JPH0422560B2 - - Google Patents

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JPH0422560B2
JPH0422560B2 JP58070730A JP7073083A JPH0422560B2 JP H0422560 B2 JPH0422560 B2 JP H0422560B2 JP 58070730 A JP58070730 A JP 58070730A JP 7073083 A JP7073083 A JP 7073083A JP H0422560 B2 JPH0422560 B2 JP H0422560B2
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glycerol
dihydroxyacetone
enzyme
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glyceraldehyde
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Description

【発明の詳細な説明】 本発明はグリセロールの測定法ならびにその測
定組成物に関する。さらに詳しくはグリセロール
デヒドロゲナーゼを用いたグリセロールの測定に
おいて、ジヒドロキシアセトンまたはＤ−グリセ
ルアルデヒドをリン酸化する酵素を用い、グリセ
ロールデヒドロゲナーゼが触媒する反応を促進す
ることを特徴とする測定法および測定組成物であ
る。本発明は特に生体液中のグリセロールまたは
ドリグリセライドの測定に有用である。生体液中
のグリセロールおよびトリグリセライドの測定
は、高脂血症の検査の一つとして臨床上極めて重
要な位置を占めている。特に高トリグリセライド
血症は動脈硬化、冠状機能不全、心筋梗塞などの
早期診断、治療の目安として用いいられるため、
上記の迅速かつ正確な測定方法が望まれている。
トリグリセライド測定の一方法であるリパーゼ
およびグリロールデヒドロゲナーゼを用いる方法
は次の反応式で示されるように、まずトリグリセ
ライドがリパーゼの作用でグリセロールと脂肪酸
に加水分解され、次いでグリセロールはNAD
（Ｐ）+の存在下グリセロールデヒドロゲナーゼの
作用でジヒドロキシアセトン（またはＤ−グリセ
ルアルデヒド）とNAD（Ｐ）Ｈ生成し、このとき
NAD（Ｐ）Ｈの紫外部における吸収または螢光を
測定することによりグリセロール、延いてはトリ
グリセライドが測定される。
トリグリセライドリパーゼ ――――→ グリセロール＋脂肪酸グリセロール＋NAD（Ｐ）+GDH ―――→ ←――― ジヒドロキシアセトン（またはＤ−グリセ
ルアルデヒド）＋NAD（Ｐ）Ｈ＋H+ ここでNAD（Ｐ）+はニコチンアミドアデニンジ
ヌクレオチド（リン酸）を表し、GDHはグリセ
ロールデヒドロゲナーゼを表す。
上記グリセロールデヒドロゲナーゼの触媒する
反応は平衡がNAD（Ｐ）+生成の方向に傾いている
ため正方向に反応が充分進まず、また反応時間が
長くかかり、従つて測定精度および感度が低くま
た測定できるグリセロールの濃度範囲も狭いとい
う欠点を有している。
この問題を克服するため従来はNAD（Ｐ）+を過
剰量添加する、またはPH10〜11の高いPHで反応を
行うといつた酵素反応には不利な条件が強いられ
てきた。上記グリセロールデヒドロゲナーゼの反
応を進めるためには、生成物であるジヒドロキシ
アセントまたはＤ−グリセルアルデヒドを反応系
外に除去することが考えられ、このような例とし
てヒドラジンを添加しジヒドロキシアセトンをヒ
ドラゾンに変えることにより脱水素反応を進める
方法が試みられている（臨床病理、第24巻、855
頁、1976年）。しかしながらこの方法は酵素が失
活し易いという問題があり、本質的な解決法には
至つていない。そこで本発明者らは酵素反応に好
