JPH08505386A - 新規なペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 式（Ｉ）の化合物ならびにこれらの化合物の製法、これらの化合物の医薬製剤およびこれらの化合物の使用。式（Ｉ）の化合物は、治療、特に鎮痛剤としておよび免疫抑制剤として有用である。R₃、R₄、R₅、R₆は、すべてＨであるかまたはR₄およびR₅は両方ＨでありそしてR₃およびR₆は両方低級アルキルであるかまたはR₃、R₅、R₆はすべてＨでありそしてR₄はＦ、Cl、Br、OH、NH₂またはNO₂であり；R₇はC=0またはCH₂であり；R₈はＨまたは低級アルキル基であり；R₉は、（II）（式中、ｍは０〜２である）または（III）または（IV）または（Ｖ）または（VI）または（VII）または（VIII）（式中、R₁₀はＨ、Ｆ、Cl、BrまたはＩでありそしてｍは０〜２である）であり；R₁₁は、OH、NH₂または（IX）（式中、R₁₂はＨ、NO₂、Ｆ、Cｌ、BrまたはＩであり、ｍは０〜２であり、R₁₃はCOOH、CONH₂、CH₂O₂またはさらに何れかの追加的なアミノ酸またはペプチドセグメントである）であるかまたはR₁₁は（Ｘ）（式中、R₁₄はCOOH、CONH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的なアミノ酸またはペプチドセグメントである）であり；但し、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₈がすべてＨであり、R₇がC=0であり、R₉が（XI）でありそしてR₁₁がPhe−OH、Phe−NH₂、OHまたはNH₂である化合物は除く。

Description

【発明の詳細な説明】 新規なペプチド発明の分野 本発明は、δオピオイド受容体アンタゴニストである新規な級のオピオイドペ プチド類似体ならびにこれらの化合物の合成および鎮痛剤および免疫抑制剤とし てのこれらの化合物の使用に関するものである。背景 既知の非ペプチドδオピオイドアンタゴニストは、P.S．Portoghese等〔J．Me d．Chem．31，281-282（1988）〕により記載されているナルトリンドールである 。ナルトリンドールは、本発明による化合物と同様なδ-アンタゴニスト効力を 有しているけれども、δ選択性は非常に低い。さらに、ナルトリンドールはまた 、受容体結合検査において全く高いμオピオイド受容体親和性（Kiμ＝12nM）お よびモルモット回腸（GPI）検査において有力なアンタゴニスト性質（Ke＝29nM ）を有している。P.S．Portoghese，J．Med．Chem．34,1757-1762（1991）参照 。 他の既知のδ-アンタゴニストは、R．Cotton等によりEur．J．Pharmacol．97 ，331-332（1984）に記載されているエンケファリン類似体、N,N-ジアリル-Tyr- Aib-Aib-Phe-Leu-OH（ICI 174864）である。本特許出願に記載されたδ-アンタ ゴニストと比較した場合、ICI-174864は、δ-選択性が非常に低く（10〜300倍低 い）そしてMVD検査において非常に低いアンタゴニスト効力（40〜1000倍低い効 力）を有している。従来の技術 有力なδアンタゴニストであるテトラペプチドが、最近P．W．Schiller等〔FA SEB J．6（No 4），A 1575（1992），at the Inter-national Narcotics Resear ch Conference （INRC） Meeting,Keystone，CO，June 24-29（1992）およびat the 2nd JapanSymposium on Peptide Chemistry，Shizuoka，Japan，Nov．9-13, 1992〕によって開示されている。発明 意外にも、以下の式Ｉの化合物が、 δ受容体に対する異常な選択性 δアンタゴニストとしての高い効力 μアンタゴニスト性の全体の欠如 ある場合（Ｃ-末端カルボキサミド基を有するTTPP）における混合されたμア ゴニスト／δアンタゴニストの性質 を有していることが見出された。 本発明による化合物は、式Ｉ を有する。 