JPH08511765A

JPH08511765A - 標識インターロイキン−８およびその医学的使用

Info

Publication number: JPH08511765A
Application number: JP6509411A
Authority: JP
Inventors: ライル、レオン・アール; カンクル、スティーヴン・エル
Original assignee: Mallinckrodt Medical Inc; University of Michigan-Ann Arbor
Current assignee: Mallinckrodt Inc; University of Michigan-Ann Arbor
Priority date: 1992-10-05
Filing date: 1993-10-04
Publication date: 1996-12-10
Also published as: PT670736E; AU5353194A; ATE205728T1; WO1994007535A3; WO1994007535A2; US5346686A; EP0670736B1; DK0670736T3; EP0670736A1; DE69330794D1; ES2168098T3; DE69330794T2; AU686119B2; CA2146239C; CA2146239A1

Abstract

(57)【要約】標識ＣＸＣケモカインを動物体内に導入し、そしてインターロイキン-８受容体分子を含む標的部位に集積させる、動物体内の標的部位を画像化する方法。次に、集積した標識ＣＸＣケモカインを検出して体内の前記標的部位を画像化する。

Description

【発明の詳細な説明】標識インターロイキン-８およびその医学的使用発明の背景発明の分野本発明は、標識ペプチド、放射性薬剤を備えるペプチド、およびその医学的使用に関する。背景技術の記述標識ペプチドおよび放射性薬剤を備えるペプチドには、種々の治療的および診断的な医学上の用途がある。放射性薬剤を備えるペプチドは、腫瘍の処置において治療上有用であることが知られている。標識ペプチドの重要な診断的用途は、画像化薬剤（imaging agent）としての用途である。例えば、ルバインら（Rubin et al.）の米国特許第4,926,869号明細書は、標識免疫グロブリンまたはその断片を患者に投与することによる患者の炎症部位の検出を開示している。標識免疫グロブリンは炎症部位に集積し、それにより公知の画像化技術を利用してその部位の放射性写真による画像化を可能にする。標識ペプチドおよび放射性薬剤を備えたペプチドを利用した感染部位または炎症部位の画像化を記述しているその他の出版物は、国際特許公報第90/10463号および第90/13317号を包含する。この分野において、医学的な目的に利用され得る標識ペプチドおよび放射性薬剤を備えたペプチドの必要性が残っている。発明の要約本発明によれば、標識ＣＸＣケモカイン（CXC chemokine）が利用されて動物体内の標的部位が画像化される。標識ＣＸＣケモカインは動物体内に導入されて、インターロイキン-８に相補的な受容体分子を有する標的部位に集積する。そして、標的部位を画像化するために集積した標識ＣＸＣケモカインが検出される。図面の簡単な説明図１は、本発明において利用され得るインターロイキン-８の分子の概略を示す図である。図２は、インジウム-１１１で標識されたインターロイキン-８の、ラット大腿に誘導された炎症領域における集積の画像である。図３は、沃素-１２３で標識されたインタ-ロイキン-８の、ラット大腿に誘導された炎症領域における集積の画像である。図４は、沃素-１２５−インターロイキン-８のヒト好中球との生体外での結合を描写するグラフである。図５は、炎症画像化薬剤を注入されたラットのガンマカメラ画像による描写である。好ましい実施態様の詳細な記述本発明は、走化性サイトカイン（または“ケモカイン”）である“ＣＸＣ”族物質の１種であるインターロイキン-８（ＩＬ-８）、それらの類似物、同等物、誘導体または断片、あるいはインターロイキン-８の受容体に対する特異性を有するペプチドを利用する（これ以降、これらの物質をＣＸＣケモカイン、インターロイキン-８材料またはＩＬ-８材料と総称することがある）。走化性サイトカインであるＣＸＣ族物質は、これらに制限されるものではないが、インターロイキン-８、マクロファージ炎症性タンパク質-２（ＭＩＰ−２）、ＧＲＯ_α、ＧＲ_βＯおよびＧＲＯを含むＧＲＯ（Growth Regulated Gene Prod ucts）、ＭＧＳＡ（Melanoma Growth Simulating Activity）、血小板第４因子（ＰＦ−４）、γ-インターフェロン誘導性タンパク質（γ-ＩＰ）、血小板塩基性タンパク質（Platelet Basic Protein）、結合組織活性化タンパク質（ＣＴＡＰ-III）、β-トロンボグロブリン（β-ＴＧ）、好中球活性化ペプチド-２（ＮＡＰ-２）、チキンv-src誘導性タンパク質（９３）、および上皮細胞由来好中球活性化因子-７８（ＥＮＡ−７８）を包含する。好ましい実施態様において、本発明により利用されるＣＸＣケモカインはヒトインターロイキン-８あるいはその類似物、同等物、断片または誘導体である。ヒトＩＬ-８は長さが約７２アミノ酸残基であり、分子量約８ｋＤであるが、７７残基のものおよび多少はその他の変わった形態のものが存在する。サイトカインであるインターロイキン-８（ＩＬ-８）（好中球活性化タンパク質-１［ＮＡＰ-１］、好中球活性化因子［ＮＡＦ］または好中球走化性因子［ＮＣＦ］としても知られている。）は種々の炎症性刺激に反応して多くの細胞型により産生されるが、その刺激はリポポリサッカロイド、インターロイキン-１および腫瘍壊死因子を包含する。これは、好中球の動員、集積および活性化を直接的に媒介する。その生体外における効果は、他の好中球走化性因子（Ｃ５ａ、細菌性ケモタキシン類、ロイコトリエン類および血小板活性化因子）のそれに類似している。しかし、これらとは対照的に、ＩＬ-８は好中球に対する高度な特異性を示す。ＩＬ-８は安定であり、その効果は長期間作用するが、生物学的系内において種特異的なものではない。ＩＬ-８は、生体内で他のケモタキシン類がその効果を発揮する一般的な経路を示し得る。上記した如く、ＩＬ-８の主要な形態は７２アミノ酸残基のポリペプチドであり、これはＳＤＳ-ポリアクリルアミドゲル電気泳動でMr〜８kDaを示す。ＩＬ-８は好中球の細胞膜上に豊富に存在する受容体（細胞当たり20,000〜80,000個）とピコモルからナノモルの親和性で結合し、これらの細胞を、カルシウムとプロテインキナーゼＣを必要とするプロセス中にＧＴＰ結合タンパク質を介して活性化する。