JPH08508481A

JPH08508481A - プリン及びピリミジン類の不飽和ホスホネート誘導体類

Info

Publication number: JPH08508481A
Application number: JP6522053A
Authority: JP
Inventors: パトリックカサラ，; ジャン−フランシスネイブ，; サージハラジー，
Original assignee: メレルダウファーマスーティカルズインコーポレイテッド
Priority date: 1993-04-01
Filing date: 1994-02-25
Publication date: 1996-09-10
Also published as: ATE154605T1; FI954615A0; HU9502854D0; NO953878D0; ZA942092B; GR3024788T3; DE69403910T2; FI954615L; CA2159451C; EP0701562B1; IL109152A0; EP0618214A1; NZ263904A; DE69403910D1; HUT72459A; FI113539B; NO953878L; ES2105684T3; DK0701562T3; AU681395B2

Abstract

(57)【要約】抗ウィルス剤として有用なある種のプリン類又はピリミジン類の新規な不飽和ホスホネート誘導体類、それらの製造に有用な方法、及びＤＮＡウィルス、レトロウィルス、及び腫瘍形成に関与するウィルスに対し有効な抗ウィルス剤としての、それらの化合物の用途が開示される。

Description

【発明の詳細な説明】発明の名称プリン及びピリミジシ類の不飽和ホスホネート誘導体類本発明は、抗ウィルス剤として有用なある種のプリン及びピリミジン類の不飽和ホスホネート誘導体類、それらの製造に有用な方法と中間体類、及びＤＮＡウイルス類（ヘルペス１及び２型、サイトメガロウイルス、バリセラ-ゾスターウィルス、エプスタイン-バールウイルス）、レトロウイルス類（人免疫不全ウィルス１及び２、及びビスナウィルス類）、及び腫瘍形成に関与するウィルスに対する抗ウィルス剤としてのそれらの最終用途からなっている。発明の背景プリン又はピリミジシ塩基のある種の誘導体類は、抗ウィルス及び抗腫瘍活性を有することが示されている。例えば、EP 0 173,624；EP 0 253,412；EP 0 353 ,955；WO 92/01698；EP 0 481,1214；及びJ．Org．Chem．57：2320-2327（1992 ）を参照。本発明の化合物類は、プリン及びピリミジン塩基から誘導される新規な化合物類を表わしている。本発明のまとめより詳しくは、本発明は式Ｉ及び式IIの新規な化合物類、及びそれらの立体異性体形、互変異性体形、及び製薬上受入れられる塩に関する。式中Ｘ₁はＨ又はＮＨ₂であり、Ｘ₂はＯＨ又はＮＨ₂であり、Ｘ₃はＨ又はＣＨ₃であり、Ｘ₄はＮＨ₂又はＯＨであり、Ｚは何も存在しないことを表すか、又はＣＨ₂ 、ＣＨ₂ＣＨ₂、ＣＨ₂Ｏ、又はＣＨ₂ＯＣＨ₂である。Ｗは、であり、ここでＲ₁とＲ₂の夫々は独立にＨ、Ｆ、又はＣＨ₂ＯＨであり、Ｔは何も存在しないことを表わすが、Ｔ’又はＴ”であり、ここでＴ’は、ＣＨ₂ＣＨ₂、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）又はＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）であり、Ｔ”はＣＨ＝ＣＨ-ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨ（ＣＨ ₂ＯＨ）、ＣＨ₂ＯＣＨ₂、ＣＨ₂ＯＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）ＣＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ₂ ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）又はＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）であり、そしてＲ₃とＲ₄はそれぞれ独立にＯＨ、ＯＲ₅、ＯＲ₅'又は-Ｏ-ＣＨ（Ｒ₆）-Ｏ-Ｃ（Ｏ）Ｒ₅であるが、但し、Ｒ₃とＲ₄の一つがＯＨである時は、他方は-Ｏ-ＣＨ（Ｒ₆）-Ｏ-Ｃ（Ｏ）Ｒ₅でないことを条件とし、ここでＲ₅とＲ₅'はそれぞれ独立にＣ_1-15アルキル又はベンジル、そしてＲ₆はＨ又はＣ_1-10アルキルである。但し、ＴがＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ₂ＣＨ₂であり、ＷがＷｃであり、そしてＺがＣＨ₂であるときは、、同時にＸ₁がＮＨ₂でなく、かつＸ₂はＯＨでないことを条件とし、但し、ＷがＷｅであるときは、Ｚは何も存在しないことを表わすか又はＣＨ₂ であり、但し、Ｔが何も存在しないことを表わすときは、ＷはＷｃでないことを条件とし、ＺがＣＨ₂でありＷがＷａであるときは、ＴはＣＨ＝ＣＨでありえないことを条件とし、但し、Ｚが何も存在しないことを表わしＷ＝Ｗｃであるときは、ＴはＣＨ＝ＣＨではないことを条件とする。本発明のはまた、ウィルス感染を処置する為の製剤組成物を製造する式Ｉ及び式IIの化合物を使用を含んでいる。本発明の詳細な記載本発明の化合物は、ホスホネート部分を有している核酸塩基（点線は分子の残りに結合する部分を表わしている）と呼ぶ、プリン誘導体（式Ｉ）又はピリミジン誘導体類（式II）である。ホスホネート部分のプリン又はピリミジン誘導体への連結は、部分Ｔ、Ｗ及びＺ基の部分である。これらの部分が分子の残りへ結合する例は、ＴがＴ”であって、ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）である場合、ＷがＷａであって、ここでＲ₁とＲ₂が夫々Ｈであり、ＺがＣＨ₂Ｏである場合のものに従う。本発明のより小さい分子である次の組合せが好ましい。Ｗ=Ｗａ又はＷｂかつＴ=Ｔ”のときＺはCH₂OCH₂ではない。Ｗ=Ｗｃ又はＷｄかつＴ=Ｔ’のときＺはCH₂OCH₂ではない。Ｗ=Ｗｃ又はＷｄかつＴ=Ｔ”のときＺはCH₂である。ＴがＴ’であり、より好ましくはＴ’がＣＨ＝ＣＨであるとき；ＴがＴ”であり、より好ましくはＴ”がＣＨ₂ＯＣＨ₂であるとき；ＷがＷａ、Ｗｃ又はＷｄであるとき；Ｒ₁とＲ₂のそれぞれがＨであるとき；及び／又はＺがＣＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ₂又はＣＨ₂Ｏであるときが、他の好ましい化合物類である。式Ｉは、式IIより好ましい。好ましいピリミジン形の塩基は、シトシン、ウラシル及びチミンである。好ましいプリン形の塩基は、2,6-ジアミノプリン（DAP）、グアニン及びアデニンである。本明細書で使用する但し書きの「ＴがＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ₂ＣＨ₂であり、ＷがＷｃでありＺがＣＨ₂であるときは、同時にＸ₁がＮＨ₂でなくＸ₂がＯＨでない」とは、グアニン（同時にＸ₁＝ＮＨ₂、そしてＸ₂＝ＯＨ）が塩基である場合の化合物を特許請求の範囲から除外することを意味する。この但し書きは、グアニンが塩基である場合の二つの化合物を除外する。即ち、（1）ＴがＣＨ＝ＣＨであり、ＷがＷｃであり、ＺがＣＨ₂であるとき、（2）ＴがＣＨ₂ＣＨ₂であり、ＷがＷｃであり、ＺがＣＨ₂であるときである。Ｃ_1-10アルキル又はＣ_1-15アルキルは、それぞれ１から10までの炭素原子又は１から15までの炭素原子を有するアルキル部分を意味している。アルキル部分は、直鎖又は分枝鎖、例えば第三ブチルでありうる。Ｃ_1-15アルキル部分については、Ｃ_1-10アルキルが好ましく、そしてＣ_1-6のものはより好ましく、Ｃ_1-3は最も好ましい。Ｃ_1-10アルキル部分については、Ｃ_1-6のものが好ましく、Ｃ_1-3が最も好ましい。「製薬上受け入れられる塩」は、無毒であって最終用途に対し製剤処方の製造に有用な誘導体であることが知られている酸付加塩と金属及びアミン塩の両方を意味する。製薬上受け入れられる酸付加塩は、式Ｉ及ひ式IIの塩基化合物の知られている無毒の有機又は無機酸付加塩を含む。