JPH0899986A - ガングリオシドの製造法 - Google Patents
ガングリオシドの製造法Info
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- JPH0899986A JPH0899986A JP6261035A JP26103594A JPH0899986A JP H0899986 A JPH0899986 A JP H0899986A JP 6261035 A JP6261035 A JP 6261035A JP 26103594 A JP26103594 A JP 26103594A JP H0899986 A JPH0899986 A JP H0899986A
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Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
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Abstract
(57)【要約】
【目的】 ガングリオシドＧD3からガングリオシドＧM3
を製造する方法を提供する。 【構成】 ガングリオシドＧD3を含む原材料をアルカリ
条件下で加熱処理することによりガングリオシドＧM3を
得る。 【効果】 このガングリオシドＧM3の製造法を用いるこ
とにより、工業的な規模でガングリオシドＧM3を製造す
ることができる。
を製造する方法を提供する。 【構成】 ガングリオシドＧD3を含む原材料をアルカリ
条件下で加熱処理することによりガングリオシドＧM3を
得る。 【効果】 このガングリオシドＧM3の製造法を用いるこ
とにより、工業的な規模でガングリオシドＧM3を製造す
ることができる。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アルカリで加水分解す
ることによってガングリオシドＧD3からガングリオシド
ＧM3を製造する方法に関する。本発明の製造法により得
られるガングリオシドＧM3は、医学、薬学及び生化学な
どの分野で試薬として有用であり、また、医薬品、化粧
品、飲食品及び飼料などの素材としても有用である。
ることによってガングリオシドＧD3からガングリオシド
ＧM3を製造する方法に関する。本発明の製造法により得
られるガングリオシドＧM3は、医学、薬学及び生化学な
どの分野で試薬として有用であり、また、医薬品、化粧
品、飲食品及び飼料などの素材としても有用である。
【０００２】
【従来の技術】ガングリオシドは、シアル酸を含むスフ
ィンゴ糖脂質の総称であり、種々の分子種が存在するこ
とが知られている。その中で、ガングリオシドＧM3は、
セラミドに乳糖の還元末端が結合し、かつ乳糖の非還元
末端にシアル酸がα２−３結合した構造を有している。
また、ガングリオシドＧD3は、ガングリオシドＧM3の非
還元末端にさらにシアル酸がα２−８結合した構造を有
しており、分子全体としてはシアル酸を２分子含んでい
る。
ィンゴ糖脂質の総称であり、種々の分子種が存在するこ
とが知られている。その中で、ガングリオシドＧM3は、
セラミドに乳糖の還元末端が結合し、かつ乳糖の非還元
末端にシアル酸がα２−３結合した構造を有している。
また、ガングリオシドＧD3は、ガングリオシドＧM3の非
還元末端にさらにシアル酸がα２−８結合した構造を有
しており、分子全体としてはシアル酸を２分子含んでい
る。
【０００３】ガングリオシドＧM3については、多様な生
理機能が知られており、例えば、ケラチノサイトの増殖
阻害作用や血管形成抑制作用、白血球の分化作用などが
報告されている。また、ガングリオシドＧM3は、インフ
ルエンザやニューカッスル病ウイルスのレセプターであ
ることも知られている。
理機能が知られており、例えば、ケラチノサイトの増殖
阻害作用や血管形成抑制作用、白血球の分化作用などが
報告されている。また、ガングリオシドＧM3は、インフ
ルエンザやニューカッスル病ウイルスのレセプターであ
ることも知られている。
【０００４】ガングリオシドＧD3からガングリオシドＧ
M3を製造する方法としては、シアリダーゼで加水分解す
る方法や酸で加水分解する方法が知られている〔特開平
5-279379号公報〕。しかしながら、シアリダーゼで加水
分解する方法は、共存するタンパク質などによって阻害
を受けたり、共存する遊離のシアル酸や結合性のシアル
酸などによって基質阻害が起こり易い状態となってお
り、用いるシアリダーゼも高価であることなどから、必
ずしも工業的に有利な方法であるとはいい難い。また、
酸で加水分解する方法は、変換に要するコストは小さい
が、タンパク質の沈澱が生成し易いので、例えば、牛乳
や乳製品などタンパク質を含有する割合が大きい原材料
に、この方法を適用することは困難性が大きいといえ
る。さらに、酸で加水分解した場合、溶液の粘度が上昇
し易いという問題もある。
M3を製造する方法としては、シアリダーゼで加水分解す
る方法や酸で加水分解する方法が知られている〔特開平
5-279379号公報〕。しかしながら、シアリダーゼで加水
分解する方法は、共存するタンパク質などによって阻害
を受けたり、共存する遊離のシアル酸や結合性のシアル
酸などによって基質阻害が起こり易い状態となってお