ましい条件下でジヒドロキシアセトンまたはＤ−
グリセルアルデヒドを反応系外に除去する方法を
鋭意検討したところ、ジヒドロキシアセトンまた
はＤ−グリセルアルデヒドをリン酸化する酵素を
使用する方法を見いだし本発明を完成したもので
ある。
本発明法において用いるジヒドロキシアセトン
またはＤ−グリセルアルデヒドをリン酸化する酵
素の具体的な例はトリオキシナーゼまたはジヒド
ロキシアセトンキナーゼである。トリオキナーゼ
（Triokinase、系統名ATP：Ｄ−グリセルアルデ
ヒド３−ホスホトランスフエラーゼ、
EC2.7.1.28）は次式に示すように、アデノシン
5′−三リン酸（以下「ATP」という）などのリ
ン酸化合物を供与体としてそのリン酸基をＤ−グ
リセルアルデヒドに転移する反応を触媒する酵素
であり、ジヒドロキシアセトンもＤ−グリセルア
ルデヒドとほぼ等速度でリン酸化することが知ら
れている。
Ｄ−グリセルアルデヒド＋ATP→ Ｄ−グリセルアルデヒド−３リン酸＋ADP 一方ジヒドロキシアセトンキナーゼ
（Dihydroxyacetone kinAse）はATPなどのリ
ン酸供与体のリン酸基をジヒドロキシアセトンに
転移する反応を触媒する酵素であるが、Ｄ−グリ
セルアルデヒドに対する反応性は弱くトリオキナ
ーゼとは異なる酵素であると考えられている。反
応式を以下に示す。
ジヒドロキシアセトン＋ATP→ ジヒドロキシアセトンリン酸＋ADP トリオキナーゼの例としてはモルモツト肝、ラ
ツト肝、バチルス・ズブチリス（Bacillus
subtilis）などに存在することが知られている
〔メソツド イン エンザイモロジー（Meth.
Enzymol.）第５巻、362頁（1962）、ユーロピア
ン ジヤーナル オブ バイオケミストリー
（Eur.J.Biochem.）第31巻、59頁（1972）および
ジエンザイム（The Enzymes）第２版、第６巻、
75頁（1962）〕。またジヒドロキシイアセトンキナ
ーゼの例としてはキヤンジダ・メチリカ
（Candida methylica）〔ツアイトシユリフト ア
ルゲマイネ、ミクロビオロジエ（Z.Allg.
Mikrobiol.）第20巻、389頁（1980）および同第
21巻、219頁（1981）〕、グリコノバクター・サブ
オキシダンス（Gluconobacter suboxydans）
〔日本農芸化学会、中部支部・関西支部合同大会
（昭和56年10月９日）講演要旨集、３頁〕、アセト
バクター・キシリナム（Acetobacter xylinum）
〔ジヤーナル オブ バクテリオロジー（J.
Bacteriol.）第127巻、747頁（1976）〕、緑藻類の
一種あるデユナリエラ（Dunaliella）〔プラント
フイジオロジー（Plant Physiol.）第59巻、15
頁、（1977）およびバイオキミカ バイオフイジ
カ アクタ（Biochim.Biophys.Acta）第615巻、
１頁（1980）〕および本発明者らが新たにスクリ
ーニングしてシゾサツカロミセス属菌に見いだし
た酵素があげられる。
本発明には上記トリオキナーゼまたはジヒドロ
キシアセトンキナーゼはいずれも用いることがで
きるが、特に好ましいのは酵素の生産性および性
質などから、本発明者らが新しくシゾサツカロミ
セス属に属する保存菌株の中に見いだしたジヒド
ロキシアセトンキナーゼである。上記以外にもジ
ヒドロキシアセトンまたはＤ−グリセルアルデヒ
ドをリン酸化する酵素であればいずれも本発明に
用いることができるのは言うまでもない。
シゾサツカロミセス属に属するジヒドロキシア
セトンキナーゼ生産菌は、具体的にはシゾサツカ
ロミセス・ポンベ（Shizosaccharomyces
pombe）IFO0340、同IFO0.354、シゾサツカロミ
セス・マリデボランス（S.malidevorans）
IFO1608、シゾサツカロミセス・ヤポニカス（S.