結合および活性化の後、ＩＬ-８は取り込まれ、そして好中球により急速に分解される。サイトカイン類である“ＣＸＣ”族物質の仲間（ＣＸＣケモカイン）は、一般的に催炎活性および修復活性を有するポリペプチドと結合した塩基性ヘパリンである。このグループの典型的な物質は大きさ８〜10kDのサイトカイン類であり、インターロキン-８以外のそれらの物質は、インターロイキン-８と少なくとも約 20〜45％の相同性を有している。インターロイキン-８のアミノ酸配列を図１に示すが、図中、丸で囲まれた文字は次のアミノ酸またはその適切な誘導体を表している：Ａはアラニンを表し、Ｒはアルギニンを表し、Ｎはアスパラギンを表し、Ｄはアスパラギン酸を表し、Ｃはシステインを表し、Ｑはグルタミンを表し、Ｅはグルタミン酸を表し、Ｇはグリシンを表し、Ｈはヒスチジンを表し、Ｉはイソロイシンを表し、Ｌはロイシンを表し、Ｋはリシンを表し、Ｆはフェニルアラニンを表し、Ｐはプロリンを表し、Ｓはセリンを表し、Ｔはスレオニンを表し、Ｗはトリプトファンを表し、Ｙはチロシンを表し、そしてＶはバリンを表す。ＣＸＣケモカイン族の物質は、一般的に、４つのシステイン残基を有する保存Ｃ-Ｘ-Ｃ配列の直前にＥＬＲアミノ酸配列を有することにより特徴付けられるが、４つのシステイン残基の最初の２つは、それらの間に存在する可変アミノ酸（Ｘ）により隔てられている。本発明はさらに、逆向き鏡像（retroinverse）または他の非加水分解性結合が挿入されるか、あるいはＤ-アミノ酸置換が行われて、天然のＬ-アミノ酸含有配列を改変したＣＸＣケモカインの誘導体に適用することもできる。上記の如く、ＣＸＣケモカインは標識または放射性薬剤、例えば、インジウム、沃素、テクネチウム、レニウム、ガリウム、サマリウム、ホルミウム、イットリウム、銅、コバルトおよびその他を備える。特に好ましい実施態様において、ＣＸＣケモカインは、インジウム-１１１、沃素-１２３およびテクネチウム-９９ｍからなる群より選ばれる放射標識を備える。ＣＸＣケモカインは、標識または放射性薬剤を備えるためのいかなる適切な手段をも採用し得る。ペプチドを標識する公知の方法は、フリッツバーグら（Frit zburg et al.）により開発され、それぞれ米国特許第4,965,392号明細書および第5,037,630号明細書に記載されている、慣用の“キレート後形成法（post-form ed chelate approach）”およびより新規な“キレート先形成法（pre-formed ch elate approach）”を包含するが、これらの教示がここに参考として取り込まれる。 “キレート先形成法”において、キレート剤は放射性核種と複合体を形成し、次いでペプチドに結合する。“キレート後形成法”においては、キレート剤は最初にペプチドに結合し、形成された結合体が放射性核種および還元剤と共にインキュベートされる。本発明に使用するに適切なキレート剤は、下記式（Ｉ）および（Ia）で表されるようなトリアミドチオレート（Ｎ₃Ｓ）キレート剤、下記式（II）で表されるようなジアミドジチオレート（Ｎ₂Ｓ₂）および下記式（III）で表されるようなジアミドジフェノール類キレート剤を包含する。上記において、式（Ｉ）、（Ia）、（II）および（III）中のｍは１から約１０までの全ての数であり（式（Ｉ）、（Ia）および（II）においてはｍは約３であることが好ましい）；式（Ｉ）中のＰは０または１のいずれかであり；式（Ia）のＹは、ｏ-またはｐ-ニトロフェニル、２-クロロ-４-ニトロフェニル、シアノメチル、２-メルカプトピリジル、ヒドロキシベンゾトリアゾール、Ｎ-ヒドロキシスクシンイミド、トリクロロフェニル、テトラフルオロフェニル、チオフェニル、テトラフルオロチオフェニル、テトラフルオロフェニル、チオフェニル、テトラフルオロチオフェニル、ｏ-ニトロ-ｐ-スルホフェニルまたはＮ−ヒドロキシフタルイミド、最も好ましくはテトラフルオロフェニルであり；式（Ｉ）および（II）中のＰＧは下記官能基からなる群から選ばれる適切な硫黄保護基である［式（II ）中の２つのＰＧは互いに同一であっても異なっていてもよい。］が、その官能基は、炭素原子数１から約２０のＳ-アシル基、例えばアルカノイル、ベンゾイルおよび置換ベンゾイル等（これらの中でもアルカノイルが好ましい）；炭素原子数１から約２０のＳ-アルキル基、例えばベンジル、ｔ-ブチル、トリチル、４ -メトキシベンジルおよび２，４-ジメトキシベンジル等（これらの中でも２，４ -ジメトキシベンジルが好ましい）；炭素原子数１から約１０のアルコキシアルキル基、例えばメトキシメチル、エトキシエチルおよびテトラヒドロピラニル等（これらの中でもテトラヒドロピラニルが好ましい）；カルバモイル、および炭素原子数１から約１０のアルコキシカルボニル基、例えばｔ-ブトキシカルボニル、メトキシカルボニルおよびエトキシカルボニル等（これらの中でもｔ-ブトキシカルボニルが好ましい）であり；Ｘは、カルボキシル、アミノ、イソシアネート、イソチオシアネート、イミデート、マレイミデート、クロロカルボニル、クロロスルホニル、スクシンイミジルオキシカルボニル、ハロアセチルならびに炭素原子数１から約１０のＮ-アルコキシカルバモイル基、例えばＮ-メトキシカルバモイルおよびｔ-ブトキシカルバモイル等（式（Ｉ）と（II）においてはこれらの中でもＮ-メトキシカルバモイルが好ましい）、からなる群から選ばれるカップリング成分であり；ならびに、式（III）のＲは、水素ならびに炭素数１から約１０のアルキル基、例えばメチルおよびｔ-ブチル等（これらの中でもｔ −ブチルが好ましい）、からなる群より選ばれる。適切な硫黄保護基は、保護されるべき硫黄原子と共に用いられるときには、ヘミチオアセタール基、例えばエトキシエチル、テトラヒドロフラニル、メトキシメチルおよびテトラヒドロピラニル等を包含する。他の適切な硫黄保護基は、炭素原子数１から約２０のアシル基であり、好ましくはアルカノイルまたはベンゾイルである。キレート化合物として用い得る他の化合物は、公開番号第0 284 07 1号である欧州特許出願明細書に記載されており、その教示がここに参考として取り入れられる。Ｔｃ-９９ｍ二官能価キレート等の放射標識されたキレート剤の合成およびそれに続くＩＬ-８材料への結合は、欧州特許出願公開番号第0 284 071号（supra ）明細書および米国特許第4,965,392号（supra）明細書に記載された如き方法、ならびに米国特許第4,837,003号明細書、同第4,732,974号明細書および同第4,65 9,839号明細書によりカバーされる如き関連技術によっても実施されることができ、これらの教示がここに参考として取り入れられる。