JPH08511518A - 三機能性の抗血栓及び抗血小板ペプチド類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ［式中式中Ｘは水素、1-6個の炭素原子の１個又は２個のアルキル基、2-10個の炭素原子の１個又は２個のアシル基、カルボベンジロキシ、H₂NC（=NH）-、又はt-ブチロキシカルボニル基から選ばれるアミノ末端残基である。Ａは、式 のペプチド類似体であって、ここでA₁は（D）Phe、（D）Phg、（D）1-Tiq、（D）3-Tiq、N-Me-（D）Phe、（D）Cha、（D）Chg、（D）Nag、又は（D）Thgであり；A₂はPro、Pip、又はAztであり；A₃はArg、Lys、Orn、又はhArgである。Ｂは式 又は のペプチド類似体であって、ここでB₁はGly、Ala、（D）Ala、Val、（D）Val、又はGly-Gly；B₂はGly、Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Gly、又は任意の（D）アミノ酸；B₂’は、Arg-Ile-Pro又はLys-Ile-Pro；B₂はArg、Arg、N-Me-Arg、又はLys；B₄はNle、Phe、Met、又はChaである。Ｃは式 のペプチド類似体であって、ここでC₁はPhe、pClPhe、pNo₂Phe、Tha、Npa、Tyr又はTrp；C₂はGlu又はAsp；C₃は任意のアミノ酸；C₄はIle、Val、Leu、又はPhe；C₅はPro、Hyp、Sar、NMePgl、又はD-Ala；C₆は任意のアミノ酸；C₇は任意のアミノ酸；C₈はTyr、Glu、Pro、Ala-Cha、Tyr-Cha、Tyr-Leu、及びAla-Tyr；C₉は結合又はGlu、（D）Glu、Gln，Pro、Ler-Gln、Asp-Glu、又はLeu-Proである。また、ＹはOH、C₁-C₆アルコキシ、アミノ、モノ-又はジ-（C₁-C₄）アルキル置換アミノ、又はベンジルアミノから選ばれるカルボキシ末端残基である。］の化合物類、又は製薬上受入れられるその塩類は、有用な抗凝固剤である。本発明はまた、急性の血管形成手術後の閉塞、体外循環で誘発される血球減少症、発達中の心筋梗寒、及び繊維素溶解療法後の閉塞を処置する、上記化合物類の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 発明の名称 三機能性の抗血栓及び抗血小板ペプチド類 発明の分野 本発明は、抗凝固剤及び抗血小板剤として有用な、新規なペプチドに関する。 発明の背景 抗凝固剤は、薬理学的処理、例えば急性の深部静脈血栓、肺塞栓症、急性の四 肢の動脈塞栓、心筋梗塞、及び伝染性静脈内凝固の治療に有用である。抗凝固剤 の予防的な投与は、リウマチ性又は動脈硬化性の心臓病を有する患者の塞栓症の 再発の防止及び手術によるある種の血栓塞栓合併症の防止をすると信じられてい る。抗凝固剤の投与は又冠状動脈及び脳血管病の治療に有用であることが示され ている。動脈血栓、特に心臓筋肉及び脳に供給している動脈中の動脈血栓は死亡 の主要な原因である。 血小板で媒介される動脈血栓は、前節にあげた症状にとって主要な病原メカニ ズムである。その結果、血小板凝集とトロンビンの抑制を組合せると、抗血栓剤 の設計への有用な手だてが示唆される。インテグリン群の一員である活性化され た血小板糖タンバク質（GP）のIIb/IIIa受容体への、Arg-Gly-Asp（RGD）配列を 経由するフィブリノーケンの結合は、種々の作用剤によって誘発される血小板凝 集の必須段階である。エフ・エイ・マーゲリ ー（F．A．Marguerie）ら、J．Biol．Chem．254巻5357-5363頁（1979年）；ディ ー・コーリン（D．Collen）ら、「心臓血管病での血栓崩壊」［ディー・ジュリ アンら編、マーセル・テッカー社、ニューヨーク州（1989年）45-67頁］。この 結合は、線状及び環状のRGD含有合成ペプチド類によって阻止される。イー・エ フ・プロウ（E．F．Plow）ら、Prog．Hemostas．Thromb．９巻117-156頁（1989 年）；イー・エフ・プロウら、Proc．Natl．Acad．Sci.，USA 82巻8057-8061頁 （1985年）。 単一ハイブリッドペプチド中でトロンビン抑制と血小板糖タンパク質（GP）の IIb/IIIa（インテグリン）受容体遮断とを組合せる戦略が、抗凝固活性と抗血小 板活性の双方を生ずることを、最近の研究は示した。エフ・シー・チャーチ（F ．C．Church）ら、J．Biol．Chem．266巻11975-11979頁（1991年）。更に、触媒 位置抑制剤と陰イオン結合性のエキソ位置配列抑制剤成分とを組合せたペプチド トロンビン抑制剤が最近報告された。ジェイ・エム・マラカノア（J．M．Maraga nore）ら、Biochemistry 29巻7095-7101頁（1990頁）及びジェイ・ディメイオ（ J．DiMaio）ら、J．Biol．Chem．265巻21698-21703頁（1990年）。これらのペプ チド類の活性を決定する重要な要因は、トロンビン活性位置とエキソ位置に結合 する２成分を適当な長さのスペーサーによって分離することであった。これらの 研究は、触媒位置抑制剤と陰イオン結合性 のエキソ位置配列との間で、最小限４個のアミノ酸残基を含有するペプチド類が 、最大限のトロンビン抑制にとって必要であることを示した。これらの報告は、 架橋研究からの結果を支持しており、この架橋研究は、トロンビン上の陰イオン 結合性エキソ位置に結合されるヒルジン類似体のNH₂末端とトロンビンの触媒ポ ケット内のSer-195のヒドロキシル末端との間の距離が約18-20オングストローム であることを示している。ビー・ファリー（B．Furie）ら、J．Biol．Chem．257 巻3875-3882頁（1982年）及びダブリュー・ボード（W．Bode）ら、EMBO J．８巻 3467-3475頁（1989年）。 1992年６月25日公開された特許協力条約出願公開番号W０92/10575は、血小板 活性とトロンビン双方の三機能抑制剤を特定的に明らかにしている。これらの抑 制剤は、糖タンバク質IIb/IIIa抑制部分とトロンビン抑制部分からなり、後者は トロンビン活性位置に結合し、これを抑制する触媒部位特異的部分からなってい る。触媒部位特異的部分は、計算長さ約18-42オングストロームのバックボーン 鎖をもったリンカー部分を経て、陰イオン結合性エキソ位置に関連する部分に結 合される。 トロンビンの触媒位置抑制剤（例えば(D)Phe-Pro-Arg又はその類似体）を、環 状のArg-Gly-Asp-X「架橋」配列を経て、陰イオン結合性のエキソ位置関連部分 （ヒルジン_55-65類似体）とカップリングさせる時に、トロン ビンの触媒性及び陰イオン結合性エキソ位置抑制と血小板糖タンパク質（GP）II b/IIIa受容体抑制とを結びつけた三機能ペプチドが得られることを、出願人らは 発見した。さらに、トロンビンの触媒位置抑制剤をヒルジン_55-65類似体に結び つけるジスルフィド結合を提供するシステイン残基が（D）配置にあるとき、ペ プチドによる血小板凝集と抗凝固活性の抑制に有意の増加が認められる。また、 環状のArg-Gly-Asp-X「架橋」配列において、フェニルアラニンの代わりにノル ロイシンを使用する時に、いっそうの増加が認められる。この新しい化合物類は 、二重の作用方式と効力増加のために、有用な補助的療法を提供するものとなろ う。 発明のまとめ 式 X-A-B-C-Y （1） ［式中Ｘは水素、1-6個の炭素原子の１個又は２個のアルキル基、2-10個の炭素 原子の１個又は２個のアシル基、カルボベンジロキシ、H₂NC (=NH)-、又はt-ブ チロキシカルボニル基から選ばれるアミノ末端残基である。 Ａは、式 A₁-A₂-A₃ （2） のペプチド類似体であって、ここでA₁は(D)Phe、(D)Phg、(D)1-Tiq、(D)3-Tiq、 N-Me-(D)Phe、(D)Cha、(D)Chg、(D)Nag、又は(D)Thgであり； A₂はPro、Pip、又はAztであり； A₃はArg、Lys、Orn、又はhArgである。 Ｂは式 又は のペプチド類似体であって、ここで B₁は（Gly、Ala、(D)Ala，Val、(D)Val又はGly-Gly； B₂はGly、Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Gly、又は任意の（D）アミノ 酸； B₂’は、Arg-Ile-Pro又はLys-Ile-Pro； B₃はArg、hArg、N-Me-Arg、又はLys； B₄はNle、Phe、Met又はChaである。 Ｃは式 ASP-C₁-C₂-C₃-C₄-C₅-C₆-C₇-C₈-C₉ （5） のペプチド類似体であって、ここで C₁はPhe、pClPhe、pNO₂Phe、Tha、Npa、Tyr又はTrp； C₂はGlu又はAsp； C₃は任意のアミノ酸； C₄はIle、Val、Leu、又はPhe； C₅はPro、Hyp、Sar、NMePgl、又はD-Ala； C₆は任意のアミノ酸； C₇は任意のアミノ酸； C₈はTyr、Glu、Pro、Ala-Cha、Tyr-Cha、Tyr-Leu、及びAla-Tyr； C₉は結合又はGlu、(D)Glu、Gln、Pro、Leu-Gln、Asp-Glu、又はLeu-Proである 。 また、ＹはOH、C₁-C₆アルコキシ、アミノ、モノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル 置換アミノ、又はベンジルアミノから選ばれるカルボキシ末端残基である。］の 化合物、又は製薬上受入れられるその塩は、有用な抗凝固剤である。本発明はま た、血管形成手術後の急性閉塞、体外循環で誘発される血球減少症、発達途上の 心筋梗塞、及び繊（線）維素溶解療法後の閉塞を処置する、上記化合物類の用途 にも関している。 図面の簡単な説明 図１は棒グラフ形式で、ラットでのFeCl₃動脈閉塞時間に対するペプチド２の 影響を示す。対照は、陰影なしの棒で表わされており、ペプチド２は陰影つきの 棒で表示されている。この図で、ｐは確率を表し、ｎは試験動物数を表わしてい る。 図２は棒グラフ形式で、ラットでのFeCl₃動脈閉塞時間に対するペプチド2d（ 本発明でない）の影響を示す。対照は、陰影なしの棒で表わされており、ペプチ ド２は陰影つきの棒で表示されている。この図で、ｐは確率を表わすが、ｎは試 験動物数を表わしている。 図３は、トロンビン増幅された全血凝集に対するペプチド１の影響を示す。