JPH08317787A - 大腸菌群発育用生培地 - Google Patents
大腸菌群発育用生培地Info
- Publication number
- JPH08317787A JPH08317787A JP12482295A JP12482295A JPH08317787A JP H08317787 A JPH08317787 A JP H08317787A JP 12482295 A JP12482295 A JP 12482295A JP 12482295 A JP12482295 A JP 12482295A JP H08317787 A JPH08317787 A JP H08317787A
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- JP
- Japan
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- medium
- sodium lauryl
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Abstract
(57)【要約】
【構成】 ラウリル硫酸ナトリウムが存在する生培地に
おいて、リン酸一水素二カリウムに換えてリン酸一水素
二ナトリウムを用いることを特徴とする大腸菌群発育用
生培地。 【効果】 低温で長期間保存してもラウリル硫酸ナトリ
ウムが晶出することがなく、安定であり、リン酸一水素
二カリウムを用いた場合と菌の発育性、選択性、緩衝性
に変化はない。
おいて、リン酸一水素二カリウムに換えてリン酸一水素
二ナトリウムを用いることを特徴とする大腸菌群発育用
生培地。 【効果】 低温で長期間保存してもラウリル硫酸ナトリ
ウムが晶出することがなく、安定であり、リン酸一水素
二カリウムを用いた場合と菌の発育性、選択性、緩衝性
に変化はない。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は食品等の検体中に存在す
る大腸菌群を発育、更には検出させるための生培地に関
し、詳細には低温で長期間保存しても結晶の析出がなく
安定な大腸菌群発育用生培地に関する。
る大腸菌群を発育、更には検出させるための生培地に関
し、詳細には低温で長期間保存しても結晶の析出がなく
安定な大腸菌群発育用生培地に関する。
【０００２】
【従来の技術】食品、薬品等に代表されるヒトが摂取す
るものの安全性については厳しい管理がなされており、
特に微生物の有無の判定は重要である。このうち、食品
中の大腸菌群の有無の判定は日常検査として特に重要で
ある。食品中の大腸菌群の検出法としては、従来、食品
サンプルを滅菌生理食塩水等に懸濁してストマッキング
して得られた懸濁液を段階希釈した後、デゾキシコレー
ト培地を用いて２４時間培養した後、発育したコロニー
数を算出する方法、あるいはブリリアントグリーン乳糖
ブイヨン（ＢＧＬＢ）、乳糖ブイヨン等を用いて２４〜
４８時間培養した後、ガスの産生が認められる試験管の
本数を数えて菌数を算定する方法が知られている。しか
しながら前者の方法では、コロニーの計測の際に赤色培
地上の典型的な赤色コロニーを判別しなければならず、
その操作には経験を要すること、また、後者の方法では
ガスの産生が微妙である場合の確認には細心の注意が必
要である等の問題があった。
るものの安全性については厳しい管理がなされており、
特に微生物の有無の判定は重要である。このうち、食品
中の大腸菌群の有無の判定は日常検査として特に重要で
ある。食品中の大腸菌群の検出法としては、従来、食品
サンプルを滅菌生理食塩水等に懸濁してストマッキング
して得られた懸濁液を段階希釈した後、デゾキシコレー
ト培地を用いて２４時間培養した後、発育したコロニー
数を算出する方法、あるいはブリリアントグリーン乳糖
ブイヨン（ＢＧＬＢ）、乳糖ブイヨン等を用いて２４〜
４８時間培養した後、ガスの産生が認められる試験管の
本数を数えて菌数を算定する方法が知られている。しか
しながら前者の方法では、コロニーの計測の際に赤色培
地上の典型的な赤色コロニーを判別しなければならず、
その操作には経験を要すること、また、後者の方法では
ガスの産生が微妙である場合の確認には細心の注意が必
要である等の問題があった。
【０００３】一方、蛍光基質を利用した蛍光法が開発さ
れ、より迅速で簡便な微生物の検出が可能となった（特
開昭５６−６４７９７号公報及び特開昭５７−１４４９
９５号公報）。更に近年、大腸菌群増殖用培地としてジ
