JPH09154594A - ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｖの製造法 - Google Patents
ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｖの製造法Info
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- JPH09154594A JPH09154594A JP31889395A JP31889395A JPH09154594A JP H09154594 A JPH09154594 A JP H09154594A JP 31889395 A JP31889395 A JP 31889395A JP 31889395 A JP31889395 A JP 31889395A JP H09154594 A JPH09154594 A JP H09154594A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ジフルクトース・ジアンヒドリドIVの新規な
製造方法の提供。 【解決手段】 アルスロバクター・ニコチノヴォランス
（Arthrobacter nicotinovorans）由来のジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIV合成酵素または酵素含有物とレバ
ンとを接触せしめることによりレバンからジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIVを合成しジフルクトース・ジアン
ヒドリドIVを採取することを特徴とするジフルクトース
・ジアンヒドリドIVの製造法。 【効果】 レバンビオース等を副生することなくジフル
クトース・ジアンヒドリドIVを選択的に製造することが
できる。
製造方法の提供。 【解決手段】 アルスロバクター・ニコチノヴォランス
（Arthrobacter nicotinovorans）由来のジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIV合成酵素または酵素含有物とレバ
ンとを接触せしめることによりレバンからジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIVを合成しジフルクトース・ジアン
ヒドリドIVを採取することを特徴とするジフルクトース
・ジアンヒドリドIVの製造法。 【効果】 レバンビオース等を副生することなくジフル
クトース・ジアンヒドリドIVを選択的に製造することが
できる。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明はレバンから微生物的
にジフルクトース・ジアンヒドリドIVを製造する方法に
関する。ジフルクトース・ジアンヒドリドIVは分子内に
数オングストロームの孔径をもつのでここに種々の金属
や原子を包摂する能力が期待される。さらにこれを消化
する微生物が限られるので、食品として整腸能力が期待
される。
にジフルクトース・ジアンヒドリドIVを製造する方法に
関する。ジフルクトース・ジアンヒドリドIVは分子内に
数オングストロームの孔径をもつのでここに種々の金属
や原子を包摂する能力が期待される。さらにこれを消化
する微生物が限られるので、食品として整腸能力が期待
される。
【０００２】レバンからジフルクトース・ジアンヒドリ
ドIVを生成する微生物として、アルスロバクター・ウレ
アファキエンス（Arthrobacter ureafaciens ）（K.Ta
nakaら、J.Biochem. 90, 1545-1548 (1981) 、K.Tanaka
ら、J.Biochem. 94, 1569-1578 (1983) 、及びK.Tanaka
ら、J.Biochem. 97, 1679-1688 (1985))、及びアルスロ
バクター・エスピー（村上洋ら、科学と工業、67 (9),
365-370 (1993)) が知られている。
ドIVを生成する微生物として、アルスロバクター・ウレ
アファキエンス（Arthrobacter ureafaciens ）（K.Ta
nakaら、J.Biochem. 90, 1545-1548 (1981) 、K.Tanaka
ら、J.Biochem. 94, 1569-1578 (1983) 、及びK.Tanaka