適当な塩を形成する有機酸の例は、モノ、ジ及びトリカルボン酸を含む。そのような酸の例は、例えば酢酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマール酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サリチル酸、及び2-フェノキシ安息香酸である。適当な塩を形成する他の有機酸は、スルホン酸、例えばメタンスルホン酸や2-ヒドロキシエタンスルホン酸等である。モノ又はジ酸が形成出来、これらの塩は水和形又は実質的に無水形で存在できる。酸塩は標準の技術で造ることが出来る。例えば、適当な酸を含有する水溶液又は水-アルコール溶液又は他の適当な溶媒に遊離塩基を溶解し、この溶液を蒸発させることによって単離させるか、又は遊離塩基を有機溶媒中で反応させることによって単離させるが、後者の場合は塩は直接分離するか又は溶液の濃縮により得ることが出来る。一般に本発明の化合物の酸付加塩は水中に及び種々の親水性の形で可溶である結晶性物質であり、より高い融点と安定性を示す。製薬上受入れる金属及びアミン塩は、環境条件下で安定であって陽イオンが塩の生物活性に有意義に寄与しない塩である。適当な金属塩は、ナトリウム、カリウム、カルシウム、バリウム、亜鉛、及びアルミニウム塩を含む。ナトリウム及びカリウム塩が好ましい。適当なアミン塩は安定な塩を形成するのに十分な塩基性を有するアミンから製造され、好ましくは毒性が低い為及び医薬用途に受入れられる為に、医薬化学において屡々使用されるアミンを含む。これらにはトリエチルアミン等のトリアルキルアミン類、及びプロカイン、ジベンジルアミン、N- ベンジル-β-フェネチルアミン、エフェナミン、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、ジヒドロアビエチルアミシ、N-エチルピペリジン、ベンジルアミン及びジシクロヘキシルアミン等の他のアミンが含まれる。式Ｉ及び式IIの化合物の「立体異性体」は、空間に於けるそれらの原子の配向性に於いてのみ異なるそれらの分子の全ての異性体に対する一般用語であって、鏡像異性（エナンチオマー類）、幾何（シス／トランス）異性、及び互いに鏡像ではない一つを超えるキラル中心を有している薬剤の異性体類（ジアステレオマー類）が含まれる。混合物は、この分野で知られた慣用のそして標準の手順、例えばクロマトグラフィ分離、分別結晶化、光学活性酸の使用、酵素的な分割等で分割又は単離され得る。互変異性のエンド-ケト形はプリン核の６位に存在し、ピリミジンはアミン-イミン互変異性形を示すであろう。本明細書で「Ｗｃ」はシスとして描かれるかもしれないが、シスとトランスの両方の形態が描かれていることを意味していると理解する。本発明の化合物は、この分野で知られた標準の方法と技術を使用して造られるか、又は既に知られている反応体を使用してこの分野で知られている類似化学反応の適用によって製造することができる。本質的に式Ｉ及び式IIの化合物を製造する一般方法は次の反応経路Ｉによって描くことができる。別途指定されていない限り次の反応経路は前に定義された意味を有する変数を含有している。「Ｐｇ」は適当な保護基を意味する。適当な保護基は、「protec tive Groups in Organic Synthesis、第２編、セオドアダブリュ．グリーネ，ニューヨークのジョンウィリーアンドサンズ社（1991）中に見出され、これは参照により本明細書に取込まれる。幾つかの例は、ＴＨＰ（テトラヒドロピラニル）、ＴＢＤＭＳ（ターシオブチルジメチルシリル）、ＴＢＤＰＳ（ターシオブチルジフェニルシリル）である。Ｐｇ上のサブスクリプトは、幾つかの保護基が選択的に解裂されて他のものをそのまま残すように保護基を区別する為に使用される。「Ｂ」又は「塩基」は、本明細書で定義される核酸塩基を意味している。「ＤＥＡＤ」はジエチルアゾジカルボキシレートを意味する。「ＴＭＳＢｒ」は、トリメチルシリルブロマイドを意味する。「Ｐｈ」は、フェニルを意味する。「Ｋ₂ＣＯ₃」は、炭酸カリウムを意味する。「ＤＭＦ」は、ジメチルホルムアミドを意味する。Ｍ⁺は製薬上受入れられるアルカリ金属陽イオンを意味する。「ｎ」は１又は２である。反応経路Ｉ〜IIIは、反応経路Ａの中間体（3）、（6）、及び（9）をどのように造るかを示す。反応経路IV〜VIは、中間体中間体（3）、（6）、及び（9）から出発する合成を示している。反応経路Ａは、どのように反応経路の多くが互に適合しあっているかの全体像を示している。反応経路Ｂは、反応経路Ｃが反応経路Ａに加わっている、反応経路Ａの一部分に対する別の合成を示している。反応経路Ｄ、Ｅ及びＦは、Ｒ₃及びＲ₄位置に於いての変化を示している。典型的には、反応経路Ｉによって造られる（3）型の化合物の製造は、段階ａ中で、トリアルキルホスファイト又はトリアリールホスファイト部分、そして適当に保護された（1）型のアルコールハライドを加熱することによるアルブゾフ反応を使用する。エンゲルアール．等、Chem．Rev．77:349（1977）及びホーリーエー．等、Collect．Czech．Chem．Commun．52:2801（1987）。ヒドロキシ保護基Ｐｇ₁及びＰｇ₂は、反応条件に於て安定であり、また（3）型の化合物を与える為に段階ｂの反応の完了後、選択的に解裂されるように選択される。反応経路IIに於て、（6）型の化合物が、ジョーンズジー.及びモファット J．Org．Chem．（1968），ワスズクックダブリュ.等、Synthesis 1025（1984 ）に従う、（4）型のアルデヒドとのウィッテッヒ反応によって得られる。例えば、（4）型の適当なアルデヒドがテトラヒドロフラン等の中性溶媒中でテトラエチレンビスホスホネートのリチウム塩の１モル当量の僅かな過剰と反応される。反応体は典型的には10ないし24時間の範囲の期間約−78℃の温度範囲で一緒に撹拌される。対応するアルケニルホスホネート（5）は、この分野で良く知られた抽出方法によって反応混合物から回収される。段階ｂに於て、ヒドロキシ保護基Ｐｇ₁は、選択的に解裂されて（6）型のアルコールを与える。反応経路IIIに於て、（8）型の化合物は6〜24時間の期間−10℃から50℃の範囲の温度に於て、テトラヒドロフラン又はジメチルホルムアミド等の中性溶媒中でヒドロキシメチルホスホン酸ジエステルのアルコキシド陰イオンによって（7 ）型のハロゲン化アリル、ハロゲン化プロパルギル又はハロゲン化アレニルの親核置換によって段階ａ中で得られる。段階ｂに於て、ヒドロキシ保護基Ｐｇ₁は選択的に解裂されて、（9）型のアルコールを与える。別の方法としで、（8）型の化合物は上に記載のものと同じ反応条件に於て、（10）型のアルコールのアルコキシド陰イオンによってトシルオキシメチルホスホン酸ジエステルの親核置換によって得ることが出来る。それぞれの化合物（3）、（6）、又は（9）に対する反応経路IV、V、VIに於て、本明細書で定義されるように、本明細書で定義される適当なプリン又はピリミジン塩基が加えられて独立に化合物（13）、（16）及び（19）を与える。反応経路IVに於て、化合物（3）、（6）、又は（9）中の核酸塩基によるヒドロキシ官能基の置き換えは、アルコールを脱離基に変換し（段階ａ）、化合物（ 11）を与え、次に保護基形（ＢＰｇ₃）の適当な核酸塩基（Ｂ）１当量と、無水ジメチルホルムアミド等の有機溶媒中で、必要ならば炭酸カリウム等の塩基の存在下で、反応させることによって達成される（段階ｂ）。反応体は、約０℃に於て室温に約10〜48時間攪拌され、化合物（12）を与える。次に塩基の脱保護及びホスホン酸ジエスチルの臭化トリメチルシリルによる加水分解を順次幾つかの方法で行なうことが出来、化合物（13）を与える。ブロンソンジェー.等 J．Me d．Chem．32：1457（1989）及びキムシー.等，J．Med．Chem．33：1207（1990 ）。脱エステル化又は脱保護段階は、逆にすることが出来る。別の方法として、化合物（3）、（6）、又は（9）中のヒドロキシル基の核酸塩基による置き換えは、ミツノブ反応によって行なうことも出来、ジェリーティー．Tett．Lettt．32：7029（1991）、そして中間体（12）を与え、これを上に記載したように処理して（13）型の化合物を与える。