JPH09143195A - 新規化合物ａ−７４２５９ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 顕著なα−グルコシダーゼ阻害活性を有する
化合物の提供。 【解決手段】 下記式（Ｉ）： 【化１】

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、小胞体α−グルコ
シダーゼ阻害活性および抗ウイルス活性を有する新規化
合物Ａ−７４２５９に関する。

【０００２】

【従来の技術】生体内に分布するα−グルコシダーゼの
うち小胞体に存在するα−グルコシダーゼ、すなわちα
−グルコシダーゼＩ，ＩＩは、分泌糖蛋白質、細胞表層
糖蛋白質、及びウイルス表層糖蛋白質上のＮ結合型糖鎖
の成熟過程においてプロセシングに関わる酵素である。
具体的には、未成熟のＮ結合型糖鎖の末端部分に存在す
る３分子のグルコースを切り出す活性を有している。そ
の後、更に別の酵素が働き糖鎖が成熟する。ＨＩＶをは
じめとするウイルス感染細胞において本酵素を阻害した
場合、生成するウイルス粒子の表層糖蛋白質の糖鎖は未
成熟な状態にとどまり、生成ウイルスの感染性が抑制さ
れる結果となる。実際に、小胞体α−グルコシダーゼ阻
害物質として知られる、１−デオキシノジリマイシン、
カスタノスペルミン及びその誘導体は、in vitroにおい
てＨＩＶの伝翻、増殖を阻害することが報告されており
（H. Shimizu et al.、 AIDS、 4、 975-979 (1990)；B.
D. Walker et al.、 Proc. Natl. Acad. Sci. USA、 84、
8120-8124 (1987) 等）、ブロモコンジュリトール（bro
moconduritol ）がウイルス生成を抑制することが報告
されている（R. Datema et al.、 Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA、 79、 6787-6791(1982)）。

【０００３】また、小胞体α−グルコシダーゼ阻害剤は
悪性腫瘍細胞の転移、浸潤を阻害することが報告されて
いる（M. J. Humphries et al.、 Cancer Research、 46、
5215-5222 (1986); G. Pulverer et al.、 J. Cancer R
es. Clin. Oncol.、 114、 217-220（1988) ）。

【０００４】従って、小胞体α−グルコシダーゼ阻害活
性を有する化合物は、抗ウイルス剤、抗ＡＩＤＳ剤また
は抗腫瘍剤として有用である。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは微生物二
次代謝産物中より小胞体α−グルコシダーゼ阻害活性を
有する物質を検索した結果、土壌より分離したストレプ
トマイセス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ）属に属するＳ
ＡＮＫ６２６９５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２５９）の培
養液中に、小胞体α−グルコシダーゼ阻害活性を有する
新規化合物Ａ−７４２５９が生産されることを見出して
本発明を完成した。

【０００６】更に、本発明の他の目的は、新規化合物Ａ
−７４２５９を有効成分とするα−グルコシダーゼ阻害
剤、特に抗ウイルス剤、抗ＡＩＤＳ剤、抗腫瘍剤を提供
することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、（１）下記式
（Ｉ）で表わされる新規化合物Ａ−７４２５９、：

【０００８】

【化２】

【０００９】（２）ストレプトマイセス属に属する新規
化合物Ａ−７４２５９の生産菌を培養し、その培養物よ
り新規化合物Ａ−７４２５９を採取することを特徴とす
る新規化合物Ａ−７４２５９の製造法、（３）ストレプ
トマイセス属に属する新規化合物Ａ−７４２５９生産菌
がストレプトマイセス エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙ
ｃｅｓ ｓｐ．）ＳＡＮＫ６２６９５株である、（２）
に記載の製造法、（４）ストレプトマイセス エスピー
ＳＡＮＫ６２６９５株、および（５）新規化合物Ａ−７
４２５９を有効成分として含有する「医薬」、「α−グ
ルコシダーゼ阻害剤」、「抗ウイルス剤」、「抗ＡＩＤ
Ｓ剤」、「抗腫瘍剤」に関する。

【００１０】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９は下記
の物理化学的性状を有する。

【００１１】１）性質； 白色粉末。 ２）溶解性； ジメチルスルホキシド、水、メタノール
に可溶。酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 ３）分子式； Ｃ₇ Ｈ₁₂Ｏ₆ （高分解能マススペクトル
により測定） ４）分子量； １９２（ＦＡＢ−ＭＳスペクトルにより
測定） ５）比旋光度 ［α］²⁵ _D ＋７０゜ （ｃ ０．８２
５、Ｈ₂ Ｏ） ６）紫外線吸収スペクトル； λｎｍ １ｍｇ／ｍｌの水溶液中での測定で紫外線吸収を示さな
い。

【００１２】７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）；ν
_max ｃｍ^-1 ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは、次
の通りである。

【００１３】３３７５、２９３７、１６３４、１０８
８、１０４０ ８） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ｐｐｍ） 重水溶液中（内部基準：ＴＳＰ−ｄ４、０ｐｐｍ）で測
定した ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ）
は、次の通りである。 2.90(1H, d, J=4.3Hz), 3.20(1H, d, J=4.3Hz), 3.57(1
H, dd, J=9.7, 9.7Hz),3.82(1H, dd, J=5.2, 12.3Hz),
3.89(1H, dd, J=2.5, 12.3Hz),4.03(1H, ddd, J=2.5,
5.2, 9.7Hz), 4.19(1H, d, J=9.7Hz), 4.84(1H, s) ９）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ｐｐｍ) 重ジメチルスルホキシド溶液中（内部基準：重ジメチル
スルホキシド、３９．５ｐｐｍ）で測定した¹³Ｃ−核磁
気共鳴スペクトル（１００ＭＨｚ）は、次の通りであ
る。 46.6、 60.1、 61.1、 67.4、 71.4、 72.7、 94.0。