ら、J.Biochem. 97, 1679-1688 (1985))、及びアルスロ
バクター・エスピー（村上洋ら、科学と工業、67 (9),
365-370 (1993)) が知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
の菌の場合には、pH安定性の範囲がせまく、また酵素の
温度安定性が低いため低温で反応する必要があるなどの
欠点がある。従って本発明は、レバンからジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIVを広いpH範囲においても、また高
温においても製造することができる方法を提供するもの
である。
の菌の場合には、pH安定性の範囲がせまく、また酵素の
温度安定性が低いため低温で反応する必要があるなどの
欠点がある。従って本発明は、レバンからジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIVを広いpH範囲においても、また高
温においても製造することができる方法を提供するもの
である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明はアル
スロバクター・ニコチノヴォランス（Arthrobacternico
tinovorans）種（YUKIKO KODAMA et al. : Reclassific
ation of two strains of Arthrobacter oxydans and
proposal of Arthrobacter nicotinovorans sp. no
v. International Journal of Systematic Bacteriolog
y, 42 (2), 234-239 (1992).)由来の細菌のなかに、比
較的広範囲において、且つ高温においてもレバンからジ
フルクトース・ジアンヒドリドIVを特異的に生成せし
め、他のフルクトオリゴ糖を事実上生成せしめない株を
見出し、この知見に基づき本発明を完成した。
スロバクター・ニコチノヴォランス（Arthrobacternico
tinovorans）種（YUKIKO KODAMA et al. : Reclassific
ation of two strains of Arthrobacter oxydans and
proposal of Arthrobacter nicotinovorans sp. no
v. International Journal of Systematic Bacteriolog
y, 42 (2), 234-239 (1992).)由来の細菌のなかに、比
較的広範囲において、且つ高温においてもレバンからジ
フルクトース・ジアンヒドリドIVを特異的に生成せし
め、他のフルクトオリゴ糖を事実上生成せしめない株を
見出し、この知見に基づき本発明を完成した。
【０００５】従って本発明は、アルスロバクター・ニコ
チノヴォランス（Arthrobacter nicotinovorans）由来
のジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵素又は該酵
素含有物とレバンとを接触せしめることによりレバンか
らジフルクトース・ジアンヒドリドIVを合成し、該ジフ
ルクトース・ジアンヒドリドIVを採取することを特徴と
するジフルクトース・ジアンヒドリドIVの製造法を提供
するものである。
チノヴォランス（Arthrobacter nicotinovorans）由来
のジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵素又は該酵
素含有物とレバンとを接触せしめることによりレバンか
らジフルクトース・ジアンヒドリドIVを合成し、該ジフ
ルクトース・ジアンヒドリドIVを採取することを特徴と
するジフルクトース・ジアンヒドリドIVの製造法を提供
するものである。
【０００６】
【発明の実施の形態】本発明において使用する微生物と
しては、アルスロバクター・ニコチノヴォランス（Arth
robacter nicotinovorans）の種であって、レバンから
ジフルクトース・ジアンヒドリドIVを選択的に、例えば
実質的にジフルクトース・ジアンヒドリドIVのみを生成
せしめるものであればよい。本発明においては、アルス
ロバクター・ニコチノヴォランス種に属し、レバンから