ェネレイションタイムが速く、増殖率がよく、しかもラ
ッグフェイズがない大腸菌群用増殖培地（特開平４−５
１８９０号公報）や、より透明度が高く大腸菌群を明瞭
に検出するのに適した培地（特開平６−４６８９１号公
報）等が検討されている。
れ、より迅速で簡便な微生物の検出が可能となった（特
開昭５６−６４７９７号公報及び特開昭５７−１４４９
９５号公報）。更に近年、大腸菌群増殖用培地としてジ
ェネレイションタイムが速く、増殖率がよく、しかもラ
ッグフェイズがない大腸菌群用増殖培地（特開平４−５
１８９０号公報）や、より透明度が高く大腸菌群を明瞭
に検出するのに適した培地（特開平６−４６８９１号公
報）等が検討されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、後者
（特開平６−４６８９１号公報）の培地は、培地調製
後、すなわち生培地とした後、直ちに使用すれば何ら問
題は生じないものの、培地調製後４〜１５℃の低温で３
〜４日以上保存しておくと結晶物の析出が起こり、培地
としての性能に問題はないものの商品価値が半減してし
まうという問題が生じる。
（特開平６−４６８９１号公報）の培地は、培地調製
後、すなわち生培地とした後、直ちに使用すれば何ら問
題は生じないものの、培地調製後４〜１５℃の低温で３
〜４日以上保存しておくと結晶物の析出が起こり、培地
としての性能に問題はないものの商品価値が半減してし
まうという問題が生じる。
【０００５】従って、本発明の目的は、このような結晶
の析出がなく、安定な大腸菌群発育用生培地を提供する
ことにある。
の析出がなく、安定な大腸菌群発育用生培地を提供する
ことにある。
【０００６】
【課題を解決するための手段】斯かる実状において本発
明者らは種々の培地成分について鋭意研究を行った結
果、培地成分中のラウリル硫酸ナトリウムが、リン酸一
水素二カリウムにより結晶化することを見出し、更にリ
ン酸一水素二カリウムに換わる成分を鋭意探索したとこ
ろ、リン酸一水素二カリウムに換えてリン酸一水素二ナ
トリウムを用いれば、低温保存においても結晶の析出が
なく、培地の性能が保持できる大腸菌群発育用生培地が
得られることを見出し、本発明を完成した。
明者らは種々の培地成分について鋭意研究を行った結
果、培地成分中のラウリル硫酸ナトリウムが、リン酸一
水素二カリウムにより結晶化することを見出し、更にリ
ン酸一水素二カリウムに換わる成分を鋭意探索したとこ
ろ、リン酸一水素二カリウムに換えてリン酸一水素二ナ
トリウムを用いれば、低温保存においても結晶の析出が
なく、培地の性能が保持できる大腸菌群発育用生培地が
得られることを見出し、本発明を完成した。
【０００７】すなわち、本発明は、ラウリル硫酸ナトリ
ウムが存在する生培地において、リン酸一水素二カリウ
ムに換えてリン酸一水素二ナトリウムを用いることを特
徴とする大腸菌群発育用生培地を提供するものである。
ウムが存在する生培地において、リン酸一水素二カリウ
ムに換えてリン酸一水素二ナトリウムを用いることを特
徴とする大腸菌群発育用生培地を提供するものである。
【０００８】本発明において大腸菌群とは、ラクトース
分解酵素を産生する能力を有する一群の微生物で、エシ
ェリシア属、サイトロバクター属、クレブシエラ属、エ
ンテロバクター属等に属するものをいう。
分解酵素を産生する能力を有する一群の微生物で、エシ
ェリシア属、サイトロバクター属、クレブシエラ属、エ
ンテロバクター属等に属するものをいう。
【０００９】本発明の大腸菌群発育用生培地としては、
ラウリル硫酸ナトリウムが存在し、大腸菌群が発育する
生培地であれば特に限定されないが、好ましい培地とし
て、重量で、ペプトン１．０〜２．５％、塩化ナトリウ
ム０．２５〜０．５％、酵母エキス０．４〜０．６％、
リン酸一水素二ナトリウム０．１〜０．５％、ピルビン
酸ナトリウム０．０５〜５．０％、硝酸カリウム０．０
５〜１．０％及びラウリル硫酸ナトリウム０．０１〜
１．０％を含有する大腸菌群発育用生培地が挙げられ
る。
ラウリル硫酸ナトリウムが存在し、大腸菌群が発育する
生培地であれば特に限定されないが、好ましい培地とし
て、重量で、ペプトン１．０〜２．５％、塩化ナトリウ
ム０．２５〜０．５％、酵母エキス０．４〜０．６％、
リン酸一水素二ナトリウム０．１〜０．５％、ピルビン
酸ナトリウム０．０５〜５．０％、硝酸カリウム０．０
５〜１．０％及びラウリル硫酸ナトリウム０．０１〜
１．０％を含有する大腸菌群発育用生培地が挙げられ
る。
【００１０】本発明の培地は、前記成分を混合して液体
