JPH04264034A - 生体内過酸化脂質抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、乳酸桿菌菌体及び／ま
たは乳酸桿菌菌体の親水性溶媒抽出物を有効成分とする
生体内過酸化脂質抑制剤に関する。本発明の生体内過酸
化脂質抑制剤は、ヒトの老化、動脈硬化、各種腫瘍に関
連する生体内過酸化脂質の生成、蓄積を抑制する作用を
有するので、医薬及び食品の分野で利用可能である。

【０００２】

【従来の技術】近年、生体内における過酸化脂質の生成
、蓄積が、ヒトの老化（シワ、老人性色素、老眼、老人
性白内障、白髪発生、健忘症、痴呆症、老衰）や動脈硬
化症、心筋症、脳血栓症などの循環器系疾患、あるいは
各種肝疾患や各種腫瘍などの発症に影響を及ぼしている
ことが報告され、これらの治療及び予防の目的で生体内
過酸化脂質の生成を抑制する方法が注目されるようにな
ってきている。

【０００３】従来、生体内の過酸化脂質抑制剤として、
ビタミンＥ、ビタミンＣ、ビタミンＡ、尿酸などのラジ
カル消去剤やカタラーゼ、ペルオキシダーゼ、グルタチ
オンペルオキシダーゼなどの酵素剤が知られているが、
直接生体内で脂質の過酸化反応を防御するものとしては
ビタミンＥが用いられているのみである。このビタミン
Ｅは、生体内で優れた過酸化脂質抑制効果を有するが、
脂溶性であり、水に難溶性であるために適用範囲が制限
されるという問題がある。

【０００４】一方、微生物菌体、菌体培養物、あるいは
菌体抽出物の酸化抑制効果を利用して、化粧品、医薬品
、食品、飼料などの保存性を向上させるための抗酸化剤
が知られている（特開昭５８−１９８５８４号公報、特
開平２−１１７３４９号公報、特開平２−２１０４９０
号公報）。さらに、ストレプトコッカス・ラクチス・リ
スター菌体消化物の抗酸化作用を利用した乳酸菌調製物
が知られている（特開平３−４７６８号公報）。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、上述の
現状に鑑み、安全で安価な、しかも水溶性の生体内過酸
化脂質抑制剤を求めて鋭意研究を重ねてきた結果、古来
より食用として用いられ安全性が立証されている乳酸桿
菌の菌体及び菌体抽出物に生体内過酸化脂質抑制効果を
見出し、本発明を完成するに至った。したがって、本発
明は乳酸桿菌の菌体または菌体抽出物を有効成分とする
生体内過酸化脂質の生成を抑制する薬剤を提供すること
を課題とする。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明では、乳酸桿菌の
菌体または菌体の水溶性溶媒抽出物を有効成分として用
いる。本発明で用いることのできる乳酸桿菌としては、
ラクトバチルス・ラムノーサス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌ
ｌｕｓ　　ｒｈａｍｎｏｓｕｓ）、ラクトバチルス・カ
ゼイ・サブスピーシーズ・プソイドプランタルム（Ｌａ
ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓｃａｓｅｉ　　ｓｕｂｓｐ．ｐ
ｓｅｕｄｏｐｌａｎｔａｒｕｍ）、ラクトバチルス・デ
ルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス（Ｌａ
ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ　
　ｓｕｂｓｐ．ｂｕｌｇａｒｉｃｕｓ）、ラクトバチル
ス・ブヒネリ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｂｕｃ
ｈｎｅｒｉ）、ラクトバチルス・ファーメンタム（Ｌａ
ｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　　ｆｅｒｍｅｎｔｕｍ）など
を例示することができる。

【０００７】乳酸桿菌の菌体は以下のようにして得るこ
とができる。乳酸桿菌を通常の培養に用いる液体培地で
培養した後、遠心分離などの操作によって菌体を回収し
、十分洗浄を行って目的とする乳酸桿菌の生菌体を得る
。さらに、必要に応じて、常法に従い、凍結、加熱乾燥
、凍結乾燥、噴霧乾燥などの処理を行い、菌体を調製す
る。

