JPH08252403A - シアリルラクトースの分離方法 - Google Patents
シアリルラクトースの分離方法Info
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- JPH08252403A JPH08252403A JP7061361A JP6136195A JPH08252403A JP H08252403 A JPH08252403 A JP H08252403A JP 7061361 A JP7061361 A JP 7061361A JP 6136195 A JP6136195 A JP 6136195A JP H08252403 A JPH08252403 A JP H08252403A
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Landscapes
- Treatment Of Liquids With Adsorbents In General (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【目的】 結合様式の異なるシアリルラクトースを分離
する方法を提供する。 【構成】 シアリルラクトースを含む原料溶液を擬似移
動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）に供給して、シアル
酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とがα２→
３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとα２→
６結合したＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを分離す
る。 【効果】 ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα
２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを工業的規模で大量かつ
簡便に分離することができる。
する方法を提供する。 【構成】 シアリルラクトースを含む原料溶液を擬似移
動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）に供給して、シアル
酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とがα２→
３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとα２→
６結合したＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを分離す
る。 【効果】 ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα
２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを工業的規模で大量かつ
簡便に分離することができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、シアリルラクトース中
に混在しているシアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→
４Ｇｌｃ）とがα２→３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃ及びシアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１
→４Ｇｌｃ）とがα２→６結合したＳＡα２→６Ｇａｌ
β１→４Ｇｌｃを結合様式の違いにより分離、回収する
方法に関する。
に混在しているシアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→
４Ｇｌｃ）とがα２→３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃ及びシアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１
→４Ｇｌｃ）とがα２→６結合したＳＡα２→６Ｇａｌ
β１→４Ｇｌｃを結合様式の違いにより分離、回収する
方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】シアリルラクトースは、乳中に多く含ま
れていることが知られており、感染防御活性などの生理
活性を有していることが知られている。近年、このシア
リルラクトースについては、結合様式の違いによりその
生理的効果が異なることが解明されつつある。例えば、
シアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とが
α２→３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃに
ついては、胃炎の原因菌といわれているカンピロバクタ
ー・ピロリ(Campylobacter pylori) の付着を阻害する
こと[Infect Immun., vol.56, pp.2896-2906, 1988] や
新生児の脳膜炎や敗血症の原因菌であるＳ型大腸菌の付
着を阻害すること[Acta Pediatr, vol.82,pp.6-11, 199
3] が報告されている。また、シアル酸（ＳＡ）と乳糖
（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とがα２→６結合したＳＡα
２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃについては、Ａ型インフル
エンザ・ウイルスのレセプターであることが報告されて
いる[Nature, vol.333, pp.426-431, 1988] 。
れていることが知られており、感染防御活性などの生理
活性を有していることが知られている。近年、このシア