上記式において、 CH ₂-CH=CH₂であり； R₃、R₄、R₅、R₆は、すべてＨであるか、または R₄およびR₅が両方ＨでありそしてR₃およびR₆が両方低級アルキル基であるか、 または R₃、R₅、R₆がすべてＨでありそしてR₄がＦ、Cl、Br、OH、NH₂またはNO₂であり ； R₇は、C=0またはCH₂であり； R₈がＨまたは低級アルキル基であり； R₉が、 （式中、R₁₀は、Ｈ、Ｆ、Cl、BrまたはＩでありそしてｍは０〜２である）であ り； R₁₁は、0H、NH₂または （式中、R₁₂はＨ、NO₂、Ｆ、Cl、BrまたはＩであり、ｍは０〜２であり、R₁₃はC 00H、C0NH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的アミノ酸またはペプチドセグメ ントである）であるか、または R₁₁は （式中、R₁₄はC0OOH、CONH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的アミノ酸または ペプチドセグメントである）であり； 但し、R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₈がすべてＨであり、 R₇がC=0であり、 R₁₁がPhe-OH、Phe-NH₂、OHまたはNH₂である化合物を除く。 本明細書における低級アルキル基は、１〜６個の炭素原子を有する。本発明に よる特に好ましい化合物は、R₇がCH₂（還元されたペプチド結合の一部として） である化合物である。還元されたペプチド結合は、高いδアンタゴニスト効力、 増加されたδ-選択性、有機溶剤中における良好な安定性および酵素分解に対す る抵抗性を有する化合物を与える。 さらに本発明による好ましい化合物は、R₄およびR₅がＨでありそしてR₃および R₆が両方メチル基である化合物である。合成 ペプチド合成に使用される大部分のBoc-アミノ酸誘導体は、商 業的に入手することができる。2,6−ジメチル-チロシン（Dmt）は、J．H．Dygos 等〔Synthesis，No 8（August）741-743（1992）〕により記載されているように して製造されたそして２-アミノテトラリン２-カルボン酸は、P．W．Schiller等 によりJ．Med．Chem．34,3125-3132（1991）に記載されているようにして製造さ れた。 ペプチドは、すべて固相技術によって製造した。遊離のＣ-末端カルボキシル 基を有するペプチドの固相合成に対しては普通のポリスチレン／ジビニルベンゼ ン樹脂を使用したが、ペプチドアミドはｐ-メチルベンズヒドリルアミン樹脂を 使用することにより合成した。すべてのペプチドの製造において、アミノ基のBo c保護を使用した。合成は、本発明者の実験室において広く使用されているプロ トコール〔P．W．Schiller等、Biochemistry 16，1831-1832（1977）〕によって 遂行した。カップリングは、カップリング剤としてジシクロヘキシルカルボジイ ミド／１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（DCC／HOBt）を使用してCH₂Cl₂または DMF中で遂行した。カップリングの完了は、それぞれのカップリング工程後に、 ニンヒドリン色試験によって注意深く検査した。完全に組み立てられたペプチド 鎖を樹脂から開裂しそして０℃でおよび捕捉剤としてのアニソールの存在下で液 状HFで処理（60〜90分）することにより完全に脱保護する。 CH₂NHペプチド結合同配体を含有する類似体は、SasakiおよびCoy〔Y．Sasaki & D．H．Coy，Peptides 8，119-121（1987）〕により開発された操作による固相 合成により製造した。この方法によって、CH₂NHペプチド結合は、酸性DMF中でシ アノ硼水素化ナトリウムを使用したBoc-アミノ酸アルデヒドと樹脂-結合したペ プチド上のアミノ基との間の還元的アルキル化反応によって直接導入することが できる。この方法を使用して、有意なラセミ化は観察されなかった。 Boc-Ticアルデヒドは、ラセミ化が起こらないことが報告されているLiAlH₄還元 法〔J．A．Fehrentz & B．Castro，Synthesis，676-678（1983）〕によって、相 当するBoc-Tic Ｎ-メトキシ-Ｎ-メチルアミドを経て合成した。還元されたペプ チド結合を含有するペプチドは、上述したように、樹脂から開裂されそしてHF／ アニソールによる処理によって脱保護した。 