反応経路、Vに於て、化合物（17）中に於ける核酸塩基に連結されたメトキシメチルエステル官能基（Ｚ＝ＣＨ₂ＯＣＨ₂）の形成は、化合物（3）、（6）又は（9）のいずれか一つの（n=1のとき）パラホルムアルデヒドとの混合物を、1,2-ジクロロエタン中の塩化水素ガスにより処理することによって達成され、中間体のクロロメチルエーテル（14）を形成し（段階ａ）、これを、過剰の酸塩化物を除去した後に、ビストリメチルシリルアセトアミドの過剰での対応する核酸塩基の処理によって得られる核酸塩基のシリル化された形態（ＢＴＭＳ）により処理する（段階ｂ）。核酸塩基の保護基の連続的な脱保護及びホスホン酸エステルの加水分解は、反応経路Ｉ（段階ｃ及びｄ）中に記載されるように達成され、化合物（17）を与える。オギルヴィーケイ．等、（can．J．Chem．60： 3005（1982）及びオギルヴィーケイ．等、NuCleoside and Nucleotides 2：14 7（1983）。反応経路、VIに於て、酸素-核酸塩基連結を含有している（20）型の化合物の形成は、ジメチルホルムアミド中の、トリフェニルホスフィン、ジエチルジアゾジカルボキシレートを使用して、適当に官能基化されたアルコール（3）、（6）、又は（9）を1-ヒドロキシピリミジン類、又は9-ヒドロキシプリン類と結合させるミツノブ型反応によって達成される，パーキンエー.，J．Chem．Soc．Per kin Trans．2983（1991）。核酸塩基及びホスホン酸ジエステルの脱保護は反応経路VI中に記載されるように達成される。燐原子に対し結合されたメチレンオキシメチルを有する化合物（Ｔ＝ＣＨ₂ＯＣＨ₂）の特別な場合、対称ジハライド（クロライド）の連続したアルキル化を次のように使用することが出来る。反応経路Ｂの（21）型の対称ユニットの導入の特別な場合、反応経路III段階ａ及び反応経路IV段階ｂに於て記載された置換は、化合物（22）を与える為にメトキシホスホン酸ジエステルを導入する為の反応経路III段階ａ、及び化合物（23）を与える為に保護された核酸塩基を導入する為の反応経路IV段階ｂの別々の場合に於て記載される同じ条件を使用して順次達成できる。順次核酸塩基の脱保護、及びホスホン酸ジエステルの加水分解を行なうと化合物（24）を与える。Ｚが何も存在しないことを表わし、Ｗが（26）型化合物のアレニル部分に常に等しい場合に於て、（26）型の化合物は、ファドタルエス.（Phadtar S.）等、J．Am．Chem．Soc．111：5925（1989）に記載されるように、エチニル官能基をアレニル官能基に異性化する為に塩基処理することによりエチニル誘導体（24 ）（Ｔに依存して上に記載される方法の一つによって得られる）から得られ得る。反応経路Ｄ段階ａに於て、ジヒドロキシホスホネート（27）は、塩化チオニルと反応されてジクロロホスホネートを与え、これは更にアルコールＲ₅ＯＨと反応させられてジ置換ホスホネート（28）を与える。段階ｂに於てジ置換ホスホネート（28）は加水分解されて（29）を与える。段階（ｃ）に於て、モノアシルオキシアルキルモノアルキルホスホネート（29）は前に記載したように塩化チオニルと反応させられ、更にＲ₅'ＯＨと反応させられて、Ｒ₅とＲ₅'が異なる非対称ジ置換ホスホネートを生じる。反応経路Ｄに定義される通り。反応経路Ｅは、置換されたモルホリンなどの有機塩基の存在下で、置換クロロメチリエーテル（31）とジヒドロキシホスホネート（27）が反応して、ジ置換ホスホネート（32）を生じることを示している。反応経路Ｄに定義した通り。反応経路Ｆは、前に記載した通りモノアシルオキシモノアルキルホスホネート（29）がクロロメチルエーテル（31）と反応してモノアシルオキシアルキルホスホネート（32）を生じることを示している。実施例１ E-9-（5-ジヒドロキシホスホリル-3-メチリデン-4-ペンテニル）グアニン（式中Ｘ₁はＮＨ₂、Ｘ₂はＯＨ、ＺはＣＨ₂ＣＨ₂、ＷはＷａであって、ここでＲ₁ とＲ₂はそれぞれＨ、ＴはＴ’であって、ＣＨ＝ＣＨである）段階Ａ： 4-t-ブチルジメチルオキシ-2-メチリデンブタナール 4-ブチルジメチルオキシ-2-アセチルオキシ-1-ブタノール（14g,50mモル）、粉末状の分子篩、N-メチルモルホリンN-オキシド（9.9g,75mモル）及びテトラプロピルアンモニウムペルルテネート（TPAP）（0.34g,2.5mモル）の無水ジクロロメタン（250ml）中の混合物を20℃で一夜攪拌した。次に反応混合物をセライトを通して瀘過し、真空で濃縮し、表題生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（8.25g,77%）。段階Ｂ： E-5-t-ブチルジメチルシリロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニル-ホスホン酸ジエチルエステルヘキサン中の1.6Mのn-ブチルリチウム（4.7ml,7.45mモル）の溶液を、無水テトラヒドロフラン（70ml）中のテトラエチルメチレンビホスホネート（2.14g,7. 45mモル）の混合物に−78℃でアルゴン下で加えた。１時間後、無水テトラヒドロフラン（10ml）中の4-t-ブチルジメチルオキシ-2-メチリデンブタナール（1.1 4g,5.3mモル）の溶液を滴下した。反応混合物を−78℃で３時間攪拌し、20℃で一夜攪拌し、塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、ジエチルエーテルで抽出した。表題化合物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで単離した（1.7g,91%）。段階Ｃ： E-5-ヒドロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニル-ホスホン酸ジエチルエステル E-5-t-ブチルジメチルシリロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニルホスホン酸ジエチルエステル（1.7g,4.86mモル）及びテトラヒドロフラン中の1Mテトラブチルアンモニウムフルオライド（8ml,8mモル）の混合物を20℃で２時間攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、表題生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製した（1.1g,94%）。段階Ｄ： E-5-トシロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニル-ホスホン酸ジエチルエステル無水ジクロロメタン中のE-5-ヒドロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニル-ホスホン酸ジエチルエステル（1.07g,4.6mモル）、トリエチルアミン（0.7ml,5mモル）、トシルクロライド（0.96g,5mモル）及びジメチルアミノピリジン（0.005g,0.0 4mモル）を20℃で4時間攪拌し、真空で濃縮し、表題生成物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって得た（1.55g,87％）。段階Ｅ： E-9-（5-ジエトキシホスホニル-3-メチリデン-4-ペンテニル）-6-クロロ-2-アミノプリン無水ジメチルホルムアミド（10ml）中の6-クロロ-2-アミノプリン（0.74g,4.3 mモル）、水素化ナトリウム（0.175 ｇ,4.3mモル，油中60％）の混合物を20℃で30分間攪拌した。次に無水ジメチルホルムアミド（5ml）中のE-5-トシロキシ-3-メチリデン-1-ペンテニルホスホン酸ジエチルエステル（1.5g,3.9mモル）の溶液を加え、生じる混合物を20℃で一夜攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、残留物をシリカゲル上のフラッシュクロマトログラフィーによって精製し、表題生成物を得た（1.1g,73％）。