リルラクトースについては、結合様式の違いによりその
生理的効果が異なることが解明されつつある。例えば、
シアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とが
α２→３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃに
ついては、胃炎の原因菌といわれているカンピロバクタ
ー・ピロリ(Campylobacter pylori) の付着を阻害する
こと[Infect Immun., vol.56, pp.2896-2906, 1988] や
新生児の脳膜炎や敗血症の原因菌であるＳ型大腸菌の付
着を阻害すること[Acta Pediatr, vol.82,pp.6-11, 199
3] が報告されている。また、シアル酸（ＳＡ）と乳糖
（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）とがα２→６結合したＳＡα
２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃについては、Ａ型インフル
エンザ・ウイルスのレセプターであることが報告されて
いる[Nature, vol.333, pp.426-431, 1988] 。
【０００３】このシアリルラクトースについては、通
常、牛乳などの乳から分離、回収されることが多い。し
かし、このシアリルラクトース中には、結合様式の異な
るＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇ
ａｌβ１→４Ｇｌｃとが混在しており、また、このＳＡ
α２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃとの乳中での存在比率は生物種や泌乳期に
より大きく異なることが知られている。例えば、ヒト初
乳中に含まれるＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳ
Ａα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比は約５：１
であるが、牛常乳中に含まれるＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存
在比は約１：６である。
常、牛乳などの乳から分離、回収されることが多い。し
かし、このシアリルラクトース中には、結合様式の異な
るＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇ
ａｌβ１→４Ｇｌｃとが混在しており、また、このＳＡ
α２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃとの乳中での存在比率は生物種や泌乳期に
より大きく異なることが知られている。例えば、ヒト初
乳中に含まれるＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳ
Ａα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比は約５：１
であるが、牛常乳中に含まれるＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存
在比は約１：６である。
【０００４】本発明者らは、先に擬似移動床式クロマト
分離装置（ＳＭＢ）を用いて牛乳などの乳からシアリル
ラクトースを工業的規模で分離、回収する方法について
提案している [特願平5-252462号] 。
分離装置（ＳＭＢ）を用いて牛乳などの乳からシアリル
ラクトースを工業的規模で分離、回収する方法について
提案している [特願平5-252462号] 。
【０００５】牛乳などの乳から分離、回収したシアリル
ラクトースについて、さらに、その結合様式の違いによ
り分離する方法としては、樹脂にシアリルラクトースを
吸着させた後、樹脂を水洗し、塩濃度勾配溶出法により
分離する方法[Biochem.Biophys Acta, vol.130, pp.1-1
1, 1966]やシリカゲル樹脂を用い有機溶媒で分離する方
法などが知られているが、これらの方法は操作が非常に
煩雑であり、しかも、工業的規模で連続的に大量処理す
るのに適した方法とはいえない。したがって、工業的規
模で大量かつ簡便にシアリルラクトースを結合様式の違
いにより分離する方法が求められていた。
ラクトースについて、さらに、その結合様式の違いによ
り分離する方法としては、樹脂にシアリルラクトースを
吸着させた後、樹脂を水洗し、塩濃度勾配溶出法により
分離する方法[Biochem.Biophys Acta, vol.130, pp.1-1
1, 1966]やシリカゲル樹脂を用い有機溶媒で分離する方
法などが知られているが、これらの方法は操作が非常に
煩雑であり、しかも、工業的規模で連続的に大量処理す
るのに適した方法とはいえない。したがって、工業的規
模で大量かつ簡便にシアリルラクトースを結合様式の違
いにより分離する方法が求められていた。
【０００６】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、シアリ
ルラクトースを結合様式の違いにより分離する方法につ
いて、鋭意研究を進めたところ、擬似移動床式クロマト
分離装置（ＳＭＢ）を用いて処理することにより、従来
なし得なかった工業的規模で大量かつ簡便にシアリルラ
クトースを結合様式の違いにより分離することが出来る
ことを見出し、本発明を完成するに至った。したがっ
て、本発明は、擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭ
Ｂ）を用いてシアリルラクトースを結合様式の違いによ
り分離する方法を提供することを課題とする。
ルラクトースを結合様式の違いにより分離する方法につ
いて、鋭意研究を進めたところ、擬似移動床式クロマト
分離装置（ＳＭＢ）を用いて処理することにより、従来
なし得なかった工業的規模で大量かつ簡便にシアリルラ
