JPH0820440B2 - 血液凝固促進剤 - Google Patents
血液凝固促進剤Info
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- JPH0820440B2 JPH0820440B2 JP62112691A JP11269187A JPH0820440B2 JP H0820440 B2 JPH0820440 B2 JP H0820440B2 JP 62112691 A JP62112691 A JP 62112691A JP 11269187 A JP11269187 A JP 11269187A JP H0820440 B2 JPH0820440 B2 JP H0820440B2
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は血液凝固促進剤，特にヘパリン投与を受けて
いる患者から得られる血液検体の凝固を促進する血液凝
固促進剤に関する。
いる患者から得られる血液検体の凝固を促進する血液凝
固促進剤に関する。
（従来の技術） 検査技術の目覚ましい進歩とあいまって血清生化学検
査，血清免疫学検査，血球検査などの血液検査が広く普
及し，病気予防や早期診断に役立っている。血液検査の
多くは血清検査であり，その検査に要する血清は，通
常，血液検査用容器に採取した血液を凝固させた後，遠
心分離によって，比重の異なる血餅（フィブリンと血球
が混合したゲル様塊状物）から分離し，ピペットを用い
て，あるいはデカンテーションにより採取している。
査，血清免疫学検査，血球検査などの血液検査が広く普
及し，病気予防や早期診断に役立っている。血液検査の
多くは血清検査であり，その検査に要する血清は，通
常，血液検査用容器に採取した血液を凝固させた後，遠
心分離によって，比重の異なる血餅（フィブリンと血球
が混合したゲル様塊状物）から分離し，ピペットを用い
て，あるいはデカンテーションにより採取している。
被験者から採取された血液が強固するには比較的長時
間を必要とする。例えば，血液凝固時間が比較的短いと
されるガラス製検査容器を用いても血液が凝固するまで
に40〜60分を必要とし，合成樹脂製検査容器を用いる
と，実に４時間以上の放置時間が必要となる。そのた
め，検査に必要な血清を迅速に確保できないという欠点
を有する。これは，特に緊急に検査を実施する必要のあ
る場合に問題となる。
間を必要とする。例えば，血液凝固時間が比較的短いと
されるガラス製検査容器を用いても血液が凝固するまで
に40〜60分を必要とし，合成樹脂製検査容器を用いる
と，実に４時間以上の放置時間が必要となる。そのた
め，検査に必要な血清を迅速に確保できないという欠点
を有する。これは，特に緊急に検査を実施する必要のあ
る場合に問題となる。
このように，従来の血清分取法によれば，血液凝固に
長時間を要するという問題のほか，凝固した全血を遠心
分離にかけて分離するときに血清と血餅とが良好に分離
しにくいという問題もある。分離状態が悪いと，血清部
分をピペットで吸い上げる場合および／もしくはデカン
テーションを行う場合に，たとえ細心の注意を払って
も，赤血球の混入が避けられない。その結果，臨床検査
結果に悪影響をおよぼしたり，再度遠心分離する必要を
生じる。
長時間を要するという問題のほか，凝固した全血を遠心
分離にかけて分離するときに血清と血餅とが良好に分離
しにくいという問題もある。分離状態が悪いと，血清部
分をピペットで吸い上げる場合および／もしくはデカン
テーションを行う場合に，たとえ細心の注意を払って
も，赤血球の混入が避けられない。その結果，臨床検査
結果に悪影響をおよぼしたり，再度遠心分離する必要を
生じる。
人工透析を受けている患者や血栓症患者の血液検体を
あつかう場合は，さらに，別の問題が生じる。このよう
な患者は，血栓防止のためにヘパリン投与が行われるた
め，血液10mlあたり１〜20単位のヘパリンが存在する。
このヘパリンは，血液中のアンチトロンビンIIIと結合
して，トロンビンの作用を著しく阻害する。さらに，第
XII因子などの血液凝固因子の作用をも阻害するといわ
れている。そのため，フィブリノーゲンのフィブリンへ
の転化が起こらず，その結果，血液が凝固しない。それ
ゆえ，血清の分取が困難となる。
あつかう場合は，さらに，別の問題が生じる。このよう
な患者は，血栓防止のためにヘパリン投与が行われるた
め，血液10mlあたり１〜20単位のヘパリンが存在する。
このヘパリンは，血液中のアンチトロンビンIIIと結合
して，トロンビンの作用を著しく阻害する。さらに，第
XII因子などの血液凝固因子の作用をも阻害するといわ
れている。そのため，フィブリノーゲンのフィブリンへ
の転化が起こらず，その結果，血液が凝固しない。それ
ゆえ，血清の分取が困難となる。
これらの問題を解消するため，発明者は，（ａ）下記
