JPH08508716A - 血栓症のインヒビター - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明はトロンビンまたは第Ｘａ因子を抑制するペプチドアルデヒド類縁体に関する。本発明の化合物は血栓生成異常に特徴付けられる哺乳類の症状の予防または治療に有用であると考えられる。

Description

【発明の詳細な説明】 血栓症のインヒビター 関連出願 本出願は１９９３年２月１２日に出願した米国特許出願第０８／０１７１２５ 号および現在放棄されている１９９２年２月１４日に出願した米国特許出願第０ ７／８３６１２３号の一部継続出願であり、該米国特許出願の明細書および図面 もこの出願の一部をなす。発明の分野 １つの観点によれば、本発明はトロンビンまたは第Ｘａ因子に対する強いイン ヒビターである化合物に関する。他の観点から本発明は、哺乳類の血液凝固の強 力で特異的なインヒビターとして有用なペプチドアルデヒド類縁体、その薬学的 に許容され得る塩および薬学的に許容され得るこれらの組成物に関する。さらに 他の観点においては、本発明はこれらのインヒビターの、異常な血栓症に特徴付 けられる哺乳類の疾患の治療用剤の用途に関する。発明の背景 正常な止血は凝血塊の生成（血液凝固）および凝血塊の溶解（フィブリノリシ ス）の間の複雑なバランスの結果による。血液細胞、特定の血漿タンパク質およ び血管表面の複雑な相互作用により傷害や血液の消失が生じない限り順調の血液 の流れを維持している。 血液凝固は、血漿中の複数の特定セリンプロテアーゼのザイモゲン類が限定的 タンパク質分解によって活性化されて増幅される、一連の反応の頂点である。ネ マーソンとノッシール、アニュアル・レビュー・オブ・メディシン３３：４７９ （１９８２）。この一連の反応の結果、不溶性のフィブリンマトリックスが形成 されるが、これは初期止血プラグとして必要である。活性化反応間の相互作用お よび増幅作用は外因性および内因性の血液凝固経路を介して生じる。この経路は 非常に相互依存しており、セリンプロテアーゼである第Ｘａ因子の産生で収束す る。第Ｘａ因子は血液凝固カスケードの最後から２番目の反応を触媒するが、こ れは セリンプロテアーゼであるトロンビンの生成工程である。この反応は第Ｘａ因子 、非酵素補因子Ｖａおよび、粘着、活性化された血小板の表面または全身を循環 する膜性微粒子の表面上に結合されている基質プロトロンビンからなるプロトロ ンビナーゼ複合体が生成した後に生じる。 第Ｘ因子をその活性形である第Ｘａ因子に変えるタンパク質分解による活性化 は、内因性経路または外因性経路のいずれででも起こり得る。内因性経路は血液 凝固に必要な成分がすべて血液内に由来することから「内因性」と呼ばれる。サ イトウ、「正常な止血機構」止血異常、第２７〜２９頁、グルン・アンド・スト ラットン・インコーポレイテッド（オー・ディー・ランドフ、エム・ディーおよ びシィー・ディーフォーブス編集１９８４）。この経路にはセリンプロテアーゼ のザイモゲンである第IX因子と第XI因子、および非酵素的補因子である第VIII因 子を含む。内因性経路が開始されると、第XI因子が第XIａ因子へと活性化される 。第XIａ因子は、第IX因子から第IXａ因子への活性化を触媒し、第IXａ因子は適 当なリン脂質表面上の第VIII因子の活性形と共にテナーゼ（tenase）複合体を生 成する。該複合体はさらに、ザイモゲンである第Ｘ因子からセリンプロテアーゼ である第Ｘａ因子形成を剌激し、その結果凝血塊が生じる。 外因性経路は第VII因子に結合し、活性化させる因子である組織因子が血液外 に由来するものであるために「外因性」と呼ばれる。サイトウ、同。この経路の 主な成分は、セリンプロテアーゼのザイモゲンである第VII因子、および膜結合 性タンパク質である組織因子である。後者はこの酵素に対する必須の非酵素補因 子である。外因性経路が開始されると、ザイモゲンである第VII因子が痕跡量の 活性化された第VII因子（第VIIａ因子）によって活性化され、いずれも血管損傷 部位の膜表面へ新たに露出された組織因子と結合する。第VIIａ因子／組織因子 複合体はセリンプロテアーゼである第Ｘａ因子を、そのザイモゲン第Ｘ因子を活 性化して生成する。傷を受けた組織が血液にさらされると、外因性血液凝固経路 が開始される。 ザイモゲンである第Ｘ因子を触媒活性であるＸａへ変えるタンパク質分解酵素 による活性化によって、５２個のアミノ酸の活性化ペプチドが重鎖サブユニット のアミノ末端から分離される。内因性活性化反応は非酵素補因子である第VIIIa 因子と巨大分子複合体を形成している第IXａ因子により触媒される。外因性経路 による第Ｘａ因子の形成反応は第VIIa因子および組織因子の触媒性複合体により 触媒される。両反応はカルシウムイオンの存在下、適当なリン脂質表面上で行わ れる。内因性または外因性のいずれかの経路による第Ｘ因子の活性化に続いて産 生される活性生成物は、α-第Ｘａ因子である。第２のタンパク質分解性切断は 自己触媒性の反応であると考えられており、これは重鎖のカルボキシ末端からの １４個のアミノ酸からなるペプチドの分離によりβ第Ｘａ因子が生成される反応 である。活性化された分子の両方の形態は、血漿内における凝固の促進またはペ プチジルクロモジェニック基質の加水分解の促進能として測定し得る同様の触媒 活性を示す。 トロンビンの生成は、マンら、「ビタミンＫ依存性酵素複合体の表面依存性反 応」、ブロッド、７６：１〜１６（１９９０）に説明されているように、触媒性 プロトロンビナーゼ複合体の構築に続く、第Ｘａ因子の触媒によりなされる。こ の複合体は第Ｘａ因子、非酵素補因子Ｖａおよび基質であるプロトロンビンから 成り、これらすべては適当なリン脂質表面上で組合わされている。効果的な触媒 のための巨大分子複合体が形成されることによって、ヘパリン-抗トロンビンIII が仲介する阻害作用のごとき天然の抗凝固機構からＸａが保護される。テイトと ローゼンベルグ「第Ｘａ因子のヘパリン-抗トロンビン複合体による中和からの 保護」、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲイション７１：１３８ ３−１３９１（１９８３）。さらに、プロトロンビナーゼ複合体中において第Ｘ ａ因子が隔離されていることにより、抗トロンビンIIIを必要とする外来性のヘ パリン治療における抗凝固効果の発現に対しても抵抗性を示す結果となる。 トロンビンは血栓生成の主要なメディエーターである。トロンビンは循環して いるフィブリノーゲンからの不溶性フィブリンが生成される直接の原因となるよ う働く。さらに、トロンビンはザイモゲンである第XIII因子を、フィブリン架橋 をクロスリンクさせて血栓の安定性を共有結合的に強化させる、活性トランスグ ルタミナーゼである第XIIIａ因子に活性化する。ローランドとコニシ、アチ ーブス・オブ・バイオケミストリー・アンド・バイオフィジックス、１０５：５ ８（１９６４）。トロンビンは、フィブリンの多い凝血塊の生成および安定化に おける直接的な役割の他に、血管および血液内の数多くの細胞成分に対する生物 調節的役割を担っていることが報告されている。シューマン、アナルス・オブ・ ニュー・ヨーク・アカデミー・オブ・サイエンス、４０５：３４９（１９８６） 。 トロンビンは血小板活性化に対する最も強力なアゴニストであり、血小板依存 性動脈血栓の生成における主要な病態生理学的メディエーターであると考えられ ている。エヂットら、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション ズ、８４：１８（１９８９）。トロンビンの媒介する血小板活性化は主に、フィ ブリノーゲンおよびフィブロネクチンのごとき接着性リガンドと、グリコプロテ インＩＩｂ／ＩＩＩａのごとき血小板インテグリン受容体との間の二価の相互作 用を介して生じるリガンド誘導性血小板凝集を導く。このような活性コンフォメ ーションはトロンビンの活性化の後に続いて生成される。ベーントとフィリップ ス、「パレートレッツ・イン・バイオロジー・アンド・パソロジー」４３〜７４ 頁、エルスフィアー／ノース・オランダ・バイオメディカル・プレス（ゴードン 編集、１９８１）。トロンビンに活性化された血小板は、新規なプロトロンビナ ーゼとテナーゼ（第IXａ因子、第VIIIａ因子および第Ｘ因子）すなわちそ活性化 血小板および該血小板から誘導される微粒子の膜表面上の触媒複合体の構築を通 してさらなるトロンビンの産生を持続し得、これに続いて非酵素補因子である第 Ｖ因子および第VIII因子がそれぞれ活性化される。タンスら、ブロッド、７７： ２６４１（１９９１）。このポジティブなフィードバック経路によって血栓の近 辺の局部的に高濃度のトロンビンが、血栓のさらなる成長および伸展を支持する のである。マンら、ブロッド、７６：１（１９９０）。 血栓生成の前段階の効果とは対照的に、トロンビンは止血において他の観点か らも拘わっている。他の効果には、重要な生理的抗凝固作用剤としての効果が含 まれる。トロンビンのこの抗凝固効果はトロンビンが内皮細胞膜の糖タンパク質 であるトロンボモジュリンへ結合した後に生じる。この結合によって、トロンビ ンの基質特異性が変わり、これによって循環しているプロテインＣを認識し、タ ンパク質分解的に活性プロテインＣ（ａＰＣ）へと活性化させることが可能とな ると説明されている。ムッシ、バイオケミストリー、２７：７６９（１９８８） 。ａＰＣはセリンプロテアーゼであり、非酵素補体第Ｖａ因子および第VIIIａ因 子を選択的に不活性化させ、プロトロンビナーゼおよびテナーゼ触媒複合体によ るトロンビンの形成をそれぞれダウンレギュレーションする。エスモン、サイエ ンス、２３５：１３４８（１９８７）。トロンボモジュリンが無い条件下におけ るトロンビンによるプロテインＣの活性化は認められない。 トロンビンは、血管平滑筋細胞のごとき間葉由来の細胞を含む、様々な種類の 細胞に対する強力な直接マイトジェンとなることもさらに示されている。チェン とブッハナン、プロシーディングス・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サ イエンス・ユーエスエー、７２：１３１（１９７５）。トロンビンの血管平滑筋 細胞との直接的な相互作用により血管が収縮される。ワルツら、プロシーディン グス・オブ・ソサエティー・フォア・エクスペリメンタル・バイオロジー・アン ド・メディシン、１８０：５１８（１９８５）。トロンビンは、血管内皮細胞か らの様々な生理活性物質を遊離させることを含む、直接分泌促進剤として働く。 この遊離される物質には組織プラスミノーゲン活性化剤も含まれる。レバインら 、トロンボシス・アンド・ヘモスタシス、５６：１１５（１９８６）。上記のご とき血管細胞に対する直接的な作用に加え、トロンビンは血管平滑筋細胞に対し て間接的に強い細胞増殖誘導性活性を示す。即ちトロンビンは血小板を活性化さ せた後、血小板のα顆粒に含まれるいくつかの強力な成長因子（例えば血小板由 来成長因子および表皮成長因子）が遊離するという作用も示す。ロス、ニュー・ イングランド・ジャーナル・オブ・メディシン、３１４：４０８（１９８６）。 重篤疾患には止血異常が関与していることが多い。冠動脈血管系については、 形成されたアテローム性動脈硬化症プラークの破裂に起因する異常な血栓の生成 が、急性心筋梗塞および不安定なアンギナの主な原因となる。さらに、冠血管閉 塞性血栓の治療としては血栓溶解治療または経皮的冠血管拡張形成法（ＰＴＣＡ ）のいずれかが行われているが、治療された血管の急性血栓性再閉塞を伴うこと が多く、これには早急に血栓の再溶解の必要がある。静脈血管に関しては下肢ま た は腹部の大手術を行った患者には高率で静脈内に血栓が形成され、その結果血流 が減少して四肢に影響が及び、肺動脈閉栓症にかかりやすくなる。血管内凝血異 常の拡散は通常、敗血症ショックの間、ある種のウイルスの感染および癌の場合 の血管系に起こり、これは凝固因子の急速な消失および、広範囲の器官の損傷を 導き、生命を脅かすこととなる全身性の血栓生成に特徴付けるられる。 冠動脈血管における病原性血栓は、今日の医学において最も臨床的に興味をも たれている分野である。というのは、病原性血栓が急性心筋梗塞の主な原因であ り、またこの急性心筋梗塞は西側諸国においての主要な死因のうちのひとつであ るという理由による。動脈血栓症の再発もまた、閉塞した冠血管を血栓溶解剤ま たは経皮的冠血管拡張形成法（ＰＴＣＡ）のそれぞれにより酵素または機械的に 再開通させたあとに生じる疾患の主な原因として残っている。ロス、トロンボシ ス・イン・カルディオバスクラー・ディスオーダー第３２７頁、サウンダーズ・ コーポレイション（ヒュスターとバーストレート編集、１９９１年）；キャリフ とウイラーソン、同、第３８９頁。静脈血管内における血栓症と比べると、動脈 血栓は血液凝固カスケードの結果のフィブリン形成と、細胞成分、特に動脈の血 栓中の大きな割合を占める血小板との複雑な相互作用の結果物である。現在、急 性動脈血栓または再血栓の治療または予防効果のある治療法は知られていない、 というのは、臨床的に最も広く使用されている、静脈内投与する抗凝血剤である ヘパリンが、この症状に効果があるという結果が得られていないからである。プ リンスとヒルシュ、ジャーナル・オブ・アメリカン・カレッジ・オブ・カルディ オロジー、６７：３Ａ（１９９１）。 通常ＰＴＣＡの後に発生する、予測し得ない血管閉塞の再発の他にも、再開通 させた血管の再狭搾はこの処置の後１から６カ月の後に３０から４０％の患者に 認められる。キャリフら、ジャーナル・オブ・アメリカン・カレッジ・オブ・カ ルディオロジー、１７：２Ｂ（１９９１）。これらの患者には、ＰＴＣＡをもう 一度行う処置、または冠動脈バイパス手術を行うことによって新たに形成された 狭搾をを除く処置のいずれかが必要である。機械的な損傷を受けた血管の再狭搾 は血栓生成によって生じるのではなく、周囲の平滑筋細胞の過増殖性応答が長時 間 続くことによる、筋肉の量の増加のために生じる血管口径の減少に起因する。同 。動脈血栓の場合と同様に、機械的に再開通させた後に生じる血管再狭搾の予防 のための薬による治療には現在のところ有効なものは無い。 安全で有効な治療用抗凝血剤の必要性については、ひとつの試みとして血液凝 固カスケードの最後から２番目の段階でセリンプロテアーゼであるトロンビンを 形成する触媒として働く第Ｘａ因子の役割に焦点をあてた。 最も好ましいトロンビンの天然基質はＰ３認識サブサイトにおいて非荷電アミ ノ酸を含有するものであることが報告されている。例えば、トロンビンの主な生 理的基質であるフィブリノーゲンのＡα鎖上には、当該位置にグリシン残基があ ることが報告されており、一方、Ｂβ鎖には当該位置にセリン残基がある： Ｐ４ Ｐ３ Ｐ２ Ｐ１ Ｐ１’ -Ｇｌｙ-Ｇｌｙ-Ｖａｌ-Ａｒｇ／Ｇｌｙ フィブリノーゲンＡα鎖 -Ｐｈｅ-Ｓｅｒ-Ａｌａ-Ａｒｇ／Ｇｌｙ フィブリノーゲンＢβ鎖 非荷電残基をＰ３位に有するペプチジル誘導体はトロンビンの活性部位に結合 し、これによってフィブリノーゲンからフィブリンへの転換および細胞の活性化 が抑制されることが報告されている。さらに、このような誘導体にはアルデヒド 、クロロメチルケトンまたはホウ酸官能基のいずれかがＰ１アミノと結合してい る。例えば、基質類似ペプチジル誘導体、例えばＤ-フェニルアラニル-プロリル -アルギニナル（Ｄ-Ｐｈｅ-Ｐｒｏ-Ａｒｇ-ａｌ）、Ｄ-フェニルアラニル-プロ リル-アルギニン-クロロメチルケトン（Ｐ-ＰＡＣＫ）およびアセチル-Ｄ-フェ ニルアラニル-プロリル-ボロアルギニン（Ａｃ-（Ｄ-Ｐｈｅ）-Ｐｒｏ-ｂｏｒｏ Ａｒｇ）が酵素の活性部位に直接結合してトロンビンの活性を抑制することが報 告されている。バジャス、シンポジア・バイオロジカ・ハンガリカ、２５：２７ ７（１９８４）、バジャスら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー 、３３：１７２９（１９９０）およびバジャスら、インターナショナル・ジャー ナル・オブ・ペプチド・プロテイン・リサーチ、１２：２１７（１９７０）；ケ ットナーとショウ、メソッズ・オブ・エンザイモロジー、８０：８２６（１９８ ７）；ケットナーら、欧州特許願ＥＰ２９３,８８１号（１９８８年１２月７日 公開）；ケットナーら、ジャ ーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー、２６５：１８２０９（１９９０ ）。これらの分子は血小板量の多い動脈血栓を予防するための強力な抗凝血剤で あることが報告されている。ケリーら、トロンボシス・アンド・ヘモスタシス、６５ ：７３６、要約２５７（１９９１）。トロンビンの阻害剤として提案または 報告されている他のペプチジルアルデヒドもある。ベイら、ＥＰ３６３,２８４ （１９９０年４月１１日公開）およびバラスブラマニアンら、ＥＰ５２６,８７ ７（１９９３年２月１０日公開）。 トロンビンの活性部位阻害剤であると言われているペプチジル化合物としては しかし、非荷電アミノ酸をＰ３認識サブサイトに有する構造と異なる構造のもの も報告されている。化合物、アルガトロバン（Argatroban）（または２Ｒ,４Ｒ- ４-メチル-１-［Ｎ-２-（３-メチル-１,２,３,４-テトラヒドロ-８-キノリンス ルホニル）Ｌ-アルギニナル］-２-ピペリジンカルボン酸とも言う）もまた、ト ロンビンの活性部位に直接結合し、トロンビンの非ペプチジル阻害剤のうちでは 最も強いそして選択的な化合物であると報告されている。オカモトら、バイオケ ミストリー・アンド・バイオフィジオロジー・リサーチ・コミュニケーション、１０１ ：４４０（１９８１）。アルガトロバンは強い抗血栓剤であることが、い くつかの急性動脈血栓の実験モデルにて報告されている。ジャンら、サーキュレ イション、８１：２１９（１９９０）およびサーキュレイション・リサーチ、６ ７ ：１５５２（１９９０）。 トロンビンの阻害剤であると言われており、その作用機構が、酵素の活性部位 および他の部位への結合であると考えられているペプチジル化合物が報告されて いる。ヒルジン（Hirudin）とその様々なペプチジル誘導体は、フィブリノーゲ ンからフィブリンへの転化および血小板活性化の両方を、トロンビンの活性部位 とエキソ部位またはエキソ部位のみに結合することによって阻害することが報告 されている。マークワード、トロンボシス・アンド・ヘモスタシス、６６：１４ １（１９９１）、ヒルジンは水蛭唾液腺抽出物から単離された６５アミノ酸から なるポリペプチドとして報告されている。これは既知のトロンビンの阻害剤のな かで最も強い阻害剤のひとつであると言われている。マルキとワリス、トロンボ シス・ アンド・ヘモスタシス、６４：３４４（１９９０）。ヒルジンは、トロンビン上 のそれぞれ異なっており、物理的に離れているアニオン結合性エキソ部位および 触媒活性部位に結合してトロンビンの活性を抑制すると報告されている。ライデ ル、既出。ヒルジンはインビトロにおいて強い抗血栓剤であることが報告されて いる。マークワードら、ファルマジー、４３：２０２（１９８８）；ケリーら、 ブロッド、７７：１（１９９１）。抗血栓効果に加えて、ヒルジンはさらに平滑 筋の増殖、およびこれに付随するアテローム性動脈硬化症に対する外科手術の後 の再狭搾に対する効果を有することが報告されている。サーレムボックら、サー キュレイション、８４：２３２（１９９１）。 ヒルゲン（Hirugen）はヒルジンの陰イオン性カルボキシ末端から誘導された ペプチドであると報告されている。ヒルゲンはトロンビンの陰イオン結合性エキ ソ部位のみに結合し、これによってフィブリンの生成を阻害するが、トロンビン のブロックされていない活性部位に結合する小さい合成基質の触媒的ターンオー バーは阻害しない。マラガノールら、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミ ストリー、２６４：８６９２（１９８９）；ナスキら、ジャーナル・オブ・バイ オロジカル・ケミストリー、２６５：１３４８４（１９９０）。ヒルジンのヒル ゲンとなる領域は、Ｘ線結晶解析によって判明したトロンビンのエキソ部位へ結 合する部位として報告されている。スクルチャプツァク-ジャンクンら、トロン ボシス・アンド・ヘモスタシス、６５：８３０、要約５０７（１９９１）。さら に、ヒルゲンの結合はトロンビンによる特定の小さな合成基質の触媒的回転を上 げることが報告されており、これはトロンビンの酵素活性部位に関する変化が、 コンフォメーションのエキソ部位の占有を伴うことを示す。リウ、既出。ヒルゲ ンはまた、トロンビンが媒介する血小板凝集をブロックすることが報告されてい る。ジャクボウスキーとマラガノール、ブロッド、７５：３９９（１９９０）。 ヒルログ（Hirulog）はトロンビンの好ましい基質認識部位に基づくスペーサ ーとなるペプチドＤ-フェニル-アラニル-プロリル-アルギニンに結合したヒルゲ ン様配列からなる合成鏡像分子として報告されている。ヒルゲン様配列はこのペ プチドと該ペプチドのＣ末端で結合している言われている。マラガノンら、バイ オ ケミストリー、２９：７０９５（１９９０）。ヒルログはフィブリン濃度の高い および血小板濃度の高い、いずれの血栓に対しても効果的な抗血栓剤として使用 される。マラガノンら、トロンボシス・アンド・ヘモスタシス、６５：６５１、 要約１７（１９９１）。発明の概要 一つの観点によれば、本発明は抗血栓症剤として有用な化合物に関する。 