（ ▲）はヒト血液試料を表わす。（+）はラット血液試料を表わす。 図４は、麻酔をかけた犬でのトロンビン時間に対するペプチド１注入の影響を 示す。（▲）は５nmol/kg/分の は注入期間を表わす。 図５は、麻酔犬でのaPTTに対するペプチド１の影響を示す。（▲）は５nmol/k g/分の速度を表わす。（＋）は 表わす。 図６は、犬でのトロンビン‐血小板凝集に対するペプチド１の影響を示す。（ ▲）は５nmol/kg/分の速度を表 は注入期間を表わす。 図７は、麻酔犬での出血時間に対するペプチド１の影響を示す。（▲）は５nm ol/kg/分の速度を表わす。（＋） を表わす。 図８は、麻酔犬での血小板計数値に対するペプチド１注入の影響を示す。（▲ ）は５nmol/kg/分の速度を表わ は注入期間を表わす。 図９は、麻酔犬での平均血圧に対するペプチド１の影 響を示す。（▲）は５nmol/kg/分の速度を表わす。（＋） を表わす。 図１０は、麻酔犬での心拍数に対するペプチド１注入の影響を示す。（▲）は ５nmol/kg/分の速度を表わす。 入期間を表わす。 図１１は、棒グラフ形式で、ラットのFeCl₃動脈閉塞時間に対するペブチド１ の影響を示す。対照は、陰影なしの棒で表わされており、ペプチド１は陰影つき の棒で表示されている。この図で、ｐは確率を表わし、ｎは試験動物数を表わし ている。 発明の詳細な記載 アミノ酸とアミノ及びカルボキシ末端基の次の一般的な省略形が明細書を通し て使用される。 Gly（又はG） − グリシン、 Ala（又はA） − アラニン、 Val（又はV） − バリン、 Leu（又はL） − ロイシン、 Ile（又はI） − イソロイシン、 Pro（又はP） − プロリン、 Phe（又はF） − フェニルアラニン、 Trp（又はW） − トリプトファン、 Ser（又はS） − セリン、 Met（又はM） − メチオニン、 Thr（又はT） − スレオニン、 Cys（又はC） − システイン、 Tyr（又はV） − チロシン、 Gln（又はQ） − グルタミン、 Asn（又はN） − アスパラギン、 Asp（又はD） − アスパラギン酸、 Glu（又はE） − グルタミン酸、 Lys（又はK） − リジン、 Arg（又はR） − アルギニン。 His（又はH） − ヒスチジン Nle − ノルロイシン Chg − シクロヘキシルグリシン Cha − β‐シクロヘキシル‐アラニン Pip − ピペコール酸、ピペコリン酸、又は2-ピペリジンカルボン酸 Azt − 2-アゼチジンカルボン酸 Orn − オルニチン hArg − ホモアルギニン N-Me-Arg − N-メチルアルギニン N-Me-(D)Phe − N-メチル-D-フェニルアラニン Thg − 3-チエニルグリシン Nag − ナフチルグリシン 1-Tiq − 1,2,3,4-テトラヒドロイソキノリン-1-カル ボン酸 3-Tiq − 1,2.3.4-テトラヒドロイソキノリン-3-カルボン酸 Phg − フェニルグリシン pClPhe − パラ‐クロロ‐フェニルアラニン pNO₂Phe − パラ‐ニトロ‐フェニルアラニン Tha − 3-（2-チエニル‐アラニン） Npa − β-（2-ナフチル）アラニン Hyp − ヒドロキシプロリン Sar − サルコシン（N‐メチルグリシン） N-Me-Phg − N‐メチル‐フェニルグリシン Pen − ペニシラミン cys’− 二つ以上のアミノ酸が一緒になってペプチドを形成し、水に対する元素が除か れるとき、各アミノ酸の残りは本出願で残基と呼ばれる。従って、「残基」は、 末端アミノ基の水素原子を欠いているか、及び／又は末端カルボキシル基のヒド ロキシル基を欠いているアミノ酸である。受入れられる用語を使用して、アミノ 酸やアミノ酸誘導体の３文字コートの前のダッシュ（-）（水素の欠如を意味す る）及び／又は後のダッシュ（-）（ヒドロキシ ルの欠如を意昧する）は残基を示す。 Cys’残基は式（5）で表わされ、これはＲ基側鎖に硫化物部分のないシステイ ン残基を示す。式（3）と（4）に示すように、(D)Cys’残基はジスルフィド結合 を経由して結合される。ジスルフィド部分は、式（6）で示されるように、(D)Cy s’残基のメチレン部分を経由して(D)Cys’残基に結合される。 式（5）及び（6）は、一般式でD-又はL-残基のいずれかを説明する。 明細書全体を通じて、種々の保護基の次の一般的な省略形が使用される。 BoC = t-ブチルオキシカルボニル、 Bzl = ベンジル、 Mbz = p-メチルベンジル、 Chx = シクロヘキシル、 Tos又はTosyl = p-トルエンスルホニル、 Cbz = カルボベンジロキシ、 BrZ = ブロモベンジロキシカルボニル、 Suc = サクシニル、 Ac = アセチル、 PAM = フェニルアセタミドメチル、 アルキル基及びアルコキシ基のアルキル部分は、直鎖又は分枝鎖又は環状のア ルキル基、例えばメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチ ル、第三ブチル、ペンチル、イソペンチル、第二ペンチル、シクロペンチル、ヘ キシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、及びシクロヘキシルメチルを含む。２ 〜10個の炭素原子のアシルは、基あたり１又は２個のカルボニル部分を有する直 鎖、分枝鎖、環状、飽和及び不飽和アシル基、例えばアセチル、ベンゾイル、サ クシニル、マレイル、及ひグルタリルを含む。ハロゲン基は、フルオロ、クロロ 、ブロモ又はヨード基である。 「任意のアミノ酸」という用語は本明細書では、天然のアミノ酸並びに他の「 非蛋白」α-アミノ酸であって、天然のペプチドの合成類似体を製造するときに ペプチド化学技術で一般的に使用されるものである。天然のアミノ酸はグリシン 、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、メチオニン、スレオニ ン、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、システィン、プロリン、ヒ スチジン、アスパラギン酸、アスパラギン、グルタミン酸、グルタミン、アルギ ニン、オルニチン、及びリジンである。又「非蛋白」α-アミノ酸の例は、ノル ロイシン、ノルバリン、アロイソロイシン、ホモアルギニン、チアプロリン、デ ヒドロプロリン、ヒドロキシプロリン（Hyp）、ホモセリン、シクロヘキシルグ リシン （Chg）、α-アミノ-n-酪酸（Aba）、シクロヘキシルアラニン（Cha）、アミノ フェニル酪酸（Pba）、フェニル部分のオルソ、メタ、又はパラ位置で次のもの ：（C₁〜C₄）アルキル、（C₁〜C₄）アルコキシ、ハロゲン、又はニトロ基の１つ 又は２つで置換されている、又はメチレンジオキシ基で置換されているフェニル アラニン、β-2-及び3-チエニルアラニン、β-2-及び3-フラニルアラニン、β-2 -，3-．及び4-ピリジルアラニン、β-（ベンゾチエニル-2-及び3-イル）アラニ ン、β-（1-及び2-ナフチル）-アラニン、セリン・スレオニン・又はチロシンの O-アルキル化誘導体、S-アルキル化システイン、チロシンのO-サルフェートエス テル、3,5-ジヨードチロシン、及び天然のアミノ酸のD-異性体である。 グリシンを例外として天然のアミノ酸はキラル炭素原子を含有する。特定して 別に示されない限り本明細書で記載される光学活性アミノ酸はＬ-立体配置であ る。Ｒ置換基を有する炭素原子での立体化学は、Ｄ-又はＬ-立体配置の何れかで ある。本発明の目的には、Ｄ-異性体のアミノ酸は、D-アミノ酸、（D）アミノ酸 、又は１文字命名系が用いられるとき小文字として描かれ、例えばD-Phe、（D） Phe、又はfはすべて認められる描きかたである。通常用いられているように、本 明細書では、記載されているペプチドの構造はアミノ末端が鎖の左側に表われ、 カルボキシ末端が鎖の右側に表われるようになっている。 式１のポリペプチドは非毒性、有機又は無機酸との製薬上受け入れられる付加 塩を形成できる。適当な酸付加塩を形成する無機酸の例には塩酸、臭化水素酸、 硫酸及び燐酸及び酸金属塩、例えばオルト燐酸一水素ナトリウム及び硫酸水素カ リウムが含まれる。適当な塩を形成する有機酸の例にはモノ、ジ及びトリカルボ ン酸が含まれる。そのような酸の例は例えは酢酸、トリフルオロ酢酸、グリコー ル酸、乳酸、ピルビン酸、マロン酸、コハク酸、グルタル酸、フマール酸、リン ゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸 、安息香酸、ヒドロキシ安息香酸、フェニル酢酸、桂皮酸、サルチル酸、2-フェ ノキシ安息香酸、スルホン酸、例えばメタンスルホン酸及び2-ヒドロキシエタン スルホン酸が含まれる。カルボキシ末端アミノ酸部分の塩は無毒カルボン酸塩で あって、適当な無機又は有機塩基の任意のものと形成されるものが含まれる。例 示するとこれらの塩はアルカリ金属、例えばナトリウム及びカリウムとのもの、 アルカリ土類金属、例えばカルシウム及びマグネシウムとのもの、アルミニウム を含めたIIIA族の軽金属とのもの、有機第一級、第二級及び第三級アミン、例え ばトリエチルアミンを含めたトリアルキルアミン、プロカイン、ジベンジルアミ ン、1-エタナミン、N,N'-ジベンジルエチレンジアミン、ジヒドロアビエチルア ミン、N-（低級）アルキルピペリジン及び任意の他の適当なアミ ンとのものが含まれる。 式１化合物類は、単一のハイブリッドペプチド中でトロンビン抑制と血小板糖 タンパク質（GP）のIIb/IIIa受容体の拮抗とを結びつけた新規なペプチド類であ る。本発明のペプチド類は、トロンビンの触媒位置抑制剤（すなわちＡ部）を含 有しており、これは血小板糖タンパク質IIb/IIIa受容体拮抗剤として、連結「架 橋」と環状RGD-X配列とを含有するリンカー部分（すなわちＢ部）を経由して、 トロンビンの陰イオン結合性エキソ位置抑制剤（すなわちＣ部）に結合されてい る。 Ａ部はトロンビンの触媒部位特異的抑制剤を記載している。この触媒部位特異 的部分は、トロンビンの活性位置に結合し、トロンビンのタンパク質分解活性を 抑制ないし遅延化する。Ｃ部は、陰イオン結合性エキソ位置関連部分として特長 づけられるトロンビン抑制剤を記載している。Ｃ部の順列はヒルジンのカルボキ シ末端部分と構造的に類似しているから、Ｃ部はトロンビン上の陰イオン結合エ キソ位置に容易に結合することが推測される。 Ｂ部は二機能部分を含有している。