一般式（Ｉ）で示され，かつ，該式中の隣接するカルボ
ニル基が実質的に同一平面上に存在する環式有機化合物
と（ｂ）アミン塩および／または，第４級窒素を有する
有機化合物とを含有する血液凝固促進剤を提案した（特
開昭60−27858号公報）。
一般式（Ｉ）で示され，かつ，該式中の隣接するカルボ
ニル基が実質的に同一平面上に存在する環式有機化合物
と（ｂ）アミン塩および／または，第４級窒素を有する
有機化合物とを含有する血液凝固促進剤を提案した（特
開昭60−27858号公報）。
（ここで,Aは環式化合物の残基を示す）。
（Ｉ）式で示される化合物としては，例えば，没食子
酸アルキルエステル酸化物，エラジン酸酸化物などが挙
げられる。アミン塩および／または第４級窒素を有する
有機化合物としてはアルキルアミン塩酸塩などが用いら
れる。これらの化合物を含有する血液凝固促進剤を用い
ると，含有される上記アミン塩などがヘパリンを吸着・
中和して不活性化し，かつ（Ｉ）式で示される化合物が
血液中の血液凝固第XII因子を活性化して短時間で血液
を凝固させることができる。しかし，血液凝固後，時間
が経過すると血漿中に存在する分解酵素の作用により，
フィブリンの凝固塊が溶解され始める。そのため，凝固
後の経時的な安定性についての問題点がある。
酸アルキルエステル酸化物，エラジン酸酸化物などが挙
げられる。アミン塩および／または第４級窒素を有する
有機化合物としてはアルキルアミン塩酸塩などが用いら
れる。これらの化合物を含有する血液凝固促進剤を用い
ると，含有される上記アミン塩などがヘパリンを吸着・
中和して不活性化し，かつ（Ｉ）式で示される化合物が
血液中の血液凝固第XII因子を活性化して短時間で血液
を凝固させることができる。しかし，血液凝固後，時間
が経過すると血漿中に存在する分解酵素の作用により，
フィブリンの凝固塊が溶解され始める。そのため，凝固
後の経時的な安定性についての問題点がある。
（発明が解決しようとする問題点） 発明者は上記血液凝固促進剤をさらに検討し，ヘパリ
ンを含有しない血液のみならず，ヘパリンを含有する血
液をも速やかに凝固させ得，かつ凝固後の安定性の高い
血液凝固促進剤の開発を試みた。本発明の目的は，ヘパ
リン含有の有無にかかわらず血液を速やかに凝固させ
得，血清分離性がよく，かつ凝固後の安定性の良好な血
液凝固促進剤を提供することにある。
ンを含有しない血液のみならず，ヘパリンを含有する血
液をも速やかに凝固させ得，かつ凝固後の安定性の高い
血液凝固促進剤の開発を試みた。本発明の目的は，ヘパ
リン含有の有無にかかわらず血液を速やかに凝固させ
得，血清分離性がよく，かつ凝固後の安定性の良好な血
液凝固促進剤を提供することにある。
（問題点を解決するための手段および作用） 本発明の血液凝固促進剤は，（ａ）下記一般式で示さ
れ，かつ，該式中の隣接するカルボニル基が実質的に同
一平面上に存在する環式有機化合物（Ｉ），（ｂ）アミ
ン塩および／または第４級窒素を有する有機化合物，
（ｃ）抗線溶剤および／または抗プラスミン剤，および
（ｄ）加水分解酵素を含有し，そのことにより上記目的
が達成される： （ここで,Aは環式化合物の残基を示す）。
れ，かつ，該式中の隣接するカルボニル基が実質的に同
一平面上に存在する環式有機化合物（Ｉ），（ｂ）アミ
ン塩および／または第４級窒素を有する有機化合物，
（ｃ）抗線溶剤および／または抗プラスミン剤，および
（ｄ）加水分解酵素を含有し，そのことにより上記目的
が達成される： （ここで,Aは環式化合物の残基を示す）。
本発明の血液凝固促進剤の主成分である上記（Ｉ）式
で表される環式有機化合物（以下，環式化合物とする）
は，同素環式化合物であっても異節環式化合物であって
もよく，また，単環式化合物であっても，多環式化合物
であってもよい。このような環式化合物はいずれも，上
記のように，実質的に同一平面上に位置する２個のアル
ボニル基を分子内に有する。詳細な機構は不明である
が，これらの化合物は血液凝固因子に特異的に働き，こ
れを活性化させる。このような環式化合物としては，上
記２個のカルボニル炭素を含む環が６員環または５員環
であることが好ましい。
で表される環式有機化合物（以下，環式化合物とする）
は，同素環式化合物であっても異節環式化合物であって
もよく，また，単環式化合物であっても，多環式化合物
であってもよい。このような環式化合物はいずれも，上
記のように，実質的に同一平面上に位置する２個のアル
ボニル基を分子内に有する。詳細な機構は不明である
が，これらの化合物は血液凝固因子に特異的に働き，こ
れを活性化させる。このような環式化合物としては，上
記２個のカルボニル炭素を含む環が６員環または５員環
であることが好ましい。
同素環式化合物のうち好ましい６員環式化合物として
は下記一般式（II）で示されるｏ−キノン環を有する化
