JPH08140686A - 植物蛋白質をコードする遺伝子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 生理活性を有する植物蛋白質及びそれをコー
ドする蛋白質の提供。 【構成】 分裂酵母のフェロモンレセプター遺伝子二重
欠損株（減数分裂及び胞子形成ができない）に導入した
場合に該酵母の減数分裂及び胞子形成を誘導することが
できる植物遺伝子及び該遺伝子によりコードされた蛋白
質。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、植物における減数分裂
など、植物の生理作用に関与する蛋白質及びそれをコー
ドする遺伝子に関する。

【０００２】

【従来の技術】酵母では、突然変異株を利用して幾つか
の減数分裂の情報伝達に関与する遺伝子が単離され、そ
の遺伝子産物についての研究も行なわれてるが、高等植
物においては、減数分裂の突然変異体株を単離するのが
困難であり、ほとんど研究されていない。高等植物の減
数分裂については、ディファレンシャルスクリーニング
によって、減数分裂時に誘導される遺伝子群がユリから
クローニングされている（Broglie, K. らProc. Natl.
Acad. Sci. USA 83, 6820-6824, 1986) 。しかしなが
ら、今までに、分裂酵母フェロモンレセプター遺伝子二
重欠損株の胞子形成能を相補する高等植物のｃＤＮＡ
や、分裂酵母のｍｅｉ2 遺伝子にホモロジーのある高等
植物のｃＤＮＡの報告はない。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】従って本発明は、植物
細胞の減数分裂等、植物の生理作用と関連する蛋白質及
びそれをコードする遺伝子を提供しようとするものであ
る。

【０００４】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するた
め、本発明は、配列番号：１〜７のいずれかに記載され
ているアミノ酸配列と実質的に同じアミノ酸配列を有す
る蛋白質及びそれをコードする遺伝子を提供する。

【０００５】

【具体的な説明】動物や酵母では、細胞膜レセプターの
存在が明らかになっており、その遺伝子やタンパク質が
いくつか報告されている。分裂酵母においては減数分裂
に係わる変異体を用いて研究が進められて、情報伝達の
機構が明らかになりつつある（Watanabe Y. ら、実験医
学8, 115-121(1990)) 。既にいくつかのフェロモンレセ
プター遺伝子が報告されており（Kitamura, K.ら、EMBO
J. 10, 3743-3751(1991))、その情報伝達経路の下流に
存在するprotein kinaseやＲＮＡ結合タンパク質も得ら
れている。

【０００６】そこで本発明においては、植物からｃＤＮ
Ａライブラリーを作製し、これを、分裂酵母のフェロモ
ンレセプター遺伝子二重欠損株ＲＬ１９０（フェロモン
存在下でも減数分裂と胞子の形成ができない）に導入
し、胞子形成を誘導した酵母株からｃＤＮＡを抽出する
ことにより目的とする遺伝子を得る。次にこのｃＤＮＡ
の塩基配列を決定し、該塩基配列からそれがコードして
いるアミノ酸配列を推定し、それを機能が既知である蛋
白質又はペプチドのアミノ酸配列との相同性を調べ、本
発明によりクローニングした遺伝子がコードしている蛋
白質の作用を推定する。

【０００７】本発明の遺伝子の１つの態様は、配列番
号：１〜７に示すアミノ酸配列をコードするものであ
る。しかしながら、翻訳開始コドンに対応する１位のMe
t は発現後プロセシングにおいては除去される場合があ
る。従って、本発明の遺伝子の他の１つの態様は、翻訳
開始コドンに対応するMet の次から始まるアミノ酸配列
を含む蛋白質をコードするものである。この遺伝子にお
ける具体例の１つは、配列番号：１〜７におけるヌクレ
オチド配列を有するものである。

【０００８】一般に、同種又は同属に属する植物由来の
同種の活性を有する蛋白質であっても、例えば自然突然
変異、例えばヌクレオチドの置換、付加及び／又は欠失
によりアミノ酸配列のわずかな相違を伴う蛋白質が存在
することが知られている。本明細書に詳細に記載する方
法によれば、配列番号：１〜７に記載するアミノ酸配列
と全く同一ではないアミノ酸配列を有する蛋白質をコー
ドする遺伝子であってもクローニングすることができ
る。

【０００９】この様な蛋白質は、配列番号：１〜７に示
すアミノ酸配列に対して非常に高い相同性、例えば９５
％以上、さらには９８％以上の相同性を有するであろ
う。従って本発明は、配列番号：１〜７に示すアミノ酸
配列を有する蛋白質をコードする遺伝子のみならず、植
物に由来し、且つ配列番号：１〜７に示すアミノ酸配列
に対して９５％以上、例えば９８％以上の相同性を有す
るアミノ酸配列を有する蛋白質をコードする遺伝子も本
発明に属する。

【００１０】１つの生理活性蛋白質において、いわゆる
活性中心又は活性領域及びそれを立体的に支持する部分
以外の部分においては、必ずしも特定のアミノ酸配列が
必須ではなく、この様な非必須領域においては、本来の
蛋白質の活性を維持しながら、１〜少数のアミノ酸の置
換、欠失及び／又は付加等の修飾を行うことができるこ
とが知られている。この様な修飾が可能なアミノ酸の数
としては、常用の遺伝子修飾技法、例えば変異原プロー
ブを用いる部位特定変異誘発により修飾が容易な範囲で
あり、例えばアミノ酸約２０個以上、例えばアミノ酸約
１０個以下である。さらに、制限酵素及び／又は連結酵
素リガーゼを用いてアミノ酸配列の置換、欠失及び／又
は付加を行うこともできる。

【００１１】従って本発明は、配列番号：１〜７に示す
アミノ酸配列に対して、２０個以下、例えば１０個以下
のアミノ酸の置換、欠失及び／又は付加により修飾され
たアミノ酸配列を有する蛋白質をコードする遺伝子に関
する。この様な変更を本発明においては実質的に同一と
する。すなわち、本発明のＤＮＡは、植物から染色体Ｄ
ＮＡを抽出し、これを例えば制限酵素により適当な長さ
に切断し、この断片をベクターに挿入することによりゲ
ノムライブラリーを調製し、目的蛋白質の発現を検出す
ることにより目的とするＤＮＡを含有するベクターを選
択することができる。

【００１２】さらに、本発明の遺伝子は、植物から抽出
したｍＲＮＡに対して合成されたｃＤＮＡを含んで成る
ライブラリーからクローニングすることができる。ｍＲ
ＮＡからのｃＤＮＡライブラリーの作製は常法に従って
行うことができる。このようなｃＤＮＡライブラリー又
は前記のゲノムライブラリーのスクリーニング方法とし
ては、前記のごとく、フェロモンレセプター遺伝子が二
重欠損した分裂酵母を用いる方法のほかに、本発明によ
り開示されるＤＮＡ配列の全部又は一部から設計された
プローブを用いてそれとのハイブリダイゼーションによ
り行うこともできる。

【００１３】さらには、本発明により植物の生理活性蛋
白質をコードする特定のヌクレオチド配列が開示されて
いるから、そのヌクレオチド配列又は、それに所望の修
飾を加えたヌクレオチド配列を有するＤＮＡを、化学合
成により調製することができる。また、本発明の蛋白質
をコードするｃＤＮＡがクローニングされているから、
そのｃＤＮＡ又はその一部分を鋳型として用いることに
より、本発明の蛋白質をコードする修飾されたＤＮＡを
常法に従って、例えば部位特定変異誘発やＰＣＲ法によ
り合成することもできる。

【００１４】また、本発明の前記ＤＮＡ配列を含んでい
る組換えベクターも提供する。かかる組換えベクターは
前記ＤＮＡ配列が担持する蛋白質を発現調節するための
機能を有するＤＮＡ配列も含む。また、植物細胞へは、
公知の手法を用いて、エレクトロポレーション法、ある
いは、パーティクルガン法などを用いて組換え体プラス
ミドを直接導入することができる。導入された遺伝子は
植物の染色体に組み込まれて植物の遺伝子の一部として
複製・増殖する。

【００１５】また、目的とする遺伝子を公知の手法（た
とえば、Ｍ．Ｂｅｒｍａ、ヌクレイック アシッド リ
サーチ、１２巻、８７１１−８７２１ページ、１９８４
年）にしたがい、ｐＢＩ１０１などのバイナリーベクタ
ーに組み込み、これをＬＢＡ４４０４株などのアグロバ
クテリウム・ツメファシエンス菌に導入し、アグロバク
テリウムを植物の根・茎・葉などの組織に感染させて遺
伝子を導入して形質転換植物を得ることができる。導入
された遺伝子は植物の染色体に導入されて植物細胞中で
複製・増殖する。

【００１６】バイナリーベクターは市販されており、ｐ
ＢＩ１０１，ｐＢＩ２２１などが利用できる。また、ア
グロバクテリウム・ツメファシエンスＬＢＡ４４０４株
も市販されている。植物細胞での発現にはカリフラワー
モザイクの３５Ｓプロモーターなどの構成的に発現する
プロモーター、根などの器官特異的に発現するｐａｒ遺
伝子のプロモーター、植物ホルモンであるアグシジン酸
により誘導されるｒａｂ，ｌｅａ，ｅｍなどの遺伝子の
プロモーター、傷害処理などにより誘導されるフェニル
アラニンアンモニアリアーゼ遺伝子のプロモーターなど
が利用できる。

【００１７】これらのベクターへの、蛋白質をコードす
るＤＮＡ断片および必要により前記酵素の遺伝子を発現
調節する機能を有するＤＮＡ断片の組み込みは、適当な
制限酵素とリガーゼを用いる既知方法で行うことができ
る。このような組換えベクターで遺伝子導入できる微生
物としてはエシェリヒア・コリー（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈ
ｉａ ｃｏｌｉ）、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属な
どに属する微生物も利用することができる。この形質転
換も常法、たとえばMolecular cloning (J. Sambrook,
E. F. Fritsch, T. Maniatis著Cold SpringHarbor Labo
ratory Press 発行) やＤＮＡ cloning Vol.I〜III (D.
M. Glover編IRL PRESS 発行）などに記載された、Ｃａ
Ｃｌ₂ 法やプロトプラスト法により行うことができる。