一つの観点によれば、本発明は、次式： ＡcＲ-Ａ₁-Ｌ-Ｐro-Ｌ-Ａrg-al （II） （式中、ＡcＲは疎水性アシル基または疎水性スルホニル基を示し、Ａ₁はグル タミン酸（Ｇlu）もしくはアスパラギン酸（Ａsp）またはＧluもしくはＡspの等 価物を示す） で表わされ、トロンビンおよび／または第Ｘa因子に対して約２００nＭ以下のＩ Ｃ₅₀を有し、かつ、プラスミンに対しては、トロンビンまたは第Ｘa因子に対す るＩＣ₅₀のうちの低い方よりも大きなＩＣ₅₀値を有する化合物に関する。これら の化合物は血栓症のインヒビターとして有用である。 好ましい観点によれば、本発明は以下の式： ［式中、（ａ） Ｒ₁は、Ｘが-Ｃ（＝Ｏ）-もしくは-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-の場合には 約５から約１０炭素原子のアルキル基、またはＸが-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂ ）-もしくは-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-の場合には１から約１０炭素原子のアルキル基；約 ５から約８炭素原子の環状アルキル基で置換された１から約３炭素原子のアルキ ル基；随意に約５から約８炭素原子の環状アルキル基で置換された約３から約６ 炭素原子のアルケニル基；随意にＹ₁でモノ置換または随意にＹ₁とＹ₂でジ置換 された約６ から約１４炭素原子のアリール基；アリール環上が随意にＹ₁でモノ置換または 随意にＹ₁とＹ₂によってジ置換された約６から約１５炭素原子のアラルキル基； アリール環上が随意にＹ₁でモノ置換または随意にＹ₁とＹ₂でジ置換された約８ から約１５炭素原子のアラルケニル基；１から約１２炭素原子のパーフルオロア ルキル基；約６から約１４炭素原子のパーフルオロアリール基；約４から約８炭 素原子のトリメチルシリルアルキル基； からなる群から選択される （Ｙ₁およびＹ₂は独立して、ブロモ、クロロ、フルオロ、Ｚ₁-、ＨＯ-、Ｚ₁Ｏ- 、ＮＨ₂-、Ｚ₁-ＮＨ-、（Ｚ₁，Ｚ₂）Ｎ-、Ｚ₁-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、ＨＳ-、Ｚ₁-Ｓ- 、Ｚ1-Ｓ（Ｏ）-、Ｚ₁Ｓ（Ｏ₂）-、ＨＯ-Ｓ（Ｏ₂）-、Ｚ₁-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-、ＮＨ₂ -Ｓ（Ｏ₂）-およびＺ₁-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂）-からなる群から選択される、 （Ｚ₁およびＺ₂は独立してトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１から 約１２炭素原子のアルキル基、約６から約１４炭素原子のアリール基および約６ から約１５炭素原子のアラルキル基からなる群から選択される））； （ｂ） Ｘは-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨＳ（Ｏ₂） -または-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-である； （ｃ） ｍは１または２である； （ｄ） Ｒ₂はＣＯ₂Ｈ、-ＣＯ₂Ｒ’または （Ｒ’は１から約４炭素原子のアルキル基、約６から約１４炭素原子のアリール 基又は約６から約１４炭素原子のアラルキル基である）である； （ｅ） Ｒ₃は-（ＣＨ₂）₃-ＮＨ-Ｃ（＝ＮＨ）-ＮＨ₂；または薬学的に許容さ れるそ の塩である。］ で示される化合物を含む ペプチジルアルギニンアルデヒドは水溶液中においては平衡状態にあることが 報告されている。バジャスら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリー３３ ；１７２９（１９９０）。以下に示したごとき３つの構造にはアルギニンア ルデヒド（Ａ）、アルデヒド水化物（Ｂ）、および２つの環状アミノ構造（Ｃお よびＤ）を含む。Ｒ基は本発明の態様の化合物の残りを示す。本発明のペプチド アルデヒドにはその定義内ですべての等価な化合物を含む。 他の観点において、本発明は上述の化合物の治療有効量と薬学的に許容される 担体を含む医薬組成物を含む。さらに他の観点においては、本発明は上述の化合 物および医薬組成物を、哺乳類の血液凝固経路の異常に特徴付けられる疾患の予 防または治療に用いる方法を含む。定義 本発明によってここで使用する下記の用語は、特に言及しない限り、次の様に 定義される。 「アルキル」は直鎖、分枝鎖および環状基を含む飽和脂肪族基を示す。 「アルケニル」は少なくとも１の炭素-炭素二重結合を有し、直鎖、分枝鎖お よび環状基を含む不飽和炭化水素基を示す。 「アリール」は共役π電子系を有する少なくとも１個の環を有する芳香族基で あって、随意に置換されていてもよい炭素環式アリール基、ヘテロ環式アリール 基およびビアリール基が含まれる。 「アラルキル」はアリール基によって置換されたアルキル基を示す。適当なア ラルキル基としては、随意に置換されていてもよいベンジル基およびピコリル基 等が含まれる。 「アラルケニル」は１個のアリール基で置換されているアルケニル基を示す。 好ましいアラルケニル基には随意に置換されていてもよいスチレニル基等を含む 。 「アルキレン」は２価の直鎖状または分枝鎖状の飽和脂肪族残基を示す。 「アルキレンカルボキシ」はalk-ＣＯＯＨを示す（alkはアルキレンである） 。 「カルボキサミド」は-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ₂を示す。 「アルキレンカルボキサミド」は基-alk-Ｃ（Ｏ）ＮＨ₂（alkはアルキレンで ある）を示す。 「アルキレンヒドロキシ」は基-alk-ＯＨ（alkはアルキレンである）を示す。 「アミノ酸」は天然および非天然のアミノ酸であってＬ-型またはＤ-型のいず れかであるものを示す。天然のアミノ酸には、アラニン（Ａｌａ）、アルギニン （Ａｒｇ）、アスパラギン（Ａｓｎ）、アスパラギン酸（Ａｓｐ）、システイン （Ｃｙｓ）、グルタミン（Ｇｌｎ）、グルタミン酸（Ｇｌｕ）、グリシン（Ｇｌ ｙ）、ヒスチジン（Ｈｉｓ）、イソロイシン（Ｉｌｅ）、ロイシン（Ｌｅｕ）、 リジン（Ｌｙｓ）、メチオニン（Ｍｅｔｙ）、フェニルアラニン（Ｐｈｅ）、プ ロリン（Ｐｒｏ）、セリン（Ｓｅｒ）、トレオニン（Ｔｈｒ）、トリプトファン （Ｔｒｐ）、チロシン（Ｔｙｒ）およびバリン（Ｖａｌ）を含む。非天然アミノ 酸には例えば、アゼチジンカルボン酸、２-アミノアジピン酸、３-アミノアジピ ン酸、β-アラニン、アミノプロピオン酸、２-アミノブチル酸、４-アミノブチ ル酸、６-アミノカプロイン酸、２-アミノヘプタン酸、２-アミノイソブチル酸 、３-アミノイソブチル酸、２-アミノピメリン酸、２,４-ジアミノイソブチル酸 、デスモシン、２,２’-ジアミノピメリン酸、２,３-ジアミノプロピオン酸、Ｎ -エチルグリシン、Ｎ-エチルアスパラギ ン、ヒドロキシリジン、アロ-ヒドロキシリジン、３−ヒドロキシプロリン、４- ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロ-イソロイシン、Ｎ-メチルグリシン 、Ｎ-メチルイソロイシン、Ｎ-メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オル ニチンおよびピペコール酸が含まれるが、これらに限定されない。 「アミノ酸残基」は-ＮＨ-ＣＨ（Ｒ）-ＣＯ-（式中、Ｒは各アミノ酸基で異な る側鎖基を示す）で示される基である。環状アミノ酸においては、残基は （式中、ｘは１、２または３であり、それぞれアゼチジンカルボン酸、プロリン またはピペコール酸残基を示す）で示される基である。 「疎水性アシル基」は基Ｒ₁-Ｃ（＝Ｏ）（Ｒ₁はアルキル、アリール、アラル キルまたは他の非極性基である）を示す。 「疎水性スルホニル基」は基Ｒ₁-Ｓ（Ｏ₂）-（Ｒ₁はアルキル、アリール、ア ラルキルまたは他の非極性基である）を示す。 「メチレン」は-ＣＨ₂-を示す。 「パーフルオロアルキル」は各水素がフッ素に置換されているアルキル基を意 味する。好ましいパーフルオロアルキル基にはパーフルオロメチル（構造はＣＦ₃ -）およびパーフルオロエチル（構造はＣＦ₃-ＣＦ₂-）および類似の基である。 「パーフルオロアリール」は各水素がフッ素に置換されているアリール基を意 味する。好ましいパーフルオロアリール基にはパーフルオロフェニル（構造は さらに、以下の略語は次の意義を有する。 「Ａla（Ｔzl）」は（Ｒ）-３-テトラゾリル-２-アミノプロピオン酸を示す。 「Ａrg-al」はＬ-アルギニナルを示す。 「Ａsp」はＬ-アスパラギン酸を示す。 「Ａsp（ＯＣＨ₃）」はＬ-アスパラギン酸β-メチルエステルを示す。 「Ｂn」はベンジルを示す。 「ＢzlＳＯ₂」はベンジルスルホニルを示す。 「Ｂoc」はt-ブトキシカルボニルを示す。 「ＢocＰro-ＯＨ」はＮ-Ｂoc-Ｌ-プロリンを示す。 「Ｂom」はベンジルオキシメチルを示す。 「ＢＯＰ」はベンゾトリアゾール-１-イルオキシ-トリス-（ジメチルアミノ） -ホスホニウム-ヘキサフルオロホスフェートを示す。 「ブライン（Ｂrine）」は塩化ナトリウムの飽和水溶液を示す。 「ｎ-ＢuＳＯ₂」はｎ-ブチルスルホニルを示す。 「Ｃbz」はベンジルオキシカルボニルを示す。 「ＣＤＩ」はカルボニルジイミダゾールを示す。 「ＣｈxＡc」は１-シクロヘキシルアセチルを示す。 「ＣｈxＰＡ」は３-シクロヘキシルプロパノイルを示す。 「ＤＣＭ」はジクロロメタンを示す。 「ＤＩＥＡ」はジイソプロピルエチルアミンを示す。 「ＤＭＦ」はＮ,Ｎ-ジメチルホルムアミドを示す。 「ＥtＯＡc」は酢酸エチルを示す。 「ＥＤＣ」はエチル-３-（３−ジメチルアミノ）-プロピルカルボジイミド塩 酸塩を示す。 「Ｆm」は９-フルオレンメチルを示す。 「ＨＯＢｔ」は１-ヒドロキシベンゾトリアゾルモノヒドレートを示す。 「ＨＣＡ」は３-フェニルプロピオニルを示す。 「ＩＰＡ」はイソプロパノールを示す。 「αＭeＨＣＡ」は２-メチル-３-フェニルプロピオニルを示す。 「ＭeＯＨ」はメタノールを示す。 「４-ＭeＰｈＳＯ₂」は４-メチルフェニルスルホニルを示す。 「４ＭeＶ」は４-メチルペンタイノルを示す。 「ＮaＯＡc」は酢酸ナトリウムを示す。 「ＮpＡc」は１-ナフチルアセチルを示す。 「２-ＮｐＳＯ₂」は２-ナフチルスルホニルを示す。 「ＮＭＭ」は４-メチルモルホリンを示す。 「Ｏct」はオクタノイルを示す。 「Ｐh」はフェニル基を示す。 「Ｐrｏ」はＬ-プロリンを示す。 「２ＰrＰent」は２-プロピルペントイルを示す。 「ＴＵＢＵ」は２-（１Ｈ-ベンゾトリアゾル-１-イル）-1,1,3,3-テトラメチ ルウロニウムテトラフルオロボーレートを示す。 「ＴＥＡ」はトリエチルアミンを示す。 「ＴＦＡ」はトリフルオロ酢酸を示す。 「ＴＨＦ」はテトラビトロフランを示す。図面の簡単な説明 図１は、本発明による１種以上の化合物を調製するのに使用した固相試薬の製 造法を示す反応スキームである。図１において、Ｂnはベンジルを示し、t-Ｂuは t-ブチルを示し、Ｂocはt-ブトキシカルボニルを示す。 図２は、本発明による１種以上の化合物の調製に用いた化合物の合成法を示す 反応スキームである。図２において、「ｉ」は「pＴsＯＨ／ＦmＯＨ、トルエン ／還流」を示し、「ii」は「Ｂoc-Ａsp-β-ベンジルエステル／ＢＯＰ／ＮＭＭ ／ＤＭＦ」を示し、「iii」は「トリエチルアミン／還流」を示す。 図３は、本発明による化合物の液相法による合成例を示す反応スキームである 。図３において、「ｉ」は「ＣＤＩおよびt-ブチルカルバゼート」を示し、「ii 」は「ＴＦＡ／ＤＣＭ」を示し、「iii」は「１／ＮaＯＡc」を示し、「iv」は 「遊離酸（例えば図２の（２３））としての保護ペプチド（またはそのアナログ ）／ＢＯＰ／ＮＭＭ／Ｄ ＭＦ」を示し、「ｖ」は「Ｈ₂／Ｐd」を示し、「vi」は「Ｈ₃Ｏ⁺」を示し、「vi i」は「トリメチル酢酸／ＤＣＣ／１-ヒドロキシベンゾトリアゾール／ＤＭＦ」 を示す。あるいは、「ｖ」が「ＨＦ／アニソール」であり、「vi」が「ホルムア ルデヒド／Ｈ₃Ｏ⁺」であってもよい。好ましい態様の詳細な説明 好ましい化合物 好ましい観点によれば、本発明は次式： ＡcＲ-Ａ₁-Ｌ-Ｐro-Ａrg-al （式中、ＡcＲは疎水性アシル基または疎水性スルホニル基を示し、Ａ₁はグル タミン酸（Ｇlu）もしくはアスパラギン酸（Ａsp）またはＧluもしくはＡspの等 価物を示す）で表わされ、トロンビンおよび／または第Ｘa因子に対して約２０ ０nＭ以下のＩＣ₅₀を有し、かつ、プラスミンに対しては、トロンビンまたは第 Ｘa因子に対するＩＣ₅₀のうちの低い方よりも大きなＩＣ₅₀を有する化合物に関 する。 「等価物」は、アミノ酸の一般式Ａ₁または疎水性アシル基もしくは疎水性ス ルホニル基の変形物であって、所定のアミノ酸または疎水性アシル基もしくは疎 水性スルホニル基を使用する場合と比べて、当該化合物の阻害能に有害な影響を ほとんど及ぼさない変形物を含むことを意味する。一般に、適当な疎水性アシル 基は、アシル（カルボニル）炭素原子のほかに、少なくとも約５個の炭素原子を 有し、また、有効な阻害活性を発揮するのに十分な疎水性を有する。同様に、適 当な疎水性スルホニル基はスルホニル硫黄原子のほかに、少なくとも約５個の炭 素原子を有し、また、有効な阻害活性を発揮するのに十分な疎水性を有する。Ｇ luまたはＡspはカルボキシル化された非環式アミノ酸およびその等価物である。 このような等価物には、グルタミン酸のγ-Ｒ’エステル、アスパラギン酸のβ- Ｒ’エステルまたはＧluもしくはＡspのカルボン酸基にテトラゾールが置換した Ｒ’-置換テトラゾールが含まれる。この場合、Ｒ’は水素原子、１から約６炭 素原子の低級アルキル基または約６から約１５炭素原子のアラルキル基である。 本発明の一つの観点によれば、ペプチドアルデヒドの誘導体が提供される。 この種の化合物は次式（ＩＡ）で表わされる： 式（ＩＡ）で表わされる好ましい化合物には、Ｒ₃が-（ＣＨ₂）₃-ＮＨ-Ｃ（＝ ＮＨ）-ＮＨ₂である化合物を含む。即ちＰ１がＬ-アルギニナルである化合物で ある。 別の好ましい化合物にはＰ２残基がＬ-プロリンである化合物も含まれる。 別の好ましい化合物にはさらに、mが１または２である化合物も含まれる。 好ましい化合物には、さらに Ｒ₂が-ＣＯ₂Ｈ、-ＣＯ₂Ｒ’、または 約６〜約１４炭素原子のアリール基または約６〜約１４炭素原子のアラルキル基 を示す）である化合物が含まれる。特に好ましい化合物は、Ｒ’がメチル基であ る化合物である。 本発明による好ましい化合物にはさらにＰ４（即ちＲ₁-Ｘ-）が保護基である 化合物、即ちＰ３の末端アミノ基が保護されている化合物を含む。この保護基に は以下の化合物が含まれる： （１） Ｘが-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂ ）-または-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-であり； （２） Ｒ₁は、Ｘが-Ｃ（＝Ｏ）-もしくは-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-の場合には約５か ら約１０炭素原子のアルキル基、または、Ｘが-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂）- もしくは-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-の場合には１から約１０炭素原子のアルキル基；約５か ら約８炭素 原子の環状アルキル基で置換された１から約３炭素原子のアルキル基；随意に約 ５から約８炭素原子の環状アルキル基で置換された約３から約６炭素原子のアル ケニル基；随意にＹ₁でモノ置換または随意にＹ₁とＹ₂でジ置換された約６から 約１４炭素原子のアリール基；アリール環上が随意にＹ₁でモノ置換または随意 にＹ₁とＹ₂でジ置換された約６から約１５炭素原子のアラルキル基；アリール環 内が随意にＹ₁でモノ置換または随意にＹ₁とＹ₂でジ置換された約８から約１５ 炭素原子のアラルケニル基；１から約１２炭素原子のパーフルオロアルキル基； 約６から約１４炭素原子のパーフルオロアリール基；約４から約８炭素原子のト リメチルシリルアルキル基； からなる群から選択される （Ｙ₁およびＹ₂は独立して、ブロモ、クロロ、フルオロ、Ｚ₁-、ＨＯ-、Ｚ₁Ｏ- 、ＮＨ₂-、Ｚ₁-ＮＨ-、（Ｚ₁，Ｚ₂）Ｎ-、Ｚ₁-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、ＨＳ-、Ｚ₁-Ｓ- 、Ｚ₁-Ｓ（Ｏ）-、Ｚ₁Ｓ（Ｏ₂）-、ＨＯ-Ｓ（Ｏ₂）-、Ｚ₁-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-、ＮＨ₂ -Ｓ（Ｏ₂）-およびＺ₁-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂）-からなる群から選択される、 （Ｚ₁およびＺ₂は独立してトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１から 約１２炭素原子のアルキル基、約６から約１４炭素原子のアリール基および約６ から約１５炭素原子のアラルキル基からなる群から選択される））。 特に好ましい化合物はＸが-Ｃ（＝Ｏ）-またはＳ（Ｏ₂）-である化合物を含む 。 特に好ましい化合物には、Ｒ₁が約５から約１０炭素原子のアルキル、約５か ら約８炭素原子の環状アルキルで置換された炭素原子１から約３のアルキル、随 意にＹ₁でモノ置換されたかまたは随意にＹ₁とＹ₂でジ置換された約６から約１ ４炭素原子のアリール、随意にＹ₁でモノ置換されたかまたは随意にＹ₁とＹ₂で ジ置換された約６から約１５炭素原子のアラルキル、 であるものが含まれる。適当なアルキル基にはメチル、エチル、プロピル、１, １-ジメチルエチル、２-メチルプロピル、２,２-ジメチルプロピル、ブチル、３ -メチルブチル、１-プロピルブチル、ペンチル、ヘキシル、シクロペンチル、シ クロペンチルメチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、アダマンチル、 およびアダマンチルメチルが含まれる。適当な環状アルキル基にはシクロペンチ ル、シクロペンチルメチル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、アダマン チル、およびアダマンチルメチルが含まれる。好ましいアリール基にはフェニル 、ナフチル、ビフェニル、２-チエニル、２-ピロリルおよび２-フリルが含まれ る。好ましいアラルキル基にはフェニルメチル、ジフェニルメチル、ビフェニル 、ビフェニルメチル、ナフチル、ナフチルメチル、α-フェニルメチルフェニル および２-フェニルエチレンが含まれる。 より好ましい化合物にはＸが-Ｃ（＝Ｏ）-の場合にＲ₁が３-メチルブチル、４ -ヘプチル、２-シクロヘキシルエチル、２-フェニルエチルおよび１-ナフチルメ チルであるものが含まれる。その他のより好ましい化合物としては、Ｘが-Ｓ（ Ｏ₂）-である場合にＲ₁がブチル、４-メチルフェニル、ベンジル、ナフチル、 である化合物が含まれる。 式（ＩＡ）の好ましい化合物は以下のものを含む： 特に好ましい式（Ｉ）の化合物は以下のものを含む： 式（Ｉ）の好ましい化合物にはまた、その薬学的に許容される塩も含む。「薬 学的に許容される塩」という語は式（Ｉ）の化合物を有機または無機酸と結合さ せて誘導した化合物である。これらの塩は遊離の塩基としても塩としても有用で ある。実際上、塩の使用は塩基の使用と同等であり、両方の形態の化合物が本発 明に包含される。好ましい化合物の調製 本発明によるペプチドアルデヒドは固相法または液相法のいずれによって合成 してもよい。特定の条件下では、本明細書に記載の液相法が好ましい。 いずれの方法においても使用する出発原料は化学薬品メーカー、例えば、アル ドリッチ（Aldrich）社、シグマ（Sigma）社およびノバ・バイオケミカルズ（No va Biochemicals）社等からの市販品として容易に入手し得る。 これらの化合物の合成工程において、これらの方法において用いるアミノ酸誘 導体の官能基を保護基によって保護し、カップリング反応中における交差反応を 防止する。適当な保護基の例とこれらの用法は次の文献に記載されており、該記 載内容は本明細書の一部を成すものである。「ザ・ペプタイズ：アナリシス、シ ンセシス、バイオロジー」、アカデミックプレス、第３巻（グロスおよびマイエ ンホ ーファー編、１９８１年）および第９巻（ウデンフリエンドおよびマイエンホー ファー編、１９８７年）。 本発明によるペプチドアルデヒド誘導体は後述の文献に記載の方法によって合 成してもよく、あるいは、ウェッブによる１９９１年１２月１３日付の米国特許 出願第０７／８０７,４７４号明細書に記載された固相合成試薬と合成法による アミノ酸誘導体の逐次的化学結合法によって合成してもよい（該明細書の当該開 示内容も本明細書の一部を成す）。 図１に、固相合成法によってアミノ酸誘導体が結合される固相試薬の合成法を 示す。以下の実施例８に示すように、本発明による化合物の中間体を、ホルムア ルデヒド（ＴＦＡ溶媒）を用いる処理によって固相から脱離させた後、活性炭に 担持したＰd触媒上での水素化による脱保護によって、本発明による化合物を調 製することができる。 