り、用いるシアリダーゼも高価であることなどから、必
ずしも工業的に有利な方法であるとはいい難い。また、
酸で加水分解する方法は、変換に要するコストは小さい
が、タンパク質の沈澱が生成し易いので、例えば、牛乳
や乳製品などタンパク質を含有する割合が大きい原材料
に、この方法を適用することは困難性が大きいといえ
る。さらに、酸で加水分解した場合、溶液の粘度が上昇
し易いという問題もある。
【０００５】なお、一般にアルカリではタンパク質の沈
澱は生成せず、粘度の上昇もないことが知られている
が、糖の結合はアルカリで切断されることなく安定で、
アルカリにより脱シアル酸反応を行うことは困難であっ
た。
澱は生成せず、粘度の上昇もないことが知られている
が、糖の結合はアルカリで切断されることなく安定で、
アルカリにより脱シアル酸反応を行うことは困難であっ
た。
【０００６】
【発明の解決しようとする課題】本発明者らは、ガング
リオシドＧD3からガングリオシドＧM3を製造する方法に
ついて、種々、研究を進めていたところ、アルカリでの
特定条件下でガングリオシドＧD3を処理することで、ガ
ングリオシドＧD3のシアル酸部分の非還元末端に結合す
るシアル酸１分子のみを脱シアル化してガングリオシド
ＧD3をガングリオシドＧM3に変換できることを見出し、
本発明を完成するに至った。したがって、本発明は、タ
ンパク質などの沈澱が生成しないアルカリ条件下で、ガ
ングリオシドＧD3をガングリオシドＧM3に変換させてガ
ングリオシドＧM3を製造する方法を提供することを課題
とする。
リオシドＧD3からガングリオシドＧM3を製造する方法に
ついて、種々、研究を進めていたところ、アルカリでの
特定条件下でガングリオシドＧD3を処理することで、ガ
ングリオシドＧD3のシアル酸部分の非還元末端に結合す
るシアル酸１分子のみを脱シアル化してガングリオシド
ＧD3をガングリオシドＧM3に変換できることを見出し、
本発明を完成するに至った。したがって、本発明は、タ
ンパク質などの沈澱が生成しないアルカリ条件下で、ガ
ングリオシドＧD3をガングリオシドＧM3に変換させてガ
ングリオシドＧM3を製造する方法を提供することを課題
とする。
【０００７】
【課題を解決するための手段】本発明の製造法の特徴
は、アルカリの特定条件下でガングリオシドＧD3をガン
グリオシドＧM3に変換させることにある。つまり、本発
明の製造法では、反応pH及び反応温度の設定が非常に重
要となる。反応pHが高ければ高い程、また、反応温度が
高ければ高い程、ガングリオシドＧM3の生成速度は大き
くなるが、ガングリオシドＧM3の分解速度も大きくな
る。したがって、ガングリオシドＧM3を高収率で製造す
るためには、反応pHを８〜11の範囲に調整し、また、反
応温度を30℃〜 140℃の範囲に調整することが好まし
い。そして、この反応条件に応じた反応時間を適宜、設
定すればよい。
は、アルカリの特定条件下でガングリオシドＧD3をガン
グリオシドＧM3に変換させることにある。つまり、本発
明の製造法では、反応pH及び反応温度の設定が非常に重
要となる。反応pHが高ければ高い程、また、反応温度が
高ければ高い程、ガングリオシドＧM3の生成速度は大き
くなるが、ガングリオシドＧM3の分解速度も大きくな
る。したがって、ガングリオシドＧM3を高収率で製造す
るためには、反応pHを８〜11の範囲に調整し、また、反
応温度を30℃〜 140℃の範囲に調整することが好まし
い。そして、この反応条件に応じた反応時間を適宜、設
定すればよい。
【０００８】本発明の製造法では、原料としてガングリ
オシドＧD3を用いる。この原料としては、高度に精製さ
れたガングリオシドＧD3を用いることもできるし、ホエ
ータンパク質濃縮物(WPC) やバターミルクなどガングリ
オシドＧD3を比較的多量に含む素材、または全乳や脱脂
乳などのタンパク質を多量に含有するがガングリオシド
ＧD3を余り多量には含まない素材を用いることもでき
る。また、ガングリオシドＧD3を含む素材をエタノール
などの有機溶媒で抽出する方法〔特開平2-207090号公
報〕で調製したものを用いることもできる。そして、生
成したガングリオシドＧM3は、常法に従って分離、精製
し、試薬などとして用いることもできるし、ガングリオ
シドＧM3を含有する組成物の状態で、医薬品、化粧品、
飲食品及び飼料などの素材として用いることもできる。
オシドＧD3を用いる。この原料としては、高度に精製さ
れたガングリオシドＧD3を用いることもできるし、ホエ
ータンパク質濃縮物(WPC) やバターミルクなどガングリ
オシドＧD3を比較的多量に含む素材、または全乳や脱脂
乳などのタンパク質を多量に含有するがガングリオシド
ＧD3を余り多量には含まない素材を用いることもでき
る。また、ガングリオシドＧD3を含む素材をエタノール
などの有機溶媒で抽出する方法〔特開平2-207090号公
報〕で調製したものを用いることもできる。そして、生
成したガングリオシドＧM3は、常法に従って分離、精製
し、試薬などとして用いることもできるし、ガングリオ
シドＧM3を含有する組成物の状態で、医薬品、化粧品、
飲食品及び飼料などの素材として用いることもできる。
【０００９】このように、本発明の製造法によると、ガ
ングリオシドＧD3から比較的安価にかつ簡便にガングリ