【００１８】得られる本発明の形質転換体の代表的なも
のとしては、ｐＡＲ３０１／ＪＭ１０９が挙げられる。
本発明によれば、本発明の蛋白質をコードするｃＤＮＡ
は、常法に従って常用の発現ベクターに挿入した後、宿
主細胞、例えば他の細菌を含めての原核細胞、酵母等の
単細胞性宿主を含めての下等真核細胞、カイコなどの高
等真核細胞等を形質転換した後、これらの宿主細胞を培
養することにより、本発明の蛋白質を製造することがで
きる。

【００１９】具体的には、本発明によれば、配列番号：
１〜７に記載されているアミノ酸配列を有する蛋白質と
して、ＡＲ３０１，ＡＲ１９２，ＡＲ７８１，ＡＲ７８
２，ＡＲ７９１，ＡＲ４０１及びＡＲ４１１を挙げるこ
とができる。ＡＲ３０１の予想されるアミノ酸配列は分
裂酵母のＭＥＩ２（Watanabe Y. ら、EMBO J. 7, 761-7
67, 1988) とホモロジーがあった（図１）。ＭＥＩ２は
胞子形成の情報伝達経路の下流に存在するＲＮＡ結合タ
ンパク質である (Watanabe Y. ら、Cell, 78, 487-498,
1994)。ｍｅｉ２は分裂酵母の減数分裂には必須の遺伝
子である。

【００２０】ＭＥＩ２は、protein kinase PAT1 により
制御されているが（Watanabe Y. ら、EMBO J. 7, 761-7
67, 1988) 、ＰＡＴ１が不活性化された状態でｍｅｉ２
遺伝子産物が供給されると他の条件はどうであれ分裂酵
母は減数分裂を開始してしまう。このことから、ＡＲ１
７１は分裂酵母の減数分裂の情報伝達の下流に作用し
て、分裂酵母フェロモンレセプター遺伝子二重欠損株Ｒ
Ｌ１９０の胞子形成能を回復したと考えられる。高等植
物では花粉母細胞と胚のう母細胞で減数分裂が行われて
いるので（Smyth, D. ら、Plant Cell 2, 755-767(199
0))、ＡＲ１７１は、その減数分裂の情報伝達に関与し
ているかもしれない。

【００２１】ＡＲ１９２の予想されるアミノ酸配列は原
核生物で知られているヒートショック蛋白質ＧｒｐＥと
ホモロジーがあった（図２）。また高等植物ではユリの
減数分裂時に誘導される遺伝子群が報告されており、そ
の中のいくつかの遺伝子の予想されるアミノ酸配列は別
のヒートショック蛋白質にホモロジーがあることが判っ
ている。

【００２２】しかしそのユリから得られた遺伝子がどの
ような役割を果たしているかは不明である。それらの遺
伝子から予想されるアミノ酸配列とＡＲ１９２の予想さ
れるアミノ酸配列を比較しところ、特にホモロジーは見
られなかったが、ＡＲ１９２の産物も減数分裂に関与し
ているヒートショック蛋白質かもしれない。

【００２３】ＡＲ７８１の予想されるアミノ酸配列は既
知の配列と特にホモロジーは見られなかった。ＡＲ７８
１はｃＤＮＡの構造から考えて、成熟ｍＲＮＡのコード
領域全てを含む分子由来のｃＤＮＡであるといえる。つ
まりＯＲＦの上流と下流の読み枠中にストップコドンが
あり、ｐｏｌｙＡシグナルも存在している。遺伝情報解
析ソフト「マックモーリーテトラ」（KAROI-VERLAG, Re
inor Bornemann Bielefeld社）によると予想されるアミ
ノ酸配列の解析から３３ｋｄ，ｐ１８．２の可溶性の蛋
白質であると推定される。このアミノ酸配列の中にはリ
ジンやアルギニンのような塩基性のアミノ酸に富んだ部
位があり、その部分のｐＩは約９．０である。ＤＮＡ結
合蛋白質にはこのように塩基性残基に富んだ部分があ
り、その部分がＤＮＡに巻きつくと考えられているの
で、この蛋白質はＤＮＡ結合蛋白質である可能性があ
る。

【００２４】ＡＲ７８２の予想されるアミノ酸配列はカ
ーネーション（Dianthus caryophyllus)のflower senes
cence-related gene SR12 とホモロジーがあった。（図
３） （Raghothama, K.G.ら、Plant Mol. Biol. 17. 61-71,
1989) ＳＲ１２のｍＲＮＡは花に特異的に発現してお
り、ＳＲ１２の転写は花弁のエチレンに特異的に制御さ
れている。またＳＲ１２の上流には他のエチレンに制御
されている遺伝子であるＥ８（Cordes, S.ら、Plant Ce
ll 1, 1025-1034, 1989)やＣＨ５Ｂ（Broglie, K. ら、
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 6820-6824, 1986) の
プロモーターの配列とホモロジーがあることが確認され
ている。しかしＳＲ１２とその遺伝子産物の役割は明ら
かになっていない。

【００２５】ＡＲ７８２は５′端にストップコドンがな
くカーネーションのＳＲ１２のＯＲＦの長さ７３１コド
ンに比べるとＡＲ７８２の予想されるアミノ酸配列は、
２０６アミノ酸残基とかなり短いので、翻訳領域全長が
得られていないと考えられる。ＳＲ１２はエチレンに発
現が制御されていることからＳＲ１２の遺伝子産物はそ
の情報伝達に関与している可能性があり、酵母の胞子形
成の情報伝達の下流に何らかの影響を与えたのかもしれ
ない。

【００２６】ＡＲ７９１の予想されるアミノ酸配列は、
Myosin heavy chain (Yanagisawa,M.ら、J. Mol. Biol.
198, 143-157, 1987) のＲＯＤＬＩＫＥ ＴＡＩＬの
部分と分散的な弱いホモロジーがあった（図４，５，
６）。この部位はαヘリックスの繰り返し構造になって
いる。マックモーリーテトラによるＡＲ７９１の予想さ
れるアミノ酸の二次構造予測ではＡＲ７９１はヘリック
スが多く含まれており、構造的に似ていると考えられ
る。

【００２７】ミオシンは筋肉のおもな構造蛋白質であ
り、ＡＲ７９１の遺伝子産物も植物の構造蛋白質かもし
れない。構造蛋白質の中には、細胞膜の構造を形成して
いるものもあるので、分裂酵母フェロモンレセプター遺
伝子二重欠損株の細胞膜に影響し胞子形成態を回復した
可能性も考えられる。またマックモーリーテトラによる
Ｈｙｄｒｏｐａｔｈｙの解析からＮ末に疎水的な１８ア
ミノ酸残基のドメインがあることが判った。この部分は
プロセスされて他の組織へ移動するのかもしれない。

【００２８】

【実施例】次に実施例により本発明をさらに具体的に説
明する。ｃＤＮＡライブラリーの作製 シロイヌナズナ（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ ｔｈａｌｉ
ａｎａ（ｃｏｌｕｍｂｉａ））を、２４時間光条件下、
０．８％寒天ＭＳ培地上で２２℃にて培養し、２〜３週
間後に植物体を得た。この植物からホットフェノール法
(Current Protocols in Molecular Biology, Wiley int
erscience)により全ＲＮＡを抽出した。この全ＲＮＡ
を、ｍＲＮＡ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ(Pha
rmacia社製) を用い、このキットのプロトコールに記載
されている方法によりｍＲＮＡを精製した。

【００２９】次に、Ｇｕｂｌｅｒ−Ｈｏｆｆｍａｎ法に
よりｃＤＮＡを作製した。要約すれば、ＺＡＰ ｃＤＮ
Ａ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ Ｋｉｔ（STRATAGENE社製）を
用い、そのプロトコールにより、メチル化したｄＣＴＰ
を用いながら第一鎖を合成し（このためｃＤＮＡはＸｈ
ｏＩにより切断されない）し、次にＤＮＡポリメラーゼ
Ｉにより第二鎖を合成し、フェノール抽出及びエタノー
ル沈澱によりｃＤＮＡを回収した。次に制限酵素Ｘｈｏ
Ｉにより消化した。こうして得られたｃＤＮＡは０．８
％アガロースゲル電気泳動により分離した。１kbp 以上
のＤＮＡを回収精製した。精製はＧＥＮＥＣＬＥＡＮＥ
II（BI 0101 社）により行った。

【００３０】次に、分裂酵母−大腸菌シャトルベクター
ｐＲＥＰＨ１（ｐＲＥＰ１（J. Biol. Chem. 265, 19,
10857-10864, 1990)のＮａｅＩ−ＳｍａＩ部位にｐＵＣ
１８由来のＳａｃＩ−ＨｉｎｄIII 断片を挿入したも
の）をＳａｌＩ及びＳｍａＩで消化し、上記のｃＤＮＡ
と連結してｃＤＮＡライブラリーを作製した。このｃＤ
ＮＡライブラリーを用いて大腸菌ＪＭ１０９を形質転換
し、これを培養することにより約１０⁸ 個の独立したコ
ロニーを得た。液体培養してプラスミドを調製し、酵母
フェロモンレセプター欠損株への形質転換に用いた。

【００３１】分裂酵母の形質転換 上記のようにして作製したｃＤＮＡライブラリーを用い
て、分裂酵母（Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｐｏｍｂｅ）ＲＬ１９０（工業技術院生命工学工業技
術研究所に平成６年１１月１８日にＦＥＲＭ Ｐ−
として寄託されている）を形質転換した。分裂酵
母ＲＬ１９０をＹＥＬ（１／２ＹＥＬ：グルコース１５
ｇ、酵母エキス２．５ｇ、水で１Ｌとし、オートクレー
ブ滅菌）スラント上で２日間培養し、このスラントに２
mlのＭＢ培地：

【００３２】

【表１】

【００３３】

【表２】

【００３４】を添加し、酵母を懸濁し、その０．５mlを
１００mlのＭＢ培地に接種し、約１５時間培養し、菌体
を４℃にて、２５００rpm で５分間遠心分離した。沈澱
を８mlの減菌水に懸濁した後、再び４℃、２５００rpm
にて５分間遠心分離した。ＯＤ₅₃₀ ＝５０の菌体に対し
て０．１Ｍ酢酸リチウム溶液（０．６６ｇのＣＨ₃ ＣＯ
ＯＬｉに水を加えて１００mlとし、フィルター減菌した
もの）８００μｌを加えて懸濁し、１００μｌづつエッ
ペンドルフチューブに分注し、３０℃にて１時間保温し
た。

