JPH09227391A - 腸管内細胞溶解活性抑制剤 - Google Patents
腸管内細胞溶解活性抑制剤Info
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- JPH09227391A JPH09227391A JP8041263A JP4126396A JPH09227391A JP H09227391 A JPH09227391 A JP H09227391A JP 8041263 A JP8041263 A JP 8041263A JP 4126396 A JP4126396 A JP 4126396A JP H09227391 A JPH09227391 A JP H09227391A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属
に属する微生物の菌体を配合し腸管内での細胞溶解活性
抑制作用を賦与した医薬又は飲食品を提供する。 【解決手段】 合成培地等を使用し、嫌気的条件下で培
養したビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に属
する微生物の菌体を回収し、この菌体を適宜配合して腸
管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した医薬又は飲食
品を得る。
に属する微生物の菌体を配合し腸管内での細胞溶解活性
抑制作用を賦与した医薬又は飲食品を提供する。 【解決手段】 合成培地等を使用し、嫌気的条件下で培
養したビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に属
する微生物の菌体を回収し、この菌体を適宜配合して腸
管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した医薬又は飲食
品を得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ビフィドバクテリ
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の菌体を有効
成分とする腸管内での細胞溶解活性抑制剤に関する。ま
た、本発明は、ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m) 属に属する微生物の菌体を配合して腸管内での細胞
溶解活性抑制作用を賦与した医薬又は飲食品に関する。
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の菌体を有効
成分とする腸管内での細胞溶解活性抑制剤に関する。ま
た、本発明は、ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m) 属に属する微生物の菌体を配合して腸管内での細胞
溶解活性抑制作用を賦与した医薬又は飲食品に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来の日本型の食事は、人間にとって理
想的な食事に近いことから世界的に注目されてきてい
る。しかし、近年、日本人の食事は、従来の日本型から
西洋型へと変化してきており、そのことが問題視されて
きている。つまり、西洋型の食事は、一般的に肉や脂肪
が多く、野菜や穀物が少ない高脂肪・低カルシウムであ
るからである。
想的な食事に近いことから世界的に注目されてきてい
る。しかし、近年、日本人の食事は、従来の日本型から
西洋型へと変化してきており、そのことが問題視されて
きている。つまり、西洋型の食事は、一般的に肉や脂肪
が多く、野菜や穀物が少ない高脂肪・低カルシウムであ
るからである。
【０００３】先に Lapreらは、高脂肪・低カルシウムの
食事を摂取すると腸管の内容物に含まれる水溶性の胆汁
酸と脂肪酸が共に増加し、この水溶性の胆汁酸と脂肪酸
が界面活性剤として作用するので、腸粘膜を構成する細
胞を破壊すると報告している(Lapre,J.A., De Vries,H.
T., Termont,D.S.M.L., Kleibeuker,J.H., De Vries,E.
G.E. and Van der Meer,R., Cancer Research, vol.53,
pp.248-253, 1993)。なお、 Lapreらは、水溶性の胆汁
酸と脂肪酸の作用について、赤血球の溶血反応を利用し
た細胞溶解活性を測定することにより評価している。
食事を摂取すると腸管の内容物に含まれる水溶性の胆汁
酸と脂肪酸が共に増加し、この水溶性の胆汁酸と脂肪酸
が界面活性剤として作用するので、腸粘膜を構成する細
胞を破壊すると報告している(Lapre,J.A., De Vries,H.
T., Termont,D.S.M.L., Kleibeuker,J.H., De Vries,E.