固相ペプチド合成から得られた粗製生成物は、種々なクロマトグラフィー技術 によりまたは他の方法により精製することを必要とする。HF開裂および樹脂の抽 出後、セファデックス（G-15またはG-25）上のゲル濾過が慣用的に遂行される。 種々な次の精製工程は、セファデックスG-25上の分配クロマトグラフィー（種々 なブタノール-酢酸-ピリジン-水二相系を使用）、イオン交換クロマトグラフィ ー（DEAE-セファデックス、SP-セファデックスおよびCM-セルロース）および１ ％トリフルオロ酢酸中のメタノールの線状勾配を使用したオクタデカシリル-シ リカカラム上の逆相クロマトグラフィー（低圧）を包含する。必要に応じて、均 質性に対する最終精製を、半-分取HPLCにより遂行した。分離問題によって１回 の操作当たり2〜20mgのペプチド物質の精製を可能にする半-分取μ-Bondapack C -18カラム（Waters；0.7×25cm）を使用した。数回の高度に感受性のそして有効 な分析法を使用して、製造したペプチドの均質性を証明しそしてそれらの構造を 確かめた。少なくとも２種の異なる溶剤系における薄層クロマトグラフィーを使 用して純度を確立した。さらに、２種または３種の異なる溶剤における分析HPLC を、高感受性純度試験として実験室内で慣用的に使用した。ペプチド構 造の確認は、主にアミノ酸分析および高速原子衝撃-質量スペクトロメトリー（F AB-MS）に基づく。アミノ酸分析のために、ペプチドを脱空気した管中で、小量 のフェノールを含有する６Ｎ HCl中で110℃で24時間加水分解した（ある場合に おいては、アミノ酸分解を考慮に入れて12時間および48時間持続する加水分解も また遂行した）。加水分解物は、系AA計算インテグレーターを具備したBeckman Model 121 C アミノ酸分析器上で分析した。FAB質量スペクトロメトリーは、ペ プチドの正確な分子量を確立するために使用した。 特定の類似体の実施例 実施例１ Ｈ-Tyr-Tic-Hfe-Phe-OH Boc-Phe-Ｏ-樹脂（１ｇ、樹脂１ｇ当たりBoc-Phe 0.61ミリモル；Peninsula， Belmont，CA）を、次の順序で試薬で洗浄した。 CH₂Cl₂（３×１分）、CH₂Cl₂中の50％（v/v）TFA（30分）、CH₂Cl₂（５×１分） 、CH₂Cl₂中の10％（v/v）DIEA（２×５分）、CH₂Cl₂（５×１分）。それからCH₂ Cl₂／DMF（３：１，v/v）中で、HOBt（205mg、1.52ミリモル）およびDCC（313mg 、1.52ミリモル）を使用して、Boc-Hfe-OH（425mg、1.52ミリモル）を17時間カ ップリングさせる。それから樹脂をCH₂Cl₂（３×１分）、EtOH（１分）、CH₂Cｌ₂ （３×１分）で洗浄した。この洗浄および反応の順序を、次の変形を使用して それぞれの基の付加に対して反復した。 Boc-Tic-OHのカップリング後、樹脂をCH₂Cl₂／DMF（３：１,v/v）（３×）で 洗浄しそしてCH₂Cl₂／DMF（３：１，v/v）中で同量のBoc-Tic-OH、HOBtおよびDC Cを使用して再カップリングをさらに17時間 遂行した。また、同じ再カップリング工程を実施してBoc-Tyr（Boc）-OHをカッ プリングさせた。 CH₂Cl₂中の50％（v/v）TFAによる最終の脱保護後に、樹脂をCH₂Cl₂（３×１分 ）およびEtOH（３×１分）で洗浄しそしてデシケーター中で乾燥した。乾燥した 樹脂をHF 20ml＋アニソール１mlではじめに０℃で90分そしてそれから室温で15 分処理した。HFの蒸発後、樹脂をEt₂Oで３回抽出しそしてその後７％AcOHで３回 抽出した。それから、合した酢酸抽出液の凍結乾燥によって、粗製生成物を固体 の形態で得た。 このペプチドは、0.5Ｎ AcOH中におけるセファデックス-Ｇ-25カラム上のゲル 濾過次いで１％TFA中の0〜80％MeOHの線状勾配を使用したオクタデカシリルシリ カカラム上の逆相クロマトグラフィーにより精製した。溶剤蒸発後に、純粋なペ プチドを濃AcOHに溶解しそして凍結乾燥により固体の形態で得た。 