JPH08217691A - 徐放性製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】エンドセリン拮抗物質を除く水溶性ペプチド性
生理活性物質の封入効率を高め、投与後初期の漏出を抑
制した徐放性製剤の提供。 【解決手段】エンドセリン拮抗物質を除く水溶性ペプチ
ド性生理活性物質の水不溶性または水難溶性多価金属塩
と生体内分解性ポリマーとを含有してなる徐放性製剤。 【効果】本発明によれば、エンドセリン拮抗物質を除く
水溶性ペプチド性生理活性物質の封入効率を高め、投与
後初期の漏出を抑制した徐放性製剤が得られる。また、
本発明の徐放性製剤は、生体内投与後に該生理活性物質
の生物活性を保持したまま徐放できる。さらに、徐放性
製剤中の該生理活性物質が長期間にわたって安定に保た
れ、生物活性の損失が少ない。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、エンドセリン拮抗
物質を除く水溶性ペプチド性生理活性物質の水不溶性ま
たは水難溶性多価金属塩と生体内分解性ポリマーとを含
有してなる徐放性製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】生理活性物質、特にペプチドまたはその
誘導体は生体において種々の薬理作用を示すことが知ら
れており、この内いくつかについては化学合成あるいは
遺伝子工学、細胞工学の手法の発達により大腸菌、酵
母、動物細胞、あるいはハムスターなどの生体を用いて
大量に生産させ、医薬品としての応用が図られている。
しかしながら、これらのペプチドは一般的に生体内での
半減期が短いために、頻回投与が必要であり注射に伴う
患者の肉体的負担は無視できないものがある。この問題
を解決するために徐放性製剤を開発する種々の試みがな
されている。水溶性生理活性物質、特に水溶性ペプチド
（以下単にペプチドと称することもある）の徐放性製剤
を開発するときの第１の問題点はペプチドの溶解性をい
かにしてコントロールするかにある。即ち、ペプチドの
放出速度を抑制することである。特表平３−５００２８
６号には不溶性亜鉛−プロタミン−α−インターフェロ
ン複合体が開示されている。また、特開昭６３−２９３
０号には、ポリラクチドに巨大分子ポリペプチドを分散
させたシステムが開示されている。特開平５−２２１８
５５号および特開平６−１７２２０８号には水溶性ペプ
チドを水不溶性のペプチド塩に変換し、生体内分解性高
分子重合物を含有する有機媒体に懸濁することにより水
溶性ペプチドを効率良く微小球に取り込ませる技術が開
示されている。該公報において用いられる水不溶性ペプ
チドは水溶性ペプチド分子内部の塩基性部に対する有機
酸塩であり、パモエート、タンニン酸、ステアリン酸、
またはパルミチン酸塩である。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】上記のように水溶性生
理活性物質の徐放性製剤を製造する種々の試みがなされ
ているものの、まだ満足できるものはなく、水溶性生理
活性物質の封入効率が高く、投与後初期の水溶性生理活
性物質の漏出が抑制され、水溶性生理活性物質放出速度
が一定で、しかも水溶性生理活性物質が安定である徐放
性製剤の開発が望まれている。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の問題
点を解決するため鋭意研究をおこなったところ、エンド
セリン拮抗物質を除く酸性基を持つ水溶性ペプチド性生
理活性物質またはその水溶性塩（以下、単に生理活性物
質と称することもある）と水溶性多価金属塩とから生成
する生理活性物質の水不溶または水難溶性多価金属塩
（以下、単に複合体と称することもある）を製造し、こ
れを生体内分解性ポリマーに分散させることにより、生
理活性物質の生体内分解性ポリマー中への取り込み効率
が飛躍的に上昇し、生体に投与直後の薬物の漏出も少な
い徐放性製剤が得られることを見いだした。この知見に
基づいてさらに研究した結果、本発明を完成した。すな
わち本発明は、（１）エンドセリン拮抗物質を除く水溶
性ペプチド性生理活性物質の水不溶性または水難溶性多
価金属塩と生体内分解性ポリマーとを含有してなる徐放
性製剤、（２）生理活性物質が水溶性ペプチドまたはそ
の誘導体である前記（１）記載の徐放性製剤、（３）ペ
プチドがホルモン、サイトカイン、増血因子、増殖因
子、酵素、可溶性または可溶化受容体、抗体、ペプチド
性抗原、血液凝固因子または接着因子である前記（２）
記載の徐放性製剤、（４）生理活性物質がホルモンであ
る前記（１）記載の徐放性製剤、（５）ホルモンが成長
ホルモンである前記（４）記載の徐放性製剤、（６）ホ
ルモンがインスリンである前記（４）記載の徐放性製
剤、（７）生理活性物質がサイトカインである前記
（１）記載の徐放性製剤、（８）サイトカインがインタ
ーフェロンである前記（７）記載の徐放性製剤、（９）
生理活性物質が増殖因子である前記（１）記載の徐放性
製剤、（１０）多価金属塩が遷移金属塩である前記
（１）記載の徐放性製剤、（１１）多価金属塩が亜鉛塩
である前記（１）記載の徐放性製剤、（１２）多価金属
塩の水に対する溶解度が２０℃で約０ないし約０．１％
（ｗ／ｗ）である前記（１）記載の徐放性製剤、（１
３）多価金属塩の水に対する溶解度が約０ないし約０．
０１％（ｗ／ｗ）である前記（１）記載の徐放性製剤、
（１４）多価金属塩を約０．１ないし約５０％（ｗ／
ｗ）含有してなる前記（１）記載の徐放性製剤、（１
５）多価金属塩を約０．１ないし約３０％（ｗ／ｗ）含
有してなる前記（１）記載の徐放性製剤、（１６）生体
内分解性ポリマーが脂肪族ポリエステルである前記
（１）記載の徐放性製剤、（１７）脂肪族ポリエステル
が乳酸及びグリコール酸の重合体である前記（１６）記
載の徐放性製剤、（１８）乳酸及びグリコール酸の組成
比（モル／モル％）が１００／０ないし約４０／６０で
ある前記（１７）記載の徐放性製剤、（１９）組成比
（モル／モル％）が約９０／１０ないし約４５／５５で
ある前記（１８）記載の徐放性製剤、（２０）重合体の
重量平均分子量が約３，０００ないし約２０，０００で
ある前記（１７）記載の徐放性製剤、（２１）重合体の
重量平均分子量が約３，０００ないし約１４，０００で
ある前記（１７）記載の徐放性製剤、（２２）脂肪族ポ
リエステルが乳酸の単独重合物である前記（１６）記載
の徐放性製剤、（２３）単独重合物の重量平均分子量が
約３，０００ないし約２０，０００である前記（２２）
記載の徐放性製剤、（２４）単独重合物の重量平均分子
量が約３，０００ないし約１４，０００である前記（２
２）記載の徐放性製剤、（２５）マイクロカプセルであ
る前記（１）記載の徐放性製剤、（２６）マイクロカプ
セルが注射用である前記（２５）記載の徐放性製剤、
（２７）注射用である前記（１）記載の徐放性製剤、
（２８）徐放性製剤の製造のためのエンドセリン拮抗物
質を除く水溶性ペプチド性生理活性物質の水不溶性また
は水難溶性多価金属塩および生体内分解性ポリマーの使
用、及び（２９）エンドセリン拮抗物質を除く水溶性ペ
プチド性生理活性物質の水不溶性または水難溶性多価金
属塩を生体内分解性ポリマーを含む油相に分散しｓ／ｏ
型エマルションを調製し、ｓ／ｏ型エマルションを水相
に添加しｓ／ｏ／ｗ型エマルションを調製し、次いでｓ
／ｏ／ｗ型エマルションを水中乾燥に付すことを特徴と
する徐放性製剤の製造法に関する。