【００１４】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９は、そ
の分子中に５つの不斉炭素原子を有しているため、種々
の光学異性体を有する。前記式（Ｉ）は、これらの異性
体およびこれらの異性体の混合物がすべて単一の式、即
ち式（Ｉ）で示されている。従って、本発明はこれらの
異性体およびこれらの異性体の混合物をもすべて含むも
のである。更に、上記式（Ｉ）を有する化合物は、例え
ば、水溶液中では下記のような平衡状態が考えられる。

【００１５】

【化３】

【００１６】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９は上記
式（ＩＩ）の鎖状構造を有する化合物をも包含する。

【００１７】本発明の式（Ｉ）を有する化合物は、大気
中に放置したり、又は、再結晶をすることにより、水分
を吸収し、吸着水が付いたり、水和物となる場合があ
り、そのような水和物も本発明に包含される。

【００１８】本発明の化合物新規化合物Ａ−７４２５９
の製造法において用いられるストレプトマイセス属に属
する菌株としては、例えばストレプトマイセス エスピ
ーＳＡＮＫ６２６９５株を挙げることができる。ＳＡＮ
Ｋ６２６９５株は愛知県名古屋市で採集した土壌から土
壌希釈法によって分離された。

【００１９】ＳＡＮＫ６２６９５株の菌学的特徴は、次
のとおりである。

【００２０】１．形態学的特徴 ＳＡＮＫ６２６９５株は、ＩＳＰ〔インターナショナル
・ストレプトマイセス・プロジェクト（International
Streptomyces Project）〕規定の寒天培地上２８℃、１
４日間培養後、顕微鏡下観察では、ＳＡＮＫ６２６９５
株の基生菌糸は良好に伸長、分岐し、黄味灰ないし薄オ
リーブ色を示すが、ノカルディア（Nocardia）属菌株様
の菌糸断裂やジグザグ伸長は観察されない。気菌糸は単
純分岐である。気菌糸の先端に１０ないし５０個または
それ以上の胞子連鎖を形成し、胞子連鎖の形態はゆるや
かな螺旋状を示す。走査型電子顕微鏡による観察では、
胞子の表面構造はとげ（Spiny ）状を示す。胞子は楕円
形で、その大きさは０．６〜０．８×０．８〜１．２μ
ｍである。また、気菌糸の車軸分岐、菌核や胞子のうな
どの特殊器官は観察されない。

【００２１】２．各種培養基上の諸性質 各種培養基上で２８℃、１４日間培養後の性状は表１に
示したとおりである。色調の表示はマンセル方式による
日本色彩研究所版「標準色票」のカラーチップ・ナンバ
ーをあらわす。

【００２２】

【表１】 培地の種類 項目^*1：ＳＡＮＫ６２６９５株の性状 ──────────────────────────────────── シュークロース・ Ｇ：良くない、平坦、黄味灰(5Y 9/1)^*2 硝酸塩寒天 ＡＭ：良好、ビロード状、明るい茶味灰(10YR 7/2) Ｒ：茶味白(2.5Y 9/1) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── グルコース・ Ｇ：良好、平坦、茶味白(2.5Y 9/1) アスパラギン寒天 ＡＭ：余り良くない、ビロード状、白 Ｒ：黄味灰（５Ｙ ９／１） ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── グリセリン・ Ｇ：良好、平坦、黄味灰（５Ｙ ９／１） アスパラギン寒天 ＡＭ：余り良くない、ビロード状、白 （ＩＳＰ ５） Ｒ：黄味灰(7.5Y 9/2) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── 澱粉・無機塩寒天 Ｇ：良好、平坦、黄味灰(5Y 9/1) （ＩＳＰ ４） ＡＭ：豊富に形成、ビロード状、茶味灰(10YR 6/2) Ｒ：黄味灰(7.5Y 9/3) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── チロシン寒天 Ｇ：余り良くない、平坦、黄味灰(5Y 9/1) （ＩＳＰ ７） ＡＭ：余り良くない、ビロード状、白 Ｒ：黄味灰(7.5Y 9/2) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── 栄養寒天 Ｇ：非常に良好、平坦、黄味灰(5Y 9/2) （Ｄｉｆｃｏ） ＡＭ：豊富に形成、ビロード状、白ないし薄茶(2.5Y 8/2) Ｒ：薄黄(5Y 9/3) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── イーストエキス・ Ｇ：非常に良好、平坦、薄オリーブ(5Y 8/3) 麦芽エキス寒天 ＡＭ：豊富に形成、綿毛状、薄黄味茶(2.5Y 7/2) （ＩＳＰ ２） Ｒ：薄黄(5Y 9/6) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── オートミール寒天 Ｇ：非常に良好、平坦、黄味灰(5Y 8/2) （ＩＳＰ ３） ＡＭ：豊富に形成、ビロード状、明るい茶味灰（１０ＹＲ
７／２） Ｒ：黄味灰（７．５Ｙ ９／３） ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── 水寒天 Ｇ：余り良くない、平坦、黄味灰(5Y 9/1) ＡＭ：良好、ビロード状、薄茶(2.5Y 8/2) Ｒ：黄味灰(5Y 9/1) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── ポテトエキス・ Ｇ：良くない、平坦、黄味灰(5Y 9/1) 人参エキス寒天 ＡＭ：良好、ビロード状、薄茶(2.5Y 8/2) Ｒ：黄味灰(5Y 9/1) ＳＰ：産生せず ──────────────────────────────────── ＊１ Ｇ：生育、 ＡＭ：気菌糸、 Ｒ：裏面、 ＳＰ：可溶性色素 ＊２ 性状の欄の（ ）内はマンセル方式による色調表示。

