JPH09110717A

JPH09110717A - ループス腎炎治療剤

Info

Publication number: JPH09110717A
Application number: JP7297668A
Authority: JP
Inventors: Megumi Nishikawa; 恵西川; Toshisato Igarashi; 理慧五十嵐
Original assignee: SAMU KENKYUSHO KK
Current assignee: SAMU KENKYUSHO KK
Priority date: 1995-10-21
Filing date: 1995-10-21
Publication date: 1997-04-28

Abstract

(57)【要約】【課題】生体内で多様な役割を演じ得るＰＣ−ＳＯＤの
新たな医薬用途の確立及びこの医薬用途対象物の提供。【解決手段】レシチンが化学的に結合（共有結合）した
スーパーオキシドジスムターゼ、特に化学的架橋を介し
てレシチンと結合したスーパーオキシドジスムターゼを
有効成分とするループス腎炎治療剤を提供すること。こ
のループス腎炎治療剤は、何も化学的に結合していない
スーパーオキシドジスムターゼを有効成分とした製剤よ
りも、ループス腎炎に対する有効性・持続性共に優れて
いる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、レシチン化スーパ
ーオキシドジスムターゼの医薬用途に関する技術分野に
属する。さらに詳細には、レシチン化スーパーオキシド
ジスムターゼを有効成分とするループス腎炎治療剤に関
わる技術分野に属する。

【０００２】

【従来の技術】スーパーオキシドジスムターゼ（以下、
ＳＯＤと略記する場合もある）は、動物、植物、微生物
等の生体内に広く分布し、活性酸素群（以下、ＲＯＳと
略記することもある）の中でも、反応性に富む活性酸素
であるスーパーオキシドアニオンラジカル（以下、単に
Ｏ₂ ^-と略記することもある）を分解する酵素として知
られている。薬物的面では、抗リウマチ剤の使用後や、
心筋梗塞や臓器移植の際に用いられる抗血栓剤の使用後
に生じるラジカルの除去等や、ラジカルが起因となる種
々の炎症の治療にこのＳＯＤが適用されることが期待さ
れている。また、最近ではこのＳＯＤの胃粘膜障害への
適用も検討され、その治療効果が期待されている（過酸
化脂質研究、１６巻、７４頁（1992年))。一般に、静脈
内投与した場合ＳＯＤは細胞親和性が低く、かつその血
中半減期は僅か４〜６分とされており、ＳＯＤは速やか
に尿中に排泄される。このＳＯＤの血中半減期を延長さ
せるために、ＳＯＤをフィコール，ポリエチレングリコ
ール，ラットアルブミン，デキストラン等で修飾して巨
大分子化させることが試みられてきた。

【０００３】しかしながら、フィコール又はポリエチレ
ングリコールで修飾されたＳＯＤは、ＳＯＤ本来の酵素
活性が大幅に低下し、かつ依然として細胞親和性が低い
ことが報告されている。また、ラットアルブミンで修飾
されたＳＯＤには、ヒトの体内における抗原性が認めら
れることが報告されている。さらに、デキストランによ
り修飾されたＳＯＤは、ＳＯＤが本来有する抗炎症作用
が増強される点で優れているが、これもヒトの体内にお
ける抗原性が認められることが報告されている。近年、
ＳＯＤのような生物活性蛋白をレシチン（フォスファチ
ジルコリン：以下、ＰＣと略記することもある）で化学
修飾した物質が報告されている。このＰＣ結合修飾生物
活性蛋白は、細胞親和性が著しく上昇し、また生物体内
分布も従来の非修飾生物活性蛋白とは著しく異なること
が報告されている。また、生物活性蛋白の薬理活性の強
化、副作用の低下、吸収促進も期待できるといわれてい
る。

【０００４】また、ＰＣ化ＳＯＤ（以下、ＰＣ−ＳＯＤ
と略記することもある）が火傷による炎症の治癒を促進
する効果を示すことも報告されている（特開平３−１６
３１００号公報、特開平３−１７０４３８号公報、米国
特許第５,１０９,１１８号明細書）。更に、抗原性等の
副作用もなく、抗炎症剤として有用であるともいわれて
いる。特開平６−５４６８１号公報には、Forssman抗血
清による呼吸抵抗に対する、ＰＣ−ＳＯＤの効果につい
て記載されている。また、ＰＣ−ＳＯＤの潰瘍性胃腸障
害に対する効果も報告されている。さらに、筋萎縮性側
索硬化症等の運動ニューロン疾患に対するＰＣ−ＳＯＤ
の効果についても報告されている。

【０００５】

【発明が解決すべき課題】このように、生体内で多様な
役割を演じ得るＰＣ−ＳＯＤの医薬用途へのさらなる応
用が産業界で期待されている。そこで、本発明が解決す
べき課題は、上記ＰＣ−ＳＯＤの新たな医薬用途の確立
及びこの医薬用途対象物を提供することにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者は、上記の課題
に対応すべく種々の医薬用途について、ＰＣ−ＳＯＤの
適用可能性について模索した。その結果、「ループス腎
炎」に対してＰＣ−ＳＯＤをその治療剤の有効成分とし
て想定するに至り本発明を完成した。

【０００７】ループス腎炎とは、全身性エリテマトーデ
スに合併する糸球体腎炎で、免疫複合体(immune comple
x ；以下、ＩＣともいう）や活性化補体が関与する腎炎
として知られている。世界保健機構（ＷＨＯ）分類では
ループス腎炎を、１）正常糸球体におけるループス腎
炎，２）メサンギウム増殖性変化を伴うループス腎炎，
３）巣状分節状糸球体腎炎，４）びまん性増殖性糸球体
腎炎，５）びまん性膜性糸球体腎炎，６）末期硬化性糸
球体腎炎の６型に分類し、これらに巣状壊死，ヘマトキ
シリン体，半月体形成，ワイヤー・ループ病変，微小血
栓等の活動性病変の有無を併記してループス腎炎の形態
を個別的に特定している。

【０００８】このループス腎炎の発症には、生体内のＲ
ＯＳが深く関わっていることが、invitroの解析によ
り、近年明らかにされている。すなわち、ＩＣ，活性
化補体が白血球に結合するとＲＯＳ産生が起こる；Ｒ
ＯＳは、培養メサンギウム(mesangium) 細胞を障害す
る；Ｔ細胞，マクロファージ又は白血球自己産生サイ
トカインがＲＯＳ産生を増加させる；メサンギウム細
胞、内皮細胞等糸球体構成細胞からもＲＯＳが産生され
る；ＲＯＳ産生細胞の細胞内伝達系はプロテインキナ
ーゼＣ（proteinkinase Ｃ）を介し、細胞内カルシウム
イオンを必要とする；ＲＯＳが存在すると過酸化脂質
（過酸化ホスファチジルコリン；ＰＣＯＯＨ）が増加す
る；ＲＯＳをＤＮＡに接触させるとそのＤＮＡの断裂
が起こる；等のことが明らかにされている。

