JPH0793871B2 - イーストエキス及びその製造方法 - Google Patents

イーストエキス及びその製造方法

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JPH0793871B2
JPH0793871B2 JP63-501242A JP50124288A JPH0793871B2 JP H0793871 B2 JPH0793871 B2 JP H0793871B2 JP 50124288 A JP50124288 A JP 50124288A JP H0793871 B2 JPH0793871 B2 JP H0793871B2
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順一 伊東
正夫 矢野
吉紀 青柳
博和 前川
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Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明はRNAの含有率が高く,且つ,生の酵母菌体内か
ら抽出したRNAを含むエキス成分から,天然の5′−IMP
(イノシン モノ フォスホリック アシド),5′−GM
P(グアニン モノ フォスホリック アシド)等を高
率に含有するイーストエキスを製造する方法,得られる
イーストエキス及びこれに用いられるRNA含有量が高い
酵母変異株に関する。
背景技術 現在,市販されている調味料のうち,イーストエキスと
しては多種多様なものが存在し,その原料としての酵母
は,パン酵母及びビール酵母等が一般に用いられてい
る。エキスはそのまま熱水抽出するか,菌体を酵素分解
するか,機械的に細胞を破壊するかあるいは酵母菌体自
身を自己消化させることにより抽出し,粉末又はペース
ト状として製品化している。他の天然調味料としては,
畜肉,魚肉,野菜,海藻などの天然エキスがある。一
方,RNA含有率が高いトルラ酵母より抽出精製されたRNA
を化学的及び酵素的に分解し,その分解物である5′−
ヌクレオチド混合物の中から5′−IMP及び5′−GMPが
分画精製され,核酸系調味料として多用されている。
しかしながら,前記の市販されているイーストエキスに
含有されているヌクレオチドは主に3′−AMP(アデニ
ン モノ フォスホリック アシド),3′−GMPであっ
て,すぐれた呈味を有する5′−IMP,5′−GMPを殆ど含
有していないため充分満足できる調味料ではない。
又,一方,前記の酵母菌体中のRNAを抽出し,分解して
5′−IMP,5′−GMPを製造する場合には菌体からRNAを
効率的に抽出するため,アルカリ,食塩,界面活性剤等
を多量に作用させる方法が実用されており,この場合,R
NAの抽出後にこれ等の添加物を洗浄,除去するのでRNA
の分解物即ち,ヌクレオチド成分にはイーストエキス成
分は含有されない。
以上のように従来の市販の酵母エキスは調味料として旨
味が少ないので通用旨味が高い調味料を製造するために
は通常のイーストエキスに別途製造した人工調味料であ
る5′−IMP,5′−GMP等を添加し,人工調味料にせざる
を得なかった。
3.発明の詳細な説明 (問題点を解決すための手段) 本発明者等は、上記の問題点を解決すべく鋭意検討した
結果,本発明に到達したものである。即ち,本発明はRN
Aの含有率が高い生の酵母菌体水溶液を80〜120℃で加熱
処理した後,5′−フォスホジエステラーゼを作用させ,
次いでデアミナーゼを作用させ,又は作用させないで
5′−IMP,5′−GMPの含有率,又は5′−GMPの含有率
が高い天然イーストエキスを製造する方法,得られるイ
ーストエキス及びRNAの含有率が高い酵母変異株に関す
る。
本発明により得られるイーストエキスは旨味ののびがあ
り,コク味があり,さらに酵母臭が少ない独特な呈味を
有する。
以下,本発明を詳細に説明する。
尚,本発明に用いられる5′−フォスホジエステラー
ゼ,デアミナーゼ,プロテアーゼ等の由来は特に限定す
る必要はなく,市販のもので十分である。
先ず,酵母菌株を公知の培地に植菌し,培養し,得られ
た菌体をよく洗浄した後,乾燥菌体量の5〜30倍程度の
水に懸濁し,80〜120℃,好ましくは90〜100℃で加熱処
理を行い,菌体内のRNA分解酵素を失活させる。
本発明に用いられる酵母菌体としては生酵母が用いら
れ,乾燥酵母は予め苛酷な熱処理を受けているため,製