段階Ｆ： E-9-（5-ジヒドロキシホスホニル-3-メチリデン-4-ペンテニル）-6-クロロ-2-アミノプリン無水アセトニトリル（5ml）中のE-9-（5-ジエトキシホスホニル-3-メチリデン -4-ペンテニル）-6-クロロ-2-アミノプリン（0.96g,2.5mモル）及びトリメチルシリルブロマイド（1.3ml,10mモル）の混合物を20℃で一夜攪拌した。次に反応混合物をメタノール5mlで処理し、真空で濃縮した。粗生成物（0.8g）を次の段階で更に精製することなしに使用した。段階Ｇ： E-9-（5-ジヒドロキシホスホニル-3-メチリデン-4-ペンテニル）グアンニン 1N塩酸（5ml）中の粗製E-9-（5-ジヒドロキシホスホニル-3-メチリデン-4-ペンテニル）-6-クロロ-2-アミノプリン（0.8g,〜0.245mモル）の混合物を20℃で一夜攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、無水エタノールで希釈し、冷却すると表題生成物を得た（0.46g,60％）。実施例２ E-9-［（4-ジヒドロキシホスホリル-2-メチリデン-3-ブテニロキシ）メチル］グアニン（式中Ｘ₁はＮＨ₂、Ｘ₂はＯＨ、ＺはＣＨ₂ＯＣＨ₂、ＷはＷａであって、ここでＲ₁とＲ₂はそれぞれＨ、ＴはＴ’であって、ＣＨ＝ＣＨである）段階Ａ： 2-t-ブチルジフェニルシリロキシメチル-2-プロペン-1-オール無水ジクロロメタン（60ml）中のt-ブチルジフェニルシリルクロライド（45g, 165mモル）の溶液を、無水ジクロロメタン（300ml）中の2-ヒドロキシメチル-2- プロペン-1-オール（12g,165mモル）、トリエチルアミン（27.5ml）及び4-ジメチルアミノピリミジン（2g）の攪拌溶夜に０℃で滴下した。次に混合物20℃で一夜攪拌し、塩化アンモニウムの飽和溶液と食塩水で洗浄した。表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって得られる（19.4g,40％）。段階Ｂ： 2-t-ブチルジフェニルシリロキシメチル-2-プロペナール無水ジクロロメタン（400ml）中の2-t-ブチルジフェニルシリロキシメチル-2- プロペン-1-オール（25.5g,86.7mモル）、粉末形の分子篩（26g）、N-メチルモルホリン-N-オキシド（15.3g,130mモル）及びテトラプロピルアンモニウムペルルテネート（1.5g,4mモル）の混合物を20℃で一夜攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題生成物を得た（21g,83％）。段階Ｃ： E-4-ブチルジフェニルシリロキシ-1,3-ブタジエニルホスホン酸ジエチルエスチルヘキサン（70ml,120mモル）中の1.6Mのn-ブチルリチウムの溶液を無水テトラヒドロフラン（150ml）中のテトラエチルメチレンビスホスホネート（34.5g,120 mモル）の溶液に−78℃で加えた。30分後、無水テトラヒドロフラン中の2-t-ブチルジフェニルシリロキシメチル-2-プロペナール（21g,71.5mモル）の溶液を滴下した。反応混合物を−78℃で４時間攪拌し、そして20℃で一夜攪拌し、次に塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、ジエチルエーテルで抽出した。表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られる（20g,55％）。段階Ｄ E-4-ヒドロキシ-1,3-ブタジエニルホスホン酸ジエチルエステルテトラヒドロフラン（100ml）中のE-4-t-ブチルジフェニルシリロキシ-1,3-ブタジエニルホスホン酸ジエチルエステル（11g,26.4mモル）及びテトラブチルアンモニウムフルオライドトリハイドレート（10g,31mモル）の混合物を20℃で２時間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチルで希釈し、食塩水で洗浄した。表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られた（ 4.6g,80%）。段階Ｅ： E-9-［（4-ジエトキンホスホリル-2-メチリデン-3-ブテニロキシ）メチル］-6- （2-トリメチルシリルエトキシ）-2-アミノプリン無水塩化水素を無水1,2-ジクロロエタン（5ml）中のパラホルムアルデヒド（0 .17g,5.0mモル）、E-4-ヒドロキシ-1,3-ブタジエニルホスホン酸ジエチルエステル（0.9g,4.5mモル）の混合物中に０℃で15分間通しバブルさせた。反応混合物を20℃で２時間攪拌し、真空で濃縮し、1,2-ジクロロエタン（10ml）で希釈し、１時間の間に1,2-ジクロロエタン（5ml）中の6-（2-トリメチルシリルエトキシ）-2-アミノプリン（1.3g,5mモル）及びビス-トリメチルシリルアセトアミド（2 .5g）を、そしてヨウ化テトラブチルアンモニウム（0.19g,O.5mモル）を、60℃ で加熱することによって得られる、ビス-トリメチルシリル-6-（2-トリメチルシリルエチロキシ）-2 -アミノプリンの溶液に加えた。反応混合物を20℃で３時間攪拌し、次に還流下で４時間攪拌し、そして塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、そしてクロロホルムで抽出した。表題生成物は、シリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得ら）れた（0.37g,96％）。段階Ｆ： E-9-（4-ジヒドロキシホスホニル-2-メチリデン-3-ブテニロキニ）メチル］グアニン無水アセトニトリル（3ml）中のE-9-［（4-ジエトキシホスホニル-2-メチリデン-3-ブテニロキシ）メチル］-6-(2-トリメチルシリルエトキシ）-2−アミノプリン（0.24g,0.5mモル）及びトリメチルシリルブロマイド（0.26m1,2mモル）の混合物を20℃で一晩攪拌した。反応混合物をメタノール（2ml）で処理し、真空で濃縮し、表題生成物がエタノール：水中での結晶化によって得られた（0.12g, 65％）。実施例３ 9-（3-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）グアニン（式中Ｘ₁はＮＨ₂、Ｘ₂はＯＨ、ＺはＣＨ₂、ＷはＷａであって、ここでＲ₁とＲ₂ はそれぞれＨ、ＴはＴ”であって、ＣＨ₂ＯＣＨ₂である。）段階Ａ：（2-クロロメチル-2-プロペニロキシメチル）ホスホン酸ジエチルエステル無水テトラヒドロフラン（10ml）中のヒドロキシメチルホスホン酸ジエチルエステル（0.84g,5mモル）、1-クロロ-2-クロロメチル-2-プロペン（0.95g,7.6mモル）及びヨウ化テトラブチルアンモニウム（0.18g,0.5mモル)の混合物に０℃で水素化ナトリウムを加えた（0.24g,6mモル，油中60％）。混合物を一夜20℃で攪拌した。反応混合物を塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、酢酸エチルで抽出し、表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られた（0.35g,27％）。段階Ｂ： 9-（3-ジエトキシホスホリルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）6-クロロ-2-アミノプリン無水ジメチルホルムアミド中の（2-クロロメチル-2-プロペニロキシメチル）ホスホン酸ジエチルエステル（0.285g,1.1mモル）、6-クロロ-2-アミノプリン（ 0.25g,1.5mモル）及び炭酸カリウム（0.24g,1.5mモル）の混合物を20℃で二日間攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、表題生成物がシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られた（0.22g,51％）。段階Ｃ： 9-（3-ジヒドロキシスホスホニルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）グアニン無水アセトニトリル（2ml）中の9-（3-ジエトキシホスホリルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）6-クロロ-2-アミノブリン（0.22g,0.56mモル）、トリメチルシリルブロマイド（0.43g,2.8mモル）及び2,6-ルチジン（0.59g,5.5mモル）の混合物を24時間20℃でアルゴン下で攪拌した。