【００２３】３．生理学的性質 ２８℃で培養後、２ないし２１日間に観察したＳＡＮＫ
６２６９５株の生理学的性質は表２に示したとおりであ
る。

【００２４】

【表２】 ─────────────────────────── 澱粉の水解 陽性 ゼラチンの液化 陽性 硝酸塩の還元 陽性 ミルクのペプトン化 陽性 ミルクの凝固 陽性 メラニン様色素の生産性（培地１）＊陰性 （培地２）＊陰性 （培地３）＊陰性 基質分解性 カゼイン 陽性 チロシン 陰性 キサンチン 陰性 生育温度範囲（培地４）＊ １３〜３５℃ 生育適正温度（培地４） ２１〜３０℃ 食塩耐性 ７％ ─────────────────────────── ＊：培地１；トリプトン・イーストエキス・ブロス（ＩＳＰ １） ２；ペプトン・イーストエキス・鉄寒天（ＩＳＰ ６） ３；チロシン寒天（ＩＳＰ ７） ４；イーストエキス・麦芽エキス寒天（ＩＳＰ ２）。

【００２５】また、プリドハム・ゴトリーブ寒天培地
（ＩＳＰ ９）を使用して、２８℃、１４日間培養後に
観察したＳＡＮＫ６２６９５株の炭素源の資化性は表３
に示すとおりである。

【００２６】

【表３】 ───────────────────────────── Ｄ−グルコース ＋ Ｄ−フルクトース ± Ｄ−アラビノース − Ｌ−ラムノース − Ｄ−キシロース − シュークロース − イノシトール ＋ ラフィノース − Ｄ−マンニトール ＋ 対照 − ───────────────────────────── ＋：利用する、 ±：弱く利用する、 −：利用しない。

【００２７】４．菌体成分 ＳＡＮＫ６２６９５株の細胞壁はビー・ベッカーらの方
法〔B. Becker et al., Applied Microbiology, 12巻,
421〜423 頁 (1984年) 〕に従い検討した結果、ＬＬ−
ジアミノピメリン酸が検出されたことから細胞壁タイプ
Ｉであることが確認された。また、ＳＡＮＫ６２６９５
株の全細胞中の糖成分をエム・ピー・レシェバリエの方
法〔M. P. Lechevalier, Journal of Laboratory & Cli
nical Medicine, 71巻, 834 頁 (1968年) 〕に従い検討
した結果、特徴的なパターンは認められなかった。

【００２８】ＩＳＰ〔インターナショナル・ストレプト
マイセス・プロジェクト（International Streptomyces
Project）〕基準、ワックスマン著、ジ・アクチノミセ
テス（S. A. Waksman, The Actinomycetes）第２巻、ブ
キャナンとギボンズ編、バージーズ・マニュアル（R.
E. Buchanan and N. E. Gibbons, Bergey's Manual ofD
eterminative Bacteriology ）第８版（1974年）、バー
ジーズ・マニュアル（Bergey's Manual of Systematic
Bacteriology）第４巻（1989年）、およびストレプトマ
イセス属放線菌に関する最近の文献によって同定を行
い、本菌株が放線菌の中でもストレプトマイセス属に属
すると判断した。そこで、本菌株をストレプトマイセス
エスピーＳＡＮＫ６２６９５株と命名した。なお、本
菌株は１９９５年１０月１２日に通商産業省工業技術院
生命工学工業技術研究所に寄託され、寄託番号ＦＥＲＭ
ＢＰ−５２５９を付与された。

【００２９】周知のとおり、放線菌は自然界において、
または人工的な操作（例えば、紫外線照射、放射線照
射、化学薬品処理等）により、変異を起こし易く、本発
明のＳＡＮＫ６２６９５株もこの点は同じである。本発
明にいうＳＡＮＫ６２６９５株はそのすべての変異株を
包含する。

【００３０】また、これらの変異株の中には、遺伝学的
方法、例えば組み換え、形質導入、形質転換等により得
られたものも包含される。即ち、新規化合物Ａ−７４２
５９を生産する、ＳＡＮＫ６２６９５株およびその変異
株およびそれらと明確に区別されない菌株は、すべてＳ
ＡＮＫ６２６９５株に包含されるものである。

