TW295590B - - Google Patents

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295590五、發明説明（i ) A7 B7 發明領域 本發明是有關一些作爲有效抗凝血劑及抗血小板劑的 新穎肽類。 發明背景 抗凝血劑在藥理治療上是一種有效的治療劑，例如， 急性深部靜脈栓塞，肺栓塞，急性動脈末梢栓塞，心肌梗 塞，猝發和散佈的血管內凝集。抗凝血劑的預防性給藥咸 信可預防風濕性或動脈硬化性心臟病患者栓塞的再發，且 可預防手術時必然的血栓性栓塞併發症》給予抗凝血劑也 顯示可用於治療冠狀動脈和腦血管的疾病。動脈栓塞，尤 其是發生在供給心肌和腦的動脈時，會導致死亡。 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 以血小板爲媒介的動脈栓塞，是上述章節所列狀況的 主要病理機轉。因此，組合血小板凝集和凝血酶原的抑制 作用，提供了設計抗栓塞劑一個有用的方向。纖維蛋白原 藉由Ar g — G 1 y — As p (RGD)序列，結合於經 活化的血小板醣蛋白（GP) nb/ma接受器（ integrin族的一員），是由多種協同劑（agonists)誘導 之血小板凝集反應的必要步驟。F.A. Marguerie，et al. ,J. Biol. Chem. 254, 5357-5363 (1979); D. Collen, et a 1 . , Thrombolysis in Cardiovascular Disease, D. Julian, e t a 1. (eds), Marcel Dekker, Inc., New

York ( 1 9 8 9 ); pp 45- 6 7。此結合可被線狀或環狀含有 RGD 之合成狀所抑制。E.F. Plow, etal.，Prog. 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -4 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（2 )

Hemostas. Thromb. 9, 117-156 (1989); E.F. Plow, et a 1. , Proc. Natl. Acad. Sc i. , USA82, 8 0 5 7 -- 8 0 6 1 ( 1985) ° 最近的研究顯示，結合凝血酶原抑制作用和血小板醣 蛋白（GP) nb/ma ( integrin)接受器阻斷作用 於單一重組肽，可產生抗凝集和抗血小板活性。F. C. Church, et al., J. Biol. Chem. 266, 11975-11979 ( 1 9 9 1 )。另外，最近亦有報告揭示肽凝血酶抑制劑，其組 合具有催化作用與陰離子結合的外位（exosite)序列抑 制劑的組成份。J.M. Maraganore et al.，Biochemistry ,29, 7095-7101 (1990) and J. DiMaio, et al., J.

Biol. Chem.，265，2 1 698-2 1 703 ( 1 990 )。決定這些肽類 活性的關鍵特徵是兩個組份之分隔狀態，該組份結合在凝 血酶活性部位且以適當長度的間隔子區隔。這些研究顯示 ，欲獲得最大的凝血酶抑制作用，這些肽類在抑制劑催化 部位與陰離子結合之外位序列間必須至少含有四個胺基酸 殘基。這些報告支持交叉連結研究所得的結果，這結果顯 示結合在凝血酶之陰離子結合外位之水蛭素相似物的 NH2終端，與位於凝血酶催化位置之S e r — 1 9 5的 羥基基團間的距離大約是1 8 - 2 0A。B. Furie, et al., J. Biol. Chem. 257, 3875-3882 (1982) and W.

Bode, et al., EMBO J., 8, 3467-3475 (1989)° 國際合作條約申請案公開號WO 92/10575 (在1 9 9 2，6月2 5日公開)，明確地揭露血小板活化 本紙張尺度適用中國國家梯準（CNS > A4規格（2丨0 X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -5 - 附件：二第8310S188 號專利申諳案中文説明書修正頁 年 f日修正 民國8S年3月修正 五、發明説明（3 )[ …匕·^ 作用和凝血酶的三功能性抑制劑。這些抑制劑由醣蛋白 Π b/m a之抑制部分，以及凝血酶抑制部分組成，該抑 制部份由結合及抑制凝血酶活性部位的主導催化位置的部 分組成。主導催化位置的部分藉著一個連接子，與陰離子 結合之外位連接部分結合在一起，此連結物有一據估計長 度在1 8 A到4 2 A之間之中心鏈》 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 本案申請人發現，當凝血酶催化位置之抑制子（例如 ’ （D)Phe — Pro— Arg，或其相似物），藉著 環狀 A r g — G 1 y— A s ρ-Χ % 架橋（bridging)， 序列，和陰離子結合之外位連接部分（水蛭素5 5 _ 6 5 相似物）偶合時，可獲得組合血小板醣蛋白（GP) nb /Π a接受器抑制作用和凝血酶之催化抑制作用及陰離子 結合之外位抑制作用之三功能性肽類。此外，當提供雙硫 鍵將凝血酶催化位置抑制子連接至水姪素55-35相似物之 半胱胺酸是（右旋）結構時，肽類的血小板凝集抑制作用 和抗凝集活性明顯了。當環狀A r g — G 1 y— A s p -X 架橋〃序列中之正白胺酸被苯氨基丙酸取代時，抑制 作用會額外增加。這類新化合物由於雙重作用型式和增加 之效力，將提供有效的輔助治療效果。 圖形簡單的描沭 條狀之第1圖顯示’肽類2對大白鼠之F e C$3動 脈閉合時間之影響。控制組是以無陰影之條狀表示，而肽 類2是以陰影之條狀表示。在此圖中，P代表或然率，而 本紙張尺度適用中國國家標车（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 6 5 5 9 2 η

A B 85. Γ 一- —五、發明説明（

***" ' imI η代表受測動物之數目。 條狀之第2圖顯示，肽類2d (非屬於發明）對大白 鼠之F e C j?3動脈閉合時間之影響。控制組是以無陰影 之條狀表示，而肽類2 d是以陰影之條狀表示。在此圖中 ，P代表或然率，而η代表受測動物之數目。 第3圖顯示肽類1對經凝血酶擴大之全血凝集反應。 (▲)表示人體血液樣品、（+ )代表大白鼠血液樣品。 第4圖顯示肽類1對麻醉之狗的凝血酶時間的影響。 (▲)表示 5nmo 1/kg/m i η 速率。（+ )表示 1 nmo 1/kg/m i η速率。（)代表輸注期。 第5圖顯示肽類1對被麻醉之狗的a ΡΤΤ的影響。 (▲)表示 5 nmo 1/kg/m i η 速率。（+ )表示 1 nmo 1/kg/m i η速率。（)表示輸注期。 第6圖顯示肽類1輸注對狗的凝血酶一血小板凝集之 影響。（▲)代表 5nmo 1/kg/m in 速率。（+ )表示1 nmo 1/kg/m i η速率。（)表示輸注 期。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 第7圖顯示肽類1對被麻醉之狗的出血時間的影響。 (▲)表示 5nmo 1/kg/m i η 速率 β ( + )表不 1 nmo 1/kg/m i η速率。（)表示輸注期。 第8圖顯示肽類1輸注對被麻醉之狗的血小板數之影 響。（▲)代表5nmol/kg/min速率。（+) 代表1 nmo 1 / k g/m i η速率。（_)表不輸注期 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉Α4規格（210X297公慶） 五、發明説明（5 第9圖顯 (▲)代表5 1 n m ο 1 / 第1 0圖 。（▲)代表 表 1 n m ο 1 條狀的第 動脈閉合時間 1以陰影條狀 受測動物之數 如下所示 寫，於此詳細

示肽類1對被麻醉之狗的平 nmo 1/kg/mi η 速 kg/min速率。（) 顯示肽類1輸注對被麻醉之 5nmo 1/kg/mi η /kg/min速率。（ 1 1圖顯示，肽類1對大白 的影響。控制組以無陰影條 表示》在此圖中，P表示或 目。 本發明之詳細描沭 氨基酸，氨基終端和羧基終 說明全文中使用。 均血壓 率。（ 表7K輸 狗的心 速率。 )表示 鼠之F 狀表示 然率， 之影響。 + )代表 注期》 跳的影響 (+ )代 輸注期。 e C 3 ，而肽類 而η代表 —^^1— I I m i I nn _ (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 端基團的一般縮 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 G 1 y (或G) —glycine A 1 a (或A) —alanine V a 1 (或V) —valine Leu (或 L) — leucine I 1 e (或 I ) — isoleucine P r o (或P ) —proline P h e (或F ) —phenylalanine T r p (或W ) — tryptophan S e r (或S ) —serine Me t (或M) —methionine Thr (或T)— threonine 衣紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4規格（210X297公釐） ~ 8 - 經濟部中央標隼局員工消費合作社印裝 A7 --—___—- 五、發明説明（6 ) C y s (^C ) — cysteine T y r (或 Y) - tyrosine G 1 η (或Q ) —glutamine A s n (或 N) — asparagine A s p (或D ) — aspartic acid G 1 u (或E ) — glutamic acid L y s (或K) — lysine A r g (或R) — arginine H i s (或 H) — histidine N 1 e — norleucine C h g — cyc1ohexy1g 1 ycine C h a — yS — cy c 1 ohexy 1-a 1 an i ne

Pip —pipecolic acid, pipecolinic acid,或 2-piperidine carboxylic acid A z t — 2-azetidine carboxylic acid 0 r n — ornithine h A r g — homoarginine N—Me—Arg— N-methy1arginine N — M e ( D ) P h e — N-methyl-D-phenylalanine T h g — 3 - t h i e n y 1 g 1 y c i n e N a g — naphthylglycine 1 — T i q — 1 , 2 , 3 , 4-Tetrahydroisoquiηo1ine - 1- -carboxylic acid 3 — T i q — 1, 2, 3, 4-Tetrahydroisoquino 1ine-3- 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -9 - 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 A 7 B7 五、發明説明（7 ) carboxylic acid P h g — phenylglycine p C 1 P h e — para-ch1oro-pheny1 a 1 anine p N 0 2 P h e — para-nitro-pheny 1 a 1 anine T h a — 3-(2-thieny1-a 1 anine N p a — /9 - ( 2-naphthy 1 )a 1 an i ne Hyp— hydroxypro1ine S a r — sarcosine (N-methy 1 g1yc i ne ) N—Me—Phg— N-methy1-pheny1g1ycine Pen — penicillamine

Cys' (5 當2個或更多的氨基酸結合而形成肽類時，水分子會 被除去，而剩下的每一個氨基酸在此申請書中稱爲殘基。 因此殘基^是指缺少末端氨基基團的一個氫原子的氨基 酸，以及/或缺乏末端羧基基團的羥基的氨基酸。使用可 被接受的術語，當一個長劃符號（-）出現在氨基酸或氛 基酸衍生物之三個字母符號之前（表示失去氫）以及/或 之後（表示失去羥基），即表示殘基。

Cys ~殘基如分子式（5)所示，顯示半胱胺酸殘 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁)

T 10 - A7 B7 295590 五、發明説明（8 ) 基在它的R -基團側鏈沒有硫化物部分。如分子式（3 ) 和（4 )所示，（D) Cy s >殘基是藉著雙硫鍵連結。 而雙硫鍵部分是藉著（D) Cy s >殘基的伸甲基部分， 和（D) Cy s z殘基鍵結。如分子式（6)所示： / CH2 - Υλ

—V-NH C \ ^ 注意分子式（5 )和（6 )通常可表示D —或L —殘基。 如下所示多種保護基團的一般楠寫，於此詳細說明全 文中使用。 n^i ^ί>— —^—ί-—»^1 d· ^^^1 1^11 n nn \eJ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