【０００９】このことから、ＲＯＳを効果的に消去する
手段を講ずることで、ループス腎炎の症状を改善し得る
ことが想定される。そこで、ＲＯＳを消去する作用を有
することが知られている、上述したＳＯＤをループス腎
炎患者に適用することでこの腎炎の症状を改善すること
も企図し得る。しかしながら、現実にはＳＯＤは上述し
たように、その血中半減期が短く、またその細胞親和性
も低いためにループス腎炎の諸症状に対して十分な薬理
効果を期待するには懐疑的な面があり、さらに本発明者
がこの点について検討したところ、残念ながら、ＳＯＤ
をループス腎炎患者に適用しても効果的な治療薬にはな
り得ないことが判明した（実際の薬理効果については後
述の実施例を参照のこと。）。

【００１０】そこで、本発明者は、ループス腎炎の症状
改善に効果的なＳＯＤの形態について鋭意検討を重ね、
様々な改変されたＳＯＤについてループス腎炎の症状改
善効果について検討した。その結果、上記ＰＣ−ＳＯＤ
は、ループス腎炎の症状改善効果に極めて優れており、
このＰＣ−ＳＯＤは、ループス腎炎治療剤の有効成分と
して極めて有用であることを見出し本発明を完成した。
すなわち本発明者は、以下に掲げる発明を各請求項にお
いて提供する。

【００１１】請求項１において、レシチンが化学的に結
合したスーパーオキシドジスムターゼを有効成分として
含有するループス腎炎治療剤を提供する。

【００１２】請求項２において、化学的架橋を介してレ
シチンと結合したスーパーオキシドジスムターゼを有効
成分として含有するループス腎炎治療剤を提供する。

【００１３】請求項３において、化学的架橋を介してレ
シチンと結合したスーパーオキシドジスムターゼが下記
一般式（Ｉ）で表される前記請求項２記載のループス腎
炎治療剤を提供する。ＳＯＤ−〔Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂)_n−Ｃ（Ｏ）−Ｘ〕_m （Ｉ）（式中、ＳＯＤはスーパーオキシドジスムターゼを表
し、Ｘはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシ
チンの，その２位の水酸基の水素原子を除いた残基を表
し、ｍはＳＯＤ１分子への平均結合数であり、１以上の
整数を表し、ｎは２以上の整数を表す）

【００１４】請求項４において、一般式（Ｉ）におい
て、ＳＯＤがヒト由来のＳＯＤである前記請求項３記載
のループス腎炎治療剤を提供する。

【００１５】請求項５において、一般式（Ｉ）におい
て、ＳＯＤが、そのアミノ酸配列１１１位のアミノ酸
が、Ｓ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインであ
る、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムター
ゼである前記請求項３記載のループス腎炎治療剤を提供
する。

【００１６】請求項６において、一般式（Ｉ）におい
て、ｎが２以上１０以下のいずれかの整数である前記請
求項３乃至請求項５のいずれかの請求項記載のループス
腎炎治療剤を提供する。

【００１７】請求項７において、一般式（Ｉ）におい
て、ｎが３である前記請求項６記載のループス腎炎治療
剤を提供する。

【００１８】請求項８において、一般式（Ｉ）におい
て、ｍが１以上１６以下の数である前記請求項３乃至請
求項７のいずれかの請求項記載のループス腎炎治療剤を
提供する。

【００１９】請求項９において、一般式（Ｉ）におい
て、ｍが４である前記請求項８記載のループス腎炎治療
剤を提供する。

【００２０】

【発明の実施の形態】以下に、本発明の実施の形態につ
いて説明する。 <１> 本発明ループス腎炎治療剤は、レシチンが化学的
に結合したスーパーオキシドジスムターゼ、特に化学的
架橋を介してレシチンと結合したスーパーオキシドジス
ムターゼを有効成分とするループス腎炎治療剤である。

【００２１】本明細書において「レシチン」は、フォス
ファチジルコリンを意味する通常のレシチンの他に、そ
のグリセロールの１位又は２位に結合している脂肪酸１
分子がとれた「リゾレシチン」も含む。

【００２２】さらに、本明細書における「スーパーオキ
シドジスムターゼ（ＳＯＤ）」は、生体内の活性酸素Ｏ
₂ ^-の分解というその本来の機能を発揮し得る限りにお
いて、その起源等は特に限定されるものではなく、各種
の動植物又は微生物が有するＳＯＤを広く用いることが
可能である。しかしながら、本発明は、医薬品用途とし
ての発明であり、生体内での抗原性を可能な限り減じる
ことが好ましいことを考慮すれば、本発明ループス腎炎
治療剤を投与する動物種に応じて、適宜適切なＳＯＤを
選択することが好ましい。例えば、最も本発明ループス
腎炎治療剤が必要とされると考えられるヒトを対象とす
る場合には、ヒト体内における抗原性を可能な限り減ず
るべく、ヒト由来のＳＯＤを本発明において用いること
が好ましい。そしてその中でも、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎ
ＳＯＤ（活性中心に銅と亜鉛を含むヒト由来のＳＯＤ；
以下、ヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤと略記することもある）
が、細胞内における発現量が多く、また遺伝子工学的手
法による生産技術が本発明完成時点において確立してお
り、現時点で大量に調製することが可能であり、特に好
ましい。

【００２３】このヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤには、ヒト組織
から製造される天然のヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ；遺伝子工
学的手法により製造されるヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ；天然
のヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤと実質上同一のアミノ酸配列を
有する組換えヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ等があり、いずれの
ヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤをも本発明において用いるレシチ
ンが化学的に結合したスーパーオキシドジスムターゼ
（ＰＣ−ＳＯＤ）の素材とすることができる。

【００２４】参考のために、この天然のヒトＣｕ／Ｚｎ
ＳＯＤのタンパク質の一次構造を第１図に示す（配列番
号１）。なお、実際のヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤは、この第
１図に示した一次構造を有するタンパク質の二量体（ダ
イマー）である。

【００２５】このタンパク質におけるアミノ酸配列に示
すごとく、天然のヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤの１１１位のア
ミノ酸はシステインであるが、蛋白工学的手法、例えば
部位特異的変異法により、この１１１位をセリンに変換
したヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ（特開昭62-130684 号公報）
や、化学的にこの１１１のシステインを修飾したヒトＣ
ｕ／ＺｎＳＯＤ（特開平6-199895号公報）も報告されて
おり、これらのヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤを素材としたＰＣ
−ＳＯＤのいずれをも本発明ループス腎炎治療剤の有効
成分として用いることができる。そして、これらのヒト
Ｃｕ／ＺｎＳＯＤのうちでも、電荷的及び分子量的に均
一でかつＳＯＤ活性が安定している、１１１位のシステ
インを化学的に修飾した、例えばこのシステインをＳ−
（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとしたヒトＣ
ｕ／ＺｎＳＯＤを前記ＰＣ−ＳＯＤの素材として用いる
ことが好ましい。

【００２６】なお、本明細書においては、このようにヒ
トＣｕ／ＺｎＳＯＤを部位特異的変異法等により一部ア
ミノ酸を変換したものや、ヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤの一部
のアミノ酸を化学的に修飾して得られるものも含めて、
単にヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤという。