合物が挙げられる： （ここで,R1,R2,R3およびR4は，水素，炭化水素基，極
性置換基または多環式化合物における残基を示す）。
は下記一般式（II）で示されるｏ−キノン環を有する化
合物が挙げられる： （ここで,R1,R2,R3およびR4は，水素，炭化水素基，極
性置換基または多環式化合物における残基を示す）。
上記式において炭化水素基は特に限定されないが，ア
ルキル基，特に炭素数１〜18のアルキル基が好ましい。
極性置換基も特に限定されない。例えば，カルボキシル
基，カルボン酸エステル基，水酸基，アミノ基，メルカ
プト基などがある。ｏ−キノン環を有する化合物として
は,o−キノンをはじめ，下記式（III）〜（VII）で示さ
れる化合物が挙げられる： 没食子酸アルキルエステル酸化物 （ここで,R5はアルキル基を示す。） エラジン酸部分酸化物 エラジン酸完全酸化物 １・４−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３
−ジメチルブタン部分酸化物 １・４−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３
−ジメチルブタン完全酸化物 同素環式化合物のうち５員環式化合物の好ましい具体
例としては，下記式（VIII）で示される１・２・３−ト
リケトヒドロインデンが挙げられる。
ルキル基，特に炭素数１〜18のアルキル基が好ましい。
極性置換基も特に限定されない。例えば，カルボキシル
基，カルボン酸エステル基，水酸基，アミノ基，メルカ
プト基などがある。ｏ−キノン環を有する化合物として
は,o−キノンをはじめ，下記式（III）〜（VII）で示さ
れる化合物が挙げられる： 没食子酸アルキルエステル酸化物 （ここで,R5はアルキル基を示す。） エラジン酸部分酸化物 エラジン酸完全酸化物 １・４−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３
−ジメチルブタン部分酸化物 １・４−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３
−ジメチルブタン完全酸化物 同素環式化合物のうち５員環式化合物の好ましい具体
例としては，下記式（VIII）で示される１・２・３−ト
リケトヒドロインデンが挙げられる。
異節環式化合物としては，例えば，次の一般式（IX）
で示される化合物が挙げられる。
で示される化合物が挙げられる。
（ここで,R6は水素，炭素水素または多環式化合物にお
ける残基を示し,R7およびR8は水素，炭化水素基，極性
置換基または多環式化合物における残基を示す。炭化水
素基および極性置換基については（II）式と同様であ
る。） （IX）式で示される化合物の好ましい具体例としては，
例えば，次式で表されるイサチンがある。
ける残基を示し,R7およびR8は水素，炭化水素基，極性
置換基または多環式化合物における残基を示す。炭化水
素基および極性置換基については（II）式と同様であ
る。） （IX）式で示される化合物の好ましい具体例としては，
例えば，次式で表されるイサチンがある。
本発明の血液凝固促進剤に含有されるアミン塩および
／または第４級窒素を有する有機化合物はヘパリンを吸
着・中和して不活性化するヘパリン中和剤として作用す
る。アミン塩を構成するアミンは第１級，第２級および
第３級アミンのいずれでもよく，アミン塩を構成する酸
も無機酸および有機酸のいずれでもよい。無機酸として
は，塩酸などのハロゲン化水素酸，硫酸，亜硫酸などが
あり，有機酸としてはギ酸，酢酸などがある。アミン塩
の有機残基は通常アルキル基であるが，イミノ基やエー
テル基などの異種元素を含む炭化水素基であってもよ
い。アミン塩は，分子内塩であってもよい。
／または第４級窒素を有する有機化合物はヘパリンを吸
着・中和して不活性化するヘパリン中和剤として作用す
る。アミン塩を構成するアミンは第１級，第２級および
第３級アミンのいずれでもよく，アミン塩を構成する酸
も無機酸および有機酸のいずれでもよい。無機酸として
は，塩酸などのハロゲン化水素酸，硫酸，亜硫酸などが
あり，有機酸としてはギ酸，酢酸などがある。アミン塩
の有機残基は通常アルキル基であるが，イミノ基やエー
テル基などの異種元素を含む炭化水素基であってもよ
い。アミン塩は，分子内塩であってもよい。
好ましいアミン塩の具体例としては，例えば，（XI）
式で表されるヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩や，
（XII）式で表されるテトラデシルジ（アミノエチル）
グリシンがある。
式で表されるヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩や，
（XII）式で表されるテトラデシルジ（アミノエチル）