【００３１】

【発明の実施の形態】

１．培養 新規化合物Ａ−７４２５９を得るため、これらの微生物
の培養は、他の醗酵生成物を生産するために用いられる
ような培地中で行う。このような培地中には、微生物が
同化できる炭素源、窒素源及び無機塩を含有する。一般
に、炭素源としてグルコース、フルクトース、マルトー
ス、シュークロース、マンニトール、グリセリン、デキ
ストリン、オート麦、ライ麦、トウモロコシデンプン、
ジャガイモ、トウモロコシ粉、綿実油、糖蜜、クエン
酸、酒石酸等を単一に、あるいは併用して用いる事がで
きる。一般には、培地量の１〜１０重量％の範囲で用い
られる。

【００３２】窒素源としては、一般に蛋白質およびその
加水分解物を含有する物質または無機塩を醗酵工程に用
いる。適当な窒素源としては、例えば大豆粉、フスマ、
落花生粉、綿実粉、カゼイン加水分解物、ファーマミ
ン、魚粉、コーンスチープリカー、ペプトン、肉エキ
ス、イースト、イーストエキス、マルトエキス、硝酸ナ
トリウム、硝酸アンモニウム、硫酸アンモニウム等をあ
げることができる。これらの窒素源は、一般に、単一ま
たは併用して培地量の０．２〜１０重量％の範囲で用い
られる。

【００３３】培地中にとり入れる栄養無機塩は、ナトリ
ウム、アンモニウム、カルシウム、フォスフェート、サ
ルフェート、クロライド、カーボネート等のイオンを得
ることのできる通常の塩類である。また、カリウム、カ
ルシウム、コバルト、マンガン、鉄、マグネシウム等の
微量の金属も含む。

【００３４】液体培養に際しては、シリコン油、植物
油、界面活性剤等が、消泡剤として使用される。ＳＡＮ
Ｋ６２６９５株を培養し、新規化合物Ａ−７４２５９を
生産する培地のｐＨは、５．０〜８．０の範囲で変化で
きる。

【００３５】本菌株は１４℃乃至３５℃の範囲で生育
し、特に２１℃乃至３０℃の範囲で良好である。更に新
規化合物Ａ−７４２５９の生産には２２℃乃至２８℃が
好適である。新規化合物Ａ−７４２５９は、好気的に培
養して得られるが、通常用いられる好気的培養法、例え
ば固体培養法、振盪培養法、通気撹拌培養法等が用いら
れる。

【００３６】小規模な培養においては、２８℃で数日間
振盪培養を行うのが良好である。培養は、三角フラスコ
中で一段階または複数段階の種培養の発育工程により開
始する。種培養フラスコは定温インキュベーター中で数
日間、または充分に成長するまで振盪する。成長した種
培養液は、その一部または全部を次段階の種培地または
生産培地に接種するのに使用される。接種した生産培地
を含むフラスコを一定温度で数日間振盪し、培養終了
後、フラスコの含有物を遠心分離またはろ過により分別
する。

【００３７】大量培養の場合には、撹拌機、通気装置を
付けた適当なタンクで培養するのが好ましい。この方法
によれば栄養培地をタンクの中で作製することができ
る。栄養培地を１２１℃まで加熱して滅菌し、冷却後こ
の滅菌培地にあらかじめ成長させてあった種培養液を接
種する。培養は２８℃で通気撹拌して行う。この方法は
多量の化合物を得るのに適している。

【００３８】培養の経過に伴って生産される新規化合物
Ａ−７４２５９の量の経時変化を知るには、例えば培養
液をろ過して得たろ液を小胞体α−グルコシダーゼ阻害
試験（Ｉ）または（ＩＩ）に付して小胞体α−グルコシ
ダーゼ阻害活性を測定する。通常は９６時間から１６８
時間の培養で新規化合物Ａ−７４２５９の生産量は最高
値に達する。

【００３９】２．抽出精製 培養終了後、培養液中の液体部分に存在する新規化合物
Ａ−７４２５９は、菌体、その他の固形部分を珪藻土を
ろ過助剤とするろ過操作または遠心分離によって分別
し、そのろ液または上清中に存在する新規化合物Ａ−７
４２５９をその物理化学的性状を利用し抽出精製するこ
とにより得られる。例えば、吸着剤として活性炭または
吸着用樹脂であるアンバーライトＸＡＤ−２、ＸＡＤ−
４（ローム・アンド・ハース社製）等や、ダイヤイオン
ＨＰ−１０、ＨＰ−２０、ＨＰ−５０、ＣＨＰ２０Ｐ
（三菱化成（株）社製）等を使用して新規化合物Ａ−７
４２５９を精製することができる。即ち、新規化合物Ａ
−７４２５９を含む液を上記のごとき吸着剤の層を通過
させて不純物を吸着させて取り除くか、あるいは新規化
合物Ａ−７４２５９を吸着させた後、メタノール水、ア
セトン水等の水と有機溶剤との混合溶剤を用いて溶出さ
せることにより得られる。

【００４０】このようにして得られた新規化合物Ａ−７
４２５９は、更にシリカゲル、フロリジルのような担体
を用いた吸着カラムクロマトグラフィー、アビセル（旭
化成工業（株）社製）、セファデックス ＬＨ−２０
（ファルマシア社製）等を用いた分配カラムクロマトグ
ラフィーおよび順相、逆相カラム、イオン交換カラムを
用いた高速液体クロマトグラフィー等で精製することが
できる。

