JPH09194406A - 蛋白質標識のための放射性ハロゲン化化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 血清中のフェリチン濃度の in vitro インビ
トロ診断的測定に用いる放射性ハロゲン化蛋白質を得る
こと及びこれを得るための放射性ハロゲン化化合物を提
供する。 【解決手段】 放射性ハロゲン化化合物としては、 ^*Ｘ
がヨウ素，臭素，弗素或いはアスタチンの放射性同位元
素であり、Ａr が芳香族又は複素式芳香族環であり、Ｒ
が、前記放射性同位元素が置換される上記の環を強く活
性化せず、蛋白質の抱合に適する官能基をもつ短鎖置換
基である ^*Ｘ−Ａr −Ｒの式により表明される化合物。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は臨床的診断および治療の
際に診断薬、治療薬として有用な蛋白質、特に抗体を標
識化する新規な放射性ハロゲン化化合物に関する。

【０００２】

【発明の背景】放射性ハロゲン化蛋白質は広範囲にわた
る科学的研究の対象物であったし、invitroとin vivo
の両方の各種の臨床的応用に有効であるという見込があ
る。例えば、放射性ヨウ素化フェリチンは血清中のフェ
リチン濃度のin vitro 診断的測定に用いられる。放射
性ヨウ素化甲状腺刺激ホルモンは同様の検定に用いられ
る。

【０００３】ハロゲンの放射性核種は診断的撮影および
放射線療法の両方にとって非常に魅力的なものとする性
質をもつ。例えば、ヨウ素-123のような放射性ヨウ素
（Ｔ 1／2 ＝13h ， 159Ｋe Ｖガンマ線，電子捕獲）は
現在のガンマ線カメラによる撮影には殆ど理想的であ
り、ヨウ素-131（Ｔ 1／2 ＝８d ， 364Ｋe Ｖガンマ
線，ベータ粒子）は、より質の低い像を作るけれども、
甲状腺の臨床的放射線療法に有効であることが示されて
いる。同様に、臭素‐75（Ｔ 1／2 ＝ 1.6h ，陽電子）
および臭素‐76（Ｔ 1／2 ＝16h ，陽電子）のような臭
素放射性核種は陽電子断層撮影にとってよい性質をも
ち、臭素‐77（Ｔ 1／2 ＝ 2.4d ，いくつかのガンマ
線，電子捕獲）は放射線療法にとってよい性質をもつ。
フッ素‐18（Ｔ 1／2 ＝110min，陽電子）およびアスタ
チン‐21（Ｔ 1／2 ＝ 7.2h ，アルファ粒子）のような
他の放射性ハロゲンはまた放射線撮影および放射線療法
にとって将来有望な物質である。

【０００４】腫瘍細胞表面の抗原に対する高い特異性と
親和性により癌組織に局在するモノクローナル抗体の開
発は、診断と治療に対する放射性標識抗体の臨床的応用
の期待を増した。この抗体はその高い特異性により、癌
部位に放射能を放出する特異的放射性核種を付着させる
担体分子として有望である。

【０００５】残念ながら、in vivo で使用するための放
射性ハロゲン標識抗体の日常的な臨床的診断または治療
への応用は今のところない。抗体や他の蛋白質の直接的
放射性ハロゲン標識は難しいことが分っている。抗体は
放射線標識反応条件に対していろいろな感受性を示し、
放射性ハロゲン化に必要な酸化反応条件は特に有害であ
る。蛋白質の直接的放射性ヨウ素化は日常的となってき
ているが、蛋白質の生物学的活性の無視できない減少が
起ることが非常によくある。付着した放射性ラベルの安
定性もいろいろ変化すると考えられる。例えば、抗体か
らの放射性ヨウ素の喪失はある標識抗体では24時間で50
％にも上ることが分っている。放射性臭素化は放射性ヨ
ウ素化よりも強い酸化反応条件を必要とし、蛋白質を直
接に放射性臭素化する試みは、高価で面倒であるけれど
も酵素を酸化剤として使用しなければ、成功例は少な
い。さらに、蛋白質の直接的放射性ハロゲン化は先ずチ
ロシル残基で起り、チロシンの放射性化フェノール環は
結果として生ずるオルト‐置換放射性ハロゲンラベルの
固有の電子的不安定の一因となっている。放射性ハロゲ
ンラベルはまた立体障害効果の原因にもなっており、さ
らに構造的に同じ甲状腺ホルモン、すなわちチロキシン
を異化するデイオジナーゼ酵素に利用できる。

【０００６】直接的な放射性ハロゲン化に必要な厳しい
反応条件に蛋白質をおくのを回避する１つのアプローチ
は別々の反応容器中で放射線標識され、その結果緩い反
応条件下で蛋白質にカップルされる小さな分子の使用で
ある。市販されているＢolton ‐Ｈunter 試薬、Ｎ‐ス
クシンイミジル‐３‐（４‐ヒドロキシフェニル）プロ
ピオネートはこのアプローチを基本としている。それに
より、中程度の放射性標識収量が放射性ヨウ素を用いて
得られているが（放射性蛋白質の35〜60％収量）、放射
性ヨウ素ラベルの安定性は化学的に類似した放射性ヨウ
素化チロシル残基について述べたのと同じ問題がある。
同様に、市販されているＷood's 試薬、メチル‐４‐ヒ
ドロキシベンズイミデートは蛋白質への付着の前に放射
性ヨウ素化することができる。しかしながら、放射性ヨ
ウ素化生成物はまたオルト‐ヨウ素化フェノールの固有
の不安定性にも見舞われる。これらの試薬は望まれるだ
けの安定な放射性ラベルを生じないけれども、それを使
用しても蛋白質の非活性化は少ししか起らないので、そ
れは放射性ヨウ素化に広く利用されている。

【０００７】活性化芳香族環は高い比活性の放射性ヨウ
素をこれらの分子に導入するために必要であるのでフェ
ノール環はＢolton ‐Ｈunter 試薬とＷood s 試薬の両
方に利用されている。放射性ラベルがより安定につくよ
うに、放射性ハロゲンをフェノール以外の芳香族環を含
む小さな分子に導入することが非常に望ましい。さら
に、ヒドロキシルが存在しないならば、放射性ラベルは
電子および立体障害効果を余り受けない。

【０００８】

【発明の概要】本発明は高比放射能ハロゲン放射性核種
を蛋白質の生物学的活性を保持する条件下で蛋白質に抱
合されうる小さな分子の非活性化芳香族環に導入し、非
活性化芳香族環への放射性ハロゲンの置換はフェノール
のような活性化芳香族環へのこれまでの方法による置換
よりも安定性の高い放射性標識蛋白質を提供する。さら
に、放射性ハロゲンは、デイオジナーゼ酵素による攻撃
をうけやすくない放射性ラベルを与えるためにヒドロキ
シ官能性を含まない芳香族環のパラまたはメタのような
位置に置換することができる。

【０００９】この方法によって、ハロアリール化合物は
Ｓn （n-Ｂu ）₃ またはＳn Ｍe ₃の有機金属グループ
の１つによりメタル化される。その結果生成するアリー
ル錫化合物は、Ｈg Ｘ₂ 、Ｈg （ＯＡc ）₂ 、ＢＸ₃ 、
またはＢＺ₃ （これらにおいてＸはＣl 、Ｂr 、または
Ｉで、Ｚはアルキルまたはアルコキシである。）からな
る群から選ばれる１つと部位特異反応においてメタル転
移される。その結果、メタル化化合物は脱メタル反応に
よって放射性ハロゲン化される。蛋白質への抱合に適し
た官能基が放射性ハロゲン化の後あるいはむしろ前に加
えられる。

