JPH08178926A - イムノアッセイプレートおよびその用途 - Google Patents
イムノアッセイプレートおよびその用途Info
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- B01L3/508—Rigid containers without fluid transport within
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- G01—MEASURING; TESTING
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- G01N33/5304—Reaction vessels, e.g. agglutination plates
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- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 作業者が扱いやすく、複数の試験管の間での
コンタミネーションを排除でき、免疫複合体の転移をよ
り効率良く充分に遂行させ得る、免疫複合体転移法用の
高感度なイムノアッセイプレート、およびその用途を提
供すること。 【解決手段】 ウェル型固相２とこれに挿入可能なディ
ップスティック型固相１とを有し、ディップスティック
型固相の表面には後記の（Ａ）又は（Ｂ）の物質のうち
一方の物質が付着され、ウェル型固相の表面には他方の
物質が付着されてなる。これら固相が、免疫複合体転移
法における一対の固相として用いられる。 （Ａ）：被検物質と特異的に免疫複合体を形成する物質
に予め導入された官能基と、特異的に結合する反応基を
有する物質。（Ｂ）：免疫複合体中の被検物質、被検物
質と特異的に免疫複合体を形成する物質、または該物質
に予め導入された官能基、と特異的に結合しうる反応基
を有する物質。
コンタミネーションを排除でき、免疫複合体の転移をよ
り効率良く充分に遂行させ得る、免疫複合体転移法用の
高感度なイムノアッセイプレート、およびその用途を提
供すること。 【解決手段】 ウェル型固相２とこれに挿入可能なディ
ップスティック型固相１とを有し、ディップスティック
型固相の表面には後記の（Ａ）又は（Ｂ）の物質のうち
一方の物質が付着され、ウェル型固相の表面には他方の
物質が付着されてなる。これら固相が、免疫複合体転移
法における一対の固相として用いられる。 （Ａ）：被検物質と特異的に免疫複合体を形成する物質
に予め導入された官能基と、特異的に結合する反応基を
有する物質。（Ｂ）：免疫複合体中の被検物質、被検物
質と特異的に免疫複合体を形成する物質、または該物質
に予め導入された官能基、と特異的に結合しうる反応基
を有する物質。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、免疫複合体転移法
による、抗原物質または抗体物質の測定に有用な器材お
よびこの器材を用いて行なうイムノアッセイに関する。
による、抗原物質または抗体物質の測定に有用な器材お
よびこの器材を用いて行なうイムノアッセイに関する。
【０００２】
【従来の技術】抗体物質または抗原物質を測定し分析す
るための手法として、イムノアッセイは簡便かつ特異性
が高いという利点を有する。とりわけ、免疫複合体転移
イムノアッセイ（以下、「免疫複合体転移法」とい
う。）は、サンドイッチ法の欠点であった固相への夾雑
蛋白の吸着ならびにそれに起因するバックグラウンド信
号の発生等を好適に抑制でき、被検体溶液中の抗体物質
または抗原物質を、高感度に測定しうる方法として知ら
れている。以下、本明細書では、測定すべき対象であ
る、被検体溶液中の抗体物質または抗原物質を「被検物
質」という。
るための手法として、イムノアッセイは簡便かつ特異性
が高いという利点を有する。とりわけ、免疫複合体転移
イムノアッセイ（以下、「免疫複合体転移法」とい
う。）は、サンドイッチ法の欠点であった固相への夾雑
蛋白の吸着ならびにそれに起因するバックグラウンド信
号の発生等を好適に抑制でき、被検体溶液中の抗体物質
または抗原物質を、高感度に測定しうる方法として知ら
れている。以下、本明細書では、測定すべき対象であ
る、被検体溶液中の抗体物質または抗原物質を「被検物
質」という。
【０００３】免疫複合体転移法は、一対の固相を用いて
トラップを例えば２回行なうことを含むイムノアッセイ
である。次に、その操作手順を、被検物質のうち抗体物
質を測定する場合の１つのパターンを例として概略的に
説明する。また、以下本明細書では説明のために、一対
の固相のうち、最初のトラップに用いる固相を第１固
相、次のトラップに用いる固相を第２固相という。 測定対象となる抗体に、官能基で修飾した抗原と、
標識された抗原とを結合させて、例えば、図５（ａ）中
に参照番号５０として示すように、「官能基−抗原−抗
体−抗原−標識」の構成を有する免疫複合体を形成す
る。 免疫複合体を、その免疫複合体中の所定の部位（こ
の場合は抗原に結合された官能基）を介して、第１固相
にトラップする。免疫複合体は、被検体溶液中で完成し
た後にトラップしても、初めにその一端（官能基）を固
相上にトラップしておき、その一端に対して完成するも
のであってもよい。 免疫複合体を転移させるための転移反応溶液中で、
第１固相から免疫複合体を遊離させる。 免疫複合体を、第２固相にトラップする。ただし、
このトラップに係る免疫複合体中の部位は、の部位と
は異なるものとする。 免疫複合体中の測定対象となる抗体を、で導入し
た標識を利用して検出定量する。
トラップを例えば２回行なうことを含むイムノアッセイ
である。次に、その操作手順を、被検物質のうち抗体物
質を測定する場合の１つのパターンを例として概略的に
説明する。また、以下本明細書では説明のために、一対
の固相のうち、最初のトラップに用いる固相を第１固
相、次のトラップに用いる固相を第２固相という。 測定対象となる抗体に、官能基で修飾した抗原と、
標識された抗原とを結合させて、例えば、図５（ａ）中
に参照番号５０として示すように、「官能基−抗原−抗
体−抗原−標識」の構成を有する免疫複合体を形成す
る。 免疫複合体を、その免疫複合体中の所定の部位（こ
の場合は抗原に結合された官能基）を介して、第１固相
にトラップする。免疫複合体は、被検体溶液中で完成し
た後にトラップしても、初めにその一端（官能基）を固
相上にトラップしておき、その一端に対して完成するも
のであってもよい。 免疫複合体を転移させるための転移反応溶液中で、
第１固相から免疫複合体を遊離させる。 免疫複合体を、第２固相にトラップする。ただし、
このトラップに係る免疫複合体中の部位は、の部位と
は異なるものとする。 免疫複合体中の測定対象となる抗体を、で導入し
た標識を利用して検出定量する。
【０００４】免疫複合体転移法に関するさらに詳しい説
明、実例については以下の文献に詳細に記載されてい
る。 （１）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T., (1991): D
evelopment of ultrasensitive enzyme immunoassay re
viewed with emphasis on factors which limitthe sen
sitivity. MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 5, 81-9
5. （２）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T.,et al. (19
93): Principle and applications of ultrasensitive
enzyme immunoassay (Immune complex transferenzyme
immunoassay) for antibodies in body fluids. J. CLI
N. LABORATORY ANALYSIS, 7, 376-393. （３）特開平１−２５４８６８号 「超高感度抗原物質
の測定法」 （４）特願平１−２９１６５６号 「新規な抗原測定
法」 （５）特開平２−２８５５８号 「超高感度特異的抗
体の測定法」 （６）石川栄治著（１９９３） 「超高感度酵素免疫
測定法」（学会出版センター）
明、実例については以下の文献に詳細に記載されてい
る。 （１）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T., (1991): D
evelopment of ultrasensitive enzyme immunoassay re
viewed with emphasis on factors which limitthe sen
sitivity. MOLECULAR AND CELLULAR PROBES, 5, 81-9
5. （２）ISHIKAWA,E., HASHIDA,S., KOHNO,T.,et al. (19
93): Principle and applications of ultrasensitive
enzyme immunoassay (Immune complex transferenzyme
immunoassay) for antibodies in body fluids. J. CLI
N. LABORATORY ANALYSIS, 7, 376-393. （３）特開平１−２５４８６８号 「超高感度抗原物質
の測定法」 （４）特願平１−２９１６５６号 「新規な抗原測定
法」 （５）特開平２−２８５５８号 「超高感度特異的抗
体の測定法」 （６）石川栄治著（１９９３） 「超高感度酵素免疫
測定法」（学会出版センター）
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】従来の免疫複合体転移
法では、第１固相および第２固相として、ビーズと呼ば
れる直径３ｍｍ程度のプラスチックボールを用い、これ
らを試験管のなかで攪拌しながら上記〜の免疫複合
体転移を行っていた。しかし、このような固相を用いた
反応では、ビーズが２種類あるために、これらビーズを
目視で識別し、ピンセットを用いてこれらを１つずつ試
験管へ出し入れするものであり、操作性に非常に難があ
ると同時に、ピンセットを介する免疫複合体の持ち越し
によって複数の試験管の間でコンタミネーションが起こ
る欠点もあった。また、第１固相から遊離された微量の
免疫複合体が第２固相とコンタクトする確率が低く、第
２固相上にコーティングされた物質が、免疫複合体の結
合部分に対して極めて親和性の高い物でないと充分にト
ラップされず、信号量が少なくなるという傾向が見られ
た。
法では、第１固相および第２固相として、ビーズと呼ば
れる直径３ｍｍ程度のプラスチックボールを用い、これ
らを試験管のなかで攪拌しながら上記〜の免疫複合
体転移を行っていた。しかし、このような固相を用いた
反応では、ビーズが２種類あるために、これらビーズを
目視で識別し、ピンセットを用いてこれらを１つずつ試
験管へ出し入れするものであり、操作性に非常に難があ
ると同時に、ピンセットを介する免疫複合体の持ち越し
によって複数の試験管の間でコンタミネーションが起こ
る欠点もあった。また、第１固相から遊離された微量の
免疫複合体が第２固相とコンタクトする確率が低く、第
２固相上にコーティングされた物質が、免疫複合体の結
合部分に対して極めて親和性の高い物でないと充分にト
ラップされず、信号量が少なくなるという傾向が見られ
た。
【０００６】一方、通常のイムノアッセイのため、ディ
ップスティック型固相とウェル型固相を組み合わせたア
ッセイプレートが知られている。米国特許第３８２６６
１９号には、 ディップスティック型固相に抗体をコーティングし
て、ウェル型固相に入れられた被検体溶液に浸し、測定
対象物をトラップする工程、 ディップスティック型固相を洗浄後、別のウェル型
固相に入れられたマーカー溶液に浸し、測定対象物を検
出する工程、が記載されている。しかし、これらの器具
に於けるディップスティック型固相は測定対象物を単に
トラップする機能しか有さず、ウェル型固相は溶液を保
持するための容器でしかない。
ップスティック型固相とウェル型固相を組み合わせたア
ッセイプレートが知られている。米国特許第３８２６６
１９号には、 ディップスティック型固相に抗体をコーティングし
て、ウェル型固相に入れられた被検体溶液に浸し、測定
対象物をトラップする工程、 ディップスティック型固相を洗浄後、別のウェル型
固相に入れられたマーカー溶液に浸し、測定対象物を検
出する工程、が記載されている。しかし、これらの器具
に於けるディップスティック型固相は測定対象物を単に
トラップする機能しか有さず、ウェル型固相は溶液を保
持するための容器でしかない。
【０００７】また、上記ディップスティック型固相とウ
ェル型固相を組み合わせたアッセイプレートを用いた、
特殊なワンステップサンドイッチイムノアッセイの手法
として、特表平２−３５９４４号明細書には、 ウェル型固相にショ糖溶液等を溶解したマーカー
（徐放性）をコーティングし、 ウェル型固相に被検体溶液を入れ、 ディップスティック型固相に抗原を結合させたもの
をその被検体溶液に浸し、測定対象の抗体をトラップす
ると同時にマーカーを結合させる方法、が記載されてい
る。この手法は、ウェル型固相面とディップスティック
型固相とを組み合わせて用いる点では本発明のイムノア
ッセイプレートに近いが、そのウェル型固相は、単にマ
ーカーを保持するための機能しか有しておらず、あくま
で、測定対象物に対するマーキングを改善するためのも
のである。
ェル型固相を組み合わせたアッセイプレートを用いた、
特殊なワンステップサンドイッチイムノアッセイの手法
として、特表平２−３５９４４号明細書には、 ウェル型固相にショ糖溶液等を溶解したマーカー
（徐放性）をコーティングし、 ウェル型固相に被検体溶液を入れ、 ディップスティック型固相に抗原を結合させたもの
をその被検体溶液に浸し、測定対象の抗体をトラップす
ると同時にマーカーを結合させる方法、が記載されてい
る。この手法は、ウェル型固相面とディップスティック
型固相とを組み合わせて用いる点では本発明のイムノア
ッセイプレートに近いが、そのウェル型固相は、単にマ
ーカーを保持するための機能しか有しておらず、あくま
で、測定対象物に対するマーキングを改善するためのも
のである。
【０００８】上記のような従来のプレートを用いたイム
ノアッセイに対し、免疫複合体転移法は、極微量の測定
対象物を含む免疫複合体が、第１固相から第２固相へ転
移するという特殊なプロセスを含むものであり、この転
移プロセスを充分に遂行させるためのイムノアッセイ器
具は、現在まで知られていなかった。そのため、免疫複
合体転移法を、より容易に、かつ高感度に実施しうる、
臨床検査の現場に適したイムノアッセイ器具の開発が望
まれていたのである。
ノアッセイに対し、免疫複合体転移法は、極微量の測定
対象物を含む免疫複合体が、第１固相から第２固相へ転
移するという特殊なプロセスを含むものであり、この転
移プロセスを充分に遂行させるためのイムノアッセイ器
具は、現在まで知られていなかった。そのため、免疫複
合体転移法を、より容易に、かつ高感度に実施しうる、
臨床検査の現場に適したイムノアッセイ器具の開発が望
まれていたのである。
【０００９】本発明の目的は、イムノアッセイに免疫複
合体転移法を適用するに際し、作業者にとってより扱い
やすく、複数の試験管の間でのコンタミネーションを排
除し、また、免疫複合体転移法の核心であるところの、
第１固相から第２固相への免疫複合体の転移を、より効
率良く充分に遂行させることができ、自動化が容易な免
疫複合体転移法用の高感度なイムノアッセイプレート、
およびその用途を提供することである。
合体転移法を適用するに際し、作業者にとってより扱い
やすく、複数の試験管の間でのコンタミネーションを排
除し、また、免疫複合体転移法の核心であるところの、
第１固相から第２固相への免疫複合体の転移を、より効
率良く充分に遂行させることができ、自動化が容易な免
疫複合体転移法用の高感度なイムノアッセイプレート、
およびその用途を提供することである。
【００１０】
【課題を解決するための手段】本発明のイムノアッセイ
プレートは、以下の特徴を有するものである。 （１）ウェル型固相とこれに挿入可能なディップスティ
ック型固相とを有し、ディップスティック型固相の表面
には下記の（Ａ）または（Ｂ）の物質のうち一方の物質
が付着され、ウェル型固相の表面には他方の物質が付着
され、これらの固相が、免疫複合体転移イムノアッセイ
において用いられる２つの固相として用いられるもので
あることを特徴とする免疫複合体転移イムノアッセイ用
のイムノアッセイプレート。 （Ａ）：被検物質と特異的に免疫複合体を形成する物質
に予め導入された官能基と特異的に結合する反応基を有
する物質。 （Ｂ）：免疫複合体中の被検物質、被検物質と特異的に
免疫複合体を形成する物質、または該物質に予め導入さ
れた官能基と、特異的に結合しうる反応基を有する物
質。 ただし、（Ａ）の反応基に結合する部位は（Ｂ）の反応
基には結合せず、（Ｂ）の反応基に結合する部位は
（Ａ）の反応基には結合しないものである。
プレートは、以下の特徴を有するものである。 （１）ウェル型固相とこれに挿入可能なディップスティ
ック型固相とを有し、ディップスティック型固相の表面
には下記の（Ａ）または（Ｂ）の物質のうち一方の物質
が付着され、ウェル型固相の表面には他方の物質が付着
され、これらの固相が、免疫複合体転移イムノアッセイ
において用いられる２つの固相として用いられるもので
あることを特徴とする免疫複合体転移イムノアッセイ用
のイムノアッセイプレート。 （Ａ）：被検物質と特異的に免疫複合体を形成する物質
に予め導入された官能基と特異的に結合する反応基を有