japonicus）IFO1609、シゾサツカロミセス・オ
クトスポラス（S.octosporus）IAM12257などが
あげられる。このうち特に好ましいのはシゾサツ
カロミセス・ポンベIFO0354である。
シゾサツカロミセス・ポンベIFO0354が産生す
るジヒドロキシアセトンキナーゼは二種類のアイ
ソザイム〔DHAK（）およびDHAK（）とい
う〕からなり、その性質を以下に示す。
(1) 使用：ATPなどリン酸供与体のリン酸基を
基質ジヒドロキシアセトンに転移する反応を触
媒する。
(2) 基質特異性：本酵素はジヒドロキシアセトン
を基質としてこれによく作用するが、DL−グ
リセルアルデヒドに対する作用は弱くまたグリ
セロール、１，２−プロパンジオール、１，３
−プロパンジオール、アセトール、アセトイ
ン、グリセロール３−リン酸、DL−グリセリ
ン酸には作用しない。
(3) リン酸供与体の特異性：本酵素はATPを最
もよいリン酸供与体として利用する。ウリジン
5′−三リン産は若干利用するがイノシン5′−三
リン酸、シチジン5′−三リン酸、グアノシン
5′−三リン酸は利用しない。
(4) 二価金属イオンの特異性：本酵素はMg2+、
Ca2+、Co2+、Mn2+などの二価金属イオンが存
在しないと酵素活性を示さない。DHAK（）
はCa2+イオンで、DHAK（）はMg2+イオン
で最大の活性を示す。
(5) 最適PH：約7.3 (6) 安定PH：DHAK（）はPH約５〜11、
DHAK（）はPH約６〜11の範囲で安定であ
る。
(7) 至適温度：DHAK（）は60℃付近、
DHAK（）は55℃付近が至適である。
(8) 温度安定性：DHAK（）は約50℃以下、
DHAK（）は約40℃以下で安定である。
(9) 基質親和性：PH7.5、25℃の反応条件におけ
るジヒドロキシアセトン、DL−グリセルアル
デヒド、ATPに対するミハエリス定数（Km
値）はDHAK（）の場合はそれぞれ8.4×
10-6M、2.1×10-5M、2.2×10-4M、DHAK
（）の場合はそれぞれ2.5×10-5M、3.2×
10-5M、9.1×10-4Mであつた。またMg2+イオ
ンは反応系において４ｍＭ以上の濃度であれば
十分な酵素活性が得られた。
(10) 分子量：セフアデツクスＧ−200（フアルマシ
ア社製）を用いたゲルろ過法により測定したと
ころDHAK（）、DHAK（）ともに約
145000と算出された。
次に本発明法によるグリセロールの測定法につ
いて具体的に説明すると、まずグリセロールはピ
リジンヌクレオチド補酵素の存在下グリセロール
デヒドロゲナーゼの作用で脱水素されジヒドロキ
シアセトンまたはＤ−グリセルアルデヒドとな
る。このときリン酸供与体の存在下トリオキナー
ゼまたはジヒドロキシアセトンキナーゼを作用せ
しめることにより、ジヒドロキシアセトン、Ｄ−
グリセルアルデヒドはそれぞれジヒドロキシアセ
トンリン酸、Ｄ−グリセルアルデヒド３−リン酸
となつて系外に除去される結果グリセロールデヒ
ドロゲナーゼの触媒する反応がすみやかに進行す
る。
ピリジンヌクレオチド補酵素の例としては
NAD+またはNADP+が用いられる。例えばエセ
エリヒア・コーリ（Escherichia coli）、クレブ
ジエラ・ニユウモニアエ（Klebsiella
pneumoniae）、アセトバクター・サブオキシダ
ンス（Acetobacter suboxydans）およびゲオト
リカム・カンデイダム（Geotrichum candidum）
のグリセロールデヒドロゲナーゼ（EC 1.1.1.6）
〔ジヤーナル オブ バイオロジカルケミストリ
ー（J.Biol.Chem.）第203巻、153頁（1953）、同
第235巻、1820頁（1960）およびアグリカルチユ
ラル アンド バイオロジカル ケミストリー
（Agric.Biol.Chem.）第46巻、3029頁（1982）〕は
NAD+を補酵素としてグリセロールよりジヒドロ
キシアセトンを生成し、ウサギ骨格筋のグリセロ
ールデヒドロゲナーゼ（EC1.1.1.72）〔バイオキ
ミカ バイオフイジカ アクタ（Biochim.
