JPH09501826A

JPH09501826A - 新規な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株

Info

Publication number: JPH09501826A
Application number: JP7501593A
Authority: JP
Inventors: スキム，ヒョン; ジェパク，ワン; サンムン，ム; ドンユ，ワン; スノ，カプ; オクイ，ドン; フンハ，ソク; アンユ，リ; ジュンイ，ナム; ジェチョ，ヤン; ピョホン，ソン; ハクキム，ジェ; ヒョンキム，ダル; ギキム，ヨン
Original assignee: チェイルフーズアンドケミカルズインコーポレイテッド
Priority date: 1993-06-07
Filing date: 1994-06-02
Publication date: 1997-02-25
Anticipated expiration: 2014-06-23
Also published as: WO1994028928A1; AU6857194A; ATA900694A; JP2911603B2; EP0702564A1; TW403655B; CH687233A5; RU2155226C2; SE9500418D0; NO317148B1; SE507114C2; AT408445B; GB9502373D0; SE9500418L; CA2141871C; AU676575B2; EP0702564B1; ES2074968B1; DE4493997T1; NL9420005A

Abstract

(57)【要約】本発明は、Fisher-Devlin免疫タイプに従って、純粋状態においてシュードモナス・エルギノーザを単離し、次いで単離した株(特に、CFCPA 10142(KCCM 10029)株、CFCPA 20215(KCCM 10030)株、CFCPA 30720(KCCM 10031)株、CFCPA 40057(KCCM 10032)株、CFCPA 50243(KCCM 10033)株、CFCPA 60534(KCCM 10034)株、およびCFCPA 70018(KCCM 10035)株)を繰り返し精製することにより入手した新規の安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に関する。さらに、本発明は弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から得られた10,000〜100,000の範囲の分子量を有する細胞壁タンパク質を含有する、シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する免疫化のためのワクチン、実験動物中で細胞壁タンパク質により誘発された免疫グロブリンを含有するシュードモナス・エルギノーザ感染症を治療するための治療剤、およびそれらの調製方法に関する。弱毒化株の細胞壁タンパク質成分は、非病原性で安全であり、そして優れた抗体の形成を示し、そしてワクチンおよび治療剤の調製に有用である。細胞壁タンパク質は、種々のシュードモナス・エルギノーザ株についての、優れた交差防衛能力および優れた抗体誘発特性を呈する。