触媒位置抑制剤（Ａ部）と陰イオン結合性 エキソ位置抑制剤（Ｃ部）との間の連絡「橋」と、環状のRGD-X糖タンパク質IIb /IIIa抑制部分である。触媒位置抑制剤（Ａ部）と陰イオン結合性エキソ位置抑 制剤（Ｃ部）との間の連絡「架橋」は、環状のRGD-X配列の基盤である。B₁部分 、Pro、（D）Cys’、 及びＢ部の二つの（D）Cys’残基をつなぐジスルフィド結合を含有するこの橋は 、触媒位置抑制剤配列と陰イオン結合性エキソ位置認識配列との間の適当なスペ ーサーとして働くものと考えられる。この連絡「橋」は、B₁部分とA₃部分の間に プロリン残基を含有している。これは、A₃とProとの間の天然のイミド結合が、 他のアミノ酸残基のアミド結合よりかなり遅い速度で開裂されるためである。こ のイミド結合の存在が、触媒部位特異的部分の抑制効果を説明しているとの説が 考えられるが、但し本発明はこのような説に束縛されるものではない。当然なが ら、他のアミド結合で置換されたアミノ酸類、例えば還元アミド、エスチル、ケ トン、及びスルフィドが、機能的同等物として作用することも考えられる。 Ｂ部の環状RGD-X糖タンパク質IIb/IIIa抑制部分、すなわちＢ部の２個のD-Cys 残基間のアミノ酸残基は、フィブリノーゲンとその受容体の糖タンパク質IIb/II Iaとの間の相互作用を抑制する。Ｂ部の環状RGD-X糖タンパク質IIb/IIIa抑制部 分は、式（3）と（4）に特定されたとおりに、アミノ酸６−１１を含有する。Ｂ 部の環状RGD-X糖タンバク質IIb/IIIa抑制部分が式（3）であり、式（3）に特定 されたとおりに、アミノ酸６−９を含有するのが好ましい。 本発明の目的にとって、A₁がアミノ末端部分（X）に結合され、A₃部分がＢ部 分のN-末端又は左側にあるPro残 基に結合されるのが理解されよう。Ｃ部分のN-末端又は左側にあるAsp残基は、 Ｂ部分のＣ末端又は右側でB₁残基に結合される。 化学化合物類のゼネリックな群がどれもそうであるように、ある群が好ましい 。出願人らは、以下の場合の式（1）ペプチド誘導体類を好ましいと考える。 Ｘが水素、アセチル、サクシニル、又はt-ブチロキシカルボニル基； A₁が(D)Phe、(D)Chg、(D)Cha、(D)Phg、(D)1-Tiq、(D)3-Tiq、又はN-Me-(D)Ph e； A₂がPro； A₃がArg又はLys； Bが式（3）又は式（4）； B₁がGly、Ala、又はGly-Gly； Ｂが式（3）の時には、B₂がGly、Gly-Gly、又は任意の（D）アミノ酸： Ｂが式（4）の時には、B₂’がArg-Ile-Pro、又はLys-Ile-Pro； B₃がArg又はN-Me-Arg； B₄がNle、Phe、Cha、Met； C₁がPhe、Npa、又はTyr； C₂がGlu又はAsp； C₃が任意のアミノ酸； C₄がIle又は、Val； C₅がPro、Hyp、又は(D)Ala； C₆が任意のアミノ酸； C₇がGlu、Asp、又はAla； C₈がTyr、Glu、Tyr-Leu、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉が結合、(D)Glu、Glu，Glu、Leu-Gln又はLeu-pro； 及びＹがOH、C₁-C₆アルコキシ、又はモノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル置換アミ ノ。 また、以下の場合の式（1）化合物類も好ましい。 Ｘが水素、アセチル又はt-ブチロキシカルボニル基； A₁が(D)Phe、(D)Phg、(D)3-Tiq、又はN-Me-(D)Phe； A₂がPro； A₃がArg； Bが式（3）又は式（4）； B₁がGly； Ｂが式（3）の時には、B₂がGly、(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr、又は(D)Pro； Ｂが式（4）の時には、B₂’がArg-Ile-Pro； B₃がArg又はN-Me-Arg； B₄がNle又はPhe、但しB₂が(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr， 又は(D)Proの時には、B₄はNle； C₁がPhe又はTyr； C₂がGlu； C₃がGlu又はPro； C₄がIle； C₅がPro、又は(D)Ala； C₆がGlu又はAla； C₇がGlu； C₈がTyr、Tyr-Leu、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉が結合、又は(D)Glu；及び ＹがOH、C₁-C₆アルコキシ、又はモノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル置換アミノ 。 以下の場合の式（1）ペプチド誘導体は、特に好ましい。 Ｘが水素、アセチル又はt-ブチロキシカルボニル基； A₁が(D)Phe、(D)Phg、(D)3-Tiq、又はN-Me-(D)Phe； A₂がPro； A₃がArg； Bが式（3） B₁がGly； B₂がGly、(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr、又は(D)Pro； B₃がArg； B₄がNle又はPhe、但しB₂が(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr，又は(D)Proの時には、B₄ はNle； C₁がPhe； C₂がGlu； C₃がPro； C₄がIIe； C₅がPro； C₆がGlu又はAla； C₇がGlu； C₈がTyr、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉が結合、又は(D)Clu；及び ＹがOH、C₁-C₆アルコキシ。 本発明のペプチド類は、当業者に容易に知られる種々の手順によってつくるこ とができる。このような手順は、限定されるものではないが、固相逐次手順を包 含し、その固相逐次手順は、自動化ペプチド合成機の使用などの確立された目動 化法を用いて実施できる。この手順でα-アミノ保護アミノ酸は樹脂支持体へ結 合される。使用される樹脂支持体はポリペプチドの固相製造に於いてこの分野で 慣用的に用いられている任意適当な樹脂であり得、好ましくは0.5〜約３％のジ ビニルベンゼンで架橋されているポリスチレンであり、これはクロロメチル化又 はヒドロキシメチル化のいずれかがなされており、最初に導入されたα‐アミノ 保護アミノ酸とエステル形成をするための位置が提供される。 ヒドロキシノチル樹脂の例はボダンスキー等、Chem．Ind．（ロンドン）38、1 597-98（1966）に記載されている。クロロメチル化樹脂はバイオラッドラボラト リーズ、カリフォルニア州リッチモシドから市販されており、そのような樹脂の 製造はステワード等「ソリッドフェーズペプチドシンセシス Solid Phase Pept ide Synthesis」（フリーマンアンドカンパニー、サンフランシスコ 196 9）第一章、１〜６頁に記載されている。保護されたアミノ酸はギシン、Helv．C hem．Acta，56， 1476（1973）の手順によって樹脂に結合できる。例えば、カル ボキシ末端が(D)Glu残基であるポリペプチドを造るためには、約50℃で、Boc-D- Glu(Bzl)をセシウム塩としてのクロロメチル化ポリエステルに結合させる。 α-アミノ酸の樹脂支持体へのカップリングに続いて、保護基は塩化メチレン 中のトリフルオロ酢酸、トリフルオロ酢酸のみ、又はジオキサン中のHClを使用 するなど、任意適当な手順を用いて除去される。脱保護は0℃と室温の間の温度 で実施される。その他の標準的な開裂試薬と、特定的なα-アミノ保護基の除去 条件を使用できる。α-アミノ保護基の除去後、その他のアミノ保護されたアミ ノ酸類は所望の順序で段階的に結合される。その代わりに、樹脂支持されたアミ ノ酸配列とのカップリングに先立って、溶液法によって複数のアミノ酸基を結合 できる。 ポリペプチド配列へ導入される各アミノ酸に使用されるα-アミノ保護基は、 この技術で知られた任意のこのような保護基でありうる。本発明での使用に考え られるα-アミノ保護基の部類には、（1）ホルミル、トリフルオロアセチル、フ タリル、トルエシスルホニル（トシル）、ペンゼンスルホニル、ニトロフェニル スルフェニル、トリチルスルフェニル、o-ニトロフェノキシアセチル、及 びα-クロロブチリルのようなアシル型の保護基；（2）ベンジロキシカルボニル 及び置換ベンジロキシカルボニル、例えばp-クロロペンジロキシカルボニル、p- ニトロベンジロキシカルボニル、p-プロモベンジロキシカルボニル、p-メトキシ ベンジロキシカルボニル、1-（p-ビフェニル）-1-メチルエトキシカルボニル、 α,α-ジメチル-3,5-ジメトキシベンジロキシカルボニル、及びベンズヒドリロ キシカルボニルのような芳香族ウレタン型保護基；（3）第三ブチルオキンカル ボニル（Boc）、ジイソプロピルメトキシカルボニル、イソプロピロキシカルボ ニル、エトキシカルボニル、及びアリロキシカルボニルのような脂肪族ウレタン 保護基；（4）シクロペンチロキシカルボニル又はアダマンチロキシカルボニル のようなシクロアルキルウレタン型保護基；（5）フェニルチオカルボニルなど のチオウレタン型保護基；（6）トリフェニルメチル（トリチル）及びベンジル のようなアルキル型の保護基；（7）トリメチルシランのようなトリアルキルシ ラン基がある。好ましいα-アミノ保護基は第三ブチルオキシカルボニルである 。 適当なカップリング試薬の選択はこの技術の範囲内にある。添加アミノ酸がGl n、Asn又はArgの場合の特に適したカップリング試薬は、N,N'-ジイソプロピルカ ルボジイミドと1-ヒドロキシベンゾトリアゾールである。これらの試薬の使用は ニトリル及びラクタムの形成を予防 する。その他のカップリング剤は（1）カルボジイミド（例えばN,N'-ジシクロヘ キシルカルボジイミドとN-エチル-N'-（γ-ジメチルアミノプロピルカルボジイ ミド）；（2）シアナミド類（例えばN,N-ジベンジルシアナミド）；（3）ケテン イミン類；（4）イソキサゾリウム塩（例えばN-エチル-5-フェニル-イソキサゾ リウム-3'-スルホネート）；（5）環中に1-4個の窒素を含有する芳香族性で単環 の窒素含有複素環式アミド類、例えばイミダゾリド類、ピラゾリド類及び1,2,4- トリアゾリド類。有用な特定的な複素環式アミド類はN,N'-カルボニルジイミダ ゾールとN,N-カルボニル-ジ-1.2,4-トリアゾールを包含する。