G.E. and Van der Meer,R., Cancer Research, vol.53,
pp.248-253, 1993)。なお、 Lapreらは、水溶性の胆汁
酸と脂肪酸の作用について、赤血球の溶血反応を利用し
た細胞溶解活性を測定することにより評価している。
【０００４】また、遺伝的素因により大腸癌を発病する
リスクの高い人々においては、高脂肪・低カルシウムの
食事を取り続けることにより腸粘膜の損傷が起こり、大
腸癌を発病するリスクがさらに高まる恐れがあることが
報告されている(Lipkin,M.,Blattner,W.E., Fraumeni,
J.F.Jr., Lynch,H.T., Deschner,E. and Winawer,S.,Ca
ncer Research, vol.43, pp.1899-1904, 1983; Newmar
k,H.L., Lipkin,M. and Maheshwari,N., Journal of Na
tional Cancer Institute, vol.82, pp.491-496, 199
0)。
リスクの高い人々においては、高脂肪・低カルシウムの
食事を取り続けることにより腸粘膜の損傷が起こり、大
腸癌を発病するリスクがさらに高まる恐れがあることが
報告されている(Lipkin,M.,Blattner,W.E., Fraumeni,
J.F.Jr., Lynch,H.T., Deschner,E. and Winawer,S.,Ca
ncer Research, vol.43, pp.1899-1904, 1983; Newmar
k,H.L., Lipkin,M. and Maheshwari,N., Journal of Na
tional Cancer Institute, vol.82, pp.491-496, 199
0)。
【０００５】このように、高脂肪・低カルシウムの食事
を取ると、腸管の内容物に含まれる水溶性の胆汁酸と脂
肪酸が増加し、腸粘膜が損傷を受け易い腸内環境を誘発
することになる。
を取ると、腸管の内容物に含まれる水溶性の胆汁酸と脂
肪酸が増加し、腸粘膜が損傷を受け易い腸内環境を誘発
することになる。
【０００６】一方、高脂肪・低カルシウムの食事に起因
する腸粘膜の損傷は、カルシウムを大量に経口摂取する
ことにより緩和されることが、前述した Lapreらの報告
から知られている。しかし、その有効なカルシウムの摂
取量は、一日当たり 1,422mgであり、成人一日当りのカ
ルシウム所要量といわれる 600mgの２倍以上を必要とす
るものである。したがって、大量のカルシウムを通常の
食事で摂取し続けるということは困難であり、腸粘膜を
保護するにはカルシウム製剤等に頼らざるを得ないとい
う問題があった。
する腸粘膜の損傷は、カルシウムを大量に経口摂取する
ことにより緩和されることが、前述した Lapreらの報告
から知られている。しかし、その有効なカルシウムの摂
取量は、一日当たり 1,422mgであり、成人一日当りのカ
ルシウム所要量といわれる 600mgの２倍以上を必要とす
るものである。したがって、大量のカルシウムを通常の
食事で摂取し続けるということは困難であり、腸粘膜を
保護するにはカルシウム製剤等に頼らざるを得ないとい
う問題があった。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上記の
現状を鑑み、食生活を大きく変えることなく、安全に腸
粘膜を保護することができる安価な食品素材を求めて鋭
意研究を進めていたところ、従来より食用として使用さ
れ、安全性が立証されている微生物であるビフィドバク
テリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体
が腸管内での細胞溶解活性を抑制する作用を有すること
を見出した。そして、ビフィドバクテリウム(Bifidobac
terium) 属に属する微生物であるビフィドバクテリウム
・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescenti
s) 、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Bifido
bacterium infantis) 、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダム(Bifidobacterium bifidum)及びビフィドバクテ
リウム・ブレベ(Bifidobacterium breve)の菌体も同様
に腸管内での細胞溶解活性を抑制する作用を有すること
を見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本
発明は、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に
属する微生物の菌体を有効成分とする腸管内細胞溶解活
性抑制剤に関する。また、本発明は、ビフィドバクテリ
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の菌体を配合
して腸管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した医薬又
は飲食品に関する。
現状を鑑み、食生活を大きく変えることなく、安全に腸
粘膜を保護することができる安価な食品素材を求めて鋭
意研究を進めていたところ、従来より食用として使用さ
れ、安全性が立証されている微生物であるビフィドバク
テリウム・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体
が腸管内での細胞溶解活性を抑制する作用を有すること
を見出した。そして、ビフィドバクテリウム(Bifidobac
terium) 属に属する微生物であるビフィドバクテリウム
・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescenti
s) 、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Bifido
bacterium infantis) 、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダム(Bifidobacterium bifidum)及びビフィドバクテ