【００２７】また、本明細書において「化学的に結合し
た」とは、共有結合していることを意味するものであ
り、共有結合している限りにおいて、後述する化学的架
橋の存在の有無は問わない。すなわち、ＰＣがＳＯＤに
直接共有結合していてもよく、ＰＣが化学的架橋を介し
てＳＯＤに共有結合していてもよい。

【００２８】本発明において用いるＰＣ−ＳＯＤは、レ
シチンが化学的に結合したＳＯＤである限りにおいて製
造方法等も特に限定されないが、通常、前記レシチンの
残基に化学的架橋剤を予め結合させたレシチン誘導体
を、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）に、その
化学的架橋剤により形成される化学的架橋を介して、１
個以上結合させて得ることができる。

【００２９】なお、本発明ループス腎炎治療剤が含有す
る、レシチンが化学的に結合したＳＯＤは特に限定され
るものではないが、化学的架橋を介してレシチンと結合
したＳＯＤを用いることが特に好ましい。

【００３０】また、ここでＳＯＤに化学的に結合するレ
シチンは特に限定されるものではないが、前記のリゾレ
シチンが化学的に結合したＰＣ−ＳＯＤを用いることが
好ましい。

【００３１】この本発明において好適なＰＣ−ＳＯＤ
は、次式（Ｉ）で表される。ＳＯＤ−〔Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂)_n−Ｃ（Ｏ）−Ｘ〕_m （Ｉ）（式中、ＳＯＤはスーパーオキシドジスムターゼを表
し、Ｘはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシ
チンの，その２位の水酸基の水素原子を除いた残基を表
し、ｍはＳＯＤ１分子への平均結合数であり，１以上の
整数を表し、ｎは２以上の整数を表す）

【００３２】ここで、Ｘで表される「グリセロールの２
位に水酸基を有するリゾレシチンの，その２位の水酸基
の水素原子を除いた残基」は、次式（II）で表される。

【００３３】 -O-CH(CH₂OR)[CH₂OP(O)(O^-)(OCH₂CH₂N⁺(CH₃)₃)] （II）（式中、Ｒは脂肪酸残基（アシル基）である）

【００３４】特に、炭素数１０〜２８の飽和又は不飽和
の脂肪酸残基が上記Ｒとして好ましく、より好ましくは
ミリストイル基，パルミトイル基，ステアロイル基，イ
コサノイル基，ドコサノイル基，その他炭素数が１４〜
２２の飽和脂肪酸残基であり、特に好ましいのは炭素数
１６の飽和脂肪酸残基であるパルミトイル基である。

【００３５】また、前記式（Ｉ）中、残基 −Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂)_n−Ｃ（Ｏ）− は、化学的架橋の残基を表す。この化学的架橋の残基
は、式

【００３６】ＨＯ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂)_n−Ｃ（Ｏ）−ＯＨで表される直鎖状ジカルボン酸，このジカルボン酸の無
水物，このジカルボン酸のエステル，このジカルボン酸
のハロゲン化物又はその他のこのジカルボン酸の反応性
誘導体等の化学的架橋剤分子の両端における水酸基（前
記ジカルボン酸の反応性誘導体の場合は、このジカルボ
ン酸の両端における水酸基に対応する部分）を除いた残
基である。

【００３７】この残基はＳＯＤとレシチンとを架橋して
化学的に結合（共有結合）させ得るので、本明細書中で
は、これを総称して「化学的架橋」という。前記式
（Ｉ）中の化学的架橋は、その一端において、前記リゾ
レシチン残基（II）とエステル結合により結合してい
る。

【００３８】また、この化学的架橋の他端は、ＳＯＤの
アミノ基とアミド結合等により直接結合していると考え
られる。なお、この化学的架橋において、基−（ＣＨ₂)
_n−は、直鎖状アルカンの両端の炭素原子から１個ずつ
水素原子を除いてできる２価基、すなわちアルキレン基
である。ｎは２以上の整数であり、好ましくはｎは２〜
１０の整数であり、特に好ましくは３である。

【００３９】また、前記式（Ｉ）中のｍは、上記の化学
的架橋を介してＳＯＤ１分子に結合したレシチンの平均
個数を表している。このｍは１以上の整数であり、ｍが
１〜１６のものが好ましく、４のものが特に好ましい。

【００４０】上記レシチン誘導体のＳＯＤへの結合は、
具体的には例えば特開平６−５４６８１号公報に記載さ
れた方法等に基づいて行うことが可能であり、これによ
りＰＣ−ＳＯＤを製造することができる。このＰＣ−Ｓ
ＯＤの製造過程の詳細は後述する製造例に記載する。

【００４１】なお、本発明に用いるＰＣ−ＳＯＤは、薬
学上許容される塩であってもよい。具体的に用いること
ができる塩は、用いるＰＣ−ＳＯＤの等電点によって異
なる。例えばＰＣ−ＳＯＤ分子の等電点が酸性の場合
は、アルカリとの薬学上許容される塩を使用することが
できる。逆に、ＰＣ−ＳＯＤ分子の等電点がアルカリ性
の場合は、酸との薬学上許容される塩を使用することが
できる。例えば、そのアミノ酸配列の１１１位をセリン
に変換したヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤの等電点は酸性であ
り、かつこれをＰＣ化して得られるＰＣ−ＳＯＤの等電
点も酸性である。故に、この１１１位変換ヒトＣｕ／Ｚ
ｎＳＯＤに関しては、アルカリとの塩、例えばアルカリ
金属塩，アルカリ土類金属塩，アンモニウム塩等のう
ち、薬学上許容される塩を本発明において使用すること
ができる。

【００４２】このようにして製造したＰＣ−ＳＯＤを、
後述する剤形において有効成分として配合して所望のル
ープス腎炎治療剤とすることができる。本発明ループス
腎炎治療剤は、ヒトを含む哺乳動物のループス腎炎に広
く適用することができる。

【００４３】例えば、ヒトのループス腎炎であれば、前
記のＷＨＯ分類による全てのループス腎炎、具体的に
は、正常糸球体におけるループス腎炎，メサンギウム増
殖性変化を伴うループス腎炎，巣状分節状糸球体腎炎，
びまん性増殖性糸球体腎炎，びまん性膜性糸球体腎炎又
は末期硬化性糸球体腎炎等に広く本発明ループス腎炎治
療剤を適用することができる。

【００４４】そして、これらのループス腎炎の中でも、
ループス腎炎の活動性の指標の一つである腎組織におけ
る半月体の形成は好中球が放出する活性酸素が引き金と
なっているという観点からすれば、びまん性糸球体腎炎
（半月体形成性腎炎又は急速進行性腎炎）が本発明ルー
プス腎炎治療剤の投与が特に有効なループス腎炎の型で
ある。

【００４５】なお、上記した疾患名は例示であり、かか
る例示疾患に本発明ループス腎炎治療剤を適用可能なル
ープス腎炎の種類が限定されるものではない。さらに、
本発明ループス腎炎治療剤は、文字通りループス腎炎の
治療を目的として使用できることは勿論であるが、純然
とした治療目的のみならず、ループス腎炎の予防、維持
（悪化防止）、軽減（症状の改善）等を目的として投与
することもできる。