する物質。 （Ｂ）：免疫複合体中の被検物質、被検物質と特異的に
免疫複合体を形成する物質、または該物質に予め導入さ
れた官能基と、特異的に結合しうる反応基を有する物
質。 ただし、（Ａ）の反応基に結合する部位は（Ｂ）の反応
基には結合せず、（Ｂ）の反応基に結合する部位は
（Ａ）の反応基には結合しないものである。
【００１１】（２）ディップスティック型固相の表面に
（Ａ）の物質が付着され、ウェル型固相の表面に（Ｂ）
の物質が付着され、免疫複合体転移イムノアッセイにお
ける測定目標を、免疫複合体中の抗体とする上記（１）
記載のイムノアッセイプレート。
（Ａ）の物質が付着され、ウェル型固相の表面に（Ｂ）
の物質が付着され、免疫複合体転移イムノアッセイにお
ける測定目標を、免疫複合体中の抗体とする上記（１）
記載のイムノアッセイプレート。
【００１２】（３）ディップスティック型固相とウェル
型固相との関係が、ディップスティック型固相をウェル
型固相内に挿入し組み合わせた時、ディップスティック
型固相の免疫複合体結合面の５０％以上が、ウェル型固
相の免疫複合体結合面に対して、面間の最短距離におい
て１ｍｍ以下に近接する構成である上記（１）または
（２）記載のイムノアッセイプレート。
型固相との関係が、ディップスティック型固相をウェル
型固相内に挿入し組み合わせた時、ディップスティック
型固相の免疫複合体結合面の５０％以上が、ウェル型固
相の免疫複合体結合面に対して、面間の最短距離におい
て１ｍｍ以下に近接する構成である上記（１）または
（２）記載のイムノアッセイプレート。
【００１３】（４）ディップスティック型固相および／
またはウェル型固相が、蛋白吸着量の増大する表面状態
となるように表面処理を施されたものである上記（１）
または（２）記載のイムノアッセイプレート。
またはウェル型固相が、蛋白吸着量の増大する表面状態
となるように表面処理を施されたものである上記（１）
または（２）記載のイムノアッセイプレート。
【００１４】（５）ウェル型固相および／またはディッ
プスティック型固相の材料がポリスチレンである上記
（１）または（２）記載のイムノアッセイプレート。
プスティック型固相の材料がポリスチレンである上記
（１）または（２）記載のイムノアッセイプレート。
【００１５】（６）被検物質と特異的に免疫複合体を形
成する物質に導入され、受容体物質Ａと結合する官能基
がハプテンであり、受容体物質Ａがハプテン抗体であっ
て、このハプテン抗体が、ＤＮＰ（ジニトロフェニル）
抗体、または、ＭＮＰ（モノニトロフェニル）抗体、ま
たは、ＴＮＰ（トリニトロフェニル）抗体である上記
（１）または（２）記載のイムノアッセイプレート。
成する物質に導入され、受容体物質Ａと結合する官能基
がハプテンであり、受容体物質Ａがハプテン抗体であっ
て、このハプテン抗体が、ＤＮＰ（ジニトロフェニル）
抗体、または、ＭＮＰ（モノニトロフェニル）抗体、ま
たは、ＴＮＰ（トリニトロフェニル）抗体である上記
（１）または（２）記載のイムノアッセイプレート。
【００１６】（７）ディップスティック型固相の免疫複
合体結合面となる部分の形状が円柱状であって、その先
端形状が、先端方向に向かって凸の円錐状である上記
（１）〜（６）記載のイムノアッセイプレート。
合体結合面となる部分の形状が円柱状であって、その先
端形状が、先端方向に向かって凸の円錐状である上記
（１）〜（６）記載のイムノアッセイプレート。
【００１７】（８）ディップスティック型固相が、転移
反応溶液に浸漬される部分よりも根元側に、ウェル型固
相との間に生じる転移反応溶液の毛管現象を抑制し得る
くびれを有するものである上記（１）〜（６）記載のイ
ムノアッセイプレート。
反応溶液に浸漬される部分よりも根元側に、ウェル型固
相との間に生じる転移反応溶液の毛管現象を抑制し得る
くびれを有するものである上記（１）〜（６）記載のイ
ムノアッセイプレート。
【００１８】（９）ウェル型固相の免疫複合体結合面と
なる部分の形状、およびディップスティック型固相の免
疫複合体結合面となる部分の基本形状が、共に円柱状で
あって、ディップスティック型固相の免疫複合体結合面
となる円柱状の部分の胴体面に、高さ１ｍｍ以下の突起
部が１以上設けられたものである上記（１）〜（６）記
載のイムノアッセイプレート。
なる部分の形状、およびディップスティック型固相の免
疫複合体結合面となる部分の基本形状が、共に円柱状で
あって、ディップスティック型固相の免疫複合体結合面
となる円柱状の部分の胴体面に、高さ１ｍｍ以下の突起
部が１以上設けられたものである上記（１）〜（６）記
載のイムノアッセイプレート。
【００１９】（１０）突起部の形状が、円柱状部分の胴
体面の円周方向に対しては突起状を呈する形状であっ
て、円柱状部分の胴体面の長手軸方向に対しては、長手
軸方向に沿って延伸する稜線を呈する形状である上記
（９）記載のイムノアッセイプレート。
体面の円周方向に対しては突起状を呈する形状であっ
て、円柱状部分の胴体面の長手軸方向に対しては、長手
軸方向に沿って延伸する稜線を呈する形状である上記
（９）記載のイムノアッセイプレート。
【００２０】（１１）ウェル型固相が、基板に所定の配
列で複数個設けられたものであり、ディップスティック
型固相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設け
られたものである上記（１）〜（１０）記載のイムノア
ッセイプレート。
列で複数個設けられたものであり、ディップスティック
型固相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設け
られたものである上記（１）〜（１０）記載のイムノア
ッセイプレート。
【００２１】（１２）ウェル型固相が、基板に所定の配
列で３以上設けられたものであり、ディップスティック
型固相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設け
られたものであり、突起部が１つのディップスティック
型固相につき１つだけ設けられるものであって、突起部
を設けるために設定される下記（Ｃ）の位置の全てが、
各突起部のいずれかによって必ず１以上対応されるもの
である上記（９）または（１０）記載のイムノアッセイ
プレート。 （Ｃ）：ディップスティック型固相の胴体面の円周方向
に３カ所以上設定される位置であって、各位置間の間隔
が、これらの各位置全てに突起部を設けたとき、ディッ
プスティック型固相の胴体面がウェル型固相に接触でき
ないように設定された間隔である位置。
列で３以上設けられたものであり、ディップスティック
型固相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設け
られたものであり、突起部が１つのディップスティック
型固相につき１つだけ設けられるものであって、突起部
を設けるために設定される下記（Ｃ）の位置の全てが、
各突起部のいずれかによって必ず１以上対応されるもの
である上記（９）または（１０）記載のイムノアッセイ
プレート。 （Ｃ）：ディップスティック型固相の胴体面の円周方向
に３カ所以上設定される位置であって、各位置間の間隔
が、これらの各位置全てに突起部を設けたとき、ディッ
プスティック型固相の胴体面がウェル型固相に接触でき
ないように設定された間隔である位置。
【００２２】（１３）上記（Ｃ）の位置が、ディップス
ティック型固相の胴体面の円周方向に４カ所設定される
位置であって、それらの位置の間の４つの間隔が全て等
しいものである上記（１２）記載のイムノアッセイプレ
ート。
ティック型固相の胴体面の円周方向に４カ所設定される
位置であって、それらの位置の間の４つの間隔が全て等
しいものである上記（１２）記載のイムノアッセイプレ
ート。
【００２３】（１４）ウェル型固相と同一形状のウェル
が該ウェル型固相と同数かつ同一の配列でその他の基板
に配置されてなるものが、反応に必要な溶液を保持する
ための容器として１以上加えられ、この１以上のウェル
とディップスティック型固相とウェル型固相とが１組と
なったものである上記（１１）〜（１３）記載のイムノ
アッセイプレート。
が該ウェル型固相と同数かつ同一の配列でその他の基板
に配置されてなるものが、反応に必要な溶液を保持する
ための容器として１以上加えられ、この１以上のウェル
とディップスティック型固相とウェル型固相とが１組と
なったものである上記（１１）〜（１３）記載のイムノ
アッセイプレート。
【００２４】また、本発明の免疫複合体転移法は、上記
（１）〜（１４）イムノアッセイプレートを用いる方法
であって、被検体溶液中の免疫複合体をディップスティ
ック型固相またはウェル型固相のうちの一方にトラップ
し、ディップスティック型固相をウェル型固相内に挿入
し、ウェル型固相内の液相中に免疫複合体を遊離させ、
この免疫複合体を、ディップスティック型固相またはウ
ェル型固相のうちの他方にトラップし、標識によって免
疫複合体中の抗原または抗体を測定することを特徴とす
るものである。
（１）〜（１４）イムノアッセイプレートを用いる方法
であって、被検体溶液中の免疫複合体をディップスティ
ック型固相またはウェル型固相のうちの一方にトラップ
し、ディップスティック型固相をウェル型固相内に挿入
し、ウェル型固相内の液相中に免疫複合体を遊離させ、
この免疫複合体を、ディップスティック型固相またはウ
ェル型固相のうちの他方にトラップし、標識によって免
疫複合体中の抗原または抗体を測定することを特徴とす
るものである。
【００２５】以下、上記（Ａ）の物質を「受容体物質
Ａ」といい、（Ｂ）の物質を「受容体物質Ｂ」という。
Ａ」といい、（Ｂ）の物質を「受容体物質Ｂ」という。
【００２６】本明細書において「ディップスティック型
固相」とは、凸型の固相であって、後述の「ウェル型固
相」に挿入可能な形状を有し、ウェル型固相中に保持さ
れた溶液に浸して用いられるものである。また、「ウェ
ル型固相」とは、凹型の固相であって、上述の「ディッ
プスティック型固相」が挿入可能な形状を有し、被検体
溶液や転移反応溶液、その他、酵素マーカーの検出用反
応液等を入れることができるものを意味する。「免疫複
合体結合面」とは、ウェル型固相の内側表面またはディ
ップスティック型固相の外表面において、受容体物質Ａ
またはＢがコーティング等によって付着され、かつ、こ
れらが組み合わせられたときに被検体溶液や転移反応溶
液に浸り、免疫複合体をトラップし得る領域を意味す
る。
固相」とは、凸型の固相であって、後述の「ウェル型固
相」に挿入可能な形状を有し、ウェル型固相中に保持さ
れた溶液に浸して用いられるものである。また、「ウェ
ル型固相」とは、凹型の固相であって、上述の「ディッ
プスティック型固相」が挿入可能な形状を有し、被検体
溶液や転移反応溶液、その他、酵素マーカーの検出用反
応液等を入れることができるものを意味する。「免疫複
合体結合面」とは、ウェル型固相の内側表面またはディ
ップスティック型固相の外表面において、受容体物質Ａ
またはＢがコーティング等によって付着され、かつ、こ
れらが組み合わせられたときに被検体溶液や転移反応溶
液に浸り、免疫複合体をトラップし得る領域を意味す
る。
【００２７】
【作用】ディップスティック型固相およびウェル型固相
の表面に、免疫複合体をそれぞれ異なる部位でトラップ
するための受容体物質をコーティング等によって付着
し、これらを各々、免疫複合体転移法における一対の固
相として用いることによって、従来では得られなかった
次の作用が得られる。 (a) ２種類の固相の接触、離脱が容易であり、かつ複数
アッセイを同時操作することができる。 (b) ２種類の固相のうちの一方をウェル型固相とするこ
とによって、この一方の固相は、免疫複合体をトラップ
する担体としての機能と、転移反応溶液を保持する機能
とを同時に果たすものとなる。 (c) 第１固相上の免疫複合体結合面と、第２固相上の免
疫複合体結合面とを全て向い合わせることができる。し
かも、対向するこれらの面間の距離を変更することが自
在であって、極めて近接した状態で互いを対面させるこ
とができる。
の表面に、免疫複合体をそれぞれ異なる部位でトラップ
するための受容体物質をコーティング等によって付着
し、これらを各々、免疫複合体転移法における一対の固
相として用いることによって、従来では得られなかった
次の作用が得られる。 (a) ２種類の固相の接触、離脱が容易であり、かつ複数
アッセイを同時操作することができる。 (b) ２種類の固相のうちの一方をウェル型固相とするこ
とによって、この一方の固相は、免疫複合体をトラップ
する担体としての機能と、転移反応溶液を保持する機能
とを同時に果たすものとなる。 (c) 第１固相上の免疫複合体結合面と、第２固相上の免
疫複合体結合面とを全て向い合わせることができる。し
かも、対向するこれらの面間の距離を変更することが自
在であって、極めて近接した状態で互いを対面させるこ
とができる。
【００２８】上記 (a)〜(c) の作用は、免疫複合体転移
法だけの特有の問題を解決するものであって、通常のイ
ムノアッセイでは問題とならなかった、免疫複合体転移
法を実施するために従来要していた煩雑な手間を簡素化
し、また、免疫複合体の転移の効率を向上させるもので
ある。即ち、本発明のイムノアッセイプレートは、従来
法におけるピンセットを用いたビーズの挿入や取出しの
手間を簡素化しただけでなく、免疫複合体転移法の独特
の問題である、似かよった第１・第２の固相用のビーズ
の識別に係る手間を、ディップスティック型固相とウェ
ル型固相という全く異なる形状とすることによって、２
つのビーズの識別という行為そのものを排除し、操作の
手間を簡素化している。
法だけの特有の問題を解決するものであって、通常のイ
ムノアッセイでは問題とならなかった、免疫複合体転移
法を実施するために従来要していた煩雑な手間を簡素化
し、また、免疫複合体の転移の効率を向上させるもので
ある。即ち、本発明のイムノアッセイプレートは、従来
法におけるピンセットを用いたビーズの挿入や取出しの
手間を簡素化しただけでなく、免疫複合体転移法の独特
の問題である、似かよった第１・第２の固相用のビーズ
の識別に係る手間を、ディップスティック型固相とウェ
ル型固相という全く異なる形状とすることによって、２
つのビーズの識別という行為そのものを排除し、操作の
手間を簡素化している。
【００２９】また、本発明のイムノアッセイプレートで
は、上記(b) のように、ウェル型固相が固相と容器とを
兼ねるものであるから、従来では、転移反応に際して反
応溶液中に存在する独立した固相面が３種類（第１固相
面、第２固相面、これらを保持する容器の内壁面）以上
であったのに対して、本発明では、転移反応に際して不
要な容器の内壁面が排除されて２種類となっており、簡
素化されて感度の向上に寄与している。
は、上記(b) のように、ウェル型固相が固相と容器とを
兼ねるものであるから、従来では、転移反応に際して反
応溶液中に存在する独立した固相面が３種類（第１固相
面、第２固相面、これらを保持する容器の内壁面）以上
であったのに対して、本発明では、転移反応に際して不
要な容器の内壁面が排除されて２種類となっており、簡
素化されて感度の向上に寄与している。
【００３０】また、従来の技術の説明において述べたよ
うに、第１・第２固相として２つのビーズを用いた場
合、これらは２つの球体であるから、互いに対向し近接
し得るのは常に局所的な部分だけであって、球体表面の
他の部分は互いに異なる方向を向かざるを得ない構成で
ある。このような従来のビーズを用いた構成では、免疫
複合体は、第１固相から反応液中に遊離され、その中を
自由に浮遊することになる。これを第２固相上へより多
く捕捉するには、反応液の攪拌を時間的・機械的に充分
に行ない、捕捉の確率が向上するのを期待するしか手段
はなかったのである。
うに、第１・第２固相として２つのビーズを用いた場
合、これらは２つの球体であるから、互いに対向し近接
し得るのは常に局所的な部分だけであって、球体表面の
他の部分は互いに異なる方向を向かざるを得ない構成で
ある。このような従来のビーズを用いた構成では、免疫
複合体は、第１固相から反応液中に遊離され、その中を
自由に浮遊することになる。これを第２固相上へより多
く捕捉するには、反応液の攪拌を時間的・機械的に充分
に行ない、捕捉の確率が向上するのを期待するしか手段
はなかったのである。
【００３１】これに対して、本発明のイムノアッセイプ
レートでは、上記(c) のように、第１固相の免疫複合体
結合面に、必要ならば１００％、第２固相の免疫複合体
結合面を対向させることが可能な構成である。従って、
第１固相から遊離した免疫複合体が第２固相に出会う確
率を高めることができる。特に、対向するこれら第１・
第２固相の面間の距離を１ｍｍ以下となるよう充分近接
させることによって、免疫複合体が遊離後に自由に浮遊
する過程をより減少させることができ、第１固相にトラ
ップされた免疫複合体は、反応液の極めて薄い層を介し
て、第１固相から第２固相へ直線的かつ短絡的に転移す
ることが可能となる。また、同量の反応液を用いた場合
に、反応液が接触する固相の表面積がより大きくなると
いう利点も有する。これらによって、免疫複合体の転移
の効率は、向上する。
レートでは、上記(c) のように、第１固相の免疫複合体
結合面に、必要ならば１００％、第２固相の免疫複合体
結合面を対向させることが可能な構成である。従って、
第１固相から遊離した免疫複合体が第２固相に出会う確
率を高めることができる。特に、対向するこれら第１・
第２固相の面間の距離を１ｍｍ以下となるよう充分近接
させることによって、免疫複合体が遊離後に自由に浮遊
する過程をより減少させることができ、第１固相にトラ
ップされた免疫複合体は、反応液の極めて薄い層を介し
て、第１固相から第２固相へ直線的かつ短絡的に転移す
ることが可能となる。また、同量の反応液を用いた場合
に、反応液が接触する固相の表面積がより大きくなると
いう利点も有する。これらによって、免疫複合体の転移
