JPH11196859A - 変異株 - Google Patents
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Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 ＲＮＡ含有量が増加した、菌体収率のよい菌
を提供する。 【構成】 親株に比べ低温下での増殖速度が著しく低下
した低温感受性変異株を取得することにより得られる。
キャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６５５２）。
を提供する。 【構成】 親株に比べ低温下での増殖速度が著しく低下
した低温感受性変異株を取得することにより得られる。
キャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６５５２）。
Description
【０００１】
【発明が属する技術分野】本発明は、菌体内に２０重量
％以上のリボ核酸（以下、ＲＮＡと略称する。）を生成
蓄積するキャンディダ・ウチリス変異株、及び該変異株
を使用したＲＮＡ高含有酵母の製造方法に関する。
％以上のリボ核酸（以下、ＲＮＡと略称する。）を生成
蓄積するキャンディダ・ウチリス変異株、及び該変異株
を使用したＲＮＡ高含有酵母の製造方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】ＲＮＡは、医薬品あるいは５’−イノシ
ン酸、５’−グアニル酸等の旨み調味料の原料として用
いられている。このＲＮＡの製造には、一般的には廃糖
蜜や液糖、酢酸等を主炭素源として培養した酵母菌体が
用いられる。酵母は増殖速度が速く高密度培養が可能で
あると言った培養上の利点に加え、キャンディダ・ウチ
リスやサッカロマイセス・セレビジェ等では可食性が確
認されていることから、これらの酵母を用いた５’−イ
ノシン酸や５’−グアニル酸を含有する酵母エキスの製
造も可能であり、ＲＮＡ生産の菌株として極めて好適で
ある。
ン酸、５’−グアニル酸等の旨み調味料の原料として用
いられている。このＲＮＡの製造には、一般的には廃糖
蜜や液糖、酢酸等を主炭素源として培養した酵母菌体が
用いられる。酵母は増殖速度が速く高密度培養が可能で
あると言った培養上の利点に加え、キャンディダ・ウチ
リスやサッカロマイセス・セレビジェ等では可食性が確
認されていることから、これらの酵母を用いた５’−イ
ノシン酸や５’−グアニル酸を含有する酵母エキスの製
造も可能であり、ＲＮＡ生産の菌株として極めて好適で
ある。
【０００３】近年、天然、健康志向を背景に旨み調味料
としての酵母エキスの需要が拡大しており、リボ核酸リ
ッチな酵母が望まれている。しかし、公知の酵母におけ
るＲＮＡ含量は５〜１２％と低く、酵母菌体内のＲＮＡ
含量を向上させる試みが現在に至るまで盛んに行われて
きた。その試みとしては、１．抗生物質アニソマイシン
添加培養（特公昭５０−１６８７５号公報）、主炭素源
の検討（特公昭５７−２９１４９号公報）等の培養条件
の検討、２．自然界からのＲＮＡ含量の高い酵母のスク
リーニング（特公昭５５−４９８３７号公報）、および
３．チアジン系、アクリジン系、オキサジン系色素耐性
の付与（特公昭４８−３２３５０号公報）、ＫＣｌ感受
性の付与（ＵＳ 3909352号）等に代表される遺伝的改変
による菌株の改良、の３つに大別される。
としての酵母エキスの需要が拡大しており、リボ核酸リ
ッチな酵母が望まれている。しかし、公知の酵母におけ
るＲＮＡ含量は５〜１２％と低く、酵母菌体内のＲＮＡ
含量を向上させる試みが現在に至るまで盛んに行われて
きた。その試みとしては、１．抗生物質アニソマイシン
添加培養（特公昭５０−１６８７５号公報）、主炭素源
の検討（特公昭５７−２９１４９号公報）等の培養条件
の検討、２．自然界からのＲＮＡ含量の高い酵母のスク
リーニング（特公昭５５−４９８３７号公報）、および
３．チアジン系、アクリジン系、オキサジン系色素耐性
の付与（特公昭４８−３２３５０号公報）、ＫＣｌ感受
性の付与（ＵＳ 3909352号）等に代表される遺伝的改変
による菌株の改良、の３つに大別される。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記先
行技術によっても、得られる菌株の細胞内ＲＮＡ含有量
は１７％程度（菌体乾燥重量１５ｇ／ｌ程度）に過ぎな