【００３５】これに、ｃＤＮＡライブラリーから調製し
たプラスミドＤＮＡ１μｇ及び３０℃に加温した５０％
のＰＥＧ４０００（５０mlのポリエチレングリコール４
０００に水を加えて１００mlとし、フィルター減菌した
もの）２９０μｌを加え、３０℃にて１時間保温した。
次に、４３℃にて１５分間ヒートショックを加え、３０
℃にて５分間保温し、４℃、５０００rpm にて２分間遠
心分離した。

【００３６】沈澱した菌体を０．５mlの１／２ＹＥＬに
懸濁し、３０℃にて３０分間静置し、１００μｌづつＳ
ＳＡ培地（表２および表３）に塗布し、３０℃にて３日
間培養した。

【００３７】

【表３】

【００３８】陽性コロニーのスクリーニング （１）ヨウ素蒸気による検出 ＳＳＡ培地に生育したコロニーにヨウ素蒸気をあてるた
めＳＳＡ培地にRepliPlate Clony Transfer Pad （宝酒
造）でコロニーをトランスファーした。生えてきたコロ
ニーを、ヨウ素蒸気に当てた。胞子を形成していないも
のは褐色に変化したが、胞子を形成したものは紫色に変
化した（１次スクリーニング）。コントロールには分裂
酵母フェロモンレセプター遺伝子ｍａｍ２を含むプラス
ミドＤＮＡ（ｐＤＢ５２）を用いた。紫色に変化したコ
ロニーをＹＰＤ培地に広げ３０℃で３日間培養した。更
にそのコロニーをＳＳＡ培地に広げた（２次スクリーニ
ング）。

【００３９】（２）酵母プラスミドの調製 上記二次スクリーニングにおいて胞子を形成したコロニ
ーを４０mlのＹＰＤ培地中で一夜培養し、その培養液を
５０mlの遠心チューブに移して５０００rpm 、４℃にて
５分間遠心分離した。沈澱を５mlのＴＥ（１０mM Ｔｒ
ｉｓ−ＨＣｌ，pH８．０，１mM ＥＤＴＡ）に懸濁し、
４℃、５０００rpm にて５分間遠心分離した。沈澱を
３．２mlのＳｏｌｕｔｉｏｎ Ｉに溶解し、１００μｌ
の１５mg／mlＺｙｍｏｌｙａｓｅ １００Ｔを加え、３
７℃にて５分間保温した後、５０００rpm 、４℃にて５
分間遠心分離した。沈澱に３．９６mlのＳｏｌｕｔｉｏ
ｎIIを加え、６５℃にて３０分間保温した。

【００４０】

【表４】

【００４１】次に、１mlの４ＭＫＯＡｃを加え、４℃に
て１時間放置し、４℃、１００００rpm にて２５分間遠
心分離した。上清に１２mlの２５％エタノールを加え室
温にて１０分間放置した後室温、１００００rpm にて１
５分間遠心分離した。沈澱を３mlのＴＥに溶解し、これ
に１５０μｌの１mg／mlＲＮａｓｅを加え、３７℃にて
３０分間保温した後フェノール／クロロホルム処理し
た。上清に１／１０量の酢酸ナトリウム及び２倍量のエ
タノールを加え、−２０℃にて２時間放置した後、４
℃、１００００rpm にて３０分間遠心分離した。次に、
沈澱を真空乾燥した後、ＴＥに溶解した。

【００４２】（３）大腸菌への形質転換及びプラスミド
の調製 上記のプラスミドＤＮＡを大腸菌ＪＭ１０９（宝酒造
製）のコンピテント細胞に形質転換し、２ＸＴＹ培地
（Ｂａｃｔｏ−ｔｒｙｐｔｏｎ １６ｇ、Ｂａｃｔｏ−
Ｙｅａｓｔ ｅｘｔｒａｃｔ １０ｇ、ＮａＣｌ ５
ｇ、水で１Ｌにし、オートクレーブ滅菌）で培養してプ
ラスミドを調製した。

【００４３】（４）三次スクリーニング 上記のようにして大腸菌でクローニングしたプラスミド
ＤＮＡを再度分裂酵母に形質転換し、前記のようにして
ヨウ素蒸気による検出を行った。スクリーニングの結果
を表５に示す。

【００４４】

【表５】

【００４５】三次スクリーニングにより８個のクローン
を得た。ｃＤＮＡを大腸菌−酵母シャトルベクターｐＡ
Ｓ２４８に挿入してこれを用いて分裂酵母ＲＬ１９０株
を形質転換し、ＳＳＡ培地で生育したコロニーの胞子形
成率を位相差顕微鏡により確認して、四胞子形成率を求
めた。結果を次の表に示す。

【００４６】

【表６】

【００４７】塩基配列の決定 塩基配列を決定するため、約１００〜５００bpの断片と
してｐＵＣ１１８にサブクローニングし、パーキンエル
マー社製３７３Ａ蛍光ＤＮＡシークエンサーで解析し
た。その結果配列番号：１〜７に示す結果が得られた。

【００４８】

【発明の効果】本発明の遺伝子及び蛋白質は、そのアミ
ノ酸配列の類似性から、これらのアミノ酸配列と類似す
る他の既知蛋白質と同様の機能を有するものと推定され
る。また、本発明の遺伝子は、それを、フェロモンレセ
プター遺伝子を欠損しており減数分裂及び胞子形成をす
ることができない酵母に導入することにより、減数分裂
及び胞子形成を誘導するために有用である。