収量：45mg FAB-MS：MH⁺＝648 TLC（シリカ）Rf 0.75 n-BuOH/AcOH/H₂O（4/1/5，有機相） Rf 0.70 n-BuOH/ピリジン/AcOH/H₂O（15/10/3/12） アミノ酸分析：Tyr 0.96，Hfe 1.03，Phe 1.00 実施例２ Ｈ-Tyr-TicΨ〔CH₂-NH〕Phe-Phe-OH このペプチドの合成は、Tic²およびPhe³基の間の還元されたペプチド結合の導 入が、Boc-Ticアルデヒドと樹脂-結合したＨ-Phe-Pheジペプチドのアミノ基との 間の還元的アルキル化反応を必要とする以外は、同じ樹脂を使用して実施例１の 場合におけるように して遂行した。 Ｎ-ｔ-ブトキシカルボニル-Ｌ-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-３-Ｎ-メト キシ，Ｎ-メチルアミドを経たＮ-ｔ-ブトキシカルボニル-Ｌ-1,2,3,4-テトラヒ ドロイソキノリン-３-アルデヒド（Boc-Ticアルデヒド）の製造 BOP（ベンゾトリアゾール-１-イル-オキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホニ ウムヘキサフルオロホスフェート）（3.48g、10ミリモル）を、CH₂Cl₂中のBoc-T ic-OH（2.8g、10ミリモル）およびトリエチルアミン（1.33ml、10ミリモル）の 撹拌溶液に加えた。５分後に、Ｎ-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩（1.29g、 12ミリモル）およびトリエチルアミン（1.68ml、12ミリモル）を溶液に加えた。 反応を17時間実施した。次に、反応混合物をジクロロメタンでうすめそして３Ｎ HCl、NaHCO₃の飽和水溶液およびNaClの飽和水溶液で洗浄した。有機溶液をMgSO₄ 上で乾燥し、そして溶剤を蒸発する。Ｎ-ｔ-ブトキシカルボニル-Ｌ-1,2,3,4- テトラヒドロイソキノリン-３-Ｎ-メトキシ，Ｎ-メチルアミドの得られた粗生成 物を、EtOAc／ヘキサン（１：２，v/v）を使用したシリカゲルカラム上のクロマ トグラフィーにより精製した。 収量：2.1g（65％）、油 TLC（シリカ）Rf 0.57，Et0Ac／ヘキサン（１／１） Rf 0.30，EtOAc／ヘキサン（１／２） NMR（CDCl₃）δ 1.45（9H，t-ブチル），3.00（2H，H-4），3.18（3H，NCH₃） ，3.8（3H，OCH₃），4.42-4.90（3H，2H-1および1H-3），7.17（4H，ar） エーテル30ml中のＮ-ｔ-ブトキシカルボニル-Ｌ-1,2,3,4- テトラヒドロイソキノリン-３-Ｎ-メトキシ、Ｎ-メチルアミド（1.2ｇ、４ミリ モル）の撹拌溶液に、水素化アルミニウムリチウム190mg（５ミリモル）を加え た。還元反応を１時間実施しそしてそれから反応混合物を水（20ml）中のKHSO₄ （954mg、７ミリモル）の溶液で加水分解した。その後、水性相を分離しそして エーテル50mlずつで３回抽出した。４つの有機相を合し、３Ｎ HCl、NaHCO₃の飽 和水溶液およびNaClの飽和水溶液で洗浄し、そして最後に、MgS0₄上で乾燥した 。溶剤の蒸発後、アルデヒドを純粋な形態で油として得た。 収量：635mg（60％）、油 TLC（シリカ）Rf 0.84，EtOAc／ヘキサン（１／１） Rf 0.57，Et0Ac／ヘキサン（１／２） NMR（CDCl₃）δ 1.5（9H，t-ブチル），3.0-3.27（2H，H-4），4.4-4.8（3H， 1H-3および2H-1），7.0-7.2（4H，ar），9.43（1H，CHO） Boc-TicアルデヒドとＨ-Phe-Phe-Ｏ樹脂との間の還元的アルキル化反応 樹脂を、DMF（２×１分）で洗浄しそしてそれから１％のAcOHを含有するDMF中 のBoc-Ticアルデヒド（392mg、1.52ミリモル）を樹脂に加えた。シアノ硼水素化 ナトリウム（115mg、1.83ミリモル）を40分にわたって小量ずつ加えそして反応 を３時間続けた。 Ｎ-末端チロシン基のカップリングおよび脱保護後、ペプチドを樹脂から開裂 しそして実施例１に記載したように凍結乾燥した。 収量：180mg FAB-MS：MH⁺＝633 TLC（シリカ）Rf 0.73 n-BuOH/AcOH/H₂O（4/1/5，有機相） Rf 0.69 n-BuOH/ピリジン/AcOH/H₂O（15/10/3/12） アミノ酸分析：Tyr 0.95，Phe 1.00 本発明による次の化合物を合成しそしてδアンタゴニストとして試験した。