【００４１】さらに、新規化合物Ａ−７４２５９を含む
溶液をイオン交換樹脂、例えばアンバーライト ＩＲＣ
−５０、ＣＧ−５０（ローム・アンド・ハース社製）、
ダウエックス ５０ＷＸ４、ダウエックス ＳＢＲ−Ｐ
（ダウケミカル社製）の層を通過させて不純物を吸着さ
せて取り除くか、あるいは、水と混和しない有機溶剤、
たとえば、ｎ−ブタノール、酢酸エチル、メチレンクロ
ライド等の単独またはそれらの組み合わせにより、不純
物を抽出、除去することによって新規化合物Ａ−７４２
５９を精製することもできる。

【００４２】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９の精製
における所在は次に挙げる各々の方法によって測定する
ことができる。

【００４３】１）小胞体α−グルコシダーゼ阻害試験
（１） ラット肝臓ミクロソーム画分のトリトンＸ−１００可溶
化処理液を酵素液とし、トリチウム標識グルコースを含
む水疱性口内炎ウイルス糖蛋白質を基質として、各被検
試料存在下でα−グルコシダーゼ反応を進行させる。ト
リクロロ酢酸水溶液を添加して反応を停止させ、蛋白質
を不溶化した後、ポアサイズ０．６５μｍのメンブラン
フィルターでろ過したろ液中の遊離グルコースの放射活
性を液体シンチレーションカウンターを用いて計測す
る。阻害剤を含まない反応液の放射活性と比較して、被
検試料の酵素活性の阻害率を算出する。

【００４４】２）小胞体α−グルコシダーゼ阻害試験
（２） ラット肝臓ミクロソーム画分のトリトンＸ−１００可溶
化処理液を酵素液とし、パラニトロフェニルα−Ｄ−グ
ルコピラノシドを基質として各被検試料存在下でα−グ
ルコシダーゼ反応を進行させる。ｐＨ１０の緩衝液を加
えて反応を停止させ、４１５ｎｍの吸光度を計測して遊
離パラニトロフェノールの量を求める。阻害剤を含まな
い反応液の遊離パラニトロフェノール量と比較して、試
料の酵素活性の阻害率を算出する。

【００４５】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９の投与
形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤
もしくはシロップ剤等による経口投与、または注射剤も
しくは座剤等による非経口投与をあげることができる。
これらの製剤は賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤、安定
剤、矯味矯臭剤、希釈剤などの添加剤を用いて周知の方
法で製造される。ここに、賦形剤としては、例えば乳
糖、白糖、ぶどう糖、マンニット、ソルビットのような
糖誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプ
ン、α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデ
ンプンのような澱粉誘導体；結晶セルロース、低置換度
ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメ
チルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボ
キシメチルセルロースカルシウム、内部架橋カルボキシ
メチルセルロースナトリウムのようなセルロース誘導
体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；などの有
機系賦形剤；および軽質無水珪酸、合成珪酸アルミニウ
ム、メタ珪酸アルミン酸マグネシウムのような珪酸塩誘
導体；燐酸カルシウムのような燐酸塩；炭酸カルシウム
のような炭酸塩；硫酸カルシウムのような硫酸塩；など
の無機系賦形剤をあげることができる。滑沢剤として
は、例えばステアリン酸、ステアリン酸カルシウム、ス
テアリン酸マグネシウムのようなステアリン酸金属塩；
タルク；コロイドシリカ；ビーガム、ゲイ蝋のようなワ
ックス類；硼酸：アジピン酸；硫酸ナトリウムのような
硫酸塩；グリコール；フマル酸；安息香酸ナトリウム；
ＤＬ−ロイシン；脂肪酸ナトリウム塩；ラウリル硫酸ナ
トリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラウリル
硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；およ
び、上記澱粉誘導体などをあげることができる。結合剤
としては、例えばポリビニルピロリドン、マクロゴール
および前記賦形剤と同様の化合物をあげることができ
る。崩壊剤としては、例えば前記賦形剤と同様の化合物
およびクロスカルメロースナトリウム、カルボキシメチ
ルスターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのよ
うな化学修飾されたデンプン・セルロース類をあげるこ
とができる。安定剤としては、例えばメチルパラベン、
プロピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル
類；クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニル
エチルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザル
コニウム；フェノール、クレゾールのようなフェエノー
ル類；チメロサール；デヒドロ酢酸；およびソルビン酸
をあげることができる。矯味矯臭剤としては、例えば通
常使用される、甘味料、酸味料、香料等をあげることが
できる。

【００４６】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９の使用
量は症状、年齢、投与方法等によって異なるが、例えば
経口投与の場合には、成人に対して１日あたり、下限と
して０．１ｍｇ（好ましくは１ｍｇ）、上限として、１
０００ｍｇ（好ましくは１００ｍｇ）を１回または数回
に分けて、症状に応じて投与することが望ましい。静脈
内投与の場合には、成人に対して１日当たり、下限とし
て０．０１ｍｇ（好ましくは０．１ｍｇ）、上限とし
て、１００ｍｇ（好ましくは１０ｍｇ）を１回または数
回に分けて、症状に応じて投与することが望ましい。