クトースを結合様式の違いにより分離することが出来る
ことを見出し、本発明を完成するに至った。したがっ
て、本発明は、擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭ
Ｂ）を用いてシアリルラクトースを結合様式の違いによ
り分離する方法を提供することを課題とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、先に擬似
移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い酸性オリゴ
糖であるグルクロン酸含有オリゴ糖を連続的に分離する
方法について提案した[特開平6-253879号公報] 。ま
た、擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用いシ
アリルラクトースを連続的に分離する方法についても提
案している [特願平5-252462号] 。そして、これらの擬
似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い糖質を連
続的に分離する方法を研究することにより蓄積した知見
を基に、シアリルラクトースを結合様式の違いにより分
離する方法について鋭意研究を重ねたところ、擬似移動
床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い、アニオン交換
樹脂を充填剤として処理条件を最適化することにより、
ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａ
ｌβ１→４Ｇｌｃとを連続的に分離、回収することがで
きるということを見出した。
移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い酸性オリゴ
糖であるグルクロン酸含有オリゴ糖を連続的に分離する
方法について提案した[特開平6-253879号公報] 。ま
た、擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用いシ
アリルラクトースを連続的に分離する方法についても提
案している [特願平5-252462号] 。そして、これらの擬
似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い糖質を連
続的に分離する方法を研究することにより蓄積した知見
を基に、シアリルラクトースを結合様式の違いにより分
離する方法について鋭意研究を重ねたところ、擬似移動
床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）を用い、アニオン交換
樹脂を充填剤として処理条件を最適化することにより、
ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａ
ｌβ１→４Ｇｌｃとを連続的に分離、回収することがで
きるということを見出した。
【０００８】本発明では、シアリルラクトースを結合様
式の違いにより分離する際に擬似移動床式クロマト分離
装置（ＳＭＢ）を用いる。そして、ＳＭＢの充填剤とし
てアニオン交換樹脂を用いる。アニオン交換樹脂につい
ては、特に限定はないが、強塩基性アニオン交換樹脂Ｉ
型であり、好ましくは、架橋度２〜８％で対イオンが酢
酸型のものを用いると良い。なお、この強塩基性アニオ
ン交換樹脂Ｉ型の樹脂としては、アンバーライト XT-50
21（オルガノ社製）、Dowex 1x4 （ダウ・ケミカル社
製）、ダイヤイオン SAIIA (三菱化学社製）などが市販
されている。
式の違いにより分離する際に擬似移動床式クロマト分離
装置（ＳＭＢ）を用いる。そして、ＳＭＢの充填剤とし
てアニオン交換樹脂を用いる。アニオン交換樹脂につい
ては、特に限定はないが、強塩基性アニオン交換樹脂Ｉ
型であり、好ましくは、架橋度２〜８％で対イオンが酢
酸型のものを用いると良い。なお、この強塩基性アニオ
ン交換樹脂Ｉ型の樹脂としては、アンバーライト XT-50
21（オルガノ社製）、Dowex 1x4 （ダウ・ケミカル社
製）、ダイヤイオン SAIIA (三菱化学社製）などが市販
されている。
【０００９】ＳＭＢの溶離液については、pHが１〜10の
範囲のものであれば特に限定はないが、好ましくは、pH
が４〜５の酢酸緩衝液を用いると良い。なお、酢酸緩衝
液としては、酢酸ナトリウム緩衝液や酢酸アンモニウム
緩衝液などを例示できる。また、塩濃度が0.01〜1.5Mの
範囲のものであれば特に限定はないが、好ましくは、塩
濃度が0.05〜0.1Mのものを用いると良い。
範囲のものであれば特に限定はないが、好ましくは、pH
が４〜５の酢酸緩衝液を用いると良い。なお、酢酸緩衝
液としては、酢酸ナトリウム緩衝液や酢酸アンモニウム
緩衝液などを例示できる。また、塩濃度が0.01〜1.5Mの
範囲のものであれば特に限定はないが、好ましくは、塩
濃度が0.05〜0.1Mのものを用いると良い。
【００１０】擬似移動床式クロマト分離装置（ＳＭＢ）
を用い、このような条件で処理することで、工業的規模
で大量かつ簡便にシアリルラクトースを結合様式の違い
により分離することができる。
を用い、このような条件で処理することで、工業的規模
で大量かつ簡便にシアリルラクトースを結合様式の違い
により分離することができる。
【００１１】以下に実施例を示し、本発明を具体的に説
明する。なお、シアリルラクトースについては、薄層ク
ロマトグラフィー（Art13927、メルク社製）により、ｎ
−プロパノール：アンモニア：水＝120:2.5:57.5の展開
液で展開し、レゾルシノールで発色させてクロマトスキ
ャナー（CS-930、島津製作所製）で定量した。
明する。なお、シアリルラクトースについては、薄層ク
ロマトグラフィー（Art13927、メルク社製）により、ｎ
−プロパノール：アンモニア：水＝120:2.5:57.5の展開
液で展開し、レゾルシノールで発色させてクロマトスキ
ャナー（CS-930、島津製作所製）で定量した。
【００１２】
【参考例１】限外濾過装置で脱脂乳から蛋白質を除去