ジフルクトース・ジアンヒドリドIVを特異的に生成せし
め、その他のフルクトオリゴ糖を実質上生成せしめない
細菌であればいずれも使用することが出来る。一例とし
て、アルスロバクター・ニコチノヴォランスＧＳ−９を
挙げることができ、この株は、北海道内の土壌から細菌
分離の定法に従って分離したものであり、下記の菌学的
性質を有する。
しては、アルスロバクター・ニコチノヴォランス（Arth
robacter nicotinovorans）の種であって、レバンから
ジフルクトース・ジアンヒドリドIVを選択的に、例えば
実質的にジフルクトース・ジアンヒドリドIVのみを生成
せしめるものであればよい。本発明においては、アルス
ロバクター・ニコチノヴォランス種に属し、レバンから
ジフルクトース・ジアンヒドリドIVを特異的に生成せし
め、その他のフルクトオリゴ糖を実質上生成せしめない
細菌であればいずれも使用することが出来る。一例とし
て、アルスロバクター・ニコチノヴォランスＧＳ−９を
挙げることができ、この株は、北海道内の土壌から細菌
分離の定法に従って分離したものであり、下記の菌学的
性質を有する。
【０００７】（１）一般的性質 グラム陽性、不規則的桿菌、好気性、グルコースから酸
もガスも生成せず。 運動性；なし。 胞子形成；なし。 カタラーゼ；陽性。 細胞加水分解物中のｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸；検
出されず。 細胞壁ペプチドグリカン；Ａ３α、Ｌ−リジン−Ｌ−ア
ラニン−Ｌ−スレオニン−Ｌ−アラニン。 （２）遺伝子解析 １６Ｓ ｒＤＮＡ解析により本菌とArthrobacter nico
ninovorans DSM 420との類似性が９９％であった。以上
の性質から本菌株はアルスロバクター・ニコチノヴォラ
ンス種に属する細菌に分類される。
もガスも生成せず。 運動性；なし。 胞子形成；なし。 カタラーゼ；陽性。 細胞加水分解物中のｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸；検
出されず。 細胞壁ペプチドグリカン；Ａ３α、Ｌ−リジン−Ｌ−ア
ラニン−Ｌ−スレオニン−Ｌ−アラニン。 （２）遺伝子解析 １６Ｓ ｒＤＮＡ解析により本菌とArthrobacter nico
ninovorans DSM 420との類似性が９９％であった。以上
の性質から本菌株はアルスロバクター・ニコチノヴォラ
ンス種に属する細菌に分類される。
【０００８】上記のアルスロバクター・ニコチノヴォラ
ンスＧＳ−９は、ＡＮＧＳ−９の名称のもとに工業技術
院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５２８５
として平成７年１１月７日に寄託された。本発明の細菌
によりジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵素また
は該酵素含有物を得るには、前培養を行った後に本培養
を行うのが好ましい。前培養のための培地としては本発
明の細菌が増殖しうる培地であればよい。例えば炭素源
としてグルコース、スクロース、フルクトース、レバ
ン、イヌリン、グリセロール、などを単独でまたは組み
合わせて使用することができ、窒素源としては例えばポ
リペプトン、酵母エキス、肉エキス、アンモニウム塩、
麦芽エキス、コーンスチープリカー、などが用いられ
る。さらに必要に応じて燐酸塩、金属塩などの無機塩を
含めることが出来る。
ンスＧＳ−９は、ＡＮＧＳ−９の名称のもとに工業技術
院生命工学工業技術研究所にＦＥＲＭ Ｐ−１５２８５
として平成７年１１月７日に寄託された。本発明の細菌
によりジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵素また
は該酵素含有物を得るには、前培養を行った後に本培養
を行うのが好ましい。前培養のための培地としては本発
明の細菌が増殖しうる培地であればよい。例えば炭素源
としてグルコース、スクロース、フルクトース、レバ
ン、イヌリン、グリセロール、などを単独でまたは組み
合わせて使用することができ、窒素源としては例えばポ
リペプトン、酵母エキス、肉エキス、アンモニウム塩、
麦芽エキス、コーンスチープリカー、などが用いられ
る。さらに必要に応じて燐酸塩、金属塩などの無機塩を
含めることが出来る。
【０００９】本培養のための培地には炭素源としてレバ
ンを加えるのが極めて好ましい。さらに窒素源としては