オシドＧM3を製造することができるので、本発明の方法
は、工業的なガングリオシドＧM3の製造法として有用で
ある。
ングリオシドＧD3から比較的安価にかつ簡便にガングリ
オシドＧM3を製造することができるので、本発明の方法
は、工業的なガングリオシドＧM3の製造法として有用で
ある。
【００１０】次に、実施例を示して本発明を具体的に説
明する。
明する。
【実施例１】１リットル当たり 130mgのガングリオシド
ＧD3を含有する10％ホエータンパク質濃縮物(WPC) 水溶
液に5N水酸化ナトリウムを加えてpHを 9.7に調整し、85
℃にて60分間反応を行った。この際、反応液中に沈澱は
生成せず、粘度の上昇もなかった。反応終了後、反応液
に2N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒（クロロホル
ム：メタノール＝２：１）で抽出した後、薄層クロマト
グラフィーを行った。なお、薄層クロマトグラフィー
は、No.13749（メルク社製）を用い、溶媒（クロロホル
ム：メタノール：水＝60：35：８）で展開し、レゾルシ
ノール発色を行った。その結果は、図１に示した通りで
あり、標準品である牛脳由来ガングリオシドＧM3と同様
のRf値を示すガングリオシドＧM3が生成していることが
判った。また、デンシトメトリーによると、この反応液
中には、１リットル当たり42mgのガングリオシドＧM3が
含まれていることを確認した。
ＧD3を含有する10％ホエータンパク質濃縮物(WPC) 水溶
液に5N水酸化ナトリウムを加えてpHを 9.7に調整し、85
℃にて60分間反応を行った。この際、反応液中に沈澱は
生成せず、粘度の上昇もなかった。反応終了後、反応液
に2N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒（クロロホル
ム：メタノール＝２：１）で抽出した後、薄層クロマト
グラフィーを行った。なお、薄層クロマトグラフィー
は、No.13749（メルク社製）を用い、溶媒（クロロホル
ム：メタノール：水＝60：35：８）で展開し、レゾルシ
ノール発色を行った。その結果は、図１に示した通りで
あり、標準品である牛脳由来ガングリオシドＧM3と同様
のRf値を示すガングリオシドＧM3が生成していることが
判った。また、デンシトメトリーによると、この反応液
中には、１リットル当たり42mgのガングリオシドＧM3が
含まれていることを確認した。
【００１１】
【実施例２】バターミルク粉100gに80％エタノール２リ
ットルを加え、室温で８時間撹拌した後、濾過によって
沈澱物を除去し、さらに水を加えて低温で減圧蒸留を繰
り返してエタノールを除去し、最終的に２リットルの水
溶液としたものを原料として用いた。なお、この水溶液
中には、１リットル当たり2.6gのガングリオシドＧD3と
0.16gのガングリオシドＧM3が含まれていた。
ットルを加え、室温で８時間撹拌した後、濾過によって
沈澱物を除去し、さらに水を加えて低温で減圧蒸留を繰
り返してエタノールを除去し、最終的に２リットルの水
溶液としたものを原料として用いた。なお、この水溶液
中には、１リットル当たり2.6gのガングリオシドＧD3と
0.16gのガングリオシドＧM3が含まれていた。
【００１２】この水溶液に2N水酸化カリウムを加えてpH
を８に調整し、95℃にて60分間反応を行った。反応終了
後、反応液に2N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒
（クロロホルム：メタノール＝２：１）で抽出した後、
実施例１と同様の薄層クロマトグラフィーを行った。そ
の結果、この反応液中には、１リットル当たり 0.72gの
ガングリオシドＧM3が含まれていることを確認した。
を８に調整し、95℃にて60分間反応を行った。反応終了
後、反応液に2N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒
（クロロホルム：メタノール＝２：１）で抽出した後、
実施例１と同様の薄層クロマトグラフィーを行った。そ
の結果、この反応液中には、１リットル当たり 0.72gの
ガングリオシドＧM3が含まれていることを確認した。
【００１３】このガングリオシドＧM3に相当する画分を
溶媒（クロロホルム：メタノール＝２：１）で抽出し、
減圧乾固して得られた白色粉末を、DEAE-Sephadex A-25
(ファルマシア社製）によるイオン交換クロマトグラフ
ィーに供し、さらに、イアトロビーズ 6RS 8060(ヤトロ
ン社製）によるシリカゲルクロマトグラフィーに供して
反応生成物を回収した。凍結乾燥後、得られた白色粉末
0.68gをＮＭＲで分析したところ、図２に示した通りの
結果を得た。この結果は標準品と一致した。
溶媒（クロロホルム：メタノール＝２：１）で抽出し、
減圧乾固して得られた白色粉末を、DEAE-Sephadex A-25
(ファルマシア社製）によるイオン交換クロマトグラフ
ィーに供し、さらに、イアトロビーズ 6RS 8060(ヤトロ
ン社製）によるシリカゲルクロマトグラフィーに供して
反応生成物を回収した。凍結乾燥後、得られた白色粉末
0.68gをＮＭＲで分析したところ、図２に示した通りの
結果を得た。この結果は標準品と一致した。