し、シーディングにより生成した乳糖結晶を除去した乳
糖結晶母液をエバポレーターで固形率30％となるまで濃
縮したものをＳＭＢ処理液とした。また、脱イオン水を
ＳＭＢ溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラム直径25mm
長さ460mm の８塔型で、各々、カチオン交換樹脂 UBK51
0L（三菱化学社製）の対イオンをＮａ型として充填した
ものを用いた。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給
量3.4ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量5.8ml/分、エキストラ
クト抜き出し量5.0ml/分、ラフィネート抜き出し量4.2m
l/分、カラム温度10℃、ステップ時間7.40分とした。
し、シーディングにより生成した乳糖結晶を除去した乳
糖結晶母液をエバポレーターで固形率30％となるまで濃
縮したものをＳＭＢ処理液とした。また、脱イオン水を
ＳＭＢ溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラム直径25mm
長さ460mm の８塔型で、各々、カチオン交換樹脂 UBK51
0L（三菱化学社製）の対イオンをＮａ型として充填した
ものを用いた。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給
量3.4ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量5.8ml/分、エキストラ
クト抜き出し量5.0ml/分、ラフィネート抜き出し量4.2m
l/分、カラム温度10℃、ステップ時間7.40分とした。
【００１３】以上のＳＭＢ処理条件で乳糖結晶母液濃縮
液46.5リットルを処理したところ、ラフィネートにシア
リルラクトースを含む画分69.0リットルを得た。次に、
このラフィネートをロータリーエバポレーターで固形率
30％となるまで濃縮した後、再びＳＭＢ処理液とし、同
様の条件で処理した。このようにして得られたシアリル
ラクトース画分を濃縮し、凍結乾燥して純度99％のシア
リルラクトース900gを得た。
液46.5リットルを処理したところ、ラフィネートにシア
リルラクトースを含む画分69.0リットルを得た。次に、
このラフィネートをロータリーエバポレーターで固形率
30％となるまで濃縮した後、再びＳＭＢ処理液とし、同
様の条件で処理した。このようにして得られたシアリル
ラクトース画分を濃縮し、凍結乾燥して純度99％のシア
リルラクトース900gを得た。
【００１４】
【実施例１】参考例１のようにして得られた牛乳由来の
シアリルラクトース中に混在するＳＡα２→３Ｇａｌβ
１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの
分離を試みた。なお、ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌ
ｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比は1
3：２であった。
シアリルラクトース中に混在するＳＡα２→３Ｇａｌβ
１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの
分離を試みた。なお、ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌ
ｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比は1
3：２であった。
【００１５】牛乳由来のシアリルラクトースを含む溶液
を 0.07M酢酸緩衝液(pH 4.5)で固形率が10％となるよう
希釈し、ＳＭＢ処理液とした。また、 0.07M酢酸緩衝液
(pH4.5)をＳＭＢ溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラ
ム直径30mm長さ500mm の８塔型で、各々、アニオン交換
樹脂 Dowex 1x4（ダウ・ケミカル社製）を充填したもの
を用いた。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給量
1.64ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量 3.99ml/分、エキスト
ラクト抜き出し量 2.82ml/分、ラフィネート抜き出し量
2.82ml/分、カラム温度15℃、ステップ時間159.56分と
した。
を 0.07M酢酸緩衝液(pH 4.5)で固形率が10％となるよう
希釈し、ＳＭＢ処理液とした。また、 0.07M酢酸緩衝液
(pH4.5)をＳＭＢ溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラ
ム直径30mm長さ500mm の８塔型で、各々、アニオン交換
樹脂 Dowex 1x4（ダウ・ケミカル社製）を充填したもの
を用いた。ＳＭＢの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給量
1.64ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量 3.99ml/分、エキスト
ラクト抜き出し量 2.82ml/分、ラフィネート抜き出し量
2.82ml/分、カラム温度15℃、ステップ時間159.56分と
した。
【００１６】以上のＳＭＢ処理条件でシアリルラクトー
ス含有溶液 7.1リットルを処理したところ、ラフィネー
トにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分12.2
リットル及びエキストラクトにＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを含
む画分12.2リットルをそれぞれ得た。次に、このラフィ
ネート及びエキストラクトそれぞれをロータリーエバポ
