JPH09127082A - 液体クロマトグラフィー用カラムの製造方法 - Google Patents

液体クロマトグラフィー用カラムの製造方法

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JPH09127082A
JPH09127082A JP28596595A JP28596595A JPH09127082A JP H09127082 A JPH09127082 A JP H09127082A JP 28596595 A JP28596595 A JP 28596595A JP 28596595 A JP28596595 A JP 28596595A JP H09127082 A JPH09127082 A JP H09127082A
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JP
Japan
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filler
column
liquid chromatography
solution
filling
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JP28596595A
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English (en)
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Kazuo Sakamoto
和夫 坂本
Yasuhiko Mito
泰彦 三戸
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Sekisui Chemical Co Ltd
Original Assignee
Sekisui Chemical Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】 【課題】 カラムに陽イオン交換型液体クロマトグラフ
ィー用充填剤を充填後、短時間で所望の性能が得られ、
充填剤を分級し直し再充填する必要のない液体クロマト
グラフィー用カラムの製造方法を提供する。 【解決手段】 陽イオン交換型液体クロマトグラフィー
用充填剤を充填用溶液に分散し、50〜100℃で1〜
10時間加熱処理後、液体クロマトグラフィー用カラム
に充填することを特徴とする。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、液体クロマトグラ
フィー用カラムの製造方法に関する。
【0002】
【従来の技術】従来、陽イオン交換型液体クロマトグラ
フィー用カラムは、陽イオン交換型液体クロマトグラフ
ィー用充填剤を適度な粒径に分級後、溶離液などからな
る充填用溶液に分散させスラリー状態とした直後にカラ
ムに圧入充填して製造されていた。また、液送するポン
プの圧力の上限値を充填するカラムの長さに対応して経
時的にグラジエント状に上昇させ、均一に充填する方法
が提案されている(特開平2−78954号公報)。ま
た、陽イオン交換型液体クロマトグラフィー用充填剤
を、陰イオン型界面活性剤を1重量%以下の濃度で含有
し、且つ表面張力50ダイン/cm以下の充填用溶液に
分散させてカラムに充填する方法も提案されている(特
開平7−120449号公報)。
【0003】しかしながら、上記のようにして充填され
たカラムの性能は、不十分であることが多く、その場合
は、充填剤を分級し直し再充填していた。そして、所望
の性能が得られるまで、この作業を繰り返し、必要性能
が得られない場合は充填剤を処分していた。また、所望
の性能に近づけるためには、充填剤の平均粒径を小さく
分級することが多く、カラム圧力が高くなり、クロマト
グラフィー装置に負担がかかっていた。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、上記問題点
に鑑みてなされたものであり、その目的は、カラムに陽
イオン交換型液体クロマトグラフィー用充填剤を充填
後、短時間で所望の性能が得られ、充填剤を分級し直し
再充填する必要のない液体クロマトグラフィー用カラム
の製造方法を提供することにある。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明の液体クロマトグ
ラフィー用カラムの製造方法は、陽イオン交換型液体ク
ロマトグラフィー用充填剤を充填用溶液に分散し、50
〜100℃で1〜10時間加熱処理後、液体クロマトグ
ラフィー用カラムに充填する。
【0006】上記液体クロマトグラフィー用充填剤(以
下充填剤という)としては、陽イオン交換型のものであ
れば、特に限定されず、例えば、イオン交換基として表
面にカルボキシル基やスルホン基などを有するものが挙
げられる。また、充填剤の全体に上記交換基を有するも
のでもよく、適当な担体の表面に上記交換基が存在する