/Λ2 -V-NH

S-S 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 B 0 c = t-butyloxycarbonyl B z 1 = benzyl Μ b z = p-methyl-benzyl C h X 二 cyclohexyl Τ 0 s 或 T o s y 1 = p-toluenesulfon C b 2 = carbobenzyloxy Β r Z = broiobenzyIoxycarbony1 S u C = s u c c i n y 1 A c — a c e t y 1 P A M — phenylacetainidomethyl 烷基和烷氣基的烷基部分包含有直鏈，支鏈或環形院 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（21〇X 297公釐） 11 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（9 ) 基基團，例如，甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁 基，三級—丁基，戊基，異戊基，二級—戊基，環戊基， 己基，異己基，環己基和環戊基甲基。具2到10碳原子 的醯基基B包含有直鏈，支鏈，環形，飽和的和不飽和的 醯基，而道些基團中每一個基團含有1或2個羰基，例如 乙醣基，苯甲醯基，琥珀醯基，蘋果醣基，和戊二醯基。 鹵素基團是氰，氛，溴或碘基團。 在此篇中所使用到的名詞 ' 任何氨基酸'包括天然產 生的氨基酸，以及其他在製備天然產生肽類的合成相似物 時，肽類化學方法中一般需利用到的|非蛋白質# α —氣 基酸。這些天然產生的氨基酸是glycine (甘氨酸）， alanine (胺基丙酸），valine (練草胺酸），leucine (白胺酸），iso leucine (異白胺酸），serine (絲胺 酸），methionine (甲硫胺酸），threonine (滋利胺基 酸），phenylalanine (苯丙胺酸），tyrosine (酷胺酸 )，tryptophan (色胺酸），cysteine (半胱胺酸）， proline (脯胺酸）* histidine (組織胺酸）， asparatic acid (天門冬胺酸），asparagine (天冬素） ，glutamic acid (魅胺酸），glutamine (魅胺）， arginine (阿金氣基酸），ornithine (鳥胺酸），及 lysine(離胺酸）。’非蛋白質# α —氨基酸的範例有 nor leucine (正白胺酸），norva line (正顧草胺酸）， alloisoleucine (異白胺酸），homoarginine (同質阿金 氣基酸），thiaproline (硫脯胺酸），dehydroproline 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐）10 -1Z - ^1 m n ml mu 一OJ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（10 ) (去氫脯胺酸）’hydroxyproline(Hyp)(經脯胺酸）’ homoserine (同質絲胺酸）’ cyclohexylglycine(Chg)( 環己院甘氨酸）’ α -amino-n-butyric acid(Aba) ( α — 氨基—η — 丁酸），cyclohexylalanine(Cha)(環己院胺 基丙酸），aminophenylbutyric acid (Pba)(氨苯基丁 酸），phenylalanines (苯胺基丙酸）的苯基在鄰位，間 位或對位被一或二個下列基團所取代，一個（Ci — C4) 烷基，（Ci 一 C4)烴氧基，鹵素，或氮基，或被 methylenedioxy group (亞甲二氧基），0-2-和 3-thienylalanine，Θ -2 和 3-furanylalanine ( /9 — 2 和 3-呋喃基胺基丙酸），召-2-，3-和3-thienylalanine * β -(benzothieny1-2- and 3-y 1 ) alanine，/3 - (1-和 2-naphthyl)alanine ( /9 — 1 —和 2 —某基）胺基丙酸，serine的O-alkylated (絲胺酸的氧 一院基）衍生物，threonine (滋利胺酸），或 tyrosine (酪胺酸），S-alkylated cysteine (硫—院基 化半腕胺酸），tyrosine的0-sulfate ester (酪胺酸氧 硫酸鹽醋類），3,5-dicodotyrosine(3，5 —二碘酪胺 酸）及天然產生氨基酸的D-異構物。 天然的氨基酸，除glycine (甘氨酸）外，都含有一 個不對稱中心碳原子。除非有其他特別指明，在這裏的光 學活性氨基酸都是左旋-組態。帶有R取代基的碳原子的 立體化學所顯示的不是右旋-，就是左旋-組態。爲達揭 露的目的，屬於右旋組態的氨基酸可描寫爲D-氨基酸，（ 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS M4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 13 - 295590 A7 B7 五、發明説明（n ) D)氨基酸，或當使用單一字母命名系統時’較少例子中 的字母，如 D-phenylalanine， D — P h e ’ （ D ) P h e或f都是可被接受的寫法。依照慣例’在此肽類結 構的寫法是氨基終端寫在鏈的左邊，而羧基終端是寫在鏈 的右邊。 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 分子式1的多肽類可和任何無毒，有機或無機酸形成 藥學上可接受的酸加成鹽類。舉例而言，可形成合適的酸 加成鹽類的無機鹽包括有氯化氫，溴化氫，硫酸和磷酸， 以及酸金屬鹽如正磷酸單氫鈉（sodium monohydrogen orthophosphate)和硫酸氫鉀，舉例而言，可形成合適鹽 類的有機酸包括有單的，雙及三碳酸，而這些酸包括如醋 酸（乙酸），三氟醋酸，羥基乙酸，乳酸，丙酮酸，丙二 酸，丁二酸，戊二酸，反丁烯二酸，蘋果酸，酒石酸’檸 檬酸，抗壞血酸，順丁烯二酸，氫氧順丁烯二酸，苯甲酸 ，氫氧苯甲酸，苯乙酸，桂皮酸，水楊酸，2 -苯氧基苯 甲酸及磺酸如甲烷磺酸和2 -氫氧乙烷磺酸。羧基終端氣 基酸部分的鹽類包括與任何合適的無機或有機鹼所形成的 無毒羧酸鹽。舉例來說，這些鹽類包括一些鹼金靥，例如 ，鈉和鉀；鹼土金屬，如鈣和鎂；ΠΙΑ族的輕金屬，包括 鋁；以及有機一級，二級和三級胺，包括三烷基胺，包括 三乙胺，普魯卡因，雙笮胺，乙烯胺，N，N > —雙笮乙 烯二胺，二氫松香胺，N — ( lower)烷基六氫吡啶，以 及任何其他適當的胺。 分子式1的化合物是新穎肽類，其在單一的重組肽類 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 14 - 五、發明説明（12 ) 中合併有凝血酶抑制作用和血小板醣蛋白（GP) nb/ 瓜a接受器拮抗作用。每一個本發明的肽類包含一個凝血 酶催化部位抑制子（也就是A部分），而此部分藉著包含 有一個連接性'^橋^的連接部分與凝血酶的陰離子結合外 位抑制子（即C部分）結合在一起，以及一個作爲血小板 GP nb/ma接受器拮抗劑（即B部分）的環狀 R G D — X序列。 A部分是指凝血酶的直接催化部位抑制子。這個直接 催化部位部分和凝血酶的活性部分結合在一起，並且抑制 或減低凝血酶的蛋白質分解活性。C部分是指一個具有結 合陰離子之外位連接部分之特徵的凝血酶抑制子。由於C 部分之高突變現象在結構上和水蛭素的羧基終端部分相似 ，因此推測C部分很容易與凝血酶的陰離子結合外位部分 結合在一起。 經濟部中央標準局員工消费合作社印製 B部分包含有二個官能（功能）部分--介於催化部 位抑制子（A部分）與陰離子結合之外位抑制子（C部分 )之間的連接性^橋^，以及環狀RGD — X醣蛋白nb /HI a抑制部分。催化部位抑制子（A部分）與陰離子連 接的外位抑制子（C部分）之間的連接性'^橋^是環狀 RGD — X序列的鹼基。此橋包含Bi部分，Pro，( D) Cys >之殘基，以及連接B部分的二個（D) C y s >殘基之雙硫鍵，咸信此橋可作爲催化部位抑制子 序列和陰離子結合的外位辨識序列之間的適合間隔子。由 於在A 3和P r 〇之間的天然產生之亞醯胺鍵裂解的速率 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁} 15 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明 ( 13) 1 I 較 其 他 氮基 酸 殘 基 的 醢 胺 鍵 低 很 多 • 因 此此 連 接 性 橋 在 1 | B 1和A 3 部 分 之 間 含 有 — 個 脯 胺 酸 殘 基 。理 論 上 9 雖 然 本 1 I 發 明 尙 未 被 此 理 論 {TWO 確 立 > 此 亞 醢 胺 鍵 的 存在證 明 直 接 催 化 /--V 諸 1 1 鍵 先 部 位 部 分 的 抑 制 作 用 0 當 然 9 可 預 期 的 是， 其 他 醯 胺 被 閲 讀 1 取 代 之 氨 基 酸 將 扮 演 相 同 功 能 的 角 色 9 如還 原 醯 胺 類 y 酯 背 面 之 ί 類 9 酮 類 和 硫 化 物 0 注 意 事 1 i B 部 分 的 環 狀 R G D — X 醣 蛋 白 II b / III a 抑 制 部 分 項 再 填 1 Λ > 也 就 是 在 B 部 分 的 二 個 D — C y S 殘 基之 間 的 氨 基 酸 殘 % 本 頁 衣 I 基 9 會 抑 制 供 維 蛋 白 原 與 其 接 受 器 即 醣蛋 白 II b / III a '—， 1 I 9 之 間 的 交 互 作 用 0 B 部 分 的 環 狀 R G D - X 醣 蛋 白 II b 1 1 I / III a 抑 制 部 分 可 包 含 6 到 1 0 個 氨 基 酸， 如 分 子 式 ( 3 1 1 醣 蛋 白 訂 ) 及 ( 4 ) 所 示 0 較 好 9 B 部 分 的 環 狀 R G D X 1 II b / III a 抑 制 部 分 是 分 子 式 ( 3 ) ， 而且 含 有 如 分 子 式 1 1 ( 3 ) 所 述 的 6 到 9 個 氨 基 酸 0 1 1 爲 達 本 發 明 的 巨 的 9 可 瞭 解 到 A α鍵結至氨基終端部 1 分 $ 而 A 3是和I 5 I • 〇殘基鍵結 此殘基是在B部分的N 1 I — 終 端 或 左 邊 0 在 C 部 分 的 N 一 終 端 或 左邊 的 A S P 殘 基 1 1 I 鍵 結 至 B 部 分 的 C — 終 端 或 右 邊 的 B α殘基 1 1 在 化 學 化 合 物 之 任 何 上 位 基 團 中 > 有些 特 定 基 團 是 較 1 合 適 的 0 串 aa^r m 者 較 喜 歡 分 子 式 ( 1 ) 的 肽衍 生 物 ♦ 其 中 L 1 X 是 氫 9 乙 醯 基 9 琥 珀 醯 基 9 或t — 丁 氧 羰 基 1 A 1 是 ( D ) P h e ( D ) C h g 3 ( D ) 1 I C Η a » ( D ) P h g ( D ) 1 — T i Q 1 1 1 ( D ) 3 — T • Q 9 或 N 一 Me — ( D ) 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（ 210X297公釐）_ π _ A7 B7 五、發明説明（14 ) P h e

2 A

3 A

B

B

2 B

2 B p A 分 G G , A 是是是是是酸是 o Γ Γ 子 g式 y s yNly L 3 或^

A 子 G 分或 或 a G 3 i ( y 式 1 子 G 分 ’ 是 y B 1 當 I g 式 4 基 氨 \1/ ; D y ( 1 G 任 I 或 ； y y 時 ο Γ ρ I 6 式 子 分 是 B 當 ο s y L 或 4 時 6 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

3 B

4 B c 2 c A N p G 是 是是是 Γ 或， 2 6

g Γ A - 6 Μ i N t 6 M a h c 6 h p Γ y T 或 a p p s N A ’ 或 e u h '—-

、1T 3 c 4 c 5 c 6 c 經濟部中央標隼局員工消費合作杜印製 T c 8 c 是 是 是 是 是是

酸V 基或 氨 e 何 *-任 I a -< A \1/ D /(\ 或 P y Η ο Γ ρ 酸 基 氨 何 任

a A 或 P S A u -il G

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r y T u 6 L a h c I a IX A 或 a h c , G 鍵 i 學 u 化 是 L 9 c γ c 基 羥 V3/ 是

D 或 n e c

u o 1 Γ G p » I u u -----1 G L y X ο k li a

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C

基 氨 的 代 取 被 基 烷 4 C 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 17 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印聚 A7 B7 五、發明説明（15 ) 下列分子式（1 )化合物也是較適合的，其中 X 是氫，乙醯基，琥珀醯基，或t-丁氧羰基 A ! 是（D)Phe，（D)Phg，（D)3 — T i q > (D)或 N-Me - (D) Phe ; A 2 是 P r o ; A 3 是 A r g ; B 是分子式（3)或分子式（4)； B 1 是 G 1 y ; B 2 是 Gly，（D)Tyr，( D ) V a 1 > ( D) Thr ，或（D) Pro ，當B是分子式 (3 )時； B 2 ^ 是Arg— lie — Pro，當B是分子式（ 4 )時； B 3 是 Arg 或 N— Me— Arg ; B 4 是Nle或Phe但是當

Bj(D)Tyr，（D)Val，（D) Thr 或（D) Pro 時，則 B4SN1 e ; C i 是 Phe 或 Tyr; C 2 是 G 1 u >· C 3 是 Glu 或 Pro; C 4 是 I 1 e ; C 5 是 Pro 或（D)Ala; C 6 是 Glu 或 Ala; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X25»7公釐} (請先閱請背面之注意事項再填寫本頁) -a _ 18 _ A 7 B7 五、發明説明（16) C 7 是 G 1 u ; C 8 是 Tyr，Tyr-Leu，Tyr —Cha 或 A1 a — Cha ; C 〇 是化學鍵或（D)Glu;且 Y 是羥基，Ci— Ce烷氧基，或單或雙—（ C4)烷基被取代的氨基。 下列分子式（1 )的肽衍生物是特別適合的，其中 X 是氫，乙醯基，或第三丁氧羰基； A X S(D)Phe，（D)Phg，( D ) 3 -T i q 或 N — Me — (D) Phe ; A 2 是 P r o ; A 3 是 A r g ; B 是分子式（3 ); B ! 是 G 1 y ; B 2 是 Gly，（D)Tyr，（D)Val ，( D)Thr，或（D)Pro; B 3 是 A r g ; B 4 是Nle或Phe但是當 B 2是（D)Tyr，（D)Val ，( D ) Thr ，或（D) Pro 時，則 B4 是 N1 e y C l 是 P h e ; C 2 是 G 1 u ; 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) J. 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 19 - A7 A7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 B7 五、發明説明（17) C 3 是 P r 〇 ; C 4 是 I 1 e : C 5 是 P r 〇 ; C 6 是 Glu 或 Ala: C 7 是 G 1 u ; C 8 是 Tyr，Tyr— Cha 或 Ala — Cha » C 9 是化學鍵或（D)Glu;且 Y 是羥基，（：1_(：6烷氧基。 精於此技術的人可藉由多種方法，製備本發明的肽類 。而道些方法包括有，但並非特定的，固相依序法，其使 用已建立的自動方法諸如使用自動肽類合成器來完成。在 此方法中，氨基被保護的氨基酸結合在樹脂支持物上 。所使用的樹脂可以是用在多肽類的固相製備技術中的任 何一種逋用的習知樹脂，特別是聚苯乙烯，其與0. 5到 3百分比的二乙烯苯交聯，而此二乙烯苯不是經氣甲基化 就是經羥甲基化，而能提供結合部位，以便和最先導入的 α —氮基被保護的氨基酸形成酯類。 經甲基樹脂的實例，在Boctanszky et al., C h e m . Ind. (London) 38. 1 5 9 7 - 9 8 ( 1 9 6 6 )已有描述。而由 B i 〇 R a d L a b o r a t o r i e s，R i c h m ο n d，C a 1 i f o r n i a 所製得之氣甲 基化樹脂已是商業上可購得的物質。此樹脂的製備在 Stewart et al., 'Solid Phase Peptide Synthesis^ ( F r e e m a n & C o .，S a n F r a n c i s c o 1 9 6 9 )第 1 章，1 〜6 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) Α4規格（210X297公釐） »1^ ^ϋ· I -- . ^^^1 '衣— (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、?τ -20 - 經濟部中央標準局員Η消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（18) 頁已有描述。被保護的氣基酸可藉由Gisin, H e 1 v , C h e m . Acta. 56，1476 (1973)所述方法而結合在樹脂上。舉例 來說，欲製備羧基終端是（D) G 1 u殘基的多肽，則在 大約50°C時，令Bo c - D — G 1 u (Bz 1 )铯鹽與 氯甲基化的聚苯乙烯偶合。 在α -氨基酸和樹脂支持物偶合之後，可藉由使用任 何合適的步驟，例如使用在二氯甲烷中的三氟醋酸，單獨 使用三氟醋酸，或鹽酸（於二噁烷中）除去保護基團。去 保護步驟是在0°到室溫的溫度下進行。其他標準的裂解 試劑和去除特定^ 一氨基保護基團的條件也可被使用。而 當α -氨基酸的保護基團去掉後，其他的^ 一氨基被保護 的氨基酸則依期望的順序逐步偶合。或者在與樹脂支持之 氨基酸序列偶合之前，藉溶液方法來使多重氨基酸基團偶 合。 導入多肽序列中每一個氨基酸所使用的α -氨基酸保 護基團’可以是在此技術中已知的任何保護基團。而α — 氨基酸保護基團的種類可預期是下面幾類（1 )醯基類保 護基團諸如：甲醯基（醛基），三氟乙醯基，酞醯基，甲 苯磺醯’苯磺醯，硝基苯亞磺醯基，三苯甲基亞磺醯基， 鄰-硝基苯氧乙醢和a -氯丁醯；（2)芳香族脲酯類保 護SB ’如苯甲氧羰基和被取代的苯甲氧羰基，如對一氯 苯甲氧羰基，對-氮苯甲氧羰基，對一溴苯一氧羰基，對 —甲氧苯甲氧羰基，1—(對一二聯苯）一1—甲基乙氧 羰基’ a ，a_二甲基一 3，5_二甲氧苯氧羰基和二苯 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -21 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A 7 B7 五、發明説明（19 ) 甲氧羰基；（3)脂肪族脲酯類保護基團，如三級-丁氧 羰基（Boc)，二異丙基甲氧羰基，異丙氧羰基，乙氧 羰基和丙烯基氧羰基；（4)環烷脲酯類保護基團’如環 戊氧羯基，金剛院氧羰基（adamantyloxycarbonyl)和 環己氧羰基；（5)硫脲酯類保護基團，如苯硫羰基；（ 6 )烷類保護基團，如三苯甲基（trityl)和苯甲基；以 及（7 )三烷基矽烷基團，如三甲基矽烷。而較運當的a -氨基保護基團是三級-丁基氧羰基。 選擇適用的偶合試劑是屬於在本技術的專業領域之中 。欲加入之氨基酸爲G 1 η，A s η或A r g時，特別適 當之偶合試劑是N，N > —二異丙基氰胺和1 —羥基一苯 基疊氮（Ι-hydroxy-benzotriazole)。而這些試劑使用 時要避免睛（nitrile)和內醯胺的形成。其他的偶合試 劑是（1 )碳化二亞胺（carbodiimides)(例如，N， N> —二環己烷氰胺和N —乙基_N/_ (r_二甲基氣 基丙基氰胺）；（2 )氰胺（cyanamides)(如，N，N —二苯甲基氰胺）；（3 )乙嫌酮胺（Ketenimines); (4 )異曙唾鹽（isoxazolium salts)(例如，N — 乙 基一 5_苯基—異_唑基—3>_磺酸鹽；（5)含有1 到4個氮原子在環上之芳香族特性之雜環醯胺的單環氮， 諸如咪唑啶，吡唑啶，和1 ，2，4_三唑啶。有用的特 別雜環醯胺包括N，N > -羰基二咪唑和N，N_羰基一 二一 1 ，2，4_三唑類；（6)經烷氧化之乙烯（如， 乙氧乙烯）；（7)和氨基酸的羧基部分作用形成混合酐 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS > A4规格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