【００４９】

【配列表】

配列番号：１ 配列の長さ：３６１７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 AACGCGTCGT GAGAGGAGGG GAAATTCGAA AAGAGAAAGA AAAAAAATTG 50 AAAACGCCGA TTCACTTTTT TTATATATAT AATATAAAAA ATTTCTTTTA 100 CGGAATTAAA TATTCTGTGA TGGATGCGAT TGGATAGAAG GAAACAAAAA 150 GGAAAGGAGG AAGATAAAAG AGAGAAGAAG GAATTATTCT CTTCTCTCTT 200 CTCTTTCATC TCTGTCTACA TCGCTGTTTT TTTTTTTCTT CACGGATCGT 250 GATACCTGAA GAAGAAGAAG GTTTTTTCAG GGGAAGTGAT ATGGTTCGTT 300 GAAATAAGTT TAAAGTTTTA AAAGATTTTG ATTCTGGTTT TATTAGTCAA 350 ATTTTGTAAG ATGCCGTCTG ATATAATGGA ACAGAGAGGT GTTCAACACC 400 TCCCACTTTC ATGAAGATAT TCATATTACT TCAGAGAGGC AATTTGGGTT 450 T ATG AAA ACA GAC ATG ATG CCT GAA AAC CAA GGT GGT CGT 490 Met Lys Thr Asp Met Met Pro Glu Asn Gln Gly Gly Arg 1 5 10 GAT AGA CTT TCA AGT ATG CCA AAG AGT TCC TGG ACA TCT GAA AGT 535 Asp Arg Leu Ser Ser Met Pro Lys Ser Ser Trp Thr Ser Glu Ser 15 20 25 TAC CAG CTG AAG CCA CAA TCT AGT TTT TCT GGG TCG CAC CCC TCT 580 Tyr Gln Leu Lys Pro Gln Ser Ser Phe Ser Gly Ser His Pro Ser 30 35 40 GGT AGC CCT AAC GCA AGA AAC ACT ACA AAT GGT AGT CAG TGG GAA 625 Gly Ser Pro Asn Ala Arg Asn Thr Thr Asn Gly Ser Gln Trp Glu 45 50 55 AGC AGT TTA TTT TCC AGC TCA ATG TCT GAT TTA TTT AGT AGA AAG 670 Ser Ser Leu Phe Ser Ser Ser Met Ser Asp Leu Phe Ser Arg Lys 60 65 70 CTG CGG CTA CAG GGA AGT GAT ATG CTA TCC ACT ATG TCT GCA AAC 715 Leu Arg Leu Gln Gly Ser Asp Met Leu Ser Thr Met Ser Ala Asn 75 80 85 ACA GTT GTT ACC CAC CGT GAA GAA GAA CCG TCT GAA TCT TTG GAA 760 Thr Val Val Thr His Arg Glu Glu Glu Pro Ser Glu Ser Leu Glu 90 95 100 GAG ATT GAG GCA CAA ACT ATT GGA AAT CTT CTC CCA GAT GAA GAT 805 Glu Ile Glu Ala Gln Thr Ile Gly Asn Leu Leu Pro Asp Glu Asp 105 110 115 GAT CTT TTT GCA GAA GTG ACA GGT GAG GTT GGG CGT AAA TCT CGT 850 Asp Leu Phe Ala Glu Val Thr Gly Glu Val Gly Arg Lys Ser Arg 120 125 130 GCT AAT ACA GGA GAT GAG TTG GAT GAG TTT GAC CTC TTC AGC AGT 895 Ala Asn Thr Gly Asp Glu Leu Asp Glu Phe Asp Leu Phe Ser Ser 135 140 145 GTT GGT GGC ATG GAA CTA GAT GGA GAT ATT TTT TCT TCT GTG AGT 940 Val Gly Gly Met Glu Leu Asp Gly Asp Ile Phe Ser Ser Val Ser 150 155 160 CAT AGA AAT GGT GAG AGA GGT GGC AAT AAT TCT GTT GGC GAG CTT 985 His Arg Asn Gly Glu Arg Gly Gly Asn Asn Ser Val Gly Glu Leu 165 170 175 AAC CGT GGG GAA ATT CCA TCC AGA ACA CTT TTG GTC GGA AAT ATC 1030 Asn Arg Gly Glu Ile Pro Ser Arg Thr Leu Leu Val Gly Asn Ile 180 185 190 AGT AGC AAT GTT GAA GAC TAT GAG CTG AAG GTC CTT TTT GAG CAA 1075 Ser Ser Asn Val Glu Asp Tyr Glu Leu Lys Val Leu Phe Glu Gln 195 200 205 TTT GGA GAC ATC CAG GCT CTT CAT ACA GCT TGC AAA AAT CGT GGC 1120 Phe Gly Asp Ile Gln Ala Leu His Thr Ala Cys Lys Asn Arg Gly 210 215 220 TTT ATC ATG GTA TCG TAC TGT GAT ATA AGG GCT GCT CAG AAT GCG 1165 Phe Ile Met Val Ser Tyr Cys Asp Ile Arg Ala Ala Gln Asn Ala 225 230 235 GCG AGA GCA CTC CAG AAT AAG CTG TTA AGA GGA ACA AAA CTT GAC 1210 Ala Arg Ala Leu Gln Asn Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Leu Asp 240 245 250 ATT CGT TAT TCT ATC TCT AAG GAA AAT CCT TCA CAA AAA GAT ACA 1255 Ile Arg Tyr Ser Ile Ser Lys Glu Asn Pro Ser Gln Lys Asp Thr 255 260 265 AGT AAA GGA GCC TTG TTG GTT AAT AAT CTC GAT TCT TCT ATT TCG 1300 Ser Lys Gly Ala Leu Leu Val Asn Asn Leu Asp Ser Ser Ile Ser 270 275 280 AAT CAA GAG CTG AAT CGA CTG GTC AAA TCG TAT GGA GAG GTC AAA 1345 Asn Gln Glu Leu Asn Arg Leu Val Lys Ser Tyr Gly Glu Val Lys 285 290 295 GAG ATT CGT AGG ACC ATG CAT GAT AAC TCA CAG ATA TAC ATA GAG 1390 Glu Ile Arg Arg Thr Met His Asp Asn Ser Gln Ile Tyr Ile Glu 300 305 310 TTC TTT GAC GTT CGA GCT GCA GCA GCT GCT CTT GGT GGA CTA AAT 1435 Phe Phe Asp Val Arg Ala Ala Ala Ala Ala Leu Gly Gly Leu Asn 315 320 325 GGA CTT GAG GTT GCT GGG AAG AAG CTT CAA CTT GTG CCG ACC TAT 1480 Gly Leu Glu Val Ala Gly Lys Lys Leu Gln Leu Val Pro Thr Tyr 330 335 340 CCA GAG GGT ACA AGA TAC ACG TCG CAG TGT GCT GCA AAT GAT ACT 1525 Pro Glu Gly Thr Arg Tyr Thr Ser Gln Cys Ala Ala Asn Asp Thr 345 350 355 GAA GGG TGT CTA CCT AAA ACG TCT TAT AGT AAT ACA TCA TCG GGA 1570 Glu Gly Cys Leu Pro Lys Thr Ser Tyr Ser Asn Thr Ser Ser Gly 360 365 370 CAC ATA GGT AGA CAT TTC CCA GGA ATG ATT TCT TCA ACC TCC AGT 1615 His Ile Gly Arg His Phe Pro Gly Met Ile Ser Ser Thr Ser Ser 375 380 385 GAT GGT GGA TCT ATG CGG GTT ATA CAT AAT TCT ATT GGA TCA CCT 1660 Asp Gly Gly Ser Met Arg Val Ile His Asn Ser Ile Gly Ser Pro 390 395 400 GTG AAT TCC TTC ATT GAA CGA CAT CGT AGT CTC AGC ATT CCT ATT 1705 Val Asn Ser Phe Ile Glu Arg His Arg Ser Leu Ser Ile Pro Ile 405 410 415 GGA TTC CCA CCT TCG GCA AAC GGC ATC TCA GCA AGT AAG CCT GTA 1750 Gly Phe Pro Pro Ser Ala Asn Gly Ile Ser Ala Ser Lys Pro Val 420 425 430 GGA CTT CAG GAG CAT GGC CAC CAT TTT GAT AAT TCA AAT ATG GGG 1795 Gly Leu Gln Glu His Gly His His Phe Asp Asn Ser Asn Met Gly 435 440 445 ATC CAA AGC ATG CCA AAT CTC CAT CCT CAT TCT TTT TCG GAG TAC 1840 Ile Gln Ser Met Pro Asn Leu His Pro His Ser Phe Ser Glu Tyr 450 455 460 GTC GAC AAC TTT GCA AAT GGT AGT CCA TAT ACG TCC TCT GCA TTT 1885 Val Asp Asn Phe Ala Asn Gly Ser Pro Tyr Thr Ser Ser Ala Phe 465 470 475 TCT GAA ATG GTC AGT GAT GGC TCA AAA GCA AAT GAA GGC TTT ATG 1930 Ser Glu Met Val Ser Asp Gly Ser Lys Ala Asn Glu Gly Phe Met 480 485 490 ATA CAT AAT GTT CGT GGA GTG GAA GGC TTT AGT GGA GGC GGT ATA 1975 Ile His Asn Val Arg Gly Val Glu Gly Phe Ser Gly Gly Gly Ile 495 500 505 GGA TCT CCC ATG CAT CAA AGC TCT CGC CGC CCT ATT AAT TTA TGG 2020 Gly Ser Pro Met His Gln Ser Ser Arg Arg Pro Ile Asn Leu Trp 510 515 520 AGC AAC TCT AAC ACT CAG CAA CAA AAT CCG TCA AGT GGC ATG ATG 2065 Ser Asn Ser Asn Thr Gln Gln Gln Asn Pro Ser Ser Gly Met Met 525 530 535 TGG CCT AAC TCG CCA TCT CAC ATC AAC AGC ATT CCT ACT CAG CGC 2110 Trp Pro Asn Ser Pro Ser His Ile Asn Ser Ile Pro Thr Gln Arg 540 545 550 CCA CCT GTT ACT GTA TTC TCT AGA GCA CCT CCT ATA ATG GTG AAT 2155 Pro Pro Val Thr Val Phe Ser Arg Ala Pro Pro Ile Met Val Asn 555 560 565 ATG GCA TCT TCC CCT GTG CAC CAC CAC ATT GGA TCT GCG CCG GTA 2200 Met Ala Ser Ser Pro Val His His His Ile Gly Ser Ala Pro Val 570 575 580 TTA AAT TCT CCT TTC TGG GAC AGA AGA CAA GCC TAT GTA GCT GAA 2245 Leu Asn Ser Pro Phe Trp Asp Arg Arg Gln Ala Tyr Val Ala Glu 585 590 595 TCT CTA GAA TCA TCT GGC TTC CAC ATA GGT TCT CAT GGT AGC ATG 2290 Ser Leu Glu Ser Ser Gly Phe His Ile Gly Ser His Gly Ser Met 600 605 610 GGG ATT CCT GGC TCT TCA CCA TCA CAT CCA ATG GAC ATT GGT TCT 2335 Gly Ile Pro Gly Ser Ser Pro Ser His Pro Met Asp Ile Gly Ser 615 620 625 CAT AAG ACT TTC TCT GTT GGT GGG AAT CGC ATG GAT GTA AAT TCC 2380 His Lys Thr Phe Ser Val Gly Gly Asn Arg Met Asp Val Asn Ser 630 635 640 CAA AAT GCT GTC CTG CGA TCT CCT CAA CAG TTA TCT CAT CTC TTT 2425 Gln Asn Ala Val Leu Arg Ser Pro Gln Gln Leu Ser His Leu Phe 645 650 655 CCT GGA AGG AGT CCA ATG GGT TCG ATG CCA GGG TCA TTT GAC TCG 2470 Pro Gly Arg Ser Pro Met Gly Ser Met Pro Gly Ser Phe Asp Ser 660 665 670 CCA AAT GAA CGA TAC AGG AAT CTC TCT CAC CGA AGA AGC GAA TCT 2515 Pro Asn Glu Arg Tyr Arg Asn Leu Ser His Arg Arg Ser Glu Ser 675 680 685 AGC TCT AGC AAT GCT GAC AAA AAA CTG TAT GAG CTT GAC GTT GAC 2560 Ser Ser Ser Asn Ala Asp Lys Lys Leu Tyr Glu Leu Asp Val Asp 690 695 700 CGT ATA TTA CGT GGG GAG GAC AGG AGG ACA ACA TTG ATG ATT AAA 2605 Arg Ile Leu Arg Gly Glu Asp Arg Arg Thr Thr Leu Met Ile Lys 705 710 715 AAC ATT CCT AAC AAG TAC ACT TCG AAG ATG CTT CTA TCT GCT ATT 2650 Asn Ile Pro Asn Lys Tyr Thr Ser Lys Met Leu Leu Ser Ala Ile 720 725 730 GAC GAG CAT TGT AAA GGA ACT TAT GAT TTC CTT TAT TTG CCA ATT 2695 Asp Glu His Cys Lys Gly Thr Tyr Asp Phe Leu Tyr Leu Pro Ile 735 740 745 GAC TTC AAG AAC AAA TGC AAT GTG GGA TAT GCT TTC ATC AAT CTT 2740 Asp Phe Lys Asn Lys Cys Asn Val Gly Tyr Ala Phe Ile Asn Leu 750 755 760 ATT GAA CCT GAA AAG ATT GTC CCA TTT TTT AAG GCA TTT AAT GGC 2785 Ile Glu Pro Glu Lys Ile Val Pro Phe Phe Lys Ala Phe Asn Gly 765 770 775 AAA AAG TGG GAA AAG TTC AAT AGC GAG AAG GTG GCA ACG CTT ACG 2830 Lys Lys Trp Glu Lys Phe Asn Ser Glu Lys Val Ala Thr Leu Thr 780 785 790 TAT GCT CGT ATC CAA GGG AAA ACA GCT CTT ATT GCC CAT TTC CAG 2875 Tyr Ala Arg Ile Gln Gly Lys Thr Ala Leu Ile Ala His Phe Gln 795 800 805 AAC TCA AGC TTA ATG AAC GAA GAC AAA CGT TGC CGA CCT ATT CTC 2920 Asn Ser Ser Leu Met Asn Glu Asp Lys Arg Cys Arg Pro Ile Leu 810 815 820 TTC CAC ACT GAT GGT CCA AAT GCT GGT GAT CAG GAA CCA TTT CCA 2965 Phe His Thr Asp Gly Pro Asn Ala Gly Asp Gln Glu Pro Phe Pro 825 830 835 ATG GGA AGC AAC ATA CGG TCA AGA CCA GGC AAG CCA CGA AGC AGT 3010 Met Gly Ser Asn Ile Arg Ser Arg Pro Gly Lys Pro Arg Ser Ser 840 845 850 AGC ATT GAC AAC TAC AAC AGC TTT AGC ATC TCT TCC GTT TCT GAA 3055 Ser Ile Asp Asn Tyr Asn Ser Phe Ser Ile Ser Ser Val Ser Glu 855 860 865 AAC CGA GAA GAA ACT CCT AAT GGA ACT GAT CCG TTC TTG AAG GAG 3100 Asn Arg Glu Glu Thr Pro Asn Gly Thr Asp Pro Phe Leu Lys Glu 870 875 880 AAC TAA CCAATGAGCA AAACAAGCAG AGGTAAAACA AAGAACACAT 3146 Asn *** AAAAAGAGAC ACGAAGATAA CAAGAAGGTT AAATATATAT AAAGTTATTA 3196 TTATATGATA TCATCCACAC ACCCTAGAGT TCTGTAAATC GGGGGGTGTT 3246 AGATTTACCC TGACAAAACT CATTTTGCAG TGAAGAAATT TTTTGGAGAG 3296 ATGAAAAACT TTGGTGACCA CCAACCTTTA CCCAGGTTGT TGTTGCTTCA 3346 CCAGTTTTGT TGTATTACCC AAATCCCCTG AAAAAAATTG CAGGTTTTTT 3396 TTTTTTGTTC CTCTTTTTTT TTGGGTTTTG GGGTTATATT CAAGGATTTT 3446 TGGTTCTTGC TATCAATGTA TAACAGCCTT GGATTACACT CATCTTCTTT 3496 GCTGGCTATT TGTGGCCATT CTACGTTGTA CTCTTTTGGA CCCTTTTTTG 3546 AATGCTTCTA TTTTGGGATA TATAAAAATA TTATTTTTCC TAAAAAAAAA 3596 AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA A 3617