の効率は、向上する。
【００３２】
【発明の実施の形態】以下、本発明を図を用いてより詳
細に説明する。図１は、本発明のアッセイプレートの基
本的な構成を模式的に示す断面図である。同図におい
て、１はディップスティック型固相であって受容体物質
３がその表面に付着されている。２はウェル型固相であ
って受容体物質４がその表面に付着されている。５はウ
ェル型固相が保持する免疫複合体転移反応液である。た
だし、受容体物質３とは、上記受容体物質ＡまたはＢの
うちのいずれか一方の物質であって、そのときの他方の
物質が、受容体物質４である。これら固相は、ディップ
スティック型固相がウェル型固相に挿入し組み合わせる
ことができるように互いの形状が設定されており、ディ
ップスティック型固相は、免疫複合体転移法における第
１固相と第２固相のうちのいずれか一方の固相として用
いられ、また、ウェル型固相は、他方の固相として用い
られる。
細に説明する。図１は、本発明のアッセイプレートの基
本的な構成を模式的に示す断面図である。同図におい
て、１はディップスティック型固相であって受容体物質
３がその表面に付着されている。２はウェル型固相であ
って受容体物質４がその表面に付着されている。５はウ
ェル型固相が保持する免疫複合体転移反応液である。た
だし、受容体物質３とは、上記受容体物質ＡまたはＢの
うちのいずれか一方の物質であって、そのときの他方の
物質が、受容体物質４である。これら固相は、ディップ
スティック型固相がウェル型固相に挿入し組み合わせる
ことができるように互いの形状が設定されており、ディ
ップスティック型固相は、免疫複合体転移法における第
１固相と第２固相のうちのいずれか一方の固相として用
いられ、また、ウェル型固相は、他方の固相として用い
られる。
【００３３】ディップスティック型固相とウェル型固相
とは、組み合わせて用いられる関係にあるため、各々の
材料、形状等を両方同時に説明する。ディップスティッ
ク型固相およびウェル型固相に用いられる材料として
は、免疫複合体をトラップしうるための固相の担体と成
り得るものであればよいが、耐薬品性、加工性の点でプ
ラスチックやガラスが好ましく、特に、ポリスチレン、
ナイロン、酢酸セルロース等が好ましいものとして挙げ
られる。また、ディップスティック型固相の先端部と棒
状の胴体部分とを異なる材料で形成し、先端部の反応性
を高め、胴体部の強度の高低を任意に調節する態様であ
ってもよい。
とは、組み合わせて用いられる関係にあるため、各々の
材料、形状等を両方同時に説明する。ディップスティッ
ク型固相およびウェル型固相に用いられる材料として
は、免疫複合体をトラップしうるための固相の担体と成
り得るものであればよいが、耐薬品性、加工性の点でプ
ラスチックやガラスが好ましく、特に、ポリスチレン、
ナイロン、酢酸セルロース等が好ましいものとして挙げ
られる。また、ディップスティック型固相の先端部と棒
状の胴体部分とを異なる材料で形成し、先端部の反応性
を高め、胴体部の強度の高低を任意に調節する態様であ
ってもよい。
【００３４】ディップスティック型固相とウェル型固相
の形状は、ディップスティック型固相がウェル型固相内
に挿入しうるものであればよい。ディップスティック型
固相およびウェル型固相の長手方向（深さ方向）に垂直
な断面の形状は、円形・多角形・不定形等であってもよ
いが、各々、円形の断面形状が製造、反応、洗浄等の点
で好ましい。また、ディップスティック型固相の先端形
状、および、ウェル型固相の底面形状としては、平面、
錐体状、半球状面が代表的な形状として挙げられる。半
球状は、ディップスティック型固相では凸の半球状、ウ
ェル型固相では凹の半球状である。ディップスティック
型固相の先端形状は下に凸である方が挿入時に気泡がた
まらないという点で好ましい。
の形状は、ディップスティック型固相がウェル型固相内
に挿入しうるものであればよい。ディップスティック型
固相およびウェル型固相の長手方向（深さ方向）に垂直
な断面の形状は、円形・多角形・不定形等であってもよ
いが、各々、円形の断面形状が製造、反応、洗浄等の点
で好ましい。また、ディップスティック型固相の先端形
状、および、ウェル型固相の底面形状としては、平面、
錐体状、半球状面が代表的な形状として挙げられる。半
球状は、ディップスティック型固相では凸の半球状、ウ
ェル型固相では凹の半球状である。ディップスティック
型固相の先端形状は下に凸である方が挿入時に気泡がた
まらないという点で好ましい。
【００３５】図２は、ディップスティック型固相の形状
例を示す図である。同図（ａ）は円柱状であって、フラ
ットな端面を有する態様である。ただし、端面エッジ部
１ａの面取やアールは目的に応じて任意に施すものとす
る。同図（ｂ）は円柱状であって凸の半球状の端部を有
する態様である。同図（ｃ）は、球体１ｂと円柱１ｃと
を組み合わせた態様である。また、図３はウェル型固相
の形状例を示す図である。同図（ａ）、（ｂ）共に円筒
状の穴であって、底面の形状が同図（ａ）は平面状、同
図（ｂ）は凹の半球状とする態様である。同図（ａ）の
態様における底面隅部２ａのアール等の形状は、ディッ
プスティック型固相の端面エッジ部の形状等に応じて任
意に施すものとする。
例を示す図である。同図（ａ）は円柱状であって、フラ
ットな端面を有する態様である。ただし、端面エッジ部
１ａの面取やアールは目的に応じて任意に施すものとす
る。同図（ｂ）は円柱状であって凸の半球状の端部を有
する態様である。同図（ｃ）は、球体１ｂと円柱１ｃと
を組み合わせた態様である。また、図３はウェル型固相
の形状例を示す図である。同図（ａ）、（ｂ）共に円筒
状の穴であって、底面の形状が同図（ａ）は平面状、同
図（ｂ）は凹の半球状とする態様である。同図（ａ）の
態様における底面隅部２ａのアール等の形状は、ディッ
プスティック型固相の端面エッジ部の形状等に応じて任
意に施すものとする。
【００３６】ディップスティック型固相の形状とウェル
型固相の形状との好ましい組み合わせとしては、双方の
免疫複合体結合面が互いに全て対向でき、かつ、面間の
距離が均一となり得るという点で、図２（ａ）と図３
（ａ）との組み合わせ、または、図２（ｂ）と図３
（ｂ）との組み合わせ等が挙げられる。特に、ディップ
スティック型固相の直径とウェル型固相の内径を選択
し、両固相の免疫複合体結合面の５０％以上の面、好ま
しくは全面において、面間の距離を１ｍｍ以下とするこ
とによって、遊離した免疫複合体が捕捉される確率は高
くなり、従来の２つのビーズを用いた場合に比べて高い
測定感度が得られる。ウェル型固相の底面の形状は、平
面状が、光学的な測定等において焦点距離を容易に固定
しうる等の点から有利である。
型固相の形状との好ましい組み合わせとしては、双方の
免疫複合体結合面が互いに全て対向でき、かつ、面間の
距離が均一となり得るという点で、図２（ａ）と図３
（ａ）との組み合わせ、または、図２（ｂ）と図３
（ｂ）との組み合わせ等が挙げられる。特に、ディップ
スティック型固相の直径とウェル型固相の内径を選択
し、両固相の免疫複合体結合面の５０％以上の面、好ま
しくは全面において、面間の距離を１ｍｍ以下とするこ
とによって、遊離した免疫複合体が捕捉される確率は高
くなり、従来の２つのビーズを用いた場合に比べて高い
測定感度が得られる。ウェル型固相の底面の形状は、平
面状が、光学的な測定等において焦点距離を容易に固定
しうる等の点から有利である。
【００３７】ディップスティック型固相とウェル型固相
との組み合わせにおいて、より好ましい態様を次に示
す。上記のように、ウェル型固相の底面形状は平面状が
好ましく、ディップスティック型固相とウェル型固相と
は、図２（ａ）と図３（ａ）に示す組み合わせ、即ち、
共に円柱状である組み合わせがより好ましい。このと
き、図６に示すように、ディップスティック型固相の先
端部１ｄの形状は、先端方向に向かって凸の円錐状とす
ることが好ましい。この円錐の先端の角度は、１００度
〜１５０度程度の鈍角が好ましい。このような形状とす
ることによって、ディップスティック型固相とウェル型
固相とを互いに近接させながら、ディップスティック型
固相の下部に気泡が溜り難くなる。
との組み合わせにおいて、より好ましい態様を次に示
す。上記のように、ウェル型固相の底面形状は平面状が
好ましく、ディップスティック型固相とウェル型固相と
は、図２（ａ）と図３（ａ）に示す組み合わせ、即ち、
共に円柱状である組み合わせがより好ましい。このと
き、図６に示すように、ディップスティック型固相の先
端部１ｄの形状は、先端方向に向かって凸の円錐状とす
ることが好ましい。この円錐の先端の角度は、１００度
〜１５０度程度の鈍角が好ましい。このような形状とす
ることによって、ディップスティック型固相とウェル型
固相とを互いに近接させながら、ディップスティック型
固相の下部に気泡が溜り難くなる。
【００３８】ディップスティック型固相とウェル型固相
との面間の距離は、上記のように１ｍｍ以下に近接させ
ることが好ましい。従って、免疫複合体転移イムノアッ
セイを行なうに際して、これら固相の間に転移反応溶液
を介在させた場合、その転移反応溶液の液面は、これら
固相の間の毛管現象によって安定せず、不均一なものと
なる。このような問題を軽減するための好ましい態様と
して、図６に示す態様が挙げられる。即ち、ディップス
ティック型固相１の胴体に毛管現象を生じさせないよう
なくびれ１ｆを設け、この部分で毛管現象による転移反
応溶液の上昇を止める構造である。くびれの深さは、ウ
ェル型固相との間で毛管現象が生じ難い間隙となるよう
に設定すればよい。くびれの形状は、毛管現象が生じ難
くなるものであればよいが、図６に示すように、くびれ
のうちディップスティック型固相の根元側の部分を、表
面から長手軸に垂直方向に好ましい深さまで半径を減少
させ、そのから先端側に向かって半径をなだらかに増大
させる形状が、製造の容易さの点で好ましい。このよう
に、くびれを設ける態様によって、毛管現象による転移
反応溶液の上昇をその部分で断ち、不均一な反応面の拡
大を防ぐ結果、測定の均質化と効率化が達成され、バッ
クグラウンドの上昇を防止できる。
との面間の距離は、上記のように１ｍｍ以下に近接させ
ることが好ましい。従って、免疫複合体転移イムノアッ
セイを行なうに際して、これら固相の間に転移反応溶液
を介在させた場合、その転移反応溶液の液面は、これら
固相の間の毛管現象によって安定せず、不均一なものと
なる。このような問題を軽減するための好ましい態様と
して、図６に示す態様が挙げられる。即ち、ディップス
ティック型固相１の胴体に毛管現象を生じさせないよう
なくびれ１ｆを設け、この部分で毛管現象による転移反
応溶液の上昇を止める構造である。くびれの深さは、ウ
ェル型固相との間で毛管現象が生じ難い間隙となるよう
に設定すればよい。くびれの形状は、毛管現象が生じ難
くなるものであればよいが、図６に示すように、くびれ
のうちディップスティック型固相の根元側の部分を、表
面から長手軸に垂直方向に好ましい深さまで半径を減少
させ、そのから先端側に向かって半径をなだらかに増大
させる形状が、製造の容易さの点で好ましい。このよう
に、くびれを設ける態様によって、毛管現象による転移
反応溶液の上昇をその部分で断ち、不均一な反応面の拡
大を防ぐ結果、測定の均質化と効率化が達成され、バッ
クグラウンドの上昇を防止できる。
【００３９】またさらに、ディップスティック型固相の
免疫複合体結合面には、高さ１ｍｍ以下の突起部を１以
上設ける態様が好ましい。この突起部によって、その周
囲のディップスティック型固相の免疫複合体結合面とウ
ェル型固相の免疫複合体結合面とが接触することが無く
なる。
免疫複合体結合面には、高さ１ｍｍ以下の突起部を１以
上設ける態様が好ましい。この突起部によって、その周
囲のディップスティック型固相の免疫複合体結合面とウ
ェル型固相の免疫複合体結合面とが接触することが無く
なる。
【００４０】突起部の形状は、胴体面から円錐・角錐
状、円錐台・角錐台状に突起する等、突起状を呈するも
のであればよい。好ましい突起部の形状としては、図６
に１ｅとして示すように、円柱状部分の胴体面の円周方
向については三角形・台形等の突起状を呈する形状であ
って、円柱状部分の胴体面の長手軸方向に対しては、長
手軸方向に沿って延伸する稜線を描く形状であることが
好ましい。またこの長手軸方向に沿って延伸する稜線の
形状は、図６に示すように、ディップスティック型固相
をウェル型固相に挿入しやすいように、先端方向に向か
って突起の高さが減少するような態様が好ましい。
状、円錐台・角錐台状に突起する等、突起状を呈するも
のであればよい。好ましい突起部の形状としては、図６
に１ｅとして示すように、円柱状部分の胴体面の円周方
向については三角形・台形等の突起状を呈する形状であ
って、円柱状部分の胴体面の長手軸方向に対しては、長
手軸方向に沿って延伸する稜線を描く形状であることが
好ましい。またこの長手軸方向に沿って延伸する稜線の
形状は、図６に示すように、ディップスティック型固相
をウェル型固相に挿入しやすいように、先端方向に向か
って突起の高さが減少するような態様が好ましい。
【００４１】突起部は、ディップスティック型固相とウ
ェル型固相とが１対だけの態様である場合、ディップス
ティック型固相の胴体面の円周方向に３カ所以上設ける
ことが好ましい。またこのとき、各突起部間の配置間隔
は、ディップスティック型固相の胴体面がウェル型固相
に接触できないように設定することが好ましく、各突起
部間の配置間隔を、円周上において全て等間隔とするこ
とが特に好ましい。このような態様は、ディップスティ
ック型固相とウェル型固相とを近接させて用いることが
特に重要な免疫複合体転移イムノアッセイに対して、特
に有用なものとなる。また、このような態様によって、
ウェル型固相の長手方向の中心軸に、ディップスティッ
ク型固相の長手方向の中心軸を良好に近づけた状態を維
持しながら挿入することが可能となり、両固相の免疫複
合体結合面間の距離が常により一定に近づき、測定の均
質化と効率化が達成される。
ェル型固相とが１対だけの態様である場合、ディップス
ティック型固相の胴体面の円周方向に３カ所以上設ける
ことが好ましい。またこのとき、各突起部間の配置間隔
は、ディップスティック型固相の胴体面がウェル型固相
に接触できないように設定することが好ましく、各突起
部間の配置間隔を、円周上において全て等間隔とするこ
とが特に好ましい。このような態様は、ディップスティ
ック型固相とウェル型固相とを近接させて用いることが
特に重要な免疫複合体転移イムノアッセイに対して、特
に有用なものとなる。また、このような態様によって、
ウェル型固相の長手方向の中心軸に、ディップスティッ
ク型固相の長手方向の中心軸を良好に近づけた状態を維
持しながら挿入することが可能となり、両固相の免疫複
合体結合面間の距離が常により一定に近づき、測定の均
質化と効率化が達成される。
【００４２】ディップスティック型固相とウェル型固相
の表面状態には、免疫複合体の吸着能を高め得るよう適
度な表面あらさを与えることが好ましい。そのための表
面処理法としては、種々の機械的な研磨処理・化学的な
腐食処理等が挙げられる。
の表面状態には、免疫複合体の吸着能を高め得るよう適
度な表面あらさを与えることが好ましい。そのための表
面処理法としては、種々の機械的な研磨処理・化学的な
腐食処理等が挙げられる。
【００４３】ディップスティック型固相をウェル型固相
に挿入する際に、各々の長手方向の中心軸を一致させた
状態で挿入し得るよう、挿入動作のガイド構造を設ける
ことが好ましい。例えば、パイロットピンと穴、キーと
溝等を用いた構造が挙げられ、具体例として図４（ａ）
に示すように、ウェル型固相またはディップスティック
型固相の一方（同図ではウェル型固相）の器具全体の外
周部９の外側をパイロットピンと見なし、他方（同図で
はディップスティック型固相）の器具全体の外周部７の
内側を穴として利用し、位置決めする態様が挙げられ
る。
に挿入する際に、各々の長手方向の中心軸を一致させた
状態で挿入し得るよう、挿入動作のガイド構造を設ける
ことが好ましい。例えば、パイロットピンと穴、キーと
溝等を用いた構造が挙げられ、具体例として図４（ａ）
に示すように、ウェル型固相またはディップスティック
型固相の一方（同図ではウェル型固相）の器具全体の外
周部９の外側をパイロットピンと見なし、他方（同図で
はディップスティック型固相）の器具全体の外周部７の
内側を穴として利用し、位置決めする態様が挙げられ
る。
【００４４】本発明のイムノアッセイプレートの好まし
い態様の１つとして、ディップスティック型固相とウェ
ル型固相との組み合わせを複数組、同時に使用する態様
が挙げられる。図４は、このような本発明のイムノアッ
セイプレートの好ましい態様の一例を模式的に示す図で
ある。同図は、ディップスティック型固相１が、基板６
上に、所定の配列に従って複数個配置され、ウェル型固
相２が、ディップスティック型固相と同数かつ同一の配
列で他の基板８に配置され、これらを組み合わせること
によって、複数の転移実験を同時に行なうことができる
構成となっている。上記所定の配列は限定されないが、
一定ピッチとすることが好ましく、特に、生化学の分野
において用いられる市販の多穴マイクロプレートと同様
の配列とすることによって、計測器等の付帯設備の利用
が可能となり有利である。
い態様の１つとして、ディップスティック型固相とウェ
ル型固相との組み合わせを複数組、同時に使用する態様
が挙げられる。図４は、このような本発明のイムノアッ
セイプレートの好ましい態様の一例を模式的に示す図で
ある。同図は、ディップスティック型固相１が、基板６
上に、所定の配列に従って複数個配置され、ウェル型固
相２が、ディップスティック型固相と同数かつ同一の配
列で他の基板８に配置され、これらを組み合わせること
によって、複数の転移実験を同時に行なうことができる
構成となっている。上記所定の配列は限定されないが、
一定ピッチとすることが好ましく、特に、生化学の分野