あるいは、実施例１４と１５に示すように、本発明による化合物は、ＨＦ／ア ニソールを用いる処理によって、脱保護セミカルバゾンの形態で固相から脱離さ せ、次いで、該セミカルバゾンを希塩酸中でホルムアルデヒドを用いて処理する ことによって本発明による化合物に変換させる。 本発明によるペプチドアルデヒドは溶液相法によって合成してもよい。好まし い方法の概要を図２および図３に示す。図２は、本発明による化合物の合成に用 いる化合物の合成プロセスを示す。図３は、本発明による化合物を溶液相で合成 するための好ましいプロセスを示す。ペプチドアルデヒドを溶液合成する別の方 法は、例えば、次の文献に記載されている：マッコネルらの前記文献、第８７頁 および該文献の引用文献、バジャスツら、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケ ミストリー３３：１７２９（１９９０）、カワムラら、Chem．Pharm．Bull.、１ ７ ：１９０２（１９６９）、およびソメノら、Chem．Pharm．Bull.、３４：１７ ４８（１９８６）。好ましい化合物の選択 本発明による化合物は、トロンビンまたは第Ｘａ因子を阻害するが、プラスミ ンを実質的に阻害しないことによって特徴づけられる。本発明の好ましい化合物 は以下のごとく選別すればよい。 本発明による化合物を緩衝液中に溶解させて、アッセイ濃度が０〜１００μＭ の溶液を調製する。トロンビン、第Ｘａ因子およびプラスミンに対するアッセイ においては、発色性の合成基質を、被験化合物と問題となる酵素を含有する溶液 に添加し、該酵素の残余の触媒活性を分光光度法によって測定する。化合物のＩ Ｃ₅₀は基質の代謝回転から決定される。ＩＣ₅₀は、基質の代謝回転の５０％を阻 害する被験化合物の濃度である。実施例Ａには本発明の化合物を選別するのに用 いたインビトロアッセイを示した。 本発明の化合物は、トロンビンまたは第Ｘａ因子のアッセイにおいては、好ま しくは約２００ｎＭのＩＣ₅₀を有するが、プラスミンのアッセイにおいては、ト ロンビンと第Ｘａ因子に対するＩＣ₅₀のうちの低い方より低くないＩＣ₅₀値を有 するのが好ましい。好ましい化合物は、トロンビンもしくは第Ｘａ因子のアッセ イまたは両方のアッセイにおいて、約１００nＭもしくはそれ以下のＩＣ₅₀を示 す。医薬組成物 他の観点から本発明は、本発明の化合物の治療有効量および薬学的に許容され る担体もしくは希釈剤を含有する保存または投与のための医薬組成物を包含する 。 本発明の化合物の「治療有効量」は、投与経路、被処置哺乳類の種類、および 処置する特定の哺乳類の生理的特徴等によって変化する。これらの要因および投 与量を決定する該要因との関係は、医学の分野における当業者にとっては周知で ある。用量および投与方法は、最適な効果が得られるよう調整されるが、体重、 食餌、併用する薬物および医学における当業者に認識されているその他の要因に 基づいて変化する。 本発明の化合物の「治療有効量」は所望の効果と治療上の徴候によって広い範 囲にわたる。典型的には、用量は体重１ｋｇあたり約０.０１ｍｇから１００ｍ ｇ、より好ましくは１ｋｇあたり０.０１ｍｇから１０ｍｇである。 治療用途に用いる「薬学的に許容される担体もしくは希釈剤」は製薬業界にお いてよく知られており、例えばレミントンの「ファーマシュウティカル・サイエ ンシズ」、マック・パブリッシング社（Ａ．Ｒ．ジェナーロ編、１９８５年）に 記載されている。保存剤、安定剤、染料およびフレーバー剤もまた、医薬組成物 に添加してもよい。例えば、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸およびｐ-ヒドロ キシ安息香酸エステルを保存剤として添加してもよい。同、１４９ページ。さら に、抗酸化剤および懸濁剤を添加してもよい。同。 本発明の医薬組成物は経口投与用には錠剤、カプセル剤またはエリキシル剤と して、直腸内投与用には坐薬として、注射投与用には無菌溶液または懸濁液とし て製剤化して使用してもよい。投与量および投与方法は最適な効能が得られるよ うに調整せてればよいが、体重、食餌、同時投薬および医学の分野における当業 者が認識している他の因子によって変化する。 毎日の主薬として静脈内投与する場合等、非経口投与で投与する場合、注射し 得る医薬組成物は従来の処方で製造すればよく、溶液や懸濁液の液体でであって も投与前に液体中に溶液もしくは懸濁液とする固体であってもエマルジョンであ ってもよい。好ましい希釈剤は例えば水、生理的食塩水、デキストロース、マン ニトール、ラクトース、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸 システイン、またはこれらの類似物を含む。さらに、随意に注射し得る医薬組成 物には、湿潤剤、ｐＨ調整剤、その他の少量の非毒性助剤を添加してもよい。随 意に吸収強化剤形（例えばリポソーム）としてもよい。用途および方法 上述のごとく選択された場合、本発明の化合物は強力なトロンビンおよびトロ ンビンの生成（第Ｘａ因子を直接阻害する）の阻害剤として、血栓の異常生成の 予防または治療剤として有用であるのと同様に有用である。 本発明の化合物は血液採取管内で血液が凝固するのを防止するためのインビト ロ診断剤としても有用である。静脈穿針により得られる血液を採血管内に導入す る、ストッパーを有し、管内が真空である採血管は当業者によく知られている。 キャステン、スペシメン・コレクション「ラボラトリー・テスト・ハンドブック 」第２版、レキシコンプ・インコーポレイテッド、クリーブランド第１６〜１７ 頁（ヤコブスら編、１９９０年）。凝血防止のための添加剤を含まない吸引式採 血管 は、哺乳類の血清を血液から単離する場合に有用である。これに対して、凝血防 止添加剤（ヘパリン塩、ＥＤＴＡ塩、クエン酸塩またはオキサレート塩等）を含 有する場合には、哺乳類の血液から血漿を単離するのに有用である。本発明の化 合物は第Ｘａ因子またはトロンビンの強力なインヒビターであり、それ自身を血 液採取管内に取り込ませれば、該管内に吸引された哺乳類血液の凝血を防止でき る。 本発明の化合物を単独でも、本発明の他の化合物と組み合わせて、他の公知の 凝血防止剤と組み合わせて採血管に用い得る。このような採血管に添加する量は 、該採血管内に哺乳類の血液が導入された際に、当該血液が凝固するのを防止す るのに十分な量である。かかる採血管に該化合物を添加するのは、該化合物の液 体組成物、固体組成物または液体組成物を凍結乾燥した固体としてのごとく、当 業者によく知られた方法で行えばよい。本発明の化合物は採血管内へ、哺乳類の 血液２から１０ｍｌと混合した場合の凝血を防止するのに十分な濃度になる量で ある。典型的には、必要な濃度は約１から１０００ｎＭであり、１０から１００ ｎＭが好ましい。 本発明はさらに哺乳類の異常な血栓に関係する症状の予防または治療のために 、該哺乳類へ本発明の化合物または医薬組成物の治療有効量を投与する方法も含 む。 化合物の「治療有効量」は投与経路、治療対象哺乳類、および治療しようとす る動物の特別な生理的状態が挙げられる。用量を決定するにあたってのこれらの 因子およびその関係は、医学分野の当業者にはよく知られている。 「血栓生成の異常に特徴付けられる症状」には動脈および静脈血管系内の両方 の血栓を含む。冠動脈血管系に関しては、血栓形成の異常は急性心筋梗塞および 不安定アンギナの主要な原因となる確立されたアテローム性動脈硬化性プラグの 破裂を引き起こし、並びに血栓融解療法またはＰＴＣＡの結果もたらされる閉塞 性の冠状血栓形成によって特徴づけられる。静脈管系に関しては、血栓形成の異 常は、四肢の下部または腹部領域において大手術を受ける患者に認められる、冒 された四肢への血流の低減と肺塞栓症へ導く疾病素質を引き起こす静脈血管系に 形成される血栓によって特徴づけられる。血栓形成の異常はまた、敗血症ショッ ク、特定のウイルス性感染および癌で患っている場合に、両方の血管系において みられる散在性の血管内凝固障害を引き起こすが、この症状には凝固因子の急激 な消費および生命の危機をもたらす広範囲に及ぶ器官不全へとつながる全身性の 血栓形成によって特徴づけられる。 本発明の方法を実施するに際しては、上記の化合物または組成物を単独で使用 しても、本発明の化合物の複数種を互いに併用してもよく、さらに、他の治療剤 または診断剤と併用してもよい。これらの化合物はインビボで（通常は哺乳類の 体内）、好ましくはヒトの生体に使用してもよく、あるいはインビトロで使用し てもよい。 インビボ使用する場合には、該化合物または組成物を種々の方法、例えば、非 経口投与法、静脈内投与法、皮下投与法、筋肉内投与法、結腸内投与法、直腸内 投与法、鼻腔内投与法または腹腔内投与法等によって、種々の投与形態で投与す ればよい。当業者には明らかなように、有効な生体内投与量および特定の投与形 式は処置される哺乳類の年令、体重および種、使用する化合物の種類および該化 合物を使用する特定の用途等によって変化する。有効投与量、即ち、所望の効能 を得るのに必要な投与量の決定法は当業者の技術的範囲内の事項である。典型的 には、化合物の投与量は、比較的低い量から始め、所望の効能が得られるまで増 量して決定される。 本発明の化合物の用量は、所望の効果および治療の徴候によって広く変化する 。典型的な用量は約０.０１ｍｇ／ｋｇ（体重）から１００ｍｇ／ｋｇ（体重） 、好ましくは０.０１から１０ｍｇ／ｋｇ（体重）である。投与は好ましくは毎 日の主薬として静脈内投与のごとき非経口投与することである。 注射剤は従来の処方で製造すればよく、溶液や懸濁液の液体でであっても投与 前に液体中に溶液もしくは懸濁液とする固体であってもエマルジョンであっても よい。好ましい希釈剤は例えば水、生理的食塩水、デキストロース、マンニトー ル、ラクトース、レシチン、アルブミン、グルタミン酸ナトリウム、塩酸システ イン、またはこれらの類似物を含む。さらに、注射し得る医薬組成物には随意に 湿潤剤、ｐＨ調整剤、その他の少量の非毒性助剤を添加してもよい。また随意に 吸収強化剤形（例えばリポソーム）を使用してもよい。 本発明の理解を助けるために、以下に一連の実験の結果を示した実施例を記載 する。以下の実施例は本発明に関するものであるが、本発明を限定するものと考 えてはならず、そして現在または将来開発される本発明の改変のうち、当業者が 現在本明細書の記載と特許請求の範囲の記載から本願発明に含有されると考える ものは本発明の範囲に入る。 本発明は以下の実施例によりさらに詳細に説明する。最初の７つの実施例を図 １に記載した。実施例 実施例１ α−Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニトロアルギニナルの製造 Ａ．製造法１： 標題化合物であるα−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル の以下の製造方法はＢｏｃ−アミノ酸アルデヒド類の一般製造法の具体例である 。パテル（Patel）等著、バイオケミカ・エ・バイオフィジカ・アクタ（Biochim ．Biophys．Acta）、第７４８巻、第３２１〜３３０頁（１９８３年）を参照。 乾燥ＴＨＦ２００ｍＬ中で、Ｂｏｃ−Ｎ^g−ニトロアルギニン１２.７ｇ（４０ミ リモル）およびカルボニルジイミダゾール７.０ｇ（ＣＤＩ；４３ミリモル）を 室温で加え、３０分間撹拌した。反応混合物を−７８℃に冷却し、ＬiＡlＨ₄溶 液３５ｍＬ（ＴＨＦ中で１Ｍ）を３０分かけて滴加した。反応物を−７８℃で更 に数時間撹拌した。つぎに、アセトン１８ｍＬを加え、この混合物を１Ｎ塩酸４ ００ｍＬに迅速に加えた。混合物を酢酸エチル１００ｍＬで２回抽出した。酢酸 エチル洗浄液を合わせ、ついで、水１００ｍＬ、飽和ＮａＨＣＯ₃および飽和Ｎ ａＣｌ１００ｍＬで各々２回洗浄した。溶液を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮し、 泡を得た。α−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナルの粗重量 は６.３６ｇ（２１ミリモル；収率５２％）であった。Ｂ．製造法２： 別法として、標題化合物を、フェレンツ（Fehrentz）、Ｊ．Ａ．およびカスト ロ（Castro）、Ｂ.等著、シンセサス（Synthesis）、第６７６巻（１９８３年） の製造法の変形により製造した。 約０℃に冷却されているジクロロメタン７５ｍＬ中のＮ,Ｏ−ジメチルヒドロ キシルアミン８.４２ｇ（９４ミリモル）の懸濁物を撹拌しながら、そこにＮ− メチルピペリジン１１.４ｍＬをゆっくりと加えた。溶液を２０分間撹拌し、遊 離ヒドロキシルアミンを得、ついで次の工程に使用のために冷却し続けた。 分液漏斗中で、Ｂｏｃ−Ｎ^g−ニトロアルギニン３０.０ｇ（９４ミリモル）を テトラヒドロフラン約１４００ｍＬ中で加熱することにより溶解し、ついで、窒 素下で０℃に冷却した。Ｎ−メチルピペリジン１１.４ｍＬおよびイソブチルク ロロホルメート１２.１４ｍＬ（９４ミリモル）を加え、混合物を１０分間撹拌 した。上記で製造された遊離ヒドロキシルアミンを同時に加え、反応混合物を室 温に温め、ついで一夜撹拌した。 生じた沈殿物を濾過により除去し、ついでテトラヒドロフラン２００ｍＬで洗 浄した。真空下で濾液を約１５０ｍＬに濃縮した後に、酢酸エチル２００ｍＬを 加え、ついで、溶液を氷冷した。冷却した酢酸エチル相を０.２Ｎ塩酸７５ｍＬ で２回、０.５Ｎ水酸化ナトリウム７５ｍＬで２回、ブライン７５ｍＬで１回洗 浄した後に、有機相を無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空中の濃縮で、固 体状Ｂｏｃ−Ｎ^g−ニトロアルギニン−Ｎ−メチル−Ｏ−メチルカルボキサミド ２２.７ｇ（収率７０％）を回収した。ジクロロメタン／メタノール（シリカゲ ル）９：１による薄層クロマトグラフ分析は１スポットを示した。 フラスコを窒素雰囲気下に置き、−５０℃に冷却し、ついで、１Ｎ水素化アル ミニウムリチウム（テトラヒドロフラン中）７０ｍＬ（７０ミリモル）および乾 燥テトラヒドロフラン５００ｍＬを充填した。乾燥テトロヒドロフラン中にＢｏ ｃ−Ｎ^g−ニトロアルギニン−Ｎ−メチル−Ｏ−メチルカルボキサミド６６ミリ モルを含む溶液５０ｍＬを、反応混合物の温度を−５０℃に維持しながら、ゆっ くりと加えた。反応混合物を冷却を中止することにより０℃に温めた後に−３０ ℃に再冷却し、その温度で、２Ｎ硫酸水素カリウム１００ｍＬ（０.２モル）を 約１０〜１５分間かけて撹拌しながら加えた。ついで、反応混合物を２時間室温 で撹拌した。沈殿物を濾取した後に、濾液を真空下で濃縮し１００ｍＬにした。 濃縮物を酢酸エチル８００ｍＬに注ぎ、ついで１Ｎ塩酸５０ｍＬで２回、飽和炭 酸水素ナトリウム５０ｍＬで２回およびブライン５０ｍＬで１回逐次洗浄した。 合わせた水性抽出物を酢酸エチル３〜１００ｍＬで抽出した。酢酸エチル洗液の 全てを合わせ、ついで、無水硫酸マグネシウム上で乾燥した。混合物を真空下で 濃縮し、標題化合物１８.５ｇ（９５％）を得た。実施例２ トランス−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸ベンジルエステル パラ−トルエンスルホネート塩の製造 トランス−４−（アミノメチル）−シクロヘキサンカルボン酸５０ｇ（０.３ １８モル）、ｐ−トルエンスルホン酸６１.７ｇ（０.３２４モル）、ベンジルア ルコール２５０ｍＬ（２.４モル）およびトルエン２５０ｍＬを合わせて、撹拌 した。混合物を２４時間還流し、遊離した水をディーン−スターク（Dean-Stark ）装置により共沸して除去した。還流５時間後に透明な溶液を得た。溶液を室温 に冷却し、生成物を結晶化した。混合物を真空濾過し、エーテルで洗浄し、真空 炉で乾燥し、１２８.１２ｇ（収率９６％）を得た。引例：グリーンスタイン（G reenstein）、ジェッセ（Jesse）Ｐ.およびウィニッツ（Winitz）、ミルトン（M ilton）著、ケミストリー・オブ・ディ・アミノ・アッシズ（Chemistry of the Amino Acids）、第２巻、第９４２頁（１９８６年）。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ ）δ１.０５（ｍ，２Ｈ），１.４３（ｍ，２Ｈ），１.５９（ｍ，１Ｈ），１.８ ５（ｍ ，２Ｈ），２.０３（ｍ，２Ｈ），２.３３（ｍ，１Ｈ），２.３５（ｓ，３Ｈ） ，２.７５（ｄ，２Ｈ），５.０９（ｓ，２Ｈ），７.２３（ｄ，２Ｈ），７.３２ （ｍ，５Ｈ），７.６９（ｄ，２Ｈ）．融点１５４〜１５６℃。実施例３ １−ｔ−ブトキシカルボニル−セミカルバジディル−トランス−４−メチルシク ロヘキサンカルボン酸ベンジルエステルの製造 カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）３.２４ｇ（０.０２モル）を窒素下室温 でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）４５ｍＬ中に溶解した。ＤＭＦ４５ｍＬ中の ｔ−ブチルカルバザート２.４８ｇ（０.０２モル）溶液を滴加した。次に、実施 例２の固体状のベンジルエステル８.３８ｇ（０.０２モル）を加えた後に３０分 間にわたってトリエチルアミン（ＴＥＡ）３.０６ｍＬを滴加した。反応物を室 温で窒素下１時間撹拌した。水（１００ｍＬ）を加え、この混合物を酢酸エチル ５０ｍＬで３回抽出した。酢酸エチル層を合わせ、１Ｎ ＨＣｌ、水、ＮａＨＣ Ｏ₃、ＮａＣｌ各々７５ｍＬで２回ずつ抽出し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し た。混合物を濾過し、溶液を濃縮して油を得た。この物質を酢酸エチル／ヘキサ ンからの再結晶により精製（融点＝１０６〜１０８℃）または次の工程に直接使 用できた。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ０.９４（ｍ，２Ｈ），１.４２（ｍ，２ Ｈ），１.４５（ｓ，９Ｈ），１.８１（ｍ，２Ｈ），２.０２（ｍ，２Ｈ），２. ２７（ｍ，１Ｈ），３.１７（ｔ，２Ｈ），５.０９（ｓ，２Ｈ），５.５１（ｔ ，１Ｈ），６.４６（ｓ，２Ｈ），７.３４（ｍ，４Ｈ）．実施例４ １−（ｔ−ブトキシカルボニル）−３−セミカルバジディル−トランス−４−メ チル−シクロヘキサンカルボン酸の製造 上記の実施例３の粗製Ｂｏｃ−ベンジルエステルに、メタノール（ＭｅＯＨ） ２５０ｍＬおよび1０％活性炭上パラジウム５００ｍｇを加えた。５psiで１時間 水素化器上で振盪後に、混合物をセライトとともに透明ガラス濾過器を通して濾 過した。溶液を濃縮して泡状物を得、塩化メチレンを加え、沈殿物を生成した。 混合物を５℃で６５時間保存した。結晶化物質をエーテルで濾過し、粗製生成物 ４.０ｇ（１２.７ミリモル；実施例２の化合物から得られた全収率６２％）を得 た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）δ０.９６，（ｍ，２Ｈ），１.４２（ｍ，２Ｈ） ，１.４６（ｓ，９Ｈ），１.８２（ｍ，２Ｈ），１.９７（ｍ，２Ｈ），２.１８ （ｍ，１Ｈ），３.０（ｔ，２Ｈ）．融点＝１８５〜１８９℃。実施例５ セミカルバジディル−トランス−４−メチルシクロヘキサンカルボン酸トリフル オロ酢酸塩の製造 実施例４の化合物３１５ｍｇ（１ミリモル）を０℃でトリフルオロ酢酸（ＴＦ Ａ）１０ｍＬに加え、生じた溶液を３０分間撹拌した。この後、溶液をエーテル ７５ｍＬに滴加した。沈殿を生成し、この混合物を濾過し、エーテルで洗浄した 。粗製生成物の重量は２５４ｍｇ（０.７７ミリモル）であった；収率（７７％ ）。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ），δ１.０（ｍ，２Ｈ），１.３８（ｍ，２Ｈ）， １.４３（ｍ，１Ｈ），１.８４（ｍ，２Ｈ），２.０１（ｍ，２Ｈ），２.２２（ ｍ，１Ｈ），３.０４（ｄ，２Ｈ）．融点＝１５４〜１５６℃。実施例６ α−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^g−ニトロアルギニナル−セミカルバゾニ ル−トランス−４−メチル−シクロヘキサンカルボン酸の製造 水４５ｍＬを含むエタノール１３５ｍＬ中の実施例５の化合物１３.７ｇ（４ １.６ミリモル）および実施例１の粗製化合物１８.０ｇ（〜５９ミリモル）の溶 液を、酢酸ナトリウム（ＮａＯＡｃ）９.４１ｇ（６９ミリモル）で処理し、１ 時間還流した。この溶液を冷却し、ついで、０.１Ｎ塩酸中に注ぎ、酢酸エチル ３回抽出した。合わせた有機相を水、ついで、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳ Ｏ₄）し、小容量に濃縮した。この濁った混合物を５℃で一夜放置し、生成物を 沈殿させ、濾過により分離し、真空下で乾燥した。これにより、９.９ｇを得、 使用した実施例５の化合物に基づく収率は４７％であった。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤ₃ ＯＤ）δ１.０（ｍ，２Ｈ），１.４３（ｓ，９Ｈ），１.４５〜２.２０（ｍ，１ ３Ｈ），３.０９（ｄ，２Ｈ），３.３０（ｍ，２Ｈ），４.１８（ｂｓ，１Ｈ） ，７.１０（ｄ，１Ｈ）．融点＝１６２〜１６３℃。実施例７ セミカルバゾン固相の製造 反応容器中にメチルベンズヒドラルアミン（methyl-benzhydralamine） （Ｍ ＢＨＡ）樹脂０.８ｇ（０.５ミリモル、０.