【００５０】配列番号：２ 配列の長さ：１１１７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ACGGACCCCA CGATTTCTCG CATAAGCTTG TTCCAGCTCA G ATG TCT ATG 50 Met Ser Met 1 ATG GAT TCG TTT GCA CTG CAA AGG TTC AAT TTT TCT TCC TCT ACC 95 Met Asp Ser Phe Ala Leu Gln Arg Phe Asn Phe Ser Ser Ser Thr 5 10 15 TCG CCT GAA TCA GAT GAG AAG AAG ACC CAC ACT GAG GCC TCA AAG 140 Ser Pro Glu Ser Asp Glu Lys Lys Thr His Thr Glu Ala Ser Lys 20 25 30 ACA AGT GAA GAG AAA CCT ACA GCT GAG GCA AAC CAA CCA GGT CTT 185 Thr Ser Glu Glu Lys Pro Thr Ala Glu Ala Asn Gln Pro Gly Leu 35 40 45 GAC TCT GAA TCT AAA GAT TCT GTG ACA GAT TCT GCA AAA AGA AAG 230 Asp Ser Glu Ser Lys Asp Ser Val Thr Asp Ser Ala Lys Arg Lys 50 55 60 CGG AAA GGT GCT AAA GGA GCT GCA TCT TCA TCT TCT GAA TCA GAT 275 Arg Lys Gly Ala Lys Gly Ala Ala Ser Ser Ser Ser Glu Ser Asp 65 70 75 TCT GAG AGT GAT GAT GAT GAA TTG TCA GCC GAT GAT TTG GTG AAG 320 Ser Glu Ser Asp Asp Asp Glu Leu Ser Ala Asp Asp Leu Val Lys 80 85 90 CTC GTA GCT GAG AAG GAA GAG CTA CTG TCT GAG AAG GAA GAA GAG 365 Leu Val Ala Glu Lys Glu Glu Leu Leu Ser Glu Lys Glu Glu Glu 95 100 105 ATT AAG CAG TTG AAA GAC AAA GTT CTT CGC ACT TAT GCT GAG ATG 410 Ile Lys Gln Leu Lys Asp Lys Val Leu Arg Thr Tyr Ala Glu Met 110 115 120 GAG AAT GTC ATG GAC AGA ACA AGA CGT GAT GCT GAA AAC ACC AAA 455 Glu Asn Val Met Asp Arg Thr Arg Arg Asp Ala Glu Asn Thr Lys 125 130 135 AGT ATG CCG TAC AGA ATT TTG CAA AGA GCC TAT TGG ATG TGG CGG 500 Ser Met Pro Tyr Arg Ile Leu Gln Arg Ala Tyr Trp Met Trp Arg 140 145 150 ATA ATC TTG GAA GAG CTT CTT CGG TTG TCA AAG AAA GCT TCT CAA 545 Ile Ile Leu Glu Glu Leu Leu Arg Leu Ser Lys Lys Ala Ser Gln 155 160 165 AGC TTG AAC TCA GAA GAT TCT GCT GGA GCA GCT CCA CTA TTA AAG 590 Ser Leu Asn Ser Glu Asp Ser Ala Gly Ala Ala Pro Leu Leu Lys 170 175 180 ACC CTT TTA GAA GGA GTG GAG ATG ACT GAG AAA CAG CTT GCT GAG 635 Thr Leu Leu Glu Gly Val Glu Met Thr Glu Lys Gln Leu Ala Glu 185 190 195 GTA TTT AAG AAA TTT GGT ATG GAG AAG TAT GAT CCT ATA AAC GAG 680 Val Phe Lys Lys Phe Gly Met Glu Lys Tyr Asp Pro Ile Asn Glu 200 205 210 CCA TTT GAT CCA AAC AGA CAT AAC GCA GTG TTC CAA GTC CCT GAT 725 Pro Phe Asp Pro Asn Arg His Asn Ala Val Phe Gln Val Pro Asp 215 220 225 GCT TCT AAG CCA GAA GGC ACA GTT GCT CAT GTC TTG AAG TCT GGA 770 Ala Ser Lys Pro Glu Gly Thr Val Ala His Val Leu Lys Ser Gly 230 235 240 TAC ACG CTG TAT GAC CGA GTT ATA AGA CCA GCT GAG GTT GGT GTT 815 Tyr Thr Leu Tyr Asp Arg Val Ile Arg Pro Ala Glu Val Gly Val 245 250 255 ACC CAG GGA GGA GAG AAC CAA GAA GAA AAG AAA GAG TCT GAT GCT 860 Thr Gln Gly Gly Glu Asn Gln Glu Glu Lys Lys Glu Ser Asp Ala 260 265 270 TAA GAAGAAGTCA GCTGGTTTTC ATAAATTTTG TTACGGTTCT ATGTTTCCAT 913 *** TAACATCTTC TCGAGTCTTC GAGTCATAGT TTTCTTTTGT GGTTTGGTTA 963 TCATTAGATG AACAAGATCT CCCATAAGTT GCTGGACATG GCATTTTCAG 1013 GGGAAATCCT GCTTCTGTGT CTGTTTTCTC TATCCCCATT CTATAATTGG 1063 ACGAGGAAAA TATCATTTTA CATCCCAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1113 AAAA 1117

【００５１】配列番号：３ 配列の長さ：１１４０ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ACGGTACCCC TAGAAACAAT GGAAGTGATG AGCTTGACTG CCCCATCTTC 50 ACCGAGACAA TTATCTGGCT GCTTCTTAAG CGCACCAACA AGCCCTAGAA 100 GATTCA ATG AGT TTT ATA GAG AGT TTG GAG AGG CCG CAA CAA 142 Met Ser Phe Ile Glu Ser Leu Glu Arg Pro Gln Gln 1 5 10 AGA AAC TTC TCC GAC CGT CTT ACG GTT CCT TTT GAT TGG GAA GAG 187 Arg Asn Phe Ser Asp Arg Leu Thr Val Pro Phe Asp Trp Glu Glu 15 20 25 ACT CCA GGC ACG CCT AGG AAG ATC ACC AAC GAT GAT GAT GAT GAT 232 Thr Pro Gly Thr Pro Arg Lys Ile Thr Asn Asp Asp Asp Asp Asp 30 35 40 ATT GAT TTC GCT TTC GAG ATT GGT GGG AAA CTC GAA ACG ACG TCG 277 Ile Asp Phe Ala Phe Glu Ile Gly Gly Lys Leu Glu Thr Thr Ser 45 50 55 CTT TTT GCT GAA GAG CTT TTT GAT GGA GGC AAA ATC AAA CCC TTG 322 Leu Phe Ala Glu Glu Leu Phe Asp Gly Gly Lys Ile Lys Pro Leu 60 65 70 AAG CCT CCT CCG TAT TTA CAA TTA GAC CAT CAT CAT CAG CCT CAG 367 Lys Pro Pro Pro Tyr Leu Gln Leu Asp His His His Gln Pro Gln 75 80 85 ATT TTA TCT CCA AGG TCT CCA AGA TCA CCT ATT GCT CAT GGT AAG 412 Ile Leu Ser Pro Arg Ser Pro Arg Ser Pro Ile Ala His Gly Lys 90 95 100 AAC ATT ATC CGC AAA GCT TTT TCC CCA AGA AAG AAA CCG GAT AAC 457 Asn Ile Ile Arg Lys Ala Phe Ser Pro Arg Lys Lys Pro Asp Asn 105 110 115 GTG GAT CCT TTT GAG GTC GCC ATG GAT AAA GCT AGG AAT GGC TTA 502 Val Asp Pro Phe Glu Val Ala Met Asp Lys Ala Arg Asn Gly Leu 120 125 130 GGA GAG GAA AGA GGG AGA GGG AGA CGT CAA AAC TCT GGT CGT AGA 547 Gly Glu Glu Arg Gly Arg Gly Arg Arg Gln Asn Ser Gly Arg Arg 135 140 145 GTT GCT CGA TCA CTT TCG CCT TTT CGG GTT TCG GCT TAT CCA TGG 592 Val Ala Arg Ser Leu Ser Pro Phe Arg Val Ser Ala Tyr Pro Trp 150 155 160 GAA GAA CAA GAA CAA GAA CAA GAA CAA GAA CAG AGA GAT GTA CAA 637 Glu Glu Gln Glu Gln Glu Gln Glu Gln Glu Gln Arg Asp Val Gln 165 170 175 GAA CAG AGG AAA GGG ACC TTG TCT TCT ATT CCA TCT ACA TCT TCA 682 Glu Gln Arg Lys Gly Thr Leu Ser Ser Ile Pro Ser Thr Ser Ser 180 185 190 TCA GCT TGC GTG TCT TGC AAG TCA TCT TCC TCA AAG AAA TGG AGA 727 Ser Ala Cys Val Ser Cys Lys Ser Ser Ser Ser Lys Lys Trp Arg 195 200 205 CTA AAG GAC TTT CTT CTG TTC CGA AGT GCA TCC GAA GGA AGA GCA 772 Leu Lys Asp Phe Leu Leu Phe Arg Ser Ala Ser Glu Gly Arg Ala 210 215 220 AGG CAC AAC AAA GAT TCG GTA AAG ACG TTT ACA AGT TTG TTT AGG 817 Arg His Asn Lys Asp Ser Val Lys Thr Phe Thr Ser Leu Phe Arg 225 230 235 AAG CAA GAA GAC ACC AAG AAC TCG AGT TCA CGA GGA AGA GGG TCA 862 Lys Gln Glu Asp Thr Lys Asn Ser Ser Ser Arg Gly Arg Gly Ser 240 245 250 TCA TCG GTC TCC GCC CAT GAA TTC CAT TAC ATG TCT AAG AAA GCA 907 Ser Ser Val Ser Ala His Glu Phe His Tyr Met Ser Lys Lys Ala 255 260 265 GAA ACG AAA GAT TTG AAG AAG AAG ACT TTC TTG CCT TAC ATG CAA 952 Glu Thr Lys Asp Leu Lys Lys Lys Thr Phe Leu Pro Tyr Met Gln 270 275 280 ATA GGA CGA TTC GCC TTC TAA ATTAGTTCTT CCAAAGCCAG AAGTAAAAAG 1003 Ile Gly Arg Phe Ala Phe *** 285 ATTTATTTGT TTGTTCAATT ATGTTCTATG AAGGACCAAG TCTCTTCTTC 1053 TCTCTTGTGT GGTTGATTTG TGCTCAGAAG TTTGTAGAAA TTAACATCTT 1103 TTGTACACAT TAGTTTTGCT AAAAAAAAAA AAAAAAA 1140