次に反応混合物を真空で濃縮し、1M 水酸化ナトリウム（10ml）で20℃で二日間処理した。表題生成物はエタノールによる沈殿によって得られた（0.11g,61％）。実施例４ Z-9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブテニル）グアニン（式中Ｘ₁はＮＨ₂、Ｘ₂はＯＨ、ＺはＣＨ₂、ＷはＷｃであり、ここでそれぞれＲ₁ とＲ₂はＨであり、ＴはＴ”であってＣＨ₂ＯＣＨ₂である。）段階Ａ： Z-（4-クロロ-2-ブテニロキシ）メチルホスホン酸ジエチルエステル無水テトラヒドロフラン（15ml）中のヒドロキシメチルホスホン酸ジエチルエステ（1.68mg,10mモル）、Z-1,4-ジクロロ-2-ブテン（1.9g,15mモル）及びヨウ化テトラn-ブチルアンモニウム（0.36g,1mモル）の混合物に、０℃で水素化ナトリウム（0.48g,12mモル，油中60%）を加えた。生じる混合物を20℃で一夜攪拌し、塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、そしてジエチルエーテルで抽出した。表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られた（1. 2g,45％）。段階Ｂ： Z-9-（4-ジエトキシホスホリルメトキシ-2-ブテニル）6-クロロ-2-アミノプリン無水ジメチルホルムアミド（10ml）中のZ-（4-クロロ-2-ブテニロキシ）メチルホスホン酸ジエチルエステル（1.05g,4mモル）、6-クロロ-2-アミノプリン（1 g,6mモル）、及び炭酸カリウム（0.92g,6mモル）の混合物を20℃で二日間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題生成物を得た（0.85g,55％）。段階Ｃ： Z-9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブテニル）グアニン無水アセトニトリル（10ml）中のZ-9-（4-ジエトキシホスホニルメトキシ-2-ブテニル）-6-クロロ-2-アミノプリン（0.78g,2mモル）、臭化トリメチルシリル（1.5g,10mモル）及び及び2,6-ルチジン（2.15g,20mモル）の混合物を20℃でアルゴン下で24時間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物を1M水酸化ナトリウム15mlで20℃で二日間処理した。表題生成物のナトリウム塩が連続したエタノール：水中での沈殿によって得られた（0.55g,75％）。実施例５ 9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブチニル）グアニン（式中Ｘ₁はＮＨ₂、Ｘ₂はＯＨ、ＺはＣＨ₂、ＷはＷｄそしてＴはＴ”であってＣＨ₂ＯＣＨ₂である）段階Ａ：（4-クロロ-2-ブチニロキシ）メチルホスホン酸ジエチルエステルヒドロキシメチルホスホン酸ジエチルエステル（3.35g,20mモル）、1,4-ジクロロ-2-ブチン（3.8g,30mモル）及びヨウ化テトラ-n-ブチルアンモニウム（0.75 g,2mモル）の無水テトラヒドロフラン（100ml）中の混合物に、０℃で少量づつ水素化ナトリウム（0.95g,24mモル，油中60％）を加えた。生じる混合物を０℃で一夜攪拌した。反応混合物を20℃で一夜攪拌し、塩化アンモニウムの飽和溶液で加水分解し、ジエチルエーテルで抽出した。表題生成物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで得られた（2.3g,30％）。段階Ｂ： 9-（4-ジエトキシホスホリルメトキシ-2-ブチニル）-6-クロロ-2-アミノプリン無水ジメチルホルムアミド（15ml）中の（4-クロロ-2-ブチニロキシ）メチルホスホン酸ジエチルエステル（2.03g,8mモル）、6-クロロ-2-アミノプリン（2g, 12mモル）及び炭酸カリウム（1.85g,12mモル）の混合物を20℃でアルゴン下で二日間攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物をシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、表題生成物を得た（1.7g,65％）。段階Ｃ： 9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブチニル）グアニン無水アセトニトリル（20ml）中の9-（4-ジエトキシホスホリルメトキシ-2-ブチニル）-6-クロロ-2-アミノプリン（1.5g,4mモル）、臭化トリメチルシリル（3 g,20ｍモル）及び2,6-ルチジン（4.3g,40mモル）の混合物を20℃でアルゴン下で一日攪拌した。反応混合物を真空で濃縮し、残留物を1M水酸化ナトリウム20mlで 20℃で二日間処理した。表題生成物のナトリウム塩がエタノール：水中の連続した沈殿によって得られた（1.05g,70％）。実施例６ 9-（3-ジピバロルメトキシホスホニルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）グアニン（式中、Ｘ₁はＮＨ₂であり、Ｘ₂はＯＨであり、ＺはＣＨ₂であり、Ｗは、Ｗａであり、ここでＲ₁とＲ₂は夫々Ｈであり、ＴはＴ”でありＣＨ₂ＯＣＨ₂であり、Ｒ₃ とＲ₄は夫々-Ｏ-ＣＨ（Ｒ₆）-Ｏ-Ｃ（Ｏ）Ｒ₅であり、ここでＲ₆はＨである。） N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド（1.13g,0.4mモル）及びクロロメチルピバレート（1.8g,12mモル）を無水ＤＭＦ（10ml）中の9-（3-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-メチリデンプロピル）グアニン（630mg,2mモル）の混合物に加えた。混合物を20℃で一夜攪拌し、次に不溶物を瀘去し、流体を真空で濃縮した。残留物をトルエンで希釈し、水で洗浄した。表題化合物はシリカゲル上のフラッシュクロマトグラフィーで5％MeOH/CH₂で溶出して精製した。実施例７核酸塩基の修飾アデニン誘導体 6-クロロ-2-アミノプリンが使用された全ての実験中で、アデニンを使用して対応する9-置換されたアデニンを与え、次に臭化トリメチルシリル処理によるホスホン酸ジエステルの脱保護を行なった。シトシン誘導体全ての実験に於て、6-クロロ-2-アミノプリンの代りに4-N-アセチルシトシンを使用できた。脱保護は次の二段階で実施できた。（a）エタノール性アンモニアでの処理でN-アセチル基を除去する。（b）臭化トリメチルシリルでの処理によってホスホン酸ジエステルを加水分解する。チミン誘導体全ての実験で、チミンを6-クロロ-2-アミノプリンの代りに使用できる。ホスホン酸ジエステルの加水分解は、臭化トリメチルシリルによる処理によって達成できる。2,6-ジアミノプリンジアミノプリン類似体は、臭化トリメチルシリル処理によって、又は対応する実験中の6-クロロ-2-アミノプリンの代りに2,6-ジアミノプリンを使用して得ることが出来る。本発明の化合物は医療に有用であり、特にウィルス感染の治療又は予防に有用であり、例えば、ＤＮＡウイルス類（ヘルペス１及び２型、サイトメガロウイルス、バリセラ-ゾスターウィルス、エプスタイン-バールウイルス）、レトロウイルス類（人免疫不全ウィルス１及び２型、及びピスナウィルス類）、及びエイズ関連併発症（ＡＲＣ）等の関連する臨床症状、及び腫瘍形成に関与するウィルスに対し有効な抗ウィルス剤として有用である。本発明の抗ウィルス剤は単一療法剤としての有用性を有し、レトロウィルス、特に人、特に人免疫不全ウィルスのレトロウイルス感染の処置の為の連係療法等の、他の抗ウィルス剤との連係に於て有用性を有している。特に好ましいのは、2',3'-ジデオキシプリンヌクレオシド類、即ち、2',3'-ジデオキシアデノシン、2',3'-ジデオキシグアノシン、2',3'-ジデオキシチオイノシン及び2',3'-ジデオキシイノシンとの連係療法である。