【０００５】

【発明の実施の形態】本明細書において、アミノ酸，ペ
プチド等に関し、略号で表示する場合、ＩＵＰＡＣ−Ｉ
ＵＢ コミッション・オン・バイオケミカル・ノーメン
クレーチャー（Commission on Biochemical Nomenclatu
re）による略号あるいは当該分野における慣用略号に基
づくものとし、また、アミノ酸に光学異性体があり得る
場合、特に明示しなければＬ体を示すものとする。生理
活性物質の水不溶性または水難溶性多価金属塩における
生理活性物質は、酸性基を持つ生理活性物質である。こ
こにおいて、酸性基としては、例えばカルボキシル基、
スルホ基などが挙げられる。生理活性物質は、好ましく
は分子内にペプチド結合を持つか、あるいはアミノ酸を
含有し酸性基を持つ生理活性物質である。該酸性基はア
ミノ酸に由来してもよい。生理活性物質は、さらに好ま
しくは酸性基を持つペプチドまたはその誘導体である。
生理活性物質は、生理活性物質の２５℃で水に対する溶
解度は１％（ｗ／ｗ）以上である。

【０００６】生理活性物質は、二個以上のカルボキシル
基を有していることが好ましい。生理活性物質の分子量
は、約２００ないし約２００，０００、好ましくは約２
００ないし約５０，０００、さらに好ましくは分子量約
５００ないし約４０，０００である。生理活性物質の活
性として代表的なものとしては、ホルモン作用が挙げら
れる。また、該生理活性物質は天然物、合成物、半合成
物、遺伝子工学の産物のいずれでもよいし、さらにこれ
らの誘導体でもよい。これらの生理活性物質の作用機作
は、作動性あるいは拮抗性のいづれでもよい。本発明の
生理活性物質、特に水溶性ペプチドまたはその誘導体と
しては、例えばホルモン、サイトカイン、造血因子、増
殖因子、酵素、可溶性または可溶化受容体、抗体または
そのフラグメント、ペプチド性抗原、血液凝固因子、接
着因子あるいは該生理活性物質の受容体に結合しうる作
動薬あるいは拮抗薬などが挙げられる。

【０００７】ホルモンとしては、例えばインスリン，成
長ホルモン，ナトリウム利尿ペプチド，ガストリン，プ
ロラクチン，副腎皮質刺激ホルモン（ＡＣＴＨ），甲状
腺刺激ホルモン（ＴＳＨ），黄体形成ホルモン（Ｌ
Ｈ），卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ），ヒト絨毛ゴナドト
ロピン（ＨＣＧ），モチリン，カリクレインなどが挙げ
られる。ホルモンは、好ましくはインスリン、成長ホル
モンである。

【０００８】サイトカインとしては、例えばリンホカイ
ン，モノカインなどが挙げられる。リンホカインとして
は、例えばインターフェロン（アルファ，ベータ，ガン
マ），インターロイキン（ＩＬ−２ないしＩＬ−１２）
などが挙げられる。モノカインとしては、例えばインタ
ーロイキン１（ＩＬ−１），腫瘍壊死因子などが挙げら
れる。サイトカインは、好ましくはリンホカインであ
り、さらに好ましくはインターフェロン（アルファ，ベ
ータ，ガンマ）である。造血因子としては、例えばエリ
スロポエチン，顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳ
Ｆ），マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳ
Ｆ），トロンボポエチン，血小板増殖刺激因子，メガカ
リオサイトポテンシエーターなどが挙げられる。増殖因
子としては、例えば塩基性あるいは酸性の繊維芽細胞増
殖因子（ＦＧＦ）あるいはこれらのファミリー（例、Ｆ
ＧＦ−９など），神経細胞増殖因子（ＮＧＦ）あるいは
これらのファミリー，インスリン様成長因子（例、ＩＧ
Ｆ−１，ＩＧＦ−２など），骨増殖に関与する因子（Ｂ
ＭＰ）あるいはこれらのファミリーなどが挙げられる。
酵素としては、例えばスーパーオキシドディスミュター
ゼ（ＳＯＤ），ティシュープラスミノーゲンアクティベ
ーター（ＴＰＡ）などが挙げられる。可溶性受容体とし
ては、可溶性インターロイキン６（ＩＬ−６）受容体，
インスリン様成長因子結合タンパク質（ＩＧＦＢＰ），
可溶性腫瘍壊死因子受容体，可溶性上皮成長因子受容
体，可溶性インターロイキン１受容体などが挙げられ
る。可溶化受容体としては、公知の受容体、例えばイン
ターロイキン１受容体，インターロイキン６受容体，腫
瘍壊死因子受容体，ファス（Ｆａｓ）リガンド等を遺伝
子工学的手法で可溶化したもの等が挙げられる。抗体と
しては、例えばヒトモノクーナル抗体，マウス由来の可
変部とヒト由来の定常部とからなるヒト−マウスキメラ
モノクローナル抗体などが挙げられる。抗体のタイプと
しては、例えばＩｇＭ，ＩｇＧ，ＩｇＥなどが挙げられ
る。抗原としては、例えば前記抗体によって認識される
ものなどが挙げられ、さらに血小板、ウイルスなども挙
げられる。血液凝固因子としては、例えば第VIII因子な
どが挙げられる。接着因子としては、フィブロネクチ
ン，ＩＣＡＭ−１などが挙げられる。生理活性物質とし
ては、さらにエンドセリン，Arg-Gly-Asp-Ser (RGDS)、
脳下垂体アデニレートシクラーゼ活性化ポリペプチド
（ＰＡＣＡＰ）なども挙げられる。

【０００９】生理活性物質は、水溶性多価金属塩と接触
させることにより、生理活性物質の水不溶性または水難
溶性多価金属塩に変換される。水溶性多価金属塩におけ
る多価金属としては、例えばII価、III価あるいはIV価
の金属が挙げられ、具体的にはアルカリ土類金属（例、
カルシウム、マグネシウム等）、遷移金属〔鉄（II価、
III価）、銅（II価）、亜鉛（II価）等〕、IIIb属金属
〔アルミニウム（II価、III価）等〕、IVb属金属〔スズ
（II価、IV価）等〕等が挙げられる。多価金属は、好ま
しくはアルカリ土類金属または遷移金属、更に好ましく
は亜鉛またはカルシウム、特に好ましくは亜鉛である。
水溶性多価金属塩としては、多価金属と酸との塩、例え
ば多価金属と無機酸との塩または多価金属と有機酸との
塩が挙げられる。多価金属と酸との塩は、好ましくは常
温（２０℃）で水に対する溶解度が約２０mg/ml以上の
塩、さらに好ましくは溶解度が約１００mg/ml以上の
塩、特に好ましくは溶解度が約２００mg/ml以上の塩で
ある。多価金属と無機酸との塩における無機酸として
は、例えば塩酸，硫酸，硝酸，チオシアン酸が挙げられ
る。多価金属と有機酸との塩における有機酸としては、
例えば脂肪族カルボン酸，芳香族酸が挙げられる。脂肪
族カルボン酸は、好ましくは炭素数２ないし９の脂肪族
カルボン酸である。脂肪族カルボン酸としては、例えば
脂肪族モノカルボン酸、脂肪族ジカルボン酸、脂肪族ト
リカルボン酸等が挙げられる。これらの脂肪族カルボン
酸は、飽和あるいは不飽和のいずれであってもよい。