δオピオイドアンタゴニストの試験管内薬理学的試験 （ａ）生物検査は、マウス輸精管（MVD）およびモルモット回腸（GPI）の電気 的に誘発された収縮の阻害に基づく。GPI検査においては、オピオイド作用は主 としてμオピオイド受容体によって仲介されるが、MVD検査においては収縮の阻 害は、殆どδオピオイド受容体との相互作用による。これらの検査におけるアン タゴニスト効力は、いわゆるKe−値〔H．W．KosterlitzおよびA．J．Watt，Br． J．Phar-macol．33，266-276（1968）〕として表示されるアンタゴニスト効力は IC₅₀値（電気的に誘発された収縮の50％阻害を生ずるアゴニストの濃度）として 表示される。単離された器官標本を使用した生物検査 GPIおよびMVD生物検査を、P．W．Schiller等、Biochem．Biophys．Res．Commu n．85，1332-1338（1978）およびJ．Di Maio等、J．Med．Chem．25，1432-1438 （1982）に報告されているように実施した。log用量-反応曲線は、それぞれの回 腸および血管標本に対する標準として〔Leu⁵〕エンケファリンを使用して測定し そして試験される化合物のIC₅₀値は、A．A．Waterfield等、Eur．J．Phermacol ．58，11-18（1979）によりノルマライズ（normalize）した。TTPP-関連アンタ ゴニストに対するKe値は、固定されたアンタゴニスト濃度（ａ）の存在下および 不存在下で得られたIC₅₀値の比（DR）から測定した（Ke＝ａ／（DR-１））。H． W．Kosterlitz およびA．J．Watt，Br． J．Phermacol．33，266-276（1968）。これらの測定は、異なるδ-選択性アゴニ スト（〔Leu⁵〕エンケファリン、DPDPEおよび〔D-Ala²〕デルトルフィンＩ）を 使用して、ＭＶＤ検査で行った。 結果は、以下の表１において与えられる通りである。 結論 TTPP-関連δアンタゴニストのμアンタゴニストまたはμアゴニスト行動 化合物は、すべて、GPI検査において10μMのような高い濃度で、μアンタゴニ スト活性を示さない。 遊離のＣ-末端カルボキシル基を有するTTPP-関連ペプチドは、GPI検査におい て非常に弱いμアゴニスト効力（IC₅₀＞10μM）を有す。他方において、Ｃ-末端 カルボキサミド官能基を有するTTPP-誘導されたペプチドは、GPI検査において十 分なμアゴニスト効力を示す。例えば、Ｈ-Dmt-Tic-Phe-Phe-NH₂は、GPI検査に おいて18.2±l.8nMのIC₅₀を有す。オピオイド受容体結合検査 化合物のμおよびδオピオイド受容体結合定数（K_i ^μ，K_i ^δ）を、ラットの脳 膜標本の結合部位からの相対的選択性μおよびδ放射リガンドの置換によって測 定した〔ChengおよびPrusoffの式（Y．C．ChengおよびW．H．Prusoff，Biochem ．Pharmacol．22，3099-3102（1973））を基にして測定したIC₅₀値から計算した 〕。 以下の表２において、オピオイド受容体結合検査の結果を示す。 比K_i ^μ／K_i ^δは、δ-選択性の定量的測定値である。比が高い程δ-選択性は、良 好である。オピオイド受容体結合研究 すべての新規な類似体のμ-、δ-およびκ-オピオイド受容体親和性を、ラッ トの脳膜結合部位からのμ-、δ-およびκ-選択性放射リガンドの置換を基にし た結合検査において測定した。κ-リガンドの場合においては、κ-結合部位の相 対的割合はラットの 脳におけるよりもモルモットの脳においてより高いので、モルモットの脳均質化 物を使用した。本発明者等の実験室で使用された実験操作は、Pasternak等〔Mol ．Pharmacol．11，340-351（1975）〕により記載されている結合検査の変形型を 示す。カナダの飼育実験室（Canadian Breeding Laboratories）からの雄のスプ ラグ-ダウレーラット（300〜350g）を断首しそして小脳の除去後に、脳を氷冷標 準緩衝液（50mMトリス-HCｌ，pH7.7）30容量中で均質化した。４℃で30分30,000 ×gで遠心分離した後、膜を標準緩衝液のもとの容量中で再構成しそして37℃で3 0分インキュベートした（結合した内因性リガンドを放出する）。