【００１０】Ｒ₁ が放射性ハロゲンかあるいは前述の有
機金属グループの何れか１つであり、Ａr が芳香族また
は複素式芳香族環であり、Ｒ₂ が前記芳香族環を強く活
性化せず、蛋白質の生物学的活性を保持する短鎖置換基
であるところの式、Ｒ₁ −Ａr −Ｒ₂ で表わされる化合
物も提供される。本発明の放射性ハロゲン化化合物は診
断試薬や治療薬に用いられるモノクローナル抗体のよう
な蛋白質に抱合されうる。

【００１１】

【好ましい具体例の説明】本発明は、 ^*Ｘが放射性ハロ
ゲンであり、Ａr が芳香族または複素式芳香族環であ
り、Ｒが、放射性ハロゲン ^*Ｘが置換される環Ａr を強
く活性化せず、蛋白質の生物学的活性を保持する例えば
アシル化のような緩い条件下で蛋白質への抱合に適した
官能基をもつ短鎖置換基であるところの式Ｉ^* Ｘ−Ａr −Ｒ I の放射性ハロゲン化化合物に関する。式Ｉの化合物は診
断または治療に用いられる試薬を提供するために抗体、
抗原結合フラグメント，アミノ酸重合体，血漿蛋白質，
ペプチドホルモンのような蛋白質、さらに具体的にはモ
ノクローナル抗体あるいは血漿蛋白質のような蛋白質
（あるいは引き続いて蛋白質にカップルされるアミノ酸
重合体のような担体）にカップルされる。

【００１２】ここで用いられているように、記号 ^*Ｘは
ヨウ素、特にＩ-123，Ｉ-125，およびＩ-131；臭素、特
にＢr-75，Ｂr-76，およびＢr-77；フッ素、特にＦ‐1
8；およびアスタチン、特にＡt -211の放射性同位元素
を示す。診断的撮影目的のための望ましい放射性ハロゲ
ン ^*ＸはＩ-131を含み、ガンマカメラによる撮影にはＩ
-123が最も望ましい。また陽電子断層撮影にはＦ-18 、
Ｂr-75、およびＢr-76が望ましい。診療的放射線療法の
ための望ましい放射性ハロゲン ^*ＸはＩ-131，Ｂr-77，
およびＡt -211を含む。in vitro放射線免疫検定のため
の試薬の調製に用いられる望ましい放射性ハロゲン ^*Ｘ
はＩ-125とＩ-131を含む。本発明により、デハロゲナー
ゼ酵素による異化作用を受けにくい放射性ハロゲンを提
供するために、放射性ハロゲン ^*Ｘは置換基Ｒに対して
環Ａr 上のパラ‐またはメタ‐位にある。

【００１３】記号Ａr は芳香族または複素式芳香族環を
示す。望ましい環Ａr はベンゼン、ピリジン、フラン、
およびチオフェンを含み、後者の３つが水溶性促進のた
めにより好ましい。環Ａr の炭素原子への放射性ハロゲ
ンの付加は芳香族または複素式芳香族環の炭素‐ハロゲ
ン結合の結合度増加によりアルキル炭素原子への付加以
上に望ましい。環Ａr の性質は決定的ではなく、モノ
‐、ビ‐、トリ‐あるいはより高い環数であってもよい
が、単環は水溶性が大きいために望ましい。環Ａr は全
て炭素原子から成るかあるいは窒素、酸素、または硫黄
のようなヘテロ原子から成る。ピリジン、フラン、ある
いはチオフェンのような複素式芳香族環を含んでいるこ
とにより、放射性ヨウ素化化合物抱合体の水溶性を増す
ことができる。ニトロ、スルホン酸、カルボン酸、ある
いはジアルキルアミノ基のような極性置換基を用いて、
^*ＸとＲに作用せずに、環Ａr をさらに置換することは
水溶性を促進するためにも利用される。水溶性の増進は
蛋白質との抱合反応においてより高い収率（および凝集
の可能性をより少なくする）を与え、抗体抱合体の好脂
性の摂動を少なくするために望ましい。他の置換基は酵
素的分解に対していくらかの調整を行うために加えられ
る。

【００１４】記号Ｒは次の３つの必要条件に合致する置
換分を示す。先ず、Ｒ置換基は求電子的置換反応に対し
て環Ａr を強く活性化するものであってはならない。別
の言葉で言うと、Ｒは遊離のヒドロキシあるいは１級ア
ミン置換反応により生ずる増加ほどにＡr の電子密度を
増す結合により環Ａr に結合されるものであってはなら
ない。第２に、非抱合あるいは開裂した放射性ハロゲン
化分子が腎臓により迅速に除去されるように、Ｒは短鎖
置換基でなければならない。このように、Ｒはアリール
結合と蛋白質抱合のための官能基の間のアルキルまたは
他のスペーサー鎖を含むことが考えられるが、このよう
なスペーサー鎖は好ましくは５以下の、最も好ましくは
３以下の直鎖炭素原子を含むべきである。第３に、Ｒ置
換基は蛋白質の生物学的活性を保持するアシル化または
アミジネーションのような緩い抱合条件下での蛋白質へ
の抱合に用いられる官能基をもっていなければならな
い。このように、Ｒは蛋白質、糖蛋白質、あるいは続い
て蛋白質分子に抱合されるアミノ酸重合体のような担体
分子のアミノ酸または炭水化物残基上の対応する官能基
（あるいは抱合結合部位）への共有結合のためのイミド
エステルまたはイミデートエステルのような官能基（こ
こではＱと名付ける）を与えなければならない。

【００１５】前述の目的のための適切な官能基Ｑはフェ
ノールエステル（例えば、パラ‐ニトロフェノール），
イミドエステル（例えば、スクシンイミドエステル），
イミデートエステル，酸無水物，アシルスクシンイミ
ド，アルデヒド，イソチオシアネート，チオール，ジア
ゾ，アミン，ヒドラジン，ハロゲン化アルキル，マレイ
ミドのようなミカエル（Ｍichael）受容体α，β‐不飽
和カルボニル化合物、および共有結合により分子を蛋白
質に結合させるのに用いることのできる他の基を含む。
Ｒ置換基が官能基Ｑの前駆物質を含む式Ｉの放射性ハロ
ゲン化化合物も提供される。適切な前駆物質としては、
Ｑがフェノールエステル，イミドエステル，酸無水物，
アシルスクシンイミド，またはマレイミドであるカルボ
ン酸，Ｑがイミデートエステルであるニトリル，Ｑがア
ルデヒドであるアルコール，Ｑがイソチオシアナート，
チオール，ヒドラジンまたはアミンであるハロゲン化
物，およびＱがジアゾまたはマレイミドであるアミンが
含まれる。

【００１６】代表的なＲ置換基はイミドエステル，アル
キルイミドエステル，アミドアルキルイミドエステル，
イミデートエステル，アルキルイミデートエステルおよ
びアミドアルキルイミデートエステルを含む。

【００１７】本発明の代表的な放射性ハロゲン化化合物
は、 ^*Ｘが前述のような放射性ハロゲンであり、n は整
数であり、Ｑは前述のような官能基であるところの式II
とIII の化合物を含む。