硝酸アンモニウムなどの無機窒素源が好ましく、さらに
微量要素の給源としては酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなどを用いるのが好ましい。さらに、無機塩とし
て燐酸塩、カリウム、マグネシウム、鉄、カルシウムな
どの塩類を添加するのが好ましい。培養は２５℃〜３７
℃、好ましくは２７℃〜３０℃にて行う。培養期間は前
培養、本培養とも１〜４日間程度であり、好ましくは１
〜３日間程度である。培養は好気的条件下で行い、通
常、振とう、撹拌、通気等により好気的条件を確保す
る。
ンを加えるのが極めて好ましい。さらに窒素源としては
硝酸アンモニウムなどの無機窒素源が好ましく、さらに
微量要素の給源としては酵母エキス、肉エキス、ポリペ
プトンなどを用いるのが好ましい。さらに、無機塩とし
て燐酸塩、カリウム、マグネシウム、鉄、カルシウムな
どの塩類を添加するのが好ましい。培養は２５℃〜３７
℃、好ましくは２７℃〜３０℃にて行う。培養期間は前
培養、本培養とも１〜４日間程度であり、好ましくは１
〜３日間程度である。培養は好気的条件下で行い、通
常、振とう、撹拌、通気等により好気的条件を確保す
る。
【００１０】本発明においてレバンからジフルクトース
・ジアンヒドリドIVを合成するにはジフルクトース・ジ
アンヒドリドIV合成酵素を用いることも出来るが、経済
的見地から酵素含有物を用いるのが好ましい。酵素含有
物としては、ジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵
素生産菌の培養物それ自体、培養物から回収した菌体、
菌体破砕物、菌体抽出物、培養液から菌体を除去した
液、例えば培養濾液もしくは遠心分離液、あるいは種々
の段階まで酵素を濃縮もしくは乾燥または半精製した中
間精製物等が挙げられる。菌体の破砕は微生物菌体を破
砕するための常用手段、例えば機械的なすりつぶし、高
圧から低圧への圧力変化、酵素による細胞壁の溶解等に
より得ることが出来る。菌体抽出物は、例えば上記のご
とき菌体破砕物から、遠心分離、濾過等の常法に従って
不溶物を除去することにより得られる。
・ジアンヒドリドIVを合成するにはジフルクトース・ジ
アンヒドリドIV合成酵素を用いることも出来るが、経済
的見地から酵素含有物を用いるのが好ましい。酵素含有
物としては、ジフルクトース・ジアンヒドリドIV合成酵
素生産菌の培養物それ自体、培養物から回収した菌体、
菌体破砕物、菌体抽出物、培養液から菌体を除去した
液、例えば培養濾液もしくは遠心分離液、あるいは種々
の段階まで酵素を濃縮もしくは乾燥または半精製した中
間精製物等が挙げられる。菌体の破砕は微生物菌体を破
砕するための常用手段、例えば機械的なすりつぶし、高
圧から低圧への圧力変化、酵素による細胞壁の溶解等に
より得ることが出来る。菌体抽出物は、例えば上記のご
とき菌体破砕物から、遠心分離、濾過等の常法に従って
不溶物を除去することにより得られる。
【００１１】酵素濃縮物又は乾燥物は、例えば前記の培
養物、菌体、菌体除去培養液、菌体破砕物、菌体抽出物
等を、常法に従って、例えば減圧濃縮により濃縮し、あ
るいは常法に従って、例えば減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結
乾燥等により乾燥することにより得られる。中間精製物
としては、前記の菌体破砕物、菌体抽出物、もしくは菌
体除去培養液、又はこれらの濃縮物の、有機溶剤、例え
ばアセトン、エタノール等による沈澱及び／又は乾燥
物、前記菌体抽出物もしくは菌体除去培養液又はこれら
の濃縮物の硫酸アンモニウム沈澱物、等が挙げられる。
中間精製物はさらに、酵素の精製に常用されているクロ
マトグラフィー法によっても得ることができる。前記の
種々の酵素含有物はまた、常法に従って固定化して用い
ることもできる。
養物、菌体、菌体除去培養液、菌体破砕物、菌体抽出物
等を、常法に従って、例えば減圧濃縮により濃縮し、あ
るいは常法に従って、例えば減圧乾燥、噴霧乾燥、凍結
乾燥等により乾燥することにより得られる。中間精製物
としては、前記の菌体破砕物、菌体抽出物、もしくは菌
体除去培養液、又はこれらの濃縮物の、有機溶剤、例え
ばアセトン、エタノール等による沈澱及び／又は乾燥
物、前記菌体抽出物もしくは菌体除去培養液又はこれら
の濃縮物の硫酸アンモニウム沈澱物、等が挙げられる。