【００４７】本発明の新規化合物Ａ−７４２５９を含有
するカプセル剤を製造する場合は、例えば以下のように
製造することができる。 製剤例１．新規化合物Ａ−７４２５９ １０ｇ、乳糖
１０ｇ、トウモロコシ澱粉 １５．８ｇおよびステアリ
ン酸マグネシウム ０．２ｇをＶ型混合機を用いて混合
した後、３号カプセルに１８０ｍｇずつ充填すると、カ
プセル剤が得られる。該カプセル剤は１カプセル当たり
新規化合物Ａ−７４２５９ ５０ｍｇを含有する。

【００４８】

【実施例】次に、実施例を挙げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれに限定されない。

【００４９】実施例 １． （Ａ）培養 培地組成−１で示される培地８０ｍｌを入れた５００ｍ
ｌ容三角フラスコ３７本を１２１℃で４５分間加熱滅菌
し２８℃に冷却した。それに、ストレプトマイセス エ
スピ−ＳＡＮＫ６２６９５株（ＦＥＲＭ ＢＰ−５２５
９）をスラントより１白金耳接種し、２１０ｒｐｍの回
転振盪培養機において２８℃で１４４時間培養した。

【００５０】 培地組成−１ グルコース ５％ ポリペプトン ０．４％ 大豆粉 １．０％ 肉エキス ０．４％ イーストエキス ０．１％ ＮａＣｌ ０．２５％ ＣａＣＯ₃ ０．５％ ＣＢ−４４２（消泡剤） ０．０１％ ─────────────────────────── 滅菌前 ｐＨ ７．２。

【００５１】（Ｂ）単離 得られた培養液 ２．９６リットルにろ過助剤としてセ
ライト５４５( セライトコーポレーション製）１５０ｇ
を加えてろ過し、その洗浄液と併せてろ液 ２．２５リ
ットルを得た。低温室において、４℃に冷却したクロマ
トグラフィー用カ−ボン６９５ｍｌを充填し、脱イオン
水で平衡化したカラム（φ５６×２９０ｍｍ）に４℃に
冷却した濾液を供与してＡ−７４２５９を吸着させ、脱
イオン水で溶出した。Ａ−７４２５９は溶出液 ５２０
ｍｌより２．３リットルの間に溶出された。これらのフ
ラクションを集めて濃縮し５８ｍｌとした。

【００５２】濃縮液にアビセル ４０ｇを加えてよく混
合した後、アセトニトリル ７８０ｍｌを加え懸濁し
た。この懸濁液を、予め５７０ｍｌのアビセルを充填し
て９３％アセトニトリル−水で平衡化したカラム（φ５
６×２３０ｍｍ）に供与した。９３％アセトニトリル−
水 １．３リットルで洗浄した後、９０％アセトニトリ
ル−水 ２．２リットルで溶出を行い溶出液を２０ｍｌ
ずつ分画した。α−グルコシダーゼ阻害活性を示したフ
ラクション２６〜５３を集め、減圧下で濃縮してアセト
ニトリルを留去した。次いで１Ｎ水酸化ナトリウムを用
いてｐＨを６．７に調整し、更に８．３ｍｌまで濃縮し
た。この濃縮液を４℃の低温室において、予め１リット
ルのダイヤイオンＣＨＰ２０Ｐを充填して脱イオン水で
平衡化したカラム（φ４８×５６０ｍｍ）に供与し、脱
イオン水 １．２リットルで溶出し、１０ｍｌずつ分画
した。α−グルコシダーゼ阻害活性を示したフラクショ
ン８６〜１００を集め、減圧下で濃縮した後、凍結乾燥
をおこなって、白色粉末のＡ−７４２５９を２００ｍｇ
得た。

【００５３】

【発明の効果】

試験例 １． 小胞体α−グルコシダーゼ阻害試験（そ
の１） トリチウム標識グルコースを含む糖鎖を有するウイルス
蛋白質を基質とし、遊離した標識グルコースの放射活性
を測定することで酵素活性を求めた。

【００５４】ウィスター系ラットの肝臓１５ｇを細切
し、０．２５Ｍシュークロース、０．５ｍＭジチオスレ
イトールを含むリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ ７．０）
６０ｍｌ中で、テフロンホモゲナイザーを用いてホモゲ
ナイズした。これを１，８００×ｇ、１０分間の遠心分
離に供して上清を得た。この上清を、１５，０００×
ｇ、３０分間の遠心分離に供して上清を得た。

【００５５】この上清を１２０，０００×ｇ、６０分間
の遠心分離に供して沈渣を得た。この沈渣に１０％グリ
セロール、２ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 、０．５μＭジチオスレ
イトールを含む１０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ
７．０） ６０ｍｌを加えてホモゲナイズし、再度１２
０，０００×ｇ、６０分間の遠心分離に供した。得られ
た沈渣に１０％グリセロール、２ｍＭ ＭｇＣｌ₂ 、
０．５μＭジチオスレイトールを含む１０ｍＭリン酸カ
リウム緩衝液ｐＨ ７．０） ６０ｍｌを加えてホモゲ
ナイズしたものを肝臓ミクロソーム画分とした。

【００５６】この肝臓ミクロソーム画分を、２％トリト
ンＸ−１００存在下で、テフロンホモゲナイザーを用い
てホモゲナイズした。バイオラッド社プロテインアッセ
イにより牛血清アルブミンを標準試料として換算し、蛋
白質濃度４．７ｍｇ／ｍｌになるように２０ｍＭエチレ
ンジアミン四酢酸を含んだ１００ｍＭリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ ６．８）で希釈したものを酵素液とした。