【００４６】<２> 本発明においては、対象となる疾患
の性質や進行状況に応じて、任意の剤形を本発明ループ
ス腎炎治療剤の剤形として適宜選択することができる。
すなわち、本発明ループス腎炎治療剤は、注射（筋肉
内，皮下，皮内，静脈内注射）、経口、吸入等、投与方
法によって経口又は非経口的に選択して投与することが
できる。これらの薬剤は、これらの投与方法に応じて適
宜製剤化することができる。

【００４７】選択し得る剤形も特に限定されず、例えば
注射剤（溶液，懸濁液，乳濁液，用時溶解用固形剤
等）、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、液剤、リポ化
剤、ゲル剤、外用散剤、スプレー剤、吸入剤、坐剤等を
広く選択することができる。また、これらの製剤調製に
あたり、賦形剤、結合剤、滑沢剤、その他着色剤、崩壊
剤等の通常医薬品の製剤上用いられる成分を配合するこ
とができる。

【００４８】本発明ループス腎炎治療剤中の有効成分で
あるＰＣ−ＳＯＤの配合量及び本発明ループス腎炎治療
剤の投与量は、その製剤の投与方法、投与形態、使用目
的、患者の具体的症状、患者の体重等に応じて個別的に
決定されるべき事項であり、特に限定はされないが、Ｐ
Ｃ−ＳＯＤの臨床投与量として１日当り概ね１００Ｕ／
Kg〜１００００Ｕ／Kg程度である〔本明細書中で１Ｕ
（ユニット）とは、ｐＨ７．８，３０℃下でチトクロー
ムｃ法（キサンチン−キサンチンオキシダーゼ−チトク
ロームｃ系；J. Biol. Chem., Vol.244, No.22, 6049-6
055(1969) ）により測定したチトクロームｃの還元速度
を５０％阻害するＰＣ−ＳＯＤの酵素量を表す〕。ま
た、上記製剤の投与間隔は隔日でも毎日でもよく、特に
限定されない。投与は１日１回程度でも可能であり、１
日２〜４回に分けて投与することもできる。

【００４９】

【実施例】以下に、本発明の実施例を製造例、試験例及
び製剤例として具体的に説明する。しかしながら、これ
らにより本発明の技術的範囲が限定されるべきものでは
ない。

【００５０】〔製造例〕（１）ヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ誘導体〔ＳＯＤの１１１位
のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システ
インであるヒト由来のスーパーオキシドジスムターゼ〕
の製造：このヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤ誘導体は、特開平６
−１９９８９５号公報に記載された方法で製造した。

【００５１】すなわち、ヒトのＳＯＤ遺伝子を導入する
ことにより作製された、公知の大腸菌５４５πＨＲ（ｐ
ＨＴ３５１）を培養し、得られた培養菌体を破砕し、ヒ
トＣｕ／ＺｎＳＯＤの粗抽出液を得た。この粗抽出液に
硫安沈澱、Ｑ−セファロースＦＦ（ファルマシア社製）
カラム、硫安沈澱を順に施して精製し、さらに０．２μ
m フィルターで濾過した濾液を凍結乾燥して無色の固体
（組換えヒトアポＳＯＤ）を得た。この組換えヒトアポ
ＳＯＤを１０mMトリエタノールアミン緩衝液（ｐＨ７．
０）に溶解し、ビス（２−ヒドロキシエチル）ジスルフ
ィドを加え、ｐＨ７．０に再調整した後、４℃で２４時
間攪拌した。これにＮａＣｌ、２Ｍ酢酸緩衝液（ｐＨ
５．０）及び０．１ＭＣｕＣｌ₂水溶液を加え、４℃
で１３時間攪拌した。この攪拌後、ｐＨを７．０に調整
し、硫安沈澱（４℃・１００％飽和）で生じた沈澱を集
めた。この沈澱を１０mMトリエタノールアミン緩衝液
（ｐＨ７．０）で透析して脱塩した。この脱塩画分をＱ
−セファロースＦＦカラムに通し、ＮａＣｌ濃度を５m
M，１０mM，２０mM，５０mMの順に段階的に上昇させて
展開し、ＳＯＤ画分を集めた。次いで、このＳＯＤ画分
を硫安沈澱（４℃・１００％飽和）し、生じた沈澱を集
めた。この沈澱を水溶液として、０．５ＭＮａＣｌ水
溶液、次いで精製水で透析し、これらの透析終了後凍結
乾燥してヒトＳＯＤ誘導体を得た（以下、単にＳＯＤと
記載することもある）。このヒトＳＯＤ誘導体の１１１
位のアミノ酸はＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）シス
テインとなった。

【００５２】（２）ＰＣ−ＳＯＤの製造：ＰＣ−ＳＯＤ
は、特開平６−５４６８１号公報に記載された方法で製
造した。具体的には以下の通りである。

【００５３】（ａ）２−（４−ヒドロキシカルボニルブ
チロイル）リゾレシチンの活性エステル体の合成２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロイル）リゾレ
シチンの合成グリセロールの２位が水酸基であるリゾレシチンのクロ
ロホルム−ピリジン（８０ml／２０ml）懸濁液に、ＤＭ
ＡＰ（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）及び無水グル
タル酸を加え、６０℃で１５時間攪拌した。その後、反
応液を減圧濃縮し、残渣にクロロホルム：メタノール：
水＝４：５：１の溶媒を加えて溶解し、同液で平衡化し
たイオン交換カラム（Dowex 50W-X8, ダウケミカル社
製）に通した。ＴＬＣにより目的化合物を分画し、溶媒
を減圧濃縮した後、残渣をＯＤＳ（オクタデシルシラ
ン）を充填したカラムで精製して、標記の化合物を得
た。

【００５４】２−（４−ヒドロキシカルボニルブチロ
イル）リゾレシチンの活性エステル体の合成上記で得られたカルボン酸をジクロロメタンに溶解さ
せて０℃で冷却し、これにＮ−ヒドロキシスクシンイミ
ド及びテトラゾールを順に加え、次にＤＣＣ（１，３−
ジシクロヘキシルカルボジイミド）のジクロロメタン溶
液をゆっくり滴下し、室温で１５時間攪拌した。攪拌
後、不溶物をセライトで濾過し、活性エステル体のジク
ロロメタン溶液を得た。

【００５５】（ｂ）ＳＯＤ１分子あたりレシチン誘導体
が平均４個結合したＰＣ−ＳＯＤの合成５０mMホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）に溶解させた上記の
工程に従って製造したＳＯＤと、このＳＯＤの全アミノ
基に対して０．８倍モル量の２−（４−ヒドロキシカル
ボニルブチロイル）リゾレシチンの活性エステル体とを
次の方法により反応させた。