中間精製物はさらに、酵素の精製に常用されているクロ
マトグラフィー法によっても得ることができる。前記の
種々の酵素含有物はまた、常法に従って固定化して用い
ることもできる。
【００１２】最も簡単な反応方法は、レバンを炭素源と
して含有する培地中で本発明の細菌を培養する方法であ
る。この方法においては、培地中のレバンの一部が細菌
に資化されて菌体の増殖に用いられ、それによりジフル
クトース・ジアンヒドリドIV合成酵素が生産される。そ
して培養中のレバンの残りが酵素により分解されてジフ
ルクトース・ジアンヒドリドIVとなり、これが目的物と
して回収される。この態様においては、培養中に間欠的
又は連続的にレバンを浜加することによってジフルクト
ース・ジアンヒドリドIVの増収を図ることもできる。
して含有する培地中で本発明の細菌を培養する方法であ
る。この方法においては、培地中のレバンの一部が細菌
に資化されて菌体の増殖に用いられ、それによりジフル
クトース・ジアンヒドリドIV合成酵素が生産される。そ
して培養中のレバンの残りが酵素により分解されてジフ
ルクトース・ジアンヒドリドIVとなり、これが目的物と
して回収される。この態様においては、培養中に間欠的
又は連続的にレバンを浜加することによってジフルクト
ース・ジアンヒドリドIVの増収を図ることもできる。
【００１３】他の反応方法は、培養物から、菌体、培養
濾液等を分離した後、これらを酵素源として用いて培養
とは別の段階として反応を行う方法である。この方法の
最も便利な態様は、培養物から濾液又は上清液を回収
し、これを粗酵素液として用い、例えばリン酸緩衝液、
クエン酸緩衝液、ほう酸緩衝液等の緩衝液中でレバンの
分解を行う方法である。
濾液等を分離した後、これらを酵素源として用いて培養
とは別の段階として反応を行う方法である。この方法の
最も便利な態様は、培養物から濾液又は上清液を回収
し、これを粗酵素液として用い、例えばリン酸緩衝液、
クエン酸緩衝液、ほう酸緩衝液等の緩衝液中でレバンの
分解を行う方法である。
【００１４】この場合の反応液のpHは４．５〜１１．
５、好ましくは４．５〜７．５、例えばpH５．５であ
り、反応温度は２０℃〜７０℃、好ましくは３０℃〜５
０℃である。反応における基質レバンの初期濃度は酵素
濃度等により異なるが０．１％〜１０％、好ましくは
０．５％〜５．０％である。反応時間は、使用する酵素
量、基質であるレバンの量等により異なるが１０分〜２
４時間、好ましくは１時間〜８時間である。反応液又は
培溶液からのジフルクトース・ジアンヒドリドIVの回収
・精製に用いられる常法に従って行うことができ、例え
ば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、活性炭カラ
ムクロマトグラフィー、凍結乾燥等により行うことがで
きる。
５、好ましくは４．５〜７．５、例えばpH５．５であ
り、反応温度は２０℃〜７０℃、好ましくは３０℃〜５
０℃である。反応における基質レバンの初期濃度は酵素
濃度等により異なるが０．１％〜１０％、好ましくは
０．５％〜５．０％である。反応時間は、使用する酵素
量、基質であるレバンの量等により異なるが１０分〜２
４時間、好ましくは１時間〜８時間である。反応液又は
培溶液からのジフルクトース・ジアンヒドリドIVの回収
・精製に用いられる常法に従って行うことができ、例え
ば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、活性炭カラ
ムクロマトグラフィー、凍結乾燥等により行うことがで
きる。
【００１５】生成物がジフルクトース・ジアンヒドリド
IVであることの確認は薄層クロマトグラフィー（薄層
板：シリカゲル、展開溶媒：ｎ−ブタノール／エタノー
ル／水＝２／１／１）によって行うことができる。まず
生成物のＲｆ値がジフルクトース・ジアンヒドリドIVに
一致すること、および生成物の塩酸分解物を展開すると
フルクトースに一致することから確認される。さらに生
成物のマススペクトル又はＮＭＲスペクトルからも確認
できる。
IVであることの確認は薄層クロマトグラフィー（薄層
板：シリカゲル、展開溶媒：ｎ−ブタノール／エタノー
ル／水＝２／１／１）によって行うことができる。まず
生成物のＲｆ値がジフルクトース・ジアンヒドリドIVに
一致すること、および生成物の塩酸分解物を展開すると
フルクトースに一致することから確認される。さらに生
成物のマススペクトル又はＮＭＲスペクトルからも確認