品の風味が好ましくない。
更に,用いる酵母菌体はRNA含有量が乾燥重量換算で10
%以上の株が好ましく,15重量%以上のものが更に好ま
しい。
RNA含有量が高い酵母菌株の例としてはキャンディダ・
ウチリスCS7529株(FERM BP-1656),キャンディダ・ウ
チリスCSB6316株(FERM BP-1657)などが例示される。
上記変異株CSB6316株は親株である低温感受性を有する
キャンディダ・ウチリスCS7529株に突然変異剤であるニ
トロソグアニジンを作用せしめることにより得られた変
異株であり,親株であるCS7529株が生育できない濃度の
ホウ酸を含む合成培地に生育でき,且つ菌体中のRNA含
有率が高い株を選別した結果得られたものである。
以下に,キャンディダ・ウチリスSC7529株とキャンディ
ダ・ウチリスCSB6316株の菌学的性質を示すが,両者は
ホウ酸耐性を除いて全く同一の菌学的性質を有し,かつ
ホウ酸耐性,低温感受性を除いてキャンディダ・ウチリ
スの一般的菌学的性質とも全く同じである。
キャンディダ・ウチリスCS7529及びCSB6316の菌学的性
質: 1.YM寒天上で全縁,半レンズ状隆起,表面滑らかで,鈍
い光沢,クリーム色で軟質のコロニーを形成する。
グルコース/イーストエキス/ペプトンを含む液体培地
で混濁,沈殿あり,菌膜と菌環の形状は認められない。
2.ダルモー平板上で仮性菌糸を形成する。
3.酢酸ソーダ寒天斜面,麦芽エキス寒天斜面,V8ジュー
ス寒天斜面,コーンミルク寒天斜面の各培養で子嚢胞子
の形成は認められない。
4.グルコース,シュークロース,ラフィノースを発酵
し,ガラクトース,マルトース,トレハロース,ラクト
ースを発酵しない。
5.グルコース,シュクロース,マルトース,セロビオー
ス,トレハロース,ラフィノース,メレジトース,キシ
ロース,エタノール,マンニットール,乳酸,クエン
酸,KN03を同化する。
6.ビタミンフリー培地で良好に生育する。
7.30℃,3日間培養で卵形乃至円筒状の細胞(3.5〜4.5)
×(7〜13)μmとなる。
8.20℃ではほとんど増殖しないか,ごく僅か生育する。
9.30〜40℃でよく生育する。
又、CS7529株及びCSB6316株のホウ酸耐性は次のとおり
であった。
各菌株をグルコース3重量%,燐酸1カリウム0.3重量
%,硫酸アンモニウム0.7重量%,硫酸マグネシウム0.0
3重量%,硫酸第二鉄5ppm,硫酸亜鉛9ppm,塩化マンガン4
ppm,B+++100〜1000ppm;寒天2%を含む培地を用いプレ
ート上で30℃,7日間バッチ培養を行った。その結果それ
ぞれの菌株の耐性度は表1のとおりであった。
RNA含有率が低いものは,得られるイーストエキス中に
含まれる呈味成分である5′−IMP,5′−GMP等の量が少
ないものとなり,他のエキス成分とのバランスから調味
料として用いる場合酵母臭が強く,又,味ののびが少な
いものとなる。
前記の加熱温度が80℃未満ではRNA分解酵素の失活が不
完全であり、後工程においてRNAが2′−又は3′−の
ヌクレオチドやヌクレオサイドに変化し,呈味成分とし
て好まれる5′−ヌクレオチドの生成が阻害される。
又,120℃を超えると加熱焦げ臭が生じるので好ましくな
い。
このようにして菌体内のRNA分解酵素が失活した菌体の
水懸濁液にそのまま,あるいはプロテアーゼを作用せし
めた後,あるいはアルカリを加えてRNAエキス成分を抽
出した後,5′−フォスホジエステラーゼを作用させ,次
いで希望によりデアミナーゼを作用せしめる。
前記のプロテアーゼの添加量は1g/L以下で十分であり,3
0〜50℃で1〜20時間作用せしめる。添加量が1g/Lを超
えてもその効果は殆ど増加せず,実用的でなく,又,添
加量が少ないと,それだけ作用効果が低く,後工程にお
いて得られるRNA分解生成物である5′−ヌクレオチド
の量が少なくなる。
アルカリ処理を行う場合はアルカリとしてはカセイソー
ダ,カセイカリ等が使用でき,作用条件としては,PH=
8〜12,好ましくは9〜10,40〜50℃,1〜3時間程度が好
ましい。この時PHが8未満であるとRNAの抽出が十分で
なくアルカリ使用の意味が殆どなく,また12以上である
とRNAのアルカリ分解が起こるので好ましくない。又,
アルカリの添加量は最終製品中に残る塩分による味覚の
影響を少なくするため可能な限り少量にするのが好まし
い。
次に,抽出液中のRNAを5′−ヌクレオチドに分解する
為に5′−フォスホジエステラーゼを作用させる場合,