T -22 - A7 _ B7 五、發明説明（20) 的試劑（如，氣甲酸乙酯和異氯甲酸丁酯）或和氨基酸成 對的對稱酐（如，Boc— A1 a — Ο — A1 a — Boc )，及（8)在環的氮上有羥基的含氮雜環化合物（例如 ，N -羥基酞醯亞胺，N—羥基琥珀醯亞胺醯和1 一羥基 三唑甲苯）。其他的活性試劑及其偶合肽類的用途在 Kapoor , J . Phar . Sc i . . 59 . ：l - 27頁（1 9 7 0 )有描 述。申請者喜歡使用對稱酐作爲偶合試劑，以偶合除了 Ar g，As η和G 1 η之外的所有氨基酸。 毎一個被保護的氣基酸或氨基酸序列以大約二倍到四 倍的超量，添入固相反應器中。此偶合反應是在含有二甲 基甲醯胺：二氣甲烷（1 : 1)，單獨只有二甲基甲醢胺 或二氯甲烷之介質中進行。如果有不完全的偶合情形發生 時，在固相反應器中偶合下一個胺基酸之前，於α —氨基 保護基團還沒有除去之前，重複偶合步探。在合成反應每 一階段之偶合反應是否成功，可由芘三酮反應偵測得知。 此在 E. Kaiser e t a_, A n a 1 v t . B i o c h e m . 34. 5 9 5 ( 1 970 )中有記述。 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 --«-t--------f ''衣-- (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 製得所欲的氨基酸序列後，可在此藝熟知的條件下， 將肽類自樹脂上取下。例如我們可將與樹脂結合的多肽類 用5 %溶於無水氫氟酸的茴香醚來處理，則可完成分離工 作。 誠如此技藝中已知之固相肽類合成技術，許多氨基酸 具有功能性，在鏈的製備時獬要有保護。逋當保護基團的 使用和選擇則是在專精於此技術之士的能力範園內，而且 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -L6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（21) 端視被保護的氨基酸是何種以及出現此肽上的其他經保護 的氨基酸殘基而定。這種側鏈保護基團的選擇是嚴謹的， 要求必須在α —氨基部分的保護基團裂解過程中不會被除 去。例如，天門冬酸和麩胺酸的羧基上的羥基基團可被苯 甲基或環己基保護。而較佳的保護基團是苯甲基。 道些基團可藉由此技藝爲人熟知的方法來除去。除去 典型的保護基團，是在肽鏈合成完成後進行。例如於溶在 5 %無水氫氣酸的茴香醚處理此肽之後，自樹脂上除去該 肽，同時去保護。保護基團可以在任何其他適合時間被除 去。 本發明的肽類相似物的抗凝集劑置和抗血小板劑量， 乃是根據病人，須治療的栓塞情形的嚴重程度，以及所選 擇的肽類相似物來決定，依病人髏重每天給予0. 2毫克 /公斤到2 5 0毫克/公斤。對特定病人的適當劑量是容 易決定的。一般來說，最好每天給予1到4個劑量，且每 一劑置通常有5毫克到1 0 0毫克的活性化合物。 抗凝集劑療法是用來治療和預防各種的栓塞情況，特 別是冠狀動脈和腦血管疾病，例如藉著溶解存在的血塊來 治療冠狀栓塞。抗血小板劑的治療是用於預防心肌梗塞和 中風的再發生。在這方面很有經驗的人知道需要給予抗凝 集劑和抗血小板劑治療的條件。一般相信，本發明的肽類 對於因血管造形術所產生的冠狀栓塞，體外循環的血小板 減少症，後纖維蛋白分解療法的栓塞預防，以及停止或減 緩進行性的心肌梗塞有特別的助益。 本紙張尺度適用中國國家榡準（CNS ) Α4規格（210X 297公釐）~ -Ζ4 ^^^1 ^—^1· ^nt4flEH ^^^^1 in^i ^^^—9 1— ^^^^1 ^^^1· m· ml (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（22) 在此所稱的名詞 ' 病人〃是指晡乳動物，如靈長類， 包括人類，羊，馬，牛，豬，狗，貓，大鼠和小鼠。 雖然一些肽類衍生物可以藉由口服給蕖通過胃部而不 被破壞，但本案申請者喜歡用非口服給蕖，如皮下，靜脈 內，肌內或腹腔內：藉由depot注射：藉由植入物製品： 或藉由塗於黏膜來給蕖，如鼻子，喉嚙和支氣管的黏膜， 可利用含噴霧狀或乾粉狀的本發明的肽類衍生物之喷霧器 來給藥。 道些化合物可藉溶液或懸浮液的注射劑型施以腸外注 射，道些劑型乃是藉由製劑上載劑諸如無菌液體，像水和 油，而將這些化合物溶於生理上可接受的稀釋液中，而此 載劑可添加或不添加界面活性劑和其他藥學上可接受的佐 劑。而可使用在這些製劑上的油，包括石油，動物油，蔬 菜油，或合成油來源，諸如，花生油，大豆油，和礦物油 。一般來說，水，生理食鹽水，葡萄糖水溶液和相關的糖 溶液，乙酵和乙二醉如丙烯基乙二醉（propylene glyrol )或聚乙嫌乙二醇（polyethylene glyrol)是較佳的液 體載劑，特別是對注射用溶液而言。 窗施例 實施例1—12代表分子式1的肽之典型合成方法， 這些實施例僅作爲例證，而不想以任何方式限制發明。用 於實施例1 — 1 2的試藥或起始物質是熟悉此藝之士易於 獲得者。下列名詞用於實施例1一12時，表示：％ 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X297公釐）_ π _ I IK- i. l-n I - - '衣I I----訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（23 ) DCM^表示二氯甲烷，、DIEA"表示二異丙基乙胺 ，，Me〇H，表示甲醇，，DCC，表示 N，N< —二 環己基氰胺，，DMF"表示N，N>—二甲基甲醯胺’ %HOB t "表示1 —羥基苯並三唑（1-hyaroxybenzotriazole) ， 示三氟醋酸，， eq 〃表示當量，""me q 〃表示毫當量，〃表示公 克，wmg 〃表示毫克，'"mmol”表示毫莫耳， L"表示毫升，、°C 〃表示攝氏溫度，、TLC"表示薄 層色層分析，表示置留因子，表示微升 ，表示微克，'βΜ 〃表示微莫耳濃度，' mmHg^表示毫米汞柱，而表示自四甲基矽烷算 起之每百萬低磁場的部分。 實施例1 (D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle l

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 1) 的製備。 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、^ -26 - 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 295590 _B7__ 五、發明説明（24 )

Boc — (D) G1 u (Bz 1) — Pam — r e s i η ( Pen insula Laboratories, Belmont, California)係利用Dupont 250半自動胜肽合成器，根據 下列計劃藉逐步的去保護和連續的胺基酸連接而加長： 試藥/溶劑 時間（秒數） #重做次數 DCM 30 1 MeOH 30 2 DCM 30 3 TFA：an i sole：DCM(48：2 :50) 60 1 TFA：anisole：DCM(48：2 :50) 1200 1 DCM 30 3 DIEA:DCM(10 ： 90) 60 3 DCM 30 2 Boc-am i no acid 1800 1 DMF 30 1 DCM 30 1 DIEA：DCM(10：90) 30 1 DCM 30 2 除A r g在4倍過量下被偶合成其HOB t酯外，所 有B 〇 c胺基酸在兩倍過量下被偶合成其預定的對稱酐， 對稱酐的製備如下： 將B 〇 c胺基酸（4個當量）溶於DCM中，接著加 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -0 -27 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 25 ) 1 1 入0 5 M D C C / DC M (2個當量 ) 攪拌並反應 1 | 5分鐘 作成對稱酐 過濾除去所產生的二環己基脲，然 1 1 | 後將濾液加入肽樹脂中 ，並以等量的D Μ F 稀釋該結合的 請 先 閱 讀 1 1 混合物 ο Γ I A r g 的Η 0 B t 酯係以類似的方法形成 ο 將B o c 背 1 Γ 之 1 -A r g ( T o s ) ( 4個當量）溶於D C Μ 中 ，加入 注 意 1 1 ψ 1 0 . 5 Μ Η 0 B t / DM F (4個當量 ) 和 0 .5 M 項 再 1 DC C / D C M ( 4 個 當量 ) ，過濾除去二環己基脲，將 寫 本 冬 頁 1 濾液加入胜肽樹脂中 並以等量的DMF 稀釋該結合的混 1 合物 o 1 1 在每次偶合後， 使用此藝習知的Kaiser代寧希德林（ 1 1 n i n h y a r i n ) 步驟來測試肽樹脂看是否有游離胺存在。胺 訂 1 基酸如所需地重新偶接 〇 1 I 依照上述的步驟 Bo c 一 D 一 G 1 U ( Β Z 1 )- 1 I Pa m — 樹脂（8 . 0 6克 0 . 3 1m e q / g m ， 1 1 2 . 5 毫莫耳，買自 Peninsula Laboratories ， Belmont, Γ California )的加長反應， 製得肽樹脂（ D ) P he1 — 1 1 P r 0 — A r g ( T 0 S ) — P r 〇 — G 1 y 5 _ -(D) 1 C y S ( M b z )— G 1 y — A r g ( T 0 S ) —G 1 y 1 -A S P ( C h x ) 1 〇 -N 1 e — P r ο — ( D )c y s I | (M b Z ) -G 1 y — As P (C h x ) 15 — T y r ( 1 1 t B r z ) — G 1 u ( B z 1 ) — Pro — I 1 e — 1 1 P r ο 2 0 — G 1 u ( B z 1 ) —G 1 u ( B Z 1 )_ 1 1 A 1 a — C h a —( D )G 1 u ( B z 1 ) — P am — 1 1 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -28 - B7 五、發明説明（26) 經濟部中央標準局員工消費合作社印繁 R e s i η ( 1 9 4 g 胜 肽 樹 脂 ) > 下 列的胺 基 酸 需 與 個 莫 耳 當 量 的 其 對 稱 酐 作 二 次 偶 合 B 〇 c - C h a 2 4 » B 0 c — G 1 U ( B Z 1 ) 2 1 1 B 0 C -T y r ( B r z ) 2 1 1 Β 0 C — T y r ( Β r Ζ ) 16 - B 0 c — A s P ( C h X ) 15 B 0 C ( D ) c y s (Μ b ζ ) 6 » B 0 c — P r 0 4 , 1 Β 〇 c - -Pro2 和 Β o c 一 ( D ) P h e 1 c > Έ i c )c - -A r g 1 (Τ 〇 s〕 ι的偶合反應係與兩 倍 過 量 的 Η 0 Β t 酯 重 覆 兩 次 » 接 著 用 醋 酸酐： D I E A D c M ( 1 0 5 8 5 ) 加 蓋 0 上 述 所 製 備 的 肽 樹 脂 ( D ) Ρ h e 1 -Pro- A r g ( T 0 s ) — P r 0 — G 1 y 5 一 (D ) C y s ( Μ b Z ) — G 1 y — A r g ( T 0 S ) — G 1 y — A s Ρ ( C h X ) ΙΟ — P r 0 — ( D ) C y S ( M b z ) — G 1 y — A S P ( c h X ) 15 — Τ y r ( B r z ) — G 1 u ( B Ζ 1 ) — P r 0 — I 1 e — P r o 2 ° — G 1 u ( B z 1 ) — G 1 U ( Β Z 1 ) — A 1 a -C h a ( D ) G 1 u ( B Ζ 1 ) — P a m — R e s i η 被分成 5 等 分 * 每 —. 部 分 在 下 列 條 件 被 切 開 9 去 保 護 » 及 環化： 在 An is o 1 e (5%)存 在 下 將 肽 樹 脂 ( 3 8 8 g ) 懸 浮 於 挑 水 氫 氟 酸 ( 2 0 m ) ， 在 0 °C 下 攪 拌 並 反應約 3 0 分 餘 理 » 然 後 在 真 空 下 除 去 氫 氟 酸 0 殘 餘 物 用 5 0 %醋 酸 ( 2 X 1 0 m 9. ) ♦ 醋 酸 ( 2 X 5 m il ) 和 水 ( 3xl 0 m ) 萃 取 » 將 萃 取 物 混 合 且 用 水 稀 釋 成 1 公 升 ，然後 用 氨 水 調 P Η 值 至 8 5 9 加 入 鐵 氰 化 鉀 ( κ 3 F « 3 ( C N ) β ) 超 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) -29 - A 7 B7 五、發明説明（27 ) 過1 5分鐘，直到黃色穩定存在，然後在室溫下攪拌3 0 分鐘，用醋酸調整pH值至4. 0，加入陰離子交換樹脂 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (AG3x4A，B i o—Red)並攪拌至黃色消失， 以過濾法收集樹脂，並冷凍乾燥濾液而得到肽的粗製品。 將肽粗製品溶於5 0%的醋酸，然後通入Sephadex G-10管柱（2. 5x70cm)中，用50%醋酸以約

10. 5mJ?/hr的速率沖提，在約70 — 150mj? 時沖提出肽，將此沖提物用水稀釋，然後冷凍乾燥而得總 重6.17克，這些經過脫鹽的物質再藉逆相製備的 Η P L C ( Dynaraax Cis, 21. 4x25〇mm> Rainin)，利用 Beckman Prep 350 系統以 0 · 1 %T F A 水溶液/氰化甲烷的梯度，以約每分鐘4 Omj?的速度純 化，製得純物質（1 . 3克）。 (S E Q ID Ν Ο ： 1 ) (D)Phe-Pro-Arg-Pr〇-Gly-(D)Cys，-Gly-Arg-Gly_Asp

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經濟部中央樣準局員工消费合作社印製

Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle

Glu—Glu—Ala—Cha—(D)Glu—OH 下列實施例的肽可以用相同或類似的方法製備。 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS > A4規格（210X297公釐） 30 - 295590五、發明説明（28 A7 B7 實施例2 (D)Phe-Pro-Arg—Pro-Gly-(D)Cys *-Gly-Arg_Gly—Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-iDJCys'-PrQ-Phe

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 2) 實施例 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

經濟部中央標率局員工消費合作杜印製 (D)Phg-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pr〇-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly~(D)Cys1-Pro—Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 20) 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210 X 297公釐） -31 一95590五、發明説明（29 A7 B7 實施例 (D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pro—lie一Pr〇_Glu一Tyr_Asp一Gly一(D)Cys,一Pr〇_Met

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 11)實施例5 (DJPhe-Pro-Arg-Pro-Gly-iDJCys'-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Cha

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 12) 實施例 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、-=a 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (D)Phe-Pro-Arg-Pr〇-Gly-(D)Cys'-(D)Tyr-Arg-Gly-Asp s-s

Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 15) 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -32 - 五、發明説明（ A7 B7 實施例 (D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys1 -(D)Val-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys *-Pro-Nle