次の遠心分離 および新鮮な標準緩衝液の初期の容量中のペレットの再懸濁によって最終の膜懸 濁液を得た。膜標本の一部（２ml）を、試験されるペプチドおよび以下に示す放 射リガンドの１種を以下に示す最終濃度で含有する標準緩衝液１mlを使用して25 ℃で１〜２時間インキュベートした。〔³H〕DAMG0、μ−選択性、07nM;〔³H〕DS LET、〔³H〕DPDPEまたは〔³H〕TTPP、δ-選択性、1.0nM；および〔³H〕U69.563 、κ-選択性、0.5nM。インキュベーションは、４℃の真空下におけるWhatman GF /Bフィルターを通した濾過により終了した。氷冷標準緩衝液５mlずつで２回洗浄 した後、フィルターをシンチレーションバイアルに移しそしてプロトソール（Pr otsol）（New England Nuclear）１mlで30分処理しそれから酢酸0.5mlおよびア キュアソル（Aquasol）（New Eng1and Nuclear）10mlを加えた。30分振盪した後 、バイアルを40〜50％の効率でカウントした。実験は、すべて二度遂行しそして 少なくとも３回反復した。３種の放射リガンドのそれぞれの特異的結合は、１ミ クロンの濃度のそれぞれ冷DAMGO、DSLETおよびU69,563の存在下においてインキ ュベーションを遂行することにより定義した。特異的結合の半-最高阻害（IC₅₀ ）の値は、半対数のプロットからグラフ的に得た。それから、測定したIC₅₀値か ら、結合阻害定数（K_i）を、ChengおよびPrusoffの式〔Biochem．Pharmaco1．22 ，3099-3102（1973）〕を基にして計算した。μ-、δ-およびκ-結合検査におけ るK_i-値の比は、調査下における化合物の受容体選択性の測定値である。（例え ばK_i ^μ／K_i ^δは、δ-受容体対μ-受容体の選択性を示す）。クレームされた本発 明による化合物は、κ-受容体に対する有意な親和性は有していない。 可能な使用 純粋なδアンタゴニストは、E．E．Abdelhamid等、J．Parmaco1．Exp．Ther． 258，299-303（1991）の結果により示唆されるように、耐性および依存性の発現 を防止するためにμアゴニスト型の鎮痛剤（例えばモルフィン）と組み合わせて 使用することができる。後者 の研究は、また、混合μアゴニスト／δアンタゴニスト性質を有する化合物は耐 性および依存性を生じない鎮痛剤として治療的に有用であることを示唆している 。本特許出願に記載されたＣ-末端カルボキサミド基を有するTTPP-関連ペプチド は、最初に知られた混合μアゴニスト／δアンタゴニストである。 本特許出願に記載されたδアンタゴニストは、また、免疫抑制剤として治療的 に使用することもできる。δ-選択性の低いそして純度の低いδアンタゴニスト ナルトリンドールの免疫抑制作用は、K．Arakawa〔Transplantation Proc．24， 696-697（1992）；Trans-plantation 53，951-953（1992）〕により記載されて いる。略号 Aib＝α‐アミノイソ酪酸 Atc＝２‐アミノテトラリン‐２‐カルボン酸 Boc＝第３‐ブトキシカルボニル Cpm＝シクロプロピルメチル DAMGO＝Ｈ‐Tyr‐Ｄ‐Ala‐Gly‐Pro（N^αMe）‐Gly‐オール DCC＝ジシクロヘキシルカルボジイミド DIEA＝ジイソプロピルエチルアミン Dmt＝2,6‐ジメチルチロシン DSLET＝Ｈ‐Tyr‐Ｄ‐Ser‐Gly‐Phe‐Leu‐Thr‐OH Et＝エチル FAB-MS＝高速原子衝撃質量スペクトロメトリー GPI＝モルモット回腸 Hex＝ヘキシル Hfe＝ホモフェニルアラニン HOBt＝１‐ヒドロキシベンゾトリアゾール MVD＝マウス輸精管 １‐Nal＝３‐（1'‐ナフチル）アラニン ２‐Nal＝３‐（2'‐ナフチル）アラニン Phe（pNO₂）＝４‐ニトロフェニルアラニン Phg＝フェニルグリシン Tic＝1,2,3,4,‐テトラヒドロイソキノリン‐３‐カルボン酸 TTP＝Ｈ‐Tyr‐Tic‐Phe‐OH TTP-NH₂＝Ｈ‐Tyr‐Tic‐Phe‐NH₂ TTP（Ψ）＝Ｈ‐Tyr‐TicΨ〔CH₂-NH〕Phe‐OH TTPP＝Ｈ‐Tyr‐Tic‐Phe‐Phe‐OH TTPP-NH₂＝Ｈ‐Tyr‐Tic‐Phe‐Phe‐NH₂ TTPP（Ψ）＝Ｈ‐Tyr‐TicΨ〔CH₂-NH〕Phe‐Phe‐OH Tyr（3-Br）＝３‐ブロモチロシン Tyr（3-Cl）＝３‐クロロチロシン Tyr（3-F）＝３‐フルオロチロシン Tyr（N^αMe）＝N^α‐メチルチロシン U69,593＝（５α，７α，８β）‐（−）‐Ｎ‐メチル‐〔７‐（１‐ピ ロリジニル）‐１‐オキサスピロ〔4,5〕デク‐８‐ イル〕ベンゼンアセトアミド