レーター（柴田科学機械工業社製）で３リットルとなる
まで濃縮した後、電気透析装置（TS-2型、トクヤマ社
製）で脱塩した。そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡ
α２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ粉末246g及びＳＡα２→
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が３：７の白色粉末320gを得た。
ス含有溶液 7.1リットルを処理したところ、ラフィネー
トにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分12.2
リットル及びエキストラクトにＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを含
む画分12.2リットルをそれぞれ得た。次に、このラフィ
ネート及びエキストラクトそれぞれをロータリーエバポ
レーター（柴田科学機械工業社製）で３リットルとなる
まで濃縮した後、電気透析装置（TS-2型、トクヤマ社
製）で脱塩した。そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡ
α２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ粉末246g及びＳＡα２→
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が３：７の白色粉末320gを得た。
【００１７】
【実施例２】実施例１のようにして得られたＳＡα２→
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が３：７の白色粉末を0.5M酢酸ナトリ
ウムで固形率が５％となるよう溶解し、ＳＭＢ処理液と
した。また、0.5M酢酸ナトリウム溶液をＳＭＢ溶離液と
した。なお、ＳＭＢは、カラム直径30mm長さ500mm の８
塔型で、各々、アニオン交換樹脂 XT5021(三菱化学社
製）を充填したものを用いた。ＳＭＢの運転条件は、Ｓ
ＭＢ処理液供給量 0.72ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量 3.0
7ml/分、エキストラクト抜き出し量 1.90ml/分、ラフィ
ネート抜き出し量1.90ml/分、カラム温度15℃、ステッ
プ時間 26.04分とした。
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が３：７の白色粉末を0.5M酢酸ナトリ
ウムで固形率が５％となるよう溶解し、ＳＭＢ処理液と
した。また、0.5M酢酸ナトリウム溶液をＳＭＢ溶離液と
した。なお、ＳＭＢは、カラム直径30mm長さ500mm の８
塔型で、各々、アニオン交換樹脂 XT5021(三菱化学社
製）を充填したものを用いた。ＳＭＢの運転条件は、Ｓ
ＭＢ処理液供給量 0.72ml/分、ＳＭＢ溶離液供給量 3.0
7ml/分、エキストラクト抜き出し量 1.90ml/分、ラフィ
ネート抜き出し量1.90ml/分、カラム温度15℃、ステッ
プ時間 26.04分とした。
【００１８】以上のＳＭＢ処理条件でＳＡα２→３Ｇａ
ｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ
とを３：７の割合で含有する溶液 4.0リットルを処理し
たところ、ラフィネートにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃを含む画分 10.56リットル及びエキストラクトに
ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分 10.56リ
ットルをそれぞれ得た。次に、このラフィネート及びエ
キストラクトそれぞれをロータリーエバポレーターで３
リットルとなるまで濃縮した後、電気透析装置で脱塩し
た。そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡα２→３Ｇａ
ｌβ１→４Ｇｌｃ粉末7.8g及びＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存
在比が１：４の白色粉末 55gを得た。
ｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ
とを３：７の割合で含有する溶液 4.0リットルを処理し
たところ、ラフィネートにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃを含む画分 10.56リットル及びエキストラクトに
ＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分 10.56リ
ットルをそれぞれ得た。次に、このラフィネート及びエ
キストラクトそれぞれをロータリーエバポレーターで３
リットルとなるまで濃縮した後、電気透析装置で脱塩し
た。そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡα２→３Ｇａ
ｌβ１→４Ｇｌｃ粉末7.8g及びＳＡα２→３Ｇａｌβ１
→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存
在比が１：４の白色粉末 55gを得た。
【００１９】
【実施例３】実施例２のようにして得られたＳＡα２→
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が１：４の白色粉末を 0.07M酢酸緩衝
液(pH 4.5)で固形率が10％となるよう溶解し、ＳＭＢ処
理液とした。また、 0.07M酢酸緩衝液(pH 4.5)をＳＭＢ
溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラム直径30mm長さ50
0mm の８塔型で、各々、アニオン交換樹脂 Dowex 1x4