グリシンがある。
第４級窒素を有する有機化合物には，例えばテトラア
ルキルアンモニウムがある。アルキル基の代わりにアリ
ール基を有する化合物やイミノ基，エーテル基などの異
種元素を含む炭化水素基を有する化合物であってもよ
い。好ましい具体例としては，例えば（XIII）式で表さ
れるドデシルトリメチルアンモニウムクロライドがあ
る。
ルキルアンモニウムがある。アルキル基の代わりにアリ
ール基を有する化合物やイミノ基，エーテル基などの異
種元素を含む炭化水素基を有する化合物であってもよ
い。好ましい具体例としては，例えば（XIII）式で表さ
れるドデシルトリメチルアンモニウムクロライドがあ
る。
このような比較的低分子量の化合物のほか，第４級窒
素を有する有機重合体も利用されうる。このような重合
体としては，一般式（XIV）で表される繰り返し単位を
有するポリカチオンが挙げられる。
素を有する有機重合体も利用されうる。このような重合
体としては，一般式（XIV）で表される繰り返し単位を
有するポリカチオンが挙げられる。
（ここで,R9〜R12は水素またはアルキル基,Xはハロゲン
根または酸根,Yはアルキレン基または−アルキレン基−
SO2−を示し，上記単位の繰り返し数は５〜2000であ
る。） （XIV）で示される化合物のうち，特に（XV）または
（XVI）で表される繰り返し単位を有するポリカチオン
が好適である。
根または酸根,Yはアルキレン基または−アルキレン基−
SO2−を示し，上記単位の繰り返し数は５〜2000であ
る。） （XIV）で示される化合物のうち，特に（XV）または
（XVI）で表される繰り返し単位を有するポリカチオン
が好適である。
上記アミン塩および／または第４級窒素を有する化合
物（中和剤）は上記環式化合物100重量部に対し５〜10,
000重量部の割合で含有される。過少であるとヘパリン
が中和されないため血液が凝固しない。過剰であっても
含有量に応じた効果は得られない。
物（中和剤）は上記環式化合物100重量部に対し５〜10,
000重量部の割合で含有される。過少であるとヘパリン
が中和されないため血液が凝固しない。過剰であっても
含有量に応じた効果は得られない。
抗線溶剤および／または抗プラスミン剤としては，従
来より臨床で用いられているアプロチニン，大豆トリプ
シンインヒビター，ε−アミノカプロン酸,p−アミノメ
チル安息香酸，アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸
などが，単独であるいは組み合わせて用いられる。これ
らは，得られる血清を用いた臨床検査に影響を及ぼさな
い程度の量で血液凝固促進剤中に含有される。例えば，
アプロチニンは血液1mlあたり約100〜600KIU（単位）の
割合で，大豆トリプシンインヒビターは血液1mlあたり
約500〜4000FU（単位）の割合で，そして，ε−アミノ
カプロン酸,p−アミノメチル安息香酸およびアミノメチ
ルシクロヘキサンカルボン酸は，いずれも血液1mlあた
り約10-2〜10-8gの割合となるように，血液凝固促進剤
中に含有される。
来より臨床で用いられているアプロチニン，大豆トリプ
シンインヒビター，ε−アミノカプロン酸,p−アミノメ
チル安息香酸，アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸
などが，単独であるいは組み合わせて用いられる。これ
らは，得られる血清を用いた臨床検査に影響を及ぼさな
い程度の量で血液凝固促進剤中に含有される。例えば，
アプロチニンは血液1mlあたり約100〜600KIU（単位）の
割合で，大豆トリプシンインヒビターは血液1mlあたり
約500〜4000FU（単位）の割合で，そして，ε−アミノ
カプロン酸,p−アミノメチル安息香酸およびアミノメチ
ルシクロヘキサンカルボン酸は，いずれも血液1mlあた
り約10-2〜10-8gの割合となるように，血液凝固促進剤
中に含有される。
本発明の血液凝固促進剤に含有される加水分解酵素は
プロテアーゼであり，ペプチド鎖においてArgと任意の
アミノ酸残基との結合およびLysと任意のアミノ酸残基
との結合を加水分解しうる酵素である。このようなプロ
テアーゼとしては，例えば，トリプシン，トロンビン，
ヘビ毒トロンビン様酵素などのセリンプロテアーゼ；カ
テプシンB,フィシンなどのチオールプロテアーゼ；キニ
ナーゼＩなどの金属プロテアーゼがある。特にセリンプ
ロテアーゼが好適に用いられる。これらプロテアーゼ
は，単独でも血液凝固促進作用を有するが，上記環式化
合物と併用することによって血液凝固の活性化能が飛躍
的に向上する。
プロテアーゼであり，ペプチド鎖においてArgと任意の
アミノ酸残基との結合およびLysと任意のアミノ酸残基
との結合を加水分解しうる酵素である。このようなプロ
テアーゼとしては，例えば，トリプシン，トロンビン，