リウム・ブレベ(Bifidobacterium breve)の菌体も同様
に腸管内での細胞溶解活性を抑制する作用を有すること
を見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本
発明は、ビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に
属する微生物の菌体を有効成分とする腸管内細胞溶解活
性抑制剤に関する。また、本発明は、ビフィドバクテリ
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の菌体を配合
して腸管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した医薬又
は飲食品に関する。
【０００８】
【課題を解決するための手段】本発明で有効成分として
使用するビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に
属する微生物は、発酵乳等のスターターとして使用され
ており、腸管に定着して感染や腐敗の防止、下痢の予防
等に役立っていることが知られている。
使用するビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に
属する微生物は、発酵乳等のスターターとして使用され
ており、腸管に定着して感染や腐敗の防止、下痢の予防
等に役立っていることが知られている。
【０００９】このビフィドバクテリウム(Bifidobacteri
um) 属に属する微生物の菌体は、例えば、培養基として
合成培地等を使用し、嫌気的条件下で培養した後、遠心
分離等の処理により生菌体を回収し、そのまま利用する
こともできるし、また、この生菌体を洗浄した後、凍結
乾燥等の処理により乾燥菌体として利用することもでき
る。
um) 属に属する微生物の菌体は、例えば、培養基として
合成培地等を使用し、嫌気的条件下で培養した後、遠心
分離等の処理により生菌体を回収し、そのまま利用する
こともできるし、また、この生菌体を洗浄した後、凍結
乾燥等の処理により乾燥菌体として利用することもでき
る。
【００１０】なお、本発明で有効成分として使用するこ
とのできるビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属
に属する微生物としては、ビフィドバクテリウム・ロン
ガム(Bifidobacterium longum) 、ビフィドバクテリウ
ム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescent
is) 、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Bifid
obacterium infantis) 、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダム(Bifidobacterium bifidum)、ビフィドバクテリ
ウム・ブレベ(Bifidobacterium breve)等を例示するこ
とができる。
とのできるビフィドバクテリウム(Bifidobacterium) 属
に属する微生物としては、ビフィドバクテリウム・ロン
ガム(Bifidobacterium longum) 、ビフィドバクテリウ
ム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adolescent
is) 、ビフィドバクテリウム・インファンティス(Bifid
obacterium infantis) 、ビフィドバクテリウム・ビフ
ィダム(Bifidobacterium bifidum)、ビフィドバクテリ
ウム・ブレベ(Bifidobacterium breve)等を例示するこ
とができる。
【００１１】
【発明の実施の形態】上記のようにして得られたビフィ
ドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の
菌体は、そのまま使用しても良いし、あるいは、乳糖等
の賦形剤を加え、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒
剤等の医薬としても良い。また、各種飲食品、例えば、
清涼飲料水、果汁飲料、発酵飲料、ゼリー、アイスクリ
ーム、ガム、キャンディー等に配合して使用することも
できる。
ドバクテリウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の
菌体は、そのまま使用しても良いし、あるいは、乳糖等
の賦形剤を加え、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、顆粒
剤等の医薬としても良い。また、各種飲食品、例えば、
清涼飲料水、果汁飲料、発酵飲料、ゼリー、アイスクリ
ーム、ガム、キャンディー等に配合して使用することも
できる。
【００１２】なお、ビフィドバクテリウム(Bifidobacte
rium) 属に属する微生物の菌体に腸管内での細胞溶解活
性抑制作用を発揮させるには、成人の場合、一日当たり
乾燥菌体重量として0.5g〜5gを摂取する必要がある。以
下に実施例を示し、本発明を詳しく説明する。
rium) 属に属する微生物の菌体に腸管内での細胞溶解活
性抑制作用を発揮させるには、成人の場合、一日当たり
乾燥菌体重量として0.5g〜5gを摂取する必要がある。以
下に実施例を示し、本発明を詳しく説明する。
【００１３】
【実施例１】表１に組成を示した培地12リットルに、同
様の培地で前培養したビフィドバクテリウム・ロンガム
(Bifidobacterium longum) SBT-2928 (FERM P-10657)
を５重量％接種した後、37℃で16時間、嫌気的条件下で
循環培養して、菌体を増殖させた。なお、この培養は、
6Nアンモニア溶液を断続的に添加することによりpHが6.
5となるよう調整しながら行った。
様の培地で前培養したビフィドバクテリウム・ロンガム
(Bifidobacterium longum) SBT-2928 (FERM P-10657)
を５重量％接種した後、37℃で16時間、嫌気的条件下で
循環培養して、菌体を増殖させた。なお、この培養は、
6Nアンモニア溶液を断続的に添加することによりpHが6.