；（6）アルコキ シル化アセチレン（例えばエトキシアセチレン）；（7）アミノ酸のカルボキシ ル部分と混合無水物を形成する試薬（例えばエチルクロロホルメートとイソブチ ルクロロホルノート）又はカップリングしようとするアミノ酸の対称無水物（例 えはBoc-Ala-O-Ala-Boc）；及び（8）一つの環窒素上に１個のヒドロキシ基をも った窒素含有複素環式化合物類（例えばN-ヒドロキシフタルイミド、N-ヒドロキ シサクシンイミド及び1-ヒドロキシベンゾトリアゾール）である。その他の活性 化試薬と、ペプチドのカップリングにおけるそれらの使用は、カプール（Kapoor ）、J．Pharm．Sci.59巻1-27頁（1970年）に記載されている。出願人らはＡrg、 Ａsn及びＧlnを除き、全てのアミノ酸に対するカップリング試薬として対称的無 水物の使 用を好ましいと考える。 各保護アミノ酸又はアミノ酸配列は、約２倍乃至４倍過剰量で固相反応器に導 入され、ジメチルホルムアミド：塩化メチレン（1:1）又はジメチルホルムアミ ドのみ、又は好ましくは塩化メチレンのみの媒体などの中でカップリングが行な われる。不完全なカップリングが起こる場合は、固相反応器での次のアミノ酸の カップリングに先立って、α-アミノ保護基の除去前に、カップリング手順を繰 り返す。合成の各段階におけるカップリング反応の成功は、イー・カイザー（E ．Kaiser）ら、Analyt．Biochem．34巻595頁（1970年）に記載されるように、ニ ンヒドリン反応によってモニターされる。 所望のアミノ酸が得られた後、この分野でよく知られる条件下でペプチドは樹 脂から除去される。例えば、除去は、樹脂結合ポリペブチドを無水フッ化水素酸 中の5%アニソール溶液で処理することにより達成出来る。 固相ペプチド合成の技術に知られているように、アミノ酸類の多くは鎖製造中 に保護を必要とするような官能基をもっている。適当な保護基の使用と選定は、 当業者が行い得る範囲の事項であって、保護しようとするアミノ酸と、ペプチド 上の他の保護アミノ酸残基の存在に依存する。一般にこのような側鎖保護基の選 択は、ａ-アミノ部分の保護基の解裂中に除去されないものでなくてはならない という点で臨海的なことである。例えば、ア スパラギン酸とグルタミン酸のカルボキシルヒドロキシ基は、ベンジル又はシク ロヘキシル基で保護できる。好ましい保護基はベンジルである。 これらの基はこの分野てよく知られた手順で除去できる。典型的には保護基の 除去はペプチド鎖の合成が完了した後になされる。例えば、ペプチドは無水弗化 水素酸中の5％アニソール溶液での処理で樹脂からのペプチドの除去と同時に脱 保護できる。保護基は任意の他の適当な時期にも除去できる。 本発明のペプチド類似体の抗凝固及び抗血小板投与量は、患者、処置される血 栓症状のひどさ、及び選ばれるペプチド類似体に依存し、一日当たり患者体重キ ログラム当たり0.2mg〜250mgである。特定の患者に対する適当な投与量は容易に 決定され得る。好ましくは１〜４回の毎日の投与がなされ典型的には投与当たり 5mg〜100mgの活性化合物が投与される。 抗凝固療法は種々の血栓症状、特に冠状動脈及び脳血管病の処置及び予防、並 びに例えば存在する凝塊溶解による冠状動脈の閉塞の処置に対し指示されている 。抗血小板療法は心筋梗塞症及び脳卒中の再発予防に対して指示されている。こ の分野で経験を積んだ者は、抗凝固療法及び抗血小板療法を要求するような状況 が何かは容易にわかる。本発明のペプチド類は、血管形成手術後の冠状動脈血栓 症の予防、体外循環中の血小板減少症、繊（線） 維素溶解療法後の閉塞の予防、また発達途上の心筋梗塞の停止又は遅延化のため に特に有益と思われる。 本明細書で使用する「患者」という用語は、哺乳類、例えば人を含めた霊長類 、羊、馬、牛、豚、犬、猫、ラット及びマウスを意味するものとする。 ペプチド誘導体の幾つかは経口投与の後腸を通過しても生延び得るが、本発明 者は非経口投与、例えば皮下、静脈内、筋肉内又は腹腔内投与、デポー注射によ る投与、移植製剤による投与又は粘膜への適用、例えは鼻、喉及び気管支に対す る適用、例えば本発明のペプチド誘導体をスプレー又は乾燥粉末形で含有してい るエロゾルの缶に於ける投与が好ましいと考えている。 化合物の非経口投与は、表面活性剤及び他の製薬上受け入れられる助剤の添加 有り又は無しで、水又は油の様な滅菌液体であり得る製薬担体と共に生理学的に 受け入れられる希釈剤中の化合物の溶液又は懸濁液の注射可能な投与物として投 与され得る。これらの製剤中で使用できる油の例は石油、動物、植物、又は合成 起源のもの、例えばピーナツ油、大豆油、及び鉱油である。一般に、水、塩水、 デキストロース水溶液及び関連糖溶液、エタノール及びグリコール類、例えばプ ロピレングリコール又はポリエチレングリコールが好ましい液体担体で、特に注 射溶液に良い。 実施例 実施例1-12は、式１ペプチド類の典型的な合成を示している。これらの実施例 は、例示的なものであって、いかなる点でも本発明を制限する意図のものではな い。実施例1-12の試薬と出発材料は、当業者に容易に入手できる。実施例1-12で 使用される以下の用語は、指定の意味をもっている。「DCM」はジクロロメタン を指す。「DIEA」はジイソプロピルエチルアミンを指す。「MeOH」は、メタノー ルを指す。「DCC」はN,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミドを指す。「DMF」はN ,N'-ジメチルホルムアミドを指す。「HOBt」は1-ヒドロキシベンゾトリアゾール を指す。「TFA」はトリフルオロ酢酸を指す。「eq.」は当量を指す。「meq」は ミリ当量を指す。「g」はグラムを指す。「mg」はミリグラムを指す。「mmol」 はミリモルを指す。「mL」はミリリットルを指す。「℃」は摂氏の度を指す。「 TLC」は薄層クロマトグラフィを指す。「Rf」は保持係数を指す。「μL」はミク ロリットルを指す。「μg」はミクロクラムを指す。「μM」はミクロモルを指す 。「mmHg」は水銀のミリメートルを指す。また、「δ」はテトラメチルシランか らダウンフィールドでの百万分率を指す。 実施例１ の調製 以下のプロトコルに従って、デュポン250半自動ペプチド合成機を使用して、B oc-(D)Glu(Bzl)-Pam-樹脂（ペニンスラ・ラボラトリーズ、カリフォルニア州ベ ルモント）を段階的脱保護とその後のBoc-アミノ酸のカップリングによって伸長 させる。 全Boc-アミノ酸を２倍過剰量の事前形成された対称性 無水物としてカップリングさせるが、但しArgは４倍過剰量でそのHOBtエステル としてカップリングさせる。対称性無水物は以下のように調製される。 Boc-アミノ酸（4eq.）をDCMに溶解し、続いて0.5M DCC/DCM（2eq.）を加える 。反応物を５分かきまぜる。対称的無水物の形成は、ジシクロヘキシルユリアの 沈殿を生じ、これを濾過によって除去する。次に、濾液をペプチド樹脂に加え、 カップリング混合物を同量のDMFで希釈する。 ArgのHOBtエステルは、同様に形成される。Boc-Arg（Tos）（4eq）をDCMに溶 解する。0.5M HOBt/DMF（4eq）と0.5M DCC/DCM（4eq）を加える。ジシクロヘキ シルユリアを濾過によって除去し、濾液をペプチド樹脂に加え、カップリング混 合物を同量のDMFで希釈する。 各カップリング後、この技術で周知のように、カイザーのニンヒドリン手順を 使用して、任意の遊離アミンの存在についてペプチド樹脂を試験する。必要に応 じて、アミノ酸類を再カプリングする。 上の手順に従って、Boc-D-Glu(Bzl)-Pam-樹脂（8.06g，0.31meq/gm．2.5mmol ，ベニンスラ・ラボラトリーズ、カリフォルニア州ベルモント、から購入）を伸 長させるど、ペプチド-樹脂(D)Phe¹-Pro-Arg(Tos)-Pro-Gly⁵-(D)(Cys(Mbz)-Gly- Arg(Tos)-Gly-Asp(Chx)¹⁰-Nle-Pro-(D)Cys(Mbz)-Gly-ASP(Chx)¹⁵-Tyr(BrZ)-Glu( Bzl)-Pro-Ile-Pr o²⁰-Glu(Bzl)-Glu(Bzl)-Ala-Cha-(D)GLu(Bzl)-Pam-樹脂（ペプチド樹脂19.4g） を生じる。以下のアミノ酸類は１モル当量のそれらの対称性無水物との第二のカ ップリングを必要としている。Boc-Cha²⁴、Boc-Glu(Bzl)²¹、Boc-Tyr(BrZ)¹⁶、B oc-Asp(Chx)¹⁵、Boc-(D)Cys(Mbz)⁶、Boc-Pro⁴、Roc-Pro²及ぴBoc-(D)Phe¹。Boc- Arg(Tos)²のカップリングをそのHOBtエステルの２倍過剰量と２回くり返した後 、無水酢酸：DIEA:DCM（10:5:85）でキャップする。 上に調製されたペプチド樹脂(D)Phe¹-Pro-Arg(Tos)-Pro-Gly⁵-(D)Cys(Mbz)-Gl y-Arg(Tos)-Gly-Asp(Chx)¹⁰-Nle-Pro-(D)Cys(Mbz)-Gly-Asp(Chx)¹⁵-Tyr(BrZ)-Gl u(Bzl)-Pro-Ile−Pro²⁰-Glu(Bzl)-Glu(Bzl)-Ala-Cha-(D)Glu(Bzl)-Pam-樹脂を５ 部分に分割する。各部分を切断し、脱保護し、以下の条件下に環化する。アニソ ール（５％）の存在下に、ペプチド樹脂（3.88g）を無水フッ化水素酸（20mL） に懸濁する。反応物を約0℃で約30分かきまぜる。次に、フッ化水素酸を真空下 に除去し、残留物を50％酢酸（2x10mL）、酢酸（2x5mL）、及び水（3x10mL）で 抽出する。一緒にした抽出液を水で１リットルに希釈し、水酸化アンモニウムで pHを８.５に調整する。K₃Fe(CN)₆（1.0M、約55mL）を15分間に、黄色が持続する まで加え、室温で30分かきまぜる。酢酸でpHを4.0に調整する。陰イオン交換樹 脂（AG3 x 4A、バイオラド）を加え、黄 色がなくなるまでかきまぜる。樹脂を濾過によって集め、濾液を凍結乾燥すると 、粗製ペプチドを生ずる。 粗製ペプチドを50％酢酸に溶解し、セファデックスG-10カラム（2.5x70cm）に 充填する。50％酢酸で約10.5mL/時の速度で溶離する。ペプチドは約70-150mLで 溶離する。この溶離液を水で希釈し、凍結乾燥すると、計6.17gを提供する。脱 塩材料をさらに逆相分離用HPLC（ダイナマックスC₁₈、21.4x250mm、ライニン） により、速度約40mL/分、0.1％水性TFA/アセトニトリルの勾配で、ペッグマンプ レップ350システムを使用して精製すると、純粋なペプチド（1.3g）を生ずる。 