ヘビ毒トロンビン様酵素などのセリンプロテアーゼ；カ
テプシンB,フィシンなどのチオールプロテアーゼ；キニ
ナーゼＩなどの金属プロテアーゼがある。特にセリンプ
ロテアーゼが好適に用いられる。これらプロテアーゼ
は，単独でも血液凝固促進作用を有するが，上記環式化
合物と併用することによって血液凝固の活性化能が飛躍
的に向上する。
加水分解酵素は，血液1mlあたり10-2〜102IUとなるよ
うに血液凝固促進剤中に含有される。酵素が過少であっ
ても環式化合物が含有されていれば血液凝固促進作用は
得られるが，酵素を上記割合で配合した場合に比べる
と，その効果がはるかに小さい。過剰であっても含有量
に比例した効果は得られない。
うに血液凝固促進剤中に含有される。酵素が過少であっ
ても環式化合物が含有されていれば血液凝固促進作用は
得られるが，酵素を上記割合で配合した場合に比べる
と，その効果がはるかに小さい。過剰であっても含有量
に比例した効果は得られない。
本発明の血液凝固促進剤は血液1mlあたり１×10-10〜
１×10-1gの割合で使用される。過少であると血液凝固
促進効果が得られない。過剰であっても使用量に応じた
効果は得られず，血液検査に種々の影響を与える場合も
ある。
１×10-1gの割合で使用される。過少であると血液凝固
促進効果が得られない。過剰であっても使用量に応じた
効果は得られず，血液検査に種々の影響を与える場合も
ある。
本発明の血液凝固促進剤を使用するときに用いる血液
検査用容器はガラス製であっても樹脂製であってもよ
い。血液を凝固させるには，例えば容器中に採取した血
液に血液凝固促進剤を加えてもよく，血液凝固促進剤を
あらかじめ容器内部に付与しておいてもよい。血液凝固
促進剤は，例えば粉末状のまま利用してもよく，あらか
じめ適当な溶媒に溶解もしくは分散させておいてもよ
い。高濃度の血液凝固促進剤が血液と接触して蛋白成分
を変性させるのを避けるために，血液凝固促進剤を比表
面積の大きい担体に担持させることも可能である。
検査用容器はガラス製であっても樹脂製であってもよ
い。血液を凝固させるには，例えば容器中に採取した血
液に血液凝固促進剤を加えてもよく，血液凝固促進剤を
あらかじめ容器内部に付与しておいてもよい。血液凝固
促進剤は，例えば粉末状のまま利用してもよく，あらか
じめ適当な溶媒に溶解もしくは分散させておいてもよ
い。高濃度の血液凝固促進剤が血液と接触して蛋白成分
を変性させるのを避けるために，血液凝固促進剤を比表
面積の大きい担体に担持させることも可能である。
このような担体としては，血液検査に有害な影響を与
えず，大きい比表面積を有するものであれば，特に限定
されない。例えば，不織布，織布，樹脂ビーズなどが好
適に用いられる。このような担体に上記血液凝固促進剤
を担持させるには，例えば，その溶液や分散液を担体に
塗布したり，溶液や分散液中に担体を浸漬して含浸させ
た後，乾燥させる。アラビアゴムなどの適宜の助剤を含
む血液凝固促進剤の水分散液を調製し，これを急速凍結
乾燥して血液凝固促進剤担持粒子状物を得ることもでき
る。
えず，大きい比表面積を有するものであれば，特に限定
されない。例えば，不織布，織布，樹脂ビーズなどが好
適に用いられる。このような担体に上記血液凝固促進剤
を担持させるには，例えば，その溶液や分散液を担体に
塗布したり，溶液や分散液中に担体を浸漬して含浸させ
た後，乾燥させる。アラビアゴムなどの適宜の助剤を含
む血液凝固促進剤の水分散液を調製し，これを急速凍結
乾燥して血液凝固促進剤担持粒子状物を得ることもでき
る。
本発明の血液凝固促進剤がヘパリンを含有する血液に
加えられると血液中のヘパリンが，アミン塩などの中和
剤に吸着・中和されて沈澱するためヘパリンのトロンビ
ンや第XII因子に対する阻害作用がなくなる。そのた
め，血液は正常な凝固機能を回復する。血液凝固促進剤
に含有される環式化合物は血液中の第VII因子に作用し
てこれを活性化させる能力を有する。第XII因子の活性
化により短時間のうちに連鎖反応的に血液凝固が進行
し，最終的にはプロトロンビンの活性化によって生成さ
れたトロンビンがフィブリノーゲンに作用し，不溶性の
フィブリン網を形成して血液凝固が完了する。血液凝固
促進剤にはさらにセリンプロテアーゼなどの蛋白質加水
分解酵素が存在するため，上記血液凝固因子の活性化が
促進される。血液凝固促進剤に含有される環式化合物が
この蛋白質加水分解酵素の酵素反応を促進することも考
えられる。その結果，短時間で血液が凝固する。血液凝
固に要する時間は血液凝固促進剤中の環式化合物や中和
剤の種類，血液凝固促進剤の量，使用する容器の材質，
血液中のヘパリンの量などにより異なるが，合成樹脂製
容器を用いると通常,10〜20分である。血液凝固促進剤
中には，さらに抗線溶剤および／または抗プラスミン剤
が含有されるため，血液の凝固反応過程で拮抗的に生成