Biophys.Acta）第258巻、40頁（1972）〕は
NADP+を補酵素としてＤ−グリセルアルデヒド
を生成し、また緑藻デユナリエラ・パルヴア
（Dunaliella parva）のグリセロール２−デヒド
ロゲナーゼ（EC1.1.1.156）〔フエブス レター
（FEBS Lett.）第29巻、153頁（1973）〕は
NADP+を補酵素としてジヒドロキシアセトンを
生成する。本発明には上記グリセロールデヒドロ
ゲナーゼはいずれも使用することができるが、好
ましくはグリセロールに対するミハエリス定数
（Km値）の小さいゲオトリカム・カンデイダム
の産生するグリセロールデヒドロゲナーゼがよ
い。
リン酸供与体の例としては、ATP、ウリジン
5′−三リン酸（UTP）、イノシン5′−三リン酸
（ITP）、シチジン5′−三リン酸（CTP）、グアノ
シン5′−三リン酸（GTP）などがあげられる。
シゾサツカロミセス・ポンベIFO0354のジヒドロ
キシアセトンキナーゼはATPを最もよいリン酸
供与体とする。
上記反応においてグリセロールを測定するに
は、グリセロールデヒドロゲナーゼの触媒する反
応におけるNAD（Ｐ）+の変化、好ましくは生成す
るNAD（Ｐ）Ｈを340nｍ付近における紫外部吸
収により測定するのが最も簡便である。
その他螢光強度を測定する方法、フエナジンメト
サルフエートとニトロテトラゾリウムブルーなど
のテトラゾリウム塩を使用して比色する方法〔ク
リニカキミカ アクタ（Clinica Chimica Acta）
第81巻、125頁（1977）〕、ジアホラーゼとテトラ
ゾリウム塩を使用して比色する方法〔特公昭56−
38199号公報〕などの方法も利用できる。
本発明のグリセロール測定組成物はジヒドロキ
シアセトンまたはＤ−グリセルアルデヒドをリン
酸化する酵素、グリセロールデヒドロゲナーゼ、
ピリジンヌクレオチド補酵素およびリン酸供与体
を必須として含んで成り、各成分の具体例は前述
のとおりである。各成分の使用量は幅広く変えて
用いることが可能である。例えばグリセロールデ
ヒドロゲナーゼの使用量は、反応の初速度からグ
リセロールを求める場合には反応液中の濃度が
0.01〜0.5u／ml、グリセロールを完全に生成物に
変化させることにより求める場合には0.5〜50u／
ml用いることが好ましい。トリオキナーゼまたは
ジヒドロキシアセトンキナーゼの使用量は0.1〜
100u／mlが好ましい。
反応の条件は、PH７〜９、温度25〜40℃が特に
有効であるが、この範囲を越えて行うことも可能
である。また反応液のPHを一定に保持するために
緩衝液を含むのが好ましい。緩衝液は上記PH範囲
を示すものであればいずれでもよいが、より好ま
しくはトリス塩酸緩衝液（PH8.0〜8.5）である。
以下に実施例をもつて本発明を具体的に説明す
るが、使用した酵素の調製法および各酵素の活性
の表示は次のとおりである。
(1) ジヒドロキシアセトンキナーゼの調製麦芽エ
キス１％、ペプトン0.3％、酵母エキス0.1％、
リン酸二カリウム0.2％、硫酸マグネシウム７
水塩0.05％、塩化カリウム0.05％および硫酸第