【００１０】脂肪族モノカルボン酸としては、例えば炭
素数２ないし９の飽和脂肪族モノカルボン酸（例、酢
酸、プロピオン酸、酪酸、吉草酸、カプロン酸、エナン
ト酸、カプリル酸、ペラルゴン酸、カプリン酸等）およ
び炭素数２ないし９の不飽和脂肪族モノカルボン酸
（例、アクリル酸、プロピオール酸、メタクリル酸、ク
ロトン酸、イソクロトン酸等）が挙げられる。脂肪族ジ
カルボン酸としては、例えば炭素数２ないし９の飽和脂
肪族ジカルボン酸（例、マロン酸、コハク酸、グルタル
酸、アジピン酸、ピメリン酸等）および炭素数２ないし
９の不飽和脂肪族ジカルボン酸（例、マレイン酸、フマ
ル酸、シトラコン酸、メサコン酸等）が挙げられる。脂
肪族トリカルボン酸としては、例えば炭素数２ないし９
の飽和脂肪族トリカルボン酸（例、トリカルバリル酸、
１、２、３−ブタントリカルボン酸等）が挙げられる。
上記した脂肪族カルボン酸は、水酸基を１ないし２個有
していてもよく、このような例としては、例えばグリコ
ール酸、乳酸、グリセリン酸、タルトロン酸、リンゴ
酸、酒石酸、クエン酸等が挙げられる。脂肪族カルボン
酸は、好ましくは脂肪族モノカルボン酸である。脂肪族
カルボン酸は、さらに好ましくは炭素数２ないし９の脂
肪族モノカルボン酸、特に好ましくは炭素数２ないし３
の飽和脂肪族モノカルボン酸である。脂肪族カルボン酸
の特に好ましい具体例としては、例えば酢酸等が挙げら
れる。芳香族酸としては、例えば安息香酸、サリチル酸
等が挙げられ、好ましくは安息香酸である。

【００１１】多価金属と無機酸との塩、すなわち無機酸
多価金属塩の具体例を挙げれば、例えばハロゲン化塩
（例、塩化亜鉛、塩化カルシウム）、硫酸塩、硝酸塩、
チオシアン酸塩等である。多価金属と脂肪族カルボン酸
との塩、すなわち脂肪族カルボン酸多価金属塩の具体例
を挙げれば、例えば酢酸カルシウム、酢酸亜鉛、プロピ
オン酸カルシウム、グリコール酸亜鉛、乳酸カルシウ
ム、乳酸亜鉛、酒石酸亜鉛である。脂肪族カルボン酸多
価金属塩の好ましい例を挙げれば、例えば酢酸カルシウ
ム、酢酸亜鉛である。特に好ましい具体例を挙げれば酢
酸亜鉛等である。多価金属と芳香族酸との塩、すなわち
芳香族酸多価金属塩の具体例を挙げれば、例えば安息香
酸塩、サリチル酸塩等である。特に好ましい具体例を挙
げれば安息香酸亜鉛である。

【００１２】生理活性物質の水不溶性または水難溶性多
価金属塩は、生理活性物質と水溶性多価金属塩とを溶媒
中で混合することにより製造される。混合操作は、好ま
しくは水中で行われる。生理活性物質と水溶性多価金属
塩とを水中で混合する際の量比（モル比）は、例えば
１：１ないし１：１０００、好ましくは１：１ないし
１：１００、より好ましくは１：１ないし１：５０、特
に好ましくは１：１ないし１：１０である。また、両者
の水中における濃度は、それぞれ単独の溶解度範囲内
で、生成する複合体の溶解度以上の濃度であればよい。
上記混合時の水溶液のpHは、生理活性物質の生理活性を
損なわず、また、生理活性物質および水溶性多価金属塩
それぞれの溶解性を極端に下げないpHが採用される。混
合操作は、通常蒸留水中で行われるが、必要に応じて弱
酸性、中性または弱アルカリ性に調整した水中で行って
もよい。本発明における水不溶性または水難溶性とは不
可逆的なものではなく、可逆的であり、水に対する溶解
度が非常に低いことを意味する。水に対する溶解度とし
ては通常の温度（２０℃）において約０ないし約０．１
％（ｗ／ｗ）、さらに好ましくは約０ないし約０．０１
％（ｗ／ｗ）である。このようにして得られた生理活性
物質の水不溶性または水難溶性多価金属塩は、必要に応
じて真空乾燥あるいは凍結乾燥した後用いられる。本発
明の徐放性製剤中、生理活性物質の水難溶性多価金属塩
の含量は、一般的に約０．１％（ｗ／ｗ）ないし約５０
％（ｗ／ｗ）、好ましくは約１％（ｗ／ｗ）ないし約３
０％（ｗ／ｗ）である。

【００１３】生体内分解性ポリマーとしては、水に難溶
または不溶である高分子重合物、例えば脂肪族ポリエス
テル〔例、α−ヒドロキシカルボン酸類（例、グリコー
ル酸、乳酸、ヒドロキシ酪酸等）、ヒドロキシジカルボ
ン酸類（例、リンゴ酸等）、ヒドロキシトリカルボン酸
（例、クエン酸等）等の１種以上から合成された単独重
合体、共重合体、あるいはこれらの混合物〕、ポリ−α
−シアノアクリル酸エステル、ポリアミノ酸（例、ポリ
−γ−ベンジル−Ｌ−グルタミン酸等）が挙げられる。
これらは、適宜の割合で混合して用いてもよい。重合の
形式はランダム、ブロック、グラフトの何れでもよい。
生体内分解性ポリマーは、好ましくは脂肪族ポリエステ
ル〔例、α−ヒドロキシカルボン酸類（例、グリコール
酸、乳酸、ヒドロキシ酪酸等）、ヒドロキシジカルボン
酸類（例、リンゴ酸等）、ヒドロキシトリカルボン酸
（例、クエン酸等）等の１種以上から合成された単独重
合体、共重合体、あるいはこれらの混合物〕である。上
記した脂肪族ポリエステル中、α−ヒドロキシカルボン
酸類（例、グリコール酸、乳酸、ヒドロキシ酪酸等）の
１種以上から合成された単独重合体、共重合体が確実な
生体内分解性および生体適合性の観点から好ましい。脂
肪族ポリエステルは、特に好ましくはα−ヒドロキシカ
ルボン酸類（例、グリコール酸、乳酸、ヒドロキシ酪酸
等）の１種以上から合成された共重合体である。また、
これらの共重合体は混合して使用されてもよい。本発明
における生体内分解性ポリマーは、自体公知の方法によ
り製造される。