他の可能な連係療法には、ウィルス感染の治療又は予防、又は関連症状の治療又は予防の為に有効な試薬、例えば3'-アジド-3'-デオキシチミジン（ジドブジン）、2',3'-ジデオキシヌクレオシド類、例えば、2',3'- ジデオキシシチジン、2',3'-ジデオキシアデノシン、及び2',3'-ジデオキシイノシン、非環式ヌクレオシド類（例えばアシクロビル）、インターフェロン類、例えばα-インターフェロン、腎臓分泌抑制剤、例えばプロベニシド、ヌクレオシド運搬抑制剤、例えばジピリダモール、並びに免疫調整剤、例えばインターロイキンII及びグラニュロサイトマクロファージコロニー刺激因子等の試薬を含む。そのような組合せ療法の構成化合物は、組合せ効果が達成できるように、別々に、組合せ処方中で同時に又は異なる時間に、例えば連続的に投与することが出来る。本発明の化合物の抗ウィルス効果は任意の適当な方法で測定できる。これらの化合物の有効性を試験する幾つかの代表的な方法は以下の通りである。人免疫不全ウィルス（HIV）に対するＭＴＴ細胞生存検定ＭＴＴ細胞生存検定は、ポーウェルス等（J．virol．Methods，1988：20．309 -321）によって元々記載されたものである。この方法は黄色の3-（4,5-ジメチル -2-イル）-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロマイド（ＭＴＴ）（シグマケミカルカンパニーリミテッド製）を青色のフォルマザン生成物に還元する生きた細胞の能力（死んだ細胞は能力がない）に基づく比色検定である。この還元反応は、代謝的に活性な細胞のミトコンドリアのデヒドロゲナーゼによって実施される。この検定は、細胞毒性と平行して可能性のある抗ウィルス剤の抗ＨＩＶ活性の迅速かつ正確な評価を可能にし、選択指数（Ｓ．Ｉ．）を決定出来るようにする。ＨＩＶ感染に対し高度に感受性であるＭＴ-4細胞が使用され、ＨＩＶ-1系統ＲＦで感染される。プラスチックの96個ウェルのフラットボトムのミクロタイタートレイ（ステリリンリミテッド製）の中心の60個のウェルに、要求される最終濃度の二倍での試験化合物の一連の希釈物を含有している生育培地100μｌを充填する。外側のウェルは培養期間の間に蒸発を防止する為に滅菌蒸留水で充填した。化合物の各濃度について、感染された及び感染されない細胞の両方についての化合物の影響が同時に評価できるように、三重のウェルの二つのセットが存在する。幾つかのウェルは偽（mock）-及びウィルス-感染細胞の両方についての未処理対照として、薬物が存在しないままとした。指数的に増殖しているＭＴ-4細胞を計数し、細胞の数をウェルあたり５×10⁴細胞となるように調節した。細胞を次にペレット化し、次に二つに分割した。細胞の半分をウィルスで感染させ（５× 10⁴細胞あたり100TCID₅₀）、そして他の半分は偽-感染させた。ウィルスの吸着は室温で１時間である。細胞を次にペレット化し、ミクロタイタープレートの各ウェルに100μｌが加えられるように、１容量の培地中で再懸濁される前にRPMI 中で一度洗浄した。培養基プレートを37℃で５％ＣＯ₂を含有しているインキュベーター中で培養した。六日間の培養後、各ウェル中にＰＢＳ中のＭＴＴ（7.5mg/ml）の溶液10μｌを加え、そしてプレートを更に37℃で１時間培養した。フォルマザン結晶を100μ ｌの10％（v/v）トリトンＸ-100の酸性化されたイソプロパノール（500mlの溶媒あたり２mlのＨＣｌ）中のものを加えることによって可溶化し、混合した。最後に、吸光度をマルチスカンＭＣＣ分光光度計（フローラボラトリーズ）を使用して540nmにおいて読んだ。各化合物について平均光学密度（O.D.）読み値を偽-感染及びウィルス感染細胞の両方について薬剤濃度に対しプロットした。50％の細胞毒性投与量（ＣＤ₅₀）及び試験化合物の50％抑制濃度（ＩＣ₅₀）の両方が決定出来る50％終点を表わしているO.D.値は、次の式を用いて計算される。 C-8166を使用する化合物抗HIV活性検出用プロトコルプラスチックの96個のウェルのフラットボトムのミクロタイタートレイの中心の60個のウェルに、要求される最終濃度の二倍での試験化合物の一連の希釈物を含有している生育培地100μｌを充填した。外側のウェルは培養期間の間に蒸発を防止する為に滅菌蒸留水を満たした。化合物の各濃度について、三重のウェルを使用した。幾つかのウェルは末処理対照として、薬物が存在しないままとした。指数的に増殖しているC-8166細胞を計数し、細胞数をウェルあたり１×10⁵細胞を可能とするように調節した。細胞をペレット化し、HIVで感染させ、細胞あたり0.001及び0.0001感染単位の間の感染の複数を得た。ウィルスの吸着は室温で１時間であった。細胞を次にペレット化し、RPMIで３回洗浄してからミクロタイタープレートの各ウェルに10 0μｌが加えられるように培地１容量中に再懸濁した。培養基プレートを37℃で５％ＣＯ₂を含有しているインキュベーター中で培養した。三日後に感染した細胞を観測し、シンシチアの存在について記録した。+++＝50％〜100％ cpe；++＝ 10％〜50％ cpe；+＝<10％ cpe；そして０＝シンシチウムなし。100μｌの上澄み液体を次に各ウェルから収穫し、ＥＬＩＳＡを使用してｐ２４ウィルスコア抗体の水準について検定した。ｐ２４ＥＬＩＳＡ 96個のウェルのＵ字底のミクロタイタープレート（ファルコン，ベクトンディッキンソン）の中心の60個のウェルにコーティング緩衝液（100mM NaHCO₃、pH 8.5）中の10μg/mlの濃度に於けるアフィニティー精製ヒツジ抗HIV-1-ｐ24（アアルトバイオリエージェンツAalto Bioreagents，アイルランド国ダブリンのラスファーハム、コードD7320）100μｌで被覆した。この生成物はHIV-1系統BH-10 のp24 gag蛋白質のアミノ酸の283〜297（LDIRQGPKEPFRDYV）；173〜188（SALSEG ATPQDLNTML）、及び226〜237（GQMREPRGSDIA）に対応する三つの異なる合成ペプチド類でヒツジを免疫化することによって造った。プレートを＋４℃で一夜抗体が結合するように放置し、次にトリス緩衝化食塩水（TBS）（0.144M Nacl、25mM トリスpH7.5）中でミクロタイタープレートウォッシャー（ルミナールテクノロジーズ製）を用いて２回洗浄し、その後室温で１時間ＴＢＳ中で造られた２％スキムミルク（カドバリーズマルベル製）でブロックした（200μｌ/ウェル）。ＴＢＳで２回洗浄後、100μｌ容量の細胞の無い培養基流体をツヴィッターイオンの洗剤エンピゲン（Empigen）（カルビオケム）の１％（v/v）容液10 μｌと共にウェルに加えた。ｐ２４の期時される水準に依存して、培養基流体をそのまま未希釈、又は１：10又は１：100倍希釈の何れかでスクリーニングした。試料を室温で一夜培養してからウェルを３回洗浄し、100μｌの第二回目の抗- ｐ２４抗体、20％ヒツジ血清（シエララブ）を含有しているＴＢＳ中の１：3000 の濃度に於けるアルカリホスファターゼ（ＡＤＰ 452）と直接コンジュゲートされたEH12E1-AP、２％スキムミルク（カドバリーズマーベル）及び0.5％ツイーン 20（シグマケミカルカンパニー）と共に培養した。HIV-1 CB1-1単離体に対してブリゲットフェルンス、リチャードテッダー、及び同僚によってミドルセックスホスピタルメディカルスクールに於て生じさせられたこの抗体は、二つの区別されるペプチド配列を組込んでいる複合体エピトープに対しマッピングされている。これらは、GHQAAMQMLKETINEEAAEWDRVHPVHAGPIAPGQ（aa 193〜227）及びNP PIPVGEIYKRWII（aa 253〜267）であり、ＨＩＶ-1系統間にコンザーブされている。EH12E1のアルカリホスフファターゼコンジュゲート（EH12E1-AP）は、英国ケンブリッジのノボバイオラブス（Novo BioLabs）によって造られた。このコンジュゲート化抗体は、ＡＤＰ試薬銀行を通じて得られた。プレートを37 ℃で１時間インキュベーター／シェーカー（ルミナールテクノロジーズ製）を使用して培養し、次にウェルをＴＢＳ中で３回洗浄した。