において用いられる市販の多穴マイクロプレートと同様
の配列とすることによって、計測器等の付帯設備の利用
が可能となり有利である。
【００４５】上記説明のように、ディップスティック型
固相とウェル型固相とのペアが複数組同時に用いられる
場合には、ディップスティック型固相に設けられる突起
部を、各ディップスティック型固相に分散させて設け、
個々のディップスティック型固相に設けられる突起部の
数を減らすことができる。例えば、１つのディップステ
ィック型固相に４か所の突起部が設けられる場合に対し
て、ディップスティック型固相とウェル型固相とのペア
を２組用いるならば、この４か所の突起部を２つのディ
ップスティック型固相に２か所ずつに分散させて設けて
もよいということである。突起部の分散は、１か所と３
か所の分散であってもよい。全体としてもとの４か所の
位置が全てカバーされているならば、１つのディップス
ティック型固相に４か所の突起部が設けられる場合と同
じ作用を示す。
固相とウェル型固相とのペアが複数組同時に用いられる
場合には、ディップスティック型固相に設けられる突起
部を、各ディップスティック型固相に分散させて設け、
個々のディップスティック型固相に設けられる突起部の
数を減らすことができる。例えば、１つのディップステ
ィック型固相に４か所の突起部が設けられる場合に対し
て、ディップスティック型固相とウェル型固相とのペア
を２組用いるならば、この４か所の突起部を２つのディ
ップスティック型固相に２か所ずつに分散させて設けて
もよいということである。突起部の分散は、１か所と３
か所の分散であってもよい。全体としてもとの４か所の
位置が全てカバーされているならば、１つのディップス
ティック型固相に４か所の突起部が設けられる場合と同
じ作用を示す。
【００４６】特に、ディップスティック型固相とウェル
型固相とのペアの数が３以上である場合には、突起部を
１つのディップスティック型固相につき１つだけ設ける
ことが好ましい。ただしこのとき、突起部を設けるため
に設定される上記（Ｃ）の位置の全ては、各突起部のい
ずれかによって必ず１以上対応されるべきである。上記
説明のように、個々のディップスティック型固相に設け
られる突起部の数は各々１つでも、全体としてもとの３
か所の位置（方向）が全てカバーされているならば、１
つのディップスティック型固相に３か所の突起部が設け
られる場合と同じ作用を示す。このような態様によっ
て、ウェル型固相の長手方向の中心軸に、ディップステ
ィック型固相の長手方向の中心軸を良好に近づいた状態
を維持しながら挿入が可能となり、両固相の免疫複合体
結合面間の距離が常により一定に近づき、測定の均質化
と効率化が達成されるのである。また、各ディップステ
ィック型固相に設けられる突起部は、ただ１つだけであ
るため、ウェル型固相との接触点がより少なくなり、ま
た固相の洗浄が容易であるという点でも好ましい態様で
ある。
型固相とのペアの数が３以上である場合には、突起部を
１つのディップスティック型固相につき１つだけ設ける
ことが好ましい。ただしこのとき、突起部を設けるため
に設定される上記（Ｃ）の位置の全ては、各突起部のい
ずれかによって必ず１以上対応されるべきである。上記
説明のように、個々のディップスティック型固相に設け
られる突起部の数は各々１つでも、全体としてもとの３
か所の位置（方向）が全てカバーされているならば、１
つのディップスティック型固相に３か所の突起部が設け
られる場合と同じ作用を示す。このような態様によっ
て、ウェル型固相の長手方向の中心軸に、ディップステ
ィック型固相の長手方向の中心軸を良好に近づいた状態
を維持しながら挿入が可能となり、両固相の免疫複合体
結合面間の距離が常により一定に近づき、測定の均質化
と効率化が達成されるのである。また、各ディップステ
ィック型固相に設けられる突起部は、ただ１つだけであ
るため、ウェル型固相との接触点がより少なくなり、ま
た固相の洗浄が容易であるという点でも好ましい態様で
ある。
【００４７】上記（Ｃ）の位置の好ましい例としては、
ディップスティック型固相の胴体面の円周方向に４カ所
設定され、かつ、それらの位置の間の４つの間隔が全て
等しいように設定された位置が挙げられる。これをディ
ップスティック型固相の胴体の軸に垂直な断面で説明す
ると、胴体表面の円周上に軸の回りに９０度ずつの等し
い角度をおいて４カ所設定するということである。
ディップスティック型固相の胴体面の円周方向に４カ所
設定され、かつ、それらの位置の間の４つの間隔が全て
等しいように設定された位置が挙げられる。これをディ
ップスティック型固相の胴体の軸に垂直な断面で説明す
ると、胴体表面の円周上に軸の回りに９０度ずつの等し
い角度をおいて４カ所設定するということである。
【００４８】図７は、この態様の具体的な一例を模式的
に示す図である。図７（ａ）に示すディップスティック
型固相は、９６穴（１行８穴×１２行）の標準的なマト
リクス配置として形成されたウェル型固相に対応すべ
く、基板上の９６カ所（１行８カ所×１２行）の位置に
ディップスティック型固相１が形成されたサンプルの側
面図である。また、図７（ｂ）は、図７（ａ）に示すデ
ィップスティック型固相を先端方向から見たときの図で
ある。
に示す図である。図７（ａ）に示すディップスティック
型固相は、９６穴（１行８穴×１２行）の標準的なマト
リクス配置として形成されたウェル型固相に対応すべ
く、基板上の９６カ所（１行８カ所×１２行）の位置に
ディップスティック型固相１が形成されたサンプルの側
面図である。また、図７（ｂ）は、図７（ａ）に示すデ
ィップスティック型固相を先端方向から見たときの図で
ある。
【００４９】図７（ａ）に示す個々のディップスティッ
ク型固相は、図６に示すディップスティック型固相と同
様である。その重要な特徴は、突起部１ｅの位置であ
る。図７（ｂ）に示すように、突起部１ｅは、各ディッ
プスティック型固相ごとに、胴体面の円周方向に４カ所
設定された４方向のうちのいずれかの方向を向くように
配置されている。さらに、その４カ所設定された４方向
の全てが、必ず各突起部のいずれかによって１以上対応
されている。即ち、突起部が向いていない方向が存在す
ることがないように、各ディップスティック型固相の突
起部が配置されるということである。図７（ｂ）の例で
は、隣合った２行、計１６本のディップスティック型固
相の各々の突起部によって、４カ所設定された４方向の
突起部の位置が全てカバーされている。
ク型固相は、図６に示すディップスティック型固相と同
様である。その重要な特徴は、突起部１ｅの位置であ
る。図７（ｂ）に示すように、突起部１ｅは、各ディッ
プスティック型固相ごとに、胴体面の円周方向に４カ所
設定された４方向のうちのいずれかの方向を向くように
配置されている。さらに、その４カ所設定された４方向
の全てが、必ず各突起部のいずれかによって１以上対応
されている。即ち、突起部が向いていない方向が存在す
ることがないように、各ディップスティック型固相の突
起部が配置されるということである。図７（ｂ）の例で
は、隣合った２行、計１６本のディップスティック型固
相の各々の突起部によって、４カ所設定された４方向の
突起部の位置が全てカバーされている。
【００５０】ディップスティック型固相の数と、突起部
を設けるための上記（Ｃ）の位置との組み合わせは自由
である。ディップスティック型固相の数が３本であるな
らば、上記（Ｃ）の位置は３カ所であって、各ディップ
スティック型固相の突起部は、互いに全て異なる位置
（方向）に設けられる。ディップスティック型固相の数
が４本以上さらに増加するにともない、上記（Ｃ）の位
置は３カ所以上自由に設定してもよいが、実際の製作コ
ストと突起部が示す上記作用とのバランス等の点から、
上記（Ｃ）の位置は４カ所程度とすることが好ましい。
を設けるための上記（Ｃ）の位置との組み合わせは自由
である。ディップスティック型固相の数が３本であるな
らば、上記（Ｃ）の位置は３カ所であって、各ディップ
スティック型固相の突起部は、互いに全て異なる位置
（方向）に設けられる。ディップスティック型固相の数
が４本以上さらに増加するにともない、上記（Ｃ）の位
置は３カ所以上自由に設定してもよいが、実際の製作コ
ストと突起部が示す上記作用とのバランス等の点から、
上記（Ｃ）の位置は４カ所程度とすることが好ましい。
【００５１】本発明のイムノアッセイプレートの好まし
い態様の他の例として、上記ディップスティック型固相
とウェル型固相との組み合わせに、さらに反応に必要な
溶液を保持するための容器としてのウェルを１以上加
え、このウェルとディップスティック型固相とウェル型
固相とを１組とする態様が挙げられる。加えられるウェ
ルの数は、目的に応じて決定すればよく、例えば、免疫
複合体転移法の工程の最初に用いる被検体溶液の保持用
として、あるいは、免疫複合体転移法の工程の最後に用
いる測定用の補助容器として用いられる。また、このウ
ェルは、図４（ｂ）に示すようにウェル１０をウェル型
固相と同一形状とし、該ウェル型固相と同数かつ同一の
配列で基板１１に配置し、該ウェル型固相と同一のガイ
ド構造９を設ける態様が好ましい。このような態様によ
って、ディップスティック型固相をウェル型固相内の転
移反応溶液に浸す工程の前後に、これと同様の単純で確
実な予備工程や、後工程を連続的に結びつけることがで
き、免疫複合体転移法の工程全体は、より容易に、かつ
正確に行なうことが可能となる。
い態様の他の例として、上記ディップスティック型固相
とウェル型固相との組み合わせに、さらに反応に必要な
溶液を保持するための容器としてのウェルを１以上加
え、このウェルとディップスティック型固相とウェル型
固相とを１組とする態様が挙げられる。加えられるウェ
ルの数は、目的に応じて決定すればよく、例えば、免疫
複合体転移法の工程の最初に用いる被検体溶液の保持用
として、あるいは、免疫複合体転移法の工程の最後に用
いる測定用の補助容器として用いられる。また、このウ
ェルは、図４（ｂ）に示すようにウェル１０をウェル型
固相と同一形状とし、該ウェル型固相と同数かつ同一の
配列で基板１１に配置し、該ウェル型固相と同一のガイ
ド構造９を設ける態様が好ましい。このような態様によ
って、ディップスティック型固相をウェル型固相内の転
移反応溶液に浸す工程の前後に、これと同様の単純で確
実な予備工程や、後工程を連続的に結びつけることがで
き、免疫複合体転移法の工程全体は、より容易に、かつ
正確に行なうことが可能となる。
【００５２】ディップスティック型固相またはウェル型
固相のどちらが第１固相として用いられても、第１固相
の表面に付着される受容体物質は、上記受容体物質Ａが
選択され、第２固相の表面に付着される受容体物質は上
記受容体物質Ｂが選択される。受容体物質Ａ、Ｂについ
ては、以下の、本発明のイムノアッセイプレートを用い
た免疫複合体転移法の説明に沿って、詳細な説明を行な
う。
固相のどちらが第１固相として用いられても、第１固相
の表面に付着される受容体物質は、上記受容体物質Ａが
選択され、第２固相の表面に付着される受容体物質は上
記受容体物質Ｂが選択される。受容体物質Ａ、Ｂについ
ては、以下の、本発明のイムノアッセイプレートを用い
た免疫複合体転移法の説明に沿って、詳細な説明を行な
う。
【００５３】本発明のイムノアッセイプレートを用いた
免疫複合体転移法の一例を以下に説明する。ただし、被
検物質は抗体物質とする。第１固相は、ディップスティ
ック型固相、ウェル型固相のどちらであってもよいが、
以下の例では第１固相をディップスティック型固相とし
た場合を例示する。図５に模式的に示すように、本発明
のイムノアッセイプレートを用いた免疫複合体転移法に
よる抗体検査工程例は、次の（イ）〜（ハ）の手順で表
される。 （イ）被検体溶液１２中において、測定すべき抗体２０
に対して、官能基３１を結合した抗原３０と、標識４１
を結合した抗原４０とを結合して、免疫複合体５０を形
成する。被検体溶液１２は、ウェル型固相と同形の他の
ウェルに保持するのが好ましい。この免疫複合体５０を
ディップスティック型固相１に官能基３１を介してトラ
ップする。このときディップスティック型固相１にコー
ティングされた受容体物質３が上記受容体物質Ａであ
り、官能基３１と特異的に結合する反応基を有する物質
である。 （ロ）ディップスティック型固相を洗浄してトラップさ
れた免疫複合体だけを残す。このディップスティック型
固相１を、ウェル型固相２内に挿入し、該ウェル型固相
内に保持された転移反応溶液５中に免疫複合体を遊離さ
せる。遊離した免疫複合体をウェル型固相２に、抗体２
０を介してトラップする。このときウェル型固相２にコ
ーティングされる受容体物質４が、受容体物質Ｂ、即
ち、抗体２０と特異的に結合する物質である。この物質
は、抗原３０に結合された官能基３１とは異なる別の官
能基と特異的に結合しうる反応基を有する物質であって
もよい。ただし、この官能基は（Ａ）の物質の反応基と
は結合しないようにする。 （ハ）標識４１によって、ウェル型固相２にトラップさ
れた免疫複合体中の抗体を測定する。標識を用いた測定
法は公知の方法を用いてよい。
免疫複合体転移法の一例を以下に説明する。ただし、被
検物質は抗体物質とする。第１固相は、ディップスティ
ック型固相、ウェル型固相のどちらであってもよいが、
以下の例では第１固相をディップスティック型固相とし
た場合を例示する。図５に模式的に示すように、本発明
のイムノアッセイプレートを用いた免疫複合体転移法に
よる抗体検査工程例は、次の（イ）〜（ハ）の手順で表
される。 （イ）被検体溶液１２中において、測定すべき抗体２０
に対して、官能基３１を結合した抗原３０と、標識４１
を結合した抗原４０とを結合して、免疫複合体５０を形
成する。被検体溶液１２は、ウェル型固相と同形の他の
ウェルに保持するのが好ましい。この免疫複合体５０を
ディップスティック型固相１に官能基３１を介してトラ
ップする。このときディップスティック型固相１にコー
ティングされた受容体物質３が上記受容体物質Ａであ
り、官能基３１と特異的に結合する反応基を有する物質
である。 （ロ）ディップスティック型固相を洗浄してトラップさ
れた免疫複合体だけを残す。このディップスティック型
固相１を、ウェル型固相２内に挿入し、該ウェル型固相
内に保持された転移反応溶液５中に免疫複合体を遊離さ
せる。遊離した免疫複合体をウェル型固相２に、抗体２
０を介してトラップする。このときウェル型固相２にコ
ーティングされる受容体物質４が、受容体物質Ｂ、即
ち、抗体２０と特異的に結合する物質である。この物質
は、抗原３０に結合された官能基３１とは異なる別の官
能基と特異的に結合しうる反応基を有する物質であって
もよい。ただし、この官能基は（Ａ）の物質の反応基と
は結合しないようにする。 （ハ）標識４１によって、ウェル型固相２にトラップさ
れた免疫複合体中の抗体を測定する。標識を用いた測定
法は公知の方法を用いてよい。
【００５４】被検体溶液としては、例えば、血清、血
漿、髄液、唾液、尿等の体液、抗体を含む緩衝液等が例
示される。
漿、髄液、唾液、尿等の体液、抗体を含む緩衝液等が例
示される。
【００５５】測定すべき抗体としては、実質上、免疫学
的測定法で測定し得る全ての抗体が挙げられる。例を挙
げれば、抗核抗体、抗ＤＮＡ抗体、抗ＲＮＡ抗体、リウ
マトイド因子、抗赤血球抗体、抗ミトコンドリア抗体、
抗筋抗体、抗甲状腺抗体（抗ミクロソーム抗体、抗サイ
ログロブリン抗体、抗ＴＳＨレセプター抗体）、抗イン
スリン抗体、抗インスリンレセプター抗体、抗アセチル
コリンレセプター抗体等の自己抗体やウィルス、微生物
に対する抗体、インターフェロンやヒト成長ホルモン等
の蛋白製剤に対する抗体、アレルギー疾患におけるアレ
ルゲン抗体等である。これら抗体は被検液中で遊離した
状態のみではなく免疫複合体、結合蛋白と結合した状態
でも測定可能である。
的測定法で測定し得る全ての抗体が挙げられる。例を挙
げれば、抗核抗体、抗ＤＮＡ抗体、抗ＲＮＡ抗体、リウ
マトイド因子、抗赤血球抗体、抗ミトコンドリア抗体、
抗筋抗体、抗甲状腺抗体（抗ミクロソーム抗体、抗サイ
ログロブリン抗体、抗ＴＳＨレセプター抗体）、抗イン
スリン抗体、抗インスリンレセプター抗体、抗アセチル
コリンレセプター抗体等の自己抗体やウィルス、微生物
に対する抗体、インターフェロンやヒト成長ホルモン等
の蛋白製剤に対する抗体、アレルギー疾患におけるアレ
ルゲン抗体等である。これら抗体は被検液中で遊離した
状態のみではなく免疫複合体、結合蛋白と結合した状態
でも測定可能である。
【００５６】一方、抗原を被検物質とする場合には、測
定すべき抗原としては、抗原として抗原部位を有する全
ての物質、実質上、従来の免疫学的測定法で測定し得た
全ての物質が測定可能である。例を挙げれば、γ−グル
タミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＴＰ）、アルカリ
フォスファダーゼ、糖転位酵素等の酵素類、甲状腺刺激
ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、胎盤
性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、インスリン、セクレチ
ン、成長ホルモン（ＧＨ）等の蛋白性ホルモン類、フィ
ブリン分解物（ＦＤＰ）、Ｃ−反応性蛋白（ＣＲＰ）、
α1 −酸性グリコプロテイン（α1 −ＡＧＰ）、α1 −
アンチトリプシン（α1 −ＡＴ）、α2−プラスミンイ
ンヒビター（α2 −ＰＩ）、β2 −マイクログロブリン
（β2 −ＭＧ）、免疫グロブリン等の血漿蛋白類、α−
フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性蛋白（ＣＥ
Ａ）、胎児性フェリチン等の癌胎児性蛋白類、リンパ
球、ウイルス微生物等の細胞、細胞表面抗原、チロキシ
ン、バソプレッシン、心房性ナトリウム利尿ホルモン等
のハプテンである。これら抗原は被検液中で、遊離した