【００１４】上記α−ヒドロキシカルボン酸類はＤ−
体、Ｌ−体、およびＤ、Ｌ−体の何れでもよいが、Ｄ−
体／Ｌ−体（モル／モル％）が約７５／２５ないし約２
５／７５の範囲のものが好ましい。Ｄ−体／Ｌ−体（モ
ル／モル％）は、さらに好ましくは約６０／４０ないし
約３０／７０である。上記α−ヒドロキシカルボン酸類
の共重合体の例としてはグリコール酸と他のα−ヒドロ
キシ酸類との共重合体が挙げられ、該α−ヒドロキシ酸
類としては乳酸、２−ヒドロキシ酪酸が好ましい。α−
ヒドロキシカルボン酸類の共重合体は、好ましくは乳酸
−グリコール酸共重合体または２−ヒドロキシ酪酸−グ
リコール酸共重合体である。α−ヒドロキシカルボン酸
類の共重合体は、特に好ましくは乳酸−グリコール酸共
重合体である。

【００１５】乳酸−グリコール酸共重合体において、そ
の組成比（乳酸／グリコール酸）（モル／モル％）は約
１００／０ないし約４０／６０が好ましい。該組成比
は、さらに好ましくは約９０／１０ないし約４５／５５
である。組成比は、特に好ましくは約８０／４０ないし
約４５／５５である。乳酸−グリコール酸共重合体の重
量平均分子量は約３，０００ないし約２０，０００、好
ましくは約３，０００ないし約１４，０００、さらに好
ましくは約３，０００ないし１２，０００である。ま
た、乳酸−グリコール酸共重合体の分散度（重量平均分
子量／数平均分子量）は約１．２から約４．０が好まし
い。さらに好ましくは、約１．５から約３．５である。
乳酸−グリコール酸共重合体は、自体公知の製造法、例
えば特開昭６１−２８５２１号公報に記載の方法に従っ
て合成できる。該共重合体は無触媒脱水重縮合で合成さ
れたものが好ましい。２−ヒドロキシ酪酸−グリコール
酸共重合体において、グリコール酸が約１０ないし約７
５モル％、残りが２−ヒドロキシ酪酸である場合が好ま
しい。さらに好ましくは、グリコール酸が約２０ないし
約７５モル％の場合である。特に好ましくは、グリコー
ル酸が約３０ないし約７０モル％の場合である。２−ヒ
ドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体の重量平均分子量
は、約２，０００ないし約２０，０００が好ましい。２
−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重合体の分散度（重
量平均分子量／数平均分子量）は約１．２ないし４．０
が好ましい。分散度は、特に好ましくは約１．５ないし
３．５である。２−ヒドロキシ酪酸−グリコール酸共重
合体は公知の製造法、例えば特開昭６１−２８５２１号
公報に記載の方法に従って合成できる。該共重合体は無
触媒脱水重縮合で合成されたものが好ましい。上記α−
ヒドロキシカルボン酸類の単独重合体の好ましい例とし
ては乳酸の単独重合体が挙げられる。乳酸単独重合体の
重量平均分子量は約３，０００ないし約２０，０００、
好ましくは約３，０００ないし約１４，０００である。
乳酸単独重合体は、自体公知の製造法、例えば特開昭６
１−２８５２１号公報に記載の方法に従って合成でき
る。該単独重合体は無触媒脱水重縮合で合成されたもの
が好ましい。

【００１６】上記した２−ヒドロキシ酪酸−グリコール
酸共重合体は、さらにポリ乳酸と混合して使用してもよ
い。該ポリ乳酸としては、Ｄ−体、Ｌ−体およびこれら
の混合物の何れでもよいが、Ｄ−体／Ｌ−体（モル／モ
ル％）が約７５／２５ないし約２０／８０の範囲のもの
が好ましい。Ｄ−体／Ｌ−体（モル／モル％）は、さら
に好ましくは約６０／４０ないし約２５／７５である。
Ｄ−体／Ｌ−体（モル／モル％）は、特に好ましくは約
５５／４５ないし約２５／７５である。該ポリ乳酸の重
量平均分子量は、約１，５００ないし約２０，０００、
好ましくは約１，５００ないし約１０，０００である。
また、ポリ乳酸の分散度は約１．２ないし約４．０が好
ましい。分散度は、特に好ましくは約１．５ないし約
３．５である。ポリ乳酸の製造法については、乳酸の二
量体であるラクタイドを開環重合する方法と乳酸を脱水
重縮合する方法が知られている。本発明で使用する比較
的低分子のポリ乳酸を得るためには、乳酸を直接脱水重
縮合する方法が好ましい。該方法は、例えば特開昭６１
−２８５２１号公報に記載されている。２−ヒドロキシ
酪酸−グリコール酸共重合体とポリ乳酸とを混合して使
用する場合、その混合比は例えば約１０／９０ないし約
９０／１０（重量％）である。混合比は、好ましくは約
２０／８０ないし約８０／２０である。混合比は、さら
に好ましくは約３０／７０ないし７０／３０である。

【００１７】本明細書中、重量平均分子量とは、重量平
均分子量が１２０，０００、５２，０００、２２，００
０、９，２００、５，０５０、２，９５０、１，０５
０、５８０、１６２の９種類のポリスチレンを基準物質
としてゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰ
Ｃ）で測定したポリスチレン換算の分子量をいう。ＧＰ
Ｃ測定により数平均分子量も計算される。分散度は重量
平均分子量と数平均分子量とから計算される。ＧＰＣ測
定はＧＰＣカラムＫＦ８０４Ｌ ｘ ２（昭和電工製）、
ＲＩモニターＬ−３３００（日立製作所製）を使用し、
移動相としてクロロホルムを用いた。

【００１８】上記した無触媒脱水重縮合で合成される共
重合体は、一般的に末端に遊離のカルボキシル基を有す
る。本発明において、生体内分解性ポリマーは、好まし
くは末端に遊離のカルボキシル基を有する。末端に遊離
のカルボキシル基を有する生体内分解性ポリマーとは、
ＧＰＣ測定による数平均分子量と末端基定量による数平
均分子量とがほぼ一致する生体内分解性ポリマーであ
る。末端基定量による数平均分子量は、以下のようにし
て算出される。約１ｇないし３ｇの生体内分解性ポリマ
ーをアセトン(25 ml)とメタノール(5ml)との混合溶媒に
溶解し、フェノールフタレインを指示薬としてこの溶液
中のカルボキシル基を0.05 N アルコール性水酸化カリ
ウム溶液で室温での撹拌下、速やかに滴定して末端基定
量による数平均分子量を次式で算出した。 末端基定量による数平均分子量 ＝ 20,000 A／B Ａ：生体内分解性ポリマーの質量 (g) Ｂ：滴定終点までに添加した 0.05 N アルコール性水酸
化カリウム溶液 (ml) 例えば、１種類以上のα-ヒドロキシ酸類から無触媒脱
水重縮合法で合成され、末端に遊離のカルボキシル基を
有する重合体では、ＧＰＣ測定による数平均分子量と末
端基定量による数平均分子量とがほぼ一致する。これに
対し、環状二量体から触媒を用いて開環重合法で合成さ
れ、末端に遊離カルボキシル基を本質的には有しない重
合体では、末端基定量による数平均分子量がＧＰＣ測定
による数平均分子量を大きく上回る。この相違によって
末端に遊離のカルボキシル基を有する重合体は末端に遊
離カルボキシル基を有しない重合体と明確に区別するこ
とができる。