【００５６】上記活性エステル体溶液のジクロロメタン
を留去し、ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）に
溶解させた。これを５０mMホウ酸緩衝液（ｐＨ８．５）
に添加し、不溶物を濾過後、同一緩衝液に溶解して０℃
に冷却したＤＭＦを５０％加えた上記ＳＯＤ溶液に滴下
した。これを０℃で１５時間攪拌後、反応液を濾過し、
セファクリルＳ−３００（ファルマシア社製）を担体と
したゲル濾過カラムに付し、５０mMホウ酸緩衝液（ｐＨ
８．５）で溶出し、ＰＣ−ＳＯＤ溶出分画を集め、イオ
ン交換クロマトグラフィーにより精製した。次いでこれ
を限外濾過により濃縮し、タンパク質濃度をローリー法
（Lowry,O.h.等、J. Biol. Chem., 193巻, 265 頁(1951
年))、ＳＯＤの残存アミノ基をＴＮＢＳ法（トリニト
ロベンゼンスルホン酸塩、Goodwin,J.F 等、Clin. Che
m.,16巻,24 頁(1970 年))で分析することにより、ＳＯ
Ｄ１分子あたりのレシチン誘導体の結合数を求めたとこ
ろ、平均４．０個であった。このＰＣ−ＳＯＤの性状
は、青緑色乃至緑色の透明な水溶液であり、ｐＨは７〜
８であった。また、分子量をＳＤＳ−ポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動法により調べたところ、ＰＣ−ＳＯＤサ
ブユニットのモノマー（前述した通り、ＰＣ−ＳＯＤは
サブユニットのホモダイマーである）あたり約１８００
０であった。

【００５７】〔試験例〕上記製造例により製造したＰＣ
−ＳＯＤ（濃度３０mg／ml；比活性３．０７×１０³Ｕ
／蛋白mg）について毒性試験及び薬効薬理試験を行っ
た。ＰＣ−ＳＯＤは５％マンニトール水溶液に終濃度５
mg／mlになるように溶解した溶液（以下、ＰＣ−ＳＯＤ
溶液と略記することもある）を使用した。このＰＣ−Ｓ
ＯＤ溶液の性状は、青緑色乃至緑色の透明な水溶液であ
り、ｐＨは６〜８であった。また、生理食塩液に対する
浸透圧比は約１であった。

【００５８】（１）急性毒性試験ラットを用いた急性毒性試験ＰＣ−ＳＯＤ溶液を、ＳＤ系ラット雌雄各５匹に尾静脈
から１００mg／Kgを投与した。投与後１４日間、一般状
態及び生死についての観察と体重の測定とを行った。そ
して、１５日目に剖検して、主要臓器の肉眼的観察を行
った。その結果、死亡したラットは観察されず、一般状
態、体重、剖検所見のいずれにおいても変化は認められ
なかったことから、静脈内投与によるＰＣ−ＳＯＤの致
死量は１００mg／Kg以上と推定された。

【００５９】サルを用いた急性毒性試験ＰＣ−ＳＯＤ溶液を雌のカニクイザル２頭に四肢の静脈
から１００mg／Kgを投与した。投与後１４日間、一般状
態及び生死についての観察と体重の測定とを行った。そ
の結果、死亡したカニクイザルは観察されず、一般状
態、体重、剖検所見のいずれにおいても変化は認められ
なかったことから、静脈内投与によるＰＣ−ＳＯＤの致
死量は１００mg／Kg以上と推定された。

【００６０】（２）薬効薬理試験（ａ）ループス腎炎モデル（（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マ
ウス）ヒトループス腎炎の数％は、５０％以上の糸球体が半月
体の形成を伴って、急速に腎炎が進行して腎不全に陥る
ＲＰＧＮ（rapidly progressive glomerulo nephritis
）像を呈する。この半月体形成は急速な糸球体硬化を
意味するものであり、腎炎の進行速度をはかる指標とさ
れている。また、病変が浸潤した部分の単球やマクロフ
ァージからは、活性酸素群（ＲＯＳ）を増加させるサイ
トカインが放出される。

【００６１】本薬効薬理試験に使用する、自然発症ルー
プス腎炎モデルの（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マウスは、生
後４週間で腎炎を発症し、急性進行性糸球体腎炎（ＲＰ
ＧＮ）像を呈して腎機能が廃絶し、約４０週で死亡する
モデルである。このループス腎炎モデルマウスを用い
て、以下の薬効薬理試験を行った。なお、このループス
腎炎モデル（（ＮＺＢ×ＮＺＷ）Ｆ１マウス）は、日本
チャールズリバー社から入手した。

【００６２】（ｂ）ＰＣ−ＳＯＤによるループス腎炎症
状の改善効果の検討上記のループス腎炎モデルを用いて、ＰＣ−ＳＯＤを投
与した群（以下、ＰＣ−ＳＯＤ投与群ともいう）、ＰＣ
化していないＳＯＤ（フリーＳＯＤ）を投与した群（以
下、フリーＳＯＤ投与群ともいう）並びにＰＣ−ＳＯＤ
及びフリーＳＯＤのいずれも投与しない群（以下、非投
与群という）で薬効薬理試験を行った。

【００６３】なお、各群とも、ループス腎炎モデルマウ
ス６匹を用いた。生後４週間目の上記ループス腎炎モデ
ルマウスの尾静脈より、非投与群では５％マンニトール
水溶液２００μl を隔日投与した。また、フリーＳＯＤ
投与群では、フリーＳＯＤを１０００Ｕ／Kg体重となる
ように２００μl を隔日投与した。そして、ＰＣ−ＳＯ
Ｄ投与群では、ＰＣ−ＳＯＤを１０００Ｕ／Kg体重とな
るように２００μl を隔日投与した。

【００６４】ＰＡＳ染色した腎臓切片標本を用いたル
ープス腎炎に対するＰＣ−ＳＯＤ投与の効果の検討上記投与を継続して、試験対象となっている各ループス
腎炎モデルマウスが生後２３週目を経過する時点で、各
群のマウスから腎臓を摘出し、腎臓切片標本を作成し
て、この切片標本に対してＰＡＳ染色を行った。その染
色像を第２図〜第４図に示す。

【００６５】第２図は、非投与群におけるＰＡＳ染色像
を示す生物の形態写真（拡大倍率４０倍）である。第２
図においては糸球体全体において、糸球体の全周に及ぶ
ようなボーマン嚢との癒着（半月体形成）が見られた。
また、硝子化した糸球体も観察された。さらに、尿細管
の萎縮も見られ、間質の病変も顕著であった。

【００６６】第３図は、フリーＳＯＤ投与群におけるＰ
ＡＳ染色像を示す生物の形態写真（拡大倍率４０倍）で
あり、第４図は、ＰＣ−ＳＯＤ投与群におけるＰＡＳ染
色像を示す生物の形態写真（拡大倍率４０倍）である。
第３図においては糸球体内の細胞が増殖し、その結果糸
球体自体が大きくなっている様子が観察された。しかし
半月体形成した糸球体数及び硝子化した糸球体数は、第
２図に比較して減少していた。

【００６７】第４図においては、第２図に顕著に見られ
る半月体形成、糸球体の硝子化、尿細管萎縮及び間質病
変、さらに第３図に見られる糸球体内の細胞増殖はほと
んど観察されず、ほぼ正常な腎臓組織像が観察された。