してくるプラスミンのフィブリン分解作用が阻害され
る。そのため血液の凝固が促進され，さらに凝固後にお
いても凝固状態を安定に保つことができる。このよう
に，正常血液のみならずヘパリンが含有される血液も短
時間のうちに凝固し，凝固状態が安定に保たれうる。さ
らに，血清と血餅との分離が容易となるため，分離採取
された血清中に血餅成分が混在する問題も解消される。
血餅成分の収縮度合も充分であるため，血清収率も高
い。
加えられると血液中のヘパリンが，アミン塩などの中和
剤に吸着・中和されて沈澱するためヘパリンのトロンビ
ンや第XII因子に対する阻害作用がなくなる。そのた
め，血液は正常な凝固機能を回復する。血液凝固促進剤
に含有される環式化合物は血液中の第VII因子に作用し
てこれを活性化させる能力を有する。第XII因子の活性
化により短時間のうちに連鎖反応的に血液凝固が進行
し，最終的にはプロトロンビンの活性化によって生成さ
れたトロンビンがフィブリノーゲンに作用し，不溶性の
フィブリン網を形成して血液凝固が完了する。血液凝固
促進剤にはさらにセリンプロテアーゼなどの蛋白質加水
分解酵素が存在するため，上記血液凝固因子の活性化が
促進される。血液凝固促進剤に含有される環式化合物が
この蛋白質加水分解酵素の酵素反応を促進することも考
えられる。その結果，短時間で血液が凝固する。血液凝
固に要する時間は血液凝固促進剤中の環式化合物や中和
剤の種類，血液凝固促進剤の量，使用する容器の材質，
血液中のヘパリンの量などにより異なるが，合成樹脂製
容器を用いると通常,10〜20分である。血液凝固促進剤
中には，さらに抗線溶剤および／または抗プラスミン剤
が含有されるため，血液の凝固反応過程で拮抗的に生成
してくるプラスミンのフィブリン分解作用が阻害され
る。そのため血液の凝固が促進され，さらに凝固後にお
いても凝固状態を安定に保つことができる。このよう
に，正常血液のみならずヘパリンが含有される血液も短
時間のうちに凝固し，凝固状態が安定に保たれうる。さ
らに，血清と血餅との分離が容易となるため，分離採取
された血清中に血餅成分が混在する問題も解消される。
血餅成分の収縮度合も充分であるため，血清収率も高
い。
（実施例） 以下に本発明を実施例につき説明する。
実施例１ エラジン酸酸化物（（Ｖ）式で示される化合物），ポ
リカチオン（（XVI）式で示される化合物），アプロチ
ニンおよびトリプシンを含む水分散液をポリエステル系
不織布に含浸させ，充分に乾燥させた。不織布1cm2あた
りの上記各成分の量はそれぞれ４×10-4g,4×10-4g,500
KIUおよび3IUであった。
リカチオン（（XVI）式で示される化合物），アプロチ
ニンおよびトリプシンを含む水分散液をポリエステル系
不織布に含浸させ，充分に乾燥させた。不織布1cm2あた
りの上記各成分の量はそれぞれ４×10-4g,4×10-4g,500
KIUおよび3IUであった。
市販の5mlポリエチレン製スピッツにヘパリンを1.0IU
/mlの濃度で含む人新鮮血2mlを注入し，次いで，上記成
分を担持した不織布1cm2を入れ，緩やかに撹拌した後,2
0℃で放置した。放置１時間後，および30時間後の血清
をそれぞれ分取し，フィブリノーゲンおよびフィブリン
分解産物（以下FDPと略す）の測定行った。その結果を
下表に示す。１時間後および30時間後のFDP測定値に差
異はなく，血餅の分解反応がよく抑制されていることが
わかる。実施例２〜７および比較例１〜２の結果も合わ
せて下表に示す。
/mlの濃度で含む人新鮮血2mlを注入し，次いで，上記成
分を担持した不織布1cm2を入れ，緩やかに撹拌した後,2
0℃で放置した。放置１時間後，および30時間後の血清
をそれぞれ分取し，フィブリノーゲンおよびフィブリン
分解産物（以下FDPと略す）の測定行った。その結果を
下表に示す。１時間後および30時間後のFDP測定値に差
異はなく，血餅の分解反応がよく抑制されていることが
わかる。実施例２〜７および比較例１〜２の結果も合わ
せて下表に示す。
実施例２ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物，テトラデシルジ（アミ
ノエチル）グリシン，アプロチニンおよびトリプシンを
それぞれ0.5重量％,0.5重量％,10000KIU/mlおよび40IU/
mlの濃度で含有する生理食塩水分散液を調製した。
ノエチル）グリシン，アプロチニンおよびトリプシンを
それぞれ0.5重量％,0.5重量％,10000KIU/mlおよび40IU/
mlの濃度で含有する生理食塩水分散液を調製した。
市販の5mlポリエチレン製スピッツにヘパリンを1.0IU
/mlの濃度で含む人新鮮血2mlを注入し，次いで上記分散
液を50μ添加した後，実施例１と同様に処理し評価を
行った。
/mlの濃度で含む人新鮮血2mlを注入し，次いで上記分散