ように処理されたものでもよい。
【0007】充填剤の全体に上記交換基を有するものと
しては、例えば、スチレン、ジビニルベンゼンとイオン
交換基を有する単量体との架橋共重合体粒子;テトラメ
チロールメタントリアクリレート等の(メタ)アクリル
酸エステルと(メタ)アクリル酸の架橋共重合体粒子な
どが挙げられる(特開昭58−221164号公報)。
【0008】担体の表面に上記交換基が存在するように
処理されたものとしては、例えば、スチレン、ジビニル
ベンゼンの架橋共重合体粒子の表面にイオン交換基が導
入されたもの;疎水性架橋共重合体粒子の表面に(メ
タ)アクリル酸の(共)重合体の層が形成されたもの
(特開平2−309253号公報);シリカ粒子の表面
にイオン交換基が導入されたもの(特開昭63−755
58号公報)などが挙げられる。
【0009】上記充填剤は、カラム圧力の点から、分級
されることにより平均粒径および粒径分布が限定された
ものが使用される。
【0010】本発明で使用される充填用溶液は、その主
成分としては従来より使用されているものがいずれも使
用可能であり、例えば、液体クロマトグラフィー用カラ
ムが使用されるときの溶離液;該溶離液に近い組成の
液;水などの液体が挙げられる。
【0011】本発明においては、上記充填剤を上記充填
用溶液に分散し、50〜100℃で1〜10時間加熱処
理後、液体クロマトグラフィー用カラムに充填する。上
記処理温度は、低くなると所望の性能が得られなくな
り、高くなると充填剤が劣化し性能が低下する。上記処
理時間は、短くなると所望の性能が得られなくなり、長
くなると充填剤が劣化し性能が低下する。
【0012】上記充填用溶液における充填剤濃度は、低
くなると充填に時間がかかり、高くなると充填し難くな
るので、1〜30重量%が好ましく、5〜15重量%が
より好ましい。
【0013】上記充填剤をカラムに充填する方法として
は、従来より用いられている方法が採用され、例えば、
図1に模式的に示すように、出口部にフィルター(図示
せず)がセットされたカラム1にパッカー2を接続し、
パッカー2に充填剤が分散された充填用溶液3を充填し
た後、高圧充填ポンプ4によってリン酸緩衝液からなる
充填用溶液5をパッカー2に送液する。これによって、
パッカー2を通じてカラム1に充填剤を圧入する。
【0014】
【作用】本発明の製造方法では、充填剤を充填用溶液中
で加熱処理することにより充填剤の活性化度をコントロ
ールできるので、短時間で所望の性能が得られ再分級を
必要としない。
【0015】
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施例及び比較例
を挙げることにより、本発明を詳細に説明する。
【0016】(実施例1) (1)充填剤の調製 ジエチレングリコールジメタクリート300g及びベン
ゾイルパーオキサイド1gをイソアミルアルコール20
0gに溶解させた。これを4重量%ポリビニルアルコー
ル水溶液2.5リットルに添加して、攪拌しながら調粒
した後、窒素置換下で80℃に加熱し懸濁重合を行っ
た。80℃で8時間重合した後、生成物を熱水及びアセ
トンで順次洗浄し、乾燥して微小の疎水性架橋重合体粒
子を得た。この疎水性架橋重合体粒子200gをベンゾ
イルパーオキサイド0.5gが溶解しているアセトン1
リットルに浸漬してベンゾイルパーオキサイドを含浸さ
せた。次に、アセトンを20℃において減圧下で留去し
た。上記の含浸処理した疎水性架橋重合体粒子を1重量
%ポリビニルアルコール水溶液2.5リットルに懸濁さ
せ、攪拌しながらメタクリル酸50gを添加し、窒素置
換後80℃で2時間重合反応を行った。生成物を熱水及
びアセトンで順次洗浄した後、乾燥し、陽イオン交換型
液体クロマトグラフィー用充填剤を得た。上記充填剤を
乾式分級機にて、平均粒径7.5μm、粒径の標準偏差
1.3μmに分級した。
【0017】(2)液体クロマトグラフィー用カラムの
製造 リン酸緩衝液(NaH2 PO4 ・2H2 O 21.8g
とNa2 HPO4 ・12H2 O 8.2gを水に溶解さ
せて1リットルとしたもの)に、上記(1)で得られた
分級された陽イオン交換型液体クロマトグラフィー用充
填剤が10重量%となるように分散させた。上記の充填
剤が分散された充填用溶液を、80℃で2時間加熱処理
した後、6φ×75mmのステンレス製カラムに350
kg/cm2 で圧入して充填して陽イオン交換型液体ク
ロマトグラフィー用カラムを製造した。
【0018】(3)カラムの性能試験 上記(2)で得られた液体クロマトグラフィー用カラム
を使用して、京都第一科学社製、「Hi−AUTO A
1c」(分析装置)を用いて、ヒト血液のヘモグロビンの
分析を行い、ヘモグロビンA1cの濃度の定量を行なっ
た。その結果を表1に示した。なお、測定方法は次の通
りである。ヒト血液検体として、同一人(健常人)の血
液を採取後直ちにヘパリンを添加したものを用いた。血
液検体は、本装置付属の専用溶血液21L(ノニオン系
界面活性剤を含むリン酸緩衝液)によって、自動的に2