一鉄７水塩0.001％から成る組成の培地（PH
6.2）にシゾサツカロミセス・ポンベIFO0354
を接種し、30℃で48時間培養した。
培養液10を遠心分離して菌体を集め、20ｍ
Ｍトリス塩酸緩衝液（PH7.0）に懸濁後、ダイ
ノミルにて菌体破砕を行い酵素を抽出した。抽
出液を遠心分離して固型物を除去し、得られた
上清液にポリエチレンイミン溶液を最終濃度
0.02％になるように添加し、沈澱物を再度遠心
分離により除去した。次に得られた上清液を硫
安塩析し、40−70％飽和画分の酵素沈澱を取得
した。沈澱を上記同緩衝液に溶解したのちセフ
アデツクスＧ−25（フアルマシア社製）を使用
したゲルろ過法により脱塩したのち、同緩衝液
で平衡化したDEAE−セフアロース（フアルマ
シア社製）カラムに吸着させ、カラムを洗浄後
０〜0.3Mの食塩濃度勾配により酵素を溶出し
た。酵素活性は二つのピークに分れ、約0.12M
食塩で溶出させる画分をDHAK（）、約
0.16M食塩で溶出される画分をDHAK（）と
してそれぞれ別に集めた。
DHAK（）、DHAK（）画分はそれぞれ
硫酸アンモニウムを80％飽和になるように加え
て酵素を沈澱させたのち、遠心分離により集
め、上記同緩衝液に溶解してセフアデツクスＧ
−25により脱塩した。次に得られた酵素溶液を
40ｍＭのトリス塩酸緩衝液（PH7.0）で平衡化
したブルーセフアロース（フアルマシア社製）
カラムに通し、吸着されずに溶出してきた活性
画分を限外ろ過法により濃縮したところ、
12u／mlの活性を有するDHAK（）溶液10ml
ならびに20u／mlの活性を有するDHAK（）
溶液18mlを得た。なお本DHAK（）と
DHAK（）は混合状態でも有効であり、以下
に示す実施例では混合物を使用した。
活性測定法：2.5ｍＭ ATP、４ｍＭ硫酸マグ
ネシウム、0.2ｍＭ NADH、1.0ｍＭジヒド
ロキシアセトンおよび2.5u／mlグリセロール
−３−リン酸デヒドロゲナーゼ（ベーリンガ
ー・マンハイム社製）を含む0.1Mトリス塩
酸緩衝液（PH7.5）1.0mlと酵素溶液0.01mlを
混合し25℃で反応させ、340nｍにおける吸
光度の減少を測定する。酵素活性の表示は、
上記条件で１分間に1μモルのNADHを減少
させる酵素量を１単位とした。以上の反応式
を示せば次の通りである。
ジヒドロキシアセトン＋ATP→ ジヒドロキシアセトンリン酸＋ADP ジヒドロキシアセトンリン酸＋NADH→ グリセロール３−リン酸＋NAD+ (2) トリオキナーゼの調製 メソツド イン エンザイモロジー（Meth.
Enzymol.）第５巻、362頁（1962）記載の方法
に準じてブタ肝臓より調製した。活性の測定
は、上記ジヒドロキシアセトンオキナーゼ活性
の測定法におけル基質ジヒドロキシアセトンの
代わりにＤ−グリセルアルデヒドを用いて同様
に操作した。
(3) グリセロールデヒドロゲナーゼの調製 ゲオトリカム・カンデイダムのグリセロール
デヒドロゲナーゼはAgric.Biol.Chem.第46巻、
3029頁（1982）に準じ、またウサギ骨格筋のグ
リセロールデヒドロゲナーゼはBiochim.