【００１８】

【化１】

【００１９】放射性ハロゲンは芳香族環Ａr のどの放射
性異性体としても位置することができるが、放射性ハロ
ゲンが立体的不安定性およびデイオディナーゼ酵素によ
る異化を受けにくくするためにパラ‐あるいはメタ‐置
換が好ましい。スペーサー成分（ＣＨ₂ ）n は12までで
あるが、好ましいのはわずか５の直鎖炭素原子を含む直
鎖または分枝鎖アルキルまたはヘテロアルキル基であ
る。最も望ましい具体例においては、わずか３の直鎖炭
素原子が官能基Ｑを芳香族環から分離している。すなわ
ちｎ＝０，１，２，または３である。診断的撮影のため
にバックグラウンド放射能を迅速に取り除き、生体器官
に対する放射線量を最小にするためには、アルキルスペ
ーサー成分は、非抱合で化学的にまたは酵素的に開裂し
た放射性ハロゲン化化合物が心臓または肝臓における脂
肪酸分解経路を通じてよりも腎臓を通じて迅速に除去さ
れるように、短くしなければならない。他方、ある応用
のためには、放射性標識アリール環と蛋白質の間の短い
アルキルまたはヘテロアルキルスペーサーが望ましいと
考えられる。

【００２０】本発明の放射性ハロゲン化化合物は、Ｎ‐
スクシンイミジル３‐（４′‐［ ^*Ｘ］ハロフェニル）
プロピオネート；メチル３‐（４′‐［ ^*Ｘ］ハロフェ
ニル）‐プロピオイミデート；Ｎ‐スクシンイミジル４
‐［ ^*Ｘ］ハロベンゾエート；メチル４‐［ ^*Ｘ］ハロ
ベンズイミデート；Ｎ‐スクシンイミジル４‐［ ^*Ｘ］
ハロベンズアミドアセテートまたはＮ‐スクシンイミジ
ル４‐［ ^*Ｘ］ハロ馬尿酸エステル；メチル４‐
［ ^*Ｘ］ハロベンズアミドアセトイミデート；および４
‐［ ^*Ｘ］ハロベンズアミドアセトニトリルの化合物か
らなる群から選ばれるが、さらに具体的な実施例は、こ
れに限られものではないが、Ｎ‐スクシンイミジル３‐
（４′‐［ ¹³¹Ｉ］ヨードフェニル）‐プロピオネー
ト、メチル３‐（４′‐［ ¹³¹Ｉ］ヨードフェニル）プ
ロピオイミデート、Ｎ‐スクシンイミジル４‐
［ ¹³¹Ｉ］ヨードベンゾエート、メチル４‐［ ¹³¹Ｉ］
‐ヨードベンズイミデート、Ｎ‐スクシンイミジル４‐
［ ¹³¹Ｉ］‐ヨードベンズアミドアセテートあるいはＮ
‐スクシンイミジル４‐［ ¹³¹Ｉ］ヨード馬尿酸エステ
ル、メチル４‐ ［ ¹³¹Ｉ］ヨードベンズアミドアセト
イミデート、および４‐［ ¹³¹Ｉ］ヨードベンズアミド
アセトニトリルを含む。

【００２１】また、本発明によりＭがＳn （n-Ｂu ）₃
（Ｂu はブチル）、Ｓn Ｍe ₃ （Ｍe はメチル）、Ｈg
Ｘ（ＸはＣl 、Ｂr またはＩ）、Ｈg ＯＡc （ＯＡc は
アセテート）、Ｂ（ＯＨ）₂ 、あるいはＢＺ₂ （Ｚはわ
ずか５個、好ましくはより少数の炭素原子を含むアルキ
ルまたはアルコキシ）であり、Ａr とＲの両者は式Ｉに
より定義されているところの式IV^* Ｘ−Ａr −Ｒ IV の有機金属中間分子も提供される。有機金属基ＭとＲは
Ａr においてパラ‐またはメタ‐位であることが望まし
い。上述の置換基Ｒの官能基がフェノールエステル，イ
ミドエステル，イミデートエステル，酸無水物，アシル
スクシンイミド，アルデヒド，イソチオシアネート，チ
オール，ジアゾ，アミン，ヒドラジン，ハロゲン化アル
キル、およびマレイミドからなる群から選ばれる。本発
明の有機金属中間分子の実例は、これらに限られるもの
ではないが、Ｎ‐スクシンイミジル３‐（４′‐トリブ
チルスタンニルフェニル）プロピオネート，メチル３‐
（４′‐トリブチルスタンニルフェニル）プロピオイミ
デート，Ｎ‐スクシンイミジル４‐トリブチルスタンニ
ルベンゾエート，メチル４‐トリブチルスタンニルベン
ズイミデート，Ｎ‐スクシンイミジル４‐トリブチルス
タンニルベンズアミドアセテートまたはＮ‐スクシンイ
ミジル４‐トリブチルスタンニル馬尿酸エステル，メチ
ル４‐トリブチルスタンニルベンズアミドアセトイミデ
ートおよび４‐トリブチルスタンニルベンズアミドアセ
トニトリルを含む。

【００２２】式Ｉの放射性ハロゲン化化合物を合成する
方法について説明する。

【００２３】第１の合成方法は ^*Ｘがヨウ素、臭素、フ
ッ素、またはアスタチンの放射性同位元素であり、Ａr
が芳香族環または複素環式芳香族環であり、およびＲ
が、上記放射性同位元素が置換されている上記環を強く
活性化せず、また蛋白質の生物学的活性を保持する条件
下で蛋白質に対する抱合に適した官能基をもつ短鎖置換
基であるところの式^* Ｘ−Ａr −Ｒ をもつ放射性ハロゲン化化合物を合成する方法であっ
て、（ａ）上記官能基あるいは上記官能基の前駆物質を
もつハロ芳香族化合物のハロゲンを、Ｓn （n-Ｂu ）₃
およびＳn Ｍe ₃ から選ばれる有機金属グループで置換
し、（ｂ）ステップ（ａ）の生成物の前駆物質グループ
を上記官能基に転換し、および（ｃ）上記有機金属グル
ープを除去し、ヨウ素、臭素、フッ素またはアスタチン
の放射性同位元素を置換するためにステップ、（ａ）ま
たは（ｂ）の官能基含有生成物をハロ脱メタル化するス
テップから成る放射性ハロゲン化化合物の合成方法であ
る。

【００２４】別の合成方法は、第１の合成方法におい
て、（ａ）上記官能基の前駆物質をもつハロ芳香族化合
物のハロゲンを、Ｓn （n-Ｂu ）₃ およびＳn Ｍe ₃ か
ら選ばれる有機金属グループで置換し、（ｂ）有機金属
グループを除去し、ヨウ素、臭素、フッ素またはアスタ
チンの放射性同位元素を置換するためにステップ（ａ）
の生成物をハロ脱メタル化し、また（ｃ）ステップ
（ｂ）の生成物の前駆物質グループを上記官能基に転換
するステップから成る放射性ハロゲン化化合物の合成方
法である。

【００２５】簡単に言うと、下に述べる３つの反応の１
つは官能基Ｑあるいは官能基Ｑの前駆動物質をもつハロ
芳香族誘導体の位置的異性体をメタル化するために使用
される。メタル化にはＳn （n ‐Ｂu ）₃ またはＳn Ｍ
e ₃ のようなトリアルキル錫試薬が用いられる。その結
果生成するアリール錫化合物は、ＸがＢr Ｉまたは好ま
しくはＣl で、Ｚがアルキルあるいはアルコキシである
ところの次の有機水銀あるいは有機ホウ素試薬、Ｈg Ｘ
₂ 、Ｈg （ＯＡc ）₂ 、ＢＸ₃ 、またはＢＺ₃の１つと
の部位特異性反応においてメタル転移される。その結果
生ずる有機金属中間物質は下に述べるメタル化反応によ
り代りにつくられる。スタンニル化あるいは別のメタル
化化合物は、官能基Ｑが存在してからが望ましいが、脱
メタル反応により放射性ハロゲン化される。