６２ｇ／モル）を入れ、ジクロロメ タン（ＤＣＭ）で１回（全ての洗浄には１〜２分間撹拌している溶媒１０ｍＬが 必要である）、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）で３回、１０％ジイソプロピル エチルアミン（ＤＩＥＡ）／ＤＭＦで２回、およびＤＭＦで４回で洗浄すること により、固相試薬である標題樹脂を製造した。ＤＭＦ５ｍＬ、４−メチルモルホ リン１ミリモル（１０２μＬ）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ−トリス −（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＢＯＰ試薬 ）１ミリモル（４４３ｍｇ）および実施例６の化合物１ミリモル（５００ｍｇ） を加え、１６時間回転輪上で混合し、ＤＭＦで３回、１０％ＤＩＥＡ／ＤＭＦで ２回およびＤＭＦで３回洗浄した。ついで、樹脂をＤＣＭ、メタノールおよびエ ーテルで逐次洗浄した。標題樹脂はニンヒドリンにより９８〜９９％カップリン グしたことを示した。 ついで、以下の実施例で示されるように標準ｔ−Ｂｏｃ法を使用して常用ペプ チド合成器で、アミノ酸またはアミノ酸類似体を用いてＮ−末端で樹脂を延長し た。 ペプチド類似体の製造をアプライド・バイオシステム社製４３０Ａ型ペプチド 合成器で４３０Ａ取り扱い説明書中のｔ−Ｂｏｃ化学条件を使用して行った。生 じた保護ペプチドアルデヒドはホルムアルデヒドで支持体から切断でき、ついで 、水素／Ｐｄで脱保護できる。窒素基はアルデヒドを還元しないで、グアニジン 基から除去できる。実施例８ Ｎ−４−（メチルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−アルギニ ナルの製造 標題化合物をアプライド・バイオシステムズ社製４３０Ａ型ペプチド合成器を 使用してして製造した。使用したＢｏｃ化学条件は装置取り扱い説明書に記載の 通りであった。 実施例７の樹脂０.５００ｇを５０％トリフルオロ酢酸（ジクロロメタン中） で処理してＢｏｃ保護基を除去することにより、すぐに使用できるようにした。 洗浄し、１０％ジイソプロピルエチルアミン（ジクロロメタン中）で処理して酸 性を中和した後に、連続法で市販のＢｏｃ−保護アミノ酸類を支持試薬にカップ リング（およびアミノ酸支持体鎖を延長）した。 従って、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンをジメチルホルムアミド中のジクロロヘキ シルカルボジイミドおよび１−ヒドロキシベンゾトリアゾールを使用して樹脂に 結合した後に、５０％トリフルオロ酢酸（ジクロロメタン中）で処理し、Ｂｏｃ 保護基を除去し、洗浄し、および１０％ジイソプロピルエチルアミン（ジクロロ メタン中）で洗浄し、酸性を中和した。Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β− ベンジルエステルを同じ方法でカップリングし、脱保護した。４−メチルペンタ ン酸を、ジメチルホルムアミド中ジクロロヘキシルカルボジイミドおよび１−ヒ ドロキシベンゾトリアゾールを使用して固相上でペプチドにカップリングした。 ペプチドアルデヒドを、テトラヒドロフラン５ｍＬ、酢酸１ｍＬ、ホルムアデ ヒド１ｍＬおよび１Ｎ塩酸０.１００ｍＬを含む混合物で１時間撹拌しつつ処理 することにより固相からペプチドアルデヒドを除去した。この混合物を濾過した 後に、樹脂をテトラヒドロフラン１０ｍＬで洗浄した。合わせた濾液を水１００ ｍＬで希釈し、酢酸エチルで抽出した。ついで、酢酸エチル相を飽和塩化ナトリ ウムで洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空下で濃縮した。 ペプチドアルデヒドのニトロおよびベンジル保護基を除去するために、濃縮し たペプチドアルデヒドを１０％水を含有するメタノール１０ｍＬ、１Ｎ塩酸０. ３００ｍＬおよび炭素上のパラジウム０.２００ｇの混合物中に取り、４５分間 ５ｐｓｉで水素で処理した。混合物をセライトとともに微細ガラスフィルター（ fine fritted filter）を通して濾過し、１０％水を含有するメタノールで洗浄 し、濃縮し、粗製ペプチドアルデヒドを得た。 ついで、生じたペプチドアルデヒドを、アセトニトリルが５％〜４０％である 水−アセトニトリル（ともに、０.１％トリフルオロ酢酸を含む）勾配で溶出し 、粒径１０ミクロンの細孔径３００オングストロームのＣ−１８カラム上で逆相 ＨＰＬＣを使用し精製した。カラム画分を分析用ＨＰＬＣにより分析し、純品を 含む画分を溜めて、凍結乾燥して、標題化合物を得た。高速原子衝撃質量分析計 （fast atom bombardment mass spectrometry）により４６８.３ａ.ｍ.ｕ.の理 論分子量を確認した。実施例９ Ｎ−オクタニル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で製造し、精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついで、Ｎ− Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベンジルエステルを結合した。５０％トリフ ルオロ酢酸（ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去した後に、 洗浄し、酸性を中和し、オクタン酸（４−メチルペンタン酸の代わり）を固相上 でペプチドに結合した。標題化合物を脱保護および精製後に得た。高速原子衝撃 質量分析計により、理論分子量４９６.３ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例１０ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア ルギニナルの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で製造し、精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついでＮ−Ｂ ｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベンジルエステルを結合した。５０％トリフル オロ酢酸（ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去した後に、洗 浄し、酸性を中和し、３−フェニルプロピオン酸（４−メチルペンタン酸の代わ り）を固相上でペプチドに結合した。標題化合物を脱保護および精製後に得た。 高速原子衝撃質量分析計により、理論分子量５０２.３ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例１１ Ｎ−ｔ−（（＋／−）−２−メチル−３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパ ルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で製造し、精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついでＮ−Ｂ ｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベンジルエステルに結合した。５０％トリフル オロ酢酸（ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去した後に、洗 浄し、酸性を中和し、（＋／−）−２−メチル−３−フェニルプロピオン酸（４ −メチルペンタン酸の代わり）を固相上でペプチドに結合した。標題化合物を脱 保護および精製後に得た。高速原子衝撃質量分析計により、理論分子量５１６. ３ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例１２ Ｎ−（１−シクロヘキシルアセチル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニナルの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で製造し、精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついでＮ−Ｂ ｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベンジルエステルを結合した。５０％トリフル オロ酢酸（ジクロロメタン中で）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去し、洗浄し て酸性を中和した後に、酢酸シクロヘキサン（４−メチルペンタン酸の代わり） を固相上でペプチドに結合した。更に脱保護および精製後に標題化合物を得た。 高速原子衝撃質量分析計により理論分子量４９４.６ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例１３ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル−Ｌ−グルタミル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギ ニナルの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で製造し、精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついで、Ｎ− Ｂｏｃ−Ｌ−グルタミン酸−β−ベンジルエステル（Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラ ギン酸−β−ベンジルエステルの代わり）を結合した。５０％トリフルオロ酢酸 （ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去し、洗浄して酸性を中 和した後に、３−フェニルプロピオン酸（４−メチルペンタン酸の代わり）を固 相上でペプチドに結合した。標題化合物を脱保護および精製後に得た。高速原子 衝撃質量分析計により、理論分子量５１６.３ａ.ｍ.ｕ.を確認した。 固相からの本発明の化合物の中間体を除去する別法を、実施例１４および１５ に表す。実施例１４ Ｎ−（３−シクロヘキサンプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル− Ｌ−アルギニナル−セミカルバゾニル−トランス−４−アミノメチルシクロヘキ サンカルボキサミドの製造 標題化合物を実施例８に記載と同様の方法で実施例７の樹脂上で製造した。Ｎ −Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に、ついで、Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ −アスパラギン酸−β−ベンジルエステルに結合した。５０％トリフルオロ酢酸 （ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去し、洗浄して酸性を中 和した後に、３−シクロヘキサンプロピオン酸（４−メチルペンタン酸の代わり ）を固相上でペプチドに結合した。 ＭＢＨＡ（メチルベンズヒドリルアミン）樹脂支持ペプチド３００ｍｇを円筒 テフロン反応器に入れた。アニソール３００μＬを加え、反応フラスコをねじ山 によりＨＦ装置に取り付けた。無水ＨＦ３ｍＬを−２０℃でフラスコ中へ液化し た。反応混合物を磁気撹拌器で−２０℃で０.５時間撹拌し、０℃に加温し、更 に１時間撹拌した。ＨＦを窒素流下で除去し、粗製生成物を０.１Ｍ炭酸水素ア ンモニウム５０ｍＬ樹脂から抽出した。この水性抽出物をジエチルエーテル（３ ×２５ｍｌ）で洗浄し、凍結し、凍結乾燥し、白色泡状として粗製生成物を得た 。このセミカルバゾンを、４５分間かけて１５％〜４０％の水（１５ｍＭ炭酸水 素アンモニウム含有、ｐＨ＝７．１）−アセトニトリル勾配で溶出し、粒径１０ ミクロン、細孔径３００オングストロームのＣ−１８カラムを使用して精製した 。カラム画分を分析用ＨＰＬＣにより分析し、および生成物を含む画分（保持時 間＝１８分）を溜め、凍結し、凍結乾燥し、白色粉末（６０ｍｇ、０.０８５ミ リモル）を得た。実施例１５ Ｎ−（３−シクロヘキサンプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリン− Ｌ−アルギニナルの製造 実施例１４のセミカルバゾン（６０ｍｇ、０.０８５ミリモル）をＴＦＡ水溶 液（ｐＨ＝１に緩衝化した）１４.１ｍＬおよび３７％ホルムアルデヒド（８.５ ミリモル、１００当量）６３６μＬの混合物で処理した。この混合物を２３℃で ０.５時間撹拌し、０.２μｍフィルターを通して濾過し、４５分間かけて１０％ 〜３０％になる水（０.１％トリフルオロ酢酸含有）−アセトニトリル勾配で溶 出し、粒径１０ミクロン、細孔径３００オングストロームのＣ−１８カラム上で 逆相ＨＰＬＣを使用し精製した。カラム画分を分析用ＨＰＬＣにより分析し、お よび生成物を含む画分（保持時間＝１７分）を溜め、凍結乾燥後に、生成物２０ ｍｇ（０.０３９ミリモル）を得た。この物質の質量分析は５０９.２ａｍｕでＭ ＋１ピークを表した。実施例１６ Ｎ−（２−プロピルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア ルギニナルの製造 標題化合物を実施例１４および１５記載の同様の方法で製造し、樹脂から切断 し、脱保護および精製した。 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−プロリンを、まず、実施例７の樹脂に結合し、ついでＮ−Ｂ ｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベンジルエステルを結合した。５０％トリフル オロ酢酸（ジクロロメタン中）で処理してｔ−Ｂｏｃ保護基を除去し、洗浄して 酸性を中和した後に、２−プロピルペンタン酸（４−メチルペンタン酸の代わり ）を固相上でペプチドに結合した。標題化合物を脱保護および精製後に得た。高 速原子衝撃質量分析計により、理論分子量４９６.３ａ.ｍ.ｕ.を確認した。 本発明の化合物の液相製造法は実施例１７〜４６に示す。実施例１７ １−ｔ−ブトキシカルボニル−セミカルバジディル−４−ジフェニルメタンの製 造 ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）２２５ｍＬ中カルボニルジイミダゾール（Ｃ ＤＩ）１６.２ｇ（０.１０モル）の溶液を室温で製造し、窒素下で撹拌した。つ いで、ＤＭＦ２２５ｍＬ中ｔ−ブチルカルバザート１３.２ｇ（０.１００モル） の溶液を３０分かけて滴加した。つぎに、ＤＭＦ１００ｍＬ中のジフェニルメチ ルアミン１８.３ｇ（０.１０モル）を３０分かけて加えた。反応物を窒素下室温 で１時間撹拌した。水（１０ｍＬ）を加え、この混合物を真空下で約１５０ｍＬ に濃縮した。この溶液を水５００ｍＬに注ぎ、酢酸エチル４００ｍＬで抽出した 。酢酸エチル相を１Ｎ ＨＣｌ、Ｈ₂Ｏ、飽和ＮａＨＣＯ₃、ブラインで各々７５ ｍＬ２回ずつ抽出し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した。混合物を濾過し、溶液を濃縮し、 白色泡状の標題化合物２９.５ｇ（収率８５％）を得た。この物質を酢酸エチル ／ヘキサンから再結晶により精製できるが、次の工程に直接使用するのに十分な 純度であった；融点１４２〜１４３℃。計算値Ｃ₁₉Ｈ₂₃Ｎ₃Ｏ₃：Ｃ，６６.８４ ；Ｈ，６.７９；Ｎ，１２.３１。実測値：Ｃ，６６.４６；Ｈ，６.７５；Ｎ；１ ２.９０．実施例１８ セミカルバジディル−４−ジフェニルメタントリフルオロ酢酸塩の製造 ジクロロメタン１２.５ｍＬ中実施例１７の化合物３.４３ｇ（１０ミリモル） の溶液を０℃トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）１２.５ｍＬで処理し、同温で３０分 間撹拌した。この後、溶液をエーテル７５ｍＬに滴加した。沈殿を生成し、混合 物を濾過し、エーテルを洗浄した。粗製標題化合物の重量は２.７ｇ（収率８０ ％）であった：融点１８２〜１８４℃。実施例１９ α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^g−ニトロアルギニナル−セミカルバ ゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタンの製造 水６ｍＬを含むエタノール２０ｍＬ中実施例１８の化合物２.６５ｇ（７.８ミ リモル）および実施例１の化合物（α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ^g −ニトロ−アルギニナル）２.３６ｇ（７.８ミリモル）の溶液を、酢酸ナトリウ ム１.２ｇ（８.８ミリモル）で処理し、１時間還流した。この溶液を冷却し、つ いで、水に注ぎ、酢酸エチルで３回抽出した。合わせた有機相を水、０.１Ｎ ＨＣｌ、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、小容量に濃縮した。白色固 体状残渣をアセトニトリル／エーテルから再結晶した。これにより標題化合物３ .２ｇ（実施例１８の化合物を基礎として収率７８％）を得た；融点７８〜７９ ℃。実施例２０ Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタント リフルオロ酢酸塩の製造 ジクロロメタン５ｍＬ中の実施例１９の化合物０.５３ｇ（１.０ミリモル）の 溶液を０℃でトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）５ｍＬで処理し、同温で３０分間撹拌 した。この後に、溶液をエーテル４０ｍＬに滴加した。沈殿を生成し、混合物を 濾過し、エーテルで洗浄した。これにより純粋白色固体として標題化合物０.５ １ｇを得た（収率９７％）：融点１５９〜１６０℃。実施例２１ Ｌ−プロリン−９−フルオレンメチルエステル−ｐ−トルエンスルホン酸塩の製 造 トルエン６００ｍＬ中Ｌ−プロリン１５.９９ｇ（１３９.０ミリモル）、９− フルオレンメタノール３０.０ｇ（１５２.９ミリモル）およびｐ−トルエンスル ホン酸の溶液を還流し、水をジーン−スタークトラップで除去した。２６時間後 、反応物を濃縮し、次の工程で直接使用する油状の標題化合物６４ｇ（収率９９ ％）を得た。実施例２２ α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジルエス テル）−Ｌ−プロリン−９−フルオレンメチルエステルの製造 ＤＭＦ１００ｍＬ中実施例２１の化合物（Ｌ−プロリン−９−フルオレンメチ ルエステル−ｐ−トルエンスルホン酸塩）（１５.４４ｇ、３３.２ミリモル）、 α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパラギン酸−β−（ベンジルエ ステル）（９.３５ｇ、４１.９ミリモル）、ベンゾトリアゾール−１−イルオキ シ−トリス−（ジメチルアミノ）−ホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ ＢＯＰ試薬）１８.６ｇ（４２.０ミリモル）の溶液を氷浴中で撹拌した。この溶 液を１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（０.４５、３.３４ミリモル）、 ジイソプロピルエチルアミン（１９.０ｍＬ、１９８ミリモル）で処理し、反応 物を０〜５℃で１.５時間撹拌した。この後、反応混合物を酢酸エチル６００ｍ Ｌに注ぎ、クエン酸飽和水溶液、水、飽和炭化水素ナトリウムおよび最後にブラ インで逐次抽出した。有機相を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、真空下で濃縮し、油とし て標題化合物１８ｇ（粗収率９１％）を得、次の工程で直接使用した。実施例２３ α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジルエス テル）−Ｌ−プロリンの製造 上記の実施例２２のα−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチル −β−（ベンジルエステル）−Ｌ−プロリン−９−フルオレンメチルエステルか らの粗製油（１７.５ｇ、２９.２ミリモル）をトリエチルアミン２５０ｍＬ中に 懸濁し、１時間還流した。この混合物を濃縮し、油を得、酢酸エチル６００ｍＬ 中に溶解した。酢酸エチル相をクエン酸で１回、ブライン１回洗浄し、乾燥（Ｍ ｇＳＯ₄）し、濃縮し、油を得た。この物質をカラムクロマトグラフィー（シリ カゲル、１０〜２０％ＴＨＦ／ＤＣＭ）により精製し、７.５ｇ（２１の化合物 から全収率３８％）を得た。実施例２４ α−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジルエス テル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルバゾニル− ４−Ｎ−ジフェニルメタンの製造 実施例２３のα−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチル−β− （ベンジルエステル）−Ｌ−プロリン（１１.２９ｇ、２６.