【０００８】また、菌体抽出物の調製は、水、温水、メ
タノール、エタノール、アセトンなどの水系有機溶媒を
用い、様々な形態の菌体を懸濁させ、そのまま、もしく
は超音波破砕処理などの物理的処理や酵素処理などの生
化学的処理など様々な処理を単独または組み合わせるこ
とによって抽出を行い、次いで、遠心分離や濾過などの
処理によって菌体残渣を除去することによって行う。さ
らに、必要に応じて、常法に従い、ゲル濾過クロマトグ
ラフィー、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマ
トグラフィー、親和性クロマトグラフィーなどのクロマ
ト処理や限外濾過、透析などの膜処理を単独または組み
合わせることによって有効成分の含量を高めることもで
きる。

【０００９】ここで用いる乳酸桿菌の菌体は生菌でも死
菌でもよい。上述のようにして得られた乳酸桿菌の菌体
または菌体抽出物は、そのままの粉末状態、または、こ
れに乳糖などの賦形剤を加えて粉剤、錠剤、丸剤、カプ
セル剤、顆粒剤として経口の生体内過酸化脂質抑制剤と
して用いることができる。また、各種飲食品、例えば、
清涼飲料水、果汁飲料、発酵飲料、ゼリー、アイスクリ
ームなどに添加することによって生体内過酸化脂質抑制
飲食品として用いられる。さらに、ガムやキャンディー
などの菓子類にも添加することができる。

【００１０】投与量は、投与対象者の症状、年令などを
考慮して、それぞれ個別に適宜決定されるが、通常成人
一日当たり、菌体粉末として０．０２〜０．４ｇ、菌体
抽出物粉末として１ｍｇ〜２０ｍｇであり、これを一日
数回に分けて投与するとよい。

【００１１】次に本発明の実施例を挙げて本発明を具体
的に説明する。

【実施例１】１％ペプトン、０．５％酵母エキス、２％
グルコース、０．２％リン酸水素二カリウム、０．２％
クエン酸二アンモニウム、０．１％ツィーン８０、０．
５％酢酸ナトリウム、０．０５８％硫酸マグネシウム、
０．０２８％硫酸マンガンを含む合成培地２００ｌを１
００℃、２時間で殺菌し、同様の合成培地で予め培養し
た各種乳酸桿菌４ｌをこの合成培地に接種して、３７℃
、１６時間培養した。培養終了後、７０００×ｇ、１０
分間の遠心分離を行って菌体を回収し、この菌体を蒸留
水で３回洗浄した後、さらに凍結乾燥を行って凍結乾燥
菌体を得た。この凍結乾燥菌体を１０倍量の蒸留水に懸
濁し、氷冷中で４０分間の超音波処理を行い、１６００
０×ｇ、２０分間の遠心分離を行って上清を分取した後
、凍結乾燥を行って菌体の親水性溶媒抽出物を得た。

【００１２】このようにして得られた各種乳酸桿菌の菌
体及び菌体の親水性溶媒抽出物を生体内過酸化脂質抑制
剤として各実施例及び試験に用いた。なお、各種乳酸桿
菌の凍結乾燥菌体の収量及び菌体の親水性溶媒抽出物の
収量は以下の通りである。ラクトバチルス・ブヒネリ　
　ＳＢＴ　　２０２８（微工研菌寄第１１９２１号）凍
結乾燥菌体収量３８５ｇ、親水性溶媒抽出物収量１５．
４８ｇ、ラクトバチルス・ラムノーサス　　ＳＢＴ　　
２２５７（微工研菌寄第１１９２２号）凍結乾燥菌体収
量２２８ｇ、親水性溶媒抽出物収量１６．３６ｇ。ラク
トバチルス・カゼイ・サブスピーシーズ・プソイドプラ
ンタルム　　ＳＢＴ　　０６２４（微工研菌寄第１１９
２０号）凍結乾燥菌体収量３６２ｇ、親水性溶媒抽出物
収量１８．０５ｇ。ラクトバチルス・ファーメンタム　
　ＳＢＴ　　２５５８（微工研菌寄第１１９２３号）凍
結乾燥菌体収量３７４ｇ、親水性溶媒抽出物収量１５．
２４ｇ。ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピー
シーズ・ブルガリカス　　ＳＢＴ　　２１１８Ｂ（微工
研菌寄第１１９１８号）凍結乾燥菌体収量１８１ｇ、親
水性溶媒抽出物収量１０．４５ｇ。ラクトバチルス・デ
ルブルッキー・サブスピーシーズ・ブルガリカス　　Ｓ
ＢＴ　　２１２１Ａ（微工研菌寄第１１９１９号）凍結
乾燥菌体収量１７５ｇ、親水性溶媒抽出物収量１１．７
７ｇ。