できる。
【００１６】本発明の微生物が生産するジフルクトース
・ジアンヒドリドIV合成酵素の、粗酵素の状態での至適
pHは、反応濃度、レバン終濃度１％、粗酵素１．４６Ｕ
／mlで測定した場合図２のＡに示す通り５．５であり、
至適温度は、pH６．０で測定した場合図２のＢに示す通
り約５０℃であった。また、pH耐性は、４℃にて２４時
間のpH処理（Britton-Robinson緩衝液）において、図３
のＡに示すごとくpH４．５〜１１．５において安定であ
った。また温度耐性は、図３のＢに示すごとく、pH６．
０にて２０分間の熱処理において、４０℃まで９０％以
上の残存活性を示した。
・ジアンヒドリドIV合成酵素の、粗酵素の状態での至適
pHは、反応濃度、レバン終濃度１％、粗酵素１．４６Ｕ
／mlで測定した場合図２のＡに示す通り５．５であり、
至適温度は、pH６．０で測定した場合図２のＢに示す通
り約５０℃であった。また、pH耐性は、４℃にて２４時
間のpH処理（Britton-Robinson緩衝液）において、図３
のＡに示すごとくpH４．５〜１１．５において安定であ
った。また温度耐性は、図３のＢに示すごとく、pH６．
０にて２０分間の熱処理において、４０℃まで９０％以
上の残存活性を示した。
【００１７】
【実施例】アルスロバクター・ニコチノヴォランス（Ar
throbacter nicotinovorans）ＧＳ−９を、斜面培地
（１Ｌ当たりポリペプトン５ｇ、肉エキス５ｇ、グルコ
ース１０ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、寒天１５ｇ、pH７．
２）上に培養し、その培養物の１白金耳を、１００mLの
本培養培地（１Ｌ当たり、レバン１０ｇ、ＮＨ4 ＮＯ 3
２．０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５ｇ、ＫＣｌ
０．５ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５ｇ、ＦｅＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ ０．０１ｇ、酵母エキス０．２ｇ、ＣａＣＯ3
２０ｇ、pH７．０）を収容した５００mL容三角フラス
コに植菌し、２７℃で２４時間振とう培養した。この培
養液を遠心分離し菌体除去後、上澄みを粗酵素液とし
た。
throbacter nicotinovorans）ＧＳ−９を、斜面培地
（１Ｌ当たりポリペプトン５ｇ、肉エキス５ｇ、グルコ
ース１０ｇ、塩化ナトリウム３ｇ、寒天１５ｇ、pH７．
２）上に培養し、その培養物の１白金耳を、１００mLの
本培養培地（１Ｌ当たり、レバン１０ｇ、ＮＨ4 ＮＯ 3
２．０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏ ０．５ｇ、ＫＣｌ
０．５ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 ０．５ｇ、ＦｅＳＯ4 ・７
Ｈ2 Ｏ ０．０１ｇ、酵母エキス０．２ｇ、ＣａＣＯ3
２０ｇ、pH７．０）を収容した５００mL容三角フラス
コに植菌し、２７℃で２４時間振とう培養した。この培
養液を遠心分離し菌体除去後、上澄みを粗酵素液とし
た。
【００１８】次にpH６．０の０．１Ｍ燐酸緩衝液に２０
ｇのレバンを溶解した溶液１Ｌのうち０．５mLに先の上
澄みを０．５mL混合し３７℃で２時間反応を行った。反
応液に生成したジフルクトース・ジアンヒドリドIVの濃
度は高速液体クロマトグラフィーの分析（カラム：ＹＭ
Ｃ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ、溶離液：水、カラム温度
室温）により１４．５ｇ／Ｌであった。反応液の経時変
化を薄層クロマトグラフィーにより分析した結果を図１
に示す。ジフルクトース・ジアンヒドリドIV以外の生成
物は検出されなかった。
ｇのレバンを溶解した溶液１Ｌのうち０．５mLに先の上
澄みを０．５mL混合し３７℃で２時間反応を行った。反
応液に生成したジフルクトース・ジアンヒドリドIVの濃
度は高速液体クロマトグラフィーの分析（カラム：ＹＭ
Ｃ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ−ＡＱ、溶離液：水、カラム温度
室温）により１４．５ｇ／Ｌであった。反応液の経時変