９ミリモル）をＤＭ Ｆ６０ｍＬ中に溶解した。この溶液をＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ、１１.９ ｍＬ、１０８ミリモル）、ＢＯＰ（１１.９ｇ、２７ミリモル）および実施例２ ０の化合物（１４.６４ｇ、２８ミリモル）で処理し、ついで、２時間撹拌した 。この混合物を酢酸エチル７００ｍＬに注ぎ、１Ｎクエン酸、飽和ＮａＨＣＯ₃ 、水、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮し、泡を得た。この物質 をカラムクロマトグラフィー（シリカゲル、６〜２０％ＩＰＡ／ＤＣＭ）により 精製し、１２.５ｇ（実施例２３の化合物からの全収率３８％）を得た。実施例２５ Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジルエステル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニト ロ−アルギニナル−セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタンの製造 前もって０℃に冷却したジクロロメタン中５０％トリフルオロ酢酸１００ｍＬ の溶液に、実施例２４のα−Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｌ−アスパルチ ル−β−（ベンジルエステル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトローアルギニナ ル−セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタン１０.０ｇ（１２.１ミリモル ）を加えた。同温で１時間半反応混合物を撹拌し、ついでエーテル１０００ｍＬ にそれを注ぎ、沈殿物を得た。沈殿物を濾取し、エーテルで洗浄し、標題化合物 を得た。実施例２６ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジルエステ ル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルボゾニル−４ −Ｎ−ジフェニルメタンの製造 ＴＨＦ２０ｍＬ中の実施例２５のＬ−アスパルチル−β−（ベンジルエステル ）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトローアルギニナル−セミカルバゾニル−４− Ｎ−ジフェニルメタン０.９１ｇ（１.０８ミリモル）の溶液。この溶液を乾燥ピ リジン０.１６ｍＬおよび３−フェニルプロピオン酸クロリド０.２９７ｍＬ（２ .２ミリモル）で処理し、ついで水分を保ちながら１時間撹拌した。反応混合物 を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を１Ｍ ＨＣｌ水溶液、水、５ ％ＮａＨＣＯ₃水溶液で逐次洗浄し、最後に飽和ＮａＣｌで洗浄した。酢酸エチ ル抽出液を乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、減圧下で濃縮した。生成物をフラッシュクロ マトグラフィー（ジクロロメタン中１０％イソプロパノール）により精製し、標 題化合物Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（ベンジ ルエステル）−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルバゾ ニル−４−Ｎ−ジフェニルメタン０.７ｇを得た。実施例２７ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア ルギニナルの製造の別法 実施例２６の化合物をアニソール０.７０ｍＬを入れたテフロンＨＦ容器に移 した。これを乾燥窒素流下で−７８℃に冷却した。ついで、無水ＨＦ（〜１０ｍ Ｌ）を容器中へ液化した。反応物を撹拌し、−２０℃に加温し、３０分間その温 度に保った。反応物を０℃に加温し、ＨＦを乾燥窒素流下で蒸発させた。ＨＦ蒸 発後、０.１Ｍ ＮＨ₄ＨＣＯ₃５０ｍｌを加え、得られた溶液を３回ジエチルエ ーテルで抽出した。ついで、水相（Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−ア スパルチル−Ｌ−プロリル-Ｌ−アルギニナル−セミカルバゾン含有）を氷酢酸 ４.９ｍＬ、１Ｍ ＨＣｌ水溶液５.６ｍＬおよび４７％ホルムアミド水溶液２. ７ｍＬで処理した。ついで、この溶液を１時間撹拌した（セミカルバゾンを加水 分解するために）。ついで、反応混合物を３００ｍｍ×５０ｍｍ混合カラム（オ ールテック社製、商品番号Ｃ−６０００Ｂ）に適用し、５０ｍＭリン酸塩緩衝液 で溶出した。標題化合物を含有する画分を合わせ、蒸発した。ついで、得られた ペプチドアルデヒドを、アセトニトリル５％〜４０％である水−アセトニトリル （０.１％トリフルオロ酢酸をともに含む）勾配で溶出し、粒径１０ミクロ、細 孔径３００オングストロームのＣ−１８カラム上で逆相ＨＰＬＣを使用して脱塩 した。た。カラム画分を分析用ＨＰＬＣにより分析し、純粋な生成物を含有する 画分を溜め、凍結乾燥し、標題化合物を得た。高速原子衝撃質量分析計により理 論分子 量５０２ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例２８ α−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−メチルエステルの製造 乾燥無水メタノール（１００ｍＬ）を、氷浴中で撹拌しながら窒素雰囲気下で ナトリウム金属（０.２６ｇ、１０.８ミリモル）で処理した。ナトリウムを溶解 した後に、無水メタノール２０ｍＬ中α−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−β−ベ ンジルエステル（３.２ｇ、１０.０ミリモル）を加えた。この溶液を撹拌し、Ｔ ＬＣによりエステル交換した。約２０時間後、氷酢酸１ｍＬを加え、反応混合物 を小容量に濃縮した。この残渣を０.５Ｎ ＨＣｌ水溶液へ注ぎ、酢酸エチルで 抽出した。酢酸エチル相を水、ついで、ブラインで洗浄し、乾燥（ＭｇＳＯ₄） し、濃縮した。標題化合物（〜３ｇ）を次の工程に使用した。実施例２９ α−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル）−Ｌ−プロリンベンジ ルエステルの製造 ＤＭＦ９０ｍＬ中実施例２８の化合物（α−Ｂｏｃ−Ｌ−アルパルチル−β− （メチルエステル））（８.９ｇ、３.６ミリモル）、ＢＯＰ（１５.９ｇ、３６ ミリモル）、Ｌ−プロリンベンジルエステル（８.７ｇ、３６ミリモル）の溶液 をＮＭＭ（１９.７ｍＬ）で処理した。この溶液を３時間撹拌し、ついで、１Ｍ ＨＣｌへ注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機相を１Ｍ ＨＣｌ、１Ｍ ＮａＯＨ 、水で逐次洗浄し、最後にブラインで洗浄し、ついで乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃 縮した。これにより粗製生成物１６.８ｇを得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ １.４２（ｓ，９Ｈ），２.０（ｍ，３Ｈ），２.２（ｍ，１Ｈ），２.６５（ｍ ，２Ｈ），３.６７（ｓ，３Ｈ），３.７６（ｍ，２Ｈ），４.５７（ｍ，１Ｈ） ，４.８６（ｍ，１Ｈ），５.１５（ｄｄ，２Ｈ），５.４０（ｄ，１Ｈ），７.３ ５（ｍ，５Ｈ）．実施例３０ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリンベンジルエステルの製造 ７５％ＴＦＡ／ＣＨ₂Ｃｌ₂１００ｍＬ中実施例２９の化合物（８.４ｇ、１９. ３ミリモル）の溶液を氷浴中で１.５時間撹拌し、ついで濃縮し、油を得た。こ の残渣をトルエン中に溶解し、濃縮して過剰のＴＦＡを除去した。これをＴＨＦ ７５ｍＬ中に溶解し、３−フェニルプロピオン酸クロリド（２１.６ミリモル） 、ついでＮａＨＣＯ₃飽和水溶液１００ｍＬを加えた。この混合物を７０分間激 しく撹拌し、ついで、酢酸エチルおよびＮａＨＣＯ₃飽和水溶液の混合物に注い だ。混合物を振盪し、有機相を水およびブラインで洗浄し、ついで乾燥（ＭｇＳ Ｏ₄）し、濃縮した。この残渣をフラッシュクロマトグラフィー（０〜２％ＣＨ₃ ＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製し、標題化合物を得た。ＴＬＣ（シリカ）；Ｒ_f ＝０.５（２％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）。実施例３１ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ） −Ｌ−プロリンの製造 メタノール１２５ｍＬ中実施例３０の化合物（２.８ｇ、６.０ミリモル）の溶 液を炭素上１０％パラジウム２８０ｍｇで処理し、振盪しながら１.５時間水素 雰囲気（１５psig）に付した。この後に、懸濁物を濾過し、濃縮し標題化合物を 得た。¹Ｈ ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ ２.１（ｍ，３Ｈ），２.２（ｍ，１Ｈ）， ２.５３（ｔ，３Ｈ），２.９１（ｔ，３Ｈ），２.６〜２.９（ｍ，２Ｈ），３. ６５（ｓ，３Ｈ），３.７（ｍ，２Ｈ），４.３８（ｄｄ，１Ｈ），４.８６（ｍ ，１Ｈ），５.０５（ｍ，２Ｈ），７.２３（ｍ，５Ｈ），８.３７（ｄ，１Ｈ） ．実施例３２ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリル−Ｎ^g−ニトロ−Ｌ−アルギニナルセミカルバゾニル−４−Ｎ −ジフェニルメタンの製造 ＤＭＦ１３ｍＬ中実施例３１の化合物（１.７ｇ、４.５ミリモル）、ＢＯＰ（ ２.０ｇ、４.５ミリモル）、実施例２０の化合物（２.３ｇ、４.５ミリモル）の 溶液を、ＮＭＭ２.３ｍＬで処理した。この溶液を３時間撹拌した後に、水に注 ぎ、 酢酸エチルで抽出した。有機相を１Ｍ ＨＣｌ、１Ｍ ＮａＯＨ、水で洗浄し、 ついで、乾燥（ＭｇＳＯ₄）し、濃縮した。残渣をフラッシュクロマトグラフィ ー（０〜１０％ＣＨ₃ＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製した。Ｒ_f＝０.３７で標題 化合物のシングルスポットを得た（シリカガル上ジクロロメタン中１０％メタノ ールを使用するＴＬＣにおいて）。実施例３３ Ｎ−（３−フェニルプロピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例３２の全ての化合物をアニソール０．７０ｍＬとともにテフロンＨＦ容 器（teflon HF vessel）に移した。これを、乾燥窒素流（a stream of dry nitr ogen）のもと−７８℃まで冷却した。その後、無水ＨＦ（〜１０ｍｌ）を容器へ 液化させた。その反応物を攪拌し、−２０℃まで温め、その温度で３０分間維持 した。その反応物を０℃まで温め、乾燥窒素流のもとＨＦを蒸発させた。ＨＦが 蒸発した後、０．１Ｍ ＮＨ₄ＨＣＯ₃５０ｍｌを添加し、その結果生じた溶液を ジエチルエーテルで３回抽出した。次に、その水性相（Ｎ−（３−フェニルプロ ピオニル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル）−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニナル−セミカルバゾンを含有する）を氷酢酸４．９ｍＬ、１Ｍ ＨＣｌ 水溶液５．６ｍＬおよび４７％ホルムアルデヒド水溶液２．７ｍＬで処理した。 この溶液を１時間攪拌した（セミカルバゾンを加水分解するため）。次に、粒度 １０ミクロン、細孔サイズ３００オングストロームのＣ−１８カラムでの逆相Ｈ ＰＬＣを用いて、その結果生じたペプトチドアルデヒドをアセトニトリルの勾配 が５％〜４０％に及ぶ水−アセトニトリル（双方に０．１％トリフルオロ酢酸含 有）勾配で溶出させて精製する。そのカラム分留を分析用ＨＰＬＣで分析し、純 粋な生成物を含有する分留を溜め、凍結乾燥し、表題の化合物を得た。高速原子 衝撃質量分析により、理論分子量５１６原子質量単位を確証した。実施例３４ Ｎ−（２−プロピルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリンベンジルエステルの製造 実施例３０の化合物（８．４ｇ、１９．３ミリモル）の７５％ＴＦＡ／ＣＨ₂ Ｃｌ₂１００ｍＬ溶液を氷浴中で１．５時間攪拌し、その後オイルに濃縮した。 この残留物をトルエンに溶解し、濃縮して過剰なＴＦＡを除去した。これを、Ｄ ＭＦ３５ｍＬ中の２−プロピルペンタン酸（２．４４ｍＬ、１５．６ミリモル） 、ＢＯＰ（６．９１ｇ）、およびＮＭＭ（７８ミリモル）の混合物に添加した。 この溶液を１．２時間攪拌し、実施例３３と同様にして、操作した。その生成物 を、勾配が１０〜５０％のエチルアセテート／ヘキサンを用いてフラッシュクロ マトグラフィーにより精製した。これにより、表題の化合物２．０ｇをオイルと して得た（ＴＬＣ Ｒ_f＝０．３ ４０％エチルアセテート／ヘキサン中）。実施例３５ Ｎ−（２−プロピルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリンの製造 実施例３４の化合物（２．０ｇ、４．３４ミリモル）のメタノール９０ｍＬ溶 液を１０％炭素上パラジウム（palladium on carbon）２００ｍｇで処理した。 これを、１５psigにて１．５時間水素添加した。これを濾過し、濃縮して表題の 化合物を１．４６ｇ得た。その表題の化合物の融点は１５７−１５９℃であった 。実施例３６ Ｎ−（２−プロピルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリル−Ｎ^g−ニトロ−Ｌ−アルギニナルセミカルバゾニル−４−Ｎ −ジフェニルメタンの製造 実施例３４の化合物（１．６７ｇ、４．５ミリモル）、ＢＯＰ（２．０ｇ、４ ． ５ミリモル）、実施例２０の化合物（２．３ｇ、４．５ミリモル）のＤＭＦ１３ ｍＬ溶液をＮＭＭ２．３ｍＬで処理した。この溶液を２時間攪拌し、その後水に 注ぎエチルアセテートで抽出した。その有機相を１Ｍ ＨＣｌ、１Ｍ ＮａＯＨ 、水で洗浄し、次に乾燥させ（ＭｇＳＯ₄）、濃縮した。その残留物をフラッシ ュクロマトグラフィー（０〜８％ＣＨ₃ＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂）により精製した。こ れにより純粋な表題の化合物を１．２ｇ得た。Ｒ_f＝０．５４で表題化合物のス ポット１つを得た（シリカゲルによるジクロロメタン中の１０％メタノールを用 いたＴＬＣにて）。実施例３７ Ｎ−（２−プロピルペンタノイル）−Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル ）−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例３６からの化合物を、実施例３３と同様にして、脱保護し、精製し、表 題の化合物を得た。高速原子衝撃質量分析により、理論分子量５１０．３原子質 量単位を確証した。実施例３８ Ｎ−Ｂｏｃ−Ｄ−フェニルアラニル−Ｌ−アスパルチル−Ｌ−プロリル−Ｌ−ア ルギニナルの製造 当該分野では、表題の化合物は開示されている。バジュツ（Bajusz）、Ｓ.等 著、ホリア・ヘマトール・レイプチッグ（Folia Haematol．Leipzig）、第１０ ９巻 ：第１６頁（１９８２年）；バジュツ Ｓ.著、シンポシア・バイオロジカ ・ハンガリカ（Symposia Biologica Hungarica）、第２５巻：第２７７頁（１９ ８４年）；バジュツ、Ｓ.等著、ジャーナル・オブ・メディシナル・ケミストリ ー（J．Med．Chem．）、第３３巻：第１７２９頁（１９９０年）を見よ。それは 実施例ＡおよびＢに記載のアッセイ中の対照として使用するために下記のように して製造された。 表題の化合物を実施例８と同様の方法で合成し、精製した。まず、Ｎ−Ｂｏｃ −Ｌ−プロリンを実施例７の樹脂に結合し、ついでＮ−Ｂｏｃ−Ｄ−フェニルア ラニンを結合した。最終カップリング後、５０％トリフルオロ酢酸での処理を省 略した。標題の化合物が次の脱保護および精製後に得られた。高速原子衝撃質量 分析により、理論分子量５０２原子質量単位を確証した。実施例３９ ３−シアノ−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタンアミドプロピオン酸の製 造 Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン２０．０ｇ（８６ミリモル、１当量）を乾燥ピリジ ン１２０ｍＬに溶解し、乾燥ピリジン６０ｍＬに溶解したジシクロヘキシルカル ボジイミド２０．０ｇ（９７ミリモル、１．３当量）を３０分以上かけてで滴下 した。反応物を２３℃にて３時間攪拌し、２μｍナイロンフィルターで濾過した 。濾液をロータリーエバポレーターにて真空で濃縮し、１００ｍＬの水を添加し た。そのｐＨを４０％ＮａＯＨ（aq.）で１０に調節し、その溶液を再度もう一 度２μｍナイロンフィルターで濾過した。濾液をダウエクス（Dowex）５０Ｘ８ −４００イオン交換樹脂１２０ｍＬの床に通過させ、その樹脂を１：１のメタノ ール：水４カラム容積で洗浄した。濾液を真空で濃縮して、表題の化合物１７． ５ｇ（収率９５％）を白色固体として得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：４．４ ０p.p.m（ｍ、１Ｈ）；２．９５p.p.m（ｍ、２Ｈ）；１．４０p.p.m（s、９Ｈ） 。実施例４０ ３−テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタンアミドプロピオン 酸の製造 実施例３９の化合物（３−シアノ−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタン アミドプロビオン酸）１７．５ｇ（８２ミリモル、１当量）をＴＨＦ１２５ｍＬ に溶解し、トリブチルチンアジド４０．５ｇ（１２９ミリモル、１．５当量）を 添加した。反応混合物を還流に至らせ、そこで３日間維持した。反応混合物を冷 却し、ロータリーエバポレーターにて真空で揮発分を除去した。残留物を０．５ Ｍ ＮａＯＨ３００ｍＬに溶解し、この水溶液をエチルアセテート（４×１００ ｍＬ）で洗浄した。水性相をダウエクス（Dowex）５０Ｘ８−４００イオン交換 樹脂１２５ｍＬの床に通過させ、樹脂を１：１のメタノール：水４カラム容積で 洗浄した。ロータリーエバポレーターにて真空で揮発分を除去して、表題の化合 物１７．９ｇを白色固体として得た（収率８５％）。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ） ：４．５５p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３．４０p.p.m（ｍ、２Ｈ）；１．４０p.p.m（ ｓ、９Ｈ）。この物質は、固相ペプチド合成での使用に適している。実施例４１ ３−（Ｎ−２−メチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタ ンアミドプロピオン酸メチルエステルおよび３−（Ｎ−３−メチル）テトラゾリ ル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタン−アミドプロピオン酸メチルエス テルの製造 実施例４０の化合物（３−テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ） メタンアミドプロピオン酸）１．５ｇ（５．８ミリモル、１．０当量）を乾燥Ｄ ＭＦ１３ｍＬに溶解し、セシウムカーボネート３．９ｇ（１２．０ミリモル、２ ．１当量）を添加した。この後、シリンジによりヨウ化メチルを９３０μｌ（１ ４．５ミリモル、２．５当量）添加した。反応混合物を２３℃にて３時間攪拌し 、０．５Ｍ ＨＣ１５０ｍＬに注いだ。これを、エチルアセテート（３×５０ｍ Ｌ）で抽出した。併せた有機相を０．５Ｍ ＨＣ１５０ｍＬ、飽和ＮａＨＣＯ₃ ５０ｍＬ、およびブライン５０ｍＬで洗浄した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後 、有機相をデカントし、ロートバップ（rotovap）にて真空で揮発分を除去して 、表題化合物の混合物を黄色オイルとして得た。一方の異性体が最初に溶出する （他方の異性体Ｒｆ＝０．１５に対するＲｆ＝０．３）シリカのクロマトグラフ ィー（５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）により異性体を分離した。純粋な生成物を 含有する留分を併せ、ロータリーエバポレーターにて揮発分を除去して、表題の 化合物のそれぞれの純粋な生成物０．６０ｇを得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） ：２番目に溶出する異性体：５．８p.p.m（ｄ、１Ｈ）、４．７５p.p.m（ｍ、１ Ｈ）；４．０５p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．