【００１３】

【実施例２】（１）顆粒剤の製造 乳酸桿菌の凍結乾燥菌体３８０ｇに、乳糖８８３ｇとコ
ーンスターチ２２１ｇを加え、Ｖ型混合機で混合し、混
合粉末を得た。この混合粉末をヒドロキシプロピルセル
ロース１６ｇに滅菌精製水１５０ｍｌを加えて攪拌溶解
した溶液と共に双軸練合機で練合し、押し出し造粒機で
造粒した後、通気乾燥機で６０℃、５０分間乾燥するこ
とによって整粒し、顆粒状の生体内過酸化脂質抑制剤１
４８０ｇを製造した。

【００１４】（２）清涼飲料の製造 乳酸桿菌体の親水性溶媒抽出物５０ｇ、リンゴ冷凍濃縮
果汁２０ｋｇ、グラニュー糖９２ｋｇ、リンゴ酸２．５
ｋｇ、クエン酸０．５ｋｇ、アップルアロマ３ｋｇ、エ
ッセンス１ｋｇに水９００ｋｇを加えて混合溶解した後
、プレート式殺菌機で９５℃、５秒間殺菌することによ
って生体内過酸化脂質抑制効果を有する清涼飲料１００
０ｋｇを製造した。

【００１５】

【試験例１】（１）ラット肝ミクロソームの調製生体内
過酸化脂質抑制試験に用いるラット肝ミクロソームを次
のように調製した。ＳＤ系ラットの肝臓８０．９ｇを０
．１５Ｍ塩化カリウムを含むｐＨ７．４の５ｍＭトリス
−マレイン酸緩衝液で均質後、１５０００×ｇ、６０分
間の遠心分離を行って上清を得、さらに１０００００×
ｇ、６０分間の遠心分離を行って沈澱を回収した。この
沈澱を上記トリス−マレイン酸緩衝液で１回洗浄し、同
緩衝液中蛋白質濃度が５ｍｇ／ｍｌのラット肝ミクロソ
ーム懸濁液１２０ｍｌを得た。

【００１６】（２）生体内過酸化脂質抑制試験試験管に
、実施例で調製した乳酸桿菌菌体親水性溶媒抽出物５ｍ
ｇを１０ｍｌの蒸留水に懸濁した生体内過酸化脂質抑制
剤０．１ｍｌ、ｐＨ７．４の５０ｍＭトリス−塩酸緩衝
液２．０ｍｌ、ラット肝ミクロソーム懸濁液０．１ｍｌ
、蒸留水０．１ｍｌ、１．５ｍＭニコチンアミドアデニ
ンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）０．１ｍｌをそ
れぞれ分注して３７℃に保温した。これに０．１２５ｍ
Ｍ硫酸第一鉄０．１ｍｌを添加して３０分間保持したも
のを反応液とした。そして、２０％トリクロロ酢酸０．
３ｍｌ、０．０５Ｍチオバルビツール酸０．６ｍｌ、０
．２％ブチルヒドロキシトルエン０．０５ｍｌをそれぞ
れ分注した別の試験管に、反応液１ｍｌを移して混合し
た後、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行って上
清を得た。この上清をネジ付試験管に移して沸騰湯浴中
で２０分間加熱した後、直ちに氷水で冷却し、５３２ｎ
ｍの吸光度を測定した。なお、生体内過酸化脂質の抑制
率は次の式によって算出した。