培地として用いることもできるが、これに寒天０．１〜
２重量％を添加して寒天培地としてもよい。
培地として用いることもできるが、これに寒天０．１〜
２重量％を添加して寒天培地としてもよい。
【００１１】本発明の生培地には、更に発色酵素基質又
は蛍光酵素基質を添加して、大腸菌群検出用の培地とす
ることができる。ここで、発色酵素基質としては、例え
ば５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド
（Ｂｌｕｇａｌ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）等
が挙げられ、蛍光酵素基質としては、例えば４−メチル
−ウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド（４−ＭＵ
Ｇａｌ）等が挙げられる。
は蛍光酵素基質を添加して、大腸菌群検出用の培地とす
ることができる。ここで、発色酵素基質としては、例え
ば５−ブロモ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトシド
（Ｂｌｕｇａｌ）、５−ブロモ−４−クロロ−３−イン
ドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシド（Ｘ−Ｇａｌ）等
が挙げられ、蛍光酵素基質としては、例えば４−メチル
−ウンベリフェリル−β−Ｄ−ガラクトシド（４−ＭＵ
Ｇａｌ）等が挙げられる。
【００１２】これらの酵素基質は通常無色であるが、大
腸菌群が存在すると、これが産生するβ−ガラクトシダ
ーゼの作用によって前者は５−ブロモ−３−インドリン
又は５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリンが酸化反
応を経て青緑色に呈色し、後者は４−メチル−ウンベリ
フェロンが生成し３６５nmの波長で励起されて４５０nm
の蛍光を発する。それぞれの変化を確認することにより
大腸菌群の存在を確認することができる。これら発色酵
素基質又は蛍光酵素基質は、本発明の培地中に１０-4〜
１０-2Ｍ程度添加するのが好ましい。
腸菌群が存在すると、これが産生するβ−ガラクトシダ
ーゼの作用によって前者は５−ブロモ−３−インドリン
又は５−ブロモ−４−クロロ−３−インドリンが酸化反
応を経て青緑色に呈色し、後者は４−メチル−ウンベリ
フェロンが生成し３６５nmの波長で励起されて４５０nm
の蛍光を発する。それぞれの変化を確認することにより
大腸菌群の存在を確認することができる。これら発色酵
素基質又は蛍光酵素基質は、本発明の培地中に１０-4〜
１０-2Ｍ程度添加するのが好ましい。
【００１３】このような培地を用いて、被検体中の大腸
菌群の存在を検出するには、当該培地に被検体を接種し
て３０〜４４．５℃で数時間〜十数時間培養した後、呈
色又は蛍光測定をすればよい。
菌群の存在を検出するには、当該培地に被検体を接種し
て３０〜４４．５℃で数時間〜十数時間培養した後、呈
色又は蛍光測定をすればよい。
【００１４】
【発明の効果】本発明の大腸菌群発育用生培地は、４〜
１５℃の低温で長期間保存してもラウリル硫酸ナトリウ
ムが晶出することがなく、安定であり、リン酸一水素二
カリウムを用いた場合と菌の発育性、選択性に変化は生
じない。また、発色酵素基質又は蛍光酵素基質を添加し
て大腸菌検出用の培地にすれば、検体中の大腸菌群を迅
速かつ高感度に判定することができる。
１５℃の低温で長期間保存してもラウリル硫酸ナトリウ
ムが晶出することがなく、安定であり、リン酸一水素二
カリウムを用いた場合と菌の発育性、選択性に変化は生
じない。また、発色酵素基質又は蛍光酵素基質を添加し
て大腸菌検出用の培地にすれば、検体中の大腸菌群を迅
速かつ高感度に判定することができる。
【００１５】
【実施例】以下、実施例を挙げて更に詳細に説明する
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
が、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１６】実施例１ 下記表１に示すＸ−Ｇａｌスタンプ培地のリン酸一水素
二カリウムを、リン酸一水素二ナトリウム又は３−（Ｎ
−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）（同仁
化学社製）に換えるか、又は無添加の生培地を調製し、
４℃で１０日間保存し結晶が析出するか否かを調べた。
結果を表２に示す。