【００６８】なお、非投与群（第２図）において顕著に
認められた半月体形成には、好中球（多形核白血球）の
血管への接着に伴う、好中球接着部位における基底膜の
断裂（focal disruptive lesion：ＦＤＬ）・血管破壊
により放出されるフィブリン、さらにはＦＤＬに伴って
起こるボーマン嚢上皮や上皮細胞の増殖等が関与するこ
とが知られている。このようにして形成される半月体
が、前述のようにループス腎炎の活動性に関与してい
る。

【００６９】次に、上記切片標本において、糸球体数及
びその中で半月体を形成した糸球体数をそれぞれカウン
トし、糸球体数全体に対する半月体を形成した糸球体数
の割合を算出して各群間で比較した（第５図）。なお、
カウント数は各群６匹のマウスの切片標本を用い、それ
ぞれの切片標本につき、１００個の糸球体について検討
した。

【００７０】なお、第５図におけるバーは標準誤差を示
す。この第５図に示す結果において、ＰＣ−ＳＯＤ投与
群では非投与群及びフリーＳＯＤ投与群と比較して半月
体形成の割合が顕著に低下していることが示された（ｐ
＜０．００１）。なお、フリーＳＯＤ投与群も、非投与
群と比較すると半月体形成の割合が有意に低下していた
（ｐ＜０．００１）。

【００７１】以上のことから、ＰＣ−ＳＯＤがループス
腎炎の活動性の指標となる半月体の形成を顕著に抑制す
ることが示され、ＰＣ−ＳＯＤの投与により、ループス
腎炎の進行を抑制することが示された。

【００７２】セリウム染色標本による組織中の活性酸
素に対するＰＣ−ＳＯＤの作用の検討ループス腎炎モデルの組織中の活性酸素の発生状況を可
視化するために、上記各群のマウス（生後２３週経過
時）から腎臓を摘出し、腎臓切片標本を作成し、この切
片標本に既知の方法（Briggs et al., J. Cell Biol.6
7, 566(1975))を基本としたセリウム染色を施した。な
お、この染色法では、塩化セリウム（ＣｅＣｌ₃）を取
り込ませた細胞内にＲＯＳ（過酸化水素（ＯＨ^-））が
存在すると、過酸化セリウム（Ｃｅ（ＯＨ）₃ＯＯＨ）
が形成され、電子顕微鏡で電子密度の高い顆粒状の沈澱
(hidensity granular deposition) として検出される。

【００７３】このセリウム染色像を第６図〜第９図に示
す。非投与群におけるセリウム染色像を第６図及び第７
図に示す。なお第６図（拡大倍率４０００倍）は糸球体
内部及びその周辺の像であり、第７図（拡大倍率４００
０倍）は尿細管及びその周辺の像である。

【００７４】第６図においては像全体に渡って、電子密
度の高い顆粒状の沈澱（ＲＯＳの存在部位を示す）が観
察され、このことから多量のＲＯＳの存在が示された。
特に糸球体のメサンギウム領域及び基底膜に多くのＲＯ
Ｓが確認された。

【００７５】第７図においては、近位尿細管の結合面、
尿細管基底膜及び毛細血管に多量の電子密度の高い顆粒
（同上）が観察された。また、近位尿細管周囲の毛細血
管中の白血球がＲＯＳを放出し、ローリング(rolling)
している像が観察された。

【００７６】このように非投与群では多量のＲＯＳが観
察され、白血球が毛細血管壁に接着し、ＲＯＳを放出し
ながらローリングするという典型的な炎症の様相を呈し
ていた。なお、白血球や単球にもＲＯＳが発現している
ために、細胞内に黒色の像が観察された。

【００７７】次に、ＰＣ−ＳＯＤ投与群におけるセリウ
ム染色像を第８図及び第９図に示す。なお第８図（拡大
倍率２５００倍）は糸球体内部及びその周辺の像であ
り、第９図（拡大倍率６０００倍）は尿細管及びその周
辺の像である。

【００７８】第８図においては、毛細血管中に白血球
（好中球）や単球の浸潤が見られたが、電子密度の高い
顆粒（同上）を放出している像は観察されなかった。第
９図においては、第７図に比較して基底膜における電子
密度の高い顆粒（同上）の存在は軽度であった。これら
の結果から、ＰＣ−ＳＯＤはＲＯＳを抑制することが示
され、ＰＣ−ＳＯＤがループス腎炎の進行を抑制するこ
とが示された。

【００７９】誘導型ＮＯ産生酵素(inducible nitric
oxide synthase）を指標としたループス腎炎に対するＰ
Ｃ−ＳＯＤ投与の効果の検討ＮＯ（nitoric oxide)は、外部髄質(outer medulla) に
存在し、糸球体血流量を調節し、ナトリウムと水のバラ
ンスを調節することが知られている。そして、かかるＮ
Ｏを産生するための誘導型ＮＯ産生酵素(inducible nit
ric oxide synthase；以下、ｉＮＯＳともいう）は、炎
症性サイトカインにより誘導されるが、壊死に陥った細
胞では産生されないことが知られている。

【００８０】本試験ではこのｉＮＯＳを指標として、Ｐ
Ｃ−ＳＯＤ投与によるループス腎炎に対する効果を検討
した。すなわち、上記各群のマウス（生後２３週経過
時）から腎臓を摘出し、腎臓切片標本を作製し、この腎
臓切片を抗ｉＮＯＳ抗体による免疫染色を行って、ｉＮ
ＯＳの有無を検討した。この免疫染色像を第１０図に示
す。

【００８１】第１０図において、左側の写真は非投与
群、中央の写真はフリーＳＯＤ投与群、右側の写真はＰ
Ｃ−ＳＯＤ投与群の染色像をそれぞれ示している。それ
ぞれの写真において、視野全体に渡って見られる小さな
球状の構造は細胞核である。非投与群及びフリーＳＯＤ
投与群では、抗ｉＮＯＳ抗体による染色はほとんど見ら
れなかった。これはループス腎炎において細胞が壊死に
陥り、本来産生すべきｉＮＯＳの産生能を消失してしま
ったことを示唆している。これに対し、ＰＣ−ＳＯＤ投
与群では、抗ｉＮＯＳ抗体による染色が、糸球体メサン
ギウムと外部髄質に見られた。このことはｉＮＯＳが糸
球体メサンギウムと外部髄質で発現していることを示し
ている。ＰＣ−ＳＯＤ投与群でｉＮＯＳが発現したこと
は、ＮＯが産生されていることを示唆するものであり、
糸球体血流量の調節やナトリウムと水とのバランスの調
節が正常に機能していることを示唆するものである。こ
の結果から、ＰＣ−ＳＯＤの投与により腎臓の生理的機
能が改善されることが示唆される。またＰＣ−ＳＯＤ
が、腎臓の生理的なメカニズム（ｉＮＯＳ発現）に対し
て、その発現を抑制する等の影響を及ぼさないことを示
唆している。

【００８２】マンガンＳＯＤ（ＭｎＳＯＤ）を指標と
したループス腎炎に対するＰＣ−ＳＯＤ投与の効果の検
討ＭｎＳＯＤは、真核生物の細胞質中のミトコンドリアに
存在している。本試験では、上記各群のマウス（生後２
３週経過時）から腎臓を摘出し、腎臓切片標本を作製
し、この腎臓切片を抗ＭｎＳＯＤラット抗体による免疫
染色を行って、ＭｎＳＯＤの有無を検討した。この免疫
染色像を第１１図に示す。