Glu—Glu—Ala—Cha—{D)Glu—OH (SEQ 工D N〇：16) 實施例 (D)Phe-Pr〇-Arg-Pr〇-Gly-(D)Cys1 -(D)Thr-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 18) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CMS ) A4規格（210X 297公釐） 33 A7 B7 五、發明説明（31 窗施例 (D) Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys1 -(D)Pro-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Gla-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys1-Pro-Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 19) 實施例1 3-(D)Tiq-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH (SEQ ID NO: 21) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -tr '*τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X2.97公釐） «•«I JIIII<4M·· -34 295590 A7 B7 五、發明説明（32 官施例 N-Me-(D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys1-Gly-Arg-Gly-Asp

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Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle

Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-〇H (SEQ ID NO: 22) 實施例1 (D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Arg-Ile-Pro-Arg

S-S

Tyr-Asp-Gly-(D)Cys1-Asp-Ala-Pro-Nle-Asp-Gly

Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-〇H. (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) —Λ *?τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (SEQ ID NO: l〇 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） 35 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（33) 生物方面 如上所述，具有顯著凝血酶抑制作用而顯示它們是有 效的抗凝血劑，可用於靜脈和動脈栓塞的疾病和不穩定的 狹縮性痛，冠狀動脈血管造形術後血管的猝閉之預防，矯 形外科手術後，血栓溶解和深部靜脈栓塞的輔助療法。因 爲本發明的化合物也含有環RGD — X序列（Cyclic RGD-X sequence)，其位於B部分的連接部分，這些化合 物也作爲血小板G P II b / III a接受器的拮抗劑。 實施例2的胜肽之抗凝血和抗栓輋的作用 令實施例2(胜肽2)(SEQ ID Ν Ο ： 2 ) 之胜肽與其個別的組成份胜肽作比較，該肽由藉環狀血小 板GP II b /III a接受器拮抗子（RGD — X)偶合至 水蛭素55 - 65 ( hirudin55 - 65 )同類物的催化位凝血酶抑 制子（i_P R )組成。注意，下列所附註的實驗用設備只 是建議而已，並未想在任何情況下束縛或限制了發明。 實驗動物

Sprague-Dawley公大白鼠（3 0 0 — 4 0 0克），買 自 Spargue Dowley公司 Mndianaplis，In 46229 )而用 於本硏究中。 血液垛樣 採取血液樣本並置於內含3. 8 %三鈉檸槺酸鹽（1 I紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 17 -〇0 - an ^ Bn^i —^^1« I ^^^^1 ^^^^1 nn ^^^^1 f ^ i (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _B7_ 五、發明説明（34 ) :1 0 )的塑膠製注射器中，血漿以離心法在2 0 0 0 g -力下離心1 0分鐘製得。體外試驗研究所用的靜脈血係 收集自健康，未給過藥的雄性自願者。 凝血作用的分析 測定經活化的部分凝血激素時間（a P T T )，乃使 用 Dode Diagnostics公司（Aguada， Puerto Rico 00602 )的試藥和方法進行，凝血酶時間乃將0. lmj?的大白 鼠血漿置於0. 1M Tris緩衝液中（TrisBuffer )，p Η 7 . 5，3 7 °C下培養3 0秒而測定。凝集反應 係使用 0 · 1 m 又牛凝血 1¾ (Sigma Diagnostics, St

Louis, M63178)溶液起動（12NIH 單位 / mj?)， 所有的凝集時間乃用MLA公司（Pleasantviiie，NY 10570) MLA-Electra 750自動凝血計時器半自動的測定。 兩倍凝集時間（I D2)所需的濃度以簡單的線性回歸計 算。 體外試驗中血小板的凝集 製備富含人類血小板的血漿（P R p )，係藉離心法 於室溫’ 200g —力下離心1〇分鐘而得。製備缺乏血 小板的血漿（P P P )，係以離心法於2 0 〇 g —力下離 心1 0分鐘而製得。P R P僅暴露於塑膠製的實驗容器中 ’且所有實驗於血液採集後3小時內完成。血小板凝集的 測定乃用光量性的雙管道凝集計（chr〇nc)_lQg C〇rp.， 本紙張尺度適用中國國家裸準（CNS〉A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、?τ -37 - 經濟部中央標準局B貝工消費合作社印製 A7 B7五、發明説明（35) Haverstown，PA19083 )，以自«的PPP定義爲百分之 百的透光，於PRP中加入ADP(1pM)或凝血酶後 ，測得透光度最大改變的百分比。凝血酶（0. 2— 2. 0單位/ mi?)誘發的血小板凝集是依澳度而定的， 而最大濃度的一半被用於抑制作用的硏究。胜肽2 ( SEQ ID NO: 2)在加入ADP或凝血酶前用 P R P ( 0 . 45πιβ)培養 30 秒，在 0· 5mj?的總 量下測定凝集作用，抑制反應以相對於控制組値的抑制百 分比來表示，造成凝集作用5 0 %抑制的濃度以簡單的線 性回歸計算。 大白鼠三氢化嫌動脈栓塞模型（髗內試驗） 胜肽2(SEQ ID NO: 2)也用於大白鼠體 內抗栓塞作用的評估實驗。例如，根據R.J. Broersraa等 (T h r。m b . R e s · 6 4 4 0 5 - 4 1 2 ( 1 9 9 1 ))，評估胜狀 2 ( SEQ ID NO: 2)於三氣化嫌誘導的大白鼠頸動 脈栓塞模型其由依賴血小板之凝血酶所調節中的抗栓塞活 性，上述納入本發明的參考資料，若以全文列出也作爲參 考賫料。 結果 本硏究的結果顯示，當胜肽2 (SEQ ID NO :2 )在血漿凝集及血小板凝集的分析中作爲抗凝血劑和 抗凝血酶時，比其各自的組成分更有效。 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐）^ (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

訂 85. 8. A7 B7 年月ΰ m 祯€ 五、發明説明（36 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 關於表格，除一些經修改過的胺基酸，和/或可以三 個字母命名系統表示和以括弧包括的保護基團外，胜肽序 列中的胺基酸殘基係使單一字母命名系統命名。而且，連 接（D)Cys>殘基的雙硫鍵將在兩個（D)Cys<殘基下方和B 部分之環中之所有殘基之下方畫一條底線表示。

表I 人類血漿中胜肽2抗凝血的活性與其組成份之比較 經濟部t央橾準局員工消费合作社印製 胜狀 胜肽序列 11>2 β m aPTT 凝血酶 時間 2 fPRPGcGRGDFPc GDYEPIPEEA(Cha)e 0.060 0.024 2 a c G R G D F P c — >1 , 000 2b (Suc)YEPIPEEA(Cha)e 4 0.564 2 c f PRPG >1000 5 10 2d (CH3)fPR 2 0.587 私紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210X 297公釐） -39 - 295590 ㉟ 8, 02 五、發明説明（37 ) __________________ 1 值是將凝集時間從對照組（三份）放大爲兩倍所需 的澳度，a P TT爲活化的部分凝血激素時間》 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 參考表I，是胜肽2(SEQ ID N0:2)的 抗凝集劑活性與其組成分——胜肽2 a (SEQ ID N〇:3)，胜肽2b(SEQ ID N0:4)，胜 肽2c(SEQ ID N0:5)和胜肽2d(SEQ ID NO : 6)——在正常人類血清中，活化的部分 凝血激素時間（a P TT)和凝血酶時間方面的比較，胜 肽 2a — 2d(SEQ ID NO: 3 — 6)並不包含 於本發明中《在約60和24nM時，胜肽2 (SEQ ID NO :2)分別可延長a PTT和凝血酶時間爲兩 倍（ID2)，胜肽 2(SEQ ID NO:2)的活 性至少比2b(SEQ ID NO:4)或2d( SEQ ID NO: 6)(安定的催化位抑制劑Me-fPR)強 20 倍，而 2c(SEQ ID N Ο ： 5 ) 經濟部中央樣準局員工消費合作杜印製 (f P RP G五胜肽）僅在較高濃度時才有抗凝血活性， 當作爲抗凝血劑時，胜肽2a (SEQ ID NO: 3 )(環RGD — X胜肽）並不具活性。 參考表Π，胜肽2(SEQ ID NO:2)抗凝 血的研究在大白鼠的血漿中進行。a PTT和凝血酶時間 的ID2分別約爲181和1 16nM。 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS > A4規格（2丨0'〆297公釐） -40 - 85. 8. 〇： 五、發明説明（38 ) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 表Π 胜肽2對大白鼠和人類的凝血和血小板分析的作用 —----------- 大白鼠 人類 ID2,nM 抗凝血活性 aPTT 1 81 ± 43 6 0 ± 1 8 凝血酶時間 1 16 土 1 2 24 ± 7 ΙΓ5Π. υ. Μ 血小板凝集的抑制 ADP 65 ± 2 1 9 ± 5 凝血酶 0 014± . 0 0 2 0. 0 6 0 ± . 026 I D 2值是將凝集時間比對照組（三份）延長爲兩倍 所需的濃度；aPTT爲活化的部分凝血激素時間。 參考表Π可知，胜肽2(SEQ ID NO:2: 之抗凝血研究係以大鼠血漿進行。a P TT與凝血酶時f 之I 值分別約爲1 8 1與1 1 6 nM。 表紙張尺度適用中國國家標準（〇阳）八4规格（210/297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -41 經濟部中央橾準局員工消费合作社印裝 α^5. Η. ι>ϋ __ Β7__ 五、發明説明（39 ) ^

因此，當作爲抗凝血劑時，胜肽2(SEQ ID NO : 2)在大白鼠血漿中的活性比在人類血漿中小3 — 5倍。 表瓜 人類血小板的抑制作用 胜肽 胜肽序列 I D 5 0 β M ADP 凝血酶 2 f P R Ρ Γ, r Γ, R G D F P c Γ, DYEPIPEEA(Cha)a 19 0.060 2a π G R Γ, D F P c 20 13 2b (Suc)YEPIPEEA(Cha)e 895 3 2d CHafPR >1,000 0. 2 I D 5。值是在P R P中抑制血小板凝集達對照組（二份） 凝集反應50%所需的濃度。 如表ΠΙ所述，以A D P和凝血酶誘發的人類血小板凝 集反應被胜肽2(SEQ ID NO:2)所抑制。抑 制AD P誘發的血小板凝集達5 0% ( I C5。）的濃度約 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） 訂 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

-42 -

五、發明説明（40 ) 爲1 9 βΜ，這類似於環RGD — X胜肽（I C50 — 20#M)，胜肽 2a(SEQ ID NO: 3)’ 抗 凝血酶胜肽2b(SEQ ID NO:4)和2d( SEQ ID NO :6)對ADP誘發的血小板凝集基 本上是無效的。（其I C 50分別爲895和大於1000 U Μ )，胜肽 2 (SEQ ID 1^0:2)以1(：5。值 6 0 ηΜ抑制凝血酶誘發的血小板凝集，這比其成分活性 更強——胜肽2b(SEQ ID Ν Ο ： 4 )( IC5〇=2eM)，胜肽 2d(SEQ ID Ν Ο ： 6 )(IC5O=200nM)和胜肽2a(SEQ ID ΝΟ:3) (ICso^lSeM)。 相反地，AD P和凝血酶誘發的大白鼠血小板凝集被 胜肽2(SEQ ID NO:2)以1C 5〇分別爲6 5 βΜ和14#M抑制（如表Π)，因此，胜肽2 (SEQ ID NO : 2 )在大白鼠血漿中的活性比在人類富血 小板的血漿中小3 - 4倍。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 本紙張尺度適用刪家標準（叫Μ規格⑺™ 295590 五、發明説明（41丁 表

V 用 作 的 塞 栓 脈 πβπ 鼠 白 大 對 2 肽 胜 胜肽2 (nmo 1 /kg /m i η )a 數 栓塞時間（分） ‘ 動物數 栓塞數/ 實驗組 巨 控制組 實驗組 10 6 1 5. 2 ± 2. 0 26. 3 ± 5.4* 5/6 25 5 1 6 _ 9 ± 1 . 1 50. 8 ± 5. 4** 2/5 50 5 16. 8± 1. 8 55. 5 ± 1 〇. 8*b 1/5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁} k

1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a _在以三氯化鐵破壞前的l 5分鐘，輸注超過6 0分鐘 〇 b.栓塞時間超過9 0分鐘（η = 4) ； * ρ < 〇 〇5 對比較（控制組）標準：*p<〇. 〇i對比較標準 0 胜肽2被用以評估三氯化鐵誘發的大白鼠頸動脈栓塞 的抗栓塞活性》當在用三氯化鐵的1 5分鐘前，以10 , 25 ’ 50nmo 1/kg/mi η (如第 1 圖）的速度 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 五、發明説明 連嫌靜脈 於動脈中 5 0 n m 4隻被預 m i η時 防了》當 k g / m S E Q 2圖）。 如表 時，栓塞 ，水蛭素 )5 0 0 胜肽2 a 1 Ο Ο η 生 ° η m 1 1;~ Α7 _I Β7 ---- . 1 …,一 ---------------------- . 42 ) 輸注胜肽2(SEQ ID N0:2)l小時 ，發現是依劑量而減少的。當劑量速度爲 〇 1/kg/mi η時，栓塞在5隻大白鼠中有 防了；當速度爲25和l〇nmo l/kg/ ，栓塞分別有5隻中的3隻和6隻中的1隻被預 輸注速度爲50，100和200nmo 1/ in時，催化位的抗凝血酶（胜肽2d)( ID NO : 6)依劑量而延長栓塞時間（如第 V，當劑量速度爲50nmo 1/kg/mi η 在5隻大白鼠中有4隻被預防了，在這個模式中 同類物（胜肽2b) (SEQ ID Ν Ο ： 4 /kg/m i η和環RGD — X胜肽 )(SEQ ID Ν Ο : 3 mo 1/kg/mi η 二者均 I— —^n » n m —^1 I— I. _ --- .1 沐 、vs (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央樣準局員工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -45 - 五、發明説明（43 ) A7 B7 表V 胜肽2及其成分對大白鼠動脈栓塞的作用 胜肽 劑 量 數 g 栓塞時間（分） 動物數 栓塞數/ 實驗數 控制組 實驗組 2 A 5 1 6. 8± 1 . 8 55. 5 ± 10. 8* 1/5 2a B 4 18.5±1.2 19.1±2.0 4/4 2b C 6 16. 9± 1. 9 22. 4 ± 7. 1 5/6 2d D 5 19. 3土 1. 5 44. 1 ± 1. 0** 1/5 (請先聞讀背面之注意事項再填寫本頁) 、π 經濟部中央標準局員工消費合作杜印裝 a , 在以 二 氯 化鐵 破 壞前 1 5 分鐘， 輸 注超 過 6 0分鐘 "P 0 < 0 . ( 〕ί 5對比較標準 ，* * p < 0 . 0 ] L對比較標準 A — ——5 0 η m ο 1 / k g / m i n » 靜脈 注 射 0 B — —1 0 0 n m 0 1 / k g /mi n ，靜 脈 注 射。 c ~~~ —5 0 0 η m 0 1 / k g / m i n ，靜 脈 注 射。 D - —2 0 0 η m 0 1 / k g / m i n ，靜 脈 注 射。 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -46 -

A7 _B7 五、發明説明（44 )