5となるよう調整しながら行った。
【００１４】
【表１】 ─────────────────────────────── プロテオースペプトン（雪印乳業製） 10 (g/リットル) 酵母エキス粉末（アサヒビール薬品製） 10 Ｄ−グルコース 10 リン酸水素二カリウム 5 リン酸二水素カリウム 1 Ｌ−アスコルビン酸ナトリウム 1 ───────────────────────────────
【００１５】培養終了後、この培養液に 0.9％塩化ナト
リウム溶液60リットルを通液して菌体を洗浄し、限外濾
過膜処理して溶液が７リットルとなるまで濃縮した後、
遠心分離(8,000×g 、15分間、４℃) し菌体及び菌体を
含んだスラリーを回収した。そして、菌体を含んだスラ
リーには凍結保護剤として最終濃度１％のグルタミン酸
ナトリウムと最終濃度５％のショ糖を添加し、溶解し
た。そして、菌体とグルタミン酸ナトリウムとショ糖を
溶解したスラリーとを混合し、凍結乾燥した後、粉砕し
てビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium
longum) の菌体80g を得た。なお、この菌体中の生菌数
は３×1011cfu/g であった。
リウム溶液60リットルを通液して菌体を洗浄し、限外濾
過膜処理して溶液が７リットルとなるまで濃縮した後、
遠心分離(8,000×g 、15分間、４℃) し菌体及び菌体を
含んだスラリーを回収した。そして、菌体を含んだスラ
リーには凍結保護剤として最終濃度１％のグルタミン酸
ナトリウムと最終濃度５％のショ糖を添加し、溶解し
た。そして、菌体とグルタミン酸ナトリウムとショ糖を
溶解したスラリーとを混合し、凍結乾燥した後、粉砕し
てビフィドバクテリウム・ロンガム(Bifidobacterium
longum) の菌体80g を得た。なお、この菌体中の生菌数
は３×1011cfu/g であった。
【００１６】
【実施例２】実施例１と同様の条件で、ビフィドバクテ
リウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adoles
centis) JCM-7046、ビフィドバクテリウム・インファン
ティス(Bifidobacterium infantis) JCM-1210、ビフィ
ドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidu
m) JCM-7004 及びビフィドバクテリウム・ブレベ(Bifid
obacterium breve) JCM-7016 を培養し、同様に処理し
て各菌体を得た。
リウム・アドレスセンティス(Bifidobacterium adoles
centis) JCM-7046、ビフィドバクテリウム・インファン
ティス(Bifidobacterium infantis) JCM-1210、ビフィ
ドバクテリウム・ビフィダム(Bifidobacterium bifidu
m) JCM-7004 及びビフィドバクテリウム・ブレベ(Bifid
obacterium breve) JCM-7016 を培養し、同様に処理し
て各菌体を得た。
【００１７】
【試験例１】実施例１及び２で得られたビフィドバクテ
リウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の各菌体を
使用し、動物実験により、腸管内での細胞溶解活性抑制
作用を調べた。
リウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の各菌体を
使用し、動物実験により、腸管内での細胞溶解活性抑制
作用を調べた。
【００１８】１，２−ジメチルヒドラジン・２塩酸を体
重１kg当たり40mgとなるよう調整して８週齢のWistar系
雄ラット16匹に皮下注射した。なお、実験動物に１，２
−ジメチルヒドラジン・２塩酸を注射すると大腸癌を発
病し易い遺伝的素因が誘導される。そして、これらのラ
ットを群間において体重が等しくなるように配慮しなが
ら１群８匹の２群に分け、表２に示した飼料を15日間自
由摂取させると共に、イオン交換水も自由摂取させた。
なお、対照飼料及び本発明飼料に配合した脂肪は標準飼
料(American Institute of Nutrition: Journal of Nut
rition, vol.107, pp.1340-1348, 1977)の４倍であり、
対照飼料及び本発明飼料に配合したカルシウムは標準飼
料の 1/5であって、高脂肪・低カルシウムとなってい
る。
重１kg当たり40mgとなるよう調整して８週齢のWistar系
雄ラット16匹に皮下注射した。なお、実験動物に１，２
−ジメチルヒドラジン・２塩酸を注射すると大腸癌を発
病し易い遺伝的素因が誘導される。そして、これらのラ
ットを群間において体重が等しくなるように配慮しなが
ら１群８匹の２群に分け、表２に示した飼料を15日間自
由摂取させると共に、イオン交換水も自由摂取させた。
なお、対照飼料及び本発明飼料に配合した脂肪は標準飼
料(American Institute of Nutrition: Journal of Nut
rition, vol.107, pp.1340-1348, 1977)の４倍であり、