【００１４】
【実施例３】１リットル当たり 3.8mgのガングリオシド
ＧD3と 0.1mgのガングリオシドＧM3を含有する脱脂乳５
リットルに1N水酸化ナトリウムを加えてpHを 8.7に調整
し、90℃にて60分間反応を行った。反応終了後、反応液
に0.5N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒（クロロホ
ルム：メタノール＝２：１）で抽出した後、実施例１と
同様の薄層クロマトグラフィーを行った。その結果、こ
の反応液中には、１リットル当たり 1.1mgのガングリオ
シドＧM3が含まれていることを確認した。
ＧD3と 0.1mgのガングリオシドＧM3を含有する脱脂乳５
リットルに1N水酸化ナトリウムを加えてpHを 8.7に調整
し、90℃にて60分間反応を行った。反応終了後、反応液
に0.5N塩酸を加えて中和し、脂質画分を溶媒（クロロホ
ルム：メタノール＝２：１）で抽出した後、実施例１と
同様の薄層クロマトグラフィーを行った。その結果、こ
の反応液中には、１リットル当たり 1.1mgのガングリオ
シドＧM3が含まれていることを確認した。
【００１５】
【発明の効果】本発明の製造法によると、ガングリオシ
ドＧD3から比較的安価にかつ簡便にガングリオシドＧM3
を製造することができる。特に、タンパク質を比較的多
量に含む乳や乳製品を原料としてガングリオシドＧM3を
製造することができるので、本発明の方法は工業的なガ
ングリオシドＧM3の製造法として有用である。そして、
本発明の製造法によって製造されたガングリオシドＧM3
は、感染防御能などの生理機能を有するので、医薬品、
化粧品、飲食品及び飼料などの素材として有用である。
ドＧD3から比較的安価にかつ簡便にガングリオシドＧM3
を製造することができる。特に、タンパク質を比較的多
量に含む乳や乳製品を原料としてガングリオシドＧM3を
製造することができるので、本発明の方法は工業的なガ
ングリオシドＧM3の製造法として有用である。そして、
本発明の製造法によって製造されたガングリオシドＧM3
は、感染防御能などの生理機能を有するので、医薬品、
化粧品、飲食品及び飼料などの素材として有用である。
【図１】は、実施例１における反応生成物の薄層クロマ
トグラフィーの結果である。
トグラフィーの結果である。
【図２】は、実施例２における反応生成物のＮＭＲスペ
クトルである。
クトルである。
Claims (2)
- 【請求項１】 アルカリ条件下で加熱処理を行ってガン
グリオシドＧD3をガングリオシドＧM3に変換することを
特徴とするガングリオシドＧM3の製造法。 - 【請求項２】 反応pH８〜11及び反応温度30℃〜 140℃
の範囲で加熱処理を行う請求項１記載の製造法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26103594A JP3615798B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | ガングリオシドの製造法 |
| US08/534,941 US5831079A (en) | 1994-09-30 | 1995-09-28 | Method of preparing ganglioside |
| NZ280131A NZ280131A (en) | 1994-09-30 | 1995-09-29 | Preparing ganglioside gm3 |
| EP95115469A EP0713879B1 (en) | 1994-09-30 | 1995-09-29 | A method of preparing ganglioside |
| AU32981/95A AU692299B2 (en) | 1994-09-30 | 1995-09-29 | A method of preparing ganglioside |
| DK95115469T DK0713879T3 (da) | 1994-09-30 | 1995-09-29 | Fremgangsmåde til fremstilling af gangliosid |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26103594A JP3615798B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | ガングリオシドの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0899986A true JPH0899986A (ja) | 1996-04-16 |
| JP3615798B2 JP3615798B2 (ja) | 2005-02-02 |
Family
ID=17356154
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26103594A Expired - Fee Related JP3615798B2 (ja) | 1994-09-30 | 1994-09-30 | ガングリオシドの製造法 |
Country Status (6)
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| EP (1) | EP0713879B1 (ja) |