Biophys.Acta第258巻、40頁（1972）に準じそ
れぞれ調製した。酵素活性は、グリセロールと
NAD（Ｐ）+を基質として、PH8.0、25℃の反応
条件で１分間に1μモルのNAD（Ｐ）Ｈを生成
する酵素量を１単位とした。
(4) リパーゼ活性の表示 オリーブ油乳化液と牛血清アルブミンとの混
合液を基質として、PH7.0、37℃の反応条件で
１分間に1μモルの脂肪酸を遊離する酵素量を
１単位とした。
実施例 １ 硫酸マグネシウム・７水塩1.04mg／ml、
NAD+2.0mg／mlおよびNTP1.5mg／mlを含む
0.15Mトリス塩酸緩衝液（PH8.5）0.96mlと試料と
してトリオレイン換算75〜1050mg／dlの既知濃度
のグリセロール溶液0.02mlを１mlのキユベツトに
入れて混合し、37℃で３分間保持した。その後ゲ
オトリカム・カンデイダムのグリセロールデヒド
ロゲナーゼ8.75u／mlおよびジヒドロキシアセト
ンキナーゼ25u／mlを含む0.02Mトリス塩酸緩衝
液（PH7.5）0.02mlを添加して反応させ、340nｍ
における吸光度の１分間当りの増加を測定した。
なお比較のためにジヒドロキシアセトンキナーゼ
を除いた系についても同様に操作した。
反応時間と吸光度の関係を第１図（本発明法）
および第２図（比較例）に、また本発明法の検量
線を第３図に示す。本発明法では1000mg／dl以上
の試料にに対しても反応速度は一定であり、高感
度で定量的な測定が可能であるが、比較例では反
応速度が遅く、また時間とともに低下することが
わかる。
実施例 ２ 実施例１におけるジヒドロキシアセトンキナー
ゼ、ゲオトリカム・カンデイダムのグリセロール
デヒドロゲナーゼおよびNAD+に代えてそれぞれ
トリオキナーゼ、ウサギ骨格筋のグリセロールデ
ヒドロゲナーゼおよびNADP+を用いて同様に操
作したところ、実施例１と同様の結果を得た。
実施例 ３ 実施例１における硫酸マグネシウム代えて塩化
カルシウム、塩化コバルトまたは塩化マンガンを
用いて同様に操作したところ、いずれも実施例１
と同様の結果であつた。
実施例 ４ 硫酸マグネシウム・７水塩1.04mg／ml、
NAD+2.0mg／mlおよびATP1.5mg／mlを含む
0.15Mトリス塩酸緩衝液（PH8.5）0.96mlとゲオト
リカム・カンデイダムのグリセロールデヒドロゲ
ナーゼ75u／mlおよびジヒドロキシアセトンキナ
ーゼ25u／mlを含む0.02Mトリス塩酸緩衝液（PH
7.5）0.02mlを試験管に入れて混合し、37℃で３
分間保持した。その後試料としてトリオレイン換
算75〜900mg／dlの既知濃度のグリセロール溶液
0.02mlを添加して20分間反応させ、340nｍにおけ
る吸光度の増加を測定した。なお比較のためジヒ
ドロキシアセトンキナーゼを除いた系についても
同様に操作した。
結果は、第４図に示すように本発明法ではグリ
セロールデヒドロゲナーゼの反応が終点まで達す
ることにより少なくとも900mg／dlまでは検量線
は直線であり、感度良く測定できることがわか
る。一方比較例では反応性が低くて、感度が悪
く、検量線は直線性を示さない。
実施例 ５ トリグリセライドの測定 試料にリパーゼ（リポプロテインリパーゼ）を
作用させて含有するトリグリセライドを加水分解
し、生じたグリセロールを測定することによりト
リグリセライドの測定を行つた。即ち、リポプロ
テインリパーゼ（天野製薬社製）500u／ml、硫
酸マグネシウム・７水塩1.04mg／ml、NAD+2.0
mg／ml、ATP1.5mg／mlおよびトリトンＸ−100
0.1％を含む0.15Mトリス塩酸緩衝液（PH8.5）
0.96mlと血清試料0.02mlを混合し37℃で５分間保
持したのち、ゲオトリカム・カンデイダムのグリ
セロールデヒドロゲナーゼ8.75u／mlおよびジヒ
ドロキシアセトンキナーゼ25u／mlを含む0.02M
トリス塩酸緩衝液（PH7.5）0.02mlを添加して反