対照飼料及び本発明飼料に配合したカルシウムは標準飼
料の 1/5であって、高脂肪・低カルシウムとなってい
る。
【００１９】そして、15日間の飼育期間中、各群共に体
重増加量及び摂取カロリーに有意差は認められなかっ
た。
重増加量及び摂取カロリーに有意差は認められなかっ
た。
【００２０】
【表２】 ──────────────────────────────────── 対照飼料 本発明飼料 ──────────────────────────────────── カゼイン 20 (重量％) 20 (重量％) ココナツ油 18 18 コーン油 2 2 グルコース 50 49 実施例１及び２で得られた各菌体 − 1 セルロース 5 5 塩類混合 3.5 3.5 ビタミン混合 1 1 ＤＬ−メチオニン 0.3 0.3 重酒石酸コリン 0.2 0.2 ────────────────────────────────────
【００２１】また、飼料に配合した塩類混合の組成を表
３に、ビタミン混合の組成を表４にそれぞれ示す。
３に、ビタミン混合の組成を表４にそれぞれ示す。
【００２２】
【表３】 ─────────────────────────── リン酸水素カルシウム・２水和物 12.3 (重量％) 塩化ナトリウム 7.4 塩化カリウム 7.7 炭酸水素カリウム 10.0 硫酸カリウム 5.2 酸化マグネシウム 2.4 硫酸マンガン・５水和物 0.73 硫酸第一鉄・７水和物 0.51 炭酸亜鉛 0.16 炭酸水酸化第二銅・１水和物 0.03 セレン酸ナトリウム・５水和物 0.001 ヨウ素酸カリウム 0.001 クロムミョウバン 0.055 ──────────────────────────────────── ショ糖で全量を 100％とした。
【００２３】
【表４】 ────────────────────── ビタミンＥ・アセテート 750IU/100g ビタミンＫ3 5mg/100g ビタミンＢ1 60mg/100g ビタミンＢ2 60mg/100g ビタミンＢ6 70mg/100g ビタミンＢ12 0.1mg/100g Ｄ−ビオチン 2mg/100g 葉酸 20mg/100g パントテン酸カルシウム 160mg/100g ニコチン酸 300mg/100g ────────────────────── ショ糖で全量を100gとした。
【００２４】飼料摂取を開始して11〜14日目に、糞を定
量的に回収し、凍結乾燥した後、粉砕した。そして、こ
の粉砕した糞1.2gに超純水 3.6mlを加えてペースト状に
し、37℃で１時間加温した後、遠心分離 (15,000×g 、
10分間) して水溶性画分を分離、回収し、この水溶性画
分の細胞溶解活性を測定した。
量的に回収し、凍結乾燥した後、粉砕した。そして、こ
の粉砕した糞1.2gに超純水 3.6mlを加えてペースト状に
し、37℃で１時間加温した後、遠心分離 (15,000×g 、
10分間) して水溶性画分を分離、回収し、この水溶性画
分の細胞溶解活性を測定した。
【００２５】また、飼育が終了したラットはエーテル麻
酔下で解剖し、大腸遠位部の内容物を回収し、凍結乾燥
して水分（％）を測定した。
酔下で解剖し、大腸遠位部の内容物を回収し、凍結乾燥
して水分（％）を測定した。
【００２６】一方、13週齢Wistar系雄ラット１匹をエー
テル麻酔下で開腹し、後大静脈より血液５mlを回収し、
ヘパリン処理した後、遠心分離(1,000×g 、10分間、４
℃)し、上清とバフィコートをパスツールピペットで除
去して残渣を赤血球画分とした。次に、この赤血球画分
に３倍体積量のＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液(pH
7.4、1.5mM ＨＥＰＥＳ及び 0.9％塩化ナトリウム含有)
を添加し、赤血球膜を壊さないよう良く撹拌した後、
遠心分離(1,000×g 、10分間、４℃) し、上層とバフィ
コートを除去するという操作を４回繰り返し、赤血球を
洗浄した。そして、このようにして得られた赤血球に３
倍体積量の 0.9％塩化ナトリウム溶液を添加、混合し、
糞の水溶性画分の細胞溶解活性を測定する際に使用し
た。
テル麻酔下で開腹し、後大静脈より血液５mlを回収し、
ヘパリン処理した後、遠心分離(1,000×g 、10分間、４
℃)し、上清とバフィコートをパスツールピペットで除
去して残渣を赤血球画分とした。次に、この赤血球画分
に３倍体積量のＮ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−
Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液(pH
7.4、1.5mM ＨＥＰＥＳ及び 0.9％塩化ナトリウム含有)
を添加し、赤血球膜を壊さないよう良く撹拌した後、
遠心分離(1,000×g 、10分間、４℃) し、上層とバフィ
コートを除去するという操作を４回繰り返し、赤血球を
洗浄した。そして、このようにして得られた赤血球に３
倍体積量の 0.9％塩化ナトリウム溶液を添加、混合し、
糞の水溶性画分の細胞溶解活性を測定する際に使用し
た。
【００２７】糞の水溶性画分の細胞溶解活性を測定する