（ダウ・ケミカル社製）を充填したものを用いた。ＳＭ
Ｂの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給量 1.64ml/分、ＳＭ
Ｂ溶離液供給量 3.99ml/分、エキストラクト抜き出し量
2.82ml/分、ラフィネート抜き出し量 2.82ml/分、カラ
ム温度15℃、ステップ時間159.56分とした。
３Ｇａｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃとの存在比が１：４の白色粉末を 0.07M酢酸緩衝
液(pH 4.5)で固形率が10％となるよう溶解し、ＳＭＢ処
理液とした。また、 0.07M酢酸緩衝液(pH 4.5)をＳＭＢ
溶離液とした。なお、ＳＭＢは、カラム直径30mm長さ50
0mm の８塔型で、各々、アニオン交換樹脂 Dowex 1x4
（ダウ・ケミカル社製）を充填したものを用いた。ＳＭ
Ｂの運転条件は、ＳＭＢ処理液供給量 1.64ml/分、ＳＭ
Ｂ溶離液供給量 3.99ml/分、エキストラクト抜き出し量
2.82ml/分、ラフィネート抜き出し量 2.82ml/分、カラ
ム温度15℃、ステップ時間159.56分とした。
【００２０】以上のＳＭＢ処理条件でＳＡα２→３Ｇａ
ｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ
とを１：４の割合で含有する溶液 3.0リットルを処理し
たところ、ラフィネートにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃを含む画分5.15リットル及びエキストラクトにＳ
Ａα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分5.15リット
ルをそれぞれ得た。次に、このラフィネート及びエキス
トラクトそれぞれをロータリーエバポレーターで２リッ
トルとなるまで濃縮した後、電気透析装置で脱塩した。
そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡα２→６Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃ粉末 22g及びＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比
が１：２の白色粉末 25gを得た。
ｌβ１→４ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ
とを１：４の割合で含有する溶液 3.0リットルを処理し
たところ、ラフィネートにＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃを含む画分5.15リットル及びエキストラクトにＳ
Ａα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを含む画分5.15リット
ルをそれぞれ得た。次に、このラフィネート及びエキス
トラクトそれぞれをロータリーエバポレーターで２リッ
トルとなるまで濃縮した後、電気透析装置で脱塩した。
そして、凍結乾燥し、純度99％のＳＡα２→６Ｇａｌβ
１→４Ｇｌｃ粉末 22g及びＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４
ＧｌｃとＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとの存在比
が１：２の白色粉末 25gを得た。
【００２１】
【発明の効果】本発明の方法によると、シアリルラクト
ース中に混在するＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃと
ＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを工業的規模で大
量かつ簡便に分離することができる。したがって、高純
度のＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ及びＳＡα２→
６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを大量かつ安価に提供できるの
で、これらの素材を飲食品、医薬品、化粧品、飼料など
に利用することが容易となる。
ース中に混在するＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃと
ＳＡα２→６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃとを工業的規模で大
量かつ簡便に分離することができる。したがって、高純
度のＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ及びＳＡα２→
６Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃを大量かつ安価に提供できるの
で、これらの素材を飲食品、医薬品、化粧品、飼料など
に利用することが容易となる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 守田 稔 埼玉県川越市仙波町３丁目２−５ ＹＳハ イツ第二202 (72)発明者 石川 秀敏 北海道札幌市手稲区前田３条３丁目８−３
Claims (2)
- 【請求項１】 結合様式の異なるシアリルラクトースを
含む原料溶液を擬似移動床式クロマト分離装置に供給し
て、シアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４Ｇｌｃ）
とがα２→３結合したＳＡα２→３Ｇａｌβ１→４Ｇｌ
ｃ及び／又はシアル酸（ＳＡ）と乳糖（Ｇａｌβ１→４
Ｇｌｃ）とがα２→６結合したＳＡα２→６Ｇａｌβ１
→４Ｇｌｃを分離することを特徴とするシアリルラクト
ースの分離方法。 - 【請求項２】 擬似移動床式クロマト分離装置の分離剤
としてアニオン交換樹脂を用い、溶離液として塩濃度が
0.01〜1.5MでpHが１〜10の溶液を用いる請求項１記載の