【式１】 　　　　Ａ：生体内過酸化脂質抑制剤を添加した時の吸
光度　　　　Ｂ：生体内過酸化脂質抑制剤に代えて水を
添加した時の吸光度

【００１７】各菌株抽出物由来の生
体内過酸化脂質抑制剤を用いて行った生体内過酸化脂質
抑制試験の結果を表１に示す。

【表１】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　乳　　酸　　菌　　株　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　抑制率───
─────────────────────────
────────　　ラクトバチルス・ブヒネリ　　Ｓ
ＢＴ　　２０２８　　　　　　　　　　　　　　　　　
　９２％　　ラクトバチルス・ラムノーサス　　ＳＢＴ
　　２２５７　　　　　　　　　　　　　　９３％　　
ラクトバチルス・カゼイ・サブスピーシーズ・　　　　
　　　　　　　　　　　　　　８８％　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　プソイドプランタルム　　Ｓ
ＢＴ　　０６２４　　ラクトバチルス・ファーメンタム
　　ＳＢＴ　　２５５８　　　　　　　　　　　　８９
％────────────────────────
────────────　　ストレプトコッカス・サ
リバリウス・　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　１０％　　　　　　　　サブスピーシー
ズ・サーモフィルス　　ＳＢＴ　　１０２０　　（Ｓｔ
ｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｓｕｂｓｐ
．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）　　ビフィドバクテリウ
ム・アドレッセンチス　　ＳＢＴ　　２７０３　　　　
　　６％　　（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａ
ｄｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）──────────────
──────────────────────

【００
１８】

【試験例２】（１）ラット肝ミクロソームの調製試験例
１と同様に行った。 （２）生体内過酸化脂質抑制試験 試験管に、実施例で調製した乳酸桿菌の凍結乾燥菌体０
．１ｇを１０ｍｌの蒸留水に懸濁した生体内過酸化脂質
抑制剤０．１ｍｌ、ｐＨ７．４の５０ｍＭトリス−塩酸
緩衝液２．０ｍｌ、ラット肝ミクロソーム画分懸濁液０
．１ｍｌ、蒸留水０．１ｍｌ、１．５ｍＭニコチンアミ
ドアデニンジヌクレオチドリン酸（ＮＡＤＰＨ）０．１
ｍｌをそれぞれ分注して３７℃に保温した。これに０．
１２５ｍＭ塩酸第一鉄０．１ｍｌを添加して３０分間保
持したものを反応液とした。そして、２０％トリクロロ
酢酸０．３ｍｌ、０．０５Ｍチオバルビツール酸０．６
ｍｌ、０．２％ブチルヒドロキシトルエン０．０５ｍｌ
をそれぞれ分注した別の試験管に、反応液１ｍｌを移し
て混合した後、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を
行って上清を得た。この上清をネジ付試験管に移して沸
騰湯浴中で２０分間加熱した後、直ちに氷水で冷却し、
５３２ｎｍの吸光度を測定した。なお、生体内過酸化脂
質の抑制率は式１によって算出した。

【００１９】各菌体由来の生体内過酸化脂質抑制剤を用
いて行った生体内過酸化脂質抑制試験の結果を表２に示
す。

【表２】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　乳　　酸　　菌　　株　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　抑制率（％）──
─────────────────────────
─────────　　ラクトバチルス・ブヒネリ　　
ＳＢＴ　　２０２８　　　　　　　　　　　　　　　　
　　８７　　ラクトバチルス・ラムノーサス　　ＳＢＴ
　　２２５７　　　　　　　　　　　　　　８２　　ラ
クトバチルス・カゼイ・サブスピーシーズ・　　　　　
　　　　　　　　　　　　　７５　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　プソイドプランタルム　　ＳＢＴ
　　０６２４　　ラクトバチルス・ファーメンタム　　
ＳＢＴ　　２５５８　　　　　　　　　　　　７７　　
ラクトバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ　
　　　　　　　　　　　７０　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　ブルガリカス　　ＳＢＴ
　　２１２１Ａ　　ラクトバチルス・デルブルッキー・
サブスピーシーズ　　　　　　　　　　　　８６　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ブル
ガリカス　　ＳＢＴ　　２１１８Ｂ─────────
─────────────────────────
──

【００２０】

【試験例３】（１）赤血球浮遊液の調製赤血球膜溶血試
験に用いるウサギ赤血球浮遊液を次のように調製した。 市販ウサギ血液１０ｍｌをスピッツ管に分取して３００
０ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行った後、その上清を
除去して赤血球を得た。この赤血球に４倍量の生理食塩
水を添加して赤血球膜を壊さないよう良く攪拌した後、
３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離を行った。この操
作を２回繰り返して赤血球を洗浄した。 こうして得られた洗浄赤血球１ｍｌを生理食塩水１９ｍ
ｌに懸濁して５％赤血球浮遊液とした。