【００１９】末端基定量による数平均分子量が絶対値で
あるのに対してＧＰＣ測定による数平均分子量は各種分
析、解析条件（例えば移動相の種類、カラムの種類、基
準物質、スライス幅の選択、ベースラインの選択等）に
よって変動する相対値であるため、一義的な数値化は困
難であるが、例えばＧＰＣ測定による数平均分子量と末
端基定量による数平均分子量とがほぼ一致するとは、末
端基定量による数平均分子量がＧＰＣ測定による数平均
分子量の約０．５倍ないし約２倍の範囲内であることを
いう。好ましくは、約０．８倍ないし約１．５倍の範囲
内であることをいう。また、末端基定量による数平均分
子量がＧＰＣ測定による数平均分子量を大きく上回ると
は、末端基定量による数平均分子量がＧＰＣ測定による
数平均分子量の約２倍を越える場合をいう。

【００２０】本発明の徐放性製剤は、生理活性物質と水
溶性多価金属塩とを混合して得られる生理活性物質の水
不溶性または水難溶性多価金属塩を生体内分解性ポリマ
ーに分散または溶解させることによって製造される。徐
放性製剤の製造法としては、例えば水中乾燥法、相分離
法、噴霧乾燥法あるいはこれらに準ずる方法などが挙げ
られる。以下に、徐放性製剤として、例えばマイクロカ
プセルを製造する場合の製造方法について記述する。

【００２１】（イ）水中乾燥法（ｏ／ｗ法） 本方法においては、まず生体内分解性ポリマーの有機溶
媒溶液を作製する。本発明の徐放性製剤の製造の際に使
用する有機溶媒は、沸点が１２０℃以下であることが好
ましい。該有機溶媒としては、例えばハロゲン化炭化水
素（例、ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素
等）、アルコール類（エタノール、メタノール）、アセ
トニトリル等が挙げられる。これらは適宜の割合で混合
して用いてもよい。有機溶媒は、好ましくはジクロロメ
タン、アセトニトリルである。有機溶媒は、特に好まし
くはジクロロメタンである。生体内分解性ポリマーの有
機溶媒溶液中の濃度は、生体内分解性ポリマーの分子
量、有機溶媒の種類などによって異なるが、一般的には
約０．０１ないし約８０％（ｗ／ｗ）から選ばれる。さ
らに好ましくは約０．１ないし約７０％（ｗ／ｗ）、特
に好ましくは約１ないし約６０％である。このようにし
て得られた生体内分解性ポリマーの有機溶媒溶液中に、
生理活性物質の水不溶性または水難溶性多価金属塩を、
必要により凍結乾燥あるいは真空乾燥した後、添加し、
溶解させる。この際、複合体の添加量は、複合体：生体
内分解性ポリマーの重量比の上限が約１：２まで、好ま
しくは約１：３までとなるようにする。ついで、このよ
うにして調製された有機溶媒溶液をさらに水相中に加え
て、タービン型攪拌機などを用いてｏ／ｗエマルション
を形成させた後、油相溶媒を蒸発させ、マイクロカプセ
ルを製造する。この際の水相体積は一般的には油相体積
の約１倍ないし約１０，０００倍から選ばれる。さらに
好ましくは、約２倍ないし約５，０００倍から選ばれ
る。特に好ましくは、約５倍ないし約２，０００倍から
選ばれる。上記外水相中に乳化剤を加えてもよい。該乳
化剤は、一般的に安定なｏ／ｗエマルションを形成でき
るものであれば何れでもよい。乳化剤としては、例えば
アニオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤、ポリオ
キシエチレンヒマシ油誘導体、ポリビニルピロリドン、
ポリビニルアルコール、カルボキシメチルセルロース、
レシチン、ゼラチン、ヒアルロン酸などが挙げられる。
これらは適宜組み合わせて使用してもよい。外水相中の
乳化剤の濃度は、好ましくは約０．００１％ないし２０
％（ｗ／ｗ）である。さらに好ましくは約０．０１％な
いし１０％（ｗ／ｗ）、特に好ましくは約０．０５％な
いし５％（ｗ／ｗ）である。上記したｏ／ｗ法において
は、複合体を生体内分解性ポリマーの有機溶媒溶液中に
分散させる方法、すなわちｓ／ｏ／ｗ法によりマイクロ
カプセルを製造してもよい。

【００２２】（ロ）水中乾燥法（ｗ／ｏ／ｗ法） 本方法においては、まず生体内分解性ポリマーの有機溶
媒溶液を製造する。この際、生体内分解性ポリマーの有
機溶媒溶液中の濃度は、生体内分解性ポリマーの分子
量、有機溶媒の種類などによって異なるが、一般的には
約０．０１ないし約８０％（ｗ／ｗ）から選ばれる。さ
らに好ましくは約０．１ないし約７０％（ｗ／ｗ）、特
に好ましくは約１ないし約６０％である。内水相として
複合体の水分散液を使用する。複合体の水分散液中の濃
度は、例えば約１０％（ｗ／ｖ）ないし約９０％（ｗ／
ｖ）である。上記した複合体の水分散液を生体内分解性
ポリマーの有機溶媒溶液に乳化，分散し、ｗ／ｏエマル
ションを製造する。乳化操作は、公知の分散方法により
行われる。乳化操作は、例えばタービン型撹拌機、ホモ
ジナイザー等を用いて行われる。この際、内水相と生体
内分解性ポリマーの重量比の上限が約１：２まで、好ま
しくは約１：３までとなるようにする。内水相と生体内
分解性ポリマーの有機溶媒溶液との比率は１：１，００
０（ｖ／ｖ）ないし１：１（ｖ／ｖ）、好ましくは１：
１００（ｖ／ｖ）ないし１：５（ｖ／ｖ）、特に好まし
くは１：５０（ｖ／ｖ）ないし１：５（ｖ／ｖ）であ
る。ついでこのようにして製造されたｗ／ｏエマルショ
ンをさらに水相中に加えて、ｗ／ｏ／ｗエマルションを
製造し、油相溶媒を蒸発させマイクロカプセルを製造す
る。具体的操作は上記（イ）に準ずる。

【００２３】本発明で用いられる徐放性製剤は微粒子状
であることが好ましい。なぜならば徐放性製剤は、通常
の皮下あるいは筋肉内注射に使用される注射針を通して
投与される方が、患者に対し過度の苦痛を与えることが
ないからである。該徐放性製剤の粒子径は、例えば平均
粒子径として約０．１ないし３００μm、好ましくは約
１ないし１５０μm、特に好ましくは約２ないし１００
μmである。本明細書中、微粒子状の徐放性製剤を、マ
イクロカプセルと称することもある。マイクロカプセル
はマイクロスフィアと称することもある。

【００２４】本発明の徐放性製剤は、例えばマイクロカ
プセルとして、あるいはマイクロカプセルを原料物質と
して種々の剤形に製剤化し、非経口剤（例、筋肉内、皮
下、臓器などへの注射剤または埋め込み剤、鼻腔、直
腸、子宮などへの経粘膜剤等）、経口剤（例、カプセル
剤（例、硬カプセル剤、軟カプセル剤等）、顆粒剤、散
剤等の固形製剤、懸濁剤等の液剤等）などとして投与す
ることができる。本発明において、徐放性製剤は特に注
射用であることが好ましい。例えば、徐放性製剤がマイ
クロカプセルである場合、マイクロカプセルを分散剤
（例、Tween 80、HCO-60 等の界面活性剤、カルボキシ
メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ヒアルロン
酸等の多糖類など）、保存剤（例、メチルパラベン、プ
ロピルパラベンなど）、等張化剤（例、塩化ナトリウ
ム、マンニトール、ソルビトール、ブドウ糖など）等と
共に水性懸濁剤とすることにより実用的な注射用徐放製
剤が得られる。また、ゴマ油、コーン油などの植物油あ
るいはこれにレシチンなどのりん脂質を混合したもの、
あるいは中鎖脂肪酸トリグリセリド（例、ミグリオール
８１２）と共に分散して油性懸濁剤として実際に使用で
きる徐放性注射剤とする。