【００２６】前記有機金属試薬は既知の化学により得ら
れ、例えばＡlpha Ｐroducts ，Ｄanvers，ＭＡから市
販されている。

【００２７】式IVの有機金属中間分子の前駆動物質は既
知の化学により得られ、市販もされている。適切な前駆
物質分子は、パラ‐ブロム‐およびパラ‐ヨード安息香
酸（Ｐfaltz and Ｂauer，Ｓtamford,Ｃonn.）、パラ‐
ブロム‐およびパラ‐ヨードベンゾニトリル（Ｐfaltz
and Ｂauer）を含む。パラ‐ブロムフェニルプロピオン
酸の高収率の合成は調製例１に述べる。酸の対応するニ
トリルへの転換はＪ. Ｏrg. Ｃhem.41（７）：1187−11
91，1976年に述べられているようにして行うことができ
る。アリールスタナンの合成は次の明らかに異なった３
つの反応のいずれか１つにより行うことができる。第１
の反応においては、ハロ芳香族化合物は−100 ℃近くで
n‐ブチルリチウムとあるいは室温でマグネシウムと反
応させ、次いでアリール金属をトリアルキル錫試薬のハ
ロゲン化物誘導体と反応させる。第２の反応において
は、ハロ芳香族化合物はヘキサアルキルジ錫およびテト
ラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウムと反応さ
せる。第３の反応においては、ハロ芳香族化合物はトリ
アルキルスタンニルアルカリ（例えば、トリメチルスタ
ンニルナトリウム）と０℃でテトラグライム中で反応さ
せる。

【００２８】有機水銀および有機ホウ素中間物質の合成
は前述の方法によって（Ｏrganometallic Ｃhem.Ｒev.
１： 305− 329，1966；Ｔetrahedron 38（12）：1713
−1754，1982）または前記アリールスタナンのメタル転
移によって行われる。アリール錫化合物の前記有機水銀
または有機ホウ素グループの１つによるメタル転移は芳
香族環への部位特異性置換を達成するために行われる。
例えば、ＢＣl ₃ とのメタル転移は対応するアリール‐
ＢＣl ₂ 化合物を生じ、これは次に対応するアリール‐
Ｂ（ＯＨ）₂ 化合物に転換されるベースとなれる。Ｈg
（ＯＡc ）₂ との反応は、ハロゲン化物イオン（Ｘ）と
の反応によりアリール‐Ｈg Ｘにさらに転換される対応
するアリール‐Ｈg ＯＡc 化合物を生成する。

【００２９】放射線標識されることになっている化合物
を前述の蛋白質につけるには、所望の残留グループ、例
えばヒドロキシスクシンイミドを含むエステルにカルボ
ン酸前駆物質グループを転換することにより、あるいは
シアノ前駆物質をイミデートエステルに転換することに
よって得ることができる官能基Ｑが必要である。このよ
うな転換は蛋白質のアミノ基（例えばリジン残基）、チ
オールまたはヒドロキシ（あるいは余り好ましくないが
カルボキシレート）のような対応する官能基との反応へ
向って分子を活性化するものと考えることができる。ア
ルカリ金属中間物質の求核的性質により、これらの試薬
が使用される場合には、活性化イミドおよびイミデート
エステルあるいは他の求核的試薬に感受性のある前記官
能基Ｑはトリアルキル錫官能性を芳香族環に導入した後
でのみ合成することができる。従って、我々は、第２の
アリールスタナン合成反応は求核反応に感受性のある化
合物を製造するのに特に有用であることを認めた。活性
化イミドおよびイミデートエステルあるいは他の官能基
Ｑを放射性ハロゲンを導入する前につくることによっ
て、放射線化学的収率のロスと他の方法では生ずると思
われる放射線化学的不純物の取込みを避けられる。

【００３０】アリール錫かそうでなければ遊離のカルボ
ン酸またはそのスタンニルエステルからのメタル化誘導
体のＮ‐スクシンイミジルエイテルへの転換は、無水テ
トラヒドロフラン（ＴＨＦ）中でジシクロヘキシルカル
ボジイミド（ＤＣＣ）およびＮ‐ヒドロキシスクシンイ
ミド（ＮＨＳ）を用いて放射線ハロゲン化段階前に達成
される。しかしながら、シアノ化合物からのイミデート
エステルの合成はアリール‐金属結合、特にアリール錫
結合の酸不安定性により問題とされている。このよう
に、シアノ含有化合物はイミデートエステル生成の前に
放射性ハロゲン化される。望ましい方法は対応するハロ
ベンゾニトリルあるいはハロアリールアルキルニトリル
のイミデートエステルを生成し、その後でイミデート含
有化合物をヘキサアルキルジ錫およびテトラキス（トリ
フェニルホスフィン）パラジウムを用いて（第２のアリ
ールスタナン合成ルートを用いて）メタル化することで
ある。

【００３１】対応するＮ‐スクシンイミジルエステルの
放射線ハロゲン化は部位特異的脱メタル反応により所望
の化合物を生成する。

【００３２】具体的にはＮa ^*Ｘ， ^*ＸＣl または ^*Ｘ
−Ｘ（ ^*Ｘ₂ ）のような放射性ハロゲンを持つものは約
５％の酢酸／メタノール溶液の存在下にアリル錫誘導体
と結合する放射性ハロゲン化反応試薬がＮa ^*Ｘの場合
には、求電子性ハロゲン（^+*Ｘ）の生成を促進するため
にＮ‐クロロ‐サクシンイミド（ＮＣＳ）またはターシ
ャリーブチルハイポクロライドのような酸化剤が使用さ
れる。Ｎa ^*Ｘ反応試薬は上記酸化剤の添加前または後
に加えてよい。その後におこなわれるハロ脱錫反応の際
に、Ｓn （Ｂu ）₃ 置換基をもつ炭素に、^+*Ｘが求電子
付加によって加えられる。

【００３３】そこで、Ｓn （Ｂu ）₃ 置換基は置きかえ
られて放射性ハロゲン化された最終生成物が得られる。
反応混合物中に少量の燐酸塩緩衝が存在するとハロ脱錫
反応は促進される。Ｎ‐スクシンイミジルエステルの加
水分解の可能性により、反応は反応時間を最小にする条
件を用いて行うべきである。例えば、反応物質は反応時
間を短縮することによって加水分解を最小にするために
室温にもってくる。あるいは、加水分解が比較的遅い反
応混合物が用いられる。驚いたことには、反応混合物に
酢酸を加えるとＮ‐スクシンイミジルエステルの加水分
解が非常に遅くなる。例えば、４‐トリ‐n ‐ブチルス
タンニルベンゾエートのＮ‐スクシンイミジルエステル
は５％酢酸／メタノール溶液中で何ケ月も安定であるこ
とが認められており、例えばＢolton ‐Ｈunter 法で一
般に経験する短時間の安定性という欠点を有利に取り除
いている。

【００３４】放射性ハロゲン化反応混合物は精製あるい
はワークアップ工程の前に添加される稀チオ硫酸ナトリ
ウム溶液として調製されなければならない。残留する放
射性ハロゲン化物の分離はクロマトグラフィーによる分
離によって放射性標識蛋白質の精製の前あるいは精製の
間に簡単に行うことができる。