【００５２】配列番号：４ 配列の長さ：８３２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 ACG GCG GGT ACA GGA AAG GGT ATT GCA TGG GTG AAT GGA CAG AGC 45 Thr Ala Gly Thr Gly Lys Gly Ile Ala Trp Val Asn Gly Gln Ser 1 5 10 15 ATA GGT AGG TAC TGG CCA ACT AGT ATC GCT GGA AAT GGC GGT TGT 90 Ile Gly Arg Tyr Trp Pro Thr Ser Ile Ala Gly Asn Gly Gly Cys 20 25 30 ACA GAA TCA TGC GAC TAT AGA GGT TCT TAC CGT GCA AAC AAA TGC 135 Thr Glu Ser Cys Asp Tyr Arg Gly Ser Tyr Arg Ala Asn Lys Cys 35 40 45 CTC AAG AAC TGT GGA AAA CCT TCA CAG ACA TTG TAT CAT GTA CCT 180 Leu Lys Asn Cys Gly Lys Pro Ser Gln Thr Leu Tyr His Val Pro 50 55 60 CGC TCG TGG CTA AAA CCG AGC GGG AAC ATA CTT GTT CTG TTT GAG 225 Arg Ser Trp Leu Lys Pro Ser Gly Asn Ile Leu Val Leu Phe Glu 65 70 75 GAG ATG GGA GGA GAT CCA ACA CAA ATA TCA TTT GCG ACA AAA CAA 270 Glu Met Gly Gly Asp Pro Thr Gln Ile Ser Phe Ala Thr Lys Gln 80 85 90 ACA GGA AGC AAT CTT TGT CTA ACG GTG TCA CAG TCT CAT CCA CCA 315 Thr Gly Ser Asn Leu Cys Leu Thr Val Ser Gln Ser His Pro Pro 95 100 105 CCG GTG GAC ACA TGG ACT TCC GAC TCA AAG ATC TCA AAC AGA AAC 360 Pro Val Asp Thr Trp Thr Ser Asp Ser Lys Ile Ser Asn Arg Asn 110 115 120 AGA ACC AGG CCG GTT CTT TCG TTG AAA TGC CCT ATC TCT ACT CAG 405 Arg Thr Arg Pro Val Leu Ser Leu Lys Cys Pro Ile Ser Thr Gln 125 130 135 GTG ATA TTT TCT ATA AAA TTT GCA AGC TTT GGT ACA CCC AAA GGT 450 Val Ile Phe Ser Ile Lys Phe Ala Ser Phe Gly Thr Pro Lys Gly 140 145 150 ACT TGC GGT AGC TTC ACA CAA GGC CAT TGC AAT AGC TCT CGA TCT 495 Thr Cys Gly Ser Phe Thr Gln Gly His Cys Asn Ser Ser Arg Ser 155 160 165 CTC TCC CTC GTC CAA AAG GCA TGT ATT GGA TTG AGG AGT TGC AAC 540 Leu Ser Leu Val Gln Lys Ala Cys Ile Gly Leu Arg Ser Cys Asn 170 175 180 GTT GAA GTA TCG ACT AGA GTG TTC GGG GAA CCT TGT CGT GGC GTC 585 Val Glu Val Ser Thr Arg Val Phe Gly Glu Pro Cys Arg Gly Val 185 190 195 GTC AAG AGC TTA GCT GTT GAA GCT TCT TGT TCA TGA GGAGTGCCCG 631 Val Lys Ser Leu Ala Val Glu Ala Ser Cys Ser *** 200 205 GTTCCTAAAC CTCTGCTGAT TTGATATTAT TTTAAGCATG TAATTGTTGG 681 AAATAAAGCA AAATGAAATG GAAATTAGTA GTATAGTTTT ATGGTCTATC 731 CAAATAAATT TGGCTGGAAT TAAAGTTACT AAACTATGTA TGTGTGTGGT 781 AAGCACTTTG GAAAAGAAAA GAAAAAGTTG ATTGAAAAAA AAAAAAAAAA 831 A 832