応させ、340nｍにおける吸光度の１分間当りの
増加を測定した。別に、既知濃度のトリグリセラ
イドを含む標準血清を試料として上記と同様に操
作して得た検量線と上記測定値を対比して前記血
清試料中のトリグリセライドを求めた。検量線を
第５図に示す。
なお、公知のトリグリセライドの測定試薬であ
るTGキツト−Ｋ（日本商事社製、リポプロテイ
ンリパーゼ、ゲリセロールキナーゼ、グリセロー
ル３−リン酸オキシダーゼを含む）を用いた方法
と本発明法との血清試料測定結果の関係をみたと
ころ、第６図に示すように極めて有意な相関が認
められた。
【図面の簡単な説明】
第１図は本発明によるグリセロールの測定にお
ける反応時間と吸光度の関係を表す図であり、第
２図はその比較例を表す図である。第３図および
第４図は本発明によるグリセロールの測定の検量
線を表す図である。第５図は本発明を利用したト
リグリセライドの測定の検量線を表す図であり、
第６図はそれによる血清試料中のトリグリセライ
ドの測定値と公知法による測定値との相関を表す
図である。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 １ グリセロールにグリセロールデヒドロゲナー
    ゼを作用させ、減少したNAD（Ｐ）+または生成し
    たNAD（Ｐ）Ｈの量を測定するグリセロールの測
    定において、ジヒドロキシアセトンまたはＤ−グ
    リセルアルデヒドをリン酸化する酵素およびリン
    酸供与体を用い、グリセロールデヒドロゲナーゼ
    が触媒する反応を促進することを特徴とするグリ
    セロールの測定法。 ２ ジヒドロキシアセトンまたはＤ−グリセルア
    ルデヒドをリン酸化する酵素がトリオキナーゼま
    たはジヒドロキシアセトンキナーゼである特許請
    求の範囲第１項記載のグリセロールの測定法。 ３ グリセロールがトリグリセライドの加水分解
    に由来するものである特許請求の範囲第１項記載
    のグリセロールの測定法。 ４ ジヒドロキシアセトンまたはＤ−グリセルア
    ルデヒドをリン酸化する酵素、グリセロールデヒ
    ドロゲナーゼ、ピリジンヌクレオチド補酵素およ
    びリン酸供与体を含んでなるグリセロール測定組
    成物。 ５ ジヒドロキシアセトンまたはＤ−グリセルア
    ルデヒドをリン酸化する酵素がトリオキナーゼま
    たはジヒドロキシアセトンキナーゼである特許請
    求の範囲第４項記載のグリセロール測定組成物。 ６ ピリジンヌクレオチド補酵素がニコチンアミ
    ドアデニンジヌクレオチドまたはニコチンアミド
    アデニンジヌクレオチドリン酸である特許請求の
    範囲第４項記載のグリセロール測定組成物。 ７ リン酸供与体がアデノシン5′−三リン酸であ
    る特許請求の範囲第４項記載のグリセロール測定
    組成物。 ８ 前記組成物がさらに二価金属イオンを含む特
    許請求の範囲第４項記載のグリセロール測定組成
    物。 ９ 二価金属イオンがマグネシウム、カルシウ
    ム、コバルトまたはマンガンである特許請求の範
    囲第８項記載のグリセロール測定組成物。 １０ 前記組成物がさらに緩衝液を含む特許請求
    の範囲第４項記載のグリセロール測定組成物。
JP58070730A 1983-04-21 1983-04-21 グリセロ−ルの測定法および測定組成物 Granted JPS59196100A (ja)

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EP0123511A3 (en) 1986-02-12
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DE3468124D1 (en) 1988-01-28
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