Description

【発明の詳細な説明】新規な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株発明の背景発明の分野本発明は、新規な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株、シュードモナス・エルギノーザ感染症の予防ワクチンおよび治療剤、ならびにそれらの調製方法に関する。さらに具体的には、本発明は、Fisher-Devlin免疫タイプ(immunotype) に従って、純粋状態においてシュードモナス・エルギノーザを単離し、次いでマウスを継代させて単離した株を繰り返し精製することにより入手した新規な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株、それらから調製した予防ワクチン、および弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から分離した細胞壁タンパク質により誘発された治療用免疫グロブリン、ならびにそれらの調製方法に関する。先行技術の説明シュードモナス・エルギノーザは、運動性のグラム陰性桿菌で、約0.5μm×1. 5〜3.0μmであり、一本の鞭毛を有し、そして土壌、水中、下水中、およびヒト腸中に広く分布する(Mol．Microbiol．4，1069-1075，1990)。シュードモナス・エルギノーザは、敗血症、一般的な感染症、慢性気道感染症、膵嚢胞性線維症などの難治性の感染症の原因となる病原性株である。シュードモナス・エルギノーザによって引き起こされる敗血症は、微生物自体の侵入、または手術、裂傷、外傷などのせいで抵抗力が低くなった患者の血液中への微生物の毒素成分の分泌のどちらかの原因によって起こる疾患である。毒素の存在は、高熱、血圧の低下、そして最後には死に至る他の症状を伴うショックを引き起こす。さらに、シュードモナス・エルギノーザは尿道感染症において検出されたので、シュードモナス・エルギノーザに対する関心は著しく増加した。従って、シュードモナス・エルギノーザにより生じる敗血症および尿道感染症などの難治性の化膿性疾患を効果的に予防または治療し得る医薬の開発が、緊急に要求される。しかし、シュードモナス・エルギノーザ株は、大部分の抗生物質に耐性であり、そしてシュードモナス・エルギノーザ感染症の効果的な予防剤または治療剤は、現在まで開発されていない。従って、シュードモナス・エルギノーザ感染症の毒力は、時間の経過につれて増加した。シュードモナス・エルギノーザ株は、種々の方法で分類され得る。ある分類系では、Fisher免疫タイプに従って株を７つのタイプに分類する。他の系は、Tera daにより提唱されたO-抗原群に基づいている。さらに他の系は、国際抗原分類表 (International Antigenic Typing Scheme)(IATS)分類系である。分類系の観点では、シュードモナス・エルギノーザに感染した患者中に、最も頻繁に見られるシュードモナス・エルギノーザ株は：Fisher免疫タイプ/O-血清タイプに従う5/2 a、2c、3、7/3a、3c、1/4a、4b、6/5a、5b、4/6、2/7a、7b、7c、/10a、 /13、/12、/11および３、7/3d、3eタイプ、および、Fisher免疫タイプの３、７、２および１タイプ(O-血清タイプの3a、3c、3d、3e、7a、7b、7c、4aおよび4b に相当)が主に存在する。シュードモナス・エルギノーザ感染症の治療方法の一つは、抗毒素でシュードモナス・エルギノーザ毒素を中和する。しかし、抗毒素は、敗血症をすでに患っている患者にのみ有益な治療剤であり、予防的な効果はない。さらに、現在入手可能な抗毒素は、非常に高価であり、そしてその使用が制限されている。その上、抗毒素の使用に伴う最も重大な欠点は、比較的低い治癒率および危険な副作用を伴うことである。抗毒素に伴う欠点を避ける研究下での１つの方法は、シュードモナス・エルギノーザ感染症の予防および治療に共通の抗原を使用する。共通の抗原を入手するための研究下での方法は、一般的に２つの群に分類され得る。第１の方法は、シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防ワクチン抗原として、異なった免疫タイプを有するシュードモナス・エルギノーザ株から分離し、そして精製した共通抗原の使用に関する[Japan，J．Exp．Med．45，355-359，1975]。２番目の方法は、遺伝子工学技術を利用して生産される共通抗原塊の使用に関し、ここで、所望の抗原をコードしている遺伝子を単離し、そして組換えベクターを入手するために好適なベクターに挿入し、次いで好適な宿主を得られた組換えベクターで形質転換し、そして所望の抗原が発現するようにインキュベートする。共通抗原を使用する予防ワクチンの開発は、理論上非常に効果的な方法であるが、この方法に関する研究の現在の進行は、依然未解決な多くの問題を抱えている。主要な欠点は、共通の抗原が、異なった免疫タイプを有するシュードモナス・エルギノーザの全ての種類を妨害し得ず、従ってその効果が極端に低いことである。このような低い効果は、この共通抗原に加えて、他の未知の主要な抗原の存在が、効果的な予防効果を誘発することを示唆している。シュードモナス・エルギノーザ感染症を治療するための他の方法は、または抗生物質、シュードモナス・エルギノーザ株に対して広範囲スペクトル選択性を有する化学療法薬の投与である。しかし、おびただしいシュードモナス・エルギノーザ株が存在し、そしてそれらは一般的に非常に程度の高い薬剤耐性を有するので、多くの患者は、抗生物質では効果的に治療され得ないシュードモナス・エルギノーザ株のために倒れるのである。さらに、治療用免疫グロブリンを用いる方法が開発された。しかし、このような免疫グロブリンは、全てのシュードモナス・エルギノーザ感染症に全く治療効果が見られないかまたはほとんど見られず、従って、シュードモナス・エルギノーザ感染症のほんの限られたタイプに対してのみ用いられた。これは、特定の微生物に対するポリクローナル抗体の調製方法に従って調製した免疫グロブリンに負うところが大きく、従っておびただしいシュードモナス・エルギノーザ株に対しては一般的に作用し得ない。シュードモナス・エルギノーザに対してマウスモノクローナル抗体[J．Inf．D is．152，1290-1299，1985]またはヒトモノクローナル抗体[FEMS Microbiol．Im munol．64，263-268，1990]を用いる安価な治療剤の開発を試みた。