【００２５】徐放性製剤が例えばマイクロカプセルであ
る場合、マイクロカプセルの粒子径は、懸濁注射剤とし
て使用する場合にはその分散度、通針性を満足する範囲
であればよく、例えば平均粒子径として約０．１ないし
約３００μmの範囲が挙げられる。粒子径は、好ましく
は約１ないし約１５０μm、特に好ましくは約２ないし
約１００μmの範囲である。上記したマイクロカプセル
を無菌製剤にするには、製造全工程を無菌にする方法、
ガンマ線で滅菌する方法、防腐剤を添加する方法等が挙
げられるが、特に限定されない。

【００２６】本発明の徐放性製剤は、低毒性で哺乳動物
（例、ヒト、牛、豚、犬、ネコ、マウス、ラット、ウサ
ギ等）に対して安全に用いることができる。本発明の徐
放性製剤の適応は、使用する生理活性物質により異な
る。本発明の徐放性製剤は、生理活性物質が例えばイン
スリンである場合には糖尿病などの治療または予防に、
インターフェロンアルファである場合には腎癌，Ｃ型肝
炎などの治療または予防に、エリスロポエチンである場
合には貧血などの治療または予防に、成長ホルモンであ
る場合には発育不全などの治療または予防に、顆粒球コ
ロニー刺激因子である場合には癌化学療法後の好中球減
少症などの治療または予防に有効である。また、生理活
性物質がエリスロポエチンである場合、本発明の徐放性
製剤は、自己血輸血のための造血促進にも有効である。
徐放性製剤の投与量は、生理活性物質の種類と含量、放
出の持続時間、対象疾病、対象動物などによって種々異
なるが、生理活性物質の有効量であればよい。該生理活
性物質の１回当たりの投与量としては、例えば徐放性製
剤が１週間型製剤である場合、好ましくは、成人１人、
約 0.0001 ないし10mg／kg体重の範囲から適宜選ぶこと
ができる。さらに好ましくは約 0.0005 ないし1mg／kg
体重の範囲から適宜選ぶことができる。徐放性製剤の投
与量は、成人１人、１回当たり好ましくは、約 0.0005
ないし50 mg／kg体重の範囲から適宜選ぶことができ
る。さらに好ましくは約 0.0025ないし10mg／kg体重の
範囲から適宜選ぶことができる。投与回数は、１週間に
１回、２週間に１回，４週間に１回等、生理活性物質の
種類と含量、剤型、放出の持続時間、対象疾病、対象動
物などによって適宜選ぶことができる。本発明の製剤の
保存は常温あるいは冷所に保存されるが、好ましくは冷
所である。ここでいう常温あるいは冷所とは日本薬局方
において定義されるものである。すなわち、常温とは１
５ないし２５℃を、冷所とは１５℃以下を意味する。

【００２７】

【実施例】以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的
に説明するが、これらは本発明を限定するものではな
い。 参考例１ ０．５ｇの豚インスリン（２７．３Ｕ／ｍｇ、ディオシ
ンス社、オランダ））を１００ｍＭ水酸化ナトリウム水
溶液２２ｍｌに溶解させた溶液と、１ｇの酢酸亜鉛（２
水和物）を１０ｍｌの蒸留水に溶解させた溶液を混合
し、室温で１時間放置した。約３，０００ rpm で遠心
分離操作を行ない（05PR-22、日立製作所）上清を捨て
た。これを再び蒸留水に分散後、さらに遠心分離を行っ
た。上清を捨てた後、少量の蒸留水を加えて凍結乾燥
し、約１ｇの粗豚インスリン亜鉛塩を乾燥粉末として得
た。得られた粉末中のインスリン含量を調べるため、３
０％アセトニトリルを含有する５０ｍＭのＥＤＴＡ溶液
で３時間振とうして抽出し、高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ）で定量した。その結果、乾燥粉末１００
ｍｇあたり豚インスリンを４７．６ｍｇ含有していた。

【００２８】参考例２ ４０％水酸化カリウム水溶液１６８ｍｌとエチルエーテ
ル１，０００ｍｌの混液に氷冷撹拌下、ニトロソエチル
尿素１０４ｇを少しずつ加えた。生じた黄色のエーテル
層を分液し、粒状の水酸化カリウムを加え乾燥した。つ
いで水酸化カリウムを除去し、ジアゾエタン溶液約９０
０ｍｌを得た。重量平均分子量約5,800の乳酸−グリコ
ール酸共重合体（乳酸/グリコール酸＝５０／５０（モ
ル／モル％））、１３０ｇを塩化メチレン１，９００ｍ
ｌに溶解し、撹拌冷却した。氷冷下、上記したジアゾエ
タン溶液を滴下し、その後室温下２時間撹拌した。一夜
放置後、溶媒を減圧留去し、残留物を室温で真空乾燥す
ることにより、乳酸−グリコール酸共重合体のエチルエ
ステル１３１ｇを得た。

【００２９】参考例３ １ｍｇのヒト成長ホルモン（バイオテクノロジー・ジェ
ネラル社、米国）を０．９ｍｌの蒸留水に溶解した溶液
に、９．９８、２９．４３、４９．８８、６９．８４、
７９．８１または９９．７７μｇの酢酸亜鉛（二水和
物）を１００μｌの蒸留水に溶解した水溶液を混合し
た。亜鉛／成長ホルモンのモル比はそれぞれ１、３、
５、７、８、１０である。このモル比が５の時には成長
ホルモンの約６０％が沈殿し、７以上ではほぼ１００％
の成長ホルモンが沈殿した。

【００３０】実施例１ インターフェロンアルファ水溶液２００ｍｌ（４００億
国際単位を含有）に酢酸亜鉛（２水和物）水溶液１ｍｌ
（２００ｍｇ／ｍｌ）と１規定水酸化ナトリウム１ｍｌ
を加えて、混合後４℃にて一晩静置した。３，０００rp
mで遠心分離後、不溶性の複合体を回収し、凍結乾燥し
て、約２００ｍｇの粗インターフェロンアルファ亜鉛塩
を得た。乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコー
ル酸比＝50/50、分子量５８００、和光純薬製）１．５
ｇと参考例２で得られた乳酸−グリコール酸共重合体の
エチルエステル１．５ｇをジクロロメタン４ｍｌに溶解
した溶液に、前記した粗インターフェロンアルファ亜鉛
塩２００ｍｇを添加し、ホモジナイザー（ポリトロン）
で約３０秒間攪拌し、ｓ／ｏエマルションを得た。得ら
れたｓ／ｏエマルションを予め１８℃に調節しておいた
０．１％ (w/w) ポリビニルアルコール（EG-40、日本合
成化学製）水溶液７００ｍｌ 中に注入し、タービン型
ホモミキサーを用い、６，０００ rpm でｓ／ｏ／ｗエ
マルションとした。このｓ／ｏ／ｗエマルションを室温
で３時間撹拌してジクロロメタンを揮散させ、油相を固
化させた。ついで、約２，０００ rpm で遠心分離操作
を行ない（05PR-22、日立製作所）上清を捨てた。得ら
れる残渣を再び蒸留水に分散後、さらに遠心分離を行っ
た。捕集されたマイクロカプセルにＤ−マンニトール５
０ｍｇを加え、さらに少量の蒸留水を加えて再分散した
後、この分散液を凍結乾燥して粉末状のマイクロカプセ
ルを得た。