７５p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．４p.p.m （ｍ、２Ｈ） ；１．５p.p.m（ｓ、９Ｈ）。最初に溶出する異性体：５．７５p.p.m（ｄ、１Ｈ ）、４．７５p.p.m（ｍ、１Ｈ）；４．３０p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．７５p.p.m （ｓ、３Ｈ）；３．６５p.p.m（ｍ、２Ｈ）；１．７p.p.m（ｓ、９Ｈ）。実施例４２ ３−（Ｎ−２−メチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタ ンアミドプロピオン酸または３−（Ｎ−３−メチル）テトラゾリル−２−（１， １−ジメチルエトキシ）メタンアミドプロピオン酸の製造 実施例４１の化合物（３−（Ｎ−２−メチル）テトラゾリル−２−（１，１− ジメチルエトキシ）−メタンアミドプロピオン酸メチルエステルまたは３−（Ｎ −３−メチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）−メタンアミ ドプロピオン酸メチルエステル）０．５ｇ（１．７５ミリモル、１．０当量）を メタノール１２ｍＬに溶解し、１．０Ｍ ＬｉＯＨ（aq．）２．３ｍＬ（１．３ 当量）を添加した。出発原料をＴＬＣ分析（シリカゲルでの１：１ ＥｔＯＡｃ ：ヘキサン）により観察できない場合、反応物を２３℃にて２時間攪拌する。反 応混合物をダウエクス（Dowex）５０Ｘ８−４００イオン交換樹脂１０ｍＬの床 に 通過させ、その樹脂を１：１のメタノール：水４カラム容積で洗浄する。真空で 溶媒を除去して、適当な表題の生成物を得る。実施例４３ ３−テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタンアミドプロピオン 酸メチルエステルの製造 実施例４０の化合物（３−テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ） −メタンアミドプロピオン酸）１．６６ｇ（６．５ミリモル、１当量）を乾燥Ｔ ＨＦ２６ｍＬに入れ、カルボニルジイミダゾール３．１４ｇ（１９．４ミリモル 、３当量）を添加し、その後イミダゾール８８ｍｇ（１．３ミリモル、０．２当 量）を添加した。反応混合物を２３℃にて３．５時間攪拌した。メタノール２０ ｍＬを添加し、その混合物をさらに０．５時間攪拌した。揮発分をロータリーエ バポレーターにて真空で除去し、粗製物をエチルアセテート１００ｍＬに入れた 。有機相を０．５Ｍ ＨＣｌ（２×２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥 させた。乾燥剤（dessicant）からデカントした後、有機相を真空で濃縮し、（ ２〜１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ₂Ｃｌ₂、１％酢酸、シリカ）でのクロマトグラフィー により表題の化合物を精製して、７２０ｍｇの生成物を得た。ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃ ）５．８p.p.m（ｄ、１Ｈ）、４．７５p.p.m（ｓ、１Ｈ）、３．８p.p.m（ｓ、 ３Ｈ）、３．５５p.p.m（ｍ、２Ｈ）、１．４p.p.m（ｓ、９Ｈ）。実施例４４ ３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジメチル エトキシ）メタンアミドプロピオン酸メチルエステルおよび３−（Ｎ−３−ベン ジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタンア ミドプロピオン酸メチルエステルの製造 実施例４３の化合物（３−テトラゾリル−２−（１，１−ジメチルエトキシ） −メタンアミドプロピオン酸メチルエステル）１．２８ｇ（４．７ミリモル、１ 当量）を乾燥ＴＨＦ９．５ｍＬに入れ、ベンジルオキシメチルクロライド０．６ ５ｍＬ（５．６ミリモル、１．２当量）をシリンジで添加し、その後ジイソプロ ピルエチルアミン１．０５ｍＬ（６．１ミリモル、１．３当量）を添加した。反 応混合物を２３℃にて１時間攪拌し、エチルアセテート１００ｍＬで希釈した。 有機相を０．５Ｍ ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ₃（５０ｍＬ）、 およびブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させた。有 機相をデカントし、真空で濃縮した。クロマトグラフィー（１：１ ＥｔＯＡｃ ／ヘキサン、シリカ）により、表題の化合物（Ｒｆ＝０．４、１．０５ｇ；Ｒｆ ０．２５、０．６７ｇ）が得られた。後の反応で、どちらの異性体を用いてもよ い。実施例４５ ３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロ イルアミド）プロピオン酸メチルエステルまたは３−（Ｎ−３−ベンジルオキシ メチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸メチ ルエステル ４−メチルバレリアン酸２．０ｇをオキサリルクロライド１０ｍＬに入れ、こ の混合物を窒素雰囲気下にて２３℃で一晩中攪拌する。この後、乾燥トルエン１ ００ｍＬを添加し、真空で揮発分を除去して、以下で示されるようにして用いら れる酸塩化物を得た。 実施例４４の化合物（３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル− ２−（１，１−ジメチルエトキシ）メタンアミド−プロピオン酸メチルエステル または３−（Ｎ−３−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（１，１−ジ メチルエトキシ）メタンアミド−プロピオン酸メチルエステル）１．０ｇ（２． ５ミリモル、１当量）を−５℃にてトリフルオロ酢酸１０ｍＬに入れ、この溶液 を０．５時間攪拌し、この後真空で濃縮する。粗製のトリフルオロ酢酸塩をトル エンに入れ、これを再度濃縮して、いかなる残留トリフルオロ酢酸を除去する。 次に粗製のトリフルオロ酢酸塩を乾燥ＴＨＦ５ｍＬに入れ、上記されたようにし て製造された４−メチルバレロイルクロライド０．５２ｇ（３．８ミリモル、１ ．５当量）を添加し、その後トリエチルアミン１．０７ｍＬを添加する。反応混 合物を２３℃にて２時間攪拌し、エチルアセテート５０ｍＬで希釈する。有機相 を ０．５Ｍ ＨＣｌ（２×２５ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ₃（２５ｍＬ）、ブライン （２５ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥させる。デカントした後、有機相 を真空で濃縮し、シリカでのクロマトグラフィー（１：１ ＥｔＯＡｃ／ヘキサ ン）により精製して、相当する表題の化合物を得る。実施例４６ ３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロ イルアミド）プロピオン酸または３−（Ｎ−３−ベンジルオキシメチル）テトラ ゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸の製造 実施例４５の化合物（３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル− ２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸メチルエステルまたは３−（ Ｎ−３−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルア ミド）プロピオン酸メチルエステル）のメタノール溶液０．１５Ｍを製造し、１ ．５当量の１Ｍ ＬｉＯＨ（eq.）を添加する。反応混合物を出発原料がＴＬＣ によりなくなるまで（約３時間）攪拌し、ダウエクス（Dowex）５０Ｘ８−４０ ０イオン交換樹脂に通過させ、その樹脂を１：１のメタノール：水４カラム容積 で洗浄する。真空で濾液を濃縮して、相当する表題の生成物を得る。実施例４７ Ｂｏｃ−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルバゾニル− ４−Ｎ−ジフェニルメタンの製造 実施例２０の化合物（Ｎ^g−ニトロ−アルギナル−セミカルバゾニル−４−Ｎ −ジフェニルメタントリフルオロ酢酸塩）５．０ｇ（９．６ミリモル、１当量） 、Ｎ−ｔ−ブトキシカルボニル−Ｌ−ブロリン２．１５ｇ（１１．５ミリモル、 １．２当量）、ＢＯＰ試薬５．５３ｇ（１２．５ミリモル、１．３当量）、およ びＮ−ヒドロキシベンズトリアゾールモノハイドルート０．１５ｇ（０．９６ミ リモル、０．１当量）を乾燥ＤＭＦ３８ｍＬに入れ、Ｎ−メチルモルホリン６． ３ｍＬ（５７．６ミリモル、６当量）をシリンジにより添加する。反応混合物を ３時間攪拌し、エチルアセテート３００ｍＬで希釈する。有機相を４Ｍ ＨＣｌ （３０ｍＬ）、１Ｍ ＮａＯＨ（２×３０ｍＬ）、およびブライン（３０ｍＬ） で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させる。有機相をデカントし、真空で濃 縮して、シリカの１：１０ＭｅＯＨ／メチレンクロライドでのクロマトグラフを することができる粗製の表題化合物を得る。実施例４８ ３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロ イルアミド）プロピオノイル−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル −セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタンまたは３−（Ｎ−３−ベンジル オキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオノ イル−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル−セミカルバゾニル−４ −Ｎ−ジフェニルメタンの製造 実施例４７の化合物（Ｂｏｃ−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナ ル−セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタン）２．５ミリモル（１当量） を−５℃にてトリフルオロ酢酸１０ｍＬに入れ、この溶液を０．５時間攪拌し、 その後真空で濃縮する。粗製のトリフルオロ酢酸塩をトルエンに入れ、これを再 度濃縮して、残留するいかなるトリフルオロ酢酸を除去する。実施例４６の化合 物（３−（Ｎ−２−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバ レロイルアミド）プロピオン酸または３−（Ｎ−３−ベンジルオキシメチル）テ トラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸）３ミリモル（ １．２当量）、ＢＯＰ試薬３．２５ミリモル（１．３当量）、およびＮ−ヒドロ キシベンゾトリアゾールモノハイドレート０．２５ミリモル（０．１当量）を乾 燥ＤＭＦ１０ｍＬに入れ、Ｎ−メチルモルホリン１５ミリモル（６当量）をシリ ンジで添加する。反応混合物を３時間攪拌し、エチルアセテート１００ｍＬで希 釈する。有機相を４Ｍ ＨＣｌ（１０ｍＬ）、１Ｍ ＮａＯＨ（２×１０ｍＬ） 、およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させる。 有機相をデカントし、真空で濃縮して粗製物を得、これはシリカの１：１０のＭ ｅＯＨ／メチレンクロライドでクロマトグラフすることができ、相当する表題の 化合物を得る。実施例４９ ３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオノイル−Ｌ− プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例４８の全ての生成物をアニソール０．７０ｍＬとともにテフロンＨＦ容 器に入れる。これを、乾燥窒素流のもと−７８℃まで冷却する。その後、無水Ｈ Ｆ（〜１０ｍｌ）をその容器へ液化させる。その反応物を攪拌し、−２０℃まで 温め、その温度で３０分間維持する。その反応物を０℃まで温め、乾燥窒素流の もとＨＦを蒸発させる。ＨＦが蒸発した後、０．１Ｍ ＮＨ₄ＨＣＯ₃５０ｍｌを 添加し、その結果生じた溶液をジエチルエーテルで３回抽出する。次に、その水 性相（２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオノイル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニナルセミカルバゾンを含有する）を氷酢酸４．９ｍＬ、１Ｍ ＨＣｌ 水溶液５．６ｍＬおよび４７％ホルムアルデヒド水溶液２．７ｍＬで処理する。 この溶液を１時間攪拌する（セミカルバゾンを加水分解するため）。次に、粒度 １０ミクロン、細孔サイズ３００オングストロームのＣ−１８カラムでの逆相Ｈ ＰＬＣを用いて、その結果生じたペプトチドアルデヒドをアセトニトリルの勾配 が５％〜４０％に及ぶ水−アセトニトリル（双方に０．１％トリフルオロ酢酸含 有）勾配で溶出させて精製する。そのカラム分留を分析用ＨＰＬＣで分析し、純 粋な生成物を含有する分留を溜め、凍結乾燥し、表題の生成物を得る。 もしくは、実施例４９の化合物は実施例５０〜５６で示される手段により合成 されてよい。実施例５０ １−アミド−３−ベンジルオキシメタンアミド−１，４−ブタンジオイックアシ ッド（butanedioic acid）メチルエステル Ｃｂｚ−Ｌ−アスパラギン１５．０ｇ（５６．４ミリモル、１当量）を乾燥メ チレンクロライド１００ｍＬに溶解し、オキサリルクロライド５０ｍＬ（５７３ ミリモル、１０当量）を１０分間以上かけて滴下した。反応物を２３℃にて４時 間攪拌し、その後ロータリーエバポレーターにて真空で揮発分を除去した。メタ ノール１００ｍＬを添加し、その混合物を２３℃にて０．５時間攪拌した。反応 混合物を真空で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（０〜５％メタノール／ メチレンクロライド）によりその粗製物を精製して、表題の化合物１２．４５ｇ を得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：７．４p.p.m（ｍ、５Ｈ）；６．１p.p.m（ ｄ 、１Ｈ）；５．８p.p.m（ｄ、２Ｈ）；５．１p.p.m（ｓ、２Ｈ）；４．６p.p.m （ｍ、１Ｈ）；３．７５p.p.m（ｓ、３Ｈ）；２．８５p.p.m（ｍ、２Ｈ）。実施例５１ ３−シアノ−２−ベンジルオキシメタンアミドプロピオン酸メチルエステルの製 造 実施例５０の化合物（Ｃｂｚ−Ｌ−アスパラギン、メチルエステル）５．０ｇ （１７．９ミリモル、１当量）を乾燥ピリジン１０ｍＬに溶解し、ベンゼンスル ホニルクロライド３．０ｍＬ（２３．２ミリモル、１．３当量）をシリンジで添 加した。反応物を５０℃にて３時間攪拌した。１Ｍ ＨＣｌ５０ｍＬを添加し、 その水溶液をエチルアセテート（２×１００ｍＬ）で抽出した。有機相を併せて 、１Ｍ ＨＣｌ５０ｍＬ、飽和ＮａＨＣＯ₃５０ｍＬ、およびブラインで洗浄し た。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、有機相をデカントし、真空で濃縮した。粗 製物をフラッシュクロマトグラフィー（１０％ＥｔＯＡｃ／メチレンクロライド 、Ｒｆ＝０．４５）により精製して、表題の化合物４．１ｇを得た。¹Ｈ−ＮＭ Ｒ（ＣＤＣｌ₃）：７．４p.p.m（ｍ、５Ｈ）；５．７p.p.m（ｍ、１Ｈ）；５． １p.p.m（ｓ、２Ｈ）；４．６p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３．８p.p.m（ｓ、３Ｈ）； ３．０p.p.m（ｍ、２Ｈ）。実施例５２ ３−テトラゾリル−２−ベンジルオキシメタンアミドプロピオン酸メチルエステ ルの製造 実施例５１の化合物（３−シアノ−２−ベンジルオキシメタンアミドプロピオ ン酸メチルエステル）２．５ｇ（９．５４ミリモル、１当量）を乾燥ＴＨＦ１０ ｍＬに溶解し、トリ−ｎ−ブチルチンアジド３．０ｇ（９．５４ミリモル、１当 量）を添加した。反応物を７２時間還流させ、その後真空で濃縮した。１Ｍ Ｎ ａＯＨ５０ｍＬを添加し、その水溶液をエチルアセテート（３×５０ｍＬ）で抽 出した。その水溶液を４Ｍ ＨＣｌでｐＨ＝１に酸性化し、エチルアセテート（ ４×６０ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウムで乾燥させた後、有機相をデカント し、真空で濃縮して、表題の化合物２．５ｇを得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃） ：７．３p.p.m（ｍ、５Ｈ）；６．１p.p.m（ｍ、１Ｈ）；５．１p.p.m（ｓ、２ Ｈ）；４．８p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３．８p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．５p.p.m（ｍ 、２Ｈ）。実施例５３ ３−テトラゾリル−２−アミノプロピオン酸メチルエステル塩酸塩の製造 実施例５２の化合物（３−テトラゾリル−２−ベンジルオキシメタンアミドプ ロピオン酸メチルエステル）０．５３ｇ（１．７４ミリモル、１当量）をメタノ ール３０ｍＬに溶解し、conc．ＨＣｌ１ｍＬを添加した。反応物を窒素でフラッ シュ（flush）し、１０％炭素上パラジウム８０ｍｇを添加した。その溶液に４ ０psiにて２時間水素添加した。その触媒を濾過し、その後真空で濃縮して、表 題の化合物３５４ｍｇを得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：４．７p.p.m（ｍ、 １Ｈ）；３．８p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．６p.p.m（ｍ、２Ｈ）。実施例５４ ３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸メチルエ ステルの製造 実施例５３の化合物（３−テトラゾリル−２−アミノプロピオン酸メチルエス テル塩酸塩）３５３ｍｇ（１．７４ミリモル、１当量）、４−メチルバレリアン 酸２６２μＬ（２．０９ミリモル、１．２当量）、ＢＯＰ試薬１．０ｇ（２．２ ６ミリモル、１．３当量）、およびＮ−ヒドロキシベンズトリアゾールモノハイ ドレート２７ｍｇ（０．１７４ミリモル、０．１当量）を乾燥ＤＭＦ５ｍＬに入 れ、Ｎ−メチルモルホリン９６０μＬ（８．７ミリモル、５当量）をシリンジに より添加した。反応混合物を２３℃にて１８時間攪拌し、その後エチルアセテー ト１００ｍＬで希釈した。有機相を２０％クエン酸（１０ｍＬ）およびフライン （１０ｍＬ）で洗浄し、その後硫酸ナトリウムで乾燥させる。有機相をデカント し、真空で濃縮して粗製物を得、これをＭｅＯＨ／メチレンクロライド（２〜１ ０％、１％酢酸）でシリカのクロマトグラフをして、表題の化合物２３０ｍｇを 得る（Ｒｆ＝０．３０；１０％ＭｅＯＨ／メチレンクロライド、１％酢酸）。¹ Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：７．０p.p.m（ｄ、１Ｈ）；５．０５p.p.m（ｍ、１ Ｈ）；３．８p.p.m（ｓ、３Ｈ）；３．６p.p.m（ｍ、２Ｈ）；１．５p.p.m（ｍ 、３Ｈ）；０．８p.p.m（ｄ、６Ｈ）。実施例５５ ３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオン酸の製造 実施例５４の化合物（３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド ）プロピオン酸メチルエステル）５１ｍｇ（０．１９ミリモル、１当量）、水酸 化リチウム１６ｍｇ（０．３８ミリモル、２当量）を水１．５ｍＬに入れ、その 反応混合物を２時間攪拌した。１Ｍ ＨＣｌ３５μＬを添加し、その溶液を真空 で 濃縮して、その後の反応でそのまま使用される表題の化合物を得た。¹Ｈ−Ｎ ＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：４．６p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３．４p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３ ．２p.p.m（ｍ、１Ｈ）；２．１５p.p.m（ｍ、２Ｈ）；１．４p.p.m（ｍ、３Ｈ ）；０．８p.p.m（ｄ、６Ｈ）。実施例５６ ３−（Ｎ−３−ベンジルオキシメチル）テトラゾリル−２−（４−メチルバレロ イルアミド）プロピオニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナル− セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタンの製造 実施例１９の化合物（Ｂｏｃ−Ｌ−プロリル−Ｌ−Ｎ^g−ニトロ−アルギニナ ル−セミカルバゾニル−４−Ｎ−ジフェニルメタン）１２０ｍｇ（０．