【００８３】第１１図において、左側の写真は非投与
群、中央の写真はフリーＳＯＤ投与群、右側の写真はＰ
Ｃ−ＳＯＤ投与群の染色像をそれぞれ示している。それ
ぞれの写真において、視野全体に渡って見られる小さな
球状の構造は細胞核である。非投与群及びフリーＳＯＤ
投与群では、抗ＭｎＳＯＤ抗体による染色はほとんど見
られなかった。これはループス腎炎において細胞が壊死
に陥り、本来産生すべきＭｎＳＯＤの産生能を消失して
しまったことを示唆している。これに対し、ＰＣ−ＳＯ
Ｄ投与群では、抗ＭｎＳＯＤ抗体による強い染色が糸球
体で見られた。このことはＭｎＳＯＤが糸球体で強く発
現していることを示している。ＰＣ−ＳＯＤ投与群でＭ
ｎＳＯＤが強く発現したことは、ＲＯＳの生理的な除去
機構が正常に機能していることを示しており、ＭｎＳＯ
Ｄ及びＰＣ−ＳＯＤにより過剰のＲＯＳが除去され、腎
臓の生理的機能が改善したことを示唆している。またＰ
Ｃ−ＳＯＤが、ＲＯＳの生理的な除去機構（ＭｎＳＯＤ
発現）に対して、発現を抑制する等の影響を及ぼさない
ことも示唆している。

【００８４】炎症性サイトカインのｍＲＮＡを指標と
したループス腎炎に関する薬効薬理試験遺伝子のサイトカインの調節領域κＢに結合するタンパ
ク質ＮＦ−κＢ(nuclear factor-κB)は転写調節因子の
１つであり、炎症等における一部の急性期タンパク質の
発現増加に関与していることが知られている。ＮＦ−κ
Ｂは、非Ｂ細胞の細胞質中では、Ｉ−κＢ(inhibitor−
κＢ) と呼ばれる抑制タンパク質と複合体（ＮＦ−κＢ
−Ｉ−κＢ複合体）を形成しており、不活性型のＮＦ−
κＢとして存在している。このＮＦ−κＢ−Ｉ−κＢ複
合体は、ＲＯＳにより、ＮＦ−κＢとＩ−κＢとに解離
し、ＮＦ−κＢは細胞核内へと移行して活性型のＮＦ−
κＢとなり、炎症性サイトカインの遺伝子の転写を活性
化するものと考えられている。また、上記解離後はＩ−
κＢも細胞核中へと移行し、その結果Ｉ−κＢが細胞核
内に偏在することになり、細胞質中のＩ−κＢ量が相対
的に減少する。この場合、減少した細胞質内のＩ−κＢ
量を確保するために、上記炎症性サイトカインのｍＲＮ
Ａの他に、Ｉ−κＢのｍＲＮＡも発現することになる。

【００８５】このように炎症が起こると、それに伴い、
細胞質中における炎症性サイトカインのｍＲＮＡ及びＩ
−κＢのｍＲＮＡが強い正の相関で発現する。一方、ル
ープス腎炎も典型的な一種の炎症であるから、ループス
腎炎の発症や症状の進行に伴い炎症性サイトカインのｍ
ＲＮＡ及びＩ−κＢのｍＲＮＡの発現量も増加する。

【００８６】よって、炎症性サイトカインの発現の有無
又は多少を的確に表す、例えばこの炎症性サイトカイン
のｍＲＮＡ及びＩ−κＢのｍＲＮＡの有無又は多少は、
ループス腎炎の活動性の指標として優れている。そこ
で、ＰＣ−ＳＯＤが、ＮＦ−κＢにより誘導される炎症
性サイトカイン等のｍＲＮＡの発現及びＩκ−ＢのｍＲ
ＮＡの発現を抑制するか否かを検討した。

【００８７】すなわち、生後２３週目に、各群のマウス
から腎臓を摘出し、これらの腎臓からＮＦ−κＢにより
誘導される炎症性サイトカイン〔インターロイキン−６
（ＩＬ−６），インターロイキン−２（ＩＬ−２），腫
瘍壊死因子α（ＴＮＦα），インターロイキン−８（Ｉ
Ｌ−８），顆粒球マクロファージ刺激因子（ＧＭ−ＣＳ
Ｆ）〕、補体Ｃ₃成分及びフィブロネクチンＢのｍＲＮ
Ａ並びにＩ−κＢのｍＲＮＡを抽出し、それぞれをＲＴ
−ＰＣＲ法（Frohman M.A. et al.,Proc.Natl.Acad.Sc
i.U.S.A.,Vol.85,pp8998-9002(1988)）により検出し
た。

【００８８】なお、コントロールとして、β−アクチン
のｍＲＮＡについても検討した。また、非投与群におい
ては、生後５週目と８週目においても同様にｍＲＮＡを
抽出し、ＲＴ−ＰＣＲ法により、検出した。その結果を
第１表に示す。この表中の＋は、それぞれのｍＲＮＡが
検出されたことを示す。

【００８９】

【表１】（生後２３週を経過したマウスは、非投与群においては
２匹、フリー投与群及びＰＣ−ＳＯＤ投与群においては
それぞれ３匹用いた。）

【００９０】この結果から、非投与群では、生後２３週
目において、炎症性サイトカインである、ＩＬ−６，Ｉ
Ｌ−２，ＴＮＦα，ＩＬ−８及びＧＭ−ＣＳＦのｍＲＮ
Ａが検出された（生後８週目においても、ＩＬ−６，Ｔ
ＮＦα及びＩＬ−８のｍＲＮＡが検出された）。フリー
ＳＯＤ投与群では、ＩＬ−６のｍＲＮＡのみが検出され
た。しかし、ＰＣ−ＳＯＤ投与群では、炎症性サイトカ
インのｍＲＮＡは検出されなかった。

【００９１】この結果は、ＰＣ−ＳＯＤがループス腎炎
に伴う炎症性サイトカインのｍＲＮＡの発現を抑制する
ことを示しており、ＰＣ−ＳＯＤがループス腎炎の進行
を抑制し得ることを示すものである。

【００９２】また、Ｉ−κＢのｍＲＮＡは、非投与群に
おいてのみ検出され、ＰＣ−ＳＯＤ投与群及びフリーＳ
ＯＤ投与群においては見られなかった。このことから、
ＰＣ−ＳＯＤがκＢ領域を有する炎症性サイトカインの
遺伝子調節領域の活性化を抑制していることが示され
た。これもまた、ＰＣ−ＳＯＤがループス腎炎の進行を
抑制し得ることを支持するものである。