状態のみではなく免疫複合体、結合蛋白と結合した状態
でも測定可能である。
定すべき抗原としては、抗原として抗原部位を有する全
ての物質、実質上、従来の免疫学的測定法で測定し得た
全ての物質が測定可能である。例を挙げれば、γ−グル
タミルトランスペプチダーゼ（γ−ＧＴＰ）、アルカリ
フォスファダーゼ、糖転位酵素等の酵素類、甲状腺刺激
ホルモン（ＴＳＨ）、黄体形成ホルモン（ＬＨ）、胎盤
性性腺刺激ホルモン（ｈＣＧ）、インスリン、セクレチ
ン、成長ホルモン（ＧＨ）等の蛋白性ホルモン類、フィ
ブリン分解物（ＦＤＰ）、Ｃ−反応性蛋白（ＣＲＰ）、
α1 −酸性グリコプロテイン（α1 −ＡＧＰ）、α1 −
アンチトリプシン（α1 −ＡＴ）、α2−プラスミンイ
ンヒビター（α2 −ＰＩ）、β2 −マイクログロブリン
（β2 −ＭＧ）、免疫グロブリン等の血漿蛋白類、α−
フェトプロテイン（ＡＦＰ）、癌胎児性蛋白（ＣＥ
Ａ）、胎児性フェリチン等の癌胎児性蛋白類、リンパ
球、ウイルス微生物等の細胞、細胞表面抗原、チロキシ
ン、バソプレッシン、心房性ナトリウム利尿ホルモン等
のハプテンである。これら抗原は被検液中で、遊離した
状態のみではなく免疫複合体、結合蛋白と結合した状態
でも測定可能である。
【００５７】図５（ｂ）における抗原３０および４０
は、測定すべき抗体と抗原抗体反応を生じさせる、特異
抗原、抗イディオタイプ抗体の様な成分をいう。なお、
免疫複合体転移法においては、抗原として、一つの抗原
に官能基と標識とが同時に結合しないものが好適に用い
られる。
は、測定すべき抗体と抗原抗体反応を生じさせる、特異
抗原、抗イディオタイプ抗体の様な成分をいう。なお、
免疫複合体転移法においては、抗原として、一つの抗原
に官能基と標識とが同時に結合しないものが好適に用い
られる。
【００５８】前記抗原に結合される官能基は、ディップ
スティック型固相へのトラップに関与するものであり、
被検液中の成分によってトラップを阻害されることな
く、トラップ後は洗浄によっても脱離されにくい結合性
を示すものが好ましい。このような物質としては、例え
ば、ジニトロフェニル基・モノニトロフェニル基・トリ
ニトロフェニル基・フルオレセイン基等のハプテン、ビ
オチン、あるいは免疫複合体を構成する抗体・抗原以外
の抗体・抗原等が挙げられる。
スティック型固相へのトラップに関与するものであり、
被検液中の成分によってトラップを阻害されることな
く、トラップ後は洗浄によっても脱離されにくい結合性
を示すものが好ましい。このような物質としては、例え
ば、ジニトロフェニル基・モノニトロフェニル基・トリ
ニトロフェニル基・フルオレセイン基等のハプテン、ビ
オチン、あるいは免疫複合体を構成する抗体・抗原以外
の抗体・抗原等が挙げられる。
【００５９】標識に用いられる物質としては、免疫学的
測定において測定に利用されるいずれの物質でもよく、
酵素、放射性物質、発光物質、螢光物質、金属化合物等
が挙げられる。例えば、酵素としてはペルオキシダー
ゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファター
ゼ等が、放射性物質としてはヨウ素、水素、螢光物質と
してはフルオレセインイソチオシアネート等が、発光物
質としては、アクリジウム塩等が挙げられる。
測定において測定に利用されるいずれの物質でもよく、
酵素、放射性物質、発光物質、螢光物質、金属化合物等
が挙げられる。例えば、酵素としてはペルオキシダー
ゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファター
ゼ等が、放射性物質としてはヨウ素、水素、螢光物質と
してはフルオレセインイソチオシアネート等が、発光物
質としては、アクリジウム塩等が挙げられる。
【００６０】官能基または標識と、抗原との結合は自体
既知の方法によって行えばよく、免疫複合体転移法の工
程に影響を及ぼさないキャリヤーを介在させて抗原に結
合させてもよい。抗原が低分子の場合には、特にこの様
な介在が好ましい。キャリヤーとしては、例えば非特異
ウサギＩｇＧ、ウシ血清アルブミン、デキストラン等が
挙げられる。
既知の方法によって行えばよく、免疫複合体転移法の工
程に影響を及ぼさないキャリヤーを介在させて抗原に結
合させてもよい。抗原が低分子の場合には、特にこの様
な介在が好ましい。キャリヤーとしては、例えば非特異
ウサギＩｇＧ、ウシ血清アルブミン、デキストラン等が
挙げられる。
【００６１】ディップスティック型固相に付着される受
容体物質は、上記受容体物質Ａが選択される。即ち、図
５（ａ）において、官能基３１と特異的に結合しうる反
応基を有する物質３である。このような物質としては、
官能基に対応する通常のものが挙げられるが、例えば、
官能基がハプテンのときは、ハプテンに対する特異抗体
（ハプテン抗体）が挙げられる。即ち、ジニトロフェニ
ル抗体、モノニトロフェニル抗体、トリニトロフェニル
抗体等である。また、官能基がビオチンのときは、アビ
ジンまたはストレプトアビジンが挙げられ、官能基が抗
原または抗体のときは、これに対応する抗体または抗原
が挙げられる。受容体物質をディップスティック型固相
の表面上に付着させる方法は、免疫学的測定における担
体作成の公知のコーティング（膜形成）方法、塗装方法
を用いればよい。
容体物質は、上記受容体物質Ａが選択される。即ち、図
５（ａ）において、官能基３１と特異的に結合しうる反
応基を有する物質３である。このような物質としては、
官能基に対応する通常のものが挙げられるが、例えば、
官能基がハプテンのときは、ハプテンに対する特異抗体
（ハプテン抗体）が挙げられる。即ち、ジニトロフェニ
ル抗体、モノニトロフェニル抗体、トリニトロフェニル
抗体等である。また、官能基がビオチンのときは、アビ
ジンまたはストレプトアビジンが挙げられ、官能基が抗
原または抗体のときは、これに対応する抗体または抗原
が挙げられる。受容体物質をディップスティック型固相
の表面上に付着させる方法は、免疫学的測定における担
体作成の公知のコーティング（膜形成）方法、塗装方法
を用いればよい。
【００６２】ウェル型固相内に保持される転移反応溶液
としては、ディップスティック型固相上にトラップされ
た免疫複合体を遊離させる性質を有するもの、またはそ
のような物質が付加されたものが用いられる。免疫複合
体の遊離を、酸、アルカリ、高濃度無機塩等で処理する
場合、一般に、酸で解離する場合はｐＨ５以下、好まし
くはｐＨ０．５〜３．５とし、アルカリで解離する場合
はｐＨ９以上とし、高濃度無機塩で解離する場合は２Ｍ
以上の塩濃度とすることが好ましい。このような処理は
一般に０〜４５℃の温度において、１０分〜数１０時間
処理することによって行われる。また、免疫複合体の遊
離は、トラップに係る官能基と同一部位を有する物質を
加えることによって行なうことができ、例えば、官能基
がジニトロフェニルの時にはジニトロフェニルアミノ酸
（例：ジニトロフェニルリジン）が、官能基がビオチニ
ルの時にはビオチンが用いられる。また、抗体に官能基
が−Ｓ−Ｓ−結合を介して結合している場合は、−Ｓ−
Ｓ−結合を切断する試薬により修飾抗原−抗体複合体を
解離することができる。
としては、ディップスティック型固相上にトラップされ
た免疫複合体を遊離させる性質を有するもの、またはそ
のような物質が付加されたものが用いられる。免疫複合
体の遊離を、酸、アルカリ、高濃度無機塩等で処理する
場合、一般に、酸で解離する場合はｐＨ５以下、好まし
くはｐＨ０．５〜３．５とし、アルカリで解離する場合
はｐＨ９以上とし、高濃度無機塩で解離する場合は２Ｍ
以上の塩濃度とすることが好ましい。このような処理は
一般に０〜４５℃の温度において、１０分〜数１０時間
処理することによって行われる。また、免疫複合体の遊
離は、トラップに係る官能基と同一部位を有する物質を
加えることによって行なうことができ、例えば、官能基
がジニトロフェニルの時にはジニトロフェニルアミノ酸
（例：ジニトロフェニルリジン）が、官能基がビオチニ
ルの時にはビオチンが用いられる。また、抗体に官能基
が−Ｓ−Ｓ−結合を介して結合している場合は、−Ｓ−
Ｓ−結合を切断する試薬により修飾抗原−抗体複合体を
解離することができる。
【００６３】ウェル型固相に付着される受容体物質は、
受容体物質Ｂであって、免疫複合体の部位のうち、先の
トラップに係る部位以外の部位において、この免疫複合
体を再びトラップする物質である。即ち、免疫複合体中
の抗体（この場合、測定すべき抗体）と直接特異的に結
合する物質、または抗原に予め修飾しておいた官能基と
特異的に結合しうる反応基を有する物質である。ただ
し、この官能基は受容体物質Ａとは反応しないものであ
る。抗体と直接特異的に結合する物質としては、その抗
体に対する抗体、即ち、抗抗体が代表例である。また、
抗原に予め修飾しておいた官能基としては、ジニトロフ
ェニル基・モノニトロフェニル基・トリニトロフェニル
基・フルオレセイン基等のハプテン、ビオチン等のう
ち、受容体物質Ａと反応する官能基とは異なる物質が選
択される。従って、この官能基と特異的に結合しうる反
応基を有する物質としては、ハプテンに対してはハプテ
ン抗体、ビオチンに対してはアビジン（ストレプトアビ
ジン）、糖鎖を有する場合はレクチン等の他、プロテイ
ンＡと免疫グロブリン、ホルモンとホルモン受容体、基
質又は補酵素と酵素、ＤＮＡ・ＲＮＡと相補配列ＤＮＡ
・ＲＮＡ等が例示される。受容体物質をウェル型固相上
に付着する方法は、上記ディップスティック型固相に対
する方法と同様である。
受容体物質Ｂであって、免疫複合体の部位のうち、先の
トラップに係る部位以外の部位において、この免疫複合
体を再びトラップする物質である。即ち、免疫複合体中
の抗体（この場合、測定すべき抗体）と直接特異的に結
合する物質、または抗原に予め修飾しておいた官能基と
特異的に結合しうる反応基を有する物質である。ただ
し、この官能基は受容体物質Ａとは反応しないものであ
る。抗体と直接特異的に結合する物質としては、その抗
体に対する抗体、即ち、抗抗体が代表例である。また、
抗原に予め修飾しておいた官能基としては、ジニトロフ
ェニル基・モノニトロフェニル基・トリニトロフェニル
基・フルオレセイン基等のハプテン、ビオチン等のう
ち、受容体物質Ａと反応する官能基とは異なる物質が選
択される。従って、この官能基と特異的に結合しうる反
応基を有する物質としては、ハプテンに対してはハプテ
ン抗体、ビオチンに対してはアビジン（ストレプトアビ
ジン）、糖鎖を有する場合はレクチン等の他、プロテイ
ンＡと免疫グロブリン、ホルモンとホルモン受容体、基
質又は補酵素と酵素、ＤＮＡ・ＲＮＡと相補配列ＤＮＡ
・ＲＮＡ等が例示される。受容体物質をウェル型固相上
に付着する方法は、上記ディップスティック型固相に対
する方法と同様である。
【００６４】本例に対して、第１固相をウェル型固相、
第２固相をディップスティック型固相とした場合は、両
固相の表面に付着される受容体物質は、上記説明とは互
いに入れ替わるものとなる。
第２固相をディップスティック型固相とした場合は、両
固相の表面に付着される受容体物質は、上記説明とは互
いに入れ替わるものとなる。
【００６５】また、抗原を測定対象とする場合も受容体
物質の選択は、抗体を測定対象とする場合と同様で、抗
原の代わりに特異的抗体あるいはレクチン等を用いれば
よく、ディップスティック型固相またはウェル型固相の
どちらが第１固相として用いられても、第１固相の表面
に付着される受容体物質は、受容体物質Ａが選択され
る。抗原を測定対象とする場合も、免疫複合体の転移方
向は、ディップスティック型固相からウェル型固相、ま
たはその逆でもよい。各々の転移方向の場合について、
両固相の表面に付着される受容体物質が、互いに入れ替
わることは、上記抗体を測定対象とする場合と同様であ
る。
物質の選択は、抗体を測定対象とする場合と同様で、抗
原の代わりに特異的抗体あるいはレクチン等を用いれば
よく、ディップスティック型固相またはウェル型固相の
どちらが第１固相として用いられても、第１固相の表面
に付着される受容体物質は、受容体物質Ａが選択され
る。抗原を測定対象とする場合も、免疫複合体の転移方
向は、ディップスティック型固相からウェル型固相、ま
たはその逆でもよい。各々の転移方向の場合について、
両固相の表面に付着される受容体物質が、互いに入れ替
わることは、上記抗体を測定対象とする場合と同様であ
る。
【００６６】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明をより具体的に
説明する。本実施例では、本発明によるイムノアッセイ
プレートを用いて免疫複合体転移法による抗体の測定を
行い、その際免疫複合体結合面の間の最短距離が１ｍｍ
以下の面積が結合面の５０％以上の場合および５０％未
満の場合で、その測定感度を従来のビーズを用いた場合
と比較した。
説明する。本実施例では、本発明によるイムノアッセイ
プレートを用いて免疫複合体転移法による抗体の測定を
行い、その際免疫複合体結合面の間の最短距離が１ｍｍ
以下の面積が結合面の５０％以上の場合および５０％未
満の場合で、その測定感度を従来のビーズを用いた場合
と比較した。
【００６７】実施例１ 本実施例では、ディップスティック型固相を第１固相、
ウェル型固相を第２固相として免疫複合体転移法を行っ
た。即ち、免疫複合体の転移方向は、ディップスティッ
ク型固相からウェル型固相に向かう方向である。図５
は、本実施例の工程の概略および物質を模式的に示す図
である。同図における、免疫複合体５０を構成する各物
質（測定すべき抗体２０、官能基３１を結合した抗原３
０、標識４１を結合した抗原４０）、ディップスティッ
ク型固相１の表面に付着された受容体物質３（受容体物
質Ａ）、ウェル型固相２の表面に付着された受容体物質
４（受容体物質Ｂ）は以下の通りである。 測定すべき抗体２０；測定すべき抗体を、血清中の
抗ヒトＴ細胞白血病ウィルス−Ｉ抗体（略称；抗ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ抗体）とした。血清検体としては、ゼラチン粒子
凝集キット（セロディア−ＡＴＬＡ、富士レビオ、東
京）にて陽性および陰性を示した健常人血清を用いた。 抗原３０（抗原４０と同じ物質）；上記抗体２０に
結合し、免疫複合体を構成するための抗原として、ＨＴ
ＬＶ−Ｉのｅｎｖ−ｇｐ４６蛋白質のＮ末端より１８８
番目のＰｒｏから２２４番目のＴｈｒまでの部位にＮ末
端Ｃｙｓをつなげたペプチド（略称、Ｃｙｓ−ｅｎｖ−
ｇｐ４６（１８８−２２４））を用いた。 官能基３１；上記抗原３０と結合して免疫複合体を
構成し、第１固相へのトラップに関与する官能基とし
て、２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンを
用いた。 標識４１；上記抗原４０と結合して免疫複合体を構
成し、測定に用いる標識として、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼを用いた。 受容体物質３；本実施例で第１固相となるディップ
スティック型固相上に付着される受容体物質として、ウ
サギ抗（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミ
ン）抗体を用いた。 受容体物質４；本実施例で第２固相となるウェル型
固相上に付着される受容体物質として、ウサギ抗ヒトＩ
ｇＧγ鎖抗体を用いた。
ウェル型固相を第２固相として免疫複合体転移法を行っ
た。即ち、免疫複合体の転移方向は、ディップスティッ
ク型固相からウェル型固相に向かう方向である。図５
は、本実施例の工程の概略および物質を模式的に示す図
である。同図における、免疫複合体５０を構成する各物
質（測定すべき抗体２０、官能基３１を結合した抗原３
０、標識４１を結合した抗原４０）、ディップスティッ
ク型固相１の表面に付着された受容体物質３（受容体物
質Ａ）、ウェル型固相２の表面に付着された受容体物質
４（受容体物質Ｂ）は以下の通りである。 測定すべき抗体２０；測定すべき抗体を、血清中の
抗ヒトＴ細胞白血病ウィルス−Ｉ抗体（略称；抗ＨＴＬ
Ｖ−Ｉ抗体）とした。血清検体としては、ゼラチン粒子
凝集キット（セロディア−ＡＴＬＡ、富士レビオ、東
京）にて陽性および陰性を示した健常人血清を用いた。 抗原３０（抗原４０と同じ物質）；上記抗体２０に
結合し、免疫複合体を構成するための抗原として、ＨＴ
ＬＶ−Ｉのｅｎｖ−ｇｐ４６蛋白質のＮ末端より１８８
番目のＰｒｏから２２４番目のＴｈｒまでの部位にＮ末
端Ｃｙｓをつなげたペプチド（略称、Ｃｙｓ−ｅｎｖ−
ｇｐ４６（１８８−２２４））を用いた。 官能基３１；上記抗原３０と結合して免疫複合体を
構成し、第１固相へのトラップに関与する官能基とし
て、２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンを
用いた。 標識４１；上記抗原４０と結合して免疫複合体を構
成し、測定に用いる標識として、β−Ｄ−ガラクトシダ
ーゼを用いた。 受容体物質３；本実施例で第１固相となるディップ
スティック型固相上に付着される受容体物質として、ウ
サギ抗（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミ
ン）抗体を用いた。 受容体物質４；本実施例で第２固相となるウェル型
固相上に付着される受容体物質として、ウサギ抗ヒトＩ
ｇＧγ鎖抗体を用いた。
【００６８】免疫複合体転移法による本実施例の手順の
概略は次の通りである。 (1) 抗原３０と官能基３１との結合体を形成する。抗原
４０と標識４１との結合体を形成する。免疫複合体５０
を形成する。 (2) ディップスティック型固相上へ免疫複合体５０をト
ラップした後、この固相をトラップされた免疫複合体５
０だけが残るよう洗浄する。（免疫複合体５０のトラッ
プは、必ずしも免疫複合体５０が形成された後である必
要はなく、先に官能基３１がトラップされた後、これに