表V I 靜脈內胜肽2對凝血分析的作用 胜肽2 比較標準值的倍數 nmo1/kg/n i η aPttb 凝血酶時間 .10 2. 9± 0.7(5) 3. 9± 0. 5(5) 25 3. 6± 1.2(4) 5. 8± 1.8(4) 50 3· 7± 0. 7(2) 4. 2± 0. 4(2) a .血液樣本在研究的最後，當三氣化鐵誘發大白鼠動脈 栓塞的採取· b . a PTT，即活化的部分凝血激素時間（n=大白鼠 數）· 表VI說明在凝集分析法中胜肽2之功效（α P TT及 凝血酶時間）·在劑量速率爲10及25毫微莫耳/公斤 /分鐘時，胜肽2確實隨劑置延長凝集分析’然後在6 0 毫微莫耳/公斤/分鐘時達到高原期* 窗施例1中的胖肽之抗猫血和抗栓塞的作用 本紙浪尺度通用t國國家標準·（ CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐Ί ~ • 47 - (請先M讀背面之注意事項再填寫本頁) .1 J-----..袈------訂----- 魍濟部t央揉準局貝工消费合作，社印*. A7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 B7 五、一 齋明説明（ 4E ) 1 | 實 施 例 1 ( 胜 肽 1 ) ( S E Q I D N 0 1 ) 的 1 1 胜 肽 類 似 胜 肽 2 ( S E Q I D Ν 0 2 ) 由 以 環 1 1 血 小 板 G P Π b / Π a 接 受 器 拮 抗 劑 ( R G D — X ) 偶 1 I 合 請 1 I 於 水 蛭 素 5 5 -β 5 (h i r ud i η 5 5 一 5 β) 同類物的催化位凝血 閱 酶 抑 1 制劑 ( f Ρ R ) 組 成 與 其 各 白 成 分 的 胜 肽作 比 較 〇 背 1 胜 肽 1 ( S E Q I D Ν 0 1 ) 是 胜 肽 2 ( S E Q 之 '意 1 D 事 1 I N 〇 2 ) 的 同 類 物 然 而 其 中 胜 狀 2 ( S E Q 項 再 1 D N 〇 填 ...,1 I 2 ) 環 R G D — X 序 列 的 苯 胺 基 丙 酸 被 以 寫 本 正 白 胺 基 酸 ( Ν 1 e ) 取 代 0 在 本 研 究 中 胜 肽 1 ( 頁 1 1 S E Q I D N 0 1 ) 相 較 於 胜 肽 2 ( S E Q I D 1 1 N 0 2 ) 胜 肽 3 ( S E Q I D Ν 0 7 ) — — 1 1 —. 種 胜 肽 1 的 同 類 物 其 中 陰 離 子 結 合 的 外 位 結 合 部 分 ( 訂 | 部 分 C ) 被 截 去 頭 端 — 一 而 胜 肽 4 ( S Ε Q I D N 0 1 I 8 ) — — 一 種 胜 肽 1 的 同 類 物 僅 含 一 種 天 然 的 左 旋 胺 1 1 I 基 酸 〇 另 外 胜 肽 5 ( S E Q I D Ν 0 9 ) — — 一 1 1 種 胜 肽 1 ( S Ε Q I D N 0 1 ) 的 同 類 物 含 有 一 Γ 個 1 0 個 胺 基 酸 的 R G D — X 環 且 僅 含 一 個 天 然 的 左 旋 1 1 胺 基 酸 相 較 於 胜 肽 6 ( 實 施 例 1 2 的 胜 肽 ) ( S E Q 1 I D N 〇 1 0 ) — — — 種 胜 肽 1 的 同 類 物 含 有 —· 個 1 1 0 個 胺 基 酸 的 R G D 一 X 環 而 描 述 了 在 本 發 明 胜 肽 的 活 1 1 性 中 R G D — X 環 方 向 的 作 用 0 胜 肽 1 9 2 和 6 ( 1 1 ¥ S E Q I D N 〇 1 2 和 1 0 ) 包 含 於 本 發 明 中 9 I 1 而 胜 肽 3 — 5 ( S Ε Q I D Ν 0 7 — 9 ) 並 不 包 含 1 1 於 本 發 明 中 注 意 下 列 所 附 註 的 實 驗 設 備 > 只 是 建 議 而 已 [ 1 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -48 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（46 ) ，並不想在任何情況下，束縛或限制了發明。 t驗動物 可購自 Sprague Dawley公司（Indianapolis, IN4622 9 )的雄性 Sprague-Dawley 大白鼠（3 0 0 -4 0 〇克）和兩種性別的混合繁殖之獵狐犬（6 — 1 1公 斤）用於本研究中。 狗被以戊基巴比特魯鈉鹽（3 〇mg/k g靜脈注射 )麻醉。股動脈和兩側股靜脈被分離出來並插管以記錄血 壓（Gould P23ID, Gluld Inc.， Medical Products Division, Oxnard, CA 9 3 0 3 0 )，四肢導移置於皮下以偵 測第Π導程的心電圖。血壓和心電圖的測定值記錄下來（ Gould 440 recorder, Gould Inc., Instrument System Division, Cleveland, OH 44114)。 血液换樣 血液樣本可取出而置於內含3. 8%三鈉檸檬酸鹽（ 1:10)的塑膠製注射器中，血漿以離心法在2000 克-力下離心1 0分鐘而製得，作體外試驗研究的靜脈血 則收集自健康，未給過藥的雄性自願者。 凝血的分析，樣板出血時間和血液學 活化的部分凝血激素時間（a P T T )之測定乃用 Dade Diagnostics, Inc. (Aguada, Puerto Rico 00602 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210 X297公釐） " -49 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

A7 __B7 五、發明説明（47 ) )的試劑和方法進行。凝血酶凝集時間乃將0 . 1 mi?的 大白鼠血漿置於0. 1M Tr is緩衝液中，pH 7. 5，37 °C下培養30秒而測定，凝集的起始是用 0. lmj?牛的凝血酶（Sigma Diagnostics, St.

Louis, MO 63178)溶液（1 2N I Η 單位 / mj?)，所 有的凝集時間之測定乃用MLA公司MLA-Electra 750自 動凝集計時器（Pleasantville，NY 1 0 5 7 0 )半自動地測 定。兩倍凝集時間（I D 2 )所需的濃度以簡單的線性回 歸計算。t i / 2的測定是計算以1和5 n m ο I / k g / min的速度輸注胜肽1(SEQ ID NO:l)後 的抗凝血酶活性（凝血酶時間），t 1 / 2的估計是以超過 時間的反應數據之線性回歸做成的。 樣板出血時間（Template Bleeding Time)是在除去 毛髮之左腳的中間表面進行（Nair，Carter-Wallace， Inc.，New York，NY 10105)，以 Surgicutt® 出血時間 測定儀（International Technidyne Corp.，Edison, 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 —I n··— ^^^^1 HI— ml ^ V I t"t (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) NJ 0 8 8 2 0 )測定，樣板出血時間測定於給藥前6 0分和 30分及給藥後15，30，60，120 ’ 180和 2 4 0 分。 全血細胞計數和紅血球含量分析是取E D TA抗凝血 的1 4 0 L血液樣本以血液學分析器進行分析而測定（ Technicon Η I, Miles Techn i con , Tarrytown, NY 10591)。樣品在給藥前6 0分鐘和3 0分鐘及給藥後 15，30，60，120，180 和 240 分鐘摘取。 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -50 - A 7 B7 五、發明説明（48 ) 血^板凝集試驗 人類富血小板的血漿（P R P )以離心法於室溫， 2 0 0克一力下離心1 0分鐘製得；而缺血小板血漿（ PPP)以離心法於2000克—力下離心10分鐘而製 得。PRP僅暴露於塑膠製的實驗容器中，且所有實驗於 血液收集後3小時內完成。血小板凝集的測定乃是用光量 性的雙頻道凝集計（Chrono-log Corp·，Haverstown, PA 19083)，以自體的P P P定義百分之百的透光，當於 P R P中加入A D P ( 1 μ Μ )或凝血酶後，測得透光度 最大改變的百分比。凝血酶（0. 2 — 2. 0單位/ mj? )誘發的血小板凝集是依濃度而定的，而最大濃度的一半 被用於抑制作用的研究。胜肽2 (SEQ ID NO: 2)在加入ADP或凝血酶前用PRP(〇. 45mj?) 培養3 0秒，在0 . 5 m $的總量下測定凝集作用，抑制 反應以相對於比較標準的抑制百分比來表示，造成凝集作 用5 0 %抑制的濃度以簡單的線性回歸計算。 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 血液中血小板的凝集作用是用全血凝集計數器（ Chrono-log, model 540-VS)在以生理鹽水稀釋（1 : 2 )的檸檬酸化的血中完成。定量的稀釋血置於塑膠製的比 色器中，3 7°C下培養1 5分鐘。ADP (2//M)或凝 血酶（0. 4V/mj?)的加入被用於誘發凝集作用，而 電阻的改變被登記於記錄紙爲一長條狀的記錄器上。凝集 作用在1 . 0 m 全血中測定，抑制反應以相對於比較標 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X297公釐） -51 - A7 B7 五、發明説明（49) 準的控制百分比來表示，造成凝集作用5 0%抑制的濃度 以簡單的線性回歸來計算。 大白鼠三氯化鐵動脈栓塞模型（體內試驗） 胜肽1(SEQ ID NO:1)也用於作大白鼠 體內抗栓塞作用的評估，例如，根據R.J. Broersma等（ Thromb. Res. 64，40 5-4 1 2 ( 1 9 9 1 ))的實驗，胜肽 1 ( S E Q ID N ◦ : 1 )被評估其對以血小板依賴性的 凝血酶爲媒介，三氯化鐵誘發的大白鼠頸動脈栓塞模型之 抗栓塞活性，上述併入本發明之參考資料若以全文併入， 亦作爲參考資料。 結果 本研究的結果顯示，作爲凝血酶誘發之血小板凝集之 抑制劑，出乎意料之外地，胜肽1 (SEQ ID NO :1)比胜肽 3(SEQ ID Ν Ο ： 7 )，胜肽 4( SEQ ID 1^0:8)，或甚至比胜肽2(5£〇 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消费合作社印製

ο N D 效 有 爲 更 \ly 2 準 一標 i家 國 j國 I中 -用 適 -^ 尺 一張 紙 -本 必〜“.¾正！ 295590 ㈢无β 五、發明説明（50 )

表V I I 胜肽1與胜肽2，3 ’ 4在人類血漿中抗凝血活性的比 ΛΚ 經濟部中央棣準局員工消費合作社印製 I D ?!. n Ma 胜肽 胜肽序列 aPTT 凝血酶 時間 3 fPRPr,rGRGD(Nle)Pr GDYEPIPE 9 98 ± 108 141 ± 52 4 f PRPr,r,r,RrrD(Nle)Prn DYEPIPEEAYD 1 1 5 ± 24 1 4 ± 3 2 f P R P Π r Γ, R Γ, D F P c Γι D Y R P T PEEA (Cha ) e 60± 18 24± 7 1 fPRPGcriRr,D(N1e)PnrrDY EPIPEEA(Cha)e 1 2 ± 0.2 5± 1 a. 1〇2值（平均值土標準差）是將凝集時間的比對照. 值延長兩倍所需濃度之三組數據平均值。 b· aPTT，活化的部分凝血激素時間。 ---^--.-----.衣-- (請先鬩讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 本紙柒尺度適用中國國家梂準（CNS〉M規格（2丨OX297公釐） -53 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 _B7 五、發明説明（51 ) 參考表 VI I ’ 胜肽 1 (SEQ ID NO: 1) 是胜肽2(SEQ ID NO:2)的同類物，其中胜 肽2(SEQ ID 1^0:2)環尺〇0-又序列中的

苯胺基丙酸（Phe)被以正白胺酸（N1 e)取代。胜 肽3(SEQ ID N0:7)是胜肽2(SEQ

ID NO : 2)的同類物，其中陰離子結合的外位結合 部分（C部分）被截去頭端；胜肽4 (SEQ ID N0:8)是胜肽2b(SEQ ID NO:4)的同 類物，而其僅含天然的左旋胺基酸，而胜肽1 ( S E Q ID N0:1)和胜肽 2(SEQ ID N 0 ： 2 ) 包含於本發明中，胜肽3 (SEQ ID NO: 7)和 胜肽4 (SEQ ID NO:8)並不包含於本發明中 。在12和5nM濃度時，胜肽1 (SEQ ID NO :1 )分別可放大（I D2) a PTT和凝血酶時間爲兩 倍，與胜肽2 (SEQ ID NO:2)比較起來，這 個抗凝血活性的數值約增加五倍。表V I I指出，胜肽3 (S E Q ID N0:7)和胜肽 4(SEQ ID N 〇 : 8 )之抗凝血活性比胜肽2小。 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4规格（210'乂297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本1)

*tT -54 -

A7 7 B 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（52 )

表 V I I I 胜肽1與胜肽2，3，4對人類血小板凝集抑制作用的比 較 胜肽 胜肽序列 I C R n a ADP 凝血酶 μ M nJ. 3 fPRPGcGRGD(Nle)PcGDYEPIPE 29.3+7.8 4 0 7 ± 372 4 fPRPGCGRGD(Nle)PCGD 丫 EPIP EEAYD 35. 9 ± . 5 40 8 ± 180 2 fPRPGcGRGDFPcGDYEPIPEEA (Cha)e 18.7+4.6 60± 26 1 fPRPGcGRGD(Nle)PcGDYEPIPEE A(Cha)e 31. 7 ± 2.3 0 . 4 ± 0. 05 I C 50值（平均值土標準差）是在PRP中抑制血小 板凝集達凝集比較標準值5 0 %所需濃度之兩組數 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、τ Γ -55 - 經濟部中央榡準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（53 ) 據平均值。 凝血豳誘發的血小板凝集 胜肽1-4(SEQ ID NO:1，2，7，8 )對人類血小板凝集之劑量依賴性抑制作用示於表 VI I I ，凝血酶誘發的血小板凝集作用更可被胜肽1 (

SEQ ID Ν〇·1)以 399±76pM 1 C 5。有效的抑制’活性比胜肽2 ( S E Q ID N 0 :2) ( I C5O=60±26nM)強過 i 5〇 倍。 胜狀4(SEQ ID N〇:8)，其具所有天然 左旋胺基酸的同類物，和胜肽3 (SEQ ID NO: 7 ) ’其具有縮短的竣基（C 0〇H)端的同類物，活性 比胜肽1約小1 0 0 0倍。 A D P誘發的血小板凝集 分解素活性用對人類血小板A D P誘發之凝集作用的 劑量依賴性抑制作用來測定而示於表V I I I 。胜肽i ( SEQ ID NO:l) (IC50=32eM)和胜肽 2 ( S E Q ID N〇：2)(IC 5〇= 1 9 以 M )顯 示有類似的活性，胜肽4 (SEQ ID NO: 8)，