【００５７】カングらの方法（M. S. Kang et al., Ana
lytical Biochemistry, 184 巻,109 〜112 頁 (1989年)
）に従いトリチウム化ガラクトースを培養上清中に添
加することで水疱性口内炎ウイルスをラベルした。すな
わち、ＢＨＫ細胞を、培養面積１５０ｃｍ² の培養ボト
ル１８個に培養し、これに水疱性口内炎ウイルスを感染
させて２４時間培養した。これら１８個の培養ボトルか
ら回収した培養上清を１００，０００×ｇ、２時間の遠
心分離処理に供し、ウイルスを含む沈渣を得た。これを
蒸留水に溶解後、トリクロロ酢酸で沈殿させた。この沈
殿を０．５％ドデシル硫酸ナトリウム、５ｍＭジチオス
レイトール存在下で、ｐＨ ７で可溶化し、得た溶液
７ｍｌを基質液とした。

【００５８】以下、希釈等の操作には、２０ｍＭエチレ
ンジアミン四酢酸を含んだ１００ｍＭリン酸カリウム緩
衝液（ｐＨ ６．８）を使用した。９６穴マイクロタイ
タープレートの各ウェルに、被検試料溶液１０μｌ、酵
素液１０μｌ、基質液の５倍希釈液１０μｌと上記緩衝
液７０μｌを加え、総計１００μｌとして、反応を開始
した。３７℃で６０分静置して反応を進行させた後、１
０ｍｇ／ｍｌ牛血清アルブミン水溶液と５０％トリクロ
ロ酢酸水溶液をそれぞれ２５μｌずつ分注し、α−グル
コシダーゼ反応を停止した。４℃で６０分静置した後、
ミリポア社マルチスクリーンアッセイシステムを用い
て、ポアサイズ０．６５μｍのグラスファイバー付きメ
ンブレンフィルターでろ過した。ろ液１００μｌ中に含
まれる放射活性を液体シンチレーションカウンターを用
いて計測した。阻害剤を含まない反応液の放射活性と比
較し、被検試料の酵素活性の阻害率を算出した。

【００５９】この方法においてＡ−７４２５９が小胞体
α−グルコシダーゼを５０％阻害する濃度は１．７μｇ
／ｍｌであった。

【００６０】試験例２．小胞体α−グルコシダーゼ阻害
活性（その２） 試験例 １．で調製した、ラット肝臓ミクロソーム画分
を、２％トリトンＸ−１００存在下で、テフロンホモゲ
ナイザ−を用いてホモゲナイズした。プロテインアッセ
イ（バイオラッド社製）により牛血清アルブミンを標準
試料として換算し、蛋白質濃度４．７ｍｇ／ｍｌになる
ように２０ｍＭエチレンジアミン四酢酸を含む１００ｍ
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ ６．８）で希釈したも
のを酵素液とした。

【００６１】希釈等の操作には、２０ｍＭエチレンジア
ミン四酢酸を含む１００ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐ
Ｈ ６．８）を使用した。９６穴マイクロタイタープレ
ートの各ウエルに、被検試料溶液 １０μｌ、酵素液
１０μｌ、緩衝液 ８０μｌを加え３７℃で１５分静置
でプレインキュベイションを行い、それに１０ｍＭパラ
ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシド溶液 ５０μ
ｌを加え、総計１５０μｌとして、反応を開始した。３
７℃で２０分静置して反応を進行させた後、４Ｍグリシ
ンナトリウム緩衝液（ｐＨ １０）を２０μｌ分注して
反応を停止させた。４１５ｎｍの吸光度を計測して遊離
パラニトロフェノールの量を求め、阻害剤を含まない反
応液の遊離パラニトロフェノールの量と比較し、試料の
酵素活性の阻害率を算出した。

【００６２】この方法においてＡ−７４２５９が小胞体
α−グルコシダーゼを５０％阻害する濃度は１．０μｇ
／ｍｌであった。

【００６３】試験例３．抗ウイルス活性 抗ウイルス活性は、発育鶏卵に感染させて増殖させたイ
ンフルエンザウイルスＡ／山形／３２／８９（Ｈ１Ｎ
１）株（以下単に「ウイルス」という。）をイヌ腎臓由
来細胞（ＭＤＣＫ細胞）に感染させ、ウイルスの増殖に
より生ずるプラークを計数することにより測定した。