【００５３】配列番号：５ 配列の長さ：２０５３ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CGGTACTTTA AGCGATTTTT TCATGGCGTT TCTGATGGAG GTCGATGAAG 50 AAGAAGAGAT ATGATTTAGT CGTTCTTCAA ATTGAGAATC TTGGGGTGGT 100 TGTTTTTTAT TGGTAGTC ATG ATT ATT ACC ACA CAC AAA AGA GAT 145 Met Ile Ile Thr Thr His Lys Arg Asp 1 5 ATA AAC TTG TTG GTG CTT CAA TTA GGA GCA GCT CTT GCT GTA TCT 190 Ile Asn Leu Leu Val Leu Gln Leu Gly Ala Ala Leu Ala Val Ser 10 15 20 TTT GCT GGA TTT CTC TTT GCC CGA TTT AGA AAG AAT ACA AAA AGA 235 Phe Ala Gly Phe Leu Phe Ala Arg Phe Arg Lys Asn Thr Lys Arg 25 30 35 ATT GGA CCT ACT TTG CCT CCT CTT CCA CCT CAC TCT TCT GAT AAT 280 Ile Gly Pro Thr Leu Pro Pro Leu Pro Pro His Ser Ser Asp Asn 40 45 50 GGA TAC AGA GAC TAT TCC AAC AAA TCC ATT GAT AGA CGA GAT GAG 325 Gly Tyr Arg Asp Tyr Ser Asn Lys Ser Ile Asp Arg Arg Asp Glu 55 60 65 GGC ACG GAG AAG ACG GAT GAA GAG ACT TTA ATT GGT GTT TCG CCA 370 Gly Thr Glu Lys Thr Asp Glu Glu Thr Leu Ile Gly Val Ser Pro 70 75 80 CGA AGG GAA TGT GAT CTT GAT GAA AAA GAT GTG TTT CTT TTA CCG 415 Arg Arg Glu Cys Asp Leu Asp Glu Lys Asp Val Phe Leu Leu Pro 85 90 95 GAG TTT GAA GAG GAA GCT AAA AAG TTA GAT TTG TTG GTT TGT GAT 460 Glu Phe Glu Glu Glu Ala Lys Lys Leu Asp Leu Leu Val Cys Asp 100 105 110 GAC TGT GAA ACA CCG AGG TCA GAT ATA ACT GCT CCT TTA GCA TTT 505 Asp Cys Glu Thr Pro Arg Ser Asp Ile Thr Ala Pro Leu Ala Phe 115 120 125 CCT AGC GAA GAG GAA GCT GAT CAT GAG AAT GAG ATT AAC CGG TTG 550 Pro Ser Glu Glu Glu Ala Asp His Glu Asn Glu Ile Asn Arg Leu 130 135 140 AGA AAC ACG GTG AGA GCG CTC CGT GAG AGA GAG AGG TGT CTT GAG 595 Arg Asn Thr Val Arg Ala Leu Arg Glu Arg Glu Arg Cys Leu Glu 145 150 155 GAT AAG TTG TTA GAA TAC TAC AGC CTT AAG GAG CAG CAA AAG ATT 640 Asp Lys Leu Leu Glu Tyr Tyr Ser Leu Lys Glu Gln Gln Lys Ile 160 165 170 GCA ATG GAA CTG AGA AGT AGA TTG AAG CTA AAC CAG ATG GAG ACT 685 Ala Met Glu Leu Arg Ser Arg Leu Lys Leu Asn Gln Met Glu Thr 175 180 185 AAA GTT TTC AAT TTT AAG ATC AAG AAG TTG CAA GCA GAG AAC GAA 730 Lys Val Phe Asn Phe Lys Ile Lys Lys Leu Gln Ala Glu Asn Glu 190 195 200 AAA CTT AAG GCT GAA TGT TTT GAG CAT TCT AAA GTT TTG TTG GAG 775 Lys Leu Lys Ala Glu Cys Phe Glu His Ser Lys Val Leu Leu Glu 205 210 215 CTG GAT ATG GCT AAG TCT CAG GTT CAA GTG CTT AAG AAG AAA CTG 820 Leu Asp Met Ala Lys Ser Gln Val Gln Val Leu Lys Lys Lys Leu 220 225 230 AAC ATC AAT ACT CAA CAA CAC GTA GCG CAG ATC TTG TCG CTT AAA 865 Asn Ile Asn Thr Gln Gln His Val Ala Gln Ile Leu Ser Leu Lys 235 240 245 CAA CGA GTG GCG AGG CTG CAA GAA GAA GAA ATC AAG CCT GTG TTA 910 Gln Arg Val Ala Arg Leu Gln Glu Glu Glu Ile Lys Pro Val Leu 250 255 260 CCT GAT CTT GAA GCT GAT AAG ATG ATG CAG AGG TTA AGG GAT TTG 955 Pro Asp Leu Glu Ala Asp Lys Met Met Gln Arg Leu Arg Asp Leu 265 270 275 GAA AGT GAG ATC AAC GAG CTT ACG GAT ACT AAC ACG AGA TTA CAG 1000 Glu Ser Glu Ile Asn Glu Leu Thr Asp Thr Asn Thr Arg Leu Gln 280 285 290 TTT GAG AAT TTT GAG CTT TCT GAG AAG CTG GAG TCT GTT CAA ATC 1045 Phe Glu Asn Phe Glu Leu Ser Glu Lys Leu Glu Ser Val Gln Ile 295 300 305 ATA GCA AAT TCA AAA CTG GAG GAA CCA GAG GAG ATT GAG ACA TTA 1090 Ile Ala Asn Ser Lys Leu Glu Glu Pro Glu Glu Ile Glu Thr Leu 310 315 320 CGC GAA GAT TGT AAC CGA TTG AGG AGT GAA AAT GAA GAG TTA AAG 1135 Arg Glu Asp Cys Asn Arg Leu Arg Ser Glu Asn Glu Glu Leu Lys 325 330 335 AAG GAT GTC GAG CAG CTT CAA GGG GAT CGA TGT ACT GAC CTC GAG 1180 Lys Asp Val Glu Gln Leu Gln Gly Asp Arg Cys Thr Asp Leu Glu 340 345 350 CAG CTC GTT TAT CTC AGA TGG ATA AAT GCT TGC TTA AGA TAT GAG 1225 Gln Leu Val Tyr Leu Arg Trp Ile Asn Ala Cys Leu Arg Tyr Glu 355 360 365 CTA AGG ACT TAC CAG CCT CCT GCT GGT AAA ACT GTT GCT AGG GAT 1270 Leu Arg Thr Tyr Gln Pro Pro Ala Gly Lys Thr Val Ala Arg Asp 370 375 380 CTT AGT ACT ACT CTA AGT CCT ACT TCA GAG GAG AAA GCA AAG CAA 1315 Leu Ser Thr Thr Leu Ser Pro Thr Ser Glu Glu Lys Ala Lys Gln 385 390 395 CTG ATC CTC GAA TAC GCA CAT AGC GAA GAT AAC ACT GAT TAT GAT 1360 Leu Ile Leu Glu Tyr Ala His Ser Glu Asp Asn Thr Asp Tyr Asp 400 405 410 CGA TGG TCA TCT TCG CAG GAA GAG TCA TCA ATG ATC ACT GAC TCA 1405 Arg Trp Ser Ser Ser Gln Glu Glu Ser Ser Met Ile Thr Asp Ser 415 420 425 ATG TTT TTA GAT GAT TCT TCT GTT GAC ACT TTG TTT GCA ACT AAA 1450 Met Phe Leu Asp Asp Ser Ser Val Asp Thr Leu Phe Ala Thr Lys 430 435 440 ACC CTA AAG ACA GGA AAG AAG AAG CTG ATG CAT AAG TTA ATG AAG 1495 Thr Leu Lys Thr Gly Lys Lys Lys Leu Met His Lys Leu Met Lys 445 450 455 ATC TTA CAT GGT AAA GAT ACT AAA GAC AGC AAG AAG AGA GCT GGT 1540 Ile Leu His Gly Lys Asp Thr Lys Asp Ser Lys Lys Arg Ala Gly 460 465 470 TCA TCG GAA CCG AGC AGC TCA AAC ACT GGT GTT CAT TCA ACT CCT 1585 Ser Ser Glu Pro Ser Ser Ser Asn Thr Gly Val His Ser Thr Pro 475 480 485 AGG CAG CTT AGA TCA ACA CAT TCA ATG GAC TTC CAA ATG TTG ATG 1630 Arg Gln Leu Arg Ser Thr His Ser Met Asp Phe Gln Met Leu Met 490 495 500 CGT GGC AAA GAC GAG GAA GAA GAC TTC AAG AAT CAC ATT GTG ATG 1675 Arg Gly Lys Asp Glu Glu Glu Asp Phe Lys Asn His Ile Val Met 505 510 515 CTG CGT CGT AAG AGT GAA GCA GCA GGT TCT TCC ACT TAT GGA GAA 1720 Leu Arg Arg Lys Ser Glu Ala Ala Gly Ser Ser Thr Tyr Gly Glu 520 525 530 GAA CAC TGT TTG GAA ACA GAT CAA AAC GGG AAG AAA GAG CTG ATT 1765 Glu His Cys Leu Glu Thr Asp Gln Asn Gly Lys Lys Glu Leu Ile 535 540 545 AAA TTA GCA GAT GCG CTT ACG AAA TCT CGT TCT ACA AAG AAA CTG 1810 Lys Leu Ala Asp Ala Leu Thr Lys Ser Arg Ser Thr Lys Lys Leu 550 555 560 CAT AAG AAA TCT GTG TCC TTC TTT TTC TGA AAG TAA GTA GAA ACA 1855 His Lys Lys Ser Val Ser Phe Phe Phe *** Lys *** Val Glu Thr 565 570 575 CTA ACT TAC TTG TTA CTG TAA CACGCATCGC CTAAAGCTAC ATGTATGTGT 1906 Leu Thr Tyr Leu Leu Leu *** 580 585 ATATAGATAT AGCTTAAAGT TTGTAAATTT GTGAACCCAA ACATAAGAAA 1956 AGAGTGGAGA GAATCTGATA TGAAGCTTGA GAGAAATGAG TAACGCTTGG 2006 TGAGGAGCAT TGAAACTTAA AAAAAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAA 2053

【００５４】配列番号：６ 配列の長さ：１３４２ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 AGCTCCACCG CGGTGGCGGC CGCTCTAGAA CTAGTGGATC CCCCGGGCTG 50 CAGGAATTCG ATCCAAAAAA AAAGGAACCG TACTGTTTAT TCTCTGTGGC 100 GTTGAATCTG CG ATG GCG GGA ATC AGA TTG CTA CCG GAA GAA 142 Met Ala Gly Ile Arg Leu Leu Pro Glu Glu 1 5 10 CCT GAG ACG ACT CCT CAA CAA CAA GCC AGA GCC GCC GCC GCG GTG 187 Pro Glu Thr Thr Pro Gln Gln Gln Ala Arg Ala Ala Ala Ala Val 15 20 25 ACA ACG ACA ACA ACG GAT AGT TTG GCT TCC GAT GAC GAT CGA TCT 232 Thr Thr Thr Thr Thr Asp Ser Leu Ala Ser Asp Asp Asp Arg Ser 30 35 40 ATC GCG GCG GAT TCG TGG TCG ATC AAA AGT GAG TAT GGA AGC ACT 277 Ile Ala Ala Asp Ser Trp Ser Ile Lys Ser Glu Tyr Gly Ser Thr 45 50 55 CTC GAT GAC GAT CAA CGT CAC GCC GAT GCC GCC GAG GCT CTC TCG 322 Leu Asp Asp Asp Gln Arg His Ala Asp Ala Ala Glu Ala Leu Ser 60 65 70 TCC GCT AAC TTC CGT GTC TCT TCC GAT TAC AGT TCT GAT AAG GAA 367 Ser Ala Asn Phe Arg Val Ser Ser Asp Tyr Ser Ser Asp Lys Glu 75 80 85 GAG CCA GAT GCT GAT GGA GGA GGT CAA TCA ATG CTT GGT CTT CAA 412 Glu Pro Asp Ala Asp Gly Gly Gly Gln Ser Met Leu Gly Leu Gln 90 95 100 AGC TAT TGG GAT GCA GCG TAT TCC GAT GAG CTT ACT AAT TTC AGA 457 Ser Tyr Trp Asp Ala Ala Tyr Ser Asp Glu Leu Thr Asn Phe Arg 105 110 115 GAG CAT GGT CAT GCT GGT GAA GTT TGG TTT GGA GAT GAT GTG ATG 502 Glu His Gly His Ala Gly Glu Val Trp Phe Gly Asp Asp Val Met 120 125 130 GAG ATT GTT ACT TCT TGG ACT AAA GAC TTA TGC GTT GAG ATT TCT 547 Glu Ile Val Thr Ser Trp Thr Lys Asp Leu Cys Val Glu Ile Ser 135 140 145 CAA AGA AAC ATG TCT GTT TCT GAA AAC GAT GTT ACG ACA GAG GTG 592 Gln Arg Asn Met Ser Val Ser Glu Asn Asp Val Thr Thr Glu Val 150 155 160 AAT GAT CAG GCT GAT AAG TAT TTG TCT AGT TGG AAT GTG CTT GAT 637 Asn Asp Gln Ala Asp Lys Tyr Leu Ser Ser Trp Asn Val Leu Asp 165 170 175 CTT GGT ACT GGA AAT GGC TTA CTC CTT CAT CAA CTT GCT AAG GAA 682 Leu Gly Thr Gly Asn Gly Leu Leu Leu His Gln Leu Ala Lys Glu 180 185 190 GGG TTC TCT GAT TTA ACC GGA ACT GAT TAC AGT GAC GGG GCT GTA 727 Gly Phe Ser Asp Leu Thr Gly Thr Asp Tyr Ser Asp Gly Ala Val 195 200 205 GAA CTC GCT CAA CAT CTT TCC CAA CGT GAT GGC TTT CCA AAT ATC 772 Glu Leu Ala Gln His Leu Ser Gln Arg Asp Gly Phe Pro Asn Ile 210 215 220 CGT TTC ATG GTT GAT GAT ATC CTT GAC ACA AAA TTG GAA CAG CAG 817 Arg Phe Met Val Asp Asp Ile Leu Asp Thr Lys Leu Glu Gln Gln 225 230 235 TTC AAG CTG GTA ATG GAC AAA GGA ACT TTA GAT GCT ATT GGT TTG 862 Phe Lys Leu Val Met Asp Lys Gly Thr Leu Asp Ala Ile Gly Leu 240 245 250 CAT CCT GAT GGC CCT GTC AAA AGA GTC ATG TAC TGG GAT TCA GTG 907 His Pro Asp Gly Pro Val Lys Arg Val Met Tyr Trp Asp Ser Val 255 260 265 TCC AAG CTG GTT GCT CCT GGT GGA ATA TTG GTG ATC ACA TCG TGT 952 Ser Lys Leu Val Ala Pro Gly Gly Ile Leu Val Ile Thr Ser Cys 270 275 280 AAC CAC ACA AAG GAC GAA CTG GTG GAA GAA GTA GAG AAT TTC AAC 997 Asn His Thr Lys Asp Glu Leu Val Glu Glu Val Glu Asn Phe Asn 285 290 295 ATC AGA AAA TCC AAC TTA TGT AGA GGA GAT GGA AAT GAC GCA AAC 1042 Ile Arg Lys Ser Asn Leu Cys Arg Gly Asp Gly Asn Asp Ala Asn 300 305 310 AAT GTA CTT TCC CTC TGG CTC TGA AGCTGCAAGC AGAATTGATC 1086 Asn Val Leu Ser Leu Trp Leu *** 315 AACCTCCGTT TGGAGTATCT CAGCCATGTT AGGACATACC CGACGTTCAT 1136 GTTCAGTGGG TCTGTAGGAT CGCGTGTGCC AACGGTTGCT TTTCTGCGGA 1186 CTCTTCTTTT TATGTTGGTG TCAAGCAAGA CTGTTGATGT GCTTTTGGGA 1286 GTTCTTAATA ACCTCTAAAG TTCTTTTAAG AGAAAAAAAA AAAAAAAAAA 1336 AAAAAA 1342