に際しては、以下のような検体を調製して使用した。 検体１ 糞の水溶性画分 40μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 120μl 検体２ 糞の水溶性画分 80μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 80μl 検体３ 糞の水溶性画分 120μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 40μl 検体４ 糞の水溶性画分 160μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 ０μl 標準検体１ 超純水 ０μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 160μl 標準検体２ 超純水 40μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 120μl 標準検体３ 超純水 80μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 80μl 標準検体４ 超純水 120μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 40μl 標準検体５ 超純水 160μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 ０μl
に際しては、以下のような検体を調製して使用した。 検体１ 糞の水溶性画分 40μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 120μl 検体２ 糞の水溶性画分 80μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 80μl 検体３ 糞の水溶性画分 120μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 40μl 検体４ 糞の水溶性画分 160μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 ０μl 標準検体１ 超純水 ０μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 160μl 標準検体２ 超純水 40μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 120μl 標準検体３ 超純水 80μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 80μl 標準検体４ 超純水 120μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 40μl 標準検体５ 超純水 160μl ＋ 0.9％塩化ナトリウム溶液 ０μl
【００２８】まず、検体１〜４に 0.9％塩化ナトリウム
溶液に混合した赤血球40μl を添加した後、１分間に 1
00回のストロークで振とうしながら37℃で２時間加温し
た。また、検体ブランクとして、糞の水溶性画分 160μ
l と 0.9％塩化ナトリウム溶液40μl を混合したものを
同様に加温した。さらに、標準検体１〜５に 0.9％塩化
ナトリウム溶液に混合した赤血球40μl を添加した後、
同様に加温した。
溶液に混合した赤血球40μl を添加した後、１分間に 1
00回のストロークで振とうしながら37℃で２時間加温し
た。また、検体ブランクとして、糞の水溶性画分 160μ
l と 0.9％塩化ナトリウム溶液40μl を混合したものを
同様に加温した。さらに、標準検体１〜５に 0.9％塩化
ナトリウム溶液に混合した赤血球40μl を添加した後、
同様に加温した。
【００２９】この加温した検体１〜４、検体ブランク及
び標準検体１〜５をそれぞれ遠心分離 (10,000×g 、５
分間) し、上清を回収した後、この上清 150μl に超純
水６mlを添加し、原子吸光分析機（日立製作所製、180-
80型）で鉄濃度を測定した。
び標準検体１〜５をそれぞれ遠心分離 (10,000×g 、５
分間) し、上清を回収した後、この上清 150μl に超純
水６mlを添加し、原子吸光分析機（日立製作所製、180-
80型）で鉄濃度を測定した。
【００３０】そして、以下のような計算により細胞溶解
活性を算出した。 （１）次式により、標準検体１〜５の鉄濃度から標準の
面積を求めた。 標準の面積=(B-A)×1/2 +((B-A)+(C-A))×1/2 +((C-A)+
(D-A))×1/2 +((D-A)+(E-A))×1/2 標準検体１の鉄濃度 (μg/ml) ： A 標準検体２の鉄濃度 (μg/ml) ： B 標準検体３の鉄濃度 (μg/ml) ： C 標準検体４の鉄濃度 (μg/ml) ： D 標準検体５の鉄濃度 (μg/ml) ： E
活性を算出した。 （１）次式により、標準検体１〜５の鉄濃度から標準の
面積を求めた。 標準の面積=(B-A)×1/2 +((B-A)+(C-A))×1/2 +((C-A)+