二カリウムを、リン酸一水素二ナトリウム又は３−（Ｎ
−モルホリノ）プロパンスルホン酸（ＭＯＰＳ）（同仁
化学社製）に換えるか、又は無添加の生培地を調製し、
４℃で１０日間保存し結晶が析出するか否かを調べた。
結果を表２に示す。
【００１７】
【表１】
【００１８】
【表２】
【００１９】この結果、リン酸一水素二カリウムを用い
たものは結晶が観察され、ＭＯＰＳを用いたものは培地
表面に雪結晶様の析出が認められたが、本発明のリン酸
一水素二ナトリウムを用いた培地は結晶の析出が観察さ
れなかった。
たものは結晶が観察され、ＭＯＰＳを用いたものは培地
表面に雪結晶様の析出が認められたが、本発明のリン酸
一水素二ナトリウムを用いた培地は結晶の析出が観察さ
れなかった。
【００２０】実施例２ ラウリル硫酸ナトリウム及び下記表３に示す緩衝剤を含
む１．５％寒天添加平板培地を調製し、４℃及び１５℃
で保存したときの、１０日後における結晶の析出を観察
した。結果を表３に示す。
む１．５％寒天添加平板培地を調製し、４℃及び１５℃
で保存したときの、１０日後における結晶の析出を観察
した。結果を表３に示す。
【００２１】
【表３】
【００２２】実施例３ 表４に示す各種培地について、４℃及び１５℃で１０日
間保存後の結晶の析出を観察した。結果を表４に示す。
間保存後の結晶の析出を観察した。結果を表４に示す。
【００２３】
【表４】
【００２４】この結果、リン酸一水素二カリウム及びリ
ン酸二水素一カリウムを含有する培地は結晶の析出が認
められたが、本発明のリン酸一水素二ナトリウムを用い
たものは結晶の析出が観察されなかった。
ン酸二水素一カリウムを含有する培地は結晶の析出が認
められたが、本発明のリン酸一水素二ナトリウムを用い
たものは結晶の析出が観察されなかった。
【００２５】実施例４ 前記表２に示した如く、Ｘ−Ｇａｌスタンプ培地中のリ
ン酸一水素二カリウムをリン酸一水素二ナトリウム又は
ＭＯＰＳに換えたもの又は無添加のものの緩衝作用を調
べた。試験はこれら培地に０．１Ｍ ＮａＣｌ、０．１
Ｍ ＨＣｌ又は０．１Ｍ ＨＣｌ−ＮａＯＨを１mlずつ
滴下して、pHの変動を観察することにより行った。これ
らの結果を図１〜４に示す。図３は測定値をつなぎ合わ
せたものであり、図４はその曲線をpH７を基準点として
緩衝剤の比較を行ったものである。リン酸水素二カリウ
ム及びリン酸水素二ナトリウムはpH４〜９の域において
同様な曲線を描き、ＭＯＰＳではそれよりもpHの変動が
緩やかであり、緩衝剤無添加ではpH４〜７において塩酸
によるpHの低下が顕著であった。
ン酸一水素二カリウムをリン酸一水素二ナトリウム又は
ＭＯＰＳに換えたもの又は無添加のものの緩衝作用を調
べた。試験はこれら培地に０．１Ｍ ＮａＣｌ、０．１
Ｍ ＨＣｌ又は０．１Ｍ ＨＣｌ−ＮａＯＨを１mlずつ
滴下して、pHの変動を観察することにより行った。これ
らの結果を図１〜４に示す。図３は測定値をつなぎ合わ
せたものであり、図４はその曲線をpH７を基準点として
緩衝剤の比較を行ったものである。リン酸水素二カリウ
ム及びリン酸水素二ナトリウムはpH４〜９の域において
同様な曲線を描き、ＭＯＰＳではそれよりもpHの変動が
緩やかであり、緩衝剤無添加ではpH４〜７において塩酸
によるpHの低下が顕著であった。
【００２６】実施例５ 上記実施例で用いた各種緩衝剤を添加したＸ−Ｇａｌス
タンプ培地を用い表５〜２３に示す各種菌株を培養し
た。これらの結果を同表に示す。
タンプ培地を用い表５〜２３に示す各種菌株を培養し
た。これらの結果を同表に示す。
【００２７】
【表５】
【００２８】
【表６】
【００２９】
【表７】
【００３０】
【表８】
【００３１】
【表９】
【００３２】
【表１０】
【００３３】
【表１１】
【００３４】
【表１２】
【００３５】
【表１３】
【００３６】
【表１４】
【００３７】
【表１５】
【００３８】
【表１６】
【００３９】
【表１７】
【００４０】
【表１８】
【００４１】
【表１９】
【００４２】
【表２０】
【００４３】
【表２１】
【００４４】
【表２２】
【００４５】
【表２３】
【００４６】Ｎａ2ＨＰＯ4を用いた培地は、選択性、発
色性においてＫ2ＨＰＯ4を用いたＸ−Ｇａｌスタンプ培
地と顕著な差は認められなかった。従って、Ｘ−Ｇａｌ
スタンプ培地のリン酸水素二カリウムをリン酸水素二ナ
トリウムに変更することにより、緩衝力は以前と同様で
あり、菌の発育性、選択性、発色性には問題がなく、更
にラウリル硫酸ナトリウムの結晶化が回避できる培地が
得られることが判る。