通常5′−フォスホジエステラーゼは0.1〜0.5g/L添加
し,50〜80℃で30分〜3時間作用させる。この際あらか
じめ50〜80℃好ましくは60〜70℃に昇温した後添加する
のが好ましい。50℃未満で添加すると5′−フォスホジ
エステラーゼ製剤中にしばしば微量混在するフォスファ
ターゼが作用し,不純物を副生しやすいので好ましくな
い。上記のようにして得られた5′−ヌクレオチドを含
む液中の5′−AMPを希望により5′−IMPに変換する場
合はデアミナーゼを0.1〜0.5g/L添加し,35〜45℃で30分
〜2時間の条件で作用させる。
以上の反応の後,利用した酵素を失活させる為90〜100
℃で30〜60分程度の加熱処理を行った後,遠心分離等の
方法により固形分を除去し,次いで上澄液を濃縮してペ
ーストにするか,更に乾燥して粉末に加工する。濃縮方
法,乾燥方法は特に限定されるものではないが,特に減
圧濃縮法,スプレードライヤー法等過度の高温に成らな
いような乾燥方法が好適に用いられる。
図面1は実施例3において得られたイーストエキスのヌ
クレオチドを高速液体クロマトグラフィによって定量し
た結果を示すチャート図である。
発明を実施するための最良の形態 以下に本発明を実施例を掲げて更に具体的に説明する
が,本発明はこれらの例に限定されるものではない。
実施例1 キャンディダ・ウチリスCSB6316株を予めフラスコ中で
種母培養し,これを30L容発酵槽に2%植菌した。
培地としてグルコース3重量%,燐酸1カリウム0.3重
量%,硫酸アンモニウム0.7重量%,硫酸マグネシウム
0.03重量%,硫酸第二鉄5ppm,硫酸亜鉛9ppm,塩化マンガ
ン4ppmを含む培地を用い16時間バッチ培養を行った。
培養条件は槽内液量15L,培養温度30℃,通気量15L/min,
撹はん数500rpm,PH4.0(アンモニアによる自動コントロ
ール)にて行った。上記変異株の親株についても同一の
条件で培養した。得られた菌体について測定した結果を
表2に記載した。
実施例2 ホウ酸耐性変異株キャンディダ・ウチリスCSB6316及び
その親株を実施例1と同様に30L発酵槽でバッチ培養を
行い,対数増殖期に連続培養へ移行させた。実施例1に
記載の培地を連続注加し,培養PH4.0,培養温度30℃,槽
内液量15L,撹はん数500rpm,通気量15L/minで維持した。
上記変異株の親株についても同一の条件で連続培養を行
った。培養の結果を表3に示した。
上記実施例1及び2の結果から分るようにホウ酸耐性変
異株はRNA含量が著しく向上していた。
実施例3 30L容ジャーファーメンターを用い以下に示した培地15L
にキャンディダ・ウチリスCS7529株の前培養液1Lを植菌
し,30℃で24時間通気培養して酵母菌体を得た。培地組
成はグルコース5重量%,燐酸アンモニウム0.2重量
%,硫酸アンモニウム0.2重量%,硫酸マグネシウム0.1
重量%,塩化カリウム0.17重量%,硫酸第二鉄5ppm,硫
酸亜鉛9ppm,塩化マンガン4ppmを含む水溶液をPHを4.5に
調整したものである。
培養終了後,シャープレス型遠心分離機にて集菌し湿潤
酵母を得た。これを水に再懸濁して遠心分離することを
二回繰り返した。本法により乾燥重量として約300gの菌
体が得られた。ここに得られた酵母に水を加え全量を15
00mlとし、次いで湯浴中で加熱し液温が80℃を超えてか
ら80〜100℃の範囲で30分間加熱した。この後直ちに流
水にて冷却し液温を40℃とした後プロチンPC-10(大和
化成株式会社製プロテアーゼ製剤)の1.5gを少量の水に
溶解後添加し30〜50℃で10時間,撹はんしながら反応さ
せた。
次いで,液温80℃以上で30分間加熱し,つづいて65℃に
冷却した.これにリボヌクレアーゼP(天野製薬株式会
社製5′−フォスホジエステラーゼ製剤)の0.2gを少量
の水に溶解して加え,この温度下で穏やかに3時間撹は
んした。次に液温を45℃となし,デアミザイム(天野製
薬株式会社製デアミナーゼ製剤)の0.2gを前記と同様に
添加して撹はんしながらこの温度下に2時間保持した。
この後遠心分離により不溶性固形分を除去しエキスを得
た。ついでこのエキスを30分間90〜95℃に加熱し,放置
冷却の後,スプレードライヤーにより粉末化し,粉末イ
ーストエキス約75gを得た。このエキス中の5′−IMPの
含量は12重量%,5′−GMPのそれは8.3重量%,5′−CMP
は6重量%,5′−UMPは11.8重量%であった。尚,各
5′−ヌクレオチドの定量は以下に示した条件で高速液
体クロマトグラフィにより行った。
条件 充填剤 :TSK-GEL ODS-80TM カラム :15cm×φ4.6mm 溶出溶媒 :7.0重量%メタノールを含む0.05molKH2
PO4 溶出速度 :0.5ml/min サンプル注入量:20μl 検 出 :UV254 以下の実施例においても同様である。又,この1%水溶
液は酵母臭が少なく,イースト由来のアミノ酸及びペプ
チッド系の味に加えて,いわゆるかつおぶし様旨味とシ
イタケの味が混合された複雑で独特の好ましい呈味を有
していた。
実施例4 実施例3と同様の方法で乾燥重量として約300gの菌体を
得た。これに水を加え全量を1500mlとし,ついで実施例
3と同じく加熱処理を行った後液温を50℃とした。次に
これを撹はんしながら6N苛性ソーダを滴下しPHを10と
し,さらに3時間撹はんを続けた。次に遠心分離により
菌体を除去し得られた清澄液のPHを直ちに6N塩酸を加え
て6に調整し、更に加温して液温を65℃とした。以下,
実施例3と同様の方法で5′−フォスホジエステラーゼ
及びデアミナーゼ処理等を行い,スプレードライヤーに
より粉末化して粉末イーストエキス約70gを得た。この
エキス中の5′−IMPの含量は10.2重量%,5′−GMPのそ
れは7.1重量%,5′−CMPは5.1重量%,5′−UMPは10.0重
量%であった。
この1%水溶液は若干の塩味はあるが実施例3とほぼ同
様の呈味を有していた。
実施例5 キャンディダ・ウチリスCSB6316菌株を実施例3と同様
の培養地により30℃で24時間通気培養して酵母菌体を得
た。
培養終了後,実施例3と同様にして湿潤酵母を得た。こ
れを水に再懸濁して遠心分離することを二回繰り返し
た。本法により乾燥重量として約360gの菌体が得られ
た。ここに得られた酵母を実施例3と同様にして順にプ
ロチンPC-10,リボヌクレアーゼP及びデアミザイムを反
応せしめた。この後遠心分離により不溶性固形分を除去
しエキスを得た。ついでこのエキスを30分間90〜95℃に
加熱し,放置冷却の後,スプレードライヤーにより粉末
化し,粉末イーストエキス約98gを得た。このエキス中
の5′−IMPの含量は15.0重量%、5′−GMPのそれは1
2.1重量%であった。尚、各5′−フクレオチドの含有
率の定量は実施例3と同様の方法で行った。
この1%水溶液はイースト由来のアミノ酸及びペプチッ
ド系の味に加えて,いわゆるかつおぶし様旨味とシイタ
ケの味が混合され,実施例3〜4に比べて旨味が強いも
のであった。
実施例6 実施例6においてデアミザイムを添加しない以外は実施
例6と全く同じようにしてイーストエキスを製造した。
得られたエキス中の5′−GMPの含有量は12.5重量%で
あり,鰹節の味は感じなかったが,しいたけ風の味が強
いものであった。
比較例1 エキス抽出前に80〜100℃で30分間の加熱処理を行わせ
しめないこと以外は実施例3と全く同様にCS7529株菌体
を処理して,乾燥重量として約300gの菌体から粉末イー
ストエキス約65gを得た。
このエキス中の5′−IMP,5′−GMP,5′CMP及び5′−U
MPの含有率はいずれも0.5重量%未満であった。このエ
キスの1%水溶液はアミノ酸様呈味はあるが旨味は殆ど
なかった。
比較例2 5′−フォスホジエステラーゼを添加する際に,あらか
じめ液温を50℃に調温しないで,室温で添加し且つその
後加温して65℃にて酵素反応を行わしめたこと以外は実
施例3と同様にCS7529株菌体を処理して乾燥重量として
約300gの菌体から粉末イーストエキス約75gを得た。こ
のエキスの5′−IMPの含有率は2.5重量%,5′−GMPの
それは1.7重量%,5′−CMPは1.3重量%及び5′−UMPは
2.5重量%であった。この1%水溶液は実施例3で得た
エキスに比較して呈味の劣るものであった。
産業上の利用可能性 本発明はRNA含有率が高い菌体中のRNAをヌクレオチドに
分解するに際し,あらじめ熱処理を行うことにより2′
−又は3′−ヌクレオチドに変換されるのを阻害し,全
て5′−ヌクレオチドに変換することができ,その際,
従来法のように大量のアルカリ,食塩,界面活性剤を用
いなくても良いため,抽出されたエキス分はそのまま全
量をすぐれた呈味を有する調味料製品に転換できる。
特にRNAの含有率が10%以上,更に好ましくは15%以上
の酵母菌変異株を用いて得られるイーストエキスは特に