【００３１】実施例２ 乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸＝７
５／２５（モル／モル％）、重量平均分子量１３，５８
５、数平均分子量 ４，４１３、和光純薬工業製）３．
６ｇにジクロロメタン６．６ｇ（５ｍｌ) を加えて溶解
した。また参考例１で得られた粗豚インスリン亜鉛塩４
２０ｍｇ（豚インスリンを２００ｍｇ含有）をジクロロ
メタン６．６ｇ（５ｍｌ) に分散し、両者を混合した
後、ホモジナイザー（ポリトロン）で約１０秒間攪拌
し、ｓ／ｏエマルションを得た。得られたｓ／ｏエマル
ションを予め１８℃に調節しておいた０．１％ (w/w)
ポリビニルアルコール（EG-40、日本合成化学製）水溶
液８００ｍｌ中に注入し、タービン型ホモミキサーを用
い、６，０００ rpm でｓ／ｏ／ｗエマルションとし
た。このｓ／ｏ／ｗエマルションを室温で３時間撹拌し
てジクロロメタンを揮散させ、油相を固化させた。つい
で、約２，０００ rpm で遠心分離操作を行ない（05PR-
22、日立製作所）上清を捨てた 。得られる残渣を再び
蒸留水に分散後、さらに遠心分離を行った。捕集された
マイクロカプセルにＤ−マンニトール５０ｍｇを加え、
さらに少量の蒸留水を加えて再分散した後、この分散液
を凍結乾燥して粉末状のマイクロカプセルを得た（約３
グラム回収）。得られたマイクロカプセル中のインスリ
ン含量を調べるため、３０％アセトニトリルを含有する
５０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で３時間振とうして抽出し、高
速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で定量した。そ
の結果、マイクロカプセル１００ｍｇあたりインスリン
を６．２ｍｇ含有していた。

【００３２】実施例３ エリスロポエチン注射液（エスポー^TM 注射液３００
０、三共株式会社製）８ｍｌ（１２０００国際単位を含
有）に塩化亜鉛１ｇを少量づつ加え、室温で１時間放置
した。得られる混合液を３，０００ｒｐｍで遠心分離
し、沈殿物を蒸留水に再度分散したのち、さらに遠心分
離により沈殿物を得た。該沈殿物に少量の蒸留水を加え
て凍結乾燥し、粗エリスロポエチン亜鉛塩と粗アルブミ
ン亜鉛塩との混合物６０ｍｇを粉末として得た。乳酸−
グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸比＝50/5
0、分子量１４０００、和光純薬製）０．５ｇをジクロ
ロメタン１．５ｍｌに溶解した溶液に、前記した粗エリ
スロポエチン亜鉛塩と粗アルブミン亜鉛塩との混合物６
０ｍｇを添加し、ホモジナイザー（ポリトロン）で約３
０秒間攪拌しｓ／ｏエマルションを得た。ついで、実施
例１と同様にして粉末状のマイクロカプセル１５２ｍｇ
を得た。

【００３３】実施例４ ヒト成長ホルモン（ジェノトロピン^TM １６ＩＵ、住友
製薬株式会社製）を蒸留水１ｍｌに溶解し、さらに塩化
亜鉛水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）１００μｌを加え、室温
で１時間放置した。得られる混合液を遠心分離し、沈殿
物を蒸留水に再度分散したのち、さらに遠心分離により
沈殿物を得た。該沈殿物に少量の蒸留水を加えて凍結乾
燥し、粗ヒト成長ホルモン亜鉛塩５．６ｍｇを粉末とし
て得た。乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコー
ル酸比＝75/25、分子量９，８００、和光純薬製）０．
５ｇをジクロロメタン１．５ｍｌに溶解した溶液に、前
記した粗ヒト成長ホルモン亜鉛塩５．６ｍｇを添加し、
ホモジナイザー（ポリトロン）で約３０秒間攪拌しｓ／
ｏエマルションを得た。ついで、実施例１と同様にして
粉末状のマイクロカプセル１２１ｍｇを得た。

【００３４】実施例５ 顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）注射液〔フィル
グラスチンノイポージェン（Filgrastin Neupogen）
（商品名）、アムジェン社，米国〕１０ｍｌ（３×１０
⁸国際単位を含有）を希水酸化ナトリウム水溶液で中性
にしたのち、塩化亜鉛水溶液（１０ｍｇ／ｍｌ）１ｍｌ
を加え、室温で１時間放置した。得られる混合液を遠心
分離し、沈殿物を蒸留水に再度分散したのち、さらに遠
心分離により沈殿物を得た。該沈殿物に少量の蒸留水を
加えて凍結乾燥し、粗顆粒球コロニー刺激因子亜鉛塩４
ｍｇを粉末として得た。乳酸−グリコール酸共重合体
（乳酸／グリコール酸比＝50/50、分子量８，０００、
和光純薬製）０．５ｇをジクロロメタン１．５ｍｌに溶
解した溶液に、前記した粗顆粒球コロニー刺激因子亜鉛
塩４ｍｇを添加し、ホモジナイザー（ポリトロン）で約
３０秒間攪拌しｓ／ｏエマルションを得た。ついで、実
施例１と同様にして粉末状のマイクロカプセル１１０ｍ
ｇを得た。

【００３５】実施例６ ヒトインスリン（ヒト組換え体インスリン、和光純薬
製）５．２１ｍｇ（２６Ｕ／ｍｇ）を５７ｍＭ塩酸水溶
液０．６３ｍｌに溶解した後、０．０５Ｎ水酸化ナトリ
ウム水溶液０．３５ｍｌを加えて、ｐＨが中性付近のヒ
トインスリン溶液を得た。該ヒトインスリン溶液に酢酸
亜鉛水溶液（２０ｍｇ／ｍｌ）０．２ｍｌを加え、４℃
で１晩放置した。得られる混合液を約３，０００ｒｐｍ
で遠心分離し、沈殿物を蒸留水に再度分散したのち、さ
らに遠心分離により沈殿物を得た。該沈殿物に少量の蒸
留水を加えて凍結乾燥し、粗ヒトインスリン亜鉛塩１１
ｍｇを粉末として得た。乳酸−グリコール酸共重合体
（乳酸／グリコール酸比＝50/50、分子量６，０００、
和光純薬製）０．５ｇをジクロロメタン１．５ｍｌに溶
解した溶液に、前記した粗ヒトインスリン亜鉛塩１１ｍ
ｇを添加し、ホモジナイザー（ポリトロン）で約３０秒
間攪拌しｓ／ｏエマルションを得た。ついで、実施例１
と同様にして粉末状のマイクロカプセル１０５ｍｇを得
た。