化を薄層クロマトグラフィーにより分析した結果を図１
に示す。ジフルクトース・ジアンヒドリドIV以外の生成
物は検出されなかった。
【００１９】
【発明の効果】本発明のアルスロバクター・ニコチノヴ
ォランス（Arthrobacter nicotinovorans ）を用いるこ
とにより、レバンから選択的にジフルクトース・ジアン
ヒドリドIVが合成され、ほかのフルクトオリゴ糖が実質
上生成しない。
ォランス（Arthrobacter nicotinovorans ）を用いるこ
とにより、レバンから選択的にジフルクトース・ジアン
ヒドリドIVが合成され、ほかのフルクトオリゴ糖が実質
上生成しない。
【図１】図１はアルスロバクター・ニコチノヴォランス
ＧＳ−９株の培養上澄液をレバンに作用させた場合に生
ずる生成物を薄層クロマトグラフィーにより経時的に分
析した結果を示すスケッチ図である。図中Ｓ１及びＳ２
は標準物質を示す。
ＧＳ−９株の培養上澄液をレバンに作用させた場合に生
ずる生成物を薄層クロマトグラフィーにより経時的に分
析した結果を示すスケッチ図である。図中Ｓ１及びＳ２
は標準物質を示す。
【図２】図２は、本発明で使用する酵素の粗精製物の至
適pH（Ａ）及び至適温度（Ｂ）を示すグラフである。
適pH（Ａ）及び至適温度（Ｂ）を示すグラフである。
【図３】図３は、本発明で使用する酵素の粗精製物のpH
安定性（Ａ）及び温度安定性（Ｂ）を示すグラフであ
る。
安定性（Ａ）及び温度安定性（Ｂ）を示すグラフであ
る。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 後藤 敬子 北海道札幌市北区北９条西９丁目 北海道 大学農学部内
Claims (2)
- 【請求項１】 アルスロバクター・ニコチノヴォランス
（Arthrobacter nicotinovorans）由来のジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIV合成酵素または酵素含有物とレバ
ンとを接触せしめることによりレバンからジフルクトー
ス・ジアンヒドリドIVを合成しジフルクトース・ジアン
ヒドリドIVを採取することを特徴とするジフルクトース
・ジアンヒドリドIVの製造法。 - 【請求項２】 前記アルスロバクター・ニコチノヴォラ
ンスが、アルスロバクター・ニコチノヴォランスＧＳ−
９（ＦＥＲＭ Ｐ−１５２８５）である請求項第１に記
載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31889395A JP3531848B2 (ja) | 1995-12-07 | 1995-12-07 | ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｖの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31889395A JP3531848B2 (ja) | 1995-12-07 | 1995-12-07 | ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｖの製造法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09154594A true JPH09154594A (ja) | 1997-06-17 |
| JP3531848B2 JP3531848B2 (ja) | 2004-05-31 |
Family
ID=18104149
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31889395A Expired - Lifetime JP3531848B2 (ja) | 1995-12-07 | 1995-12-07 | ジフルクトース・ジアンヒドリドｉｖの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3531848B2 (ja) |
-
1995
- 1995-12-07 JP JP31889395A patent/JP3531848B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3531848B2 (ja) | 2004-05-31 |
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