【００３５】放射性ハロゲン化反応は水、メタノール、
エタノール、あるいはその混合物のようなプロトン溶媒
中で実施される。アルコール溶媒は放射性化合物を蛋白
質溶液に加える前にうまく除去することができる（ある
いは逆もまた同じ）。また、２相システムは遊離の放射
性ハロゲン化物を標識化合物から分離する便利な方法で
あるので非プロトン溶媒（例えば四塩化炭素）を放射性
ハロゲン化に使用することができる。

【００３６】放射性ハロゲン化は放射線‐ＨＰＬＣによ
り、例えばＭe ＯＨ／１％ＨＯＡcの混合物で水中に稀
釈逆相高性能液体クロマトグラフカラム（Ｃ‐18）上で
監視し、精製することができる。

【００３７】また、放射性ハロゲンの導入が所望の放射
性ハロゲン化分子を与える適切な試薬と一緒に適切な官
能基Ｑをもつ化合物（IV）を含む薬瓶を含めた臨床使用
のための放射性薬剤キットも提供される。次いで、放射
性ハロゲン化生成物は、別々の薬瓶中に与えられるモノ
クローナル抗体のような蛋白質に抱合される。キットは
また放射性ハロゲン化蛋白質製品からの残留する前駆物
質と不純物のクロマトグラフィーによる分離のための１
個以上の小さなカラムを含む。

【００３８】本発明は次の調製例ならびに実施例と効果
確認結果によりさらに詳しく説明される。

【００３９】調製例１ ３‐（４′‐ブロムフェニル）
プロピオン酸の合成 窒素下で無水テトラヒドロフラン（ＴＨＦ）中に溶解し
た10.0g の2,4,4,‐トリメチル‐２‐オキサゾリン（88
mモル）を含むフラスコを−78℃（ドライアイス／アセ
トン浴）で10分間平衡を保たせた。このフラスコにゆっ
くりとn-ブチルリチウム（ 1.6Ｎ，85 mモル）55 mＬを
加えた。次に、淡黄色の溶液は−78℃で窒素のもとで20
0mＬの無水ＴＨＦ中に29.4g の（100mモル）４‐ブロム
ベンジル臭化物を含む第２のフラスコに移した。その添
加が完了したら、反応混合物は−78℃で20分間攪拌し
た。次に冷浴を取り外し、攪拌を３時間続けた。

【００４０】飽和ＮＨ₄ Ｃl の200mＬ量を慎重に加え、
２つの相を分離した。ＴＨＦ層を無水Ｍg ＳＯ₄ 上で乾
燥させ、油を生成させるために蒸発させた。この油を20
0mＬのジメトキシエタンと100mＬの３ＮＨＣl 中に溶解
し、５時間還流させるために加熱した。その結果生ずる
溶液を氷に注ぎ、淡黄褐色の固体を集めた（収量：17g
）。

【００４１】この固体を約300mＬの15％ＫＯＨ中に溶解
し、200mＬのジエチルエーテルで抽出した。ＫＯＨ溶液
を氷で稀釈し、濃ＨＣl で酸性化した。白色の沈澱物を
集め、Ｈ₂ Ｏで十分に洗った（収量：10g ）。

【００４２】調製例２ ４‐トリ‐n-ブチルスタンニル
ベンゾニトリルの合成 蒸留したばかりの無水ＴＨＦ中に１当量（例えば、100m
モル）の４‐ブロムベンゾニトリルを含むフラスコを窒
素のもとで約30分間約−100 ℃（ジエチルエーテル／液
体窒素浴）で平衡を保たせておいた。次に、このフラス
コに 1.1当量（例えば11 mモル）の n‐ブチルリチウム
溶液（ヘキサン中に 2.3Ｍ）を−90℃以下の反応温度を
保たせるような速度で添加した。添加が完了したら、反
応混合物を更に５分間約−100 ℃で攪拌した。

【００４３】次に、無水ＴＨＦ中の 1.1当量（例えば、
11 mモル）のトリ‐n-ブチル錫塩化物の溶液を１滴づつ
加えた。前と同じく、その添加は反応温度を−90℃以下
に保つような速度で行った。その添加が完了したら、反
応混合物を30分間−100 ℃で攪拌した。次いで、冷浴を
取り除き、反応混合物は２時間以上で室温になるように
した。

【００４４】次に、ＴＨＦを回転蒸発により除去し、乳
状の油が得られた。この油をＣＨ _{2 C}l _{2 中}に溶解し、
Ｈ₂ Ｏで洗い、Ｍg ＳＯ₄ 上で乾燥させた。ＣＨ₂ Ｃl
₂の蒸発により淡黄色の油が生成した（96％）。 132℃
／100 ミクロンでの蒸留によるこの油の精製により、Ｈ
ＰＬＣ分析で85％純度の無色の油が得られた：ＨＮＭＲ
（ＣＤＣl ₃ ）δ 0.68 − 2.0（m ，27Ｈ）、 7.68
（s ，４Ｈ）。

【００４５】調製例３ トリ‐n-ブチルスタンニル４‐
（トリ‐n-ブチルスタンニル）ベンゾエートの合成 方法１：−100 ℃（ジエチルエーテル／液体窒素）に冷
やした無水ＴＨＦ100mＬ中の 2.01g（10 mモル）の４‐
ブロム安息香酸（Ａlfa Ｐroducts 社）の溶液に（温度
計、添加漏斗および磁気攪拌棒を装備したフラスコ中
で）、ヘキサン（Ａldrich社）中の13.5 mＬ（21 mモ
ル）の 1.55 Ｎ n-ブチルリチウムを内部温度が−90℃
を越えないような速度で１滴づつ添加した。粘性のある
混合物を−78℃にまで温め、 5.70mＬ（ 6.83g）、21 m
モル）の塩化 n‐トリブチル錫（Ａldrich社）を15分以
上かけて添加した。添加が完了したら、混合物を室温に
までもってきて、１時間攪拌した。次に、混合物に150m
Ｌの飽和（ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄溶液を添加し、混合物を150
mＬのジエチルエーテルで抽出した。上層をかん水で洗
い、Ｍg ＳＯ₄ で乾燥し、ろ過し、濃縮して 7.49 g の
液体が得られた。シリカゲルクロマトグラフィーによる
精製（25％Ｅt ＯＡc ／ヘキサン）で 2.32g（33％）の
トリ‐n-ブチルスタンニル４‐（トリ‐n-ブチルスタン
ニル）ベンゾエートが粘性のある油として得られた： ¹
ＨＮＭＲ（ＣＣl ₄ ）δ 0.32 − 2.70 （m ，54Ｈ）、
7.50 （d ，Ｊ＝７Ｈz ，２Ｈ）、 7.99 （d ，Ｊ＝７
Ｈz ，２Ｈ）。ＩＲ（neat）1635，1450，1315cm^-1。

【００４６】方法２：Ｎ₂ 雰囲気の下で 7.6 mＬのヘキ
サブチル錫（Ａlfa 社）および10 mＬのトルエン中の
1.00g（５m モル）の４‐ブロム安息香酸（Ａlfa 社）
の攪拌した懸濁液に58mgのテトラキス（トリフェニルホ
スフィン）パラジウム（Ｏ）（Ａldrich社）を添加し、
混合物を95℃で20時間攪拌した。涼しい時には、オレン
ジ色の混合物が100mＬの10％水性ＫＦ液と100mＬのジエ
チルエーテルの間で分配された。エーテル層はかん水で
洗い、Ｍg ＳＯ₄ で乾燥し、ろ過し、濃縮し、Ｋugelro
hrにより蒸留し、 1.14g（33％）のトリ‐n-ブチルスタ
ンニル４‐（トリ‐n-ブチルスタンニル）ベンゾエート
が粘性のある油として得られた： 0.25mm Ｈg 、 200ー
250℃で蒸留。