２８ミリ モル、１当量）を−５℃にてトリフルオロ酢酸５ｍＬに入れ、この溶液を０．５ 時間攪拌し、その後真空で濃縮した。その粗製のトリフルオロ酢酸塩をトルエン に入れ、これを再度濃縮して、残留するいかなるトリフルオロ酢酸を除去する。 実施例５５の化合物（３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド） プロピオン酸）４８ｍｇ（０．２３ミリモル、１．２当量）、１−（３−ジメチ ルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドハイドロクロライド４８ｍｇ（ ０．２５ミリモル、１．３当量）、および４−ジメチルアミノピリジン２ｍｇ（ ０．０２ミリモル、０．１当量）を乾燥ＤＭＦ３ｍＬに入れ、ジイソプロピルエ チルアミン１００μＬ（０．５７ミリモル、３当量）をシリンジで添加した。反 応混合物を２３℃にて１８時間攪拌し、２０％クエン酸１０ｍＬに注いだ。水溶 液をエチルアセテート（６×１５ｍＬ）で抽出し、併せた有機相を硫酸ナトリウ ムで乾燥させた。有機相をデカントし、真空で濃縮して、粗製物を得、これを２ ｍｍ分取ＴＬＣシリカゲルプレート（１０％ＭｅＯＨ／メチレンクロライド、１ ％酢酸）でクロマトグラフした。Ｒｆが０．２５のバンド（band）を回収し、１ ０％ＭｅＯＨ／エチルアセテートに入れ、濾過した。真空で揮発分を除去して、 表題の化合物３０ｍｇを得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤ₃ＯＤ）：７．３p.p.m（ｍ、 １０ Ｈ）；７．１p.p.m（ｄ、１Ｈ）；６．１p.p.m（ｓ、１Ｈ）；４．７p.p.m（ｍ 、１Ｈ）；４．５p.p.m（ｍ、１Ｈ）；４．３p.p.m（ｍ、１Ｈ）；３．６p.p.m （ｍ、１Ｈ）；３．２p.p.m（ｍ、２Ｈ）；２．８p.p.m（ｍ、１Ｈ）；２．１p. p.m（ｍ、３Ｈ）；１．２−１．９p.p.m（ｍ、１３Ｈ）。実施例５７ ３−テトラゾリル−２−（４−メチルバレロイルアミド）プロピオニル−Ｌ−プ ロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例５６の全ての生成物をアニソール０．７０ｍＬとともにテフロンＨＦ容 器に移した。これを、乾燥窒素流のもと−７８℃まで冷却した。その後、無水Ｈ Ｆ（〜１０ｍｌ）を容器へ液化させた。その反応物を攪拌し、−２０℃まで温め 、その温度で３０分間維持した。その反応物を０℃まで温め、乾燥窒素流のもと ＨＦを蒸発させた。ＨＦが蒸発した後、０．１Ｍ ＮＨ₄ＨＣＯ₃５０ｍｌを添加 し、その結果生じた溶液をジエチルエーテルで３回抽出した。次に、その水性相 （２−（バレロイルアミド）プロピオニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナル− セミカルバゾンを含有する）を氷酢酸４．９ｍＬ、１Ｍ ＨＣｌ水溶液５．６ｍ Ｌおよび４７％ホルムアルデヒド水溶液２．７ｍＬで処理した。この溶液を１時 間攪拌した（セミカルバゾンを加水分解するため）。次に、粒度１０ミクロン、 細孔サイズ３００オングストロームのＣ−１８カラムでの逆相ＨＰＬＣを用いて 、その結果生じたペプトチドアルデヒドをアセトニトリルの勾配が５％〜４０％ に及ぶ水−アセトニトリル（双方に０．１％トリフルオロ酢酸含有）勾配で溶出 させて精製した。そのカラム分留を分析用ＨＰＬＣで分析し、純粋な生成物を含 有す る分留を溜め、凍結乾燥し、表題の生成物を得た。高速原子衝撃質量分析により 、理論分子量４９２原子質量単位を確証した。実施例５８ Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル）−Ｌ−プロリン−Ｏ− ベンジルエステルの製造 Ｎ−Ｂｏｃ−Ｌ−アスパラギン酸−（β−メチルエステル）５７．５８ｇ（０ ．２３２モル）、Ｌ−プロリン−（Ｏ−ベンジルエステル）ハイドロクロライド ５０ｇ（０．２０８モル）、乾燥ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）６４０ｍｌ、 およびＢＯＰ１０２ｇ（０．２３７モル）の溶液を４−メチルモルホリン（ＮＭ Ｍ）１２７．４７ｍＬで処理し、窒素雰囲気下で一晩中攪拌した。この溶液を水 １０００ｍＬに注ぎ、エチルアセテート３００ｍＬで３回抽出した。併せた有機 相を水、１０％ＨＣｌ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、およびブライン３００ ｍＬで３回洗浄した。その有機相を硫酸マグネシウムで乾燥させ、減圧下で蒸発 させた。これにより、表題の化合物９１．３９ｇ（収率９７．７％）（粘稠オイ ル）を得た。¹Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）：７．３３（Ｍ、５Ｈ）、５．４２（ｍ 、１Ｈ）、５．１９、５．１２（ｄ、ｄ、２Ｈ）、４．５６（ｂ、１Ｈ）、３． ７７（ｍ、２Ｈ）、３．６７（ｓ、３Ｈ）、２．７２（ｍ、１Ｈ）、２．５８（ ｍ、１Ｈ）、２．１８（ｍ、１Ｈ）、１．９７（ｍ、１Ｈ）、１．４３（ｓ、９ Ｈ）。実施例５９ Ｌ−アスパルチル−β−（メチルエステル）−Ｌ−プロリン−Ｏ−ベンジルエス テル塩酸塩の製造 実施例５８の化合物１２５．２ｇ（０．２８８モル）の溶液をジオキサン５０ ０ｍＬに溶解し、ＨＣｌ（g）で飽和されたジオキサン５００ｍＬの溶液に０℃ にて添加した。３．５時間後、ＴＬＣにより残留している出発原料はないことを 確認した。溶媒を減圧下で蒸発させて、褐色ガラス（a brown glass）を得た。 その固体を減圧下で２４時間放置し、粗製の表題化合物１４５ｇ（収率＞１００ ％）を得た。これは、さらなる精製なしに使用される。実施例６０ Ｎ−（ブチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル）−Ｌ− プロリン−Ｏ−ベンジルエステルの製造 実施例５９の化合物１２．２ｇ（０．０３３モル）、ｎ−ブチル−スルホニル クロライド３．９ｍＬ（０．０３モル）、アセトニトリル５００ｍｌおよび乾燥 ＤＭＦ７ｍＬの溶液を０℃まで冷却した。この溶液をピリジン７ｍＬで処理し、 室温まで一晩中温めた。この溶液を水１０００ｍＬに注ぎ、エチルアセテート３ ００ｍＬで３回抽出した。併せた有機相を水、１０％ＨＣｌ、飽和炭酸水素ナト リウム水溶液、およびブライン３００ｍＬで３回洗浄した。その有機相を硫酸マ グネシウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。これにより、表題の化合物５．３ ５ｇ（収率３６．３％）を褐色オイルとして得た。Ｒｆ＝０．９５（１０％Ｍｅ ＯＨ／メチレンクロライド）。実施例６１ Ｎ−（ブチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル）−Ｌ− プロリンの製造 パール・ハイドロゲネーター（Parr Hydrogenator）中、実施例６０の化合物 ５．３５ｇ（０．０１２モル）、メタノール２５０ｍＬおよび１０％炭素上パラ ジウム１．３ｇの溶液を水素４０psiで加圧した。この混合物を２時間振盪し、 次に微細ガラスフィルターを用いて、その混合物をセライトを通して濾過した。 その溶液を濃縮し、白色カラスとして表題の化合物３．３３ｇ（７７．６％）を 得た。Ｒｆ＝０．１８（１０％ＭｅＯＨ／メチレンクロライド）。実施例６２ Ｎ−（ブチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル）−Ｌ− プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例７からの樹脂０．５ｇ（０．２５ミリモル保護アミノ基）を反応容器に 置き、次にジクロロメタン５〜１０ｍＬで３回洗浄した。 総時間３５分間で５０％トリフルオロ酢酸（ジクロロメタン中）５〜１０ｍＬ で２回連続処理することにより、Ｂｏｃ保護基を除去して、樹脂を使用準備した 。その樹脂を５％ジイソプロピルエチルアミン（ジメチルホルムアミド中）５〜 １０ｍＬに７分間浸漬して置くことにより酸性度を中性化した後、その樹脂をジ メチルホルムアミド、ジクロロメタン、およびジメチルホルムアミドそれぞれ５ 〜１０ｍＬで２回連続的に洗浄した。 粉々の樹脂をジメチルホルムアミド５ｍＬ中、懸濁させ、次にＮＭＭ（１０１ ｍｇ、１．０ミリモル）、実施例６１の化合物（３９７ｍｇ、１．０ミリモル） 、ＴＢＴＵ（３２１ｍｇ、１．０ミリモル）、ＨＯＢｔ（１３５ｍｇ、０．９ミ リモル）およびＤＭＦ（３ｍＬ）で処理した。室温（２０〜２５℃）で３時間攪 拌後、樹脂を濾過し、ジメチルホルムアミド、ジクロロメタン、メタノールおよ びジエチルエーテル５〜１０ｍＬで３回洗浄し、次に減圧下で乾燥させた。 乾燥した樹脂を反応容器に置き、アニソール（０．５ｍＬ）を添加した。その 反応容器を−２０℃まで冷却後、攪拌しながら気体フッ化水素（１２．０ｍＬ） を反応混合物に滴下させた。−２０℃にて２時間攪拌後、その反応混合物を０℃ まで温め、次に０℃にてフッ化水素を窒素流のもと蒸留して除いた。樹脂をジエ チルエーテル５〜１０ｍＬで２回洗浄し、次に表題の化合物を０．１Ｍ炭酸水素 アンモニウム（５０ｍＬ）および水（２００ｍＬ）で樹脂から抽出した。水性抽 出液を併せ、ジエチルエーテル５〜１０ｍＬで３回抽出し、凍結させ凍結乾燥し て、表題生成物の粗製のセミカルバゾン（１７０ｍｇ）を得た。 粗製のセミカルバゾン（４０ｍｇ、０．０６ミリモル）を反応容器に置き、そ の後酢酸１．４ｍＬ、ＴＨＦ２．９ｍＬ、およびトリフルオロ酢酸（水中）１． ４ｍＬを入れｐＨを１にした。反応混合物の攪拌を始め、エチルアセトアセテー ト０．２ｍＬを添加した。セミカルバゾンが粗製の表題生成物に変換するまで、 １〜８時間毎にエチルアセトアセテートを添加した。その後反応混合物を真空で 濃くして乾燥させた。 粒度１０ミクロン、細孔サイズ３００オングストロームのＣ−１８カラムでの 逆相ＨＰＬＣを用いて、粗製の表題生成物をアセトニトリルの勾配が５％〜４０ ％に及ぶ水−アセトニトリル（双方に０．１％トリフルオロ酢酸含有）勾配で溶 出させて精製した。そのカラム分留を分析用ＨＰＬＣで分析し、純粋な生成物を 含有する分留を溜め、凍結乾燥して、純粋な表題生成物を得た。高速原子衝撃質 量分析により、理論分子量５０４原子質量単位を確証した。実施例６３ Ｎ−（２−ナフチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル） −Ｌ−プロリン−Ｏ−ベンジルエステルの製造 実施例５９の化合物１２．２ｇ（０．０３３モル）、２−ナフタレン−スルホ ニルクロライド６．８ｇ（０．０３モル）、アセトニトリル５００ｍＬおよび乾 燥ＤＭＦ７ｍＬの溶液を０℃まで冷却した。この溶液をピリジン７ｍＬで処理し 、一晩中室温まで温めた。この溶液を水１０００ｍＬに注ぎ、エチルアセテート ３００ｍＬで３回抽出した。併せた有機相を水、１０％ＨＣｌ、飽和炭酸水素ナ トリウム水溶液、およびブライン３００ｍＬで３回洗浄した。その有機相を硫酸 マグネシウムで乾燥させ、減圧下で蒸発させた。これにより、表題の化合物１２ ．７６ｇ（収率８１．２％）を薄黄色固体として得た。Ｒｆ＝０．７２（１０％ ＭｅＯＨ／メチレンクロライド）。実施例６４ Ｎ−（２−ナフチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル） −Ｌ−プロリンの製造 パール・ハイドロゲネーター（Parr Hydrogenator）中、実施例６３の化合物 １２．７６ｇ（０．０２４モル）、メタノール２５０ｍＬおよび１０％炭素上パ ラジウム１．３ｇの溶液を水素の４０psiで加圧した。この混合物を２時間振盪 し、次に微細ガラスフィルターを用いて、その混合物をセライトを通して濾過し た。その溶液を濃縮し、白色固体として表題の化合物９．２２ｇ（８７．３％） を得た。Ｒｆ＝０．１２（１０％ＭｅＯＨ／メチレンクロライド）。実施例６５ Ｎ−（２−ナフチルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエステル） −Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニナルの製造 実施例６１の化合物を実施例６４の化合物（３９７ｍｇ、１．０ミリモル）に 代えたこと以外、実施例６２と同様の方法により表題の化合物を製造した。高速 原子衝撃質量分析により、理論分子量５７４原子質量単位を確証した。実施例６６ Ｎ−（４−メチルフェニルスルホニル）−Ｌ−アスパルチル−（β−メチルエス テル）−Ｌ−プロリン−Ｏ−ベンジルエステルの製造 実施例５９の化合物１２．２ｇ（０．０３３モル）、トシルクロライト５．７ ２ｇ（０．０３モル）、アセトニトリル４５０ｍＬおよび乾燥ＤＭＦ７ｍＬの溶 液を０℃まで冷却した。この溶液をピリジン７ｍＬで処理し、一晩中室温まで温 めた。この溶液を水１０００ｍＬに注ぎ、エチルアセテート３００ｍＬで３回抽 出した。併せた有機相を水、１０％ＨＣｌ、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、お よびブライン３００ｍＬで３回洗浄した。その有機相を硫酸マグネシウムで乾燥 させ、減圧下で蒸発させた。これにより、表題の化合物４．２１ｇ（収率２８． ７％）を薄褐色オイルとして得た。Ｒｆ＝０．９０（１０％ＭｅＯＨ／メチレン クロライド）。実施例６７ Ｎ-（４-メチルフェニルスルホニル）-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル） -Ｌ-プロリンの調製 実施例６６の化合物４.２１ｇ（０.０１２モル）、メタノール２５０ｍＬおよ び炭素上の１０％パラジウム１.３ｇの溶液をパルのヒドロゲネーター（Ｐａｒ ｒ Ｈｙｄｒｏｇｅｎａｔｏｒ）中で４０ｐｓｉの水素で加圧した。この混合物 を２時間振とうし、次に混合物を微粉ガラスフィルターを用いてセライトを通し て濾過した。溶液を濃縮して白色ガラス状の標題化合物３．１７ｇ（９２.４％ ）を得た。Ｒｆ＝０.１１（メタノール／塩化メチレン中１０％）。実施例６８ Ｎ-（４-メチルフェニルスルホニル）-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル） -Ｌ-プロリル-Ｌ-アルギニナルの調製 実施例６２に記載したと同じ方法で、実施例６１の化合物の代わりに実施例６ ７ の化合物（３９７ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ）を用いて標題化合物を調製した。高 速原子衝撃質量分析法により理論分子量５３８ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例６９ Ｎ-Ｂｏｃ-Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）-Ｏ-ベンジルエステルの 合成 ０℃に冷却した、乾燥アセトニトリル（６０ｍＬ）中のＮ-Ｂｏｃ-アスパラギ ン酸-（β-メチルエステル）溶液６.２ｇ（２５ｍｍｏｌｅ）中へ、ＨＯＢｔ（ ５.１ｇ、３３ｍｍｏｌｅ）、次いでＥＤＣ（５.３ｇ、２７.５ｍｍｏｌｅ）お よびベンジルアルコール（２.５８ｍＬ、２５ｍｍｏｌｅ）を加えた。それから 混合物を氷温浴中で１２時間撹拌し、それを室温へ暖めた。粗反応混合物を真空 内に移した後、酢酸エチル（２００ｍＬ）、次いで水（５０ｍＬ）を加えた。次 いで有機相を分離し、飽和重炭酸ナトリウム溶液（５０ｍＬ）、ブライン（５０ ｍＬ）および飽和クエン酸溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、硫酸 マグネシウムで乾燥した。次いで溶液を濾過し、それから濾液を真空内に移して 粗製エステルを得た。生成物を、溶離液として４：１（ヘキサン：酢酸エチル） を用いてフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＳｉＯ₂、１００ｇ）により、 精製し、標題化合物の白色固体３.５ｇ（収率４１％）を得た。Ｒｆ＝０.３２（ ４：１ ヘキサン：酢酸エチル）。実施例７０ Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）-Ｏ-ベンジルエステル塩酸塩の調製 ０℃の乾燥ジオキサン５０ｍＬ中の実施例６９の化合物（３.５ｇ、１０.３ｍｍ ｏｌｅ）溶液中へ４モル濃度の塩酸のジオキサン溶液５０ｍＬを加えた。ＴＬＣ 分析（４：１ ヘキサン：酢酸エチル）で出発物質が検出されなくなるまで、混 合物を０℃で１時間撹拌した。次いで溶液を真空内に移し、標記化合物２.６５ ｇ（収率９４％）を白色固体として得た。Ｒｆ＝０.２（４：１ ヘキサン：酢 酸エチル）。実施例７１ Ｎ-ベンジルスルホニル-Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）-Ｏ-ベンジ ルエステルの調製 ０℃の乾燥アセトニトリル（５０ｍＬ）中の実施例７０の化合物（２.６ｇ、 ９.５ｍｍｏｌｅ）の溶液中へ、ベンジルスルホニルクロライド（１.８ｇ、９. ５ｍｍｏｌｅ）、次いでピリジン（２.４ｍＬ、３０.０ｍｍｏｌｅ）を加えた。 混合物を終夜（１２時間）室温に温めておいた。それから混合物を真空内に移し て、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を加えた。次いで有機相を飽和重炭酸ナトリウム （５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）および飽和クエン酸（５０ｍＬ）で洗浄し た。有機相を乾燥（硫酸マグネシウム）、濾過して真空内に移して粗製物質を得 た。化合物を、溶離 液として７：３ ヘキサン：酢酸エチルを用いてフラッシュクロマトグラフィー （ＳｉＯ₂、１００ｇ）により精製し、標題化合物２.８７ｇ（収率７８％）を油 状物として得た。Ｒｆ＝０.３９（１：１ ヘキサン：酢酸エチル）。実施例７１ Ｎ-ベンジルスルホニル-Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）の調製 実施例７０の化合物（２.８ｇ、７.３ｍｍｏｌｅ）のメタノール（６０ｍＬ） 溶液に、０.５ｇの１０％パラジウム／炭素を加え、混合物を１気圧、２５℃で １２時間水素化した。次いで混合物を濾過し、真空内に移して標題化合物の透明 粘稠な油１.９３ｇ（収率８８％）を得た。Ｒｆ＝０.２５（９：１ ＣＨＣｌ₃ ：ＭｅＯＨ）。実施例７２ Ｎ-フェニルスルホニル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ-プロピル- Ｌ-アルギニナルの調製 実施例７からの樹脂（０.２５ｍｍｏｌｅ、アミノ基保護）の０.５ｇを反応容 器に入れ、次いで５〜１０ｍＬのジクロロメタンで３回洗浄した。 樹脂は５０％トリフルオロ酢酸（ジクロロメタン溶液）の５〜１０ｍＬで２回 連続して全体で３５分間処理してＢｏｃ保護基を除去して使用できる状態にした 。樹脂を５％ジイソプロピルエチルアミン（ジメチルホルムアミド溶液）の５〜 １０ｍＬ中に７分間浸けて酸性を中和した後、樹脂を、５〜１０ｍＬのジメチル ホルムアミドで２回、ジクロロメタンおよびジメチルホルムアミドで連続して洗 浄した。塊の壊れた樹脂を５ｍＬのジメチルホルムアミド中に懸濁し、次いでＮ ＭＭ（１０１ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ）、Ｎ-Ｂｏｃ-Ｌ-プロリン（２１５ｍｇ、 １.０ｍｍｏｌｅ）、ＢＯＰ（４４３ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ）、ＨＯＢｔ（１３ ５ｍｇ、０.９ｍｍｏｌｅ）およびＤＭＦ（５ｍＬ）で処理した。室温（２０〜 ２５℃）で２時間撹拌後、樹脂を濾過して除き、ジメチルホルムアミドの５〜１ ０ｍＬで３回および続いてジクロロメタンで洗浄した。 樹脂（Ｎ-Ｂｏｃ-Ｌ-プロリンを結合している）を、５０％トリフルオロ酢酸 （ジクロロメタン溶液）の５〜１０ｍＬで２回、全３５分間連続して処理するこ とにより、（結合したＢｏｃ-Ｌ-プロリンから）Ｂｏｃ保護基をはずしてすぐに 使用できる状態にした。樹脂を５％ジイソプロピルエチルアミン（ジメチルホル ムアミド溶液）の５〜１０ｍＬ中に７分間浸けて酸性を中和した後、樹脂を、５ 〜１０ｍＬのジメチルホルムアミドで２回、ジクロロメタンおよびジメチルホル ムアミドで連続して洗浄した。塊の壊れた樹脂を５ｍＬのジメチルホルムアミド 中に懸濁し、次いでＮＭＭ（１０１ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ）、実施例７１の化 合物（２８４ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ）、ＢＯＰ（４４３ｍｇ、１.０ｍｍｏｌｅ ）、ＨＯＢｔ（１３５ｍｇ、０.９ｍｍｏｌｅ）およびＤＭＦ（５−１０ｍＬ） で処理した。室温（２０〜２５℃）で２時間撹拌後、樹脂を濾過して除き、ジメ チルホルムアミドの５〜１０ｍＬで３回および引き続きジクロロメタンで洗浄し た。 純粋な標題化合物を、セミカルバゾンとしての除去、粗製の標題化合物への変 換および実施例６２に記載した方法による精製によって樹脂から回収した。高速 原子 衝撃質量分析法により理論分子量５３８ａ.ｍ.ｕ.を確認した。