具所有天然左旋胺基酸的同類物，和胜肽3 ( S E Q I D NO : 7)，具縮短的羧基端之同類物，在分解素 活性方面，則與胜肽1(SEQ ID ΝΟ:1)有大 約相等的活性。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 一 56 - (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、11 295590 8ό. f- u： 85. δ· f A7 B7 五、發明説明（54一） — 全ίΐπ的血小板凝集作用 由 ADP (〇. 5βΜ)和凝血酶（0. 025U/ mi?)結合所誘導的人類和大白鼠全血的血小板凝集作用 分別被胜肽1以2 . 9和4 2 . 5 η Μ I C 5。所抑制（ 如第3圖），因此，胜肽1(SEQ ID Ν Ο ： 1 ) 在人類血中的活性約爲在大白鼠中的1 5倍，而且胜肽1 (SEQ ID NO :1)在人類血中可完全抑制凝集 ，相反的，大白鼠血中則約只能達到最高點的5 0%。 狗的胖肽1靜脈給藥 當輸注胜肽1 (SEQ ID NO: 1) 1小時於 經濟部中央標準局貝工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 被麻醉的狗，結果證其具有凝血酶和血小板凝集的抑制作 用。而且，當輸注停止後，胜肽1(SEQ ID NO :1)的作用期不長，凝血酶時間（第4圖）和a PTT (第5圖）被以1和5nmo 1/kg/mi η的输注速 率劑量依賴性的延長。當輸注胜肽1 (SEQ ID NO : 1 )時，凝血酶時間受抑制的敏感性比a PTT高 。綜合第2圖的數據顯示，最大的抑制作用在1 5 - 3 0 分鐘，輸注停止（60分鐘）後，輸注速度1和 5 nmo 1/kg/m i η的凝血酶活性分別以1 7 土 Ό 1和2 6 ± 3 . 2分鐘的藥效半生期（pharmacodynami c t 1 / 2 )恢復。

血小板凝集的抑制作用確認了胜肽1 ( s E Q ID 表紙張尺度適用中國國家樣準（CNS ) A4規格（210X 297公着) ' -57 - (ίό. !. 02 Α7 Β7 五、發明説明（55 ) NO: 1)在凝集試驗方面的作用。胜肽1 (SEQ ID NO : 1 )的輸注抑制凝血酶誘發的血小板凝集 1 5分鐘（第6圖），在三隻狗中有2隻其抑制作用在輸 注的1小時期間內仍維持著。在速度爲Inmo1/kg /m i η的輸注停止後’血小板活性以藥效的半生期（ pharmacodynamic t 1/2) 1 2 · 8 ± 1 . 1 分鐘恢復。 三隻狗中的一隻其A D P誘發的血小板凝集作用在每 一種劑童速度下均受到抑制，在體外試驗中，AD P誘發 的血小板凝集作用在# Μ的程度即受到抑制，我們相信（ 但本發明並未受限於此信念），在全血血小板的凝集中， 以生理鹽水對血所作的1 : 2稀釋，減少了胜肽1 ( SEQ ID NO: 1)有效抑制ADP誘發的血小板 凝集所需的濃度，當狗接受胜肽1 (SEQ ID NO :1 )時，出血時間（第7圖）和血小板數依然穩定，血 壓（第9圖）和心跳速度（第1 〇圖）依劑量而中度的升 高。這些參數在輸注結束2小時後變回基準線比較標準值 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央標準局員工消费合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家梂準（CNS ) Α4規格（210 X 297公釐） -58 - A 7 B7 i、發明説明（56) 表I X 胜肽1對大白鼠動脈栓塞的作用 胜肽1 nmo 1 / kg /in i na 栓塞時間 動物數 栓塞數/ 實驗數 控制組 實驗組 5 15.7+ 1.4 24.1+5.8 6/6 10 1 7. 1 ± 1.3 40. 4± 5. 8** 4/7 25 1 8. 6 ± 1.7 58. 1 ± 9. 5** 1/5 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、1Τ 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 a .在用三氯化鐵破壞前的1 5分鐘，即開始輸注超過 6 0分鐘。 ^P<0. 01對比較標準值。 胜肽1被用以評估在三氯化鐵誘發的大白鼠頸動脈栓 塞模型中的抗栓塞活性。當在用三氯化鐵前的1 5分鐘， 即開始以 5 ，10，25nmo 1/kg/mi η (如表 I X和圖1 1 )的速度，連續靜脈輸注1小時，則栓塞作 用依劑量而延長。輸注期間內，當劑量速度爲 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -59 - A7 _B7_ 五、發明説明（57 ) 25nmo 1/kg/mi η時，5隻大白鼠中有4隻其 栓塞得以預防；當速度爲10和5nmo 1/kg/ m i η時，分別有7隻中的4隻和6隻中的0隻其栓塞得 以預防。在使用三氯化鐵後，使栓塞作用放大爲兩倍，所 需之胜肽1(SEQ ID NO:1)的劑量速度’與 先前觀察之胜肽2(SEQ ID NO: 2)之 33. 7nmo 1/kg/mi η比較起來，其速度爲 19. 3nmo 1/kg/mi η。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 、?τ 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） -60 A7 A7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（58 )

表X "(L)Cys環〃與（D) 對人類血小板 凝集的抑制作用 胜肽 胜肽序列 I C B fi a ADP 凝血酶 μ M 〇JL 5 fPRPGCRIPRGD(Nle)PADC GDYEPIPEEA(Cha)e 1 . 4 ± 0.3 231 ± 187 6 fPRPGcRIPRGD(Nle)PADc GDYEPIPEEA(Cha)e 2. 1 土 〇· 4 21 ± 20 I C 5 0值（平均值士標準差）是在p r p中抑制血小 板凝集達凝集比較標準值5 0 %所需濃度的兩組數據 平均值。 表X說明兩種立體異構物間的差異，該異構物乃因在 催化部位抑制子和陰離子結合的外位識別序列間的連接性 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -61 ^95590 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 59 ) 1 1 橋 樑 含 有 ( L ) 1 I C y S 殘 基 取 代 ( D ) C y S 所 產 生 的 〇 胜 肽 5 ( S E Q 1 1 | I D N 0 9 ) 及 胜 肽 6 ( S E Q I D N 0 請 1 1 1 0 ) 代 表 胜 肽 1 ( S E Q I D N 0 1 ) 之 同 類 物 先 閱 讀 1 I 〇 環 狀 R G D 序 列 上 含 有 其 它 殘 基 〇 胜 肽 5 ( S E Q 背 I 之 I I D N 0 9 ) 亦 有 差 異 其 差 異 處 爲 其 在 連 接 性 橋 注 意 1 I 事 1 樑 中 含 有 ( L ) C y S 殘 基 而 非 ( D ) C y S 〇 不 同 空 項 再 1 間 方 位 造 成 了 ( D ) C y S 的 同 類 物 ( 胜 肽 6 ( S E Q 今（ 頁 1 I D N 0 1 0 ) ) 對 凝 血 酶 誘 發 的 人 類 血 小 板 凝 集 有 1 較 大 的 抑 制 作 用 〇 兩 個 立 體 異 構 物 間 在 凝 血 酶 活 性 方 面 被 1 1 觀 察 到 有 1 0 倍 的 差 異 0 而 在 A D P 誘 發 的 血 小 板 凝 集 和 1 1 抗 凝 血 活 性 的 抑 制 並 沒 有 差 異 0 注 意 胜 肽 1 ( S E Q 訂 1 I D N 0 1 ) 的 修 改 僅 產 生 一 個 天 然 左 旋 胺 基 酸 的 同 1 I 類 物 — — 胜 肽 4 ( S E Q I D N 〇 8 ) — 一 擴 大 了 1 1 1 兩 體 異 播 稱 物 間 的 差 異 0 事 實 上 胜 肽 1 ( S E Q I D 1 1 N 0 1 ) 對 凝 血 酶 誘 發 的 血 小 板 凝 集 之 抑 制 作 用 約 比 Γ 胜 肽 4 ( S E Q I D N 0 8 ) 強 1 0 0 0 倍 ( 如 表 1 1 V I I I ) 而 對 A D P 誘 發 的 血 小 板 凝 集 這 兩 種 立 體 1 I 異 構 物 間 並 yfrrr 撕 差 異 〇 然 而 在 抗 凝 血 活 性 方 面 含 ( D ) 1 I C y S 同 類 物 的 胜 肽 1 ( S E Q I D N 〇 1 ) 比 含 1 r 所 有 天 然 胺 基 酸 的 同 類 物 — — 胜 肽 4 ( S E Q I D 1 1 N 0 8 ) 活 性 強 0 r 1 1 胜肽 1 與 肸 肽 1 同 頬 物 間 的 相 對 活 件 1 1 1 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210 X297公釐） 62 心 A7 ^^5590 _B7_ 五、發明説明（60 ) 表XI— XIV說明胜肽1 (SEQ ID NO 1 )的同類物與所建立的I C 5。血小板抑制和I D 2抗凝 血數據間之比例。以這些比較的目的而言，胜肽1 ( SEQ ID NO:1)的樣本有以下的活性：凝血作 用——ID2(aPTT=27. 9nM;凝血酶時間= 1 5 η Μ ) ，·凝集作用——IC5tJ(凝血酶=5. 8M， A D P = 1 1 . 4 a Μ )，表 XI— XIV 中所列胜肽 7 -18 ( S E Q ID ΝΟ:11 — 22)之 aPTT ，凝血酶時間，凝血酶和AD P僅代表比較值，而並不意 味著代表胜肽真正的濃度--因此，沒有提出單位》例如 ，胜肽 7(SEQ ID ΝΟ:11)其 aPTT 值爲 0 . 9 9 ，表示當進行正常人類血槳活化的部分凝血激素 時間（a P T T )之分析時，胜肽7 ( S E Q ID N〇：11)的活性爲胜肽1 (SEQ ID Ν Ο ： 1 )的 9 9 % 。 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、tT 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 本紙張尺度逋用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 63 - 五、 295590 A7 B7 發明説明（ 胜 肽

表X 胜壯1與B a被取代的同類物間的相對活性 胜肽序列 凝血

aPTT 凝血酶 時間 請凝集备 讀 ~~备 凝血酶

Al· 項 再 f PRPQr.GRGDMPc GDYEPIPEEA(Cha)e 0.99 0. 1 9 10 本 頁 r fPRPfirGRGD(rha)P C_GDYEPIPEEA(Cha)e 0. 60 1. 04 • 12 〇·々 表XI說明兩個胜肽1(SEQ ID N〇:

的同類物間的差異一—胜肽7 (SEQ

D N〇: 經濟部中央榡隼局員工消費合作社印製 11)和 8(SEQ ID NO: 12)，二者均爲本 發明的化合物。胜狀7 (SEQ ID NO: 11)是 —種胜肽1 (SEQ ID NO: 1)的同類物，其中

B 4部分的N1 e已被Me t取代，而胜肽8 (SEQ ID NO:12)是一種胜肽 1(SEQ ID NO :1)的同類物，其中部分的NI e已被Cha取代 。在aPTT的分析方面，胜肽8 (SEQ ID NO 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -64 - A7 B7 五、發明説明（62 ) 1 2 ) 的 活 性 約 比 胜 肽 1 小 1 / 3 ， 但 胜 肽 7 ( S E a P T T 值 基 本 上 與 胜 肽 1 相 同 〇 在 凝 血 酶 時 間 的 值 方 肽 7 ( S E Q I D N 〇 I D N 〇 1 ) 活 性 的 I D N 〇 1 2 ) 事 實 上 N 0 1 ) 更 具 活 性 〇 由 記 胜 肽 1 ( S E Q I D N 1 0 倍 的 差 異 0 在 A D P 活 I D N 0 : 1 2 ) 的 活 性 N 〇 ： 1 ) 的 1 / 2 而 胜 1 1 ) 的 活 性 大 約 是 胜 肽 1 的 3 / 4 〇 (S E Q ID N 0 ： 1 ) Q ID N Ο : 1 1 )的 (S E Q ID N O ： 1 )

面，這些值隨胜肽而變一一胜 :11)僅爲胜肽1 (SEQ 19%，而胜肽8 (SEQ 卻比胜肽1 ( s E Q ID 錄顯示，在凝血酶活性方面， 0 : 1 )與每一種同類物間有 性方面，胜狀8 ( S E Q 大約是胜肽1 (SEQ ID 肽 7(SEQ ID NO: (SEQ ID N 0 : 1 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 CN 準 標 家 圈 國 中 用 適 度 尺 張 紙

格 規 4 A

釐 公 7 9 2 X 5 6 295590五、發明説明（63 A7 B7

表X 胜B女1 SB β被取代的音黴胺同類物之相對活件

胜肽序列 aPTT 凝血酶 凝血酶 時間

10 (Cha ) e fPRPrTcr,(Me-R)GD (N1e)P(Dnen)GDY EPIPEEA(Cha)e .52 .92 .08 訂 經濟部中央標隼局員工消費合作社印聚 表XI I說明兩種胜肽1 (SEQ ID NO: 1 )青徽胺同類物間的差異—-胜肽9 (SEQ ID NO:13)和 10(SEQ ID N〇:14)，二 者均非本發明的胜肽。這張表被提出而顯示B 3部分的 A r g與Me_A r g間的可交換性。青徽胺部分的導入 ，大大地降低胜肽9(SEQ ID NO:13)各方 面的活性。對胜肽10 (SEQ ID NO: 14)而 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（210X 297公釐} -66 - A7 B7 五、發明説明（64 )言，在凝血酶活性方面

與胜肽9 ( S E Q

D

NO IX 而， ο 低N 降 的 D 微 I 些 僅 Q 間 E 時 S 0 ( 血 1 凝肽 但胜 ’ 比 低卻 降面 樣方 同性 。 } 活倍 3 P 6 1 D 強 : A 增 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨0'乂297公釐） 67 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 295590 五、發明説明（65 )