【００２１】（２）赤血球溶血試験 試験に先立って用いる試薬、試料及び赤血球浮遊液を３
７℃に保温しておき、表３に記載された各試験区分に従
って、４００ｍＭの２，２′，アゾビス（２−アシジノ
プロパン）二塩酸塩（以後、ＡＡＰＨと略記）、実施例
で調製した乳酸桿菌菌体親水性溶媒抽出物５ｍｇを１０
ｍｌの蒸留水に懸濁した生体内過酸化脂質抑制剤、ある
いは生理食塩水を分注した試験管に、ピペットで赤血球
浮遊液をゆっくりと滴下し、恒温槽中で３７℃、６０分
間反応させた。反応終了と同時に、表４に記載された各
試験区分に従って、生理食塩水あるいは蒸留水を試験管
に分注し、赤血球膜を壊さないようにゆっくり攪拌した
後、３０００ｒｐｍ、１０分間の遠心分離によって上清
を得た。

【００２２】

【表３】 ─────────────────────────
───────────（単位：ｍｌ）　　　　　　試
料Ａ　　　　試料Ｂ　　　　試料Ｃ　　　　試料Ｄ　　
　　試料Ｅ────────────────────
────────────────　　赤血球浮遊液　
　　　　　０．１０　　０．１０　　０．１０　　０．
１０　　０．１０　　ＡＡＰＨ　　　　　　　　　　０
．０５　　０．０５　　０．０５　　０．０５　　　　
──　　　　過酸化脂質抑制剤　　０．０５　　０．０
５　　　　──　　　　　　──　　　　　　──　　
　　生理食塩水　　　　　　　　　　──　　　　　　
──　　　　０．０５　　０．０５　　０．１０───
─────────────────────────
────────　　試料Ａ：酸化剤を含む過酸化脂質
抑制剤の溶血率　　試料Ｂ：酸化剤を含む過酸化脂質抑
制剤の完全溶血率　　試料Ｃ：酸化剤のみの溶血率 　　試料Ｄ：酸化剤のみの完全溶血率 　　試料Ｅ：ブランク

【００２３】

【表４】 ─────────────────────────
───────────（単位：ｍｌ）　　　　　　試
料Ａ　　　　試料Ｂ　　　　試料Ｃ　　　　試料Ｄ　　
　　試料Ｅ────────────────────
────────────────　　蒸留水　　　　
　　　　　　　　　　──　　　　２．００　　　　─
─　　　　２．００　　　　──　　生理食塩水　　　
　　　　　２．００　　　　──　　　　２．００　　
　　──　　　　２．００─────────────
───────────────────────

【０
０２４】このようにして得られた上清について５４０ｎ
ｍの吸光度を測定した。なお、相対溶血率は式２によっ
て算出した。

【式２】 相対溶血率（％）＝｛（Ａ−Ｅ）（Ｄ−Ｅ）／（Ｂ−Ｅ
）（Ｃ−Ｅ）｝×１００Ａ：試料Ａの吸光度 Ｂ：試料Ｂの吸光度 Ｃ：試料Ｃの吸光度 Ｄ：試料Ｄの吸光度 Ｅ：試料Ｅの吸光度

【００２５】各菌体抽出物由来の生体内過酸化脂質抑制
剤の相対溶血率を表５に示す。

【表５】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　乳　　酸　　菌　　株　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　相対溶血率─
─────────────────────────
──────────　　ラクトバチルス・デルブルッ
キー・サブスピーシーズ・　　　　　　　　　　　　３
２％　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　ブルガリカス　　ＳＢＴ　　２１１８Ｂ　　ラク
トバチルス・デルブルッキー・サブスピーシーズ・　　
　　　　　　　　　　２１％　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　ブルガリカス　　ＳＢＴ
　　２１２１Ａ──────────────────
──────────────────　　ストレプト
コッカス・サリバリウス・　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　１００％　　　　　　　　
サブスピーシーズ・サーモフィルス　　ＳＢＴ　　１０
０４　　（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　ｓａｌｉｖ
ａｒｉｕｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　ｓｕｂｓｐ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ）　　ビフ
ィドバクテリウム・アドレッセンチス　　ＳＢＴ　　２
７３４　　　　１００％　　（Ｂｉｆｉｄｏｂａｃｔｅ
ｒｉｕｍ　　ａｄｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）───────
─────────────────────────
────