(D-A))×1/2 +((D-A)+(E-A))×1/2 標準検体１の鉄濃度 (μg/ml) ： A 標準検体２の鉄濃度 (μg/ml) ： B 標準検体３の鉄濃度 (μg/ml) ： C 標準検体４の鉄濃度 (μg/ml) ： D 標準検体５の鉄濃度 (μg/ml) ： E
【００３１】（２）次式により、検体１〜４及び検体ブ
ランクの鉄濃度から検体の面積を求めた。 検体の面積=(F-J/4)×1/2 +((F-J/4)+(G-J/2))×1/2 +
((G-J/2)+(H-3J/4)) ×1/2 +((H-3J/4)+(I-J)) ×1/2 検体１の鉄濃度 (μg/ml) ： F 検体２の鉄濃度 (μg/ml) ： G 検体３の鉄濃度 (μg/ml) ： H 検体４の鉄濃度 (μg/ml) ： I 検体ブランクの鉄濃度 (μg/ml) ： J
ランクの鉄濃度から検体の面積を求めた。 検体の面積=(F-J/4)×1/2 +((F-J/4)+(G-J/2))×1/2 +
((G-J/2)+(H-3J/4)) ×1/2 +((H-3J/4)+(I-J)) ×1/2 検体１の鉄濃度 (μg/ml) ： F 検体２の鉄濃度 (μg/ml) ： G 検体３の鉄濃度 (μg/ml) ： H 検体４の鉄濃度 (μg/ml) ： I 検体ブランクの鉄濃度 (μg/ml) ： J
【００３２】（３）次式により、糞の水溶性画分の細胞
溶解活性を求めた。 細胞溶解活性(%)=検体の面積× 100×３×(100／（各群
の大腸内容物の平均水分含量(%)-1)／標準の面積 その結果を表５に示す。
溶解活性を求めた。 細胞溶解活性(%)=検体の面積× 100×３×(100／（各群
の大腸内容物の平均水分含量(%)-1)／標準の面積 その結果を表５に示す。
【００３３】
【表５】 ──────────────────────────────────── 細胞溶解活性 ──────────────────────────────────── 対照群 151±24（％） ビフィドバクテリウム・ロンガム投与群 87±19* ビフィドバクテリウム・アドレスセンティス投与群 90±22* ビフィドバクテリウム・インファンティス投与群 89±15* ビフィドバクテリウム・ビフィダム投与群 92±20* ビフィドバクテリウム・ブレベ投与群 85±18* ──────────────────────────────────── 数値は平均値±標準誤差を示す * 対照群との間に有意差あり（危険率５％以下）
【００３４】本発明の有効成分であるビフィドバクテリ
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の各菌体は、
１，２−ジメチルヒドラジン・２塩酸を注射することに
より大腸癌を発病し易い遺伝的素因を誘導し、さらに高
脂肪・低カルシウム飼料を摂取させたラットから排泄さ
れる糞の水溶性画分の細胞溶解活性を対照群に比べ有意
に低下させることが判った。
ウム(Bifidobacterium) 属に属する微生物の各菌体は、
１，２−ジメチルヒドラジン・２塩酸を注射することに
より大腸癌を発病し易い遺伝的素因を誘導し、さらに高
脂肪・低カルシウム飼料を摂取させたラットから排泄さ
れる糞の水溶性画分の細胞溶解活性を対照群に比べ有意
に低下させることが判った。
【００３５】
【実施例３】実施例１で得られたビフィドバクテリウム
・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体 40gに乳
糖900gとコーンスターチ574gを加え、Ｖ型混合機で混合
し、混合粉末を得た。そして、ヒドロキシプロピルセル
ロース 16gに滅菌精製水 150mlを加えて撹拌し溶解した
溶液とこの混合粉末とを双軸練合機で練合し、押し出し
造粒機で造粒した後、通気乾燥機を使用して60℃で30分
間乾燥することにより整粒し、腸管内での細胞溶解活性
抑制作用を賦与した顆粒状薬剤1,480gを製造した。
・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体 40gに乳
糖900gとコーンスターチ574gを加え、Ｖ型混合機で混合
し、混合粉末を得た。そして、ヒドロキシプロピルセル
ロース 16gに滅菌精製水 150mlを加えて撹拌し溶解した
溶液とこの混合粉末とを双軸練合機で練合し、押し出し
造粒機で造粒した後、通気乾燥機を使用して60℃で30分
間乾燥することにより整粒し、腸管内での細胞溶解活性
抑制作用を賦与した顆粒状薬剤1,480gを製造した。
【００３６】
【実施例４】実施例１で得られたビフィドバクテリウム
・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体500g、リ
ンゴ冷凍濃縮果汁25kg、グラニュー糖92kg、リンゴ酸
2.5kg、クエン酸 0.5kg、アップルアロマ３kg及びエッ
センス１kgに水 900kgを加えて混合し溶解することによ
り、腸管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した清涼飲
料 1,000kgを製造した。
・ロンガム(Bifidobacterium longum) の菌体500g、リ
ンゴ冷凍濃縮果汁25kg、グラニュー糖92kg、リンゴ酸