以下の実施例のペプチド類は、同じ又は類似方法によって調製できる。 実施例２ 実施例３ 実施例４ 実施例５ 実施例６ 実施例７ 実施例８ 実施例９ 実施例１０ 実施例１１ 実施例１２ 生物学的説明 上記のように、本発明化合物類は有意のトロンビン抑制を示す性質をもってお り、これらが静脈と動脈の血栓病や不安定な狭心症の予防、冠状血管形成手術後 の突然の血管閉鎖の予防、血栓崩壊の補助療法、及び整形外科手術後の深部静脈 血栓の予防に有用で効果的な抗凝固剤であることを示している。本発明化合物類 は、環式RGD-X配列をも含有し、これらはＢ部の連結部分に位置していることか ら、これらは血小板GP IIb/IIIa受容体拮抗剤としても作用する。実施例２ペプチドの抗凝固・抗血栓効果 触媒位置トロンビン抑制剤（fPR）が環式血小板GP IIb/IIIa受容体拮抗剤（RG D-X）によってヒルジン_55-65類似体にカップリングされたものからなる実施例２ のペプチド（ペプチド２）（SFQ ID NO: 2）を、その個々の成分ペプチド類と比 較する。下記の実験設備がたんに示唆されたものであり、いかなる形でも本発明 を結合ないし制限する意図のものではないことが認められる。実験動物 スプラーグ・ドーリー種の雄ラット（300-400gm）をスプラーグ・ドーリー社 （46229インディアナ州インディアナポリス）から購入し、これらの研究に使用 する。血液サンプル採取 3.8％のクエン酸三ナトリウム（1:10）を含有するプ ラスチック注射器に血液サンプルを吸上げることができる。2,000gの力で10分の 遠心分離によって、血漿を調製できる。生体外研究用の静脈血を、薬物を飲んで いない健康な男子志願者から集める。凝固検定 活性化された部分的なトロンボプラスチン（aPTT）測定は、デード・ダイアグ ノスチックス社（00602プエルトリコ、アグアダ）の試薬と方法を使用して実施 される。トロンビン凝固時間は、ラット血漿0.1mlを0.1Mトリス緩衝液（pH7.5） 0.1mlと一緒に37℃で30秒培養することによって測定される。凝固は、牛トロン ビン（シグマ・ダイアグノスチックス社、63178ミズーリ州セントルイス）の溶 液0.1ml（12 NIH単位／ml）によって開始される。すべての凝固時間は、MLA-エ レクトラ750自動凝固タイマー（MLA社、10570ニューヨーク州プレザントビル） を使用して、半自動的に測定される。凝固時間を２倍にするのに必要な濃度（ID₂ ）は、簡単な線形回帰を用いて計算される。生体外の血小板凝集 ヒト血小板に富んだ血漿（PRP）は、200Gの力で室温、10分間の遠心分離によ って調製される。血小板の少ない血漿（PPP）は、2000Gの力で10分間の遠心分離 によって調製される。PPPはプラスチック製の実験器具にのみ暴露される。全実 験は、血液採取の３時間以内に完了する。 血小板凝集は、二重チャンネルのアグレゴメーター（クロノログ・コープ、1908 3ペンシルベニア州ハバースタウン）を使用して、測光学的に測定される。100％ の透光性はオートロガスPPPと定義される。透光性の最大限の変化率は、ADP（1 μM）又はトロンビンの添加後、PRPから測定される。トロンビン（0.2-2.0単位 ／ml）で誘発される血小板凝集は濃度依存性であり、半最大濃度が抑制研究に使 用される。ペプチド２（SEQ ID NO: 2）は、ADP又はトロンビンの添加に先立っ て、PRP（0.45ml）と一緒に30秒培養される。凝集は、0.5mlの全量で測定される 。抑制応答は対照値と比較した時の抑制率として表わされる。凝集の50％抑制を 生ずる濃度（IC₅₀）は、簡単な線形回帰によって計算される。ラットのFeCl₃動脈血栓モデル（生体内） ラットでのペプチド２（SEQ ID NO: 2）の生体内抗血栓効果も評価に利用され る。例えば、アール・シェイ・ブリューエルスマ（R.J．Broersma）ら、Thromb ．Res．64巻405-412頁（1991年）に従って、血小板依存性、トロンビン媒介性で 、FeCl₃誘発性のラット頚動脈血栓モデルにおいて、ペプチド２（SEQ ID NO:2） の抗血栓活性を評価する。上記参照文献は参照により、完全に説明されたものと して本明細書に取り入れられている。結果 この研究からの結果は、血漿凝固と血小板凝集検定に おいて、ペプチド２（SEQ ID NO:2）が抗凝固剤、抗トロンビン剤として個々の 成分より効力があることを示している。 表に関して、ペプチド配列内のアミノ酸残基は１文字の命名法に従って命名さ れるが、但し幾つかの変更されたアミノ酸や保護基は３文字命名法によって指定 され、カッコに入れられている。また、(D)Cys’残基間を連結するジスルフィド 結合は、２個の(D)Cys’残基とＢ部のループ部分にあるすべての残基の下に引か れる線によって表わされる。 ID₂値は、三重試験で凝固時間を対照から２倍にするのに必要な濃度である。a PTT（activated partial thromboplastin time活性部分トロンボプラスチン時間 ）。 表１を参照すると、正常なヒト血漿での活性部分トロ ンボプラスチン時間（aPTT）とトロンビン時間の検定において、ペプチド２（SE O ID NO: 2）の抗凝固活性をその成分のペプチド2a（SEO ID NO:3）、ペブチド2 b（SEQ ID NO:4）、ペプチド2c（SEQ ID NO:5）、及びペプチド2d（SEQ ID NO:6 ）と比較している。ペプチド類2a-2d（SEQ ID NO:3-6）は本発明のものではない 。ペプチド２（SEQ ID NO:2）は、約60及び24 nMにおいて、それぞれaPTTとトロ ンビン時問を倍化（ID₂）させる。ペプチド２（SEQ ID NO:2）は、2b（SEQ ID N O:4）又は2d（SEQ ID NO:6）（安定な触媒位置抑制剤Me-fPR）より、少なくとも 20倍の活性があるが、2c（SEQ ID NO:5）（fPRPGペンタペプチド）は、もっとず っと高濃度でのみ高凝固活性をもっている。ペブチド2a（SEQ ID NO:3）（環式R GD-Xペプチド）は、抗凝固剤として不活性である。 ID₂値は、三重試験で凝固時間を対照から２倍にする のに必要な濃度である。aPTT（activated partial thromboplastin time活性部 分トロンボプラスチン時間）。 表２を参照すると、ペプチド２（SEQ ID NO:2）の抗凝固研究をラット血漿で 行なっている。aPTTとトロンビン時間のID₂は、それぞれ約181及び116nMである 。このように、ペプチド２（SEQ ID NO:2）は、ヒト血漿と比べてラット血漿で は、抗凝固剤として3-5倍低活性である。 ID₅₀値は、二重試験で血小板凝集を対照の凝集から50％抑制するのに必要な濃 度である。 表３に示すとおり、ADPとトロンビンによって誘発されるヒト血小板凝集はペ プチド２（SEQ ID N0:2）によって抑制される。ADPで誘発ざれる凝集を５０％抑 制する濃度（IC₅₀）は、約19μMである。これは環式RGD-Xペプ チド（IC₅₀=20μM）のペプチド2a（SEQ ID NO:3）と類似している。抗トロンビ ンペプチド類2b（SEQ ID NO:4）と2d（SEQ ID NO: 6）は、ADPで誘発される血小 板凝集の抑制剤として本質的に不活性である（各々IC₅₀＝895及び>1,000μM）。 ペプチド２（SEQ ID NO:2）は、IC₅₀値60μMでトロンビン誘発性の血小板凝集 を抑制し、その成分であるペフチド2h（SEQ ID NO:4）（IC₅₀＝2μM）、ペプチ ド2d（SEQ NO:6）（ID₅₀＝200nM）、及びペプチド2a（SEQ ID NO:3）（IC₅₀＝13 μM）より活性がある。 対照的に、ADPとトロンビンで誘発されるラット血小板の凝集は、それぞれIC_{5 0} ＝65μMと14nMで、ペプチド２（SEQ ID NO:2）によって抑制される（表２を参 照）。このように、ペプチト２（SEQ ID NO:2）はヒト血小板に富んだ血漿と比 べ、ラット血漿では3-4倍低活性である。 ペプチド２（SEQ ID NO:2）の抗而栓活性は、FeCl₃で誘発されるラット頚動脈 血栓症モデルで評価される。血栓性閉塞は、10、25、及び50nmol/kg/分の率で動 脈にFeCl₃を投与する15分前に始めて、１時間にわたるペプチド２の連続静脈内 注入によって、投与量依存的に低下する（図１を参照）。25及び10nmol/kg/分の 率では、閉塞はラット６匹中各々３匹と５匹で予防される。触媒位置抗トロンビ ン（ペプチド2d）（SEQ ID NO:6）は、50、100、及び200nmol/kg/分の注入率で 、閉塞時間を投与量依存的に延長させる（図２を参照）。 閉塞は、50nmol/kg/分の投与率でラット５匹中４匹で予防される。500nmol/kg /分のヒルジン類似体（ペプチド2b）（SEQ ID NO:4）も、100nmol/kg/分の環式R GD-Xペプチト（ペプチト２ａ）（SEQ ID No:3）も、このモデルのラットで閉塞 を予防しない。 実施例１のペプチドの抗凝固及び抗血栓効果 ペプチド２（SEQ ID NO:2）と同様に、触媒位置トロンビン抑制剤（fPR）が環 式血小板GP IIb/IIIa受容体拮抗剤（RGD-X）によってヒルジン_55-65類似体にカ ップリングされたものからなる実施例１のペプチド（ペプチド１）（SEQ ID NO: 1）を、その個々の成分ペプチド類と比較する。しかし、ペプチド１（SEQ ID N0 :1）はペプチド２（SEQ ID NO:2）の類似体であって、この場合、ペプチド２ （SEQ ID NO:2）の環式RGD-X配列中のフェニルアラニン（Phe）はノルロイシン （Nle）と置換されている。この研究では、ペプチド１（SEQ ID NO:1）をペプチ ド２（SEQID NO:2）、ペプチド３（SEQ ID NO:7）、すなわち陰イオン結合性エ キソ位置関連部分（Ｃ部）が一部削除されている場合のペプチド１類似体、及び ペプチド４（SEQ ID NO:8）、すなわち天然のL-アミノ酸のみを含有するペプチ ド１類似体と比較している。さらに、ペプチド５（SEQ ID NO:9）、すなわち10 個のアミノ酸のRGD-Xループと天然のL-アミノ酸のみをもっているペプチド１（S EQ ID NO:1）の類似体を、ペプチド６（実施例１２のペプチド）（SEQ ID NO:10 ）、すなわち10個のアミノ酸RGD-Xループをもつペプチド１類似体と比較して、 本発明のペプチド類の活性に対して働くRGD-Xループの方向づけの影響を示す。 