【００４７】調製例４ Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ト
リ‐n-ブチルスタンニル）ベンゾエート 18.4 mＬの無水ＴＨＦ中の 1.29g（ 1.84 m モル）のト
リ‐n-ブチルスタンニル４‐（トリ‐n-ブチルスタンニ
ル）ベンゾエートの溶液に417mg （ 2.02mモル）のジシ
クロヘキシルカルボジイミド（Ｓigma社）と212mg （
1.84mモル）のＮ‐ヒドロキシスクシンイミド（Ｓigma
社）を添加し、混合物を室温で15時間攪拌した。固体は
ろ過によって除去し、混合物を濃縮した。シリカゲルク
ロマトグラフィーにる精製（25％Ｅt ＯＡc （ヘキサ
ン）で731mg （78％）のＮ‐スクシンイミジル４‐（ト
リ‐n-ブチルスタンニル）ベンゾエートが生成した：
ＨＮＭＲ（ＣＤＣl ₃ ）δ 0.50 ‐ 2.20 （m ，27
Ｈ）、 2.90 （s ，４Ｈ）、 7.65（d ，Ｊ＝８Ｈz ，
２Ｈ）、 8.06 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）。ＩＲ（nea
t）1780，1750，1190，1055，980cm ^-1。

【００４８】調製例５ ４‐（トリ‐n-ブチルスタンニ
ル）馬尿酸の合成 6.4 mＬのＣＨ₃ ＣＮ中の406mg （ 0.80mモル）のＮ‐
スクシンイミジル４‐（トリ‐ブチルスタンニル）ベン
ゾエートの溶液に 224μＬ（160mg 、 1.60mモル）のＥ
t ₃ Ｎ（Ｆisher 社）を、次いで 1.6 mＬのＨ₂ Ｏ中の
60mg（ 0.8m モル）のグリシン（Ｆisher 社）の溶液を
加えた。混合物を室温で１時間攪拌し、次に10 mＬの５
％ＨＣl 水溶液と10 mＬのＥt ₂ Ｏの間で分配させた。
Ｅt ₂ Ｏ層をかん水で洗い、乾燥し（Ｍg ＳＯ₄ ）ろ過
し、濃縮し、 374mg（ 100％）の４‐（トリ‐n-ブチル
スタンニル）馬尿酸、その後の反応に十分純粋な粘性の
ある油、が得られた： ＨＮＭＲ（ＣＤＣl ₃ ）δ 0.4
0 − 2.50 （m ，27Ｈ）、3.94 − 4.53 （m ，２
Ｈ）、 6.70 − 7.25 （m ，１Ｈ）、 7.53 （d ，Ｊ＝
８Ｈz ，２Ｈ）、 7.80 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ） 9.0
0 − 9.65 （brds，１Ｈ）。ＩＲ（neat）3330，1720，
1635，153cm ^-1により強い吸収をもつ3600‐2300範囲。

【００４９】調製例６ Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ト
リ‐n-ブチルスタンニル）馬尿酸エステルの合成 ８ mＬのＴＨＦ中の 375mg（ 0.80mモル）の４‐（トリ
‐n-ブチルスタンニル）馬尿酸の溶液に 182mgのジシク
ロヘキシルカルボジイミド（Ｓigma社）、次いで92mgの
Ｎ‐ヒドロキシスクシンイミド（Ｓigma社）を加えた。
混合物を室温で６時間攪拌し、次に酢酸を３滴加えた。
混合物をろ過し、濾液を濃縮し、油っこい固体にした。
シリカゲル上のクロマトグラフィーによる精製（50％Ｅ
t ＯＡc／ヘキサン）により、純粋なＮ‐スクシンイミ
ジル４‐（トリ‐n-ブチルスタンニル）馬尿酸エステル
158mg （35％）が白色の固体として得られた：融点 109
−111℃（Ｅt ＯＡc ／ヘキサン）；ＨＮＭＲ（ＣＤＣl
₃ ）δ 0.33 − 2.27 （m ，27Ｈ）、 2.85 （s ，４
Ｈ）、 4.66 （d ，Ｊ＝６Ｈz ，２Ｈ）、 7.02 （t ，
Ｊ＝６Ｈz ，１Ｈ）、 7.63 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２
Ｈ）、 7.89 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）。

【００５０】調製例７ トリ‐n-ブチルスタンニル３‐
（４′‐トリ‐n-ブチルスタンニルフェニル）プロピオ
ネート ＴＨＦ125mＬとヘキサン25 mＬ中の 2.25g（10m モル）
の３‐（４′‐ブロムフェニル）プロピオン酸の溶液
（Ｎ₂ 雰囲気したで、Ｎ₂ 注入口、添加漏斗、および温
度計を備えたフラスコ中で）を−100 ℃に冷却した（ジ
エチルエーテル／液体窒素）。この溶液に溶液の温度が
−90℃を超えないような速度でヘキサン（Ａldrich社）
中のブチルリチウムの 1.55 Ｍ溶液13.5 mＬ（21m モ
ル）を１滴づつ添加した。生成する粘性の塊を 1／2 時
間以上−75℃に温めておき、 5.70mＬの塩化 n‐トリブ
チル錫（Ａldrich社）を１分間以上１滴づつ添加した。
次に、この混合物を再び液状にし、30分間−75℃で攪拌
した。次に、冷浴を取り外し、混合物の温度が室温に達
するまでこれを攪拌した。この混合物に100mＬの飽和
（ＮＨ₄ ）₂ ＳＯ₄ 溶液を加えた。分離漏斗の中で振っ
た後、上層を100mＬの10％ＫＦ液と50 mＬのかん水で連
続的に洗い、Ｍg ＳＯ₄ で乾燥させ、ろ過し、濃縮し
て、ろう状の固形物を得た。この物質のＨ₂ Ｏ／アセト
ンからの２回の再結晶により、405mg （42％）のトリ‐
n-ブチルスタンニル３‐（４′‐トリ‐n-ブチルスタン
ニルフェニル）プロピネートが白色粉末として生成し
た；融点59−60℃；ＨＮＭＲ（ＣＤＣl ₃ ）δ 0.50 −
2.34 （m ，54Ｈ）、 2.75 （m ，４Ｈ）、 7.23 （d
，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）、 7.45 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２
Ｈ）；ＩＲ （melt）1695，1530cm^-1。

【００５１】調製例８ Ｎ‐スクシンイミジル３‐
（４′‐トリ‐n-ブチルスタンニルフェニル）プロピオ
ネートの合成 6.5 mＬの無水ＴＨＦ中の460mg （ 0.63 m モル）のト
リ‐n-ブチルスタンニル３‐（４′‐トリ‐n-ブチルス
タンニルフェニル）プロピオネートの溶液に143mg （
0.69 m モル）のジシクロヘキシルカルボジイミド（Ｓi
gma社）を、次いで73mg（ 0.63 m モル）のＮ‐ヒドロ
キシスクシンイミド（Ｓigma社）を添加した。この混合
物を24時間攪拌し、37μＬ（38mg、 0.63 m モル）の酢
酸を添加した。この混合物をろ過し、濃縮した。シリカ
ゲルクロマトグラフィー（30％ＥtＯＡc ／ヘキサン）
による精製で、約195mg （58％）のＮ‐スクシンイミジ
ル３‐（４′‐トリ‐n-ブチルスタンニルフェニル）プ
ロピオネートを粘性の油として得た：ＨＮＭＲ（ＣＤＣ
l ₃ ）δ 0.38 − 2.15 （m ，27Ｈ）、 2.53 − 3.32
（m ，８Ｈ）、 7.20 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）、 7.3
8 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）；ＩＲ（neat）1820，179
0，1740，1185，1045cm^-1。