１つの実施態様によれば、本発明は、適切な標識または放射性薬剤と後続工程においてキレート化され得る未標識キレート剤と結合したＩＬ-８材料を包含する。ＣＸＣケモカインのリシンはインジウム-１１１の運搬に利用され得る。ＣＸＣケモカインのチロシン、沃化フェニル誘導体またはリシン（Bolton-Hunter試薬使用）は沃素-１２３の運搬に利用され得る。ＣＸＣケモカインのリシンまたは付加遊離システインはテクネチウム-９９ｍの運搬に利用され得る。他の実施態様において、ＣＸＣケモカインはクロラミン−Ｔ水和物を利用して沃素-１２３等の放射性薬剤で標識される。さらに他の実施態様において、ＣＸＣケモカインはジエチレントリアミンペンタ酢酸等のキレート剤を利用してインジウム-１１１等の放射性薬剤で標識される。ＣＸＣケモカインは、標識または放射性薬剤を、ヒトまたは他の哺乳類等の動物の標的部位に運搬する。特に好ましい実施態様においては、放射標識されたＣＸＣケモカインは動物体内に注入されて標的部位、即ち炎症および／または感染の部位に集積することができる。インターロイキン-８はＴ-リンパ球、単球、血管内皮およびその他の組織により産生される好中球の非常に強い走性因子であることが知られている。従って、放射標識インターロイキン-８は体内における炎症性および感染性疾患の部位を画像化することに特に適している。そのような部位は対応するインターロイキン-８材料に相補的な領域を有するインターロイキン-８受容体分子を含む。放射標識ＣＸＣケモカインは、水性媒体等の医薬学的に許容され得る担体と共に被術者に注入される。一般的に、放射標識されたＣＸＣケモカインの診断的に有効な投与量は、例えば、年令、身体条件、性別、患者個体における疾患の程度、存在する場合には雑音（counter indications）、ならびに個々の医師により調整される変数等の考慮すべき要因によって変化する。例えば、投与量は、約0. 01mg/kgから約2000mg/kgまで変化し得るが、より好ましい実施態様においては約 0.1mg/kgから約1000mg/kgである。最初の毒性学的実験はＩＬ-８の生体内投与に伴う有意な病徴を示さなかった。放射標識されたＣＸＣケモカインは被術者に注入した後ほぼ１５分間以内に集積し始めるが、生体内での画像化（in vivo imaging）は、慣用の画像化機器を利用して注射後２４時間まであるいはそれ以降まで実施可能である。公知の画像化方法は、慣用のガンマカメラ技術、単一光子放射型コンピュータ断層撮影（ＳＰＥＣＴ）および他の放射核種スキャンを包含する。標的部位に集積した後、標識ＣＸＣケモカインは、通常の身体機能により標的部位および動物の全身から徐々に除かれる。本発明は、下記実施例によりさらに説明されるが、これらの実施例は本発明を制限するものではない。実施例１インターロイキン-８のテクネチウム-９９ｍによる放射標識２mLの炭酸塩/重炭酸塩緩衝液（pH8.5±0.5）中にＩＬ-８（0.01mmol）を入れたＣＸＣケモカイン溶液を、0.1mmolの上記式（Ｉ）（式中、ｍは２、ｐは１、ＰＧはベンゾイル、およびＸはスクシンイミジルオキシカルボニルである）リガンドのジメチルホルムアミド溶液（0.５mL）で処理し、全混合物を室温に２時間保った。次に、混合物を水（2.5mL）で希釈して、水または0.1M重炭酸アンモニウム（pH7.5）に対して大規模に透析した。透析後、溶液を凍結乾燥させて所望のＩＬ-８結合物を得た。実施例２２mLの炭酸塩/重炭酸塩緩衝液（pH8.5±0.5）中にＩＬ-８（0.01mmol）を入れたＣＸＣケモカイン溶液を、0.1mmolの上記式（II）（式中、ｍは２、ＰＧは共にベンゾイル、およびＸはスクシンイミジルオキシカルボニルである）リガンドのジメチルホルムアミド溶液（0.5mL）で処理し、全混合物を室温に２時間保った。次に、混合物を水（2.5mL）で希釈して、水または0.1M重炭酸アンモニウム（pH7.5）に対して大規模に透析した。透析後、溶液を凍結乾燥させて所望のＩＬ-８結合物を得た。実施例３２mLの炭酸塩/重炭酸塩緩衝液（pH8.5±0.5）中にＩＬ-８（0.01mmol）を入れたＣＸＣケモカイン溶液を、0.1mmolの上記式（III）（式中、ｍは４、Ｘはスクシンイミジルオキシカルボニル、およびＲは水素である）リガンドのジメチルホルムアミド溶液（0.5mL）で処理し、全混合物を室温に２時間保った。次に、混合物を水（2.5mL）で希釈して、水または0.1M重炭酸アンモニウム（pH7.5）に対して大規模に透析した。透析後、溶液を凍結乾燥させて所望のＩＬ-８結合物を得た。実施例４グルコン酸ナトリウム５mgと塩化第一錫0.1mgとを含む水性溶液100μLに、９９ｍ-Ｔｃ０４（過テクネチウム塩；pertechnetate）500μLを添加した。室温下に約１０分間インキュベートした後、実施例１または２のＩＬ-８結合物溶液（p H9.5の0.1M炭酸塩/重炭酸塩緩衝液中１mg/mL濃度）500μLを添加し、混合物全てを３７℃で約１時間インキュベートした。所望の標識ペプチドを、未反応の９９ｍＴｃ-グルコネートおよび他の小分子量不純物から、溶離剤として0.15M ＮａＣｌを含有するリン酸緩衝生理食塩水（pH7.4；以下ＰＢＳと称する）を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（セファデックスＧ-５０）により分離した。実施例５ゲンチシン酸（25mg）、イノシトール（10mg）および実施例３のＩＬ-８結合物（１mg/mL濃度の水溶液500μL）を塩化インジウム（インジウム-III）の0.05M ＨＣｌ溶液で処理した。溶液を室温下で約３０分間インキュベートした。所望の標識ペプチドを、未反応のインジウム（インジウム-III）塩類および他の小分子量不純物から、溶離剤として0.15M ＮａＣｌを含有するホスフィン緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を用いたゲル濾過クロマトグラフィー（セファデックスＧ-５０）により分離した。実施例６ＩＬ-８の放射沃素化、クロラミン−Ｔ水和物法。下記の試薬および材料をＩＬ-８の放射沃素化のために準備した：Ａ）クロラミン-Ｔ水和物（新鮮な調製物）（FW＝227.7）（貯蔵ストックは乾燥、減圧、暗黒、および周囲温度下に貯蔵。）１． 10.0mgを計り取り、5.0mLの0.05Mリン酸緩衝液（pH6.8）にて希釈した。２．希釈液を1.0mL取り、9.0ｍLの0.05Ｍリン酸緩衝液（pH6.8）をメスフラスコ内で添加した。３．濃度は0.2mg/mLであり、45μ/exp.＝39.5nmole使用した。Ｂ） 0.05Mリン酸ナトリウム緩衝液、二塩基性、pH6.8（FW＝268.07）（クロラミン-Ｔ、メタ重亜硫酸、希釈および反応用）。