い。一方、本発明者らは、酵母菌体に低温感受性を付与
する事によりＲＮＡ含有量が１４％を越える変異株を報
告（特公昭５６−４６８２４号公報、ＷＯ８８／０５２
６７号）しているが、培養条件を変更することなく、更
にＲＮＡ含有量が増加した、また菌体収率のよい菌株が
望まれていた。
行技術によっても、得られる菌株の細胞内ＲＮＡ含有量
は１７％程度（菌体乾燥重量１５ｇ／ｌ程度）に過ぎな
い。一方、本発明者らは、酵母菌体に低温感受性を付与
する事によりＲＮＡ含有量が１４％を越える変異株を報
告（特公昭５６−４６８２４号公報、ＷＯ８８／０５２
６７号）しているが、培養条件を変更することなく、更
にＲＮＡ含有量が増加した、また菌体収率のよい菌株が
望まれていた。
【０００５】
【課題を解決するための手段】本発明者らはかかる課題
を解決するため鋭意検討した結果、酵母菌体に高度の低
温感受性を付与することにより驚くべきことにＲＮＡ含
有量が２０％以上と著しく増加した菌体が得られるこ
と、菌体収率も良好であることを見い出し、本発明を達
成するに至った。すなわち本発明は、ＲＮＡを菌体重量
あたり２０重量％以上生成蓄積するキャンディダ・ウチ
リス変異株、及び該変異株を好気的に培養するＲＮＡ高
含有酵母の製造方法を提供するものである。
を解決するため鋭意検討した結果、酵母菌体に高度の低
温感受性を付与することにより驚くべきことにＲＮＡ含
有量が２０％以上と著しく増加した菌体が得られるこ
と、菌体収率も良好であることを見い出し、本発明を達
成するに至った。すなわち本発明は、ＲＮＡを菌体重量
あたり２０重量％以上生成蓄積するキャンディダ・ウチ
リス変異株、及び該変異株を好気的に培養するＲＮＡ高
含有酵母の製造方法を提供するものである。
【０００６】以下に本発明を詳細に説明する。本発明の
変異株は、例えばキャンディダ・ウチリスＣＳ７５２９
（ＦＥＲＭＰ−３３４０）等を親株とし突然変異処理に
より、親株に比べ低温下での増殖速度が著しく低下した
低温感受性変異株を取得することにより得られる。具体
的には、紫外線、電離放射線、亜硝酸、ニトロソグアニ
ジン、メタンスルホン酸エチル等の変異源を用い、合成
培地上で、常温での生育速度に差は認められないが、低
温での増殖速度が親株に比べ著しく遅い株を選択する。
このような低温感受性変異株は、酵母の増殖細胞のみに
作用するアンフォテリシンＢ等の抗生物質を含む培地で
低温で培養することにより選択的に濃縮される。これ等
の菌株からより低温感受性のものを選び、さらにＲＮＡ
含量が高く、且つ菌体収率の良いもの選択することによ
り、目的とする変異株を取得する。このようにして、本
発明では、キャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６５５２）が得られた。
変異株は、例えばキャンディダ・ウチリスＣＳ７５２９
（ＦＥＲＭＰ−３３４０）等を親株とし突然変異処理に
より、親株に比べ低温下での増殖速度が著しく低下した
低温感受性変異株を取得することにより得られる。具体
的には、紫外線、電離放射線、亜硝酸、ニトロソグアニ
ジン、メタンスルホン酸エチル等の変異源を用い、合成
培地上で、常温での生育速度に差は認められないが、低
温での増殖速度が親株に比べ著しく遅い株を選択する。
このような低温感受性変異株は、酵母の増殖細胞のみに
作用するアンフォテリシンＢ等の抗生物質を含む培地で
低温で培養することにより選択的に濃縮される。これ等
の菌株からより低温感受性のものを選び、さらにＲＮＡ
含量が高く、且つ菌体収率の良いもの選択することによ
り、目的とする変異株を取得する。このようにして、本
発明では、キャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（Ｆ
ＥＲＭ Ｐ−１６５５２）が得られた。
【０００７】本発明の変異株、キャンディダ・ウチリス
２７Ｂ４３１７は菌体重量あたり２０重量％以上もの著
量のＲＮＡを生成蓄積し、リボ核酸の製造に極めて好適
である。低温感受性を除いてはキャンディダ・ウチリス
の一般的菌学的性質と全く同一である。新規変異株はＦ
ＥＲＭ Ｐ−１６５５２として寄託された。以下に、本
酵母の菌学的性質について示す。 １．ＹＭ寒天上で全縁、半レンズ状隆起、表面滑らか
で、鈍い光沢、クリーム色で軟質のコロニーを形成す
る。グルコース／イーストエキス／ペプトンを含む液体