90倍に希釈・溶血される。溶離液は本装置付属の専用
試薬であるA液(pH5.9のリン酸緩衝液)、B液
(pH7.2のリン酸緩衝液)及びC液(pH5.9の
リン酸緩衝液)を使用した。
【0019】このようにして分析を行って得られたクロ
マトグラムを図2に示した。図2において、6はヘモグ
ロビンA1aおよびA1b、7は胎児性ヘモグロビンF、8
は不安定型ヘモグロビンA1c、9は安定型ヘモグロビン
1c、そして10は正常ヘモグロビンに起因するピーク
である。「Hi−AUTO A1c」においては、安定型
ヘモグロビンA1cの保持時間が130〜135秒のとき
に、ヒト血液検体中のヘモグロビンA1cの濃度が正確に
測定できるようにされている。なお、このヘモグロビン
1cの濃度は次式により算出される。 ヘモグロビンA1c(%)=(ピーク8と9の合計面積/
ピーク6〜10の合計面積)×100
【0020】(実施例2)実施例1の工程(2)におい
て、充填剤が分散された充填用溶液を80℃で2時間加
熱処理したことに代えて、80℃で6時間加熱処理した
ことの他は、実施例1と同様にして行って、ヒト血液検
体中のヘモグロビンA1cの濃度の定量を行い、結果を表
1に示した。
【0021】(実施例3)実施例1の工程(2)におい
て、充填剤が分散された充填用溶液を80℃で2時間加
熱処理したことに代えて、60℃で2時間加熱処理した
ことの他は、実施例1と同様にして行って、ヒト血液検
体中のヘモグロビンA1cの濃度の定量を行い、結果を表
1に示した。
【0022】(実施例4)実施例1の工程(2)におい
て、充填剤が分散された充填用溶液を80℃で2時間加
熱処理したことに代えて、60℃で6時間加熱処理した
ことの他は、実施例1と同様にして行って、ヒト血液検
体中のヘモグロビンA1cの濃度の定量を行い、結果を表
1に示した。
【0023】(比較例1)実施例1の工程(2)におい
て、充填剤が分散された充填用溶液を80℃で2時間加
熱処理したことに代えて、加熱処理をしなかったことの
他は、実施例1と同様にして行って、ヒト血液検体中の
ヘモグロビンA1cの濃度の定量を行い、結果を表1に示
した。
【0024】(比較例2)比較例1の工程(1)におい
て、充填剤を乾式分級機にて、平均粒径7.5μmに分
級したことに続けて、再度分級して平均粒径6.9μm
に分級したことの他は、比較例1と同様にして行って、
ヒト血液検体中のヘモグロビンA1cの濃度の定量を行
い、結果を表1に示した。
【0025】(比較例3)実施例1の工程(2)におい
て、充填剤が分散された充填用溶液を80℃で2時間加
熱処理したことに代えて、80℃で15時間加熱処理し
たことの他は、実施例1と同様にして行って、ヒト血液
検体中のヘモグロビンA1cの濃度の定量を行い、結果を
表1に示した。
【0026】
【表1】
【0027】なお、表1には、充填剤の平均粒径および
カラム圧力も示した。また、この測定におけるヘモグロ
ビンA1c濃度の基準値は7.60〜8.35%であり、
カラム圧力の基準値は45〜75kg/cm2 である。
【0028】
【発明の効果】本発明の液体クロマトグラフィー用カラ
ムの製造方法の構成は、上述の通りであり、充填剤の活
性化度をコントロールできるので、短時間で所望の性能
が得られ、充填剤を分級し直し再充填する必要がない。
短時間の加熱処理で済むため、製造工程が簡単であり、
製造工程に要する時間も短縮される。また、従来、再分
級し性能不十分で処分していた充填剤も使用可能となっ
た。
【図面の簡単な説明】
【図1】充填剤をカラムに充填する方法を示す説明図で
ある。
【図2】本発明により得られた液体クロマトグラフィー
カラムを使用して、ヒト血液中のヘモグロビンを分析し
たクロマトグラムである。
【符号の説明】
1 カラム 2 パッカー 3 液体クロマトグラフィー用充填剤が分散された充填
用溶液 4 高圧充填ポンプ 5 充填用溶液

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 陽イオン交換型液体クロマトグラフィー
    用充填剤を充填用溶液に分散し、50〜100℃で1〜
    10時間加熱処理後、液体クロマトグラフィー用カラム
    に充填することを特徴とする液体クロマトグラフィー用
    カラムの製造方法。
JP28596595A 1995-11-02 1995-11-02 液体クロマトグラフィー用カラムの製造方法 Pending JPH09127082A (ja)

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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2001349894A (ja) * 2000-06-06 2001-12-21 Sekisui Chem Co Ltd ヘモグロビン類の測定方法
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