Family
ID=13622748
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63077043A Expired - Fee Related JPH0787799B2 (ja) | 1988-03-30 | 1988-03-30 | モノクローナル抗体生産増強法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0787799B2 (ja) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL2235197T3 (pl) * | 2007-12-27 | 2018-01-31 | Baxalta GmbH | Sposoby hodowli komórek |
| AU2018241849B2 (en) | 2017-03-31 | 2023-06-22 | Boehringer Ingelheim International Gmbh | Perfusion medium |
| EP4056678A4 (en) * | 2019-11-05 | 2023-12-06 | Ajinomoto Co., Inc. | Method for producing protein |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6251983A (ja) * | 1985-09-02 | 1987-03-06 | Hagiwara Yoshihide | ヒト／ヒト・ハイブリド−マ培養用無血清培地 |
| JPS62269694A (ja) * | 1986-05-20 | 1987-11-24 | Teijin Ltd | 増殖性動物細胞を培養して有用な高分子物質を生産する方法 |
| FR2600076A1 (fr) * | 1986-06-12 | 1987-12-18 | Fond Ctre Nal Transfusion | Milieu de culture comportant de l'albumine humaine, procede de preparation d'un produit injectable a partir de ce milieu, produit obtenu et son utilisation, composition obtenue |
| JPH084518B2 (ja) * | 1986-08-30 | 1996-01-24 | 萩原 義秀 | モノクロナル抗体生産性ヒト／ヒトハイブリド−マの無血清培養法 |
-
1988
- 1988-03-30 JP JP63077043A patent/JPH0787799B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH01247097A (ja) | 1989-10-02 |
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