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９５年２月２８日 【補正内容】 請求の範囲 １．式Ｉ の化合物。 上記式において、 CH₂-CH=CH₂であり： R3、R4、R5、R6は、すべてＨであるか、または R₄およびR₅は両方ＨでありそしてR₃およびR₆は両方低級アルキル基であるか 、または R₃、R₅、R₆がすべてＨでありそしてR₄がＦ、Cl、Br、OH、NH₂ またはNO₂であり； R₇は、C=OまたはCH₂であり； R₈は、Ｈまたは低級アルキル基であり； R₉は、 （式中、R₁₀は、Ｈ、Ｆ、Cl、BrまたはＩでありそしてｍは０〜２である）で あり； R₁₁は、OH、NH₂または （式中、R₁₂は、Ｈ、NO₂、Ｆ、Cl、BrまたはＩであり、ｍは０〜２であり、R_{1 3} はCOOH、CONH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的なアミノ酸またはペプチド セグメントである）であるか、または R₁₁は （式中、R₁₄はCOO0H、CONH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的なアミノ酸ま たはペプチドセグメントである）であり； 但し、 R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₈がすべてＨであり、 R₇がC=0であり、 R₁₁がPhe-OH、Phe-NH₂、OHまたはNH₂である化合物および化合物Ｈ-Tyr-Tic- Phe-Phe-Leu-Nle-Asp-NH₂を除く。 ２．R₇が還元されたペプチド結合の一部である請求項１記載の式Ｉの化合物。 ３．R₄およびR₅が水素でありそしてR₃およびR₆が両方メチル基である請求項１記 載の式Ｉの化合物。 ４．治療に使用するための請求項１記載の化合物。 ５．鎮痛剤として使用するための請求項１記載の化合物。 ６．免疫抑制剤として使用するための請求項１記載の化合物。 ７．固相合成を使用する請求項１記載のペプチドの製法。 ８．ジペプチド樹脂にBoc-Tic-OH基を結合させる追加的工程（再カップリング工 程）およびペプチド樹脂にBoc-Tyr（Boc）-OHを結合させる追加的工程（再カッ プリング工程）からなる請求項７記載の方法。 ９．適当な不活性溶剤がCH₂Cl₂またはCH₂Cl₂/DMF（３：１，v/v）の混合物であ りそしてカップリング剤がN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド／１-ヒドロキ シ−ベンゾトリアゾールである請求項７〜８の何れかの項記載の方法。 10．酸性DMF中でシアノ硼水素化ナトリウムを使用したBoc-Ticアルデヒドおよび 樹脂-結合したペプチドのアミノ基の間の還元的アルキル化反応を基にしてTic² 基および３-位基の間に還元されたペプチド結合（-CH₂-NH-）を含有させる請求 項１記載のペプチドの若干を製造する方法。 11．請求項10記載のTic²基と３-位の基との間に還元されたペプチド結合（-CH₂- NH-）を含有するペプチドを製造するためのＮ-ｔ-ブトキシカルボニル-Ｌ-1,2,3 ,4-テトラヒドロイソキノリン-３-アルデヒド（Boc-Ticアルデヒド）の製法。 12．１種または２種以上の医薬担体と一緒に請求項１記載の化合物の有効量を含 有する医薬製剤。 13．鎮痛医薬製剤の製造における活性成分としての請求項１記載の化合物の使用 。 14．免疫抑制作用を有する医薬製剤の製造における活性成分としての請求項１記 載の化合物の使用。 15．請求項１記載の化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することか らなる苦痛の治療方法。 16．