表 X I I I 胖肽1趄Β β被取代的同類物之相對活性 胜 肽 胜肽序列 凝血 凝集 請 先 閱 背 aPTT 凝血酶 時間 凝血酶 AI 面 之 »1 事 項 再 寫 11 fPRPGcvRGD(Nle)Pc GDYEPIPEEA(Cha)e 0.37 0.86 0.13 0. 本 頁 r 12 fPRPGcvRGD(Nle)Pc GDYEPIPEEA(Cha)e 0.53 1.38 0.14 0. 8 13 fPRPGcRr,D(Nle)Pc GDYEPIPEEA(Cha)e 0. 40 0.27 0. 04 0. \ ：〇 14 f P R P G c t R fi D ( N 1 e ) P c GDYEPIPEEA(Cha)e 0.75 0.93 0. 08 0. 5 ：2 15 fPRPGcnRGDCNle)Pc GDYEPIPEEA(Cha)e 0.59 1.12 0.36 0. ί !6 本紙張尺度逋用中國國家標準（CNS ) A4规格（21〇X297公釐） 68 - A7 B7 五、發明説明（66) 表X I I I說明B2部分的G 1 y殘基與不同右旋胺 基酸間的可交換性。胜肽11 (SEQ ID N〇： 15)，12(SEQ i d NO:16)，14( SEQ ID N0:i8)和 15(SEQ ID NO: 19)爲胜肽 1 (SEQ ID NO:l)的同 類物，其中B2部分以不同D型胺基酸取代，且均爲本發 明的胜肽，胜肽13(SEQ ID N〇：17)並非 本發明的胜肽，但是胜肽1 (SEQ ID NO: 1) 的同類物’其中B2部分的G 1 y殘基被去除。 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本貢) 訂 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 準 樣 家 國 一國I樹 ，適 尺 張 紙 I本 |釐 公 97 2 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、 發明説明（67 ) 表X I V 胖肽1與A，被取的同鍤物之相對活件 — 胜 肽 — 胜肽序列 凝血 凝集 請 先 閲 背 aPTT 凝血酶 時間 凝血酶 AI ά: 之 1 再 填 寫 16 — 17 (D-Phff)RPGcGRGD(Nle )PqGDYEPIPEEA(Cha)e 0. 72 1.03 0.94 0. E 本 頁 r (D-3-TiQ)PRPGcGRGD( Nle)PcGDYEPIPREAC C h a ) e 0.62 0.93 0.13 1 . ί 7 18 C N-Me-f )PRPGcGRGD( Nle)PcGDYEPIPEEA( Cha ) e 1.73 0.77 0. 55 0. ^ 3 表X I V說明Ai部分（D) P h e殘基的可交換性 。胜狀 16 — 18(SEQ ID N〇：20-22) 均爲本發明的胜肽，胜肽16 (SEQ ID N〇： 2 0 )基本上在凝血酶活性和凝血酶時間展現與胜肽1 ( 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公嫠） -70 - 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 29559ο Α7 Β7 五、發明説明（68) S Ε Q I D N 0 : 1 ) 相 同 的 活 性 〇 胜 狀 1 7 ( S Ε Q I D N 0 : 2 1 ) 基 本 上 展 現 與 胜 肽 1 ( S Ε Q I D N 0 ： 1 ) 相 同 的 凝 血 酶 時 間 值 9 而 有 較 大 的 A D P 值， ，但 在凝血 酶 值 方 面 > 活 性 比 胜 肽 1 ( S Ε Q I D N 0 ： :1 ) 小 1 0 倍 〇 胜 肽 1 8 ( S E Q I D N 0 : :2 2 ) 在 a P T T 值 方 面 比 胜 肽 1 ( S Ε Q I D N 0 ： 1 ) 展 現 明 顯 的 增 加 9 但 在 凝 血 酶 時 間 方 面 ♦ 活性僅 爲胜肽 1 ( S E Q I D N 0 1 ) 的 7 7 % ， 而凝血 酶和A D P 值 方 面 > 活 性 僅 爲 胜 肽 1 ( SEQ ID NO:l)的一半》 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） - 71 _ 經濟部中央標準局員工消費合作社印袋 A7 B7 五、發明説明（69 ) 列出 (1 ) 一般資訊·· (i)申請人 (A )姓名：Merrell Dow Pharmaceuticals Inc. (B )街道：2110E. Galbraith Road, P. 0. Box 156300 (C )城市：Cincinnati (辛辛納堤） (D )州名：Ohio (俄亥俄） (E )國家：美國 (F) 郵遞區號（ZIP) :45215-6300 (G) 電話：513/948—6566 (Η)電話傳真：513/948-7961 或 4 6 8 1 (I)電報：214320 (i i )發明名稱：三功能性的抗凝血酶抗血小板胜肽 (i i i )序列數目：2 2 (i v )電腦可讀型式： (A )媒介型式：Floppy碟片 (B) 電腦：IBM PC可相容的 (C) 操作系統：PC — DOS/MS — DOS (D )軟體：patentln Release #1.0，Version #1.25(EP0) (vi)更重要的申請資料： (A)申請號碼：US08/076，066 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -一° 72 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 70 ) 1 I ( B ) 歸 檔 曰 期 1 1 — J U N — 1 9 9 3 ( 1 I 1 9 9 3 年 6 月 1 1 曰 ) 1 1 | (2 ) S E Q I D N 0 1 的 資 料 r·—V 1 I 請 | ( i ) 序 列 特 徵 先 閱 讀 1 I ( A ) 長 度 2 5 個 胺 基 酸 背 | 之 ( B ) 型 式 胺 基 酸 注 意 1 I 事 1 ( C ) 解 剖 學 直 線 項 再 1 4 ( i i ) 分 子 型 式 ： 胜 肽 本 頁 1 ( i X ) 特 性 1 1 ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改 的 位 置 1 1 ( B ) 位 置 1 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記 位 置 1 的 X a a 是 右 旋 訂 1 的苯 胺 基 丙 酸 1 | ( i X ) 特 性 1 I ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改 的 位 置 1 1 ( B ) 位 置 6 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記 位 置 6 的 X a a 是 D — 1 1 c y s 而 以 硫 (S u 1 f i de ) 鍵 結 於 位 置 1 3 的 D — c y s /f 1 ( i X ) 特 性 1 I ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改 的 位 置 1 r ( B ) 位 置 1 1 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記 位 置 1 1 的 X a a 是 正 1 白胺 基 酸 ( no r 1 e u C X n e ) 1 1 ( i X ) 特 性 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -73 - A7 B7 五、發明説明（71 ) (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是D _Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy s， (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=a位置24的Xaa是環 己基胺基丙酸"（cyclohexylalanine) (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記= > 位置25的Xaa是右 旋的舞胺酸y (Glutamic acid) (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Ty ! 5 10 15 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) S E Q ID NO :2 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (C) 解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） -74 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（72 ) (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xa a是D_ Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D — Cy s (i x )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy s (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=^位置25的Xaa是右 本紙張Κ度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 75 - A7 B7 五、發明説明（73 ) 旋的麩胺酸"· (xi)序列描述：SEQ ID N Ο ： 2

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Phe Pro Xaa Gly Asp Tyr ! 5 l〇 15

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) S E Q ID ^^〇：3的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：8個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=^位置1的Xa a是D — Cy s而以硫鍵結於位置8的D — Cy s〃 (i x )特性： 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：8 (D)其它資料：/註記=，位置8的又3 3是0_ Cy s而以硫鍵結於位置1的D — Cy s" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 3

Xaa Gly Arg Gly Asp Phe Pro Xaa 1 5 本紙張尺度適用中國國家樣準（CNS > A4规格（210X297公釐） 76 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（74 ) (2 ) S E Q ID N0:4 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：10個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：胜肽 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=*位置1的Xa a是以酸 號ϊθ醯基（succinyl)取代的T y r" (i x )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：9 (D)其它資料：/註記=t位置9的Xaa是環己 基胺基丙酸# (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：10 (D)其它資料：/註記=Μ立置的Xa a是右旋的 麩胺酸' (xi)序列描述：SEQ ID Ν Ο ： 4

Xaa Glu Pro lie Pro Glu Gla Ala Xaa Xaa 1 5 10 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公嫠） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 77 - 經濟部中央標準局員工消費合作杜印裝 A7 B7 五、發明説明（75 ) (2 ) S E Q ID N0:5 的資料： (i )序列特徵： (A)長度：5個胺基酸 (B )型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=^位置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 5

Xaa Pro Arg Pro Gly 1 5 (2 ) SEQ ID N〇:6 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：3個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 78 - A7 295590 B7 五、發明説明（76 ) 的苯胺基丙酸^且以甲基取代 (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 6 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁)

Xaa Pro Arg 1 (2) SEQ ID NO:7的資料： (i )序列特徵： (A)長度：21個胺基酸 (B )型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=，位置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸# (i X )特性： 經濟部中央標隼局員工消費合作社印製 (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xaa是D— Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D — Cy s" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是正 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -79 - A7 B7 五、發明説明（77 ) 白胺酸 (i X )特性： (A )名稱/關鍵 (B)位置：13 (D )其它資料： 修改的位置 註記

位置1 3的Xa a是D

Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy

序列描述：S E Q

D N 0 ： 7

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyl 1 5 10 Glu Pro He Pro Glu 20 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (2 ) S E Q ID NO:8 的資料： (i )序列特徵： (A)長度：25個胺基酸 (B )型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A )名稱/關鍵 (B )位置：1 (D )其它資料： 的苯胺基丙酸 (i X )特性： (A )名稱/關鍵 修改的位置 註記 位置1的Xa a是右旋 修改的位置 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 80 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（78) (B)位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是正 白胺酸# (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 8

Xaa Pro Arg Pro Gly Cys Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Cys Gly Asp Tyr 1 5 10 15

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Tyr Asp 20 —… 25 .....— (2 ) SEQ ID 1\[〇：9的資料： (i )序列特徵： (A)長度：29個胺基酸 (B )型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xaa是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置’ ：1 3 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是正 白胺酸' (i X )特性： 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210'乂297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -81 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明 (7! 3) 1 I ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改的 位置 1 1 1 ( B ) 位 置 2 8 1 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記= '位置 2 8 的 X a a是 環 ，·~·s 1 I 請 1 I 己基 胺 基 丙酸 ft 先 閱 I 讀 | ( i X ) 特 性 背 ιέ | 之 1 ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改的 位置 意 1 事 1 ( B ) 位 置 2 9 項 再 1 填 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記= 位置 2 9 的 X a a是 右 本 r — 頁 1 的麩 胺 酸 ff 1 I ( X i ) 序 列 描 述 S E Q I D N 0 9 1 1 1 Xaa Pro Arg Pro Gly Cys Arg lie Pro Arg Gly Asp Xaa Pro Ala Asp 1 i 丁 1 5 10 15 I Cys Gly Asp Ty r Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 1 1 20 25 1 1 (2 ) s E Q I D N 0 :1 0的資 料 1 1 ( i ) 序 列 特 徵 1 ( A ) 長 度 2 9 個 胺 基酸 1 1 ( B ) 型 式 胺 基 酸 1 ( D ) 解 剖 學 直 線 1 I ( i i ) 分 子 型 式 胜 肽 Γ ( i X ) 特 性 1 1 ( A ) 名 稱 / 關 鍵 修 改的 位置 1 ( B ) 位 置 1 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記= 1位置 1 的 X a 3是右 旋 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 82 - 經濟部中央標率局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（80 ) 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記= ' 位置6的Xaa是D — Cy s而以硫鍵結於位置1 7的D_Cy (i x )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：17

(D)其它資料：/註記= > 位置1 7的Xa a是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D_Cy s" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 8 (D)其它資料：/註記=Μ立置28的Xaa是環 己基胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 9 (D)其它資料：/註記=Μ立置2 9的Xa a是右 旋的麩胺酸" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 0

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Arg lie Pro Arg Gly Asp Xaa Pro Ala Asp 1 5 10 15

Xaa Gly Asp Tyr Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 29*7公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -83 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、發明説明（ 80 ) 1 I 的苯 胺 基 丙 酸 1 I ( i X ) 特 性： 1 1 1 ( A ) 名 稱/ 關 鍵： 修 改 的位 置 '--·. 1 I 請 1 ( B ) 位 置： 6 先 閱 讀 I ( D ) 其 它資 料 ：/ 註 記 — 免 位 置 6 的 X a a 是 D - 背 I 之 1 c y S 而 以 硫 鍵結 於 位置 1 7 的D — C y s 注 意 1 1 事 1 ( i X ) 特 性： 項 再 1 填 ( A ) 名 稱/ 關 鍵： 修 改 的位 置 -r — 頁 1 ( B ) 位 置： 1 7 1 ( D ) 其 它資 料 ·_ / 註 記 _ ， 位 置 1 7 的 X a a 是D 1 1 一 C y s 而 以 硫鍵 結 於位 置 6 的D — C y s 1 1 ( i X ) 特 性： 訂 1 ( A ) 名 稱/ 關 鍵： 修 改 的位 置 1 I ( B ) 位 置： 2 8 1 I ( D ) 其 它資 料 ·· / 註 記 _ 免 位 置 2 8 的 X a a 是環 1 1 己基 胺 基 丙 酸 >r 1 ( i X ) 特 性： 1 1 ( A ) 名 稱/ 關 鍵： 修 改 的位 置 1 ( B ) 位 置： 2 9 1 1 ( D ) 其 它資 料 註 記 — ， 位 置 2 9 的 X a a 是右 1 旋的 麩 胺 酸 ff 1 1 ( X i ) 序 列描 述 :S E Q I D N 〇 ： 1 0 1 Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Arg lie Pro Arg Gly Asp Xaa Pro Ala L Asp 1 1 5 -一- 10 15 1 Xaa Gly Asp Tyr Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xa a 1 20 25 1 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 一 83 - A7 B7 五、發明説明（81 ) (2 ) S E Q ID N〇：ll 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xa a是D_ Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D — Cy (i x )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記="位置13的Xaa是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D_Cy s" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） _ 84 _ A7 B7 五、發明説明（82 ) (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸 (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xaa是右 旋的麩胺酸' (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 1

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Met Pro Xaa Gly Asp Tyr α 5 、 10 15 G1 u Pro He Pro Glu Glu Ala Xaa Xa.a 20 25 (2 ) SEQ ID NO:12 的資料： (i )序列特徵： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (A)長度：25個胺基酸 (B )型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Μ规格（210X29·?公釐〉 -85 - A7 B7 五、發明説明（83 ) (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記="位置6的Xa a是D_ Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D — Cy s' (i x )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是環 己基胺基丙酸 (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B)位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是D _Cy s而以硫鍵結於位置6的D_Cy s" (i X )特性： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xaa是右 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 86 - A7 295590 _B7_____ 五、發明説明（84 ) 旋的麩胺酸 (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 2

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 15 10 15

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) SEQ ID NO:13 的資料： (i)序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料·_ /註記=、位置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xa a是右旋 的半腕胺酸（cysteine) 〃 (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 本紙張尺度適用中國國家橾準（CNS ) A4规格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 -87 - 經濟部中央標隼局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（85 ) (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的xa a是正 白胺酸' (i X )特性__ (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是右 旋的青徽胺 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記="位置2 5的Xa a是右 旋的麩胺酸" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 3

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 5 - 10 15

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) SEQ ID NO :14 的資料·· (i )序列特性： (A)長度：25個胺基酸 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4规格（21〇X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -88 - A7 B7 五、發明説明（86 ) (B)型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xa a是右旋 的半胱胺酸 (i X )特性： • (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：8 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)其它資料：/註記=Μ立置8的Xa a是甲基 阿全胺基酸（Methylarginine) f (i x )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 1 (D)其它資料：/註記= > 位置1 1的Xa a是正 白胺酸' (i X )特性： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨Ο X 297公釐） -89 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 87 ) 1 I ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 I ( B ) 位置： 1 3 1 1 I ( D ) 其它資料 ' / 註記=' 位置 1 3 的 X a a是右 1 I 請 I 旋的青徽胺 先 閱 I 讀 I ( i X ) 特性： 背 ιέ I 之 ( A ) 名稱/ 關 鍵： 修改的位置 注 意 1 f 事 1 ( B ) 位置： 2 4 項 再 1 峰 1 ( D ) 其它資料 註記=' 位置 2 4 的 X a a是環 ▲ - 頁 1 己基胺基丙酸' 1 ( i X ) 特性： 1 1 ( A ) 名稱/ 關 鍵： 修改的位置 1 1 ( B ) 位置： 2 5 訂 1 ( D ) 其它資料 註記=' 位置 8 的 X a a 是右旋 1 1 的麩胺酸 1 I ( X i ) 序列描述 :S E Q I D N 〇 14 1 1 Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Xaa Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr I 1 5 10 15 I Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 1 20 25 1 1 (2 ) s E Q I D N 0:15 的資料 I 1 1 ( i ) 序列特徵 I ( A ) 長度： 2 5個胺基酸 1 1 ( B ) 型式： 胺基酸 1 ( D ) 解剖學 ; 直線 1 1 ( i i ) 分子型式 :胜肽 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -90 - 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 A7 B7 五、發明説明（88 ) (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=，位置6的Xa a是D-Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D — Cy (i x )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：7 (D)其它資料：/註記=Μ立置7的Xa a是右旋 的酪胺酸（Tyrosine) ^ (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是正 白胺酸' (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是D_ 本紙張尺度適用中國國家標率（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 -91 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印餐 A7 B7 五、發明説明（89 )

Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy s" (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xaa是右 旋的麩胺酸" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 5

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Xaa Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 5 l〇 15