分離方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06136195A JP4082746B2 (ja) | 1995-03-20 | 1995-03-20 | シアリルラクトースの分離方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP06136195A JP4082746B2 (ja) | 1995-03-20 | 1995-03-20 | シアリルラクトースの分離方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08252403A true JPH08252403A (ja) | 1996-10-01 |
| JP4082746B2 JP4082746B2 (ja) | 2008-04-30 |
Family
ID=13168957
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP06136195A Expired - Fee Related JP4082746B2 (ja) | 1995-03-20 | 1995-03-20 | シアリルラクトースの分離方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4082746B2 (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006117597A (ja) * | 2004-10-22 | 2006-05-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ヒト免疫不全ウイルス感染・増殖抑制剤 |
| WO2011040360A1 (ja) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | 雪印乳業株式会社 | シアリルラクトース素材の分離方法 |
| WO2011040361A1 (ja) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | 雪印乳業株式会社 | シアリルラクトース素材の分離方法 |
| JP2012505928A (ja) * | 2008-10-20 | 2012-03-08 | ベネバイオシス カンパニー リミテッド | 眼疾患の予防又は治療用組成物 |
| WO2017086443A1 (ja) | 2015-11-18 | 2017-05-26 | 協和発酵バイオ株式会社 | ６'－シアリルラクトースナトリウム塩の結晶およびその製造方法 |
| WO2017195743A1 (ja) | 2016-05-09 | 2017-11-16 | 協和発酵バイオ株式会社 | ３'－シアリルラクトースナトリウム塩・ｎ水和物の結晶及びその製造方法 |
-
1995
- 1995-03-20 JP JP06136195A patent/JP4082746B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006117597A (ja) * | 2004-10-22 | 2006-05-11 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | ヒト免疫不全ウイルス感染・増殖抑制剤 |
| JP2012505928A (ja) * | 2008-10-20 | 2012-03-08 | ベネバイオシス カンパニー リミテッド | 眼疾患の予防又は治療用組成物 |
| WO2011040360A1 (ja) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | 雪印乳業株式会社 | シアリルラクトース素材の分離方法 |
| WO2011040361A1 (ja) | 2009-09-29 | 2011-04-07 | 雪印乳業株式会社 | シアリルラクトース素材の分離方法 |
| WO2017086443A1 (ja) | 2015-11-18 | 2017-05-26 | 協和発酵バイオ株式会社 | ６'－シアリルラクトースナトリウム塩の結晶およびその製造方法 |
| JPWO2017086443A1 (ja) * | 2015-11-18 | 2018-08-30 | 協和発酵バイオ株式会社 | ６’−シアリルラクトースナトリウム塩の結晶およびその製造方法 |
| US10745432B2 (en) | 2015-11-18 | 2020-08-18 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Crystal of 6′-sialyllactose sodium salt, and process for producing same |
| WO2017195743A1 (ja) | 2016-05-09 | 2017-11-16 | 協和発酵バイオ株式会社 | ３'－シアリルラクトースナトリウム塩・ｎ水和物の結晶及びその製造方法 |
| KR20190005162A (ko) | 2016-05-09 | 2019-01-15 | 교와 핫꼬 바이오 가부시키가이샤 | 3'-시알릴락토오스나트륨염·n수화물의 결정 및 그 제조 방법 |
| US11008355B2 (en) | 2016-05-09 | 2021-05-18 | Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. | Crystal of 3'-sialyllactose sodium salt n-hydrate, and process for producing same |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4082746B2 (ja) | 2008-04-30 |
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