【００５２】調製例９ メチル４‐ブロムベンズイミデ
ートの合成 全ての固形物が溶液になるまで、20 mＬのメタノール中
の 7.2g （40m モル）の４‐ブロムベンゾニトリル（Ｐ
faltz and Ｂauer社）の懸濁液を通じてＨＣガスを泡立
たせた。メチル４‐ブロムベンズイミデートの塩化水素
塩の長い針晶が生成される90時間の間この混合物を４℃
で冷蔵庫の中に置いた。この塩を真空ろ過により集め、
8.17g（81％）の長い白色針晶が得られ、50 mＬの氷冷
10％Ｎa ₂ ＣＯ₃ 溶液と50 mＬのジエチルエーテルの間
で 1.33gのＨＣl 塩を分配することによって塩基に転換
した。ジエチルエーテル層を50 mＬのかん水で洗い、Ｍ
g ＳＯ₄ で乾燥させ、ろ過し、濃縮し、ヘキサンから再
結晶して、 0.83g（60％全収率）の純メチル４‐ブロム
ベンズイミデートを針晶として得た：融点64−65°；Ｈ
ＮＭＲ（ＣＤＣl ₃ ）δ 3.91 （s ，３Ｈ）、 7.60
（s ，４Ｈ）、 7.53 − 7.90 （brd ，１Ｈ）。

【００５３】調製例10 メチル４‐（トリ‐n-ブチルス
タンニル）ベンズイミデートの合成 Ｎ₂ 雰囲気下トルエン２ mＬ中の214mg （ 1.0m モル）
のメチル４‐ブロムベンズイミデートの溶液に 1.52 m
Ｌ（ 1.74g、 3.0m モル）のヘキサブチルジ錫（Ａlfa
社）、次いで11mg（ 0.01mモル）のテトラキス（トリフ
ェニルホスフィン）パラジウム（Ｏ）（Ａldrich社）を
加えた。この混合物を油浴中で18時間75−80℃で加熱し
た。涼しい場合には、この混合物を10 mＬの10％水性Ｋ
Ｆ液と10mＬのジエチルエーテルの間で分配させた。ジ
エチルエーテル層をＭg ＳＯ₄ で乾燥させ、ろ過し濃縮
した。シリカゲルクロマトグラフィー（25％Ｅt ＯＡc
／ヘキサン）による油状濃縮物の精製で、226mg （53
％）の純粋な４‐（トリ‐n-ブチルスタンニル）ベンズ
イミデートが粘性油として得られた：ＨＮＭＲ（ＣＣl
₄ ）δ 0.54 − 2.18 （m ，27Ｈ）、 3.87 （s ，３
Ｈ）、 7.45 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）、 7.67 （d ，
Ｆ＝８Ｈz ，２Ｈ）；ＩＲ（neat）3340，1635cm^-1。

【００５４】調製例11 ４‐（３′‐プロピオン酸）フ
ェニル臭化第二水銀の合成 無水ＴＨＦ15 mＬ中の96mg（ 0.30mモル）酢酸第二水銀
（Ａldrich社）の溶液に20℃（水浴）で 1.72 mＬの酢
酸、次いでＴＨＦ１ mＬ中の 218mgのトリ‐n-ブチルス
タンニル３‐（４′‐トリ‐n-ブチルスタンニルフェニ
ル）プロピオネートの溶液を加えた。生成する溶液を20
℃で１時間攪拌し、15 mＬの水性３％ＫＢr 液を加え
た。さらに１時間後、白色の沈澱物が現われるまで回転
蒸発器で殆どのＴＨＦを除去し、この混合物を15 mＬの
Ｈ₂Ｏで稀釈した。沈澱物を真空ろ過により集め、少量
のＥt ＯＨで洗い、93mg（72％）の４‐（３′プロピオ
ン酸）フェニル臭化第二水銀が白色の固形物として得ら
れた：ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ−d₆ ）δ 2.23 − 3.09 （m
，４Ｈ）、 7.15 （d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｍ）、 7.39
（d ，Ｊ＝８Ｈz ，２Ｈ）；質量スペクトル（Ｃl ） m
／z 431、 433（Ｍ＋18.7， 6.0）、 351（27）、 133
（ 100）。

【００５５】有機ホウ素グループを含むメタル転移を同
様の方法で行なった。

【００５６】実施例１ Ｎ‐スクシンイミジル４‐（ト
リブチルスタンニル）ベンゾエートの放射性ヨウ素化 ５％ＨＯＡc ／メタノール50μＬ中に10ー50μg のＮ‐
スクシンイミジル４‐（トリ‐n-ブチルスタンニル）ベ
ンゾエート（ 0.02 − 0.10 μモル）を含むバイアルに
メタノール10ー20μＬ中の10−20μg （ 0.08 − 0.15
μモル）のＮ‐クロルスクシンイミドを添加した。この
溶液に10μＬのＮa ¹²⁵Ｉ溶液（Ｄelbeccosのりん酸緩
衝塩；Ｇibco Ｌabo ）（ 100μＣi −２m Ｃi ）を加
えた。３−５分後に、Ｎa ₂ Ｓ₂ Ｏ₅ の 0.25 μg ／ m
Ｌ溶液20μＬを加えた。反応混合物をさらに50μＬのＰ
ＢＳ溶液で稀釈し、容量が減少して水性のもののみにな
るまで溶液の表面にＮ₂ 流を吹きつけた。75−95％の放
射線標識が得られた。この物質は下で述べるように蛋白
質標識試験に直接に使用することができる。

【００５７】ヨウ素-131による放射線ヨウ素化は同じや
り方で匹敵する収率で行われた。

【００５８】実施例２ 放射性ハロゲン化化合物による
蛋白質標識 前述の粗水性放射性ヨウ素化エステル混合物を緩衝蛋白
質溶液（ＰＨ 8.5−９）を含む薬瓶に移した。この操作
は逆でもよい。抱合反応は室温で５分以内に完了した。
抱合収率は約35〜65％の範囲に及んだ。標識蛋白質はゲ
ル浸透クロマトグラフィーカラムかあるいは小孔ろ過シ
ステム（例えば、Ｃentricon超遠心分離）の何れかを用
いて非抱合放射能から精製した。

【００５９】実施例２の放射性ハロゲン化蛋白質生成物
は放射線診断や治療用薬剤に用いることができる。例え
ば、モノクローナル抗体あるいは腫瘍細胞関連抗原と特
異的に反応する抗原結合フラグメントはこの方法によっ
て放射性ハロゲン化することができ、哺乳動物の身体の
腫瘍細胞の位置を撮影するために使用することができ
る。放射性ハロゲン化抗体の適切な量は、例えば静脈内
注射により、患者の体内に導入され、その後に身体をガ
ンマ線カメラのようなシンチレーション検出器を用いて
スキャンする。このような放射性ハロゲン化抗体は腫瘍
の放射線療法の目的でも哺乳動物の体内に導入される。