対して免疫複合体５０が形成されるものでも、これらの
反応が混在するものでもよい。） (3) ディップスティック型固相をウェル型固相内の転移
反応溶液中に挿入し、免疫複合体５０を遊離させ、ウェ
ル型固相上にトラップする。 (4) ウェル型固相上にトラップされた免疫複合体を標識
によって測定する。
概略は次の通りである。 (1) 抗原３０と官能基３１との結合体を形成する。抗原
４０と標識４１との結合体を形成する。免疫複合体５０
を形成する。 (2) ディップスティック型固相上へ免疫複合体５０をト
ラップした後、この固相をトラップされた免疫複合体５
０だけが残るよう洗浄する。（免疫複合体５０のトラッ
プは、必ずしも免疫複合体５０が形成された後である必
要はなく、先に官能基３１がトラップされた後、これに
対して免疫複合体５０が形成されるものでも、これらの
反応が混在するものでもよい。） (3) ディップスティック型固相をウェル型固相内の転移
反応溶液中に挿入し、免疫複合体５０を遊離させ、ウェ
ル型固相上にトラップする。 (4) ウェル型固相上にトラップされた免疫複合体を標識
によって測定する。
【００６９】免疫複合体転移法に用いられる上記各物質
の調整・精製の詳細、および作業手順の詳細は次の通り
である。 〔官能基３１の調製〕ウシ血清アルブミン（フラクショ
ンＶ、ナカライテスク、京都）にＮ−サクシニミジル−
Ｓ−アセチルメルカプトアセテートを用いてチオール基
を導入、続いてＮ−サクシニミジル−６−マレイミドヘ
キサノエートを介してεＮ−２，４−ジニトロフェニル
−Ｌ−リジンを反応させる公知の方法〔河野ら、ジャー
ナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシス
（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．）、第６巻、第１
０５頁（１９９２）〕により２，４−ジニトロフェニル
基を導入した。ウシ血清アルブミン１分子あたりに導入
された２，４−ジニトロフェニル基の数は６個であっ
た。
の調整・精製の詳細、および作業手順の詳細は次の通り
である。 〔官能基３１の調製〕ウシ血清アルブミン（フラクショ
ンＶ、ナカライテスク、京都）にＮ−サクシニミジル−
Ｓ−アセチルメルカプトアセテートを用いてチオール基
を導入、続いてＮ−サクシニミジル−６−マレイミドヘ
キサノエートを介してεＮ−２，４−ジニトロフェニル
−Ｌ−リジンを反応させる公知の方法〔河野ら、ジャー
ナル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシス
（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａｌ．）、第６巻、第１
０５頁（１９９２）〕により２，４−ジニトロフェニル
基を導入した。ウシ血清アルブミン１分子あたりに導入
された２，４−ジニトロフェニル基の数は６個であっ
た。
【００７０】〔抗原３０と官能基３１との結合体の調
製〕２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンに
Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエートを
用いてマレイミド基を導入し、ＨＴＬＶ−ＩのＣｙｓ−
ｅｎｖ−ｇｐ４６（１８８−２２４）と反応させる公知
の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボ
ラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａ
ｌ．）、第６巻、第１０５頁（１９９２）〕により調製
した。
製〕２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミンに
Ｎ−サクシニミジル−６−マレイミドヘキサノエートを
用いてマレイミド基を導入し、ＨＴＬＶ−ＩのＣｙｓ−
ｅｎｖ−ｇｐ４６（１８８−２２４）と反応させる公知
の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・クリニカル・ラボ
ラトリー・アナリシス（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ａｎａ
ｌ．）、第６巻、第１０５頁（１９９２）〕により調製
した。
【００７１】〔抗原４０と標識４１との結合体の調製〕
大腸菌由来のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼにＮ，Ｎ’−ｏ
─フェニレンジマレイミドを用いてマレイミド基を導入
し、ＨＴＬＶ−ＩのＣｙｓ−Ｅｎｖ−ｇｐ４６（１８８
−２２４）と反応させる公知の方法〔河野ら、ジャーナ
ル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシス（前
出）〕により調製した。
大腸菌由来のβ−Ｄ−ガラクトシダーゼにＮ，Ｎ’−ｏ
─フェニレンジマレイミドを用いてマレイミド基を導入
し、ＨＴＬＶ−ＩのＣｙｓ−Ｅｎｖ−ｇｐ４６（１８８
−２２４）と反応させる公知の方法〔河野ら、ジャーナ
ル・オブ・クリニカル・ラボラトリー・アナリシス（前
出）〕により調製した。
【００７２】〔受容体物質３の精製〕ウサギ抗（２，４
−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗体を含む
血清（シバヤギ、群馬）より塩析とイオン交換クロマト
グラフィーを用いる公知の方法〔石川ら、ジャーナル・
オブ・イムノアッセイ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ）、第４巻、第２０９頁（１９８３）〕にてウサギ抗
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン抗体を
精製した。
−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗体を含む
血清（シバヤギ、群馬）より塩析とイオン交換クロマト
グラフィーを用いる公知の方法〔石川ら、ジャーナル・
オブ・イムノアッセイ（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａ
ｙ）、第４巻、第２０９頁（１９８３）〕にてウサギ抗
２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン抗体を
精製した。
【００７３】〔受容体物質３および受容体物質４のアフ
ィニティー精製〕先ず、２，４−ジニトロフェニル−ウ
シ血清アルブミンおよびヒトＩｇＧ（１０ｍｇ）各々
は、ファルマシアの手引書に従ってＣＮＢｒ−活性化セ
ファローズ４Ｂ（１ｇ）に不溶化した。次いで、受容体
物質３であるウサギ抗（２，４−ジニトロフェニル−ウ
シ血清アルブミン）抗体、および、受容体物質４である
ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体を、それぞれ２，４−ジニ
トロフェニル−ウシ血清アルブミンおよびヒトＩｇＧ不
溶化セファローズ４Ｂカラムを用い、ｐＨ２．５で溶出
する公知の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・バイオケ
ミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第１００巻、第
１２４７頁（１９８６）〕により、これらをアフィニテ
ィー精製した。
ィニティー精製〕先ず、２，４−ジニトロフェニル−ウ
シ血清アルブミンおよびヒトＩｇＧ（１０ｍｇ）各々
は、ファルマシアの手引書に従ってＣＮＢｒ−活性化セ
ファローズ４Ｂ（１ｇ）に不溶化した。次いで、受容体
物質３であるウサギ抗（２，４−ジニトロフェニル−ウ
シ血清アルブミン）抗体、および、受容体物質４である
ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体を、それぞれ２，４−ジニ
トロフェニル−ウシ血清アルブミンおよびヒトＩｇＧ不
溶化セファローズ４Ｂカラムを用い、ｐＨ２．５で溶出
する公知の方法〔河野ら、ジャーナル・オブ・バイオケ
ミストリー（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．）、第１００巻、第
１２４７頁（１９８６）〕により、これらをアフィニテ
ィー精製した。
【００７４】〔ディップスティック型固相１上への、受
容体物質３の付着〕直径５ｍｍのポリスチロール樹脂製
の円柱状物（端部形状は長手軸に垂直な平面）を、ウェ
ル型固相に挿入し組み合わせた時に、その端面がウェル
型固相の底から１ｍｍの高さになるような位置を保つよ
うに一方の端を固定した。このスティックを１０ｇ／Ｌ
の非イオン性洗剤ＳＣＡＴ２０Ｘ−ＰＦ（第一工業製
薬、京都）で洗浄した後、上記アフィニティー精製した
ウサギ抗（ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗
体２５ｍｇ／Ｌを含む０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ７．０中に４℃で一晩浸し、物理的吸着によ
り、スティック端面から７．０ｍｍまでの全面に、受容
体物質３をコーティングした。同固相は、使用まで０．
１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／
Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウムを含
む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中、
４℃で保存した。
容体物質３の付着〕直径５ｍｍのポリスチロール樹脂製
の円柱状物（端部形状は長手軸に垂直な平面）を、ウェ
ル型固相に挿入し組み合わせた時に、その端面がウェル
型固相の底から１ｍｍの高さになるような位置を保つよ
うに一方の端を固定した。このスティックを１０ｇ／Ｌ
の非イオン性洗剤ＳＣＡＴ２０Ｘ−ＰＦ（第一工業製
薬、京都）で洗浄した後、上記アフィニティー精製した
ウサギ抗（ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗
体２５ｍｇ／Ｌを含む０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ７．０中に４℃で一晩浸し、物理的吸着によ
り、スティック端面から７．０ｍｍまでの全面に、受容
体物質３をコーティングした。同固相は、使用まで０．
１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／
Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウムを含
む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０中、
４℃で保存した。
【００７５】〔ウェル型固相２上への、受容体物質４の
付着〕アフィニティー精製ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体
５０ｍｇ／Ｌを含む同緩衝液２８０μｌを内径６．６ｍ
ｍの円筒形ウェル型固相（底面形状は平面）にそれぞれ
添加し、４℃で一晩静置して物理的吸着により、底面か
ら８．０ｍｍの高さまでの全面に受容体物質４をコーテ
ィングした。その後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ
塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ
／Ｌアジ化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液、ｐＨ７．０で洗浄後、同緩衝液３００μｌを
添加し使用まで４℃で保存した。
付着〕アフィニティー精製ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体
５０ｍｇ／Ｌを含む同緩衝液２８０μｌを内径６．６ｍ
ｍの円筒形ウェル型固相（底面形状は平面）にそれぞれ
添加し、４℃で一晩静置して物理的吸着により、底面か
ら８．０ｍｍの高さまでの全面に受容体物質４をコーテ
ィングした。その後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ
塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ
／Ｌアジ化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウ
ム緩衝液、ｐＨ７．０で洗浄後、同緩衝液３００μｌを
添加し使用まで４℃で保存した。
【００７６】〔免疫複合体の、ディップスティック型固
相上へのトラップ〕図５（ａ）に示すように、ウェル型
固相２と同一形状のウェル６内に、血清検体、ウサギ非
特異血清、不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−ガラ
クトシダーゼ−ムテイン、ベーリンガー・マイハイム・
ドイツ）、各１００ｆｍｏｌの抗原３０と官能基３１と
の結合体、抗原４０と標識４１との結合体を添加した。
このウェル内に、受容体物質３がコーティングされたデ
ィップスティック型固相を挿入し、先端面から７．０ｍ
ｍまでを液中に浸した状態で固定し、室温で一晩静置し
た。これによって、免疫複合体５０が形成され、これが
ディップスティック型固相上へトラップされた。さら
に、このディップスティック型固相を、トラップされた
免疫複合体５０だけが残るように洗浄した。
相上へのトラップ〕図５（ａ）に示すように、ウェル型
固相２と同一形状のウェル６内に、血清検体、ウサギ非
特異血清、不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ（β−ガラ
クトシダーゼ−ムテイン、ベーリンガー・マイハイム・
ドイツ）、各１００ｆｍｏｌの抗原３０と官能基３１と
の結合体、抗原４０と標識４１との結合体を添加した。
このウェル内に、受容体物質３がコーティングされたデ
ィップスティック型固相を挿入し、先端面から７．０ｍ
ｍまでを液中に浸した状態で固定し、室温で一晩静置し
た。これによって、免疫複合体５０が形成され、これが
ディップスティック型固相上へトラップされた。さら
に、このディップスティック型固相を、トラップされた
免疫複合体５０だけが残るように洗浄した。
【００７７】〔免疫複合体の第１固相から第２固相への
転移〕図５（ｂ）に示すように、受容体物質４がコーテ
ィングされたウェル型固相２内に、１ｍＭεＮ−２，４
−ジニトロフェニル−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリ
ウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アル
ブミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０、１５０μｌ）を
添加し、このウェル型固相２内に、免疫複合体５０が表
面にトラップされたディップスティック型固相１を、各
々の長手軸が同軸となるように挿入した。室温で１時間
静置し、これによって、免疫複合体を遊離させた。この
後、ディップスティック型固相を抜き取り、ウェル型固
相をさらに２時間静置した。これによって免疫複合体５
０は、ウェル型固相２上に抗体部分を介してトラップさ
れた。
転移〕図５（ｂ）に示すように、受容体物質４がコーテ
ィングされたウェル型固相２内に、１ｍＭεＮ−２，４
−ジニトロフェニル−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリ
ウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アル
ブミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍ
リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０、１５０μｌ）を
添加し、このウェル型固相２内に、免疫複合体５０が表
面にトラップされたディップスティック型固相１を、各
々の長手軸が同軸となるように挿入した。室温で１時間
静置し、これによって、免疫複合体を遊離させた。この
後、ディップスティック型固相を抜き取り、ウェル型固
相をさらに２時間静置した。これによって免疫複合体５
０は、ウェル型固相２上に抗体部分を介してトラップさ
れた。
【００７８】〔抗体の測定〕ウェル型固相を洗浄溶液３
００μｌで２回洗浄した。続いて、４−メチルウンベリ
フェリル−β−Ｄ−ガラクトシドを基質とする公知の方
法〔石川ら、ジャーナル・オブ・イムノアッセイ（前
出）〕で、１．５時間反応させ、ウェル型固相の表面に
トラップされた免疫複合体に結合したβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼの活性を分光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津
製作所、京都）を用いて測定した。測定結果として、陽
性検体、陰性検体の各々の蛍光強度を表１に示す。
００μｌで２回洗浄した。続いて、４−メチルウンベリ
フェリル−β−Ｄ−ガラクトシドを基質とする公知の方
法〔石川ら、ジャーナル・オブ・イムノアッセイ（前
出）〕で、１．５時間反応させ、ウェル型固相の表面に
トラップされた免疫複合体に結合したβ−Ｄ−ガラクト
シダーゼの活性を分光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津
製作所、京都）を用いて測定した。測定結果として、陽