液を50μ添加した後，実施例１と同様に処理し評価を
行った。
実施例３ イサチン1g,ヘキサデシルジメチルアミン塩酸塩0.4g,
アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸50mgおよび平均
粒径1.5mmのポリスチレンビーズ担体1kgに少量のエタノ
ールを分散助剤として加えて，充分に混合した後，乾燥
した。別に，トリプシン7000IUを少量の生理食塩水に溶
解させ，これを上記処理後のビーズ表面にさらにコーテ
ィングし，乾燥させた。
アミノメチルシクロヘキサンカルボン酸50mgおよび平均
粒径1.5mmのポリスチレンビーズ担体1kgに少量のエタノ
ールを分散助剤として加えて，充分に混合した後，乾燥
した。別に，トリプシン7000IUを少量の生理食塩水に溶
解させ，これを上記処理後のビーズ表面にさらにコーテ
ィングし，乾燥させた。
市販の5mlポリエチレン製スピッツにヘパリンを1.0IU
/mlの濃度で含有する人新鮮血2mlを注入し，次いで，上
記血液凝固促進剤（ビーズ）1gを加えた後，実施例１と
同様に処理し，評価を行った。
/mlの濃度で含有する人新鮮血2mlを注入し，次いで，上
記血液凝固促進剤（ビーズ）1gを加えた後，実施例１と
同様に処理し，評価を行った。
実施例４ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物，テトラデシルジ（アミ
ノエチル）グリシンおよびアプロチニンの代わりに,o−
キノン，ポリカチオン（（XV）式で表される化合物）お
よびε−アミノカプロン酸をそれぞれ0.5重量％,0.5重
量％，および0.1重量％の割合で用いたこと以外は実施
例２と同様である。
ノエチル）グリシンおよびアプロチニンの代わりに,o−
キノン，ポリカチオン（（XV）式で表される化合物）お
よびε−アミノカプロン酸をそれぞれ0.5重量％,0.5重
量％，および0.1重量％の割合で用いたこと以外は実施
例２と同様である。
実施例５ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物，テトラデシルジ（アミ
ノエチル）グリシン，アプロチニンおよびトリプシンの
代わりに,1・２・３−トリケトヒドロインデン，ポリカ
チオン（（XVI）式で示される化合物），ε−アミノカ
プロン酸およびトロンビンをそれぞれ用いたこと以外は
実施例２と同様である。
ノエチル）グリシン，アプロチニンおよびトリプシンの
代わりに,1・２・３−トリケトヒドロインデン，ポリカ
チオン（（XVI）式で示される化合物），ε−アミノカ
プロン酸およびトロンビンをそれぞれ用いたこと以外は
実施例２と同様である。
実施例６ テトラデシルジ（アミノエチル）グリシンおよびトリ
プシンの代わりにドデシルトリメチルアンモニウムクロ
ライドおよびトロンビンをそれぞれ用いたこと以外は実
施例２と同様である。
プシンの代わりにドデシルトリメチルアンモニウムクロ
ライドおよびトロンビンをそれぞれ用いたこと以外は実
施例２と同様である。
実施例７ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物，テトラデシルジ（アミ
ノエチル）グリシンおよびトリプシンの代わりに,1・４
−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３−ジメチ
ルブタン酸化物，ポリカチオン（（XV）式で示される化
合物）および蛇毒トロンビン様酵素をそれぞれ用いたこ
と以外は実施例２と同様である。
ノエチル）グリシンおよびトリプシンの代わりに,1・４
−ジ（３・４−ジヒドロキシフェニル）２・３−ジメチ
ルブタン酸化物，ポリカチオン（（XV）式で示される化
合物）および蛇毒トロンビン様酵素をそれぞれ用いたこ
と以外は実施例２と同様である。
比較例１ アプロチニンおよびトリプシンを使用しなかったこと
以外は実施例２と同様である。
以外は実施例２と同様である。
比較例２ 没食子酸ｎ−プロピル酸化物，テトラデシルジ（アミ
ノエチル）グリシンおよびε−アミノカプロン酸をそれ
ぞれ0.5重量％,0.5重量％および0.1重量％の濃度で含有
する生理食塩水分散液を調製した。この分散液50μを
市販の5mlポリエチレン製スピッツに収容し，乾燥させ
た。このスピッツにヘパリンを1.0IU/mlの濃度を含む人
新鮮血2mlを注入し，実施例１と同様に操作し評価を行
った。
ノエチル）グリシンおよびε−アミノカプロン酸をそれ
ぞれ0.5重量％,0.5重量％および0.1重量％の濃度で含有
する生理食塩水分散液を調製した。この分散液50μを
市販の5mlポリエチレン製スピッツに収容し，乾燥させ
た。このスピッツにヘパリンを1.0IU/mlの濃度を含む人
新鮮血2mlを注入し，実施例１と同様に操作し評価を行