培地で混濁、沈澱あり、菌膜と菌環の形成は認められな
い。 ２．ダルモー平板上で仮性菌糸を形成する。 ３．酢酸ソーダ寒天斜面、麦芽エキス寒天斜面，Ｖ８ジ
ュース寒天斜面、コーンミルク寒天斜面の各培地で子嚢
胞子の形成は認められない。 ４．グルコース、シュクロース、ラフィノースを発酵
し、ガラクトース、マルトース、トレハロース、ラクト
ースを発酵しない。 ５．グルコース、シュクロース、マルトース、セロビオ
ース、トレハロース、ラフィノース、メレジトース、キ
シロース、エタノール、マンニトール、乳酸、クエン
酸，ＫＮＯ3を同化する。 ６．ビタミンフリー培地で良好に生育する。 ７．３０℃、３日間培養で卵形乃至円筒状の細胞（３．
５〜４．５）×（７〜１３）μｍとなる。 ８．２０℃ではほとんど増殖しないが、ごくわずか生育
する。 ９．３０〜４０℃で良く生育する。
２７Ｂ４３１７は菌体重量あたり２０重量％以上もの著
量のＲＮＡを生成蓄積し、リボ核酸の製造に極めて好適
である。低温感受性を除いてはキャンディダ・ウチリス
の一般的菌学的性質と全く同一である。新規変異株はＦ
ＥＲＭ Ｐ−１６５５２として寄託された。以下に、本
酵母の菌学的性質について示す。 １．ＹＭ寒天上で全縁、半レンズ状隆起、表面滑らか
で、鈍い光沢、クリーム色で軟質のコロニーを形成す
る。グルコース／イーストエキス／ペプトンを含む液体
培地で混濁、沈澱あり、菌膜と菌環の形成は認められな
い。 ２．ダルモー平板上で仮性菌糸を形成する。 ３．酢酸ソーダ寒天斜面、麦芽エキス寒天斜面，Ｖ８ジ
ュース寒天斜面、コーンミルク寒天斜面の各培地で子嚢
胞子の形成は認められない。 ４．グルコース、シュクロース、ラフィノースを発酵
し、ガラクトース、マルトース、トレハロース、ラクト
ースを発酵しない。 ５．グルコース、シュクロース、マルトース、セロビオ
ース、トレハロース、ラフィノース、メレジトース、キ
シロース、エタノール、マンニトール、乳酸、クエン
酸，ＫＮＯ3を同化する。 ６．ビタミンフリー培地で良好に生育する。 ７．３０℃、３日間培養で卵形乃至円筒状の細胞（３．
５〜４．５）×（７〜１３）μｍとなる。 ８．２０℃ではほとんど増殖しないが、ごくわずか生育
する。 ９．３０〜４０℃で良く生育する。
【０００８】本発明では、更に、変異株を好気的に培養
するリボ核酸高含有酵母の製造方法が提供される。本発
明の変異株を培養する際の培地には、炭素源として、ブ
ドウ糖、蔗糖、酢酸、エタノール、糖蜜、亜硫酸パルプ
廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニ
ア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩等が
使用される。燐酸、カリウム、マグネシウム源には、燐
酸アンモニウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩
化マグネシウム等が用いられ、その他、亜鉛、銅、マン
ガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。この他には、ビ
タミン、アミノ酸、核酸関連物質等を特に添加する必要
はないが、これらを添加したり、コーンスチーブリカ
ー、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトン等の有
機物を添加しても良いことは当然である。培養温度は、
２１〜３８℃、好ましくは著しく生育が遅延しない程度
で低温が良く、ｐＨは３．５〜８．０、特に４．０〜
６．０が好ましい。本発明の培養形式としては、回分培
養或いは連続培養の何れでも良いが、工業的には後者が
採用される。
するリボ核酸高含有酵母の製造方法が提供される。本発
明の変異株を培養する際の培地には、炭素源として、ブ
ドウ糖、蔗糖、酢酸、エタノール、糖蜜、亜硫酸パルプ
廃液等が用いられ、窒素源としては、尿素、アンモニ
ア、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸塩等が
使用される。燐酸、カリウム、マグネシウム源には、燐
酸アンモニウム、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、塩
化マグネシウム等が用いられ、その他、亜鉛、銅、マン
ガン、鉄イオン等の無機塩を添加する。この他には、ビ
タミン、アミノ酸、核酸関連物質等を特に添加する必要
はないが、これらを添加したり、コーンスチーブリカ
ー、カゼイン、酵母エキス、肉エキス、ペプトン等の有
機物を添加しても良いことは当然である。培養温度は、
２１〜３８℃、好ましくは著しく生育が遅延しない程度
で低温が良く、ｐＨは３．５〜８．０、特に４．０〜
６．０が好ましい。本発明の培養形式としては、回分培
養或いは連続培養の何れでも良いが、工業的には後者が
採用される。
【０００９】
【実施例】次に実施例を挙げ本発明を詳細に説明する。
なおＲＮＡ含有量の測定は、シュミット・タンホイザー
・シュナイダーの方法［J．Biol．Chem． 1946 164 74
7］によりＲＮＡを抽出後、ＲＮＡ量を求め、これを菌
体乾燥重量あたりの百分率で表記した。
なおＲＮＡ含有量の測定は、シュミット・タンホイザー
・シュナイダーの方法［J．Biol．Chem． 1946 164 74
7］によりＲＮＡを抽出後、ＲＮＡ量を求め、これを菌
体乾燥重量あたりの百分率で表記した。
【００１０】実施例１ キャンディダ・ウチリスＣＳ７５２９（ＦＥＲＭ Ｐ−
３３４０）をＹＰＤ培地（酵母エキス１％、ポリペプト
ン２％、グルコース２％）を含む試験管で対数増殖期ま
で培養した。この菌体を回収し、洗浄後、Ａｄｅｌｂｅ
ｒｇ等の方法に準じニトロソグアニジン（ＮＴＧ）によ
る変異処理を行った［Biochem.Biophys.Res.Comm.1965
18 788］。変異処理した菌体を洗浄後ＹＰＤ培地で一晩
培養したものをＮＴＧ処理菌体とした。ついで、ＮＴＧ
処理菌体を１０7〜8 cells／mlとなるようにＹＰＤ培地
に採取し、２０℃下で培養し対数増殖期にまで至らしめ
た。これにアンフォテリシンＢを終濃度が３０ｐｐｍと
なるように添加し、さらに２０℃下で３時間培養した。
菌体を回収し洗浄後、希釈しＹＰＤ寒天培地で塗抹培養
した。次に、これをマスタープレートとしレプリカによ
る低温感受性株の選択を行った。この際の培養温度は３
０℃と２０℃とし、３０℃での生育速度は親株と変わら
ないが、制限温度２０℃下での生育が著しく遅いもの、
もしくは生育しないものを低温感受性変異株として取得
した。この中からＲＮＡ含量が高く、かつ菌体収率が良
い株を選択する事でキャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３
１７（ＦＥＲＭＰ−１６５５２）を得た。
３３４０）をＹＰＤ培地（酵母エキス１％、ポリペプト
ン２％、グルコース２％）を含む試験管で対数増殖期ま
で培養した。この菌体を回収し、洗浄後、Ａｄｅｌｂｅ
ｒｇ等の方法に準じニトロソグアニジン（ＮＴＧ）によ
る変異処理を行った［Biochem.Biophys.Res.Comm.1965
18 788］。変異処理した菌体を洗浄後ＹＰＤ培地で一晩
培養したものをＮＴＧ処理菌体とした。ついで、ＮＴＧ
処理菌体を１０7〜8 cells／mlとなるようにＹＰＤ培地
に採取し、２０℃下で培養し対数増殖期にまで至らしめ
た。これにアンフォテリシンＢを終濃度が３０ｐｐｍと
なるように添加し、さらに２０℃下で３時間培養した。
菌体を回収し洗浄後、希釈しＹＰＤ寒天培地で塗抹培養
した。次に、これをマスタープレートとしレプリカによ
る低温感受性株の選択を行った。この際の培養温度は３
０℃と２０℃とし、３０℃での生育速度は親株と変わら
ないが、制限温度２０℃下での生育が著しく遅いもの、
もしくは生育しないものを低温感受性変異株として取得
した。この中からＲＮＡ含量が高く、かつ菌体収率が良
い株を選択する事でキャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３
１７（ＦＥＲＭＰ−１６５５２）を得た。
【００１１】実施例２ キャンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（ＦＥＲＭ Ｐ
−１６５５２）を予めＹＰＤ培地を含む三角フラスコで
種母培養し、これを３０Ｌ容発酵槽に１〜２％植菌し
た。培地組成は、グルコース４％、燐酸一アンモニウム
０．３％、硫酸アンモニウム０．１６１％、塩化カリウ
ム０．１３７％、硫酸マグネシウム０．０８％、硫酸銅
１．６ｐｐｍ、硫酸鉄１４ｐｐｍ、硫酸マンガン１６ｐ
ｐｍ、硫酸亜鉛１４ｐｐｍを用いた。培養条件は、ｐＨ
４．０、培養温度２４℃、通気量１ｖｖｍ、撹拌４００
ｒｐｍで行い、アンモニアを添加しｐＨのコントロール
を行った。比較として親株であるキャンディダ・ウチリ
スＣＳ７５２９（ＦＥＲＭＰ−３３４０）についても同
様に培養した。結果を表１に表す。表１から明らかなよ
うに、２７Ｂ４３１７株ではＣＳ７５２９株を上回る著
量のＲＮＡを菌体内に生成蓄積し、かつ対糖菌体収率も
高く、ＲＮＡ含有率は２０％を越えていた。
−１６５５２）を予めＹＰＤ培地を含む三角フラスコで
種母培養し、これを３０Ｌ容発酵槽に１〜２％植菌し
た。培地組成は、グルコース４％、燐酸一アンモニウム
０．３％、硫酸アンモニウム０．１６１％、塩化カリウ
ム０．１３７％、硫酸マグネシウム０．０８％、硫酸銅
１．６ｐｐｍ、硫酸鉄１４ｐｐｍ、硫酸マンガン１６ｐ
ｐｍ、硫酸亜鉛１４ｐｐｍを用いた。培養条件は、ｐＨ
４．０、培養温度２４℃、通気量１ｖｖｍ、撹拌４００
ｒｐｍで行い、アンモニアを添加しｐＨのコントロール
を行った。比較として親株であるキャンディダ・ウチリ
スＣＳ７５２９（ＦＥＲＭＰ−３３４０）についても同
様に培養した。結果を表１に表す。表１から明らかなよ
うに、２７Ｂ４３１７株ではＣＳ７５２９株を上回る著
量のＲＮＡを菌体内に生成蓄積し、かつ対糖菌体収率も
高く、ＲＮＡ含有率は２０％を越えていた。
【００１２】
【表１】
【００１３】
【発明の効果】以上説明してきたように、本発明によれ
ばＲＮＡ含有量が２０％以上の低温感受性のキャンディ
ダ・ウチリス変異株、及び該変異株を好気的に培養する
事によるＲＮＡを菌体内に著量蓄積する酵母の製造方法
が提供され、工業的なＲＮＡの生産性を著しく向上する
ことが出来る。
ばＲＮＡ含有量が２０％以上の低温感受性のキャンディ
ダ・ウチリス変異株、及び該変異株を好気的に培養する
事によるＲＮＡを菌体内に著量蓄積する酵母の製造方法
が提供され、工業的なＲＮＡの生産性を著しく向上する
ことが出来る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:72）
Claims (4)
- 【請求項１】 低温感受性を有し、リボ核酸を菌体重量
あたり２０重量％以上生成蓄積するキャンディダ・ウチ
リス変異株。 - 【請求項２】 キャンディダ・ウチルス変異株が、キャ
ンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（ＦＥＲＭ Ｐ−１
６５５２）である、請求項１記載のキャンディダ・ウチ
リス変異株。 - 【請求項３】 キャンディダ・ウチリス変異株を好気的
に培養して、該酵母菌体内に２０重量％以上のリボ核酸
を生成蓄積せしめることを特徴とする、リボ核酸高含有
酵母の製造方法。 - 【請求項４】 キャンディダ・ウチリス変異株が、キャ
ンディダ・ウチリス２７Ｂ４３１７（ＦＥＲＭ Ｐ−１
６５５２）である、請求項２記載のリボ核酸高含有酵母
の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2153898A JPH11196859A (ja) | 1998-01-20 | 1998-01-20 | 変異株 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2153898A JPH11196859A (ja) | 1998-01-20 | 1998-01-20 | 変異株 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH11196859A true JPH11196859A (ja) | 1999-07-27 |
Family
ID=12057757
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2153898A Pending JPH11196859A (ja) | 1998-01-20 | 1998-01-20 | 変異株 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH11196859A (ja) |
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1998
- 1998-01-20 JP JP2153898A patent/JPH11196859A/ja active Pending
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