性検体、陰性検体の各々の蛍光強度を表１に示す。
【００７９】実施例２ 本実施例では、ウェル型固相を第１固相、ディップステ
ィック型固相を第２固相として、免疫複合体の転移方向
を、実施例１とは逆に、ウェル型固相からディップステ
ィック型固相へ向かうものとした以外は、実施例１と同
様の免疫複合体転移法を行った。両固相の材質、形状、
反応に係る各物質およびその形成方法もまた、実施例１
と同様である。ただし、ディップスティック型固相の表
面にコーティングによって付着された受容体物質と、ウ
ェル型固相の表面に付着された受容体物質は、実施例１
の場合と逆であって、ディップスティック型固相にはウ
サギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体、ウェル型固相にはウサギ抗
（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗
体が付着されている。
ィック型固相を第２固相として、免疫複合体の転移方向
を、実施例１とは逆に、ウェル型固相からディップステ
ィック型固相へ向かうものとした以外は、実施例１と同
様の免疫複合体転移法を行った。両固相の材質、形状、
反応に係る各物質およびその形成方法もまた、実施例１
と同様である。ただし、ディップスティック型固相の表
面にコーティングによって付着された受容体物質と、ウ
ェル型固相の表面に付着された受容体物質は、実施例１
の場合と逆であって、ディップスティック型固相にはウ
サギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体、ウェル型固相にはウサギ抗
（２，４−ジニトロフェニル−ウシ血清アルブミン）抗
体が付着されている。
【００８０】〔免疫複合体の、ウェル型固相上へのトラ
ップ〕ウェル型固相に、血清検体、ウサギ非特異血清、
不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、各１００ｆｍｏｌの
抗原と官能基との結合体、抗原と標識との結合体を添加
し、室温で一晩静置した。これによって、免疫複合体５
０が形成され、これがウェル型固相上へトラップされ
た。さらに、このウェル型固相を、トラップされた免疫
複合体５０だけが残るように洗浄した。
ップ〕ウェル型固相に、血清検体、ウサギ非特異血清、
不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、各１００ｆｍｏｌの
抗原と官能基との結合体、抗原と標識との結合体を添加
し、室温で一晩静置した。これによって、免疫複合体５
０が形成され、これがウェル型固相上へトラップされ
た。さらに、このウェル型固相を、トラップされた免疫
複合体５０だけが残るように洗浄した。
【００８１】〔免疫複合体の、第１固相から第２固相へ
の転移〕このウェル型固相に、１ｍＭεＮ−２，４−ジ
ニトロフェニル−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリウ
ム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブ
ミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０、１５０μｌ）を添
加して、免疫複合体を遊離させた。このウェル型固相内
に、受容体物質がコーティングされたディップスティッ
ク型固相を挿入し、室温で３時間静置した。これによっ
て、免疫複合体は、ディップスティック型固相上に抗体
部分を介してトラップされた。
の転移〕このウェル型固相に、１ｍＭεＮ−２，４−ジ
ニトロフェニル−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリウ
ム、１ｍＭ塩化マグネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブ
ミン、１ｇ／Ｌアジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍリ
ン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．０、１５０μｌ）を添
加して、免疫複合体を遊離させた。このウェル型固相内
に、受容体物質がコーティングされたディップスティッ
ク型固相を挿入し、室温で３時間静置した。これによっ
て、免疫複合体は、ディップスティック型固相上に抗体
部分を介してトラップされた。
【００８２】〔抗体の測定〕ディップスティック型固相
を洗浄液で洗浄した。続いてこれを、ブラックマイクロ
プレート（蛋白非吸着、大日本製薬）に挿入し、実施例
１と同様の方法によって、ディップスティック型固相の
表面にトラップされた免疫複合体に結合したβ−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼの活性を分光蛍光光度計にて測定した。
測定結果として、陽性検体、陰性検体の各々の蛍光強度
を表１に示す。
を洗浄液で洗浄した。続いてこれを、ブラックマイクロ
プレート（蛋白非吸着、大日本製薬）に挿入し、実施例
１と同様の方法によって、ディップスティック型固相の
表面にトラップされた免疫複合体に結合したβ−Ｄ−ガ
ラクトシダーゼの活性を分光蛍光光度計にて測定した。
測定結果として、陽性検体、陰性検体の各々の蛍光強度
を表１に示す。
【００８３】実施例３ 本実施例では、実施例１において、ディップスティック
型固相とウェル型固相との各免疫複合体結合面間の大部
分の面積の最短距離を１ｍｍより大きく設定した場合
に、どの程度の感度が示されるかを調べた。本実施例
は、次の２点を除いては、実施例１と全て同様である。 (1) ディップスティック型固相の形状を、図２（ｃ）に
示すように、円柱の先端部に球体部分を設けた形状と
し、この球体部分の表面に受容体物質をコーティング
し、免疫複合体結合面とした。 (2) ディップスティック型固相の免疫複合体結合面と、
ウェル型固相の免疫複合体結合面との面間の大部分の面
積の最短距離が１ｍｍを越えるように設定した。 ディップスティック型固相の仕様は、材料をポリスチレ
ンとし、形状は、球体部分を直径５ｍｍ、円柱部分を直
径３ｍｍとした。また、ウェル型固相の内径寸法を６．
６ｍｍとした。さらに、ディップスティック型固相をウ
ェル型固相に挿入し組み合わせたときの、ウェル型固相
の底面からディップスティック型固相先端部までの距離
が１．０ｍｍとなるように設定した。
型固相とウェル型固相との各免疫複合体結合面間の大部
分の面積の最短距離を１ｍｍより大きく設定した場合
に、どの程度の感度が示されるかを調べた。本実施例
は、次の２点を除いては、実施例１と全て同様である。 (1) ディップスティック型固相の形状を、図２（ｃ）に
示すように、円柱の先端部に球体部分を設けた形状と
し、この球体部分の表面に受容体物質をコーティング
し、免疫複合体結合面とした。 (2) ディップスティック型固相の免疫複合体結合面と、
ウェル型固相の免疫複合体結合面との面間の大部分の面
積の最短距離が１ｍｍを越えるように設定した。 ディップスティック型固相の仕様は、材料をポリスチレ
ンとし、形状は、球体部分を直径５ｍｍ、円柱部分を直
径３ｍｍとした。また、ウェル型固相の内径寸法を６．
６ｍｍとした。さらに、ディップスティック型固相をウ
ェル型固相に挿入し組み合わせたときの、ウェル型固相
の底面からディップスティック型固相先端部までの距離
が１．０ｍｍとなるように設定した。
【００８４】〔抗体の測定〕実施例１と同様、免疫複合
体の転移方向をディップスティック型固相からウェル型
固相に向かう方向として、免疫複合体転移法による抗体
の測定を行った。ただし、蛍光強度は、蛍光マイクロプ
レートリーダー（Fluoroskan II 、Labsystems、フィン
ランド）にて測定した。陽性検体、陰性検体それぞれの
蛍光強度を表１に示す。
体の転移方向をディップスティック型固相からウェル型
固相に向かう方向として、免疫複合体転移法による抗体
の測定を行った。ただし、蛍光強度は、蛍光マイクロプ
レートリーダー（Fluoroskan II 、Labsystems、フィン
ランド）にて測定した。陽性検体、陰性検体それぞれの
蛍光強度を表１に示す。
【００８５】実施例４ 本実施例では、実施例２において、ディップスティック
型固相とウェル型固相の各々の免疫複合体結合面の間の
大部分の面積の最短距離を１ｍｍより大きく設定した場
合に、どの程度の感度、信号値が示されるかを調べた。
また、ディップスティック型固相とウェル型固相の材料
・形状は、実施例３と同様である。
型固相とウェル型固相の各々の免疫複合体結合面の間の
大部分の面積の最短距離を１ｍｍより大きく設定した場
合に、どの程度の感度、信号値が示されるかを調べた。
また、ディップスティック型固相とウェル型固相の材料
・形状は、実施例３と同様である。
【００８６】〔抗体の測定〕実施例２と同様、免疫複合
体の転移方向を、ウェル型固相からディップスティック
型固相へ向かって転移するものとして、免疫複合体転移
法による抗体の測定を行った。陽性検体、陰性検体それ
ぞれの蛍光強度を表１に示す。
体の転移方向を、ウェル型固相からディップスティック
型固相へ向かって転移するものとして、免疫複合体転移
法による抗体の測定を行った。陽性検体、陰性検体それ
ぞれの蛍光強度を表１に示す。
【００８７】比較例１ 本比較例では、従来における免疫複合体転移法の感度お
よびその手間を調べるために、第１固相、第２固相とし
て、共に球状のビーズを用いた。反応に係る各物質およ
びその形成方法は、実施例１と同様である。ビーズの仕
様は、第１固相用を青色、第２固相用を白色とし、共
に、直径３．２ｍｍ（球体）のポリスチレン製（イムノ
ケミカル、岡山）のものを用いた。各々のビーズ表面へ
の受容体物質のコーティング法も実施例１と同様であっ
て、第１固相のビーズにはウサギ抗（２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン）抗体が、第２固相のビ
ーズにはウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体がコーティングさ
れている。
よびその手間を調べるために、第１固相、第２固相とし
て、共に球状のビーズを用いた。反応に係る各物質およ
びその形成方法は、実施例１と同様である。ビーズの仕
様は、第１固相用を青色、第２固相用を白色とし、共
に、直径３．２ｍｍ（球体）のポリスチレン製（イムノ
ケミカル、岡山）のものを用いた。各々のビーズ表面へ
の受容体物質のコーティング法も実施例１と同様であっ
て、第１固相のビーズにはウサギ抗（２，４−ジニトロ
フェニル−ウシ血清アルブミン）抗体が、第２固相のビ
ーズにはウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体がコーティングさ
れている。
【００８８】〔免疫複合体の、第１固相のビーズ上への
トラップ〕試験管に、血清検体、ウサギ非特異兎血清、
不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、抗原と官能基との結
合体、抗原と標識との結合体を添加した。この試験管
に、上記第１固相のビーズをピンセットで２個挿入し、
室温で一晩静置した。これによって、免疫複合体が形成
され、第１固相のビーズ上へトラップされた。さらに、
この第１固相のビーズ２個を、トラップされた免疫複合
体だけが残るように洗浄した。
トラップ〕試験管に、血清検体、ウサギ非特異兎血清、
不活性β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、抗原と官能基との結
合体、抗原と標識との結合体を添加した。この試験管
に、上記第１固相のビーズをピンセットで２個挿入し、
室温で一晩静置した。これによって、免疫複合体が形成
され、第１固相のビーズ上へトラップされた。さらに、
この第１固相のビーズ２個を、トラップされた免疫複合
体だけが残るように洗浄した。
【００８９】〔免疫複合体の、第１固相から第２固相へ
の転移〕この第１固相のビーズ２個を、第２固相のビー
ズ２個と共に、１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル
−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マ
グネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ／Ｌア
ジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．０、１７０μｌ）が保持された別の試験
管にピンセットで挿入し、１時間インキュベートした。
その後、第１固相のビーズ２個をピンセットで取り除
き、残りを引き続き２時間インキュベートした。これに
よって、免疫複合体は、第１固相のビーズから遊離し、
第２固相のビーズ上に抗体部分を介してトラップされ
た。
の転移〕この第１固相のビーズ２個を、第２固相のビー
ズ２個と共に、１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル
−Ｌ−リジン、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マ
グネシウム、１ｇ／Ｌウシ血清アルブミン、１ｇ／Ｌア
ジ化ナトリウム、を含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩
衝液（ｐＨ７．０、１７０μｌ）が保持された別の試験
管にピンセットで挿入し、１時間インキュベートした。
その後、第１固相のビーズ２個をピンセットで取り除
き、残りを引き続き２時間インキュベートした。これに
よって、免疫複合体は、第１固相のビーズから遊離し、
第２固相のビーズ上に抗体部分を介してトラップされ
た。
【００９０】〔抗体の測定〕第２固相のビーズを洗浄液
２ｍｌで２回洗浄した。続いて、このビーズ２個を新し
い試験管にピンセットで移し、実施例１と同様の方法に
よって、第２固相のビーズの表面にトラップされた免疫
複合体に結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を分
光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津製作所、京都）を用
いて測定した。測定結果として、陽性検体、陰性検体の
各々の蛍光強度を表１に示す。
２ｍｌで２回洗浄した。続いて、このビーズ２個を新し
い試験管にピンセットで移し、実施例１と同様の方法に
よって、第２固相のビーズの表面にトラップされた免疫
複合体に結合したβ−Ｄ−ガラクトシダーゼの活性を分
光蛍光光度計（ＲＦ−５１０、島津製作所、京都）を用
いて測定した。測定結果として、陽性検体、陰性検体の
各々の蛍光強度を表１に示す。
【００９１】
【表１】
【００９２】上記実施例１〜４および比較例１によっ
て、以下の２点が確認できた。 (1) 工程および操作上における手間の簡素化 実施例１〜４は、ビーズを用いた比較例１に対して、ピ
ンセットの使用に係る操作や洗浄等の手間や、ビーズの
識別などの手間もなく、極めて容易に免疫複合体転移法
を遂行できた。 (2) 固相間の距離による測定感度の変化 実施例１、２の結果と、実施例３、４の結果とを比較す
ることによって、表１でも明らかなように、ディップス
ティック型固相とウェル型固相の各免疫複合体結合面の
５０％以上の面間の距離を１ｍｍ以下に近接させた場合
の構成が、大部分の面間の距離を１ｍｍを越えるように
離した構成に対して、感度の向上を示すことが別った。
これによって、免疫複合体の転移において、対面する固
相間の距離を近接させることの重要性が確認できた。
て、以下の２点が確認できた。 (1) 工程および操作上における手間の簡素化 実施例１〜４は、ビーズを用いた比較例１に対して、ピ
ンセットの使用に係る操作や洗浄等の手間や、ビーズの
識別などの手間もなく、極めて容易に免疫複合体転移法
を遂行できた。 (2) 固相間の距離による測定感度の変化 実施例１、２の結果と、実施例３、４の結果とを比較す
ることによって、表１でも明らかなように、ディップス
ティック型固相とウェル型固相の各免疫複合体結合面の
５０％以上の面間の距離を１ｍｍ以下に近接させた場合
の構成が、大部分の面間の距離を１ｍｍを越えるように
離した構成に対して、感度の向上を示すことが別った。
これによって、免疫複合体の転移において、対面する固
相間の距離を近接させることの重要性が確認できた。
【００９３】実施例５ 本実施例では、図７に示した態様のディップスティック
型固相とウェル型固相とを組合せて、抗ＨＴＬＶ−Ｉ抗
体の測定を行った。操作は、以下に記載した以外は、実
施例１と同様の免疫複合体転移法を行った。
型固相とウェル型固相とを組合せて、抗ＨＴＬＶ−Ｉ抗
体の測定を行った。操作は、以下に記載した以外は、実
施例１と同様の免疫複合体転移法を行った。
【００９４】〔ディップスティック型固相１上への、受
容体物質３の付着〕３μｇ／ｍｌのアフィニティー精製
ウサギ抗２，４−ジニトロフェリル・ウシ血清アルブミ
ン抗体と０．１％アジ化ナトリウムを含む０．１Ｍリン
酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０、１５０μｌを加えた
通常のマイクロプレート（ファルコン３０７２型、ベク
トン・ディッキンソン社、カリフォルニア州）のウェル
内に図７に示すディップスティック型固相を入れて一夜
静置した後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグ
ネシウム、０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％アジ