ウェルに市販されているアルカリホスファターゼ検出及び増幅キット中に於て与えられた緩衝液中の最終洗浄が与えられ、AMPAK（ＩＱ（バイオ）リミテッド製）及び50μｌのAMPAK基質が製造業者の指示に従って加えられた。室温で30分後、50μｌのAMPAK増幅剤を加え、酸で反応を止めた後に492nmでマルチスキャンMCC/340分光光度計（フローラボラトリーズ製）を用いておよそ10分後に紫色の強度を読んだ。免疫検定を、100ng/mlから出発する一連の二倍希釈物を使用して、ADPを通じて得られた組替えHIV-1p24（アメリカンバイオテクロノジーズInc.）を使用して、目盛検定した。この検定は、通常300から10,000pg/mlの範囲にわたって線形の応答を与えるが、日によって変化する。化合物の抗-ヘルペス（HSV-1とHSV-2）活性の検出検定の為に、適当な生育培地中の、ヒーラ（人頸部癌）細胞（0.8×10⁵／0.1m l）、又はベロ（アフリカングリーンモンキー腎臓）細胞（1.0×10⁵／0.1ml）をフラットボトムの96個のウェル（0.1ml細胞/ウェル）ミクロタイタープレート（ファルコン製）に移した。37℃で、湿らせたＣＯ₂（５％ＣＯ₂,9 5％空気）のインキュベーター中で24時間培養後、培養基は使用する準備が出来る。各検定の為には生育培地をミクロタイタープレート培養基から吸引し、100μ ｌの、維持培地で置き換えるか（細胞とウィルス対照）又は維持培地中で二培試験濃度に希釈した化合物（毒性対照、試験ウェル）で置き換えた。３時間37℃で湿らせたＣＯ₂インキュベーター中での培養後、各培養基は、100μｌの維持培地を（細胞と毒性対照）、又は維持培地中に希釈されたウィルス［単純疱疹ウィルス１型（HSV-1;系統HF，ATCC VR-260）又は単純疱疹ウィルス２型（HSV-2;系統D ,ATCC VR-734）］を（ウィルス対照、化合物試験ウェル）受けた。次に全ての培養基を37℃で培養し、そして48時間及び72時間（ヘルペス）に、又は７、10及び 14日（CMV）に、顕微鏡でウィルス-誘発及び化合物-誘発の細胞変性効果（cytop athiceffect）（ＣＰＥ）について調べた。ＣＰＥは０（無し）、１＋（25％）、３＋（75％）又は４＋（100％）細胞の単相（monolayer）破壊として等級づけた。これらのデータを次に50％化合物抑制濃度（IC₅₀）を計算する為に使用した。化合物の抗サイトメガロウィルス活性の検出検定の為には適当な生育培地中のMRC-5細胞（1.2×10⁵/0.1ml）をフラットボトム96個のウェル（0.1ml細胞/ウェル）ミクロタイタープレート（ファルコン製）に移した。湿らせたＣＯ₂（５％ＣＯ₂,95％空気）のインキュベーター中で37℃で24時間後、培養基は使用の準備が出来る。各検定については、生育培地をミクロタイタープレート培養基から吸取って10 0μｌの維持培地（細胞とウィルス対照）で、又は維持培地中で二倍試験濃度に希釈された化合物（毒性対照,試験ウェル）で置き換えた。３時間37℃で湿らせたＣＯ₂インキュベーター中で培養後、各培養基は、100μｌの、維持培地（細胞と毒性対照）を、又は、維持培地中に希釈されたウィルス［人サイトメガロウィルス（CMV,系統AD-169,ATCC VR-538）］（ウィルス対照，化合物試験ウェル）を受けた。全ての培養基を37℃で培養し、48及び72時間（ヘルペス）に、又は７、 10及び14日（CMV）に、ウィルス-誘発及び化合物-誘発の細胞変性効果（ＣＰＥ）について、顕微鏡的に調べた。ＣＰＥは、０（無し）、１＋（25％）、３＋（ 75％）又は４＋（100％）細胞の単相（monolayer）破壊として等級づけた。次に、これらのデータを50％化合物抑制濃度（ＩＣ₅₀）を計算する為に使用した。グアニレートキナーゼによるグアニンの非環式ヌクレオチド誘導体のホスホリル化効果（Ｖmax／Ｋm比として定義）を、参照基質として使用したＧＭＰのものと比較した。パラメーターのＶmax及びＫmの測定の為に使用した測定法はナブ等のArch．Biochem．Biophys．（1992）2 95，253-257に記載された通りであった。投与されるべき活性化合物の量は、使用された特定投与単位、処置の期間、処置される患者の年令と性、及び処置される病気の性質と程度に従って大きく変化し得る。投与されるべき活性成分の合計の有効抗ウィルス量は、一般に、約１mg /kg〜100mg/kg、好ましくは３mg/kg〜25mg/kgの範囲である。単位投与形は25〜5 00mgの活性成分を含有し、一日あたり１回以上投与される。式Ｉ又は式IIの活性化合物は、慣用の単位投与形を使用して経口的、非経口的、局所的又は経皮的に投与されることが出来る。「患者」という用語は、本明細書では、哺乳類、例えばマウス、ラット、ネコ、イヌ、ウシ、ヒツジ、ブタ及びヒトを含めた霊長類を意味する。経口投与には、硫酸化オリゴマーをカプセル剤、丸薬、錠剤、トローチ剤、ロゼンジ剤、溶融剤、散剤、溶液、懸濁液、又は乳濁液のような固体や液体の製剤に処方できる。固体単位適量形式はカプセル剤でありうる。これは通常の硬殻又は軟殻ゼラチン型のもので、例えば表面活性剤、潤滑剤、及び乳糖、庶糖、燐酸カルシウム、及びトウモロコシ澱粉のような不活性充填剤を含有している。別の態様では、本発明化合物類を乳糖、庶糖、及びトウモロコシ澱粉のような慣用の錠剤某剤と一緒にし、アラビアゴム、トウモロコシ澱粉、又はゼラチンのような結合剤；投与後の錠剤の崩壊と溶解を助けるための崩壊剤、例えばバレイショ澱粉、アルギン酸、トウモロコシ澱粉、及びグアーゴム；錠剤造粒の流れを改良し、錠剤ダイス及びパンチ表面への錠剤材料の接着を予防するための潤滑剤、例えば滑石、ステアリン酸、又はステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム又はステアリン酸亜鉛；錠剤の美観を増強し、患者に受け入れやすくするための染料、着色剤及び風味料と組み合わせて錠剤化できる。経口液体適量形式の使用に適した付形剤は、水とアルコール、例えばエタノール、ベンジルアルコール、及びポリエチレンアルコールのような増量剤を包含し、また製薬上受け入れられる表面活性剤、懸濁剤、又は乳化剤を加えても加えなくてもよい。本発明の式１の化合物は、製薬担体を伴った生理学的に受け入れられる増量剤中の注射適量として非経口的に、すなわち皮下、静脈内、筋肉内、又は腹腔内に投与できる。担体は、無菌液体又は液体混合物であって、例えば水、食塩水、水性デキストロース及び関連糖溶液；エタノール、イソプロパノール、又はヘキサデシルアルコールのようなアルコール；プロピレングリコールやポリエチレングリコールのようなグリコール類；2,2-ジメチル-1,3-ジオキソラン-4-メタノールのようなグリセロールケタール；ポリ（エチレングリコール）400のようなエーテル類；油、脂肪酸、脂肪酸エステル又はグリセリド；又はアセチル化脂肪酸グリセリドであり、また石鹸や洗剤のような製薬上受け入れられる表面活性剤；ペクチン、カルボマー、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、又はカルボキシメチルセルロースのような懸濁剤；又は乳化剤その他の製薬助剤を加えても加えなくてもよい。本発明の非経口処方剤に使用できる油類の例は、石油、動植物、又は合成起源のもの、例えば落花生油、大豆油、ごま油、綿実油、トウモロコシ油、オリーブ油、ペトロラタム、及び鉱油である。適当な脂肪酸は、オレイン酸、ステアリン酸、及びイソステアリン酸を包含する。適当な脂肪酸エステルは、例えばオレイン酸エチルとミリスチン酸イソプロピルである。適当な石鹸類は脂肪酸アルカリ金属、アンモニウム及びトリエタノールアミン塩類であり、適当な洗剤は陽イオン洗剤、例えばジメチルジアルキルアンモニウムハライド類、アルキルビリジニウムハライド類、及びアルキルアミンアセテート類；陰イオン洗剤、例えばアルキル、アリール、及びオレフィンスルホネート類、アルキル、オレフィン、エーテル、及びモノグリセリドスルフェート類、及びスルホサクシネート類；非イオン性洗剤、例えば脂肪酸アミンオキシド、脂肪酸フルカノールアミド、及びポリオキシエチレンポリプロピレン共重合体類；及び両性洗剤、例えばアルキル-β- アミノプロピオネート類、及び2-アルキルイミダゾリン第四級アンモニウム塩類、並びに混合物を包含する。