色性においてＫ2ＨＰＯ4を用いたＸ−Ｇａｌスタンプ培
地と顕著な差は認められなかった。従って、Ｘ−Ｇａｌ
スタンプ培地のリン酸水素二カリウムをリン酸水素二ナ
トリウムに変更することにより、緩衝力は以前と同様で
あり、菌の発育性、選択性、発色性には問題がなく、更
にラウリル硫酸ナトリウムの結晶化が回避できる培地が
得られることが判る。
【図面の簡単な説明】
【図１】０．１Ｍ ＮａＯＨを滴下したときの各種培地
のpHの変化を示す図である。
のpHの変化を示す図である。
【図２】０．１Ｍ ＨＣｌを滴下したときの各種培地の
pHの変化を示す図である。
pHの変化を示す図である。
【図３】０．１Ｍ ＨＣｌ−ＮａＯＨを滴下したときの
各種培地のpHの変化を示す図である。
各種培地のpHの変化を示す図である。
【図４】pH７を基準点とした各種培地のpHの変化を示す
図である。
図である。
フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:22） (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:43）
Claims (5)
- 【請求項１】 ラウリル硫酸ナトリウムが存在する生培
地において、リン酸一水素二カリウムに換えてリン酸一
水素二ナトリウムを用いることを特徴とする大腸菌群発
育用生培地。 - 【請求項２】 重量で、ペプトン１．０〜２．５％、塩
化ナトリウム０．２５〜０．５％、酵母エキス０．４〜
０．６％、リン酸一水素二ナトリウム０．１〜０．５
％、ピルビン酸ナトリウム０．０５〜５．０％、硝酸カ
リウム０．０５〜１．０％及びラウリル硫酸ナトリウム
０．０１〜１．０％を含有する大腸菌群発育用生培地。 - 【請求項３】 更に発色酵素基質又は蛍光酵素基質を含
有する請求項１又は２記載の大腸菌群発育用生培地。 - 【請求項４】 発色酵素基質が５−ブロモ−３−インド
リル−β−Ｄ−ガラクトシド又は５−ブロモ−４−クロ
ロ−３−インドリル−β−Ｄ−ガラクトピラノシドであ
る請求項３記載の大腸菌群発育用生培地。 - 【請求項５】 蛍光酵素基質が４−メチル−ウンベリフ
ェリル−β−Ｄ−ガラクトシドである請求項３記載の大
腸菌群発育用生培地。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12482295A JPH08317787A (ja) | 1995-05-24 | 1995-05-24 | 大腸菌群発育用生培地 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12482295A JPH08317787A (ja) | 1995-05-24 | 1995-05-24 | 大腸菌群発育用生培地 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH08317787A true JPH08317787A (ja) | 1996-12-03 |
Family
ID=14894972
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12482295A Pending JPH08317787A (ja) | 1995-05-24 | 1995-05-24 | 大腸菌群発育用生培地 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH08317787A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118048434A (zh) * | 2024-04-10 | 2024-05-17 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种快速评估抗菌组分对大肠杆菌抑制能力的方法及其应用 |
-
1995
- 1995-05-24 JP JP12482295A patent/JPH08317787A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN118048434A (zh) * | 2024-04-10 | 2024-05-17 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种快速评估抗菌组分对大肠杆菌抑制能力的方法及其应用 |
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