【００２６】

【試験例４】（１）肝細胞の調製 ラット肝細胞を次のように調製した。体重約２００ｇの
ＳＤ系雄ラットの門脈からカニューレを挿入し、前灌流
液で肝臓から血液を十分除去した。次に前灌流液をコラ
ゲナーゼに代え、右心房との間で１０分間循環させて肝
臓を消化させた後、肝臓を回収し、５００ｒｐｍ、１分
間低速遠心処理で前灌流液による洗浄を３回行って肝細
胞のみを分離した。

【００２７】（２）肝細胞障害抑制試験分離した肝細胞
をコラーゲン処理した２４穴マイクロプレートに２×１
０５　細胞／ウエルとなるよう播種し、１０％子牛血清
、１０−６Ｍデキサメサゾン、及び１０−８Ｍインスリ
ンを添加したイーグルＭＥＭ培地「ニッスイ」で、プレ
ートに定着するまで培養した。その後、実施例で調製し
た乳酸桿菌の菌体親水性溶媒抽出物を０．０１ｍｇ／ｍ
ｌとなるように蒸留水で懸濁した生体内過酸化脂質抑制
剤とジメチルスルホキシドに溶解した７ｍＭ四塩化炭素
とを同時に培地に添加してアッセイを開始した。１時間
後、培地上清に遊離したグルタミン酸−オキザロ酢酸ト
ランスアミナーゼ（以下、ＧＯＴと略記）の量を測定し
て細胞障害度の指標とした。なお、細胞障害抑制率は式
３によって算出した。

【式３】細胞障害抑制率（％）＝〔１−｛（培地上清に
遊離したＧＯＴ量）／（全細胞中に含まれるＧＯＴ量）
｝〕×１００

【００２８】各菌株抽出物由来の生体内過酸化脂質抑制
剤の細胞障害抑制率を表６に示す。

【表６】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　乳　　酸　　菌　　株　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　抑制率───
─────────────────────────
────────　　ラクトバチルス・ブヒネリ　　Ｓ
ＢＴ　　２０２８　　　　　　　　　　　　　　　　　
　８８％　　ラクトバチルス・デルブルッキー・サブス
ピーシーズ・　　　　　　　　　　７９％　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　ブルガリカ
ス　　ＳＢＴ　　２１２１Ａ────────────
────────────────────────　
　ストレプトコッカス・サリバリウス・　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０％　　
　　　　　　サブスピーシーズ・サーモフィルス　　Ｓ
ＢＴ　　１００６　　（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　
　ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　ｓｕｂｓｐ．ｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕ
ｓ）　　ビフィドバクテリウム・アドレッセンチス　　
ＳＢＴ　　２７２８　　　　　　１％　　（Ｂｉｆｉｄ
ｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　　ａｄｌｅｓｃｅｎｔｉｓ）─
─────────────────────────
──────────

【００２９】

【試験例５】（１）ラットの飼育 ３週齢のＳＤ系雄ラット２４匹（６３〜８５ｇ）を、■
実施例で調製したラクトバチルス・ブヒネリ　　ＳＢＴ
　　２０２８株の菌体親水性溶媒抽出物を０．０１ｇ／
ｍｌとなるように蒸留水で懸濁した生体内過酸化脂質抑
制剤投与群、■実施例で調製したラクトバチルス・ラム
ノーサス　　ＳＢＴ　　２２５７株の菌体親水性溶媒抽
出物を０．０１ｇ／ｍｌとなるように蒸留水で懸濁した
生体内過酸化脂質抑制剤投与群、■２０ｐｐｍビタミン
Ｅ投与群、■水投与群の４群に分け、８週間、それぞれ
の試料を１日１回２ｍｌ強制経口投与した。なお、表７
に示したビタミンＥ欠乏食は毎日給餌し、飲料水と共に
自由摂取させた。

【表７】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
　　　　組　　成　　物　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　含有率（％）───
─────────────────────────
────────　　カゼイン（ビタミンを含有しない
）　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
２０　　ショ糖　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　５０　　セルロース粉末　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　５　　ミネラル混合物　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　３．５　　ビタミン
混合物（ビタミンＥを含有しない）　　　　　　　　　
　　　　　　　　　１　　塩化コリン　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　０．２　　ＤＬ−メチ
オニン　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　０．３　　
αコーン澱粉　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
１５　　コーン油　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　５────────────────
────────────────────１００．０
ビタミンＥ無添加を除き、ＡＩＮ−７６（Ａｍｅｒｉｃ
ａｎ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ
１９７６　ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ）組成に準じて調製
した。なお、８週間の飼育期間中、各群共、体重増加量
及び総飼料摂取量に有意差は認められなかった。