本発明の非経口組成物類は典型的には溶液中に活性成分約０.５ないし約25重量％を含有する。防腐剤と緩衝剤も有利に使用できる。注射部位の刺激を最小限化ないし排除するために、このような組成物類は約12ないし約17の親水/親油バランス（HLB）をもつ非イオン性表面活性剤を含有できる。このような処方剤中の表面活性剤量は、約５ないし約15重量％の範囲にある。表面活性剤は、上のHLBをもつ単一成分でもよく、また所望のHLBをもつ二つ以上の成分の混合物でもよい。非経口処方剤に使用される表面活性剤の例は、ポリエチレンソルビタン脂肪酸エステルの部類、例えばソルビタンモノオレエートや、プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合で生成する疎水性基剤とエチレンオキシドとの高分子量アダクトである。また、本発明の化合物類は局所的に投与できる。これは、好ましくはエタノールやジメチルスルホキシド（DMSO）のような経皮吸収を促進することが知られている溶媒を使用して、またその他の付形剤を加えて、又は加えずに、単に投与化合物の溶液を調製することによって達成できる。好ましくは、局所投与は貯液型や多孔性膜型、又は固体基剤変型のパッチを使用して達成される。また局所投与は、目や耳に投与するのに適した溶液又は懸濁液中に本発明の化合物を混入することを含む。適当な幾つかの経皮デバイスは合衆国特許第3.742,951号、第3,797,494号、第 3,996,934号、及び第4,031.894 号に記載されている。これらのデバイスは、一般に片面を構成する裏張り材、他方の表面を構成する活性剤透過性の接着層、及び両表面の間にはさまれた少なくとも一つの活性剤含有貯液層を含んでいる。その代わりに、透過性接着剤層全体に分布する複数のミクロカプセル中に活性剤を含有できる。いずれの場合も、活性剤は貯液又はミクロカプセルから膜を通して活性剤透過性接着剤、継続的に運ばれ、そしてこれは受容者の皮膚や粘膜と接触している。活性剤が皮膚を通して吸収される場合、活性剤の制御された、所定の流れが受容者に投与される。ミクロカプセルの場合、カプセル封入剤も膜として機能しうる。本発明に従って化合物類を経皮投与するためのもう一つのデバイスでは、薬学的活性化合物は基材中に含有され、そこから緩慢で、一定の制御された速度で送り出される。基材は拡散又はミクロ多孔性の流れによる化合物の放出に対して透過性である。放出は、速度制御的である。膜を必要としないこのような系は、米国特許第3,921,636号に記載されている。これらの系では、少なくとも二つの型の放出が可能である。基材が非多孔性の時に、拡散による放出が起こる。製薬上有効な化合物は、基材自体の中に溶解し、拡散する。製薬上有効な化合物が基材の多孔内の液相を通して運ばれる時には、ミクロ多孔性の流れによる放出が起こる。次の表は、Ｒ₁とＲ₂が存在するときにそれらが水素を表わし、Ｒ₃とＲ₄のそれぞれがＯＨを表わす本発明の好ましい化合物の幾つかを表わす。次の表は、Ｘ₁とＸ₂がそれぞれＮＨ₂とＯＨ、ＺがＣＨ₂、ＷがＷａ、そしてＴがＣＨ₂ＯＣＨ₂である本発明の好ましい化合物を表わす。Ｒ₅及びＲ₅'はそれぞれＣＨ₃、ＣＨ₂ＣＨ₃、ＣＨ（ＣＨ₃）₂、ＣＨ₂Ｃ（ＣＨ₃）₃又はベンジルであるが、Ｒ₅とＲ₅'は同じではない。Ｒ₅又はＲ₅’として第三ブチルも含まれる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ハラジー，サージフランス国ラガリグエフ―81090 プレイスデスバリース１

Claims

【特許請求の範囲】１．式〔式中Ｘ₁はＨ又はＮＨ₂であり、Ｘ₂はＯＨ又はＮＨ₂であり、Ｘ₃はＨ又はＣＨ₃であり、そしてＸ₄はＮＨ₂又はＯＨであり、Ｚは何も存在しないことを表わすか、又はＣＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ₂、ＣＨ₂Ｏ、又はＣＨ₂ＯＣＨ₂であり、Ｗは、であり、ここでＲ₁とＲ₂の夫々は、独立にＨ、Ｆ、又はＣＨ₂ＯＨであり、Ｔは何も存在しないことを表わすか、Ｔ’又はＴ”であり、ここでＴ’はＣＨ₂ＣＨ₂、ＣＨ＝ＣＨ、ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）、又はＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）であり、Ｔ”はＣＨ＝ＣＨ-ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ＝ＣＨ-ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）、ＣＨ₂ＯＣＨ₂、ＣＨ₂ＯＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）ＣＨ₂、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＯＨ）、ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂ＯＨ）、又はＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ（ＣＨ₂Ｆ）であり、そしてＲ₃とＲ₄はそれぞれ独立に、ＯＨ、ＯＲ₅、ＯＲ₅'又は-Ｏ-ＣＨ（Ｒ₆）-Ｏ-Ｃ（Ｏ）Ｒ₅であるが、ただし、Ｒ₃とＲ₄のうちの一つがＯＨであるときには、他方は-Ｏ-ＣＨ（Ｒ₆）-Ｏ-Ｃ（Ｏ）Ｒ₅でないことを条件とし、ここでＲ₅とＲ₅' はそれぞれ独立にＣ_1-15アルキル又はベンジルであり、そしてＲ₆はＨ又はＣ_1-1 ₀ アルキルであり、但し、ＴがＣＨ＝ＣＨ又はＣＨ₂ＣＨ₂であって、ＷがＷｃでり、そしてＺがＣＨ₂であるときは、同時にＸ₁がＮＨ₂でなくかつＸ₂はＯＨでないことを条件とし、但し、ＷがＷｅであるときは、Ｚは何も存在しないことを表わすか又はＣＨ₂ であることを条件とし、但し、Ｔが何も存在しないことを表わすときは、ＷはＷｃでないことを条件とし、但し、ＺがＣＨ₂でありＷがＷａであるときには、ＴはＣＨ＝ＣＨでありえないことを条件とし、但し、Ｚが何も存在しないことを表わしかつＷ＝Ｗｃであるときには、ＴはＣＨ＝ＣＨではないことを条件とする。〕の化合物、それらの立体異性体形と立体異性体形の混合物、互変異性形、及び製薬上受入れられる塩類。２．Ｗ＝Ｗａ又はＷｂでありかつＴ＝Ｔ”であるときにはＺがＣＨ₂ＯＣＨ₂でなく；Ｗ＝Ｗｃ又はＷｄでありかつＴ＝Ｔ’であるときにはＺがＣＨ₂ＯＣＨ₂でなく；又はＷ＝Ｗｃ又はＷｄでありかつＴ＝Ｔ”であるときにはＺがＣＨ₂である、請求項１に記載の化合物。３．ＷがＷａ又はＷｃである請求項１に記載の化合物。４．ＴがＴ’でありＴ’がＣＨ＝ＣＨである請求項１に記載の化合物。５．ＴがＴ”でありＴ”がＣＨ₂ＯＣＨ₂である請求項１に記載の化合物。６．ＺがＣＨ₂又はＣＨ₂Ｏである請求項１に記載の化合物。７．化合物が E-9-（5-ジヒドロキシホスホリル-3-メチリデン-4-ペンテニル）グアニン； E-9-［（4-ジヒドロキシホスホリル-2-メチリデン-3-ブテニロキシ）メチル］グアニン； 9-（3-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）グアニン； Z-9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブテニル）グアニン； 9-（4-ジヒドロキシホスホリルメトキシ-2-ブチニル）グアニン； 9-（3-ジピバロルメトキシホスホニルメトキシ-2-メチリデン-プロピル）グアニンである請求項１に記載の化合物。８．Ｘ₁がＮＨ₂でありＸ₂がＯＨである請求項１に記載の化合物。９．化合物が式Ｉからのもののみである請求項１に記載の化合物。１０．製薬上受入れられる担体と組合せた請求項１の化合物を含む製剤組成物。１１．ＤＮＡウィルス、レトロウィルス、又は腫瘍形成に関与するウィルスのウィルス感染の処置に使用する、請求項１に記載の化合物。１２．製薬活性化合物として使用する請求項１に記載の化合物。１３．任意付加的に製薬上受入れられる担体と組合せることもある、ＤＮＡウィルス、レトロウィルス、又は腫瘍形成に関与するウィルスのウィルス感染の処置用製剤組成物の製造に於ける、請求項１に記載の化合物の用途。