| JP (1) | JP3615798B2 (ja) |
| AU (1) | AU692299B2 (ja) |
| DK (1) | DK0713879T3 (ja) |
| NZ (1) | NZ280131A (ja) |
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| US6177118B1 (en) | 1998-11-06 | 2001-01-23 | New Zealand Milk Products (North America) Inc. | Methods for producing cheese and cheese products |
| JP4965063B2 (ja) * | 2004-05-07 | 2012-07-04 | 雪印メグミルク株式会社 | 口腔内細菌叢改善剤、抗菌剤及び生育促進剤。 |
| US20080003329A1 (en) * | 2006-06-30 | 2008-01-03 | Ricardo Rueda | Enriched infant formulas |
| BR112012004689A2 (pt) | 2009-09-01 | 2019-09-24 | Lz Therapeutics Inc | métodos para extração e purificação de gangliosídeos. |
| US9556467B2 (en) * | 2012-01-20 | 2017-01-31 | Garnet Bio Therapeutics, Inc. | Methods of ganglioside production |
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| JPH0653764B2 (ja) * | 1985-07-31 | 1994-07-20 | 三井東圧化学株式会社 | モノシアロガングリオシドの製造法 |
| JP2678653B2 (ja) * | 1989-02-07 | 1997-11-17 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドの抽出および濃縮方法 |
| JPH0436294A (ja) * | 1990-06-01 | 1992-02-06 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 牛乳由来の新規なガングリオシド及びその製造法 |
| JP3100012B2 (ja) * | 1991-10-25 | 2000-10-16 | 雪印乳業株式会社 | 新規なノイラミニダーゼ、その製造法及びそれを使用するシアル酸結合化合物の製造法 |
| JP3042738B2 (ja) * | 1992-03-31 | 2000-05-22 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドｇｍ３組成物及びその製造法 |
| JP3845121B2 (ja) * | 1994-09-30 | 2006-11-15 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシドの製造法 |
-
1994
- 1994-09-30 JP JP26103594A patent/JP3615798B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1995
- 1995-09-28 US US08/534,941 patent/US5831079A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-09-29 DK DK95115469T patent/DK0713879T3/da active
- 1995-09-29 EP EP95115469A patent/EP0713879B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-09-29 NZ NZ280131A patent/NZ280131A/en unknown
- 1995-09-29 AU AU32981/95A patent/AU692299B2/en not_active Ceased
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU692299B2 (en) | 1998-06-04 |
| NZ280131A (en) | 1997-05-26 |
| AU3298195A (en) | 1996-04-26 |
| JP3615798B2 (ja) | 2005-02-02 |
| EP0713879A1 (en) | 1996-05-29 |
| DK0713879T3 (da) | 1999-08-16 |
| US5831079A (en) | 1998-11-03 |
| EP0713879B1 (en) | 1998-12-02 |
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