【００５５】配列番号：７ 配列の長さ：１０５６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ 配列 CACGTTCTCC TCGCAGATTC AGATATCTTC CCCTCGGAAT CTAGGCCTTA 50 AAAGAAGGAA GAGTCAGGCA AAGAAGGTGG TGTGCCGGCC CCGGCTGCA 99 ATG AAC AGC CGA TCA AGC GGA GAA GTG GTT CCA TCG GAT CTA TGG 144 Met Asn Ser Arg Ser Ser Gly Glu Val Val Pro Ser Asp Leu Trp 1 5 10 15 GCT TGG CGT AAA TAC GGT CAA AAA CCT ATC AAA GGC TCT CCT TTT 189 Ala Trp Arg Lys Tyr Gly Gln Lys Pro Ile Lys Gly Ser Pro Phe 20 25 30 CCA AGG GGT TAT TAT AGA TGC AGC AGC TCA AAA GGT TGT TCA GCA 234 Pro Arg Gly Tyr Tyr Arg Cys Ser Ser Ser Lys Gly Cys Ser Ala 35 40 45 AGA AAG CAA GTC GAA AGA AGC CGA ACC GAT CCA AAC ATG TTG GTG 279 Arg Lys Gln Val Glu Arg Ser Arg Thr Asp Pro Asn Met Leu Val 50 55 60 ATT ACA TAT ACC TCC GAA CAT AAC CAT CCT TGG CCC ATC CAA CGC 324 Ile Thr Tyr Thr Ser Glu His Asn His Pro Trp Pro Ile Gln Arg 65 70 75 AAC GCT CTC GCC GGT TCC ACA CGC TCC TCC ACC TCC TCC TCA TCT 369 Asn Ala Leu Ala Gly Ser Thr Arg Ser Ser Thr Ser Ser Ser Ser 80 85 90 AAC CCT AAT CCT TCC AAA CCC TCA ACC GCA AAC GTA AAC TCC TCA 414 Asn Pro Asn Pro Ser Lys Pro Ser Thr Ala Asn Val Asn Ser Ser 95 100 105 TCC AAT GGG CTC CCA AAA CAA CAT CTT ACT TGG GCT TCC TCC ACC 459 Ser Asn Gly Leu Pro Lys Gln His Leu Thr Trp Ala Ser Ser Thr 110 115 120 ACT CCT CCT CCT CCT CCT CCT ACC CTC TCA TCC TCC GCC ATC AAA 504 Thr Pro Pro Pro Pro Pro Pro Thr Leu Ser Ser Ser Ala Ile Lys 125 130 135 GAT GAA CGA GGG GAC GAT ATG GAG TTG GAA AAC GTA GAT GAT GAT 549 Asp Glu Arg Gly Asp Asp Met Glu Leu Glu Asn Val Asp Asp Asp 140 145 150 GAT GAT AAC CAG ATT GCT CCA TAC AGA CCG GAG CTT CAT GAT CAT 594 Asp Asp Asn Gln Ile Ala Pro Tyr Arg Pro Glu Leu His Asp His 155 160 165 CAG CAC CAA CCA GAT GAT TTC TTT GCA GAT CTT GAA GAG CTA GAA 639 Gln His Gln Pro Asp Asp Phe Phe Ala Asp Leu Glu Glu Leu Glu 170 175 180 GGA GAT TCT CTA AGC ATG TTG CTT TCT CAT GCT GTG ACG GCG ACG 684 Gly Asp Ser Leu Ser Met Leu Leu Ser His Ala Val Thr Ala Thr 185 190 195 GGA AGG ATA AAA CGA CCG CGT CCG ATG GGA TCA GCA ATT TCT TCG 729 Gly Arg Ile Lys Arg Pro Arg Pro Met Gly Ser Ala Ile Ser Ser 200 205 210 GGT GGT CGG GAG ATA ATA ATT ATA ATA ATT ACG ACG ACC AAG ACT 774 Gly Gly Arg Glu Ile Ile Ile Ile Ile Ile Thr Thr Thr Lys Thr 215 220 225 CAA GGT CGT TAT AGT ATA GTG TTA ATT ACA GGT AAA CAA ATT ATA 819 Gln Gly Arg Tyr Ser Ile Val Leu Ile Thr Gly Lys Gln Ile Ile 230 235 240 TTA AAT TAA GTTGAGCTTG TGAAAATGAA GATCATATGG TCTGGTCAGG 868 Leu Asn *** TTGGGGGTAA TGACTAATGA GCTGGTACAT GACAGACCGT AAACAGTATT 918 TATCGTCATT TGTTATACAT TTGTTTTTTT TCGGAAGATC CGTCTGTAGT 968 TAAAAAAAAA AAAACGGCAT TTTTTCTATG CGTTGTTATA ATTCCTCTAA 1018 AGTTCTTTTA AGAGAAAAAA AAAAAAAAAA AAAAAAAA 1056

【図面の簡単な説明】

【図１】図１は本発明のＡＲ３０１蛋白質と既知の蛋白
質ＭＥ１２とのアミノ酸配列の相同性を示す図である。

【図２】図２は本発明の蛋白質ＡＲ１９２と既知の蛋白
質ヒートショック蛋白質ＧｒｐＥとのアミノ酸配列の相
同性を示す図である。

【図３】図３は本発明の蛋白質ＡＲ７８２と既知蛋白質
ＳＲ１２とのアミノ酸配列の相同性を示す図である。

【図４】図４は本発明の蛋白質ＡＲ７９１と既知蛋白質
Ｍｙｏｓｉｎ Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎとのアミノ酸配
列の相同性を示す図である。

【図５】図５は本発明の蛋白質ＡＲ７９１と既知蛋白質
Ｍｙｏｓｉｎ Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎとのアミノ酸配
列の相同性を示す図である。

【図６】図６は本発明の蛋白質ＡＲ７９１と既知蛋白質
Ｍｙｏｓｉｎ Ｈｅａｖｙ Ｃｈａｉｎとのアミノ酸配
列の相同性を示す図である。

─────────────────────────────────────────────────────

【手続補正書】

【提出日】平成７年１月２３日

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００３１

【補正方法】変更

【補正内容】

【００３１】分裂酵母の形質転換 上記のようにして作製したｃＤＮＡライブラリーを用い
て、分裂酵母（Ｓｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ
ｐｏｍｂｅ）ＲＬ１９０（工業技術院生命工学工業技
術研究所に平成６年１１月１８日にＦＥＲＭ Ｐ−１４
６４８として寄託されている）を形質転換した。分裂酵
母ＲＬ１９０をＹＥＬ（１／２ＹＥＬ：グルコース１５
ｇ、酵母エキス２．５ｇ、水で１Ｌとし、オートクレー
ブ滅菌）スラント上で２日間培養し、このスラントに２
mlのＭＢ培地：

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 14/415 8318−4Ｈ Ｃ１２Ｎ 5/10 (72)発明者 下田 親 大阪府和泉市光明台２−21−８ (72)発明者 平山 隆志 茨城県牛久市刈谷町３−122−３ スカイ バレーＡ201号室

Claims (9)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号：１に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
2. 【請求項２】 配列番号：２に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
3. 【請求項３】 配列番号：３に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
4. 【請求項４】 配列番号：４に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
5. 【請求項５】 配列番号：５に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
6. 【請求項６】 配列番号：６に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
7. 【請求項７】 配列番号：７に記載のアミノ酸配列と実
   質的に同一のアミノ酸配列をコードする遺伝子。
8. 【請求項８】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の遺
   伝子によりコードされているポリペプチド。
9. 【請求項９】 請求項１〜７のいずれか１項に記載の遺
   伝子により形質転換されたトランスジェニック植物。