【００９３】また、補体成分Ｃ₃のｍＲＮＡ及びフィブ
ロネクチンＢのｍＲＮＡは、非投与群でのみ検出されて
おり、フリー投与群及びＰＣ−ＳＯＤ投与群では検出さ
れなかった。前述のように、ループス腎炎は全身性エリ
テマトーデスに合併する糸球体腎炎で、発症の際には免
疫複合体（抗原抗体複合体）が形成され、これにより補
体系が活性化される。よって、補体成分Ｃ₃のｍＲＮＡ
が検出されることはこの補体系が活性化されていること
を示している。そして、フィブロネクチンＢは基底膜成
分の一つであり、ループス腎炎の発症に伴って形成され
る半月体の形成に大きく関与していることが知られてい
る成分である。よって、フィブロネクチンＢのｍＲＮＡ
が検出されることもループス腎炎の発症・進行を示す指
標となる。

【００９４】よって、前記の補体成分Ｃ₃のｍＲＮＡ及
びフィブロネクチンＢのｍＲＮＡの検出に関する結果
は、ＰＣ−ＳＯＤがループス腎炎に伴うこれらの成分の
ｍＲＮＡの発現を抑制することを示しており、ＰＣ−Ｓ
ＯＤがループス腎炎の進行を抑制し得ることを示すもの
である。

【００９５】〔製剤例〕（１）注射剤前記製造例において製造したＰＣ−ＳＯＤ（３０mg／m
l）を、終濃度５mg／mlになるように５％マンニトール
水溶液に溶解し、これを無菌濾過した後、２mlずつアン
プルに分注し密封して注射剤を製造した。

【００９６】（２）錠剤前記製造例において製造したＰＣ−ＳＯＤの凍結乾燥物
１００mg、乳糖６７０mg、バレイショデンプン１５０m
g、結晶セルロース６０mg及び軽質無水ケイ酸５０mgを
混合し、これにヒドロキシプロピルセルロース３０mgを
メタノールに溶解した溶液（ヒドロキシプロピルセルロ
ース１０重量％）を添加して練合造粒した。次にこれを
径０．８mmのスクリーンで押し出して顆粒状にし、乾燥
した後、ステアリン酸マグネシウム１５mgを添加して圧
縮成型し、２００mgの錠剤を製造した。

【００９７】（３）カプセル剤前記製造例において製造したＰＣ−ＳＯＤの凍結乾燥物
１００mg、バレイショデンプン１５０mg、軽質無水ケイ
酸５０mg、ステアリン酸マグネシウム１０mg及び乳糖７
６５mgを均一に混合し、この混合物を２００mgを分取し
て硬カプセルに充填して、カプセル剤を製造した。

【００９８】

【発明の効果】本発明により、ＰＣ−ＳＯＤに関して医
薬用途発明、すなわちループス腎炎治療剤が提供され
る。

【００９９】

【配列表】配列番号：1 配列の長さ:153 配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：タンパク質配列 Ala Thr Lys Ala Val Cys Val Leu Lys Gly Asp Gly Pro Val Gln Gly 1 5 10 15 Ile Ile Asn Phe Glu Gln Lys Glu Ser Asn Gly Pro Val Lys Val Trp 20 25 30 Gly Ser Ile Lys Gly Leu Thr Glu Gly Leu His Gly Phe His Val His 35 40 45 Glu Phe Gly Asp Asn Thr Ala Gly Cys Thr Ser Ala Gly Pro His Phe 50 55 60 Asn Pro Leu Ser Arg Lys His Gly Gly Pro Lys Asp Glu Glu Arg His 65 70 75 80 Val Gly Asp Leu Gly Asn Val Thr Ala Asp Lys Asp Gly Val Ala Asp 85 90 95 Val Ser Ile Glu Asp Ser Val Ile Ser Leu Ser Gly Asp His Cys Ile 100 105 110 Ile Gly Arg Thr Leu Val Val His Glu Lys Ala Asp Asp Leu Gly Lys 115 120 125 Gly Gly Asn Glu Glu Ser Thr Lys Thr Gly Asn Ala Gly Ser Arg Leu 130 135 140 Ala Cys Gly Val Ile Gly Ile Ala Gln 145 150

【図面の簡単な説明】

【図１】ヒトＣｕ／ＺｎＳＯＤのタンパクの一次構造を
示した図面。

【図２】非投与群におけるＰＡＳ染色像を示す生物の形
態写真。

【図３】フリーＳＯＤ投与群におけるＰＡＳ染色像を示
す生物の形態写真。

【図４】ＰＣ−ＳＯＤ投与群におけるＰＡＳ染色像を示
す生物の形態写真。

【図５】糸球体数全体に対する半月体を形成した糸球体
数の割合を算出して各群間で比較した図面。

【図６】非投与群における糸球体及びその周辺のセリウ
ム染色像を示す生物の形態写真。

【図７】非投与群における細尿管及びその周辺のセリウ
ム染色像を示す生物の形態写真。

【図８】ＰＣ−ＳＯＤ投与群における糸球体及びその周
辺のセリウム染色像を示す生物の形態写真。

【図９】ＰＣ−ＳＯＤ投与群における細尿管及びその周
辺のセリウム染色像を示す生物の形態写真。

【図１０】腎臓切片の抗ｉＮＯＳ抗体による免疫染色像
を示す生物の形態写真。

【図１１】腎臓切片の抗ＭｎＳＯＤラット抗体による免
疫染色像を示す生物の形態写真。

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】レシチンが化学的に結合したスーパーオキ
シドジスムターゼを有効成分として含有するループス腎
炎治療剤。
【請求項２】化学的架橋を介してレシチンと結合したス
ーパーオキシドジスムターゼを有効成分として含有する
ループス腎炎治療剤。
【請求項３】化学的架橋を介してレシチンと結合したス
ーパーオキシドジスムターゼが下記一般式（Ｉ）で表さ
れる請求項２記載のループス腎炎治療剤：ＳＯＤ−〔Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ₂)_n−Ｃ（Ｏ）−Ｘ〕_m （Ｉ）（式中、ＳＯＤはスーパーオキシドジスムターゼを表
し、Ｘはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシ
チンの，その２位の水酸基の水素原子を除いた残基を表
し、ｍはＳＯＤ１分子への平均結合数であり、１以上の
整数を表し、ｎは２以上の整数を表す）。
【請求項４】一般式（Ｉ）において、ＳＯＤがヒト由来
のＳＯＤである請求項３記載のループス腎炎治療剤。
【請求項５】一般式（Ｉ）において、ＳＯＤが、そのア
ミノ酸配列１１１位のアミノ酸が、Ｓ−（２−ヒドロキ
シエチルチオ）システインである、ヒト由来のＣｕ／Ｚ
ｎスーパーオキシドジスムターゼである請求項３記載の
ループス腎炎治療剤。
【請求項６】一般式（Ｉ）において、ｎが２以上１０以
下のいずれかの整数である請求項３乃至請求項５のいず
れかの請求項記載のループス腎炎治療剤。
【請求項７】一般式（Ｉ）において、ｎが３である請求
項６記載のループス腎炎治療剤。
【請求項８】一般式（Ｉ）において、ｍが１以上１６以
下の数である請求項３乃至請求項７のいずれかの請求項
記載のループス腎炎治療剤。
【請求項９】一般式（Ｉ）において、ｍが４である請求
項８記載のループス腎炎治療剤。