ペプチド類１、２、及び６（SEQ ID NO:1、2、及び10）は本発明のものであるが 、ペプチド類3-5（SEQ ID NO:7-9）は本発明ではない。下記の実験設備が示唆的 なものであり、いかなる形でも本発明を束縛ないし制限する意図のものではない ことが認められる。実験動物 スプラーグ・ドーリー種の雄ラット（300-400gm）をスプラーグ・ドーリー社 （46229インディアナ州インディアナポリス）から購入し、また雌雄の混合種の 犬（6-11kg）をこれらの研究に使用する。 犬をナトリウムペントバルビタール（30mg/kg．i.v.）で麻酔にかける。股動 脈と両方の大腿静脈を分離し、血圧記録（グールドP23ID、グールド社、医学製 品部門、93030カリフォルニア州オックスナード）、血液サンプル採取、及び薬 剤投与のためにカヌーレを付ける。リードII ECGのモニターのため、四肢リード 線を皮下に入れる。血圧とECG測定を記録する（グールド440レコーダー、グール ド社、機器システム部門、44114オハイオ州クリーブランド）。血液サンプル採取 3.8％のクエン酸三ナトリウム（1:10）を含有するプラスチック注射器に血液 サシプルを吸上げることができる。2.000gの力で10分の遠心分離によって、血漿 を調製する。生体外研究用の静脈血を、薬物を飲んでいない健康な男子志願者か ら集める。凝固検定、鋳型出血時間及び血液学 活性化された部分的なトロンボプラスチン（aPTT）測定は、デード・ダイアグ ノスチックス社（00602プエルトリコ、アグアダ）の試薬と方法を使用して実施 される。トロンビン凝固時間は、ラット血漿0.1mlを0.1Mトリス緩衝液（pH7.5） 0.1mlと一緒に37℃で30秒培養することによって測定される。凝固は、牛トロン ビン（シグマ・ダイアグノスチックス社、63178ミズーリ州セントルイス）の溶 液0.1ml（12NIH／mlによって開始さ れる。すべての凝固時間は、MLA-エレクトラ750自動凝固ダイマー（MLA社、1057 0ニューヨーク州プレサントビル）を使用して、半目動的に測定される。凝固時 間を２培にするのに必要な濃度（ID₂）は、簡単な線形回帰を用いて計算される 。t_1/2の決定は、１及び５nmol/kg/分の率でペプチド１（SEQ ID NO:1）の注入 後、抗トロンビン活性（トロンビン時間）について計算される。t1/2の推定は経 時的な応答デーダの線形回帰によって行なわれる。 鋳型出血時問は、サージカット出血時間装置（インターナショナル・テクニダ イン・コーポレーション、08820ニュージャージー州エジソン）を使用して、毛 髪除去（ネア、カーター・ウォーレス社、10105ニューヨーク州ニューヨーク） 後、左足中央表面で行なった。鋳型出血時間は、薬剤投与前の60分と30分、及び 薬剤投与後の15分、30分、60分、120分、180分、及び240分に測定される。 全血細胞数とヘモグロビン含有量の分析は、EDTAで抗凝集化され、血液学分析 装置（テクニコンH1、マイルズ・テクニコン、10591ニューヨーク州タリータウ ン）で処理された血液サンプル140μLで測定される。サンプルは薬剤投与前の60 分と30分、及び薬剤投与後の15分、30分、60分、120分、180分、及び240分に採 取される。血小板凝集試験 ヒト血小板に富んだ血漿（PRP）は、200gの力で室温、10分間の遠心分離によ って調製される。血小板の少ない血漿（PPP）は、2000gの力で10分間の遠心分離 によって調製される。PPPはプラスチック製の実験器具にのみ暴露される。全実 験は、血液採取の３時間以内に完了する。血小板凝集は、クロノログ二重チャン ネルのアグレゴメーター（クロノログ・コープ、19083ペンシルベニア州ハバー スタウン）を使用して、測光学的に測定される。100％の透光性はオートロガスP PPと定義される。透光性の最大限の変化率は、ADP（1μM）又はトロンビンの添 加後、PRPから測定される。トロンビン（0.2-2.0単位／ml）で誘発される血小板 凝集は粘度依存性であり、半最大濃度が抑制研究に使用される。ペプチド２（SE Q ID NO:2）は、ADP又はトロンビンの添加に先立って、PRP（0.45ml）と一緒に3 0秒培養される。凝集は、0.5mlの全量で測定される。抑制応答は対照値と比較し た時の抑制率として表わされる。凝集の50％抑制を生ずる濃度（IC₅₀）は、簡単 な線形回帰によって計算される。 血液中の血小板凝集は、全血アグレゴメーター（クロノログ、モでル540-VS） を使用して、食塩水で希釈（1:2）されたクエン酸化血液て実施される。希釈血 液のアリコートをプラスチック製キュベットに入れ、37℃で15分培養する。凝集 を起こすためにADP（2μM）又はトロンビン（0.4U/ml）の添加を使用し、電気イ ンピーダン スの変化を帯記録紙レコーダーに記録する。凝集は1.0mlの全血液量で測定され る。抑制応答は、対照値と比較した時の抑制率として表示される。50％の凝集抑 制を生ずる濃度（IC₅₀）は簡単な線形回帰によって計算する。ラットのFeCl₃動脈血栓モテル（生体内） ラットでのペブチド１（SEQ ID NO:1）の生体内抗血栓効果も評価に利用され る。例えば、アール・ジェイ・プリューエルスマ（R.J．Broersma）ら、Thromb ．Res．64巻405-412頁（1991年）に従って、面小板依存性、トロンビン媒介性で 、Fecl誘発性のラット頚動脈血栓モデルにおいて、ペプチト１（SEQ NO:1）の抗 血栓活性を評価する。上記参照文献は参照により、完全に説明されたものとして 本明細書に取り入れられている。結果 この研究からの結果は予想外であるが、ペプチド１（SEQ ID NO:1）がトロン ピン誘発性血小板凝集の抑制剤として、ペプチド３（SEQ ID NO:7）、ペプチド ４（SEQ IDNO:8）、さらにはペプチド２（SEQ ID NO:2）よりも効力があること を示している。 表７に関して、ペプチド１（SEQ ID NO:1）はペプチド２（SEQ ID NO:2）の類 似体であるが、この場合、ペプチド２（SEQ ID NO:2）の環式RGD-X配列中のフェ ニルアラニン（Phe）がノルロイシン（Nle）で置換されている。ペプチド３（SE Q 1D NO:7）は、陰イオン結合性エキソ位置関連部分（Ｃ部）が一部切除されて いる場合の、ペプチド２（SEQ ID NO:2）の類似体である。ペプチド４（SEQ ID NO:8）は、天然L-アミノ酸のみを含有するペプチド ４（SEQ ID N0:4）の類似体である。ペプチド１（SEQ ID NO:1）と２（SEQ ID N O:2）は本発明のものであるが、ペプチド３（SEQ ID NO:7）と４（SEQ ID NO:8 ）は本発明のものではない。 ペプチド１（SEQ ID NO:1）はID₂について、12及び5nM濃度で、それぞれaPTT とトロンビン時間を２倍にする。これは、ペプチド２（SEQ ID NO:2）に比べて 、抗凝固活性の値で５倍の増加に相当する。表７は、ペプチド３（SEQ ID NO:7 ）と４（SEQ ID NO:8）がペプチド２より低い抗凝固活性をもつことを例示して いる。 トロンビンで誘発される血小板凝集 ペプチド類1-4（SEQ ID NO:1、2、7、及び8）のヒト血小板凝集の投与量依存 性抑制を表８に示す。トロンビン誘発性の血小板凝集は、ペプチド１（SEQ 1D N O:1）で効果的に抑制され、IC₅₀値は399±76pMで、ペプチド２（SEQ ID NO:2） （IC₅₀＝60+26nM）より150倍高い。 すべて天然L-アミノ酸をもつ類似体のペプチド４（SEQID NO:8）と短縮COOH末 端をもつ類似体のペプチド３（SEQ ID NO:7）はペプチド１より約1,000倍低活性 である。ADPで誘発される血小板凝集 ジスインテグリン活性をヒト血小板のADP誘発性凝集の投与量依存的抑制によ って測定し、表８に例示する。ペプチド１（SEQ ID NO:1）（IC₅₀＝32μM）とペ プチド２（SEQ ID NO:2）（IC₅₀＝19μM）は、類似した活性をもつことが示され た。すべて天然のL-アミノ酸をもった類似体のペプチド４（SEQ ID NO:8）と短 縮COOH末端をもった類似体のペプチド３（SEQ ID NO:7）は、ジスインテケリン 活性においてペプチド１（SEO ID NO:1）とほぼ同等である。全血の血小板凝集 ADF（0.5μM）とトロンビン（0.025U/ml）の組合せによって誘発されるヒト及 びラットの全血血小板凝集は、それぞれ2.9及び42.5nMのIC₅₀でペブチド１によ って抑制される（図３を参照）。このように、ペプチド１（SEQ I D NO:1）は、ラット血液に比べで、ヒト血液では約15倍活性がある。さらに、ペ プチド１（SEQ ID NO:1）は、約50％でラット血液で高原状（プラトー）である 抑制とは対称的に、ヒト血液では完全に凝集を抑制する。犬へのペプチト１の静脈内投与 ペプチド１（SEQ ID NO:1）は、麻酔をかけた犬に１時間に注入する時に、ト ロンビン及び血小板凝集の抑制を示す。さらに、ペプチド１（SEQ ID NO:1）の 効果は、注入が止まってから短期間である。トロンビン時間（図４）とaPTT（図 ５）は１及び５nmol/kg/分の注入速度によって、投与量依存的に持続する。トロ ンビン時間は、ペプチド１（SEQ ID NO:1）の注入による抑制に対して、aPTT検 定よりも感受性がある。図２の要約データは、最大の抑制が15-30分以内に完了 することを例示している。注入を止めたあと（60分）、トロンビン活性は回復し 、１及び５nmol/kg/分の注入に対して、薬効学的ｔ_1/2は17±0.1及び26±3.2分 である。 血小板凝集の抑制は、凝固試験へのペプチド１（SEQ ID NO:1）の影響を裏づ けている。ペブチド１（SEQ ID NO:1）の注入は、15分でトロンビン誘発性の血 小板凝集を抑制する（図６）。抑制は、犬３匹中２匹で１時間の注入期間中に維 持される。血小板活性は、１nmol/kg/分の注入がやんだ後回復し、薬効学的t_1/2 は12.8±1.1分である。 ADPで誘発される血小板凝集は、各投与率で３匹中１匹で抑制される。生体外 で、ADPで誘発される血小板凝集はμN水準で抑制される。