化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ７．０、２００μｌを加えた通常のマイクロプ
レートウェル内に浸して使用まで保存した。
容体物質３の付着〕３μｇ／ｍｌのアフィニティー精製
ウサギ抗２，４−ジニトロフェリル・ウシ血清アルブミ
ン抗体と０．１％アジ化ナトリウムを含む０．１Ｍリン
酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０、１５０μｌを加えた
通常のマイクロプレート（ファルコン３０７２型、ベク
トン・ディッキンソン社、カリフォルニア州）のウェル
内に図７に示すディップスティック型固相を入れて一夜
静置した後、０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグ
ネシウム、０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％アジ
化ナトリウムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝
液、ｐＨ７．０、２００μｌを加えた通常のマイクロプ
レートウェル内に浸して使用まで保存した。
【００９５】〔ウェル型固相２上への、受容体物質４の
付着〕黒色マイクロプレート（Ｈタイプ、住友ベークラ
イト、東京）のウェルに、５μｇ／ｍｌのアフィニティ
ー精製ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体と０．１％アジ化ナ
トリウムを含む０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ
７．０、２８０μｌを加え一夜静置した後、使用まで
０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、
０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％アジ化ナトリウ
ムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．
０を４００μｌ加えて保存した。
付着〕黒色マイクロプレート（Ｈタイプ、住友ベークラ
イト、東京）のウェルに、５μｇ／ｍｌのアフィニティ
ー精製ウサギ抗ヒトＩｇＧγ鎖抗体と０．１％アジ化ナ
トリウムを含む０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ
７．０、２８０μｌを加え一夜静置した後、使用まで
０．１Ｍ塩化ナトリウム、１ｍＭ塩化マグネシウム、
０．１％ウシ血清アルブミン、０．１％アジ化ナトリウ
ムを含む０．０１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．
０を４００μｌ加えて保存した。
【００９６】〔免疫複合体の、ディップスティック型固
相へのトラップ〕実施例１と同様、非検血清、不活性γ
−Ｄ−ガラクトシダーゼ、非特異ウサギ、各１００ｆｍ
ｏｌの抗原３０と官能基３１との結合体、抗原４０と標
識４１の結合体を通常のマイクロプレートウェルに添加
した（総容量１５０μｌ）。３０分間インキュベートし
た後、これに受容体物質３がコーティングされたディッ
プスティック型固相を挿入し、２時間インキュベートし
た。これにより、免疫複合体５０が形成され、これがデ
ィップスティック型固相へトラップされた。さらに、こ
のディップスティック型固相を、トラップされた免疫複
合体５０だけが残るように洗浄した。
相へのトラップ〕実施例１と同様、非検血清、不活性γ
−Ｄ−ガラクトシダーゼ、非特異ウサギ、各１００ｆｍ
ｏｌの抗原３０と官能基３１との結合体、抗原４０と標
識４１の結合体を通常のマイクロプレートウェルに添加
した（総容量１５０μｌ）。３０分間インキュベートし
た後、これに受容体物質３がコーティングされたディッ
プスティック型固相を挿入し、２時間インキュベートし
た。これにより、免疫複合体５０が形成され、これがデ
ィップスティック型固相へトラップされた。さらに、こ
のディップスティック型固相を、トラップされた免疫複
合体５０だけが残るように洗浄した。
【００９７】〔免疫複合体の第１固相から第２固相への
転移〕受容体物質４がコーティングされたウェル型固相
２に１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジ
ンを含む溶液を１５０μｌ加え、これに免疫複合体５０
が表面にトラップされたディップスティック型固相１を
挿入して、２時間インキュベートした。これにより免疫
複合体５０は、ウェル型固相２上に抗体部分を介してト
ラップされた。
転移〕受容体物質４がコーティングされたウェル型固相
２に１ｍＭεＮ−２，４−ジニトロフェニル−Ｌ−リジ
ンを含む溶液を１５０μｌ加え、これに免疫複合体５０
が表面にトラップされたディップスティック型固相１を
挿入して、２時間インキュベートした。これにより免疫
複合体５０は、ウェル型固相２上に抗体部分を介してト
ラップされた。
【００９８】〔抗体の測定〕ウェル型固相を洗浄した
後、４−メチルウンベリフェリル−γ−Ｄ−ガラクトシ
ドを基質として１時間反応させた。反応後、０．１Ｍグ
リシン−水酸化ナトリウム緩衝液、ｐＨ１０．３、５０
μｌと８Ｍ水酸化ナトリウム３μｌを加えて、１５分ほ
ど静置後、実施例３、４と同様に蛍光マイクロプレート
リーダーで蛍光強度を測定した。以上、全ての操作は、
室温で行った。陽性検体、陰性検体それぞれの蛍光強度
を表２に示す。
後、４−メチルウンベリフェリル−γ−Ｄ−ガラクトシ
ドを基質として１時間反応させた。反応後、０．１Ｍグ
リシン−水酸化ナトリウム緩衝液、ｐＨ１０．３、５０
μｌと８Ｍ水酸化ナトリウム３μｌを加えて、１５分ほ
ど静置後、実施例３、４と同様に蛍光マイクロプレート
リーダーで蛍光強度を測定した。以上、全ての操作は、
室温で行った。陽性検体、陰性検体それぞれの蛍光強度
を表２に示す。
【００９９】比較例２ 本比較例では、比較例１と同様の実験を行った。ただ
し、各工程のインキュベーション時間等の反応条件は上
記実施例５と全く同じ条件で行った。陽性検体、陰性検
体それぞれの蛍光強度を表２に示す。
し、各工程のインキュベーション時間等の反応条件は上
記実施例５と全く同じ条件で行った。陽性検体、陰性検
体それぞれの蛍光強度を表２に示す。
【０１００】
【表２】
【０１０１】
【発明の効果】免疫複合体転移法において用いられる２
種類の固相を、各々、受容体物質がコーティングされた
ディップスティック型固相とウェル型固相の組み合わせ
とすることにより、従来のように２種類のビーズを用い
ていたときと比べて、非常に操作が簡便になり、さら
に、両固相間の距離を１ｍｍ以下に近接させることによ
って転移効率が向上し、高感度化が達成できた。また、
上記説明のように、ディップスティック型固相に対して
くびれや突起部を設けることによって、免疫複合体転移
法反応をより容易で正確に行なうことが可能となる。
種類の固相を、各々、受容体物質がコーティングされた
ディップスティック型固相とウェル型固相の組み合わせ
とすることにより、従来のように２種類のビーズを用い
ていたときと比べて、非常に操作が簡便になり、さら
に、両固相間の距離を１ｍｍ以下に近接させることによ
って転移効率が向上し、高感度化が達成できた。また、
上記説明のように、ディップスティック型固相に対して
くびれや突起部を設けることによって、免疫複合体転移
法反応をより容易で正確に行なうことが可能となる。
【図１】本発明の基本的な構成を模式的に示す断面図で
ある。
ある。
【図２】本発明におけるディップスティック型固相の形
状の例を示す図である。
状の例を示す図である。
【図３】本発明におけるウェル型固相の形状の例を示す
図である。
図である。
【図４】本発明の好ましい態様の一例を模式的に示す図
である。
である。
【図５】本発明のイムノアッセイプレートを用いた免疫
複合体転移法による抗体検査工程の一例を模式的に示す
図である。
複合体転移法による抗体検査工程の一例を模式的に示す
図である。
【図６】ディップスティック型固相の好ましい態様の一
例を示す図である。
例を示す図である。
【図７】ディップスティック型固相が複数である場合の
好ましい態様の一例を示す図である。
好ましい態様の一例を示す図である。
１ ディップスティック型固相 ２ ウェル型固相 ３ 受容体物質 ４ 受容体物質 ５ 転移反応溶液
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 田中 聡 大阪府茨木市大池２丁目29−７ 住友化学 友徳寮
Claims (15)
- 【請求項１】 ウェル型固相とこれに挿入可能なディッ
プスティック型固相とを有し、ディップスティック型固
相の表面には下記の（Ａ）または（Ｂ）の物質のうち一
方の物質が付着され、ウェル型固相の表面には他方の物
質が付着され、これらの固相が、免疫複合体転移イムノ
アッセイにおいて用いられる一対の固相として用いられ
るものであることを特徴とする免疫複合体転移イムノア
ッセイ用のイムノアッセイプレート。 （Ａ）：被検物質と特異的に免疫複合体を形成する物質
に予め導入された官能基と、特異的に結合する反応基を
有する物質。 （Ｂ）：免疫複合体中の被検物質、被検物質と特異的に
免疫複合体を形成する物質、または該物質に予め導入さ
れた官能基、と特異的に結合しうる反応基を有する物
質。 ただし、（Ａ）の反応基に結合する部位は（Ｂ）の反応
基には結合せず、（Ｂ）の反応基に結合する部位は
（Ａ）の反応基には結合しないものである。 - 【請求項２】 ディップスティック型固相の表面に
（Ａ）の物質が付着され、ウェル型固相の表面に（Ｂ）
の物質が付着され、免疫複合体転移イムノアッセイにお
ける測定目標を、免疫複合体中の抗体とする請求項１記
載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項３】 ディップスティック型固相とウェル型固
相との関係が、ディップスティック型固相をウェル型固
相内に挿入し組み合わせた時、ディップスティック型固
相の免疫複合体結合面の５０％以上が、ウェル型固相の
免疫複合体結合面に対して、面間の最短距離において１
ｍｍ以下に近接する構成である請求項１または２記載の
イムノアッセイプレート。 - 【請求項４】 ディップスティック型固相および／また
はウェル型固相が、蛋白吸着量の増大する表面状態とな
るように表面処理を施されたものである請求項１または
２記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項５】 ウェル型固相および／またはディップス
ティック型固相の材料がポリスチレンである請求項１ま
たは２記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項６】 被検物質と特異的に免疫複合体を形成す
る物質に予め導入された官能基がハプテンであり、
（Ａ）の物質がハプテン抗体であり、このハプテン抗体
が、ジニトロフェニル抗体、または、モノニトロフェニ
ル抗体、または、トリニトロフェニル抗体である請求項
１または２記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項７】 ディップスティック型固相の免疫複合体
結合面となる部分の形状が円柱状であって、その先端形
状が、先端方向に向かって凸の円錐状である請求項１〜
６記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項８】 ディップスティック型固相が、転移反応
溶液に浸漬される部分よりも根元側に、ウェル型固相と
の間に生じる転移反応溶液の毛管現象を抑制し得るくび
れを有するものである請求項１〜７記載のイムノアッセ
イプレート。 - 【請求項９】 ウェル型固相の免疫複合体結合面となる
部分の形状、およびディップスティック型固相の免疫複
合体結合面となる部分の基本形状が、共に円柱状であっ
て、ディップスティック型固相の免疫複合体結合面とな
る円柱状の部分の胴体面に、高さ１ｍｍ以下の突起部が
１以上設けられたものである請求項１〜８記載のイムノ
アッセイプレート。 - 【請求項１０】 突起部の形状が、円柱状部分の胴体面
の円周方向に対しては突起状を呈する形状であって、円
柱状部分の胴体面の長手軸方向に対しては、長手軸方向
に沿って延伸する稜線を呈する形状である請求項９記載
のイムノアッセイプレート。 - 【請求項１１】 ウェル型固相が、基板に所定の配列で
複数個設けられたものであり、ディップスティック型固
相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設けられ
たものである請求項１〜１０記載のイムノアッセイプレ
ート。 - 【請求項１２】 ウェル型固相が、基板に所定の配列で
３以上設けられたものであり、ディップスティック型固
相が、ウェル型固相と同一の配列で他の基板に設けられ
たものであり、突起部が１つのディップスティック型固
相につき１つだけ設けられるものであって、突起部を設
けるために設定される下記（Ｃ）の位置の全てが、各突
起部のいずれかによって必ず１以上対応されるものであ
る請求項９または１０記載のイムノアッセイプレート。 （Ｃ）：ディップスティック型固相の胴体面の円周方向
に３カ所以上設定される位置であって、各位置間の間隔
が、これらの各位置全てに突起部を設けたとき、ディッ
プスティック型固相の胴体面がウェル型固相に接触でき
ないように設定された間隔である位置。 - 【請求項１３】 上記（Ｃ）の位置が、ディップスティ
ック型固相の胴体面の円周方向に４カ所設定される位置
であって、それらの位置の間の４つの間隔が全て等しい
ものである請求項１２記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項１４】 ウェル型固相と同一形状のウェルが該
ウェル型固相と同一の配列でその他の基板に設けられて
なるものが、反応に必要な溶液を保持するための容器と
して１以上加えられ、この１以上のウェルとディップス
ティック型固相とウェル型固相とが１組となったもので
ある請求項１１〜１３記載のイムノアッセイプレート。 - 【請求項１５】 請求項１〜１４記載のイムノアッセイ
プレートを用いる免疫複合体転移イムノアッセイであっ
て、被検体溶液中の免疫複合体をディップスティック型
固相またはウェル型固相のうちの一方にトラップし、デ
ィップスティック型固相をウェル型固相内に挿入し、ウ
ェル型固相内の液相中に免疫複合体を遊離させ、この免
疫複合体を、ディップスティック型固相またはウェル型
固相のうちの他方にトラップし、標識によって免疫複合
体中の抗原または抗体を測定することを特徴とする免疫
複合体転移イムノアッセイ。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7223696A JPH08178926A (ja) | 1994-10-25 | 1995-08-31 | イムノアッセイプレートおよびその用途 |
| CA002161301A CA2161301A1 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-24 | Immunoassay plate and use thereof |
| DE69519972T DE69519972T2 (de) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Testplatte für Immunoassay |
| AT95116778T ATE198939T1 (de) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Testplatte für immunoassay |
| EP95116778A EP0709678B1 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Immunoassay plate |
| US08/548,128 US5888834A (en) | 1994-10-25 | 1995-10-25 | Immunoassay plate and use thereof |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26058894 | 1994-10-25 | ||
| JP6-260588 | 1994-10-25 | ||
| JP7223696A JPH08178926A (ja) | 1994-10-25 | 1995-08-31 | イムノアッセイプレートおよびその用途 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08178926A true JPH08178926A (ja) | 1996-07-12 |
Family
ID=26525633
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7223696A Pending JPH08178926A (ja) | 1994-10-25 | 1995-08-31 | イムノアッセイプレートおよびその用途 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5888834A (ja) |
| EP (1) | EP0709678B1 (ja) |
| JP (1) | JPH08178926A (ja) |
| AT (1) | ATE198939T1 (ja) |
| CA (1) | CA2161301A1 (ja) |
| DE (1) | DE69519972T2 (ja) |
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