【００３６】比較例 乳酸−グリコール酸共重合体（乳酸／グリコール酸比＝
50/50、分子量６，０００、和光純薬製）０．９ｇをジ
クロロメタン１．５ｍｌに溶解した。この溶液に亜鉛を
ほとんど含まないヒトインスリン１００ｍｇ（亜鉛含量
０．０００１％（w/w）以下）を添加し、ボルテックス
ミキサーにて混合後、ホモジナイザー（ポリトロン）で
約１０秒間撹拌しｓ／ｏエマルションを得た。ついで、
実施例１と同様にして粉末状のマイクロカプセル４７０
ｍｇを得た。得られたマイクロカプセル中のインスリン
含量を調べるため、３０％アセトニトリルを含有する５
０ｍＭのＥＤＴＡ溶液で３時間振とうして抽出し、高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で定量した。その
結果、マイクロカプセル１００ｍｇあたりインスリンを
８．７ｍｇ含有していた。

【００３７】実験例１ 実施例２で得られた粉末状のマイクロカプセル３２３ｍ
ｇを注射用分散媒（蒸留水１ｍｌあたり５ｍｇのカルボ
キシメチルセルロース、１ｍｇのポリソルベート８０、
５０ｍｇのマンニトールを溶解したもの）１ｍｌに分散
し、６週令の雄性ＳＤ系ラットの背部に皮下投与した
（インスリン投与量：一匹あたり約２０ｍｇ）。投与
後、経時的に尾部より採血し、血清中の豚インスリン濃
度を酵素免疫学的手法（ＥＩＡ）（三光純薬製）で測定
した。その結果、投与後１週間以上、血清中に活性を持
つ豚インスリンが検出された。

【００３８】実験例２ 実施例４で得られたマイクロカプセル７０ｍｇを注射用
分散媒（５ｇのカルボキシメチルセルロース、２ｇのポ
リソルベート８０および５０ｇのマンニトールを蒸留水
１Ｌに溶解した溶液）０．５ｍｌに分散して、６週齢雄
性ＳＤラットの背部に皮下投与した（成長ホルモン投与
量：一匹あたり約３ｍｇ）。投与後、経時的に尾部より
採血し、血清中の成長ホルモン濃度をラジオイムノアッ
セイ（ＲＩＡ）で測定した。その結果、投与後１週間以
上、血清中に活性を持つ成長ホルモンが検出された。

【００３９】比較実験例 比較例で得られた粉末状のマイクロカプセル１５４．７
ｍｇを注射用分散媒（蒸留水１ｍｌあたり５ｍｇのカル
ボキシメチルセルロース、１ｍｇのポリソルベート８
０、５０ｍｇのマンニトールを溶解したもの）１．７５
ｍｌに分散し、６週令の雄性ＳＤ系ラットの背部皮下投
与した（インスリン投与量：一匹あたり約４４ｍｇ）。
投与後、経時的に尾部より採血し、血清中のヒトインス
リン濃度を酵素免疫学的手法（ＥＩＡ）で測定した。そ
の結果、投与後１日目以降は、血清中にインスリンは、
ほとんど検出されなかった。

【００４０】

【発明の効果】本発明によれば、生理活性物質の封入効
率を高め、投与後初期の漏出を抑制した徐放性製剤が得
られる。また、本発明の徐放性製剤は、生体内投与後に
生理活性物質の生物活性を保持したまま徐放できる。さ
らに、徐放性製剤中の生理活性物質が長期間にわたって
安定に保たれ、生物活性の損失が少ない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 37/24 47/02 37/465 37/48 (72)発明者 岡田 弘晃 大阪府吹田市山田南44番11−704号

Claims (24)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】エンドセリン拮抗物質を除く水溶性ペプチ
   ド性生理活性物質の水不溶性または水難溶性多価金属塩
   と生体内分解性ポリマーとを含有してなる徐放性製剤。
2. 【請求項２】生理活性物質が水溶性ペプチドまたはその
   誘導体である請求項１記載の徐放性製剤。
3. 【請求項３】ペプチドがホルモン、サイトカイン、増血
   因子、増殖因子、酵素、可溶性または可溶化受容体、抗
   体、ペプチド性抗原、血液凝固因子または接着因子であ
   る請求項２記載の徐放性製剤。
4. 【請求項４】生理活性物質がホルモンである請求項１記
   載の徐放性製剤。
5. 【請求項５】ホルモンが成長ホルモンである請求項４記
   載の徐放性製剤。
6. 【請求項６】ホルモンがインスリンである請求項４記載
   の徐放性製剤。
7. 【請求項７】生理活性物質がサイトカインである請求項
   １記載の徐放性製剤。
8. 【請求項８】サイトカインがインターフェロンである請
   求項７記載の徐放性製剤。
9. 【請求項９】生理活性物質が増殖因子である請求項１記
   載の徐放性製剤。
10. 【請求項１０】多価金属塩が遷移金属塩である請求項１
    記載の徐放性製剤。
11. 【請求項１１】多価金属塩が亜鉛塩である請求項１記載
    の徐放性製剤。
12. 【請求項１２】多価金属塩の水に対する溶解度が約０な
    いし約０．１％（ｗ／ｗ）である請求項１記載の徐放性
    製剤。
13. 【請求項１３】多価金属塩を約０．１ないし約５０％
    （ｗ／ｗ）含有してなる請求項１記載の徐放性製剤。
14. 【請求項１４】生体内分解性ポリマーが脂肪族ポリエス
    テルである請求項１記載の徐放性製剤。
15. 【請求項１５】脂肪族ポリエステルが乳酸及びグリコー
    ル酸の重合体である請求項１４記載の徐放性製剤。
16. 【請求項１６】乳酸及びグリコール酸の組成比（モル／
    モル％）が１００／０ないし約４０／６０である請求項
    １５記載の徐放性製剤。
17. 【請求項１７】重合体の重量平均分子量が約３，０００
    ないし約２０，０００である請求項１５記載の徐放性製
    剤。
18. 【請求項１８】脂肪族ポリエステルが乳酸の単独重合物
    である請求項１４記載の徐放性製剤。
19. 【請求項１９】単独重合物の重量平均分子量が約３，０
    ００ないし約２０，０００である請求項１８記載の徐放
    性製剤。
20. 【請求項２０】マイクロカプセルである請求項１記載の
    徐放性製剤。
21. 【請求項２１】マイクロカプセルが注射用である請求項
    ２０記載の徐放性製剤。
22. 【請求項２２】注射用である請求項１記載の徐放性製
    剤。
23. 【請求項２３】徐放性製剤の製造のためのエンドセリン
    拮抗物質を除く水溶性ペプチド性生理活性物質の水不溶
    性または水難溶性多価金属塩および生体内分解性ポリマ
    ーの使用。
24. 【請求項２４】エンドセリン拮抗物質を除く水溶性ペプ
    チド性生理活性物質の水不溶性または水難溶性多価金属
    塩を生体内分解性ポリマーを含む油相に分散しｓ／ｏ型
    エマルションを調製し、得られたｓ／ｏ型エマルション
    を水相に添加しｓ／ｏ／ｗ型エマルションを調製し、次
    いで得られたｓ／ｏ／ｗ型エマルションを水中乾燥に付
    すことを特徴とする徐放性製剤の製造法。