請求項１記載の化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することか らなる免疫抑制作用を生じさせる方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 5/107 ＺＮＡ 8318−4Ｈ 7/06 8318−4Ｈ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，Ｈ Ｕ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ， ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ 【要約の続き】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．式Ｉ の化合物。 上記式において、 CH₂-CH=CH₂であり； R₃、R₄、R₅、R₆は、すべてＨであるか、または R₄およびR₅は両方ＨでありそしてR₃およびR₆は両方低級アルキル基であるか 、または R₃、R₅、R₆がすべてＨでありそしてR₄がＦ、Cl、Br、OH、NH₂またはNO₂であ り； R₇は、C=0またはCH₂であり； R₈は、Ｈまたは低級アルキル基であり； R₉は、 （式中、R₁₀は、Ｈ、Ｆ、Cl、BrまたはＩでありそしてｍは０〜２である）で あり； R₁₁は、OH、NH₂または （式中、R₁₂は、Ｈ、NO₂、Ｆ、Cl、BrまたはＩであり、ｍは０〜２であり、R_{1 3} はCOOH、CONH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的なアミノ酸またはペプチド セグメントである）であるか、または R₁₁は （式中、R₁₄はCOOH、C0NH₂、CH₂OHまたはさらに何れかの追加的なアミノ酸ま たはペプチドセグメントである）であり； 但し、 R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆およびR₈がすべてＨであり、 R₇がC=0であり、 R₁₁がPhe-OH、Phe-NH₂、OHまたはNH₂である化合物は除く。 ２．R₇が還元されたペプチド結合の一部である請求項１記載の式Ｉの化合物。 ３．R₄およびR₅が水素でありそしてR₃およびR₆が両方メチル基である請求項１記 載の式Ｉの化合物。 ４．治療に使用するための請求項１記載の化合物。 ５．鎮痛剤として使用するための請求項１記載の化合物。 ６．免疫抑制剤として使用するための請求項１記載の化合物。 ７．固相合成を使用する請求項１記載のペプチドの製法。 ８．ジペプチド樹脂にBoc-Tic-OH基を結合させる追加的工程（再カップリング工 程)およびペプチド樹脂にBoc-Tyr（Boc）-OHを結合させる追加的工程（再カップ リング工程）からなる請求項７記載の方法。 ９．適当な不活性溶剤がCH₂Cl₂またはCH₂Cl₂/DMF(３：１，v/v）の混合物であり そしてカップリング剤がN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド／１-ヒドロキシ -ベンゾトリアゾールである請求項７〜８の何れかの項記載の方法。 10．酸性DMF中でシアノ硼水素化ナトリウムを使用したBoc-Ticアルデヒドおよび 樹脂-結合したペプチドのアミノ基の間の還元的アルキル化反応を基にしてTic² 基および３-位基の間に還元されたペプチド結合（-CH₂-NH-）を含有させる請求 項１記載のペプチドの若干を製造する方法。 11．請求項10記載のTic²基と３-位の基との間に還元されたペプチ ド結合（-CH₂-NH-）を含有するペプチドを製造するためのＮ-ｔ-ブトキシカルボ ニル-Ｌ-1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-３-アルデヒド（Boc-Ticアルデヒ ド）の製法。 12．１種または２種以上の医薬担体と一緒に請求項１記載の化合物の有効量を含 有する医薬製剤。 13．鎮痛医薬製剤の製造における活性成分としての請求項１記載の化合物の使用 。 14．免疫抑制作用を有する医薬製剤の製造における活性成分としての請求項１記 載の化合物の使用。 15．請求項１記載の化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することか らなる苦痛の治療方法。 16．請求項１記載の化合物の有効量を、治療を必要とする患者に投与することか らなる免疫抑制作用を生じさせる方法。