【００６０】器官あるいは疾患のある組織に集中する傾
向のある他の蛋白質やペプチドはこの方法によって同様
に放射性ハロゲン化でき、ホメオスタシスからの逸脱や
疾病状態を監視するのに利用することができる。例え
ば、放射性ハロゲン化フィブリノーゲンは生体内（in
vivo）撮影により深部の静脈血栓症をつきとめるのに使
用することができる。脳下垂体や他のペプチドホルモン
の病気による摂取の変動は同様にして監視することがで
きる。

【００６１】別の例として、本発明により放射性ハロゲ
ン化された抗体はin vitro放射線免疫検定に用いること
ができる。

【００６２】放射性ハロゲンは抱合体の非活性化芳香族
あるいは複素式芳香族環に置換されるために、前述の放
射性ハロゲン化蛋白質の全てはしっかりと放射性標識さ
れる。さらに、ヒドロキシル官能性の存在なしでパラま
たはメタ‐位に放射性ハロゲンを置換することによっ
て、放射性ハロゲンは身体のデイオディナーゼ酵素によ
る異化に対して感受性がより小さくなる。

【００６３】効果確認結果（生物分布研究） フェノール含有芳香族環により常法により放射性ヨウ素
化された蛋白質に比べて、被検者の小分子の放射性ヨウ
素化蛋白質の有利なin vivo 安定性は次の動物実験によ
って証明された。実験において、放射性ヨウ素の甲状腺
取込み（首の放射能により測定）はin vivo 代謝の測度
として利用された。

【００６４】12匹のマウスに実施例１の放射性ヨウ素化
化合物で標識した抗体を注射した。３匹づつのグループ
を注射後２時間、24時間、48時間および72時間目に殺
し、放射性ラベルの生物分布を常法により直ちに測定し
た。その結果を図１と図２に棒グラフとして示す。ここ
では次の記号が用いられている。ＢＬ，血液；ＴＡ，
尾；ＴＵ，色素細胞腫；ＳＫ，皮膚；ＭＵ，骨格筋；Ｂ
Ｏ，骨；ＬＵ，肺；ＬＩ，肝臓；ＳＰ，脾臓；ＳＴ，
胃；ＮＥ，首（甲状腺を含む）；ＫＩ，腎臓；およびＩ
Ｎ，腸。その結果は％線量／グラム組織または％総線量
として表わされている。％総線量を示すグラフは血液、
皮膚、筋肉および骨の全身放射能の小部分を示すにすぎ
ない。甲状腺における放射能の量は最初の２時間の基線
累積から時間とともに増加しなかった。

【００６５】24時間の安定性の比較として、追加の３匹
のマウスに既知のクロラミン‐Ｔ酸化を経て放射性ヨウ
素で直接に標識された以外の同じ抗体の同一量を注射し
た。放射性ラベルの生物分布は前記のように測定し、そ
の結果を図３と図４に示す。

【００６６】図を見ると、24時間では被検者の生物分布
と前からの試薬の生物分布は皮膚、骨、肝臓、腎臓、お
よび腸では非常に類似していた。このことは放射性標識
抗体が同じように作用することを示している。反対に、
クロラミン‐Ｔ標識蛋白質を注射した動物においては、
胃と首が注入放射性ヨウ素のかなり大きな画分を蓄積し
ていた。このことは遊離の放射性ヨウ素はクロラミン‐
Ｔ標識蛋白質の代謝によって最もつくられ易いことを示
している。これらの比較試験結果は、被検者のパラ‐ヨ
ードフェニル標識抗体はin vivo でずっと安定であり、
このことは高比放射能放射性ヨウ素を含む非活性化芳香
族環はin vivo で代謝的にあるいはその反対に脱ヨウ素
化されないことを初めて証明した。対照データ（図３と
図４）は、クロラミン‐Ｔ酸化によるように直接的に標
識されようと、Ｂolton ‐Ｈunter あるいはＷoods試薬
によるように間接的に標識されようと、一般に放射性標
識フェノール含有芳香族環に匹敵できると考えられる。

【００６７】Ｆ（ab′）₂ を用いた補助的な生物分布研
究は、この方法によって放射性標識された抗体画分はin
vivo 新陳代謝に対して安定であることを示した。さら
に、このタイプの放射性標識試薬は前に検討した標識全
抗体製品よりも早く取り除かれ、72時間目の身体器官に
おける残留物は最小である。

【００６８】本発明は好ましい具体例と共に述べたが、
種々の変更、均等手段による置換が可能であり、与えら
れる保護は特許請求の範囲とその均等概念によってのみ
限定されると考えられる。

【図面の簡単な説明】

【図１】放射性標識されたモノクローナル抗体の促進さ
れたin vivo 安定性を確証する生物分布比較を示す棒グ
ラフである。

【図２】放射性標識されたモノクローナル抗体の促進さ
れたin vivo 安定性を確証する生物分布比較を示す棒グ
ラフである。

【図３】放射性標識されたモノクローナル抗体の促進さ
れたin vivo 安定性を確証する生物分布比較を示す棒グ
ラフである。

【図４】放射性標識されたモノクローナル抗体の促進さ
れたin vivo 安定性を確証する生物分布比較を示す棒グ
ラフである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｃ 69/76 9547−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 233/64 233/64 7419−4Ｈ 323/09 323/09 7106−4Ｈ 331/28 331/28 Ｃ０７Ｋ 1/13 Ｃ０７Ｋ 1/13 Ｇ０１Ｎ 33/534 Ｇ０１Ｎ 33/534 33/60 Ｚ 33/60 33/68 33/68 Ａ６１Ｋ 35/16 // Ａ６１Ｋ 35/16 39/395 Ｃ 38/00 9451−4Ｈ Ｃ０７Ｃ 257/08 39/395 Ｃ０７Ｆ 7/22 Ｃ０７Ｃ 257/08 Ａ６１Ｋ 49/02 Ｃ Ｃ０７Ｆ 7/22 37/02 Ｃ０７Ｍ 5:00 (72)発明者 ディビッド シュスター ショウンズ アメリカ合衆国，98117 ワシントン州, シアトル，116ス ノース ウエスト, 8311

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ^*Ｘが、ヨウ素，臭素，弗素或いはアス
   タチンの放射性同位元素であり、 Ａr が、芳香族あるいは複素式芳香族環であり、 Ｒが、上記放射性同位元素が置換される上記環を強く活
   性化せず、また蛋白質の生物学的活性を保持する条件下
   で蛋白質に対する抱合に適する官能基をもつフェノール
   エステル，イミドエステル，イミデートエステル，酸無
   水物，アシルスクシンイミド，アルデヒド，イソチオシ
   アネート，チオール，ジアゾ，ヒドラジン，ハロゲン化
   アルキル，マレイミド，アルキルイミドエステル，アミ
   ドアルキルイミドエステル，アルキルイミデートエステ
   ル，或いはアミドアルキルイミデートエステルからなる
   短鎖置換基であるところの式^* Ｘ−Ａr −Ｒ をもつ放射性ハロゲン化化合物。
2. 【請求項２】 ^*Ｘが、Ｉ-123，Ｉ-125，Ｉ-131，Ｂr-
   75，Ｂr-76，Ｂr-77，Ｆ -18，或いはＡt-211 である請
   求項１記載の放射性ハロゲン化化合物。
3. 【請求項３】 ^*Ｘが置換基Ｒに関してパラ‐或いはメ
   タ‐位である請求項１記載の放射性ハロゲン化化合物。
4. 【請求項４】 前記化合物が、Ｎ‐スクシンイミジル４
   ‐ヨードベンゾエートであって、ヨードが、放射性同位
   元素である請求項１記載の放射性ハロゲン化化合物。