2.5kg、クエン酸 0.5kg、アップルアロマ３kg及びエッ
センス１kgに水 900kgを加えて混合し溶解することによ
り、腸管内での細胞溶解活性抑制作用を賦与した清涼飲
料 1,000kgを製造した。
【００３７】
【発明の効果】ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m) 属に属する微生物の菌体は、腸管内での細胞溶解活
性抑制作用を有するので、結果的に腸粘膜を保護する効
果を発揮し、大腸癌等の発病を予防することが期待され
る。
m) 属に属する微生物の菌体は、腸管内での細胞溶解活
性抑制作用を有するので、結果的に腸粘膜を保護する効
果を発揮し、大腸癌等の発病を予防することが期待され
る。
Claims (2)
- 【請求項１】 ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m) 属に属する微生物の菌体を有効成分とする腸管内細
胞溶解活性抑制剤。 - 【請求項２】 ビフィドバクテリウム(Bifidobacteriu
m) 属に属する微生物の菌体を配合して腸管内での細胞
溶解活性抑制作用を賦与した医薬又は飲食品。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04126396A JP4852681B2 (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | 腸管内細胞溶解活性抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04126396A JP4852681B2 (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | 腸管内細胞溶解活性抑制剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH09227391A true JPH09227391A (ja) | 1997-09-02 |
| JP4852681B2 JP4852681B2 (ja) | 2012-01-11 |
Family
ID=12603573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04126396A Expired - Fee Related JP4852681B2 (ja) | 1996-02-28 | 1996-02-28 | 腸管内細胞溶解活性抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP4852681B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002053472A (ja) * | 2000-05-31 | 2002-02-19 | Yakult Honsha Co Ltd | 脂質過酸化抑制剤 |
| JP2006516405A (ja) * | 2003-01-31 | 2006-07-06 | プロビ エービー | グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 |
| JP2012180288A (ja) * | 2011-02-28 | 2012-09-20 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 抗菌剤 |
| WO2018136617A3 (en) * | 2017-01-18 | 2018-08-23 | Evelo Biosciences, Inc. | Bacteria for treating cancer |
-
1996
- 1996-02-28 JP JP04126396A patent/JP4852681B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2002053472A (ja) * | 2000-05-31 | 2002-02-19 | Yakult Honsha Co Ltd | 脂質過酸化抑制剤 |
| JP2006516405A (ja) * | 2003-01-31 | 2006-07-06 | プロビ エービー | グルタミン産生能を有する新規のＢｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ菌株 |
| JP2012180288A (ja) * | 2011-02-28 | 2012-09-20 | Morinaga Milk Ind Co Ltd | 抗菌剤 |
| WO2018136617A3 (en) * | 2017-01-18 | 2018-08-23 | Evelo Biosciences, Inc. | Bacteria for treating cancer |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4852681B2 (ja) | 2012-01-11 |
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