実施例７３ Ｎ-シクロヘキシルスルフェミル-Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）-Ｏ -ベンジルエステルの調製 シクロヘキシルアミンスルファミン酸ナトリウム塩（アルドリッチ（Ａｌｄｒ ｉｃｈ）社製、２.０１ｇ、１０.０ｍｍｏｌｅ）に、６ｍＬのオキシ塩化リンを 加える。次に懸濁液を４時間１００℃に加熱する。次いで混合物を室温に冷却し 、真空内でオキシ塩化リンを取り除いて固体を得る。それからこの固体を乾燥ア セトニトリル（３５ｍＬ）中に懸濁し、混合物を０℃に冷却する。この混合物に 実施例７０のアスパラギン酸-（β-メチルエステル）ベンジルエステル塩酸塩（ ２.７３ｇ、１０.０ｍｍｏｌｅ）を、次いでピリジン（２.６ｍＬ、３０.０ｍｍ ｏｌｅ）を加える。混合物を氷温浴中で１０時間にかけて室温まで温める。アセ トニトリルを真空内で除き、残留物質を酢酸エチル中に取り出す。有機相を飽和 重炭酸ナトリウム水溶液、ブラインおよび１モル濃度の塩酸水溶液で洗浄する。 有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過して、真空内に移して、標題化合物を 得る。実施例７４ Ｎ-シクロヘキシルスルファミル-Ｌ-アスパラギン酸-（β-メチルエステル）の 調製 実施例７３の化合物を１００ｍＬのテトラヒドロフラン／メタノール１：１混 合物に溶解し、０.５ｇの１０％パラジウム／炭素を加える。混合物を１気圧の 水素で室温で４時間水素化する。次に混合物を濾過し、真空内に移して標題化合 物を得る。実施例７５ Ｎ-シクロヘキシルスルファミル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ- プロリン-Ｏ-ベンジルエステルの調製 実施例７４の化合物（２.４６ｇ、８.０ｍｍｏｌｅ）の乾燥ジメチルホルムア ミド（１０ｍＬ）溶液中へ、ＥＤＣ（８.０ｍｍｏｌｅ、１.５３ｇ）およびＨＯ Ｂｔ（１０ｍｍｏｌｅ、１.６２ｇ）を全部一時に加える。この混合物を０℃で １０分間撹拌し、それからＬ-プロリン-（Ｏ-ベンジルエステル）塩酸塩（８ｍ ｍｏｌｅ、１.９３ｇ）を加え、更にＮＭＭ（２４ｍｍｏｌｅ、２.６ｍＬ）を加 える。反応は氷温浴中で１０時間かけて室温になるように行う。それから反応混 合物を酢酸エチルで希釈し、重炭酸ナトリウムの飽和水溶液、ブラインおよび１ モル濃度の塩酸水溶液で洗浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し て真空内に移し、標題の化合物を生成する。実施例７６ Ｎ-シクロヘキシルスルファミル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ- プロリンの調製 実施例７５の化合物（２.９７ｇ、６.０ｍｍｏｌｅ）のメタノール（６０ｍＬ ）溶液に、１０％パラジウム／炭素を加え、混合物を大気圧下で１２時間水素化 する。次いで混合物をセライトの充填物を通して濾過し、溶媒を真空中で除去し て標題の化合物を得る。実施例７７ Ｎ-シクロヘキシルスルファミル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ- プロリル-Ｌ-アルギニナルの調製 実施例６２に記載したと同じ方法で、実施例６１の化合物を実施例７６の化合 物（１.０ｍｍｏｌｅ）に代えることにより標題の化合物を得る。実施例７８ Ｎ-メトキシスルホニル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ-プロリン- Ｏ-ベンジルエステルの調製 硫酸メチルのナトリウム塩（アルドリッチ、１.３４ｇ、１０.０ｍｍｏｌｅ） に、１０ｍＬのオキシ塩化リンを加え、混合物を１００℃に３時間加熱する。反 応を室温に冷却し、真空中でオキシ塩化リンを除いて、白色の残留物を残す。次 いで残留物を乾燥アセトニトリル（２５ｍＬ）と混合し、氷浴中で０℃に冷却す る。次に実施例７０のアスパラギン酸-（β-メチルエステル）ベンジルエステル 塩酸塩（３.７ｇ、１０ｍｍｏｌｅ）を全量一度に加え、次いでピリジン（２.６ ｍＬ、３０ｍｍｏｌｅ）を加える。反応を氷浴中で１０時間かけて室温まで温め る。真空にしてアセトニトリルを除き、残留物を酢酸エチルで希釈する。有機相 を重炭酸ナトリウムの飽和水溶液、ブラインおよび１モル濃度の塩酸水溶液で洗 浄する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、溶媒を真空中で除去して 標題の化合物を得る。実施例７９ Ｎ-メトキシスルホニル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ-プロリン の調製 実施例７８の化合物を１５０ｍＬのメタノールに溶解し、０.５ｇの１０％パ ラジウム／炭素を加える。次に混合物を大気圧下で４時間水素化する。混合物を 濾過し、溶媒を真空にして除き、標題の化合物を得る。実施例８０ Ｎ-メトキシスルホニル-Ｌ-アスパルチル-（β-メチルエステル）-Ｌ-プロリル- Ｌ-アルギニナルの調製 標題の化合物を、実施例７２に記載と同じ方法で、実施例７１の化合物の代わ りに実施例７９の化合物（１.０ｍｍｏｌｅ）を用いて調製した。実施例Ａ 選定した精製凝固酵素のインビトロでの抑制性 トロンビン、第Ｘａ因子およびプラスミン触媒活性のインヒビターとして作用 する本発明の化合物の能力は、精製ヒト酵素を用いて、酵素活性を５０％抑制す る濃度（ＩＣ₅₀）を決定することにより評価した。 ずべてのアッセイに使用した緩衝剤はＨＢＳＡ（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ ７.５、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、０.１％子牛血清アルブミン）であった。Ｉ Ｃ₅₀決定用のアッセイはコーニング・ミクロタイター・プレート（Ｃｏｒｎｉｎ ｇ ｍｉｃｒｏｔｉｔｅｒ ｐｌａｔｅ）の適当なウエル中で、５０μＬのＨＢ ＳＡ、ＨＢＳＡ中に希釈した特定濃度（広い濃度範囲をカバーしている）の試験 化合物（またはＶ₀（無抑制速度）測定用のＨＢＳＡ単独）の５０μＬ、および ＨＢＳＡ中に希釈した酵素の５０μＬを組み合わせて行った。室温での３０分の インキュベーションに続いて、下記で特定した濃度の基質５０μＬをウエルに加 えて、最終全体積を ２００μＬにした。クロモゲンによる基質加水分解の初期の速度は、サーモマッ クス（Ｔｈｅｒｍｏ Ｍａｘ；登録商標）キネティック・マイクロプレート・リ ーダー（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｍｉｃｒｏｐｌａｔｅ Ｒｅａｄｅｒ）を用いて、加 えた基質の５％までの量が用いられる５分間の、４０５ｎｍの吸収の変化により 測定した。初期加水分解速度を５０％低下する添加インヒビターの濃度をＩＣ₅₀ として定義した。トロンビンアッセイ 色原体基質ペファクローム（Ｐｅｆａｃｈｒｏｍｅ）ｔ−ＰＡ（ペンタファー ム社（Ｐｅｎｔａｐｈａｒｍ Ｌｔｄ．）から入手したＣＨ₃ＳＯ₂-Ｄ-ヘキサヒ ドロチロシン-グリシル-Ｌ-アルギニン-ｐ-ニトロアニリン）を用いてトロンビ ン触媒活性を測定した。基質は脱イオン水に溶解し、アッセイを行うに先立って 、最終濃度が３００μＭ（Ｋｍの約１０倍）になるようにＨＢＳＡ中に希釈した 。精製ヒトαトロンビンはエンザイム・リサーチ・ラボラトリーズ社から得た。 酵素をアッセイ開始に先立ってＨＢＳＡ中に希釈して最終濃度を０.２５ｎＭに した第Ｘａ因子アッセイ 第Ｘａ因子触媒活性は、カビ・ダイアゴノスティカ（Ｋａｂｉ Ｄｉａｇｏｎ ｏｓｔｉｃａ）社から入手した基質、Ｓ２７６５（Ｎ-α-ベンジルオキシカルボ ニル-Ｄ-アルギニニル-Ｌ-グリシル-Ｌ-アルギニン-ｐ-ニトロアニリド-ジヒド ロクロライド）を用いて測定した。基質を脱イオン水に溶解し、アッセイを行う に先立って、最終濃度が２５０μＭ（Ｋｍの約５倍）となるようにＨＢＳＡ中に 希釈した。ヒト第Ｘａ因子をエンザイム・リサーチ・ラボラトリーズから入手し た精製ヒト第Ｘ因子から、ボック、ピー・イー（Ｂｏｃｋ，Ｐ.Ｅ.）他著、アー キブズ・オブ・バイオケミカル・バイオフィジオロジー（Ａｒｃｈｉｖｅｓ ｏ ｆ Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．）、第２７３巻、第３７５頁（１９８９ 年）に記載されている方法により調製した。酵素はアッセイを実施するの先立っ て、最終濃度が０.５ｎＭとなるようにＨＢＳＡ中へ希釈した。プラスミンアッセイ プラスミン触媒活性を、カビ・ダイアゴノスチカ社から入手した色原体基質Ｓ -２２５１［Ｄ-ヴァリル-Ｌ-ロイシル-Ｌ-リジン-ｐ-ニトロアニリドジヒドロク ロライド］を用いて測定した。基質を脱イオン水に溶解し、アッセイを行うに先 立って、最終濃度が３００μＭ（Ｋｍの約５倍）となるようにＨＢＳＡ中に希釈 した。精製ヒトプラスミンをエンザイム・リサーチ・ラボラトリーズ・インコー ポレイテドから入手した。酵素は、アッセイを行うに先立って、最終濃度が１. ０ｎＭとなるようにＨＢＳＡ中へ希釈した。 下の表１には、選定した試験化合物のＩＣ₅₀値を、対照化合物である、Ｂｏｃ -（Ｄ-Ｐｈｅ）-Ｐｒｏ-Ａｒｇ-ａｌと比較して記載してある。 このデータは、これらの群のインヒビター類が、血液凝固過程に含まれる特定 の酵素類のインヒビターとして使用できることを示している。実施例Ｂ 血栓形成の実験モデル 実施例１０の化合物、ＨＣＡ-Ａｓｐ-Ｐｒｏ-Ａｒg-ａｌの抗血栓形成特性を 、以下のＦｅＣｌ₃誘発による血小板依存性動脈血栓形成のラットモデルである 急性動脈血栓形成用に確立されている実験モデルを用いて評価した。 このモデルは直接トロンビン阻害剤のごとき強い抗血栓形成剤を評価するのに 用いられてきた、詳しく解析されている血小板依存性の動脈血栓形成の特有のモ デルである。参照：クルツ、ケー・ディー（Ｋｕｒｚ，Ｋ.Ｄ.）、メイン、ビー ・ダブリュ（Ｍａｉｎ，Ｂ.Ｗ.）およびサンダスキー、ジー・イー（Ｓａｎｄｕ ｓｋｙ，Ｇ.Ｅ.）著、トロンボシス・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ.，）、 第６０巻、第２６９〜２８０頁（１９９０年）。このモデルにおける血栓の発現 は比較的ヘパリン感受性が少なく、このことは当モデルが、バルーン血管形成術 、または酵素的血栓溶解によって再開通させた冠血管内に新たに認められる血栓 形成に臨床的により近いモデルであることを示す。本モデルにおいては、血小板 が豊富な閉塞性血栓を、濾紙に含浸させた新鮮なＦｅＣｌ₃溶液で処理したラッ ト頸動脈のセグメントに生成させる。ＦｅＣｌ₃は動脈の処置されたセグメント 内に拡散し、血栓形成の原因となる内皮細胞の脱落が生じる。ＦｅＣｌ₃投与の 後の閉塞性血栓形成に及ぼす試験化合物の効果を、超音波フロートメトリーによ って監視し、これを一次データとして用いた。フロートメトリーの使用は、凝血 塊の生成を温度により追跡するオリジナル方法の改良法である。クルツ、ケー・ ディー（Ｋｕｒｚ，Ｋ.Ｄ.）、メイン、ビー・ダブリュ（Ｍａｉｎ，Ｂ.Ｗ.）お よびサンダスキー、ジー・イー（Ｓａｎｄｕｓｋｙ，Ｇ.Ｅ.）著、トロンボシス ・リサーチ（Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ.，）、第６０巻、第２６９〜２８０頁（１ ９９０年）。 オスのハーラン・スプラグー・ドゥレーラット（４２０−４５０ｇ）を少なく とも実験の７２時間前から環境に慣らした。動物は手術の１２時間前から絶食し たが、水は自由に飲めるようにした。動物は、ネンブタールで麻酔し、血圧の測 定、薬物および麻酔の注入のためにカテーテルを埋め込んで準備した。頸部の中 心を切開した後、先を鈍にした器具を用いた切開および伸展操作によって頸動脈 鞘から２ｃｍの血管を分離、左頸動脈を確保した。分離した血管の基部側の末端 および末梢側の末端の下部へ絹糸を挿入し、基部側末端の周囲の超音波フロー・ プローブ（トランソニック）の設置のためのクリアランスとした。プローブを定 常アームに固定した。 手術の後、動物をコントロール（生理的食塩水の注入）および試験化合物（実 施例８の化合物）投与群、それぞれ１群の１用量につき少なくとも６匹となるよ うにランダム化した。フロー・プローブを取り付けた後に被検化合物を投与し、 血栓形成剌激を与える３０分前から安定化させた。ｔ＝０において、直径３ｍｍ の濾紙（ワットマン＃３）を１０ｍｌの新たに調製したＦｅＣｌ₃の３５％水溶 液に浸したものを、分離させた頸動脈の、フロー・プローブの反対側の頸動脈セ グメントへ適応した。血圧、血流、心拍数および呼吸を６０分間モニターした。 血管閉塞の発生（血流が０となった点として定義した）を一次データとして記 録した。６０分間の観察期間の後、フロー・プローブを除き、過剰の流体を清浄 した。末梢側および中枢側の糸を縛り、動脈クランプを中枢および末梢側の末端 からかなり離れた部位に止めた。分離していたセグメントを切り出し、濾紙上で 吸収させて乾燥し、重量を測定した。凝血塊を除いた後、セグメントの重量を再 計量し、その差を全凝血塊重量とした。試験の後、動物を安楽死させた。 実施例１０の化合物の抗血栓形成剤としての、本インビボモデルにおける有効 性を、血管閉塞の発生の減少および凝血塊重量の縮小にて評価した。結果を表II に示す。 これらのインビボのデータは明らかに実験的血栓形成の十分確立したモデルに おける実施例１０の化合物の抗血栓形成効果を示している。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＣＡ，ＪＰ (72)発明者 ピアソン、ダニエル・アンドルー アメリカ合衆国03110ニュー・ハンプシャ ー、ベッドフォード、ビールズ・ロード 149番 (72)発明者 アベルマン、マシュー・マーク アメリカ合衆国92075カリフォルニア、ソ ラナ・ビーチ、ナンバー・3312、スティー ブンス・アベニュー873番

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 以下の式： ［式中、（ａ）Ｒ₁は以下 （１） Ｘが-Ｃ（＝Ｏ）-もしくは-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-の場合には約５から約１ ０炭素原子のアルキル基、またはＸが-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂）-もしくは- Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-の場合には１から約１０炭素原子のアルキル基、 （２） 約５から約８炭素原子の環状アルキル基で置換された１から約３炭素 原子のアルキル基、 （３） 随意に約５から約８炭素原子の環状アルキル基で置換された約３から 約６炭素原子のアルケニル基、 （４） 随意にＹ₁でモノ置換またはＹ₁とＹ₂でジ置換された約６から約１４ 炭素原子のアリール基、 （５） アリール環上が随意にＹ₁でモノ置換またはＹ₁とＹ₂でジ置換された 約６から約１５炭素原子のアラルキル基、 （６） アリール環上が随意にＹ₁でモノ置換または随意にＹ₁およびＹ₂でジ 置換された約８から約１５炭素原子のアラルケニル基、 （７） １から約１２炭素原子のパーフルオロアルキル基、 （８） 約６から約１４炭素原子のパーフルオロアリール基、 （９） 約４から約８炭素原子のトリメチルシリルアルキル基、 からなる群から選択される （Ｙ₁およびＹ₂は独立して、ブロモ、クロロ、フルオロ、Ｚ₁-、ＨＯ-、Ｚ₁Ｏ- 、ＮＨ₂-、Ｚ₁-ＮＨ-、（Ｚ₁，Ｚ₂）Ｎ-、Ｚ₁-Ｃ（Ｏ）-ＮＨ-、ＨＳ-、Ｚ₁-Ｓ- 、Ｚ₁-Ｓ（Ｏ）-、Ｚ₁Ｓ（Ｏ₂）-、ＨＯ-Ｓ（Ｏ₂）-、Ｚ₁-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-、ＮＨ₂ -Ｓ（Ｏ₂）-およびＺ₁-ＮＨ-Ｓ（Ｏ₂）-からなる群から選択される、 （Ｚ₁およびＺ₂は独立してトリフルオロメチル、ペンタフルオロエチル、１から 約１２炭素原子のアルキル基、約６から約１４炭素原子のアリール基および約６ から約１５炭素原子のアラルキル基からなる群から選択される））。； （ｂ） Ｘは-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｏ-Ｃ（＝Ｏ）-、-Ｓ（Ｏ₂）-、-ＮＨＳ（Ｏ₂） -または-Ｏ-Ｓ（Ｏ₂）-である。； （ｃ） ｍは１または２である。； （ｄ） Ｒ₂はＣＯ₂Ｈ、-ＣＯ₂Ｒ’または （Ｒ’は１から約４炭素原子のアルキル基、約６から約１４炭素原子のアリール 基またはは約６から約１４炭素原子のアラルキル基である）である。； （ｅ） Ｒ₃は-（ＣＨ₂）₃-ＮＨ-Ｃ（＝ＮＨ）-ＮＨ₂；または薬学的に許容さ れるその塩である。］ で示される化合物。 ２． Ｘが-Ｃ（＝Ｏ）-である請求項１の化合物。 ３． Ｒ₁が約５から約１０炭素原子のアルキル基；約５から約８炭素原子の 環状アルキル基で置換された１から約３炭素原子のアルキル基；所望によりＹ₁ でモノ置換された炭素原子約６から約１４のアリール基；またはアリール環上が 随意にＹ₁でモノ置換された約６から約１５炭素原子のアラルキル基である、請 求項２の化合物。 ４． Ｒ₁が３-メチルブチル、４-ヘプチル、２-シクロヘキシルエチル、２- フェニルエチルおよび１-ナフチルメチルからなる群から選択される、請求項３ の化合物。 ５． Ｒ₂が-ＣＯ₂Ｈである請求項４の化合物。 ６． 以下の化合物： からなる群から選択される請求項５の化合物。 ７． 下式で示される請求項６の化合物。 ８． Ｒ₂が-ＣＯ₂ＣＨ₃、-ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₃または-ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃で ある請求項４の化合物。 ９． Ｒ₂が-ＣＯ₂ＣＨ₃である請求項８の化合物。 １０． 以下の化合物： からなる群から選択される請求項９の化合物。 １１． 下式で示される請求項１０の化合物。 １３． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項１２の化合物。 １３． 下式で示される請求項１２の化合物。 １４． 下式で示される請求項１３の化合物。 １５． 下式で示される請求項１３の化合物。 １６． Ｘが-ＳＯ₂-である、請求項１の化合物。 １７． Ｒ₁が約５から約１０炭素原子のアルキル基；約５から約８炭素原子 の環状アルキル基で置換された１から約３炭素原子のアルキル基；随意にＹ₁で モノ置換された約６から約１４炭素原子のアリール基；及びアリール環上が随意 にＹ₁でモノ置換された約６から約１５炭素原子のアラルキル基； からなる群から選択される、請求項１６の化合物。 １８． Ｒ₂が-ＣＯ₂Ｈである請求項１７の化合物。 １９． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項１８の化合物。 ２０． Ｒ₂が-ＣＯ₂ＣＨ₃、-ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₃または-ＣＯ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₃ である、請求項１７の化合物。 ２１． Ｒ₂が-ＣＯ₂ＣＨ₃である、請求項２０の化合物。 ２２． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項２１の化合物。 ２３． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項２２記載の化合物。 ２５． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項２４の化合物。 ２６． 以下の化合物： からなる群から選択される、請求項１の化合物。 ２７． 式： ＡｃＲ-Ａ₁-Ｌ-Ｐｒｏ-Ａｒｇ-ａｌ （式中、ＡｃＲは疎水性アシル基または疎水性スルホニル基であり、Ａ₁はグル タミン酸（Ｇｌｕ）もしくはアスパラギン酸（Ａｓｐ）、またはＧｌｕもしくは Ａｓｐの等価物を示す） で示され、トロンビンおよび／または第Ｘａ因子に対するＩＣ₅₀が約２００ｎＭ 以下であり、プラスミンに対するＩＣ₅₀が、トロンビンまたは第Ｘａ因子に対す るＩＣ₅₀値のうちの低い方より高い化合物。 ２８． 治療上許容される担体と請求項１、２、３、４、５、６、７、８、９ 、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１ 、２２、２３、２４、２５、２６または２７の化合物の治療有効量を含有する、 血栓生成異常に特徴付けられる、哺乳類の症状を予防または治療するための医薬 組成物。 ２９． 血栓生成異常に特徴付けられる症状の哺乳類に請求項１、２、３、４ 、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１ ８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６または２７の化合物の治 療効果量を投与することを含む、血栓生成異常に特徴付けられる哺乳類の症状の 予防または治療法。 ３０． 血栓生成異常に特徴付けられる症状の哺乳類に請求項２８の医薬組成 物を投与することを含む、血栓生成異常に特徴付けられる哺乳類の症状の予防ま たは治療法。