１． 1.3404ｇを計り取り、（水で）80mLに希釈した。２．ｐＨを6.8に調節し、メスフラスコ内にて総容積を100mLとした。Ｃ） 0.25Mリン酸ナトリウム緩衝液、二塩基性、pH6.8（FW＝268.07）（反応中にＮａＩ-１２３を緩衝するための試薬）。１． 6.7018ｇを計り取り、（水で）80mLに希釈した。２．ｐＨを6.8に調節し、メスフラスコ内にて総容積を100mLとした。Ｄ）メタ重亜硫酸ナトリウム（新鮮な調製物）（FW＝190.1）。１． 20.0mgを計り取り、5.0mLの0.05Mリン酸ナトリウム緩衝液にて希釈した。２．この溶液を1.0mL取り、9.0mLの0.05Mリン酸ナトリウム緩衝液を添加した。３．濃度は0.4mg/mLであり、45μL＝18.0μg/exp.＝94.5nmole 使用した。Ｅ）リン酸緩衝食塩水１． Sigma社製粉末（ＰＢＳ）を１リットルのミリポア濾過した水に溶解した。Sigma製品カタログ番号1000-3。２．ｐＨが確かに7.4であるか否かをチェックした。Ｆ） BioRad社製AG1-X8アニオン樹脂100-200メッシュ、アセテート形態。１． 6.4ｇの樹脂を10mLのＰＢＳ中に懸濁してスラリーを調製した。Ｇ）沃化カリウム溶液（反応に使用する前のクロラミン-Ｔを試験するため）１．ＫＩを0.25ｇ計り取り、（水）5.0mLで希釈した。２．クロラミン-Ｔ溶液を数滴ＫＩ溶液に添加した。３．クロラミン-Ｔ溶液が反応性であれば、透明から黄色への溶液の色変わりが観察される。Ｈ）遠心管１． Sigma社製１.7mL 容珪素化ポリプロピレン、カタログ番号 T-3406。Ｉ）沃化ナトリウム（沃素-１２３）１． Mallinckrodt Medical，Inc．製。Ｊ）ＩＬ-８（推定FW＝8,000）１．放射沃素化当たり10μg＝1.25nmole使用した。Pepro Tech Inc. 製。反応開始前に次の調製を実施した：使用２４時間前に、リン酸緩衝食塩水を用いて90％V/V BioRad社製AG1-X8、10 0-200メッシュ、アセテート形態のスラリーを調製した。スラリー2.0mLを小さな AG1-X8カラム内に注ぎ込み、該カラムをリン酸緩衝食塩水10.0mLで洗浄した。クロラミン-Ｔ（新鮮な調製物）45.0μLを5.0％ＫＩにて試験した後、ハミルトン注射器内に予め吸い上げた。メタ重亜硫酸塩（新鮮な調製物）45.0 μLをハミルトン注射器内に予め吸い上げた。リン酸緩衝食塩水50.0μLをツベルクリン注射器内に予め吸い上げ、その注射器に“Ｒ”標識した。リン酸緩衝食塩水10.0mLをビーカー内へ注ぎ込み、これを前記カラムの脇にセットしてカラムの溶離液に備えた。ＩＬ-８を、次のとおり沃素-１２３で標識した：珪素化微小遠心管反応バイアル（１.7mL）にＩＬ-８（12.5μg）の0.05Mリン酸緩衝液（pH6.8）溶液0.125mLを添加した。0.25Ｍリン酸緩衝液（pH6.8）（50. 0μL）を前記反応バイアルに添加して穏やかに撹拌した。２０ナノグラムの“冷（cold）”沃素（20μL）を添加して穏やかに撹拌した。2.0mCiのＮａｌ-１２３（10〜20μL）を反応バイアルに添加し、穏やかに撹拌した。予め吸い上げておいたハミルトン注射器から、クロラミン-Ｔ（45.0μL）を反応バイアルに添加し、穏やかに撹拌した。室温で１.５分間インキュベートした。予め吸い上げておいたハミルトン注射器から、メタ重亜硫酸塩（45.0μL）を反応バイアルに添加し、穏やかに撹拌した。反応バイアルを、カピンテック用量キャリブレーター（Capintec dose calibrator）で検定した。反応混合物を検定した後、全量を調製済みAG1-X8カラム上に配置した。ＰＢＳ（50μL）を反応バイアルに添加して撹拌した後、これをカラム上の反応混合物に添加した。カラムの栓を抜き、第１管内に８滴収集した。次に、２４個の管に２滴づつ収集した。Voは恐らく管番号６前後である。1.7mL容珪素化微小遠心管を用いた。収集画分をカピンテック用量キャリブレーターで検定した。無効な画分（void volume）より後の主要画分をまとめた。（注：組織分布研究が行われている場合には、正確な結果のために、用量検定にはアリコートが用いられなければならない。）試料のＴＬＣを実施して、遊離の沃素-１２３が存在するかどうかを観察した。極微量のアリコートをゲルマン（Gelman）ITLC-SGストリップ上にスポッティングし、Ｎ-食塩水で８〜１０分間展開させた。1.0cmごとの切片に切断し、オートガンマカウンターにて計測した。未反応沃素-１２３は溶媒の先端部またはその付近に泳動しており、タンパク質はスポッティングポイントに残っており、小さいペプチドは種々のＲｆ値を有して、スポッティングポイントまたはその付近に存在した。実施例７ＩＬ-８のインジウム−１１１放射標識。反応開始前に、下記の試薬および材料を調製した：Ａ）環状ジエチレントリアミンペンタ酢酸二無水物（Ｃ−ＤＴＰＡ）、 FW＝357.22を合成して、減圧、室温下でデシケーター内に保存した。Ｂ）商業的に入手可能なジメチルスルホキシド無水物（ＤＭＳＯ）を１８.４ ℃以下で分別凍結してさらに精製した。ＤＭＳＯ20〜25mLをオーブンで乾燥させた100mL容ボトル内に入れて密封した。このボトルをスラリー氷冷水浴内に置き、内容液がボトルの壁面に固化するまで撹拌した。オーブンで乾燥させたパスツールピペットを用いて残りの液体を除去した。ボトルを封して、室温下、窒素雰囲気下にデシケーター内に保存した。アルドリッチ（Aldrich）、２７、６８５−５。Ｃ）窒素ガスはAircoの第５グレードであった。Ｄ）リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）１． Sigma社製粉末（ＰＢＳ）を1.0リットルのミリポア濾過水に溶解した。２．ｐＨが確かに7.4であるか否かをチェックした。Sigma1000-3。Ｅ）リン酸緩衝食塩水＋5.0％ＢＳＡ（Ｇ−２５カラムの平衡のため）１． 10.0mLＰＢＡにＢＳＡ0.5ｇを溶解した。２．最終濃度は50.0mg/mLＢＳＡであった。Ｆ）リン酸緩衝食塩水＋0.5％ＢＳＡ（Ｇ−２５カラムの溶離のため）１． 50.0mLＰＢＡにＢＳＡ0.25ｇを溶解した。２．最終濃度は5.0mg/mLＢＳＡであった。Ｇ）Ｇ-２５、中級品（medium grade）１．所望の量を計り取り、ＰＢＳ中で２４時間膨張させた。２．使用前に２４時間またはそれ以上かけて脱ガスさせた。３．放射標識の２４時間前にカラムに注ぎ込み、平衡させて、ＢＳＡ/ ＰＢＡ溶液で洗浄した。４．カラムサイズは実験的に測定した。Ｈ） 0.10Mジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、FW＝393.20。１．ＤＴＰＡ0.393ｇを計り取り、ＰＢＳ8.0mL中に入れた。２．ｐＨを5.4に調製し、メスフラスコ内で総量を10.0mLとした。（溶解性のために酸性とすることが必要である）Sigma、D-6518。Ｉ）ミリポア濾過した水Ｊ）塩化インジウム（１１１-インジウム）（１１１-ＩｎＣｌ₃）の0.05N ＨＣｌ溶液、Nordion International（Kanata、Canada、T209A）社製。（注：加水分解および痕跡金属による汚染を避けるために、全ての試薬は最高の純度でなければならず、ＤＭＳＯは分別凍結により精製されなければならない。また全てのガラス器具はミリポア濾過した水で約３回洗浄およびリンスする必要があり、そしてキレート反応に使用されるガラス器具は約１４０℃でほぼ２４時間オーブンで乾燥した後、デシケーター中で冷却する必要がある。）反応は下記の要領で行った：第１工程において、Ｃ-ＤＴＰＡ（11.075mg）を無水ＤＭＳＯ5.0mLに溶解した。管の口をパラフィルムで覆い、溶液が透明になるまで穏やかに倒立させた。凍結乾燥させたインターロイキン-８（ＩＬ−８）10μgにＰＢＳ（pH7.4）0.5mLを添加した。工程１からのＣ-ＤＴＰＡ/ＤＭＳＯ0.01mL（22.32μg）を添加した。室温下に５０分間、溶液をインキュベートした。１５分間毎に溶液を穏やかに撹拌した。インキュベート後に、全量を調製済みＧ-２５カラムに入れた。0.20mL 毎の画分を収集した。Voにおける画分および無効な画分より後の幾つかの画分をまとめた。Voの決定のために、ブルー・デキストランを使用した。１１１−ＩｎＣｌ₃をカピンテック用量キャリブレーターで検定し、1.0〜2.0mCiの１１１-インジウムをＩＬ-８管内にピペッティングして入れた。この管を穏やかに撹拌し、放射活性の量について検定した。１１１-インジウム/ＩＬ-８溶液を３０分間室温下にインキュベートした。過剰な１１１-インジウムをキレート化させて不溶性沈殿物であるインジウム水酸化物の形成を防いだ。Ｇ-２５カラム内の反応混合物をＰＢＳまたは0.50％ＢＳＡ＋ＰＢＳのどちらかで溶離させた。0.20mL毎の画分を収集した。画分は用量キャリブレーターによる検定またはガンマカウンターによる計測用画分の希釈アリコートの検定のいずれかに供した。Vo（タンパク質ピーク）における画分と無効な画分より後で放射活性レベルが衰退するまでの画分をまとめた。過剰のキレート１１１-インジウムはvtまたはその付近で溶離した。ひとまとめにしたVo画分を用量キャリブレーターで検定し、放射標識効率を計算した。空の反応管も検定して、放射活性の多くが移されたことを確認した。実施例８放射標識ＩＬ-８による画像化白色、雄、体重範囲250〜350ｇのスプラグ-ダウレイ（Sprague-Dawley）ラットを炎症病巣の画像化に使用した。病巣は、ｎ-食塩水に懸濁した2.0％カラギーナン（イオタ型）300μLを後脚に注射することにより誘導した。もう一方の後脚を対照として使用し、食塩水300μLを注射した。ラットの胴部にカラギーナンを腹腔内注射または皮下（sub-Q）注射するかわりに後脚を選んだのは、これらの研究におけるバックグラウンド活性の存在がより少ないからである。病巣は放射標識ＩＬ-８の注射に先立って、種々の時期に誘導した。放射標識ＩＬ-８を病巣誘導の３〜２４時間後に注射したときに、放射活性の吸収における違いが、対照脚と比較して、カラギーナン注射脚において観察された。定石通り、画像は放射標識注射後３時間にわたって１５分毎に連続して得られた。１５分の画像はまた、標識物が動物からきれいに排出されるまでの間、注射後２４時間毎に得られた。放射核種に応じて異なるカメラおよびコリメーター（collimators）が使用された。１２３-沃素および１１１-インジウムに対しては、Siemens社製ZLCオービター・カメラおよび140kev、高解像度または中位エネルギーのコリメーターをそれぞれ使用した。すべてのカメラにおける画像の獲得および貯蔵はより大型のMicroVAXユニットに接続されたSiemens社製MicroDeltaコンピューターにより達成されることができるだろう。図２および図３は、それぞれインジウム-１１１および沃素-１２３で標識されたときの、標識ＩＬ-８の集積を示している。実施例９ Ga-67クエン酸塩薬剤を有する沃素-１２５標識ヒト組換えインターロイキン-８（沃素-１２５−ＩＬ-８）とインジウム標識ヒト白血球との、ラット後脚の無菌性急性炎症病巣を画像化する能力に関する比較組換えヒトインターロイキン-８はPepro Tech Inc．より入手した。沃素-１２５はＮａＩの形態でAmersham Corp．から購入した。Ga-67クエン酸塩およびインジウム-１１１-オキシンはMediPhysics．社より入手した。ＴＣ-９９ｍタ形態、Ｖ型）は、Sigma Chemical Co．（St．louis，MO）より購入した。その他の全ての薬剤およびサプライは商業的に入手し得る最高グレードのものであった。放射核種供給者の薦めに従ってＩＬ-８を放射沃素化した。典型的には、0.25M リン酸ナトリウム（pH6.8）0.1mL中のＩＬ-８ 25〜50μgを、質量等量の非放射性ＮａＩ溶液0.01mLに添加し、続けて、沃化ナトリウムの形態の2mCi（0.02mL）沃素-１２５および20nmol（0.01mL）クロラミン-Ｔを添加した。反応物を混合し、そして室温下で９０秒間穏やかに撹拌した。42nmol（0.02mL）メタ重硫酸ナトリムを添加して反応を終了させた。沃素-１２５−ＩＬ-８を未反応沃素-１２５から、Bio-Rad社製AG 1-X8、50-100メッシュの小さなカラム上におけるイオン交換により分離した。取得した生成物は、使用時まで４℃で貯蔵し、標識後６時間以内に注射した。ヒト白血球を健康な提供者から調製し、これをインジウム-１１１-オキシンで標識した。また、放射核種供給者の薦めに従ってラット赤血球を生体内で標識しム塩（Ｔｃ-９９ｍ）をそれぞれのラットの尾部血管に注入した）。放射標識効率をBeckman社製ガンマ8000カウンターにて測定し、最終生成物におけるタンパク質結合沃素-１２５の割合をITLC-SGストリップ（Gelman社製）上で80％メタノール水溶液にて展開させるクロマトグラフィーにより定石どおり検定した。ＳＤＳ-ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびオートラジオグラフィを実施した。非標識ＩＬ-８および沃素-１２５−ＩＬ-８に対するヒト好中球のケモタキシスをボイデンチャンバー検定により評価した。沃素-１２５−ＩＬ-８と単離されたヒト好中球との特異的および非特異的結合が測定された。体重範囲200〜250ｇの雄のスプラグ-ダウレイ（Sprague-Dawley）ラット（Cha rles River社）を、学会の動物保護委員会（the institutional animal care co mmittee）により承認された条件下で、米国実験動物学会（the American Associ ation of Laboratory Animal Science）のガイドラインに従い、複数の小さなグループに分けて飼育した。動物には標準的なラット用飼料（Purina社製）を自由給餌させ、水も自由に飲ませた。病巣誘導、放射性医薬品の注射および画像化の前に、それぞれのラットの肩胛骨間の領域に、キシラジン13mg/kgおよびケタミン87mg/kgを皮下的に投与した。画像獲得中に適当なレベルの鎮静を維持する必要に応じて、少量のケトミンを付加的に投与した。急性炎症領域は、カラギーナン懸濁液（2% w/v無菌食塩水溶液）４mLをそれぞれのラットの左大腿内に皮下注射することにより誘導した。右大腿（対照）には無菌食塩水４mLを注射した。その２４時間後に、それぞれのラットに0.5mL以下の液中の50〜100μCi放射性医薬品を１回与えたが、これは直接視野下に右外頚静脈内へ無菌注射することにより投与した。ここに示す結果を得るために、それぞれの炎症画像化放射性医薬品を４匹のラットに注射し、そして３匹のラットの赤血球を生体内で放射標識した。ガンマカメラによる背部全身の画像は、放射性医薬品注射１５分間後に撮り始め、その後は所定の間隔で注射９６時間後まで撮影した。鎮静化させたラットを２匹づつ仰向けにして、コリメーター上部に保護レイヤーを備える倒立カメラヘッドの上部に配置し、そして保護レイヤーにテープで固定して最適な脚位置を維持した。それぞれの薬剤に対する、注入活性の既知画分に対応する補正基準液をシンチレーションバイアル中で希釈して被験ラットの大腿の厚みに適するようにして、共働画像化（concurrent imaging）のためにカバー付コリメーター上に配置した。沃素-１２５活性およびＴｃ-９９ｍ活性の画像は低エネルギー高感度コリメーターを備えるSimens社製LEMプラス可搬型カメラにて撮影し、そしてインジウム-１１１活性およびGa-67活性の画像は中位エネルギーコリメーターを用いる Simens社製オービターカメラにて撮影した。画像の多くは１５分間に亙る時間をかけて得た。相対的な活性を、それぞれの後脚、補正基準液および画像化時における適当な背景領域について、コンピューター支援対象領域（region-of-interest）分析により測定した。局所カウントを背景および物理的崩壊について補正した注入活性に対する百分率に変換し、注射後経過時間の関数として表した。変換したデータのグラフおよび統計による分析には、コンピュータープログラムであるエクセル（Microsoft社製）、ミニタブ（Minitab，Inc．製）およびシグマプロット（Jan del Scientific社製）を利用した。ＩＬ-８の物理学的および生物学的完全性は放射標識処理中に充分に保護された。標識混合物からＩＬ-８が物理的に完全に回収されたとすれば、放射標識効率を14〜45％として、88〜138CI/mmolの比放射能が達成される。タンパク質結合放射活性は、最終生成物において、総放射活性の95〜98％であると計測された。ＳＤＳ-ポリアクリルアミドゲル上における沃素-１２５−ＩＬ-８の電気泳動度は、非標識ＩＬ-８のそれと区別され得るものであり、そしてボイデンチャンバーによる検定において沃素-１２５−ＩＬ-８の効果は、好中球ケモタキシスに関して非標識ＩＬ-８の≧95％であった。その受容体結合特性を検定するため、本発明者らは３０フォルドの濃度範囲に亙る沃素 -１２５−ＩＬ-８を精製ヒト好中球とインキュベートしたが、それぞれの濃度範囲において、沃素-１２５−ＩＬ-８単独実験区（３反復）および１００フォルドモル過剰の非標識ＩＬ-８が存在する実験区（２反復）とを設けた（図４）。競合物の不存在および存在下における放射能結合の差異として表現した沃素-１２５−ＩＬ-８の特異的結合は、観察された結合全体の≧90％であると計測された。他の研究者の知見と一致して、結合曲線の分析は高親和性受容体の発生量を示した（細胞当たり最大〜60,000個の結合部位であると評価された；Kd＝8.3E−10M）。図５は、沃素-１２５−ＩＬ-８、Ga-67クエン酸塩およびインジウム-１１１標識ヒト白血球を血管内に注射してから１〜２４時間後に得られた個々のラットの背面画像を示している。これら３種類の薬剤は量的に類似した画像を齎し、注射後は常に、右脚に比べて不均整に増加した活性を左脚において呈した。３種類の薬剤すべてにおいて、少なくとも注射後９６時間までは、持続性の不均整が確認された。しかし後脚活性の経時変化は投与薬剤により異なっていた。左後脚の沃素-１２５−ＩＬ-８活性は、注射１時間後と３時間後の間にそのピークが存在し、物理的崩壊（％ＩＡ）について補正した注入活性の３時間の平均値および標準偏差は4.8±0.5％であると計算された。その後、活性は概略指数関数的に衰退した。左後脚におけるインジウム-１１１-ＷＢＣ活性も急速に増加し、注射３時間後までには4.2±0.6％IAの値に達し、その後最終的なプラトー（２４時間後に4.5±0.4％IA）に達した。左後脚Ga-67活性は注射６時間後までの間に位置時的に9.2±0.5％IAに上昇し、その後急激に約7.5％IAの定常レベルまで衰退した。沃素-１２５−ＩＬ-８またはインジウム-１１１-ＷＢＣを注入したラットでは、全ての画像化時点全てにおいて左後脚の活性が右後脚の活性よりも有意に大きかった（p≦0.05）。Ga-67クエン酸塩を注入したラットでは、左後脚と右後脚の活性の違いは、注射１時間後以外は全ての時点において有意な違いであった（p ＋0.2）。沃素-１２５−ＩＬ-８を与えられたラットは後脚の活性の部位による不均整を最も明瞭に示したが、その全ての画像化時点の平均の左後脚/右後脚活性比率（L /C）は2.5±0.9であり、有意な時間変数はない。分散分析によれば、この比率が、Ga-67クエン酸塩またはインジウム-１１１-ＷＢＣのどちらかを与えられたラットの対応する比率（1.5±0.3）よりも有意に高い（p＜0.001）。そのような不均整により炎症性病巣に応答する分別脚灌流を計測可能であるか否かを決定するために、カラギーナン処理した別の３匹のラットにピロリン酸第一錫とＴｃ-９９ｍを血管内注射して、これらのラットの赤血球を生体内で標識した。この放射性トレーサーの短い物理的半減期および生体内分解のために、この血液プール薬剤と炎症画像化薬剤との間での比較は注射２４時間以内に得られる画像の分析に限られる。予測通り、左後脚における活性は赤血球標識直後に最も高くなり（平均3.1±1.0％IA）、そして２４時間後までに1.6±0.5%IAにまで衰退した。Ｔｃ-９９ｍ標識赤血球を有するラットについて注射０時間後と２４時間後の平均L/C比率と標準偏差は1.2±0.2と計算された。この比率は沃素-１２５−ＩＬ-８を注射したラットのそれよりも有意に低いが、驚くべきことに、Ga- 67クエン酸塩またはインジウム-１１１-ＷＢＣを受けたラットのL/C比率との有意な差はない。上記のことは、沃素-１２５で標識したヒト組換えインターロイキン-８（沃素 -１２５−ＩＬ-８）が、Ga-67クエン酸塩およびインジウム-１１１−ＷＢＣで標識されたヒト白血球の両者に比べて、ラット後脚におけるカラギーナン誘導性急性炎症性病巣の画像化のために好ましいことを明示している。本実施例において、沃素-１２５−ＩＬ-８の活性は注射後短時間でピークを迎え、そして沃素-１２５−ＩＬ-８の目標対非目標（target-to-non-target）活性比率は比較した薬剤双方の比率または血液プール活性の放射性トレーサーの比率よりも有意に高い。沃素-１２５−ＩＬ-８はいかにして炎症性病巣に選択的に出現するかに関するどのような特別な理論とも結び付けずとも、上記観察結果は、生体外での実験を通して確立されているＩＬ-８と好中球との間の相互作用が沃素-１２５−ＩＬ- ８の生体内における振る舞いにより計測されうることを示唆している。好中球の豊富な領域へのＩＬ-８の迅速なフラックスは高発生量の高親和性受容体が仲介するプロセスが機能しているときにはよく起こることであり、そしてその後の病巣関連活性（lesion-associate activity）における指数的な衰退はプロセス後のＩＬ-８リガンドの急速な取り込みおよび分解とは矛盾しない。最初には、本実施例の比較に放射標識された均質なラット白血球を用いる考えであったが、正常ラット血液からインジウム-１１１で標識した白血球を調製しようとした本発明者らの試みは、不満足な細胞収量および標識効率という結果に終わった。外生の刺激された白血球の注入により本発明者らの実験モデルを混乱させることを避け、不必要にラットから血液を採取することを避けるために、本発明者らは容易に入手可能な正常ヒト白血球を使用することとした。ＩＬ-８は臨床における核画像化のための幾つかの生得的な利点を示す。生来的にＩＬ-８を産生するヒトポリペプチドは組換え形態（あるいは合成形態）で商業的に入手可能であり、そのＩＬ-８は非伝染性かつ非免疫原性で、（細菌性サイトカイン類と異なり）ヒトにおける毒性効果はしられていない。ＩＬ-８はその物理的または生物学的特性を検出可能なように変えることなく容易に放射沃素化され、そして予備研究は、ＩＬ-８を沃素-１２５またはインジウム-１１１で放射標識することによりカラギーナン処理されたラットにおいて本実施例において示されたと同質の画像を得ることができることを示している。ＩＬ-８の放射標識と投与は、血液の取り扱いまたは時間のかかる血液成分の単離を全く包含しないので、血液によって伝染する感染症に罹患している患者、および緊急に処置が必要であることが明白な患者においては、ＩＬ-８は最も適切な薬剤であると考えられる。ＩＬ-８のサイズおよび溶解性は組織中の好中球への接近を容易にするので、注射してから充分に画像化し得るようになるまでの間に存在するであろうタイムラグを最少化する。最後に、好中球上の受容体のＩＬ-８に対する親和性およびその数の多さは、感染性または非感染性病因の急性炎症性病巣における非常な信号増幅を齎すにちがいない。この特徴は、放射標識されたＩＬ-８を、好中球減少性患者における好中球の病巣集積の検知、および直接放射標識法のための末梢白血球を単離するためには非常に大量の血液を採取しなければならない小児にとって、特に有用なものにする。インターロイキン-８材料は、本発明に従い標識または放射性薬剤を備えるときには、炎症および感染性疾患の部位を画像化するために特に適切である。上記実施態様に対して、その細部において種々の改変、変革、手直しを行い得るが、それらは、説明するためだけのものであって何らの制限をも意図しない前記記述および図面中にすべて包含されるものである。

【手続補正書】特許法第１８４条の８【提出日】１９９４年４月２０日【補正内容】補正書の翻訳文請求の範囲（補正）１．動物の体内に標識ＣＸＣケモカインまたは該ＣＸＣケモカインの受容体分子を認識する標識ペプチドを導入すること；該ＣＸＣケモカインまたは前記標識ペプチドをその動物体内の標的部位に集積させること、その際に前記標識ＣＸＣケモカインまたは標識ペプチドにより認識され得る受容体分子が前記標的部位に位置している；および集積した標識ケモカインまたは標識ペプチドを検出して前記標的部位を画像化すること；を包含する、動物体内の標的部位の画像化方法。２．前記標的部位が、前記動物体の炎症または疾患部分である、請求項１に記載の方法。３．前記標識ＣＸＣケモカインが、放射標識ＣＸＣケモカインである、請求項１に記載の方法。４．前記ＣＸＣケモカインが、インジウム-１１１、沃素-１２３、テクネチウム-９９ｍまたは銅-６２により標識されている、請求項３に記載の方法。５．前記インジウム-１１１が、前記ＣＸＣケモカインのリシンにより備えられている、請求項４に記載の方法。６．前記ＣＸＣケモカインが、キレート剤を利用してインジウム-１１１により標識されている、請求項４に記載の方法。７．前記キレート剤が、Ｃ−ＤＴＰＡである、請求項６に記載の方法。８．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項６に記載の方法。９．前記沃素-１２３が、前記ＣＸＣケモカインのチロシン、沃化フェニル誘導体またはリシンにより備えられている、請求項４に記載の方法。１０．前記ＣＸＣケモカインが、クロラミン-Ｔ水和物を利用して沃素-１２３により標識されている、請求項４に記載の方法。１１．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１０に記載の方法。１２．前記ＣＸＣケモカインが、テクネチウム-９９ｍにより標識されている、請求項４に記載の方法。１３．前記テクネチウム-９９ｍが、前記ＣＸＣケモカインのリシンまたは付加遊離システインにより備えられている、請求項１２に記載の方法。１４．前記ＣＸＣケモカインが、キレート剤を利用して標識されている、請求項１に記載の方法。１５．前記キレート剤が、トリアミドチオレートリガンド、ジアミドジチオレートリガンドまたはジアミドジフェノル酸リガンドである、請求項１４に記載の方法。１６．前記ＣＸＣケモカインが、テクネチウム-９９ｍまたは銅-６２により標識され、かつ前記キレート剤がトリアミドチオレートリガンドである、請求項１５に記載の方法。