【００３０】（２）肝臓内過酸化脂質量測定チオバルビ
ツール酸法によって肝臓内の過酸化脂質量を測定した。 上記の通り、飼育を終了したラットから十分脱血を行い
洗浄して得られた肝臓５ｇに１．１５％塩化カリウム溶
液を加え、テフロンホモゲナイザーを用いて氷中で均質
化を行い、最終容量５０ｍｌの１０％（Ｗ／Ｖ）肝ホモ
ジネートを調製した。このようにして得られた肝ホモジ
ネート０．５０ｍｌをネジ付試験管に分取して表８に記
載した順序で試薬を添加した。この反応液を沸騰湯浴中
で４５分間加熱した後、冷却した。そして、発色画分を
ｎ−ブタノール５．０ｍｌで抽出し、得られたｎ−ブタ
ノール層の５３２ｎｍの吸光度を測定した。

【表８】 ─────────────────────────
───────────　　７％ドデシル硫酸ナトリウ
ム　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　０．２０ｍｌ　　０．１Ｎ塩酸　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　２．００ｍｌ　　１０％
リンタングステン酸　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　０．３０ｍｌ　　０
．５％チオバルビツール酸　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　１．００ｍｌ──
─────────────────────────
─────────各試料投与群の肝臓内過酸化脂質量
を表９に示す。

【表９】 ─────────────────────────
───────────　　　　　　　　　　　　　　
投　　与　　試　　料　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　ＴＢＡ値────
─────────────────────────
───────　　ラクトバチルス・ブヒネリ　　ＳＢ
Ｔ　　２０２８　　　　　　　　　　　　　　２９７±
９３　　ラクトバチルス・ラムノーサス　　ＳＢＴ　　
２２５７　　　　　　　　　　３２８±９５　　ビタミ
ンＥ　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　２２
５±５９　　水　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　　　　　４９７±２０７───────
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────ＴＢＡ値の単位は、ｎＭマロンジアルデハイド
／ｇ肝臓。

【００３１】（３）ジアルル酸溶血試験上記の通り、飼
育を終了したラットから採血して得られたヘパリン血を
遠心分離処理して赤血球０．５ｍｌを分取した。この赤
血球に生理食塩水とｐＨ７．４、０．０５Ｍリン酸緩衝
液の等量混合液２０ｍｌを加えて混和し、３０００ｒｐ
ｍ、１０分間で遠沈を行った後、上清を捨てて赤血球０
．２ｍｌを得、さらに生理食塩水３．８ｍｌを加えて５
％浮遊液とした。反応は次のように行った。試験管Ａ、
Ｂ、Ｃの３本を用意し、３０℃の水浴中で各試験管に５
％浮遊液を０．２５ｍｌずつ分注した。次いで、試験管
Ａに０．０５Ｍリン酸緩衝液０．２５ｍｌ、試験管Ｂ及
びＣに０．０５Ｍリン酸緩衝液０．２０ｍｌを分注し、
さらに試験管Ｂ及びＣには１ｍｇ／ｍｌ濃度のジアルル
酸溶液０．０５ｍｌを加えて３７℃で３０分間保温した
。そして、試験管Ａ及びＢには生理食塩水−リン酸緩衝
液等量混合液５ｍｌを分注し、試験管Ｃには蒸留水５ｍ
ｌを分注して混和した後、３０００ｒｐｍ、１０分間で
遠沈を行って上清を得、５４０ｎｍの吸光度を測定した
。なお、溶血率は次式４によって算出した。

【式４】溶血率（％）＝｛（試験管Ｂの吸光度−試験管
Ａの吸光度）／（試験管Ｃの吸光度−試験管Ａの吸光度
）｝×１００

【００３２】各試料投与群の溶血率を表１０に示す。

【表１０】

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　乳酸桿菌の菌体及び／または菌体親水
   性溶媒抽出物を有効成分とする生体内過酸化脂質抑制剤
   。