った。
実施例８ 各実施例１〜７の処方の血液凝固促進剤の調製を行っ
た。各血液凝固促進剤をそれぞれ採血用スピッツに収容
し，これにヘパリン含有（1.01U/ml）人新鮮血を注入し
た。緩やかに撹拌後,20℃で放置して，全血が完全に流
動しなくなるまでに要する時間，すなわち血液凝固時間
を測定した。いずれの実施例でも10〜20分で血液が凝固
した。血液凝固後，直ちに3000回転／分の回転速度で５
分間遠心分離し，血清分離状態を観察し，さらに，ピペ
ットによる血清の採取状況を調べた。いずれの実施例に
おいても血清分離性および血清収量は良好な結果を示し
た。
た。各血液凝固促進剤をそれぞれ採血用スピッツに収容
し，これにヘパリン含有（1.01U/ml）人新鮮血を注入し
た。緩やかに撹拌後,20℃で放置して，全血が完全に流
動しなくなるまでに要する時間，すなわち血液凝固時間
を測定した。いずれの実施例でも10〜20分で血液が凝固
した。血液凝固後，直ちに3000回転／分の回転速度で５
分間遠心分離し，血清分離状態を観察し，さらに，ピペ
ットによる血清の採取状況を調べた。いずれの実施例に
おいても血清分離性および血清収量は良好な結果を示し
た。
比較例３ 各比較例１および２の処方の血液凝固促進剤を調製
し，実施例８と同様に操作して血液凝固時間を測定した
ところ,30〜35分の時間を要した。
し，実施例８と同様に操作して血液凝固時間を測定した
ところ,30〜35分の時間を要した。
（発明の効果） 本発明によれば，このように，通常の血液検体のみな
らずヘパリンを含有する血液をも速やかに凝固させ得，
かつ凝固状態が安定に保たれうる血液凝固促進剤が得ら
れる。血清と血餅との分離状態も良好であり，血清収量
も高い。このような血液凝固促進剤は，ヘパリン投与を
受けている人工透析患者や血栓症患者の血液検査時の血
清の分取に好適に用いられる。
らずヘパリンを含有する血液をも速やかに凝固させ得，
かつ凝固状態が安定に保たれうる血液凝固促進剤が得ら
れる。血清と血餅との分離状態も良好であり，血清収量
も高い。このような血液凝固促進剤は，ヘパリン投与を
受けている人工透析患者や血栓症患者の血液検査時の血
清の分取に好適に用いられる。
Claims (2)
- 【請求項１】（ａ）下記一般式で示され，かつ，該式中
の隣接するカルボニル基が実質的に同一平面上に存在す
る環式有機化合物（Ｉ）， （ｂ）アミン塩および／または第４級窒素を有する有機
化合物， （ｃ）抗線溶剤および／または抗プラスミン剤，および （ｄ）加水分解酵素， を含有する血液凝固促進剤であって， 該加水分解酵素がペプチド鎖においてArgと任意のアミ
ノ酸残基との結合および／またはLysと任意のアミノ酸
残基との結合を加水分解しうる酵素である， 血液凝固促進剤： （ここで,Aは環式化合物の残基を示す）。 - 【請求項２】前記加水分解酵素がセリンプロテアーゼ，
チオールプロテアーゼおよび金属プロテアーゼのうちの
少なくとも一種である特許請求の範囲第１項に記載の血
液凝固促進剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62112691A JPH0820440B2 (ja) | 1987-05-08 | 1987-05-08 | 血液凝固促進剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP62112691A JPH0820440B2 (ja) | 1987-05-08 | 1987-05-08 | 血液凝固促進剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63275524A JPS63275524A (ja) | 1988-11-14 |
| JPH0820440B2 true JPH0820440B2 (ja) | 1996-03-04 |
Family
ID=14593072
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP62112691A Expired - Fee Related JPH0820440B2 (ja) | 1987-05-08 | 1987-05-08 | 血液凝固促進剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0820440B2 (ja) |
-
1987
- 1987-05-08 JP JP62112691A patent/JPH0820440B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63275524A (ja) | 1988-11-14 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |