JPH0859691A

JPH0859691A - カレドスリシン類及びその製造法

Info

Publication number: JPH0859691A
Application number: JP7204238A
Authority: JP
Inventors: Masae Kikuchi; 雅恵菊地; Hisao Shimada; 壽男嶋田; Hitomi Tanaka; ひとみ田中
Original assignee: F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1994-08-17
Filing date: 1995-08-10
Publication date: 1996-03-05
Also published as: ITMI951565A1; US5641485A; FR2723748A1; DE19529698A1; IT1275575B; ITMI951565A0

Abstract

(57)【要約】新規な生理的活物質カレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、
Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩを、水性培地中好気条件下で、シ
ュードモナス属に属する微生物を培養することによって
調製した。それらは真菌性疾患の治療に使用することが
できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明が属する技術分野】本発明は、新規な生理的活性
物質カレドスリシン(caledothricin) Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、
Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨもしくはＩ、ならびにそれらの塩に関す
るものである。

【０００２】本発明はまた、新規な生理的活性物質であ
るカレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈもし
くはＩ、またはそれらの塩を含有する医薬、特に真菌性
疾患の治療用薬剤、並びにカレドスリシン類を製造可能
な微生物、ならびにカレドスリシン類の製造方法に関す
るものでもある。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】免疫無防備状態の患者
において、真菌類に感染しやすくする多様な要因、たと
えばＡＩＤＳ、癌治療、臓器移植、高齢者人口の増加、
抗生物質の使用増といった要因のために、重篤な真菌症
が、増加している。こうした免疫無防備状態の患者にお
いては、健康な人には病原性がない多くの真菌類が、毒
性のある病原として作用する。その結果、医学的に耐性
の強い抗真菌薬の必要性が急激に増加している。しかし
ながら、完全な抗真菌薬は未だ開発されていない。全身
性真菌症に対するほんのわずかの抗真菌薬が市販されて
いるだけである。その上、これらの抗真菌薬の性質は、
実用的な必要性に十分合致するものではない。こうした
状況のなかで、本発明者により広範な抗菌スペクトルを
有する新規な抗真菌薬の研究がなされた。その結果、よ
り詳細には後述するように、広範な抗菌スペクトルを有
する新規な抗真菌薬を産生する、数種の特異な微生物を
見い出した。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明にしたがって得ら
れる、生理的活性物質であるカレドスリシンＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩの物理化学的性質は、以
下の通りである。

【０００５】カレドスリシンＡ：１）外観：白色固体２）比旋光度：〔α〕²⁴Ｄ−５０．８°±６．４°（ｃ
＝０．１０、ピリジン中）３）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １４０１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 、１４２３
（Ｍ＋Ｎａ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３９９（Ｍ−Ｈ）^- 、１４１７
（Ｍ＋Ｈ₂ Ｏ−Ｈ）^- ４）分子式：Ｃ₆₅Ｈ₁₀₀ Ｎ₁₂Ｏ₂₂ ５）高分解能質量分析（Ｍ＋Ｈとして）：測定値：１４０１．７１１７計算値（Ｃ₆₅Ｈ₁₀₁ Ｎ₁₂Ｏ₂₂として）：１４０１．７１
４３６）紫外線スペクトル：１_max ２０３±５（ε４３０
０）、２２４±５（ε２９００sh）、２７５±５（ε２
８０sh）メタノール中（図１参照）１_max ２０３±５（ε３５００）、２２０±５（ε２９
００sh）、２７５±５（ε３１５sh）（N ／１０ＨＣｌ
−メタノール中）１_max ２０４±５（ε７２００）、２２５±５（ε２６
００sh）、２４５±５（ε１６００sh），２９５±５
（ε２００sh）（N ／１０ＮａＯＨ−メタノール中）７）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図２参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３２９８、２９２
５、２８５４、１７４５、１６５７、１５１７、１２６
２、１１００〜１０００、８）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図３参照）９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：１００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図４参照）１０）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶１１）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン(Rydon) −スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀１２）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ジクロロメタン：メタノール：水（６０：３５：５）Ｒ
ｆ０．１３ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２５ *1 E. Merck AG., Germany １３）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡ３０３、山村化学研究所製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）＝４５：５５流速：１ml／min Ｒｔ＝１６．３±０．５ｍｉｎ１４）物質の分類：両性物質１５）アミノ酸分析：６Ｎ塩酸中でカレドスリシンＡ
を１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行
って、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【０００６】カレドスリシンＢ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １２２３（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １２２１（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₅₉Ｈ₉₀Ｎ₁₂Ｏ₁₆ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図５参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３０４、２９２
６、２８５４、１７４１、１６５７、１５１８、１２６
１、１１３０〜１０６０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図６参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４９＊１Ｅ．ＭｅｒｃｋＡＧ．，Ｇｅｒｍａｎｙ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０ｍＭリン酸水素ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝２２．４±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＢを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【０００７】カレドスリシンＣ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １２３９（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １２３７（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₅₉Ｈ₉₀Ｎ₁₂Ｏ₁₇ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図７参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３６８、２９２
６、２８５５、１７４０、１６７１、１５１８、１２０
４、１１３８５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図８参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４６ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝２２．２±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＣを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【０００８】カレドスリシンＤ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３５５（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３５３（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₄Ｈ₉₈Ｎ₁₂Ｏ₂₀ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図９参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３４２、２９１
０、２８３０、１７４０、１６５５、１５２７、１２０
４、１１４０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１０参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４３ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１８．２±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＤを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【０００９】カレドスリシンＥ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３７１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３６９（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₄Ｈ₉₈Ｎ₁₂Ｏ₂₁ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１１参照）主吸
収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５４、２９２０、
２８５０、１７４０、１６７８、１５３０、１２６２、
１１５０〜１０５０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１２参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．３９ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１７．６±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＥを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【００１０】カレドスリシンＦ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １５１７（Ｍ＋Ｈ）^＋陰イオンモード：ｍ／ｚ１５１５（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₇₀Ｈ₁₀₈ Ｎ₁₂Ｏ₂₅ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１３参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５６、２９２
６、２８５５、１７４０、１６５７、１５１８、１２６
０、１１００〜１０００５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１４参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．１８ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１６．３±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＦを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【００１１】カレドスリシンＧ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３７３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ３）分子式：Ｃ₆₃Ｈ₉₆Ｎ₁₂Ｏ₂₂ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１５参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５０、２９２
６、２８５５、１７３９、１６５９、１５１８、１２６
５、１１２０〜１０３０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１６参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２４ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１５．６±０．５ｍｉｎ１０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６Ｎ塩酸中でカレドスリシンＧ
を１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行
って、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【００１２】カレドスリシンＨ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３４３（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３４１（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₂Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₂₁ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１７参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３８６、２９２
５、２８５０、１７４５、１６７０、１５２０、１２１
０、１１４０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１８参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２２＊１Ｅ．ＭｅｒｃｋＡＧ．，Ｇｅｒｍａｎｙ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０ｍＭリン酸水素ナトリ
ウム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１２．３±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＨを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【００１３】カレドスリシンＩ：１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３２７（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３２５（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₂Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₂₀ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１９参照）主吸
収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３４７、２９２０、
２８５０、１６７９、１５４０、１２０５、１１４０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図２０参照）６）溶解度：溶解性：ピリジン、トリフルオロ酢酸難溶性：水、ジメチルスルホキシド、メタノール７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４^*1 溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ．４３ *1 E. Merck AG., Germany ９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ、三菱化成社製移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１２．６±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＩを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出した。

【００１４】カレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、
Ｇ、Ｈ及びＩは、図３、６、８、１０、１２、１４、１
６、１８及び２０に示すように極めて類似の¹ Ｈ−ＮＭ
Ｒスペクトルを示し、かつ図２、５、７、９、１１、１
３、１５、１７及び１９に示すように極めて類似の赤外
線スペクトルを示す。これはカレドスリシン類はデプシ
ペプチド同族体であることを各々示している。カレドス
リシン類のアミノ酸分析によって、カレドスリシン類は
同じアミノ酸残基であるトレオニン、グリシン、グルタ
ミン、ヒスチジン及びチロシンを有することが示した。
脂肪酸単位の存在は、それらの¹ Ｈ−ＮＭＲ（メチル基
の信号は０．９５ppm 、メチレン基の信号は１．２〜
１．４ppm ）によって示された。

【００１５】本発明の製造法によれば、カレドスリシン
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩは、シュードモ
ナス属に属するカレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、
Ｆ、Ｇ、ＨもしくはＩ生産菌を、水性培地中、好気条件
下で培養し、培養物から該物質を採取することによって
調製される。

【００１６】本発明で使用される微生物は、シュードモ
ナス属に属し、生理的活性物質であるカレドスリシン
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨもしくはＩを生成し得
る微生物であって、その機能的同等物、その継代培養
物、その突然変異体および変異体であるすべての菌株を
含む。

【００１７】好ましい菌株は、土壌試料から単離された
シュードモナスｓｐｐ．ＢＡ７３９９及びＢＡ８４２９
である。これらの菌株シュードモナスｓｐｐ．ＢＡ７３
９９及びＢＡ８４２９は、１９９４年８月２日に工業技
術院生命工学工業技術研究所に、ブダペスト条約に基づ
き、以下の寄託番号で寄託されている。シュードモナスｓｐ．ＢＡ７３９９ＦＥＲＭＢ
Ｐ−４７６６シュードモナスｓｐ．ＢＡ８４２９ＦＥＲＭＢ
Ｐ−４７６７

【００１８】シュードモナスｓｐｐ．ＢＡ７３９９及び
ＢＡ８４２９の形態的及び生理的特性は、以下の通りで
ある。

【００１９】形態的及び生理的特性菌株ＢＡ７３９９及びＢＡ８４２９は、グラム陰性で、
胞子を形成せず、棒状で、好気性、複数の（６より多
い）極鞭毛を持つ運動性の菌株であった。コロニーの色
は、淡黄色であった。オキシダーゼとカタラーゼの生成
は陽性であった。ＯＦテストで菌株ＢＡ７３９９は酸化
力を有するが、菌株ＢＡ８４２９では陰性であった。発
育因子は不必要であった。これらの特性は、明らかに、
二つの菌株、すなわちＢＡ７３９９及びＢＡ８４２９
が、シュードモナス・ミグラ(Pseudomonas Migula)に属
していることを示した。そのため、これらの菌株は、シ
ュードモナスｓｐｐ．ＢＡ７３９９及びＢＡ８４２９と
同定された。

【００２０】本発明の製法に従う培養は、微生物が培養
される際に使用可能な、通例の栄養を有する培地で行う
ことができる。炭素源としては、たとえばグルコース、
レブロース、グラクトース、マンノース、ソルボース、
アラビノース、キシロース、スクロース、スターチ、グ
リセロール、糖みつ、デキストリン及びそれらの混合物
が挙げられる。窒素源としては、たとえば大豆粉、綿実
粉、ひき割り麦粉、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵
母エキス、コーンスチープリカー、硫酸アンモニウム、
硝酸ナトリウム及びそれらの混合物が挙げられる。更
に、他の有機物質もしくは無機物質を、微生物の成長促
進のため及びカレドスリシン類の生成を増すため、培地
に加えてもよい。このような物質の例としては、無機
塩、たとえば炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、チオ硫
酸ナトリウム、リン酸塩等が挙げられる。

【００２１】培養は、水性培地中、好気条件下で、好ま
しくは液内発酵によって行われる。培養は好適には２０
℃〜３５℃で、最適には２７℃の温度で行われる。培養
は好ましくはｐＨ３〜９で行われる。培養時間は、培養
が実行された条件によるが、概して２４℃で２００時間
培養を行えば、十分である。

【００２２】培養物から目的とするカレドスリシン類を
採取するには、培地から微生物が産生した代謝物質を単
離するために通常用いられる分離方法を適切に使用し得
る。たとえば、カレドスリシンＡは、ｎ−ブタノールで
抽出可能な両性物質であるが、固形菌糸体に主に含ま
れ、以下の手順によって有利に回収された。すなわち、
培養液をろ過または遠心分離して細胞を集め、得られた
固型菌糸体を適切な溶媒で抽出し、所望の物質を回収す
る。抽出に使用され得る溶媒は、水溶性有機溶媒または
水溶性有機溶媒の水混和物、たとえばメタノール、エタ
ノール、アセトン、含水アセトン及び含水アルコール等
を含む。

【００２３】塩である水溶性物質等は、水と水不混和性
有機溶媒、たとえばｎ−ブタノール、メチルエチルケト
ン等との分配によって、得られた抽出物から有利に分離
し得る。着色物質、脂肪溶解性物質等を抽出物から除去
するには、シリカゲル（和光化学株式会社、日本）、分
子ふるい型の樹脂、例えばセファデックス(Sephadex)
（ファルマシア、スウェーデン）及びトヨパール（東洋
曹達工業）等が使用できる。

【００２４】化合物の完全な精製のため、高速液体クロ
マトグラフィー（ＨＰＬＣ）が有利に使用される。その
ようなＨＰＬＣで使用され得る担体は、逆相型樹脂、例
えばＹＭＣゲル（山村化学研究所）及びカプセルパック
ゲル（資生堂）等を含む。移動相としては、水性緩衝液
と適切な水溶性有機溶媒、例えばメタノール、アセトニ
トリル等との混合物からなる溶媒系が、有利に使用され
る。

【００２５】上記のようにして精製、分画した溶離液画
分は、濃縮、凍結乾燥または結晶化を行って、カレドス
リシン類を粉砕または結晶化することができる。

【００２６】薬理学的に許容し得る塩（例えば、カリウ
ム塩、カルシウム塩、塩酸塩等）を、カレドスリシン類
から調製するには、従来既知の方法が採用できる。

【００２７】インビトロ抗真菌活性代表的な病原菌に対するカレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、
Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ及びＩの最小生育阻止濃度（ＭＩ
Ｃ）を表１に示す。ＭＩＣとは、視覚し得る生長が検知
されない試験組成物の最小濃度として定義されるもので
ある。ＭＩＣを測定するために用いられる培地は、酵母
窒素基質（Difco ) に、グルコース１％、低融点アガロ
ース０．２％及びＫ₂ ＨＰＯ₄ （ｐＨ７．０）０．２５
％を補充したものを用いた。Candida albicans及びCryp
tococcus neoformans に対する抗真菌活性を測定する場
合、低融点アガロースの使用を省略した。最終濃度１
０，０００cfu/mlで、真菌細胞を培地へ接種した。プレ
ートを２７℃で１〜１２日間インキュベートした。表１
におけるＭＩＣのすべての値は、試験組成物のμg/mlで
表されている。

【００２８】

【表１】カレドスリシンＡ〜Ｉの急性毒性は、観察されなかっ
た。

【００２９】治療上の使用のため、カレドスリシン類
は、公知の配合技術により多様な形態の薬学的組成物に
調製され得る。

【００３０】カンジダ症の治療にカレドスリシン類を使
用するには、たとえばカレドスリシンＡを生理的食塩水
で溶液として、通常一回の投与量０．１〜５０mg/Kg/
日、好ましくは０．５〜２０mg/kg/日の用量で、静脈
内、皮下又は筋肉内に投与できる。経口投与としては、
カレドスリシンＡを、好ましくは従来の方法によりカプ
セルもしくは糖衣錠として製造し、通常一回の用量０．
１〜１００mg/kg/日、好ましくは１〜５０mg/kg/日で投
与される。

【００３１】本発明により得られるカレドスリシン類
は、局所的な使用には消毒剤として使用することもでき
る。例えばカレドスリシンＡを通常０．１〜１０（重量
／容量）％、好ましくは０．５〜５（重量／容量）％の
濃度に蒸留水中に溶解することにより調製した液体組成
物として、または基質としてワセリンもしくはラノリン
を使用し、１g 当たり通常０．２〜１００mg、好ましく
は１〜２０mgのカレドスリシンＡを含む軟膏として、カ
レドスリシンＡを塗布することにより、ヒトや動物の皮
膚や粘膜の殺菌剤及び消毒剤として使用することができ
る。

【００３２】

【実施例】以下の実施例により、本発明を更に例示す
る。本文中の％は重量／容量％である。

【００３３】実施例１よく成長したシュードモナスｓｐ．ＢＡ７３９９の斜面
培養からの細胞懸濁液を、デキストリン３％、アジプロ
ンＥ３（味の素）１．５％、ポリペプトン（和光）０．
２％、コ−ングルテンミール（昭和産業）１．５％、Ｎ
ａ₂ Ｓ₂ Ｏ₃ ０．１％及び消泡剤（日産）１滴／フラス
コから成る培地１００mlを入れた５００ml三角フラスコ
に接種した。フラスコは２７℃で１日、２２０rpm で振
とうした。得られた培養物０．２mlを、上記と同様の培
地を含む５００mlフラスコ５０個にそれぞれ移した。発
酵は２７℃、２２０rpm で回転しんそう機で行った。２
日間培養の後、培養ブイヨンを以下に述べる単離手順に
かけた。

【００３４】こうして得られた培養ブイヨン（５リット
ル）を、連続遠心分離機にかけ、菌糸体を得た。固形菌
糸体をエタノール（１．３リットル）に加え、混合物を
撹拌した。混合物をろ過し、エタノール抽出液（１．４
リットル）を減圧下、乾燥濃縮した。残渣（６．４g ）
を水（２リットル）に溶解し、得られた懸濁液をｐＨ２
に調整した。ｎ−ブタノール（２リットル）を加え、混
合物を撹拌して、次いで水層を除去した。こうして得ら
れた有機層に水（２リットル）を加え、混合物をｐＨ９
に調整した。混合物を撹拌し、次いで水層を除去した。
得られた有機層を減圧下に濃縮乾燥して、残渣（４．５
g ）をシリカゲル（１リットル）上でカラムクロマトグ
ラフィーに付した。カラムをまずジクロロメタンとメタ
ノール（１：１）の混合物で溶離した。次いで、抗生物
質をジクロロメタンとメタノール（１：１）の混合物次
いでメタノールで溶離した。抗生物質を含む画分を合わ
せ、減圧下に濃縮乾燥した。得られた残渣（１．４g ）
をセファデックスＬＨ２０（１．５リットル）上でカラ
ムクロマトグラフィーにかけた。メタノールで溶離し
た。抗生物質を含む画分を合わせ（２０５ml）、次いで
濃縮して減圧乾燥した。ピリジン中に溶解した粗抗生物
質を、ＹＭＣｐａｃｋＣ₁₈カラム（２０mmf Ｘ２５０m
m）上で、アセトニトリルの溶媒系、すなわち画分のた
めに１０mMリン酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ３．４）
（４５：５５）で溶離して、高速液体クロマトグラフィ
ー（ＨＰＬＣ）に付した。個々のカレドスリシンＡ〜Ｉ
を含む画分を合わせ、濃縮した。ｎ−ブタノール（３０
ml）を加えた濃縮液（３０ml）を５分間撹拌し、その後
水層を除去した。得られた有機層を水（１５mlＸ２）で
洗浄し、濃縮して、減圧乾燥した。残渣をピリジン中に
溶解し、濃縮して、再度減圧乾燥して、白色粉末状のカ
レドスリシンＡ（３０mg）、Ｂ（７．８mg）、Ｃ（３．
７mg）、Ｄ（２．１mg）、Ｅ（１．０mg）、Ｆ（１．４
mg）、Ｇ（１．１mg）、Ｈ（１．６mg）及びＩ（３．０
mg）を得た。

【００３５】実施例２シュードモナスｓｐ．ＢＡ７３９９の代わりに、シュー
ドモナスｓｐ．ＢＡ８４２９を使用した以外は、実施例
１に記載したと同様の方法で、白色粉末状のカレドスリ
シンＡ（１２．５mg）、Ｂ（２．６mg）、Ｃ（微量）、
Ｄ（微量）、Ｅ（微量）、Ｆ（０．３mg）、Ｇ（５．６
mg）、Ｈ（微量）及びＩ（３．２mg）を得た。

【００３６】実施例３以下の成分を含む注射可能な溶液を、それ自体公知の方
法で製造した。カレドスリシンＡ２０ mg リン酸水素二ナトリウム無水物７．６mg 二リン酸ナトリウム・二水化物２．０mg エチルアルコール１５０ mg 蒸留、脱イオン、滅菌水８５０ mg 合計１０２９．６mg

【図面の簡単な説明】

【図１】カレドスリシンＡの紫外線スペクトルである。

【図２】カレドスリシンＡの赤外線スペクトルである。

【図３】カレドスリシンＡの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで
ある。

【図４】カレドスリシンＡの¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルで
ある。

【図５】カレドスリシンＢの赤外線スペクトルである。

【図６】カレドスリシンＢの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで
ある。

【図７】カレドスリシンＣの赤外線スペクトルである。

【図８】カレドスリシンＣの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルで
ある。

【図９】カレドスリシンＤの赤外線スペクトルである。

【図１０】カレドスリシンＤの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

【図１１】カレドスリシンＥの赤外線スペクトルであ
る。

【図１２】カレドスリシンＥの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

【図１３】カレドスリシンＦの赤外線スペクトルであ
る。

【図１４】カレドスリシンＦの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

【図１５】カレドスリシンＧの赤外線スペクトルであ
る。

【図１６】カレドスリシンＧの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

【図１７】カレドスリシンＨの赤外線スペクトルであ
る。

【図１８】カレドスリシンＨの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

【図１９】カレドスリシンＩの赤外線スペクトルであ
る。

【図２０】カレドスリシンＩの ¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル
である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩ技術表示箇所Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ 8828−4ＢＣ１２Ｐ 21/00 Ａ 9282−4Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 21/00 Ｃ１２Ｒ 1:38）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＡ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）比旋光度：〔α〕²⁴Ｄ−５０．８°±６．４°（ｃ
＝０．１０、ピリジン中）３）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １４０１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 、１４２３
（Ｍ＋Ｎａ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３９９（Ｍ−Ｈ）^- 、１４１７
（Ｍ＋Ｈ₂ Ｏ−Ｈ）^- ４）分子式：Ｃ₆₅Ｈ₁₀₀ Ｎ₁₂Ｏ₂₂ ５）高分解能質量分析（Ｍ＋Ｈとして）：測定値：１４０１．７１１７計算値（Ｃ₆₅Ｈ₁₀₁ Ｎ₁₂Ｏ₂₂として）：１４０１．７１
４３６）紫外線スペクトル： λ_max ２０３±５（ε４３００）、２２４±５（ε２９
００sh）、２７５±５（ε２８０sh）メタノール中（図
１参照） λ_max ２０３±５（ε３５００）、２２０±５（ε２９
００sh）、２７５±５（ε３１５sh）（N ／１０ＨＣｌ
−メタノール中） λ_max ２０４±５（ε７２００）、２２５±５（ε２６
００sh）、２４５±５（ε１６００sh），２９５±５
（ε２００sh）（N ／１０ＮａＯＨ−メタノール中）７）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図２参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３２９８、２９２
５、２８５４、１７４５、１６５７、１５１７、１２６
２、１１００〜１０００、８）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図３参照）９）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル：１００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図４参照）１０）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶１１）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀１２）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ジクロロメタン：メタノール：水（６０：３５：５）Ｒ
ｆ０．１３ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２５１３）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＹＭＣ−ＰａｃｋＡ３０３移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）＝４５：５５流速：１ml／min Ｒｔ＝１６．３±０．５min １４）物質の分類：両性物質１５）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＡを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項２】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＢ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １２２３（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １２２１（Ｍ−Ｈ）⁻ ３）分子式：Ｃ_５９Ｈ₉₀Ｎ₁₂Ｏ₁₆ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図５参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３０４、２９２
６、２８５４、１７４１、１６５７、１５１８、１２６
１、１１３０〜１０６０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図６参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４９９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝２２．４±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＢを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項３】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＣ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １２３９（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １２３７（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₅₉Ｈ₉₀Ｎ₁₂Ｏ₁₇ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図７参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３６８、２９２
６、２８５５、１７４０、１６７１、１５１８、１２０
４、１１３８５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図８参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４６９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝２２．２±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＣを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項４】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＤ、及び生理学上許容さ
れる塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３５５（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３５３（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₄Ｈ₉₈Ｎ₁₂Ｏ₂₀ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図９参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３４２、２９１
０、２８３０、１７４０、１６５５、１５２７、１２０
４、１１４０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１０参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４３９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１８．２±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＤを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項５】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＥ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３７１（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３６９（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₄Ｈ₉₈Ｎ₁₂Ｏ₂₁ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１１参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５４、２９２
０、２８５０、１７４０、１６７８、１５３０、１２６
２、１１５０〜１０５０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１２参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．３９９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１７．６±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＥを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項６】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＦ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １５１７（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １５１５（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₇₀Ｈ₁₀₈ Ｎ₁₂Ｏ₂₅ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１３参照）主吸
収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５６、２９２６、
２８５５、１７４０、１６５７、１５１８、１２６０、
１１００〜１０００５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１４参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．１８９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１６．３±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＦを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項７】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＧ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３７３（Ｍ＋Ｈ）⁺ ３）分子式：Ｃ₆₃Ｈ₉₆Ｎ₁₂Ｏ₂₂ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１５参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３５０、２９２
６、２８５５、１７３９、１６５９、１５１８、１２６
５、１１２０〜１０３０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１６参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２４９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１５．６±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＧを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項８】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＨ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３４３（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３４１（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₂Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₂₁ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１７参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３８６、２９２
５、２８５０、１７４５、１６７０、１５２０、１２１
０、１１４０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図１８参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリン、
ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン硫酸、ライドン
−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン硫酸、坂口試薬、硝酸銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．２２９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速率：１．２ml／min Ｒｔ＝１２．３±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＨを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジン及び生理学上許容される塩を検出
【請求項９】以下の物理化学的性質を有する、生理的
活性物質であるカレドスリシンＩ、及びその生理学上許
容される塩。１）外観：白色固体２）分子量（高速原子衝撃質量分析法〔ＦＡＢ−ＭＳ
法〕）：陽イオンモード：m/z １３２７（Ｍ＋Ｈ）⁺ 陰イオンモード：m/z １３２５（Ｍ−Ｈ）^- ３）分子式：Ｃ₆₂Ｈ₉₄Ｎ₁₂Ｏ₂₀ ４）赤外線スペクトル：ＫＢｒ錠中（図１９参照）主吸収波数（cm^-1）は、以下の通り：３３４７、２９２
０、２８５０、１６７９、１５４０、１２０５、１１４
０５）¹ Ｈ−ＮＭＲスペクトル：４００MHz 、ジメチルス
ルホキシド−ｄ₆ 及びトリフルオロ酢酸（２５：１）の
混合物中（図２０参照）６）溶解度：ピリジン、トリフルオロ酢酸に溶解水、ジメチルスルホキシド、メタノールに難溶７）呈色反応：陽性：アニスアルデヒド−硫酸、ＨＢｒ−ニンヒドリ
ン、ヨウ素ガス、モリブドリン酸、バニリン−硫酸、ラ
イドン−スミス試薬陰性：ブロモクレゾールグリーン、塩化第二鉄、２，４
−ジニトロフェニルヒドラジン−硫酸、坂口試薬、硝酸
銀８）薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）：担体：シリカゲルＦ２５４溶媒系：ｎ−ブタノール：酢酸：水（３：１：１）Ｒｆ０．４３９）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）：担体：ＭＣＩｇｅｌＯＤＳ移動相：アセトニトリル：１０mM リン酸水素ナトリウ
ム緩衝液（ｐＨ３．４）溶媒勾配流速：１．２ml／min Ｒｔ＝１２．６±０．５min １０）物質の分類：両性物質１１）アミノ酸分析：６N 塩酸中でカレドスリシンＩを
１２０℃で２４時間加熱し、次いでアミノ酸分析を行っ
て、チロシン、トレオニンＸ２、グルタミン、グリシ
ン、ヒスチジンを検出
【請求項１０】請求項第１〜９に記載の生理的活性物
質であるカレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、
ＨもしくはＩ、またはそれらの塩を含有する医薬。
【請求項１１】請求の範囲１〜９に記載の生理的活性
物質であるカレドスリシンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、
Ｇ、ＨもしくはＩ、またはそれらの塩を含有する真菌性
疾患の治療用薬剤。
【請求項１２】シュードモナスｓｐ．ＢＡ７３９９
（ＦＥＲＭＢＰ−４７６６）。
【請求項１３】シュードモナスｓｐ．ＢＡ８４２９
（ＦＥＲＭＢＰ−４７６７）。
【請求項１４】シュードモナス属に属するカレドスリ
シンＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨもしくはＩ生産菌
を培養し、培養物から活性物質であるカレドスリシン
Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、ＨもしくはＩを採取する
ことを特徴とする製造方法。
【請求項１５】微生物がシュードモナスｓｐ．ＢＡ７
３９９（ＦＥＲＭＢＰ−４７６６）またはシュードモナ
スｓｐ．ＢＡ８４２９（ＦＥＲＭＢＰ−４７６７）で
ある、請求項１４記載の製造方法。