優れた旨味を呈する調味料となる。
規則第13規則の2の寄託された微生物への言及 1.キャンディダ・ウチリスCS7529(Candida Utilis Cs
7529) イ 当該微生物を寄託した寄託機関の名称及びあて名 名称 通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所 あて名 〒305 日本国茨城県つくば市東1丁目1番3
号 ロ イの寄託機関に寄託した日付 昭和63年(1988年)1月18日 但し,本寄託は,日本国内寄託された微工研菌寄第3340
号より寄託変更されたものである。
ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号 FERM BP-1656 2.キャンディダ・ウチリスCSB6316(Candida UTILIS CS
B 6316) イ 当該微生物を寄託した寄託機関の名称及びあて名 名称 通商産業省工業技術院微生物工業技術研究所 あて名 〒305 日本国茨城県つくば市東1丁目1番3
号 ロ イの寄託機関に寄託した日付 昭和63年(1988年)1月18日 ハ イの寄託機関が寄託について付した受託番号 FERM BP-1657
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭52−90684(JP,A) 特公 昭43−28831(JP,B1) 特公 昭57−22313(JP,B2) Agric.Biol.Chem.,第 38巻、第4号(1974年)T.Yamash ita et al.,「Studies on Substances Whic h increase RNA Cont ent of Yeast Cells」 P.724−734

Claims (7)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】キャンディダ・ウチリスCS-7529(FERM BP
    -1656)及び/又はキャンディダ・ウチリスCSB-6316(F
    ERM BP-1657)を含有する水溶液を80℃〜120℃で加熱処
    理した後、RNA及びエキス分を抽出し、次いで5′−フ
    ォスホジエステラーゼを作用させることを特徴とする
    5′−GMPの含有率が高い天然イーストエキスの製造方
    法。
  2. 【請求項2】得られるイーストエキス成分中の5′−GM
    Pの含有率が7重量%以上であることを特徴とする特許
    請求の範囲第1項のイーストエキスの製造方法。
  3. 【請求項3】キャンディダ・ウチリスCS-7529(FERM BP
    -1656)及び/又はキャンディダ・ウチリスCSB-6316(F
    ERM BP-1657)を含有する水溶液を80℃〜120℃で加熱処
    理した後、RNA及びエキス分を抽出し、次いで5′−フ
    ォスホジエステラーゼを作用させ、次いでデアミナーゼ
    を作用させることを特徴とする5′−IMP及び5′−GMP
    の含有率が高い天然イーストエキスの製造方法。
  4. 【請求項4】得られるイーストエキス成分中の5′−IM
    P及び5′−GMPの含有率がそれぞれ7重量%以上である
    ことを特徴とする特許請求の範囲第3項のイーストエキ
    スの製造方法。
  5. 【請求項5】抽出条件がpH=8〜12、40〜50℃の条件で
    あることを特徴とする特許請求の範囲第1項又は第3項
    のイーストエキスの製造方法。
  6. 【請求項6】キャンディダ・ウチリスCS-7529(FERM BP
    -1656)及び/又はキャンディダ・ウチリスCSB-6316(F
    ERM BP-1657)の菌体抽出液に酵素を作用させ、系外か
    ら当該成分を添加することなく5′−IMP及び5′−GMP
    をそれぞれ7重量%以上、又は、5′−GMPを7重量%
    以上含有するイーストエキス。
  7. 【請求項7】ほう酸耐性を有しRMA含有率が高いキャン
    ディダ・ウチリスCSB-6316変異株(FERM BP-1657)。
JP63-501242A 1987-01-22 1988-01-22 イーストエキス及びその製造方法 Expired - Lifetime JPH0793871B2 (ja)

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