全血の血小板凝集で血 液を食塩水で1:2に希釈すると、ADPで誘発される血小板凝集の効果的な抑制に必 要なペブチド１（SEQ ID NO:1）の濃度が減少すると考えられるが、本発明はこ のような考えに束縛されない。出血時間（図７）と血小板数（図８）はペプチド １（SEO ID NO:1）を受けた犬で安定している。血圧（図９）と心拍数（図１０ ）は、投与量依存的に中程度に上昇する。これらのパラメータは、注入終了後２ 時間で基本線の対照値に戻る。 ペプチド１（SEQ ID NO:1）の抗血栓活性は、FeCl3で誘発されるラット頚動脈 血栓症モデルで評価される。血栓性閉塞は、5、10、及び25nmol/kg/分の率で動 脈にFeCl₃を投与する15分前に始めて、１時間にわたる連続静 脈内注入によって、投与量依存的に延長する（表９と図１１を参照）。25nmol/k g/分の投与率では、閉塞はラット５匹中４匹で予防される。10及び５nmol/kg/分 の投与率では、閉寒は７匹中４匹、及び６匹中０匹で予防される。FeCl₃適用後 、閉塞時間を２倍にするために必要なペプチド１（SEQ ID NO:1）の投与率は、 ペプチド２（SEO ID NO:2）ですでに観察された33.7 nmol/kg/分に比べて、19.3 nmol/kg/分である。 表１０は、触媒位置抑制剤と陰イオン結合性エキソ位置認識配列との間の連結 「橋」中で、(D)Cｙsと(L)Cys残基との置換から生ずる２個の立体異性体の間の 差を例示している。ペプチト５（SEQ ID NO:9）と６（SEQ ID NO: 10）は、環式RGD配列中に追加の残基を含有するペプチド１（SFQ ID NO:1）の類 似体を表わしている。ペプチド５（SEQ ID NO:9）も、連結「橋」に(D)Cysとは 反対に(L)Cys残基をもつ点が異なる。環式RGD配列に与えられる異なる空間方向 性（spatial orientation）が(D)Cys類似体のペプチド６（SEQ ID NO:10）によ るヒト血小板のトロンピン誘発性血小板凝集の、より大きな抑制をもたらす。２ 立体異性体の間にトロンビン活性の10倍の差が認められる。しかし、ADP誘発性 血小板凝集と抗凝固活性の抑制に差はない。ペプチト１（SEQ ID NO:1）を変更 して、天然L-アミノ酸のみを含有する類似体のペプチド４（SEQ ID NO:8）をつ くると、２立体異性体間の差が増幅する。事実、ペプチド１（SEQ ID NO:1）は 、トロンビン誘発性の血小板凝集では、ペプチド４（SEO ID NO:8）より約1.000 倍大きな抑制力をもっている。ADP誘発性血小板凝集の抑制について、これらの ２立体異性体間には差がない。しかし、抗凝固活性では、すべて天然アミノ酸の 類似体であるペプチド４（SEQ ID NO:8）より(D)Cys含有類似体のペプチト１（S EO ID NO:1）のほうが大きい。ペプチド１とその類似体類との相対的な活性 表11-14は、確立されたIC₅₀血小板抑制とlD₂抗凝固データに対するペプチド１ （SEQ ID NO:1）の類似体類の比を例示している。この比較のために、ペプチド １（SEQ ID NO:1）サンプルは次の活性をもっている。疑固--ID₂ （aPTT=27.9nM；トロンビン時間＝15nM）：凝集--IC₅₀（トロンビン＝5.8 nM；A DP=11.4μM）。表11-14でペプチド７−１８（SEQ ID NO:11-22）のaPTT、トロン ビン時間、トロンビン、及びADPの値は、比較的な値のみを表わしており、実際 のペプチド濃度を示すものではなく、従って単位は付けられていない。例えば、 ペプチド７（SEQ ID NO:11）のaPTT値0.99は、正常なヒト血漿での活性部分トロ ンボプラスチン時間（aPTT）検定において、ペプチド１（SEO ID NO:1）の99％ 活性である。 表11は、ペプチド１（SEQ ID NO:1）の２類似体、すなわちともに本発明化合物 類であるペプチド７（SEQ ID NO:11）とペプチド８（SEQ ID NO:12）の間の差を 例示している。ペプチト７（SEQ ID NO:11）は、B₄部分でのNleがMetと置換され ている場合のペプチド１（SEQ ID NO:1）の類似体であり、またペプチド８（SEQ ID NO:12）はB₄部分のNleがChaで置換された場合のペプチド１（SEQ ID NO:1）類似体である。ペプチド８（SEQ ID NO:12）は、aPTTの検定ではペプチド １（SEQ ID NO:1）の約1/3の活性であるが、ペプチド７（SEQ ID NO:11）のaPTT 値はペプチド１（SEQ ID NO:1）のそれと本質的に同じである。トロンビン時間 値については、これらの値は各ペプチドで異なる。ペプチド７（SEQ ID NO:11） はペプチド（SEQID NO:1）の19％の活性しかなく、一方ペプチド８（SEQID NO:1 2）は事実上ペプチド１（SEQ ID NO:1）より活性がある。ペプチド１（SEQ ID N O:1）と類似体類のいずれとも、トロンビン活性の10倍の差が認められる。ADP活 性については、ペプチド８（SEQ ID NO:12）は、ペプチド１（SEQ ID NO:1）の ほぼ1/2の効力があるが、ペプチド７（SEQ ID NO:11）はペプチド１（SEQ ID NO :1）の約3/4の効力である。 表12は、ペプチド１（SEQ ID NO:1）の２個のペニシラミン類似体類の間の差 を例示している。すなわち、ペプチド９（SEQ ID NO: 13）と１０（SEQ ID NO:1 4）であって、いずれも本発明のペプチド類ではない。この表は、B₃部分のArgが Me-Argと交換可能であることを示すために提示されている。ペニシラミン部分の 導入は、全カテゴリーにおいてペプチド９（SEQ ID NO:13）の活性を大幅に低下 させる。ペプチド１０（SFQ ID NO:14）については、ペプチド９（SEQ ID NO:13 ）に見られるトロンビン活性と同じ低下が認められる。しかし、トロンビン時間 はやや低下するのみであるが、ADP活性はペプチド１（SEQ ID NO:1）に比べで６ 培増加した。 表１３は、B₂でのGly残基と種々のD-アミノ酸残基との互換性を例示している 。ペプチド１１（SEO ID NO:15）、１２（SE0 ID N0:16）、１４（SEQ ID N0:18 ）、及び１５（SEQ ID NO:19）は、B₂部分が種々のD-アミノ酸で置換されたペプ チド１（SEQ ID NO:1）類似体類であり、本発明のペプチド類である。ペプチド １３（SEQ ID NO:17）は本発明のペプチドではなく、B₂のGly残基が削除されて いる場合のペプチド１（SEQ ID NO:1）の類似体である。 表１４は、A₁部分での（D）Phe残基の互換性を例示している。ペプチド16-18 （SEQ ID NO:20-22）は、すべて本発明のペプチド類である。ペプチド１６（SEQ ID NO:20）はペプチド１（SEQ ID NO:1）と本質的に同じトロンビン 活性とトロンビン時間を示す。ペプチド１７（SEQ ID NO:21）はペプチド１（SE Q ID NO:1）と本質的に同じトロンビン時間値をもち、より大きいADP値をもつが 、そのトロンビン値において10倍低活性である。これに比べ、ペプチド１８（SE Q ID NO:22）はペプチド１（SEQ ID NO:1）に比べてaPTT値の注目すべき増加を 示すが、トロンビン時間はペプチド１（SEO ID N0:1）の77％の活性であるが、 トロンビン値とADP値はペプチド１（SEQ ID NO:1）のもののわずか半分の活性で ある。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９５年４月１３日 【補正内容】 −原文の77〜81頁− 請求の範囲 １． 式 Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙ （１） 〔式中Ｘは水素、アセチル、又はt-ブチロキシカルボニル基であり、 Ａは、式 Ａ₁-Ａ₂-Ａ₃ （２） のペプチド類似体であって、ここでA₁は（D）Phe、（D）Phg、（D）3-Tiq、N-Me -（D）Pheであり； A₂はProであり； A₃はArgであり； Ｂは式 又は のペプチド類似体であって、ここで B₁はGly； B₂はGly、（D）Tyr、（D）Val、（D）Thr、又は（D）Pro； B₂’は、Arg-Ile-Pro； B₃はArg又はN-Me-Arg； B₄はNle又はPheであり； Ｃは式 −原文の77〜81頁− Asp-C₁-C₂-C₃-C₄-C₅-C₆-C₇-C₈-C₉ （５） のペプチド類似体であって、ここで C₁はPhe又はTyr； C₂はGlu； C₃はGlu又はPro； C₄はIle； C₅はPro又は（D）Ala； C₆はGlu又はAla； C₇はGlu； C₈はTyr、Tyr-Leu、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉は結合又は（D）Gluであり； また、ＹはOH、C₁-C₆アルコキシ、又はモノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル置換 アミノである。〕の化合物。 ２． Ｂが式（3）のペプチドである請求項１に記載の化合物。 ３． Ｂが式（4）のペプチドである請求項１に記載の化合物。 ４． B₄がNleである請求項２に記載の化合物。 ５． ＹがＯＨ又はC₁-C₆アルコキシである請求項１に記載の化合物。 ６． −原文の77〜81頁− である請求項１に記載の化合物。 ７． である請求項１に記載の化合物。 ８． である請求項１に記載の化合物。 ９． である請求項１に記載の化合物。 １０． 製薬活性化合物として使用する請求項１に記載の化合物。 １１． 製薬上受入れられる担体と組合わせた請求項１に記載の化合物を含有す る製剤組成物。 １２． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もあ −原文の77〜81頁− る、静脈又は動脈血栓症状の処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １３． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もある、血管形成手術後の冠 状動脈血栓症の処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １４． 製薬上受入れらわる担体と組合わせる場合もある、急性血管形成手術後 閉塞の処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １５． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もある、体外循環で誘発され る血球減少症の処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １６． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もある、発達中の心筋梗塞の 処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １７． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もある、線維素溶解療法後の 閉塞の処置への請求項１に記載の化合物の用途。 １８． 製薬上受入れられる担体と組合わせる場合もある、体外循環中の血小板 減少症の処置への請求項１に記載の化合物の用途。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｋ 7/00 ＺＮＡ 9455−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，Ｇ Ｂ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＵ，ＬＶ ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＮＬ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ， ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＫ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，Ｖ Ｎ (72)発明者 オウエン，トーマス ジェイ. アメリカ合衆国 45242 オハイオ州 シ ンシナチ キャッスルフォルド レーン 8825 (72)発明者 クルステナンスキー，ジョン エル. アメリカ合衆国 94306 カリフォルニア 州 パオロ アルト ランボウドライブ 3455

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 式 Ｘ−Ａ−Ｂ−Ｃ−Ｙ 〔式中Ｘは水素、1-6個の炭素原子の１個又は２個のアルキル基、2-10個の炭素 原子の１個又は２個のアシル基、カルボベンジロキシ、H₂NC (=NH)-、又はt-ブ チロキシカルボニル基から選ばれるアミノ末端残基であり、 Ａは、式 Ａ₁-Ａ₂-Ａ₃ のペプチド類似体であって、ここでA₁は(D)Phe、(D)Phg、(D)1-Tiq、(D)3-Tiq、 N-Me-(D)Phe、(D)Cha、(D)Chg、(D)Nag、又は(D)Thgであり； A₂はPro、Pip、又はAztであり； A₃はArg、Lys、Orn、又はhArgであり； Ｂは式 又は のペプチド類似体であって、ここで B₁はGly、Ala、(D)Ala、Val、(D)Val、又はGly-Gly； B₂はGly、Gly-Gly、Gly-Gly-Gly、Gly-Gly-Gly-Gly、 又は任意の（D）アミノ酸； B₂’は、Arg-Ile-Pro又はLys-Ile-Pro； B₃はArg、hArg、N-Me-Arg、又はLys； B₄はNle、Phe、Met、又はChaである。 Ｃは式 Asp-C₁-C₂-C₃-C₄-C₅-C₆-C₇-C₈-C₉ （５） のペプチド類似体であって、ここで C₁はPhe、pClPhe、pNO₂Phe、Tha、Npa、Tyr又はTrp； C₂はGlu又はAsp； C₃は任意のアミノ酸； C₄はIle、Val、Leu、又はPhe； C₅はPro、Hyp、Sar、NMePgl、又はD-Ala； C₆は任意のアミノ酸； C₇は任意のアミノ酸； C₈はTyr、Glu、Pro、Ala-Cha、Tyr-Cha、Tyr-Leu、及びAla-Tyr； C₉は結合又はGlu、(D)Glu、Gln、Pro、Leu-Gln、Asp-Glu、又はLeu-Proであり ； また、ＹはOH、C₁-C₆アルコキシ、アミノ、モノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル 置換アミノ、又はベンジルアミノから選ばれるカルボキシ末端残基である。〕の 化合物。 ２． Ｘが、水素、アセチル、サクシニル、又はt-ブチルオキシカルボニルであ る請求項１に記載の化合物。 ３． A₁が、(D)Phe、(D)Chg、(D)Cha、(D)Phg、(D)1-Tiq、(D)3-Tiq、又はN-Me -(D)Pheであり、A₂がProであり、 A₃がArg又はLysである請求項１に記載の化合物。 ４． Ｂが式 のペプチドであり、此でB₁はGly、Ala、又はGlｙ-Gly；B₂はGly、Gly-Gly、又は 任意の（D）アミノ酸；B₃はArg、又はN-Me-Arg；B₄はNle、Phe、Cha、Metである 請求項１に記載の化合物。 ５． Ｂが式 のペプチドであり、此でB₁がGly、Ala、又はGly-Gly；B₂'がArg-Ile-Pro、又はL ys-Ile-Pro；B₃がArg、又はN-Me-Arg；B₄がNleである請求項１に記載の化合物。 ６． C₁はPhe、Npa、又はTyr； C₂はGlu又はAsp； C₃は任意のアミノ酸； C₄はIle又はVal； C₅はPro、Hyp、又は(D)-Ala； C₆は任意のアミノ酸； C₇はGlu、AspまたはAla； C₈はTyr、Glu、Tyr-Leu、Tyr-Cha又はAla-Cha； C₉は結合、(D)Glu、Glu、Gln、Leu-Gln、又はLeu-Proである請求項１に記 載の化合物。 ７． A₁が(D)Phe、(D)Chg、(D)Cha、(D)Phg、(D)1-Tiq、(D)3-Tiq、又はN-Me-( D)Phe；A₂がPro；そしてA₃がArg又はLysである、請求項２に記載の化合物。 ８． Ｂが式 又は 〔式中 B₁はGly、Ala、又はGly-Gly； B₂はGly、Gly-Gly、又は任意の（D）アミノ酸； B₂’は、Arg-Ile-Pro又はLys-Ile-Pro； B₃はArg、又はN-Me-Arg； B₄はNle、Phe、Cha、又はMetである〕のペプチドである、請求項７に記載の化 合物。 ９． C₁がPhe、Npa、又はTyr； C₂がGlu又はAsp； C₃が任意のアミノ酸； C₄がIle、又は、Val； C₅がPro、Hyp、又は(D)Ala； C₆が任意のアミノ酸； C₇がGlu、Asp、又はAla； C₈がTyr、Glu、Tyr-Leu、Tyr-Cha又はAla-Cha； C₉が結合、(D)Glu、Glu、Gln、Leu-Gln、又はLeu-Proである、請求項８に 記載の化合物。 １０． ＹがOH、C₁-C₆アルコキシ、又はモノ‐又はジ‐（C₁-C₄）アルキル置換 アミノである、請求項９に記載の化合物。 １１． B₄がNleである、請求項１０に記載の化合物。 １２． Ｘが水素、アセチル、又はt-ブチルオキシカルボニルである、請求項１ に記載の化合物。 １３． A₁が(D)Phe、(D)Phg、(D)3-Tiq、又はN-Me-(D)Phe；A₂がPro；そしてA₃ がArgである、請求項１２に記載の化合物。 １４． Ｂが式 又は 〔式中B₁はGly； B₂はGly、(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr、又は(D)Pro； B₂’は、Arg-Ile-Pro； B₃はArg、又はN-Me-Arg； B₄はNle、又はPheであるが、但しB₂が(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr又は(D)Proの時 には、B₄がNleであることを条件とする〕のペプチドである請求項１３に記載の 化合物。 １５． C₁がPhe、又はTyr； C₂がGlu； C3がGlu又はPro； C₄がIle； C₅がPro、又は(D)Ala； C₆がGlu又はAla； C₇がGlu； C₈がTyr、Tyr-Leu、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉が結合、又は(D)Glu である、請求項１４に記載の化合物。 １６． ＹがOH、C₁-C₆アルコキシ、又はモノ‐またはジ‐（C₁-C₄）アルキル置 換アミノである、請求項１５に記載の化合物。 １７． B₄がNleである、請求項１６に記載の化合物。 １８． Ｘが水素、アセチル、又はt-ブチロキシカルボニル基； A₁が(D)Phe、(D)Phg、(D)3-Tiq、又はN-Me-(D)Phe； A₂がPro； A₃がArg； Ｂが式 のペプチドであって、ここで B₁はGly； B₂はGly、(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr、又は(D)Pro； B₃はArg； B₄はNle、又はPheであるが、但し、B₂が(D)Tyr、(D)Val、(D)Thr、又は(D)Pro の時には、B₄がNleであることを条件とし； C₁はPhe； C₂はGlu； C₃はPro； C₄はIle； C₅はPro； C₆はGlu又はAla； C₇はGlu； C₈はTyr、Tyr-Cha、又はAla-Cha； C₉は結合、又は(D)Glu；また ＹはOH又はC₁-C₆アルコキシである、 請求項１に記載の化合物。 １９． ＹがOH又はC₁-C₆アルコキシである請求項１８に記載の化合物。 ２０． B₄がNleである、請求項１９に記載の化合物。 ２１． である請求項１に記載の化合物。 ２２． である請求項１に記載の化合物。 ２３． である請求項１に記載の化合物。 ２４． である請求項１に記載の化合物。 ２５． 請求項１の化合物の治療有効量を投与することからなる、静脈又は動脈 血栓症状にかかった患者の症状を処置する方法。 ２６． 血栓症状が血管形成手術後の冠状動脈血栓症で ある、請求項２５に記載の方法。 ２７． 血栓症状が急性血管形成手術後閉塞である、請求項２５に記載の方法。 ２８． 血栓症状が体外循環で誘発される血球減少症である、請求項２５に記載 の方法。 ２９． 血栓症状が発達中の心筋梗塞である、請求項２５に記載の方法。 ３０． 血栓症状が線維素溶解療法後の閉塞である、請求項２５に記載の方法。 ３１． 血栓症状が体外循環中の血小板減少症である、請求項２５に記載の方法 。 又は