１７．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１２に記載の方法。１８．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１に記載の方法。１９．標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインまたはペプチドを動物の体内に導入すること、その際に前記ペプチドは前記ＣＸＣケモカインの受容体分子を認識する；および前記標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインまたはペプチドを前記標識ＣＸＣケモカインまたは標識ペプチドにより認識され得る受容体分子を含む標的部位に集積させて前記標識薬剤を前記標的部位に送り込むこと；を包含する、動物体内の標的部位に標識薬剤を送り込む方法。２０．放射性薬剤を備えるＣＸＣケモカインまたはペプチドを動物の体内に導入すること、その際に前記ペプチドは前記ＣＸＣケモカインの受容体分子を認識する；および前記放射性薬剤を備えるＣＸＣケモカインまたはペプチドを前記標識ＣＸＣケモカインまたは標識ペプチドにより認識され得る受容体分子を含む標的部位に集積させて前記放射性薬剤を前記標的部位に送り込むこと；を包含する、動物体内の標的部位に放射性薬剤を送り込む方法。２１．前記受容体分子が、インターロイキン-８受容体分子である、請求項１、１９または２０のいずれか１つに記載の方法。２２．前記ＣＸＣケモカインが、好中球活性化ペプチド-２（ＮＡＰ−２）である、請求項１、１９または２０のいずれか１つに記載の方法。２３．前記受容体分子が、インターロイキン-８受容体分子である、請求項２２に記載の方法。２４．インジウム-１１１、沃素-１２３およびテクネチウム-９９ｍからなる群より選ばれる標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインを含有する組成物。２５．キレート剤と結合したＣＸＣケモカインを含有する組成物。２６．前記キレート剤が、トリアミドチオレートリガンド、ジアミドジチオレートリガンドまたはジアミドジフェノル酸リガンドである、請求項２５に記載の組成物。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ライル、レオン・アールアメリカ合衆国、ミズーリ州 63119、ウェブスター・グローブズ、ウェブスター・パス・ドライブ 1319 (72)発明者カンクル、スティーヴン・エルアメリカ合衆国、ミシガン州 48104、アン・アーバー、ヨスト・アベニュー 2666

Claims

【特許請求の範囲】１．動物の体内に標識ＣＸＣケモカインを導入すること；該ＣＸＣケモカインをその動物体内の標的部位に集積させること、その際に前記標的部位はインターロイキン-８受容体分子を含むものである；および集積した標識ＣＸＣケモカインを検出して前記標的部位を画像化すること；を包含する、動物体内の標的部位の画像化方法。２．前記標的部位が、前記動物体の炎症または疾患部分である、請求項１に記載の方法。３．前記標識ＣＸＣケモカインが、放射標識ＣＸＣケモカインである、請求項１に記載の方法。４．前記ＣＸＣケモカインが、インジウム-１１１、沃素-１２３、テクネチウム-９９ｍまたは銅-６２により標識されている、請求項３に記載の方法。５．前記インジウム-１１１が、前記ＣＸＣケモカインのリシンにより備えられている、請求項４に記載の方法。６．前記ＣＸＣケモカインが、キレート剤を利用してインジウム-１１１により標識されている、請求項４に記載の方法。７．前記キレート剤が、Ｃ−ＤＴＰＡである、請求項６に記載の方法。８．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項６に記載の方法。９．前記沃素-１２３が、前記ＣＸＣケモカインのチロシン、沃化フェニルまたはリシンにより備えられている、請求項４に記載の方法。１０．前記ＣＸＣケモカインが、クロラミン-Ｔ水和物を利用して沃素-１２３により標識されている、請求項４に記載の方法。１１．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１０に記載の方法。１２．前記ＣＸＣケモカインが、テクネチウム-９９ｍにより標識されている、請求項４に記載の方法。１３．前記テクネチウム-９９ｍが、前記ＣＸＣケモカインのリシンまたは付加遊離システインにより備えられている、請求項１２に記載の方法。１４．前記ＣＸＣケモカインが、キレート剤を利用して標識されている、請求項１に記載の方法。１５．前記キレート剤が、トリアミドチオレートリガンド、ジアミドジチオレートリガンドまたはジアミドジフェノル酸リガンドである、請求項１４に記載の方法。１６．前記ＣＸＣケモカインが、テクネチウム-９９ｍ、または銅-６２により標識され、かつ前記キレート剤がトリアミドチオレートリガンドである、請求項１５に記載の方法。１７．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１２に記載の方法。１８．前記ＣＸＣケモカインが、ヒトインターロイキン-８である、請求項１に記載の方法。１９．標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインを動物の体内に導入すること、および該標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインをインターロイキン-８受容体分子を含む標的部位に集積させて前記標識薬剤を前記標的部位に送り込むことを包含する、動物体内の標的部位に標識薬剤を送り込む方法。２０．放射性薬剤を備えるＣＸＣケモカインを動物の体内に導入すること、および該放射性薬剤を備えるＣＸＣケモカインをインターロイキン-８受容体分子を含む標的部位に集積させて前記放射性薬剤を前記標的部位に送り込むことを包含する、動物体内の標的部位に放射性薬剤を送り込む方法。２１．標識薬剤を備えるＣＸＣケモカインを含有する組成物。２２．放射性薬剤を備えるＣＸＣケモカインを含有する組成物。２３．前記放射性薬剤が放射標識薬剤である、請求項２２に記載の組成物。２４．前記放射性薬剤が、インジウム-１１１、沃素-1２３およびテクネチウム-９９ｍからなる群より選ばれる、請求項２３に記載の組成物。２５．キレート剤と結合したＣＸＣケモカインを含有する組成物。２６．前記キレート剤が、トリアミドチオレートリガンド、ジアミドジチオレートリガンドまたはジアミドジフェノル酸リガンドである、請求項２５に記載の組成物。