【００６４】具体的な操作法を以下にしめす。ＭＤＣＫ
細胞を、アールＭＥＭ培地（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ社製）
を含む３５ｍｍシャーレ中で、５％炭酸ガス中、３７℃
で培養し、シャーレの底一面に単層に増殖させた。シャ
ーレ中の培地のみを除き、次いで、ウイルスを感染させ
た発育鶏卵の漿尿液を希釈して調製したウイルス液を加
えた。希釈液としては、ダルベッコリン酸緩衝液（ＩＣ
Ｎ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ社製）を用いて調製した、
０．４％牛血清アルブミン（Ｍｉｌｅｓ Ｌａｂｓ社
製）を含むリン酸緩衝液（ｐＨ ７．２）を用いた。こ
れを３７℃で１時間培養して、ウイルスをＭＤＣＫ細胞
に感染させた。ウイルス液を除いた後、最終濃度として
１μｇ／ｍｌトリプシン（Ｃｏｏｐｅｒ Ｂｉｏｍｅｄ
ｉｃａｌ社製）、０．０１％ＤＥＡＥデキストラン（Ｐ
ｈａｒｍａｃｉａ ＬＫＢ社製）、０．６％寒天（Ｓｉ
ｇｍａ社製）および０．５６乃至５６μｇ／ｍｌの種々
の濃度のＡ−７４２５９を含むアールＭＥＭ培地（Ｇｉ
ｂｃｏ ＢＲＬ社製）を加えて固化させた。５％炭酸ガ
ス中、３７℃で４０時間培養したあと、寒天培地をはが
した。０．０１％クリスタルバイオレット（Ｍｅｒｃｋ
社製）−１９％メタノール溶液を添加し、ＭＤＣＫ細胞
を固定、染色して、プラーク数を計数した。（ここで、
Ａ−７４２５９非存在下におけるプラーク数が５０乃至
１００個となるように、前記行程において加えるウイル
スの量を調整した。） Ａ−７４２５９非存在下におけるプラーク数を１００％
としたときに、５０％のプラーク数を与えるＡ−７４２
５９の濃度は１３μｇ／ｍｌであった。

【００６５】以上のように本発明のＡ−７４２５９は顕
著な小胞体α−グルコシダーゼ阻害活性および抗ウイル
ス活性を有していることから、α−グルコシダーゼ阻害
剤、特に抗ＡＩＤＳ剤、抗ウイルス剤、抗腫瘍剤等とし
て有用である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 //(Ｃ１２Ｐ 19/44 Ｃ１２Ｒ 1:465） (72)発明者 倉屋 奈穂樹 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 木下 武 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内 (72)発明者 榎田 竜三 茨城県つくば市御幸が丘33 三共株式会社 内 (72)発明者 山下 誠 東京都品川区広町１丁目２番58号 三共株 式会社内

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 下記式（Ｉ）で表わされる新規化合物Ａ
   −７４２５９。： 【化１】
2. 【請求項２】 下記の物理化学的性状を有する新規化合
   物Ａ−７４２５９。 １）性質； 白色粉末。 ２）溶解性； ジメチルスルホキシド、水、メタノール
   に可溶。酢酸エチル、クロロホルムに不溶。 ３）分子式； Ｃ₇ Ｈ₁₂Ｏ₆ （高分解能マススペクトル
   により測定） ４）分子量； １９２（ＦＡＢ−ＭＳスペクトルにより
   測定） ５）比旋光度； ［α］²⁵ _D ＋７０゜ （ｃ ０．８
   ２５、Ｈ₂ Ｏ） ６）紫外線吸収スペクトル； λｎｍ １ｍｇ／ｍｌの水溶液中での測定で紫外線吸収を示さな
   い。 ７）赤外線吸収スペクトル（ＫＢｒ）； ν_max ｃｍ^-1 ＫＢｒディスクで測定した赤外線吸収スペクトルは、次
   の通りである。 ３３７５、２９３７、１６３４、１０８８、１０４０ ８） ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ｐｐｍ） 重水溶液中（内部基準：ＴＳＰ−ｄ４、０ｐｐｍ）で測
   定した ¹Ｈ−核磁気共鳴スペクトル（４００ＭＨｚ）
   は、次の通りである。 2.90(1H, d, J=4.3Hz), 3.20(1H, d, J=4.3Hz), 3.57(1
   H, dd, J=9.7, 9.7Hz),3.82(1H, dd, J=5.2, 12.3Hz),
   3.89(1H, dd, J=2.5, 12.3Hz),4.03(1H, ddd, J=2.5,
   5.2, 9.7Hz), 4.19(1H, d, J=9.7Hz), 4.84(1H, s) ９）¹³Ｃ−核磁気共鳴スペクトル； δ (ｐｐｍ） 重ジメチルスルホキシド溶液中（内部基準：重ジメチル
   スルホキシド、３９．５ｐｐｍ）で測定した^１３Ｃ−核
   磁気共鳴スペクトル（１００ＭＨｚ）は、次の通りであ
   る。 46.6、 60.1、 61.1、 67.4、 71.4、 72.7、 94.0。
3. 【請求項３】 ストレプトマイセス属に属する新規化合
   物Ａ−７４２５９の生産菌を培養し、その培養物より新
   規化合物Ａ−７４２５９を採取することを特徴とする新
   規化合物Ａ−７４２５９の製造法。
4. 【請求項４】 ストレプトマイセス属に属する新規化合
   物Ａ−７４２５９生産菌がストレプトマイセス エスピ
   ーＳＡＮＫ６２６９５株である、請求項３に記載の製造
   法。
5. 【請求項５】 ストレプトマイセス エスピーＳＡＮＫ
   ６２６９５株。
6. 【請求項６】 新規化合物Ａ−７４２５９を有効成分と
   して含有する医薬。
7. 【請求項７】 新規化合物Ａ−７４２５９を有効成分と
   して含有するα−グルコシダーゼ阻害剤。
8. 【請求項８】 新規化合物Ａ−７４２５９を有効成分と
   して含有する抗ウイルス剤。
9. 【請求項９】 新規化合物Ａ−７４２５９を有効成分と
   して含有する抗ＡＩＤＳ剤。
10. 【請求項１０】 新規化合物Ａ−７４２５９を有効成分
    として含有する抗腫瘍剤。