Glu Pro lie Pro G1u Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) SEQ ID NO:16 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS〉A4規格（210X 297公釐） 一 92 _ (讀先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

、1T 經濟部中央標準局員工消費合作社印裂 A7 B7 五、發明説明（90 ) (D)其它資料：/註記=Μ立置1的xa a是右旋 的苯胺基丙酸^ (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xaa是D— Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D_Cy s' (i x )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置__ 7 (D)其它資料：/註記=Μ立置7的Xa a是右旋 的2 —胺基異戊酸 (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是正 白胺酸" (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=a位置1 3的Xa a是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy (i x )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 93 - 295590 A7 B7 五、發明説明（91 ) (B )位置：2 4 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)其它資料：/註記="位置24的Xaa是環 己基胺基丙酸" (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xaa是右 旋的麩胺酸 (xi)序列描述：SEQ ID NO: 16

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Xaa Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 15 10 15

Glu Pro lie Pro Gla Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) SEQ ID NO:17 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：24個胺基酸 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=^位置1的Xa a是右旋 的苯胺基丙酸" 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 一 94 一 A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作杜印製 五、 發明説明（92) 1 | ( i X ) 特性： 1 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 1 1 ( B ) 位置：6 1 I 請 I ( D ) 其它資料：/ 註記= > 位置 6 的 X a a是 D - 先 閱 I 讀 1 I C y S 而以硫鍵結於位置 1 2 的 D - C y S 背 T& | 之 1 ( i X ) 特性： 意 1 事 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 項 再 1 填 ( B ) 位置：1 0 馬 本 - 頁 1 ( D ) 其它資料：/ 註記=a位置 1 0 的 X a a 是正 '〆 1 白 胺 酸 ff 1 1 ( i X ) 特性= 1 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 訂 1 ( B ) 位置：1 2 1 I ( D ) 其它資料：/ 註記= ' 位置 1 2 的 X a a 是D 1 I — C y s 而以硫鍵結於位置6的D - C y S 1 1 ( i X ) 特性： 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 1 ( B ) 位置：2 3 1 1 ( D ) 其它資料：/ 註記=位置 2 3 的 X a a 是環 1 I 己基胺基丙酸' 1 ( i X ) 特性： 1 1 I ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 ( B ) 位置：2 4 1 1 ( D ) 其它資料：/ 註記=^位置 2 4 的 X a a 是右 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐〉 -95 - A7 B7 五、發明説明（93 ) 旋的麩胺酸" (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 7

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr Glu 15 10 15

Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 ' - (2 ) SEQ ID NO:18 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的xa a是右旋 的苯胺基丙酸# (i X )特性： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閲讀背面之注意事項再填寫本頁) (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=位置6的Xa a是D_ Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D_Cy s〃 (i x )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：7 本紙張尺度適用中國國家揉準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 96 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（94 ) (D)其它資料：/註記=Μ立置7的Xaa是右旋 的滋利胺基酸（Threonine)" (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 1的Xa a是正 白胺酸 (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 (D)其它資料：/註記=Μ立置1 3的Xa a是D 一 Cy s而以硫鍵結於位置6的D_Cy s" (i X )特性： (A )名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置 (D)其它資料：/註記=位置2 5的Xa a是右 旋的麩胺酸' (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 1 8 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -β -97 - A 7 B7 經濟部中央標準局貝工消費合作杜印製 五、發明説明（9E 丨） 1 1 Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Xaa Arq Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 | 1 5 10 15 1 Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 1 20 25 | 請 jk (2 ) s E Q I D N 0 ：1 9 的 資 料 元 閱 讀 ( i ) 序 列 特 徵 背 面 I 1 | ( A ) 長 度 2 5 個 胺 基酸 注 意 拳 1 1 ( B ) 型 式 ： 胺 基 酸 項 再 1 1 捧 1 ( D ) 解 剖 學 直 線 寫 - 頁 1 ( i i ) 分 子 型 式 • 胜 肽 1 I ( i X ) 特 性 1 1 I ( A ) 名 稱 / 關 鍵 ： 修 改的 位 置 1 1 訂 ( B ) 位 置 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記= 位 置 1 的 X a a 是右 旋 1 1 的苯 胺 基 丙 酸 ff 1 I ( i X ) 特 性 1 ( A ) 名 稱 / 關 鍵 ： 修 改的 位 置 1 I ( B ) 位 置 6 1 1 1 ( D ) 其 它 資 料 / 註 記= 位 置 6 的 X a a 是D — 1 C y s 而 以 硫 鍵 結 於 位 置 3 1的 D — C y S 1 ( i X ) 特 性 : 1 ( A ) 名 稱 / 關 鍵 : 修 改的 位 置 1 ( B ) 位 置 7 1 I ( D ) 其 它 資 料 ： / 註 記= 位 置 7 的 X a a 是右 旋 1 1 | 的吡 瞎 胺 酸 ff 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210x297公釐） -98 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 96 ) 1 I ( i X ) 特性： 1 I ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 1 I ( B ) 位置：1 1 1 1 請 1 I ( D ) 其它資料：/ 註記= > 位置 1 1 的 X a a是正 先 閱 I 讀 1 | 白胺酸 背 | 之 1 ( i X ) 特性： 意 1 I ψ 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 項 再 1 填 ( B ) 位置：1 3 本 - 頁 1 ( D ) 其它資料：/ 註記=^位置 1 3 的 X a a是D 1 1 -C y s 而以硫鍵結於位置6的D - C y s 1 1 ( i X ) 特性： 1 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 訂 1 ( B ) 位置：2 4 1 I ( D ) 其它資料：/ 註記=^位置 2 4 的 X a a是環 1 1 I 己基胺基丙酸 1 1 ( i X ) 特性： 1 ( A ) 名稱/關鍵： 修改的位置 1 ( B ) 位置’· 2 5 1 I ( D ) 其它資料：/ 註記= ' 位置 1 的 X a a 是D型 j 的麩胺酸 fr 1 1 ( X i ) 序列描述：S E Q ID N 0 1 9 1 1 Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Xaa Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Ty r 1 1 5 10 15 1 G1 u Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 1 20 25 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X 297公釐） 一 99 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 A7 B7 五、發明説明（97 ) (2 ) S E Q ID NO:20 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xa a是右旋 的苯胺基醋酸# (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xaa是D— Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D-Cy s" (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 1 (D)其它資料：/註記=t位置1的Xaa是正白 胺酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 3 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁)

*1T -100 - A7 B7 五、發明説明（98 ) (D)其它資料：/註記=t位置1 3的Xa a是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy s〃 (i x )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=，位置24的Xaa是環 己基胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xaa是D 型的麩胺酸' (xi)序列描述：SEQ ID N Ο ： 2 Ο

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 5 10 15

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) S E Q ID N〇：21 的資料： 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D)解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 本紙張尺度適用中國國家橾率（CNS ) Μ規格（210 X 297公釐） -101 - 205590 A7 B7 五、發明説明（99 ) (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (B )位置：1 (D)其它資料：/註記=Μ立置1的Xaa是右旋 的’1. 2 . 3. 4 —四氫異喹啉—3 -羧酸， (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xaa是D-Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D_Cy s" (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：11 (D)其它資料：/註記=Μ立置11的Xaa是正 白胺酸" (i X )特性： (A) 名稱/關鍵：修改的位置 (B) 位置：13 經濟部中央標隼局員工消費合作社印袋 (D)其它資料：/註記= > 位置1 3的Xa a是D —Cy s而以硫鍵結於位置6的D — Cy s〃 (i x )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 4 (D)其它資料：/註記=Μ立置24的Xaa是環 己基胺基丙酸# (i X )特性： 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 102 - A7 B7 五、發明説明（100) (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：2 5 (D)其它資料：/註記=Μ立置25的Xa a是右 旋的麩胺酸^ (xi)序列描述：SEQ ID N 0 ： 2 1

Xaa Pro Arg Pro Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 5 …… 10 15 —

Glu Pro lie Pro Glu Glu Ala Xaa Xaa 20 25 (2 ) SEQ ID NO:22 的資料： (i )序列特徵： (A) 長度：25個胺基酸 (B) 型式：胺基酸 (D )解剖學：直線 (i i )分子型式：胜肽 (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：1 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) (D)其它資料：/註記=”位置1的Xa a是右旋 的1^_甲基苯胺基丙酸' (i X )特性： (A)名稱/關鍵：修改的位置 (B )位置：6 (D)其它資料：/註記=Μ立置6的Xaa是D— Cy s而以硫鍵結於位置1 3的D_Cy s' 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） -103 - A7 B7 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 五、發明説明（ 101) 1 I ( i X ) 特 性 1 I ( A ) 名 稱/ /關 鍵： 修 改的位 置 1 1 I ( B ) 位 置 1 1 ,、 1 | 請 I ( D ) 其 它資料 ：/ 記=， 位 置 1 的 X a a 是正 白 先 閱 1 I 讀 1 胺酸 背 面 1 I 之 1 ( i X ) 特 性 注 意 1 1 事 1 ( A ) 名 稱/ /關 鍵： 修 改的位 置 項 再 1 峰 1 ( B ) 位 置： 1 3 馬 頁 1 ( D ) 其 它資料 ：/ 註 記=' 位 置 1 3 的 X a a是 D 、〆 1 | —C y s 而 以 硫鍵結 於位 :置 6的D — C y s 1 1 ( i X ) 特 性： 1 1 ( A ) 名 稱/ /關 鍵： 修 改的位 置 訂 1 ( B ) 位 置： 2 4 1 | ( D ) 其 它資料 ：/ 註 記=' 位 置 2 4 的 X a a是 環 1 I 己基 胺 基 丙 酸 ff 1 1 ( i X ) 特 性： 1 ( A ) 名 稱/ /關 鍵： 修 改的位 置 1 1 ( B ) 位 置： 2 5 1 1 ( D ) 其 它資料 ：/ 註 記=' 位 置 2 5 的 X a a是 右 1 1 旋的 麩 胺 酸 1 ( X i ) 序 列描述 :S E Q I D N 0 2 2 1 1 Xaa Pro Arg Prc > Gly Xaa Gly Arg Gly Asp Xaa Pro Xaa Gly Asp Tyr 1 1 1 5 10 15 1 Glu Pro lie Prc Glu Glu Ala Xaa Xaa 1 20 25 1 1 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X29*7公釐） -104 -

Claims (1)

1. 295590祕圍 附件 公告本 Α8 Β8 i'; C8 1 D8 , 0 \ί 第83105188號專利申請案 中文申請專利範圍修正本 民國85年$月修正 1 . 一種分子式爲X_A — B — Y的化合物 其中X 是氫原子，乙醯基，或第三丁氧羰基； A 晏如下式之肽同類物， 2 其中 Ai ^(D)Phe，( D ) P h g > ( D ) 3 - T i q ，N-Me-(D)Phe; A 2 是 P r o ; A 3 是 A r g ; B 是如下式之肽同類物， pro—Bi_(D)Cys * -曰2-B3*~Gly-Asp--Pro-（D)Cys 丨—Βι (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 訂 經濟部中央搮隼局員工消費合作社印製 S (3 或 Ργο_3! - ( D) Cys I _曰2 · -B3_Gly_Asp-Nle-Pro-Ala_Asp-（ D ) Cys -Βι (4 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（2丨OX25»7公釐） A8 B8 C8 D8 々、申請專利範圍 其中 B 1 是 G 1 y ; B2 是 Gly，（D)Tyr’ （D)Val’ ( D )Thr 或（D)Pro; B / 是 A Γ g _ I 1 e — P r o ; B 3 是 A r s 或 N — M e — A r g B 4 是 N 1 e 或 P h e ； C是如下式之肽同類物，儿3? — 01—(：2—(：3-C4 — C 5 — C e ~ C7 — C8 — Cg (5) 其中 C i 是 Phe’ 或 Tyr; C 2 是 G 1 u ; C 3 是 Glu 或 Pro; C 4 是 I 1 e ; C 5 是 Pro 或 D — Ala; C θ 是 Glu 或 Ala; C 7 是 G 1 u ; 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) C 8 是 Tyr ’Tyr — Leu ’Tyr — Cha 或 A 1 a — C h a ; C 9 是一個鍵或（D)Glu;且 Y 是OH，Ci— Ce烷氧基，或單一或、雙一（C! -C4)烷基取代的胺基；或其藥學上可接受之 鹽。 2.如申請專利範圍第1項的化合物，其中B是式（ 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210 X 297公釐） -2 - 經濟部中央標準局員工消費合作社印裝 A8 B8 C8 D8六、申請專利範圍3 )之肽。3. 如申請專利範圍第1項的化合物，其中B是式4 )之肽。4. 如申請專利範圍第2項的化合物，其中B4是N 5.如申請專利範圍第1項的化合物，其中Y是0H 或C 1 — C β烷氧基》6 .如申請專利範圍第1項的化合物，其係爲 (D)Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys1-Gly-Arg-Gly-Asp \ S_S Pro-Ile-Pro—Glu-Tyr—Asp-Gly-(D)Cys 丨-Pro-Nle l Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH. (SEQ ID NO: 1)7.如申請專利範圍第1項的化合物，其係爲 (D) S.he-Pro-Arg-Pro-Gly.r (D) Cys 1 -Gly-Arg-Gly-Asp S-S Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys *-Pro-Phe Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH. 8 .如申請專利範圍第1項的化合物，其係爲 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS)A4規格（210X297公釐） (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) -" 、νβ 3 A8 B8 C8 .(D) Phg-Pro-Arg-Pro-Gly-(D)Cys'-Gly-Arg-Gly-Asp 六、申請專利範圍 s-s Pro-Ile-Pro-Glu-Tyr-Asp-Gly-(D)Cys'-Pro-Nle Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH. 請 先 閱 I讀 ___ID ;NO: 3 ) 9 .如申請專利範圍S 1 匕合物’其係爲 (D) Phe—Pro-Azrg-Pro-Gly- ( D) Cys ’ - Arg-Ile-Pro-Arg 經濟部中央標準局員工消費合作社印製 S-S / Tyr-AsD-Gly-(D)Cys'-Asp-Ala-Pro-Nle-AsD-Gly ί ' Glu-Pro-Ile-Pro-Glu-Glu-Ala-Cha-(D)Glu-OH. (SEQ ID NO： 10) l〇.如申請專利範圍第1至9項中任一項之化合物 ，其係用來作爲抗凝血及/或抗栓塞之藥學活性化合物。 1 1 . 一種治療靜脈或動脈栓塞狀況的藥學組成物， 該組成物含有治療上有效劑童之如申請專利範圍第1項的 化合物，及/或其藥學上可接受之載劑。 1 2 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物’其中 栓塞狀況是血管造形術後的冠狀動脈栓塞。 1 3 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物’其中' 栓塞狀況是急性的血管造形術後之閉合。 1 4 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物’其中 栓塞狀況是體外循環誘發之血球減少。 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) Α4規格（210Χ297公釐） 丨之 注 意 事 項 再 填 寫 本 頁 訂 -4 - A8 Βδ C8 D8 六、申請專利範圍 1 5 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物’其中 栓塞狀況是進行性的心肌梗塞。 1 6 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物，其中 栓塞狀況是纖維蛋白分解治療後之閉合° 1 7 .如申請專利範圍第1 1項的藥學組成物’其中 栓塞狀況是體外循環期間的血小板減少症（ thrombocytopenia) 0 (請先閱讀背面之注意事項再填寫本頁) 經濟部中央橾準局員工消費合作社印製 本紙張尺度適用中國國家標準（CNS ) A4規格（210X297公釐） 5