ここで、細胞融合技術を用いて細胞バンクから最も効果的な中和抗体を産生する細胞が選択され得、次いで、細胞系は、工業規模で所望の抗体を産生する出発物質として使用され得る。しかし、この方法は、抗体産生を介するシュードモナス・エルギノーザ感染症の治療を目的とし、予防用ワクチンを目的とはしていない。さらに、この方法は、全ての感染症が血清学的および免疫学的に異なったタイプである異なったシュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされるので、それらの全てがただ一つの種類のモノクローナル抗体では治療され得ないという欠点を有する。すなわち、モノクローナル抗体治療は、シュードモナス・エルギノーザに感染した患者の全てを治療するためには効果的に利用され得ない。この方法による広範囲に効果的な治療をするために、試験された交差反応に基づく数種の抗体の同時投与が開発された。ここで、血液をシュードモナス・エルギノーザ感染患者から採取し、そして罹患しているシュードモナス・エルギノーザ株の血清学的および/または免疫学的タイプを同定するために試験した。次いで、同定されたタイプに適切なモノクローナル抗体を患者に投与する。しかし、この方法には長い時間が必要であり、従って緊急の治療を必要とする状態にある患者には利用できない。先行技術において、ワクチン用に抗原としてシュードモナス・エルギノーザ株から分離された細胞壁タンパク質を用いることは提唱されている[Vaccine，Vol ．7，「シュードモナス・エルギノーザワクチンの防御効果に関する実験的研究」、1989を参照のこと]。しかし、上記参考文献において提唱された方法は、弱毒化されていない４種の普通のシュードモナス・エルギノーザ株(すなわち、NN 170041、NN 170015、NN 868、およびNN 170046)を用いており、従ってシュードモナス・エルギノーザ株自体の毒性に関する問題が存在する。さらに、このようなシュードモナス・エルギノーザ株由来のタンパク質成分ワクチンを調製する時から、細胞は破壊され得、細胞質に存在する異質の核酸および毒性の高分子量物質、リポ多糖(LPS)が培地中に放出される。次いで、これらの物質は、ワクチン投与において必要な注意を増加させ、そしてそれらの使用を制限すると思われる不純物として、得られたワクチン中に混入している。発明の開示従って、本願の発明者たちは、シュードモナス・エルギノーザに対する抗体を効果的に誘発し得る方法で、シュードモナス・エルギノーザ株自体の固有の毒性に負う危険が極端に少ない、良好な免疫原性(すなわち抗原性)活性を発現する方法を発見するために、広範囲にわたる調査を行った。その結果、本願の発明者たちは、シュードモナス・エルギノーザ感染患者から単離したシュードモナス・エルギノーザ株を、それらの免疫タイプに基づいて７種に分類し、次いで、各純粋株を、好適な動物宿主に数回生物を継代させることより弱毒化する場合、新規で安全な、そして弱毒化されたシュードモナス・エルギノーザ株が得られ得る。これらの株は、シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防用のワクチンの調製に有用であるのみならず、動物体内におけるシュードモナス・エルギノーザ感染症に対する免疫グロブリンを産生する抗体誘発物質としても用いられ得る細胞壁タンパク質を有する。本発明に従って得られた免疫グロブリンは、危険な場合を包含する種々のシュードモナス・エルギノーザ感染症に、優れた治療効果を呈する。従って、本発明の目的は、シュードモナス・エルギノーザ株自体の毒性を欠く抗原性を呈する細胞壁タンパク質を有する、新規で安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を提供することである。本発明のさらなる目的は、ワクチンが与えられた後に、患者においてシュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患を予防するための免疫応答を誘発するワクチンを提供することである。本発明のさらなる目的は、ワクチンの調製方法を提供することである。本発明の他の目的は、シュードモナス・エルギノーザ株に対する少なくとも１つの免疫グロブリンを含む、シュードモナス・エルギノーザ感染症を治療するための治療剤を提供することである。本発明のさらなる目的は、免疫グロブリンの調製方法を提供することである。本発明のさらに適切な目的のいくつかの大要を前述した。これらの目的は、本発明のさらに適切な特徴および適用を単に説明しているにすぎないと解釈されるべきである。多くの他の有益な結果が、開示された発明を異なる方法で適用することにより、または本発明を開示の範囲内で改変することにより得られ得る。従って、本発明の他の目的、および本発明をもっと完全に理解することは、添付の図面に関連する請求の範囲によって定義される本発明の範囲に加えて、本発明の要旨および好ましい実施態様を記載している詳細な説明を参照することにより行われる。発明の要旨本発明の１つの実施態様は、シュードモナス・エルギノーザ株自体の毒性を欠く抗原性を発現する細胞壁タンパク質を有する、新規で安全な、そして効果的に弱毒化されたシュードモナス・エルギノーザ株に関する。具体的には、本発明は、シュードモナス・エルギノーザに感染した患者からシュードモナス・エルギノーザ株を単離し、単離した微生物株を、Fisher- Devlin免疫タイプに従って７タイプの種に分類し、各免疫タイプに対して１つの代表株を選択し、選択した株を実験動物に対して、注入/単離/再注入を繰り返すことをで精製し、そしてシュードモナス・エルギノーザ株の７タイプのそれぞれについて最も弱毒化された株を選択することによって得られる、安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に関する。本発明のさらなる実施態様には、新規なワクチンおよびシュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防用のワクチンの調製工程が述べられている。ワクチンは、以下に記載のように安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の７タイプのそれぞれから実質的に純粋な状態において細胞壁タンパク質を分離し、そしてさらに分離した細胞壁タンパク質を精製し、次いで、好ましくは、少なくとも３タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株由来の精製細胞壁タンパク質を組み合わせて一つにすることにより調製される。好ましくは、等量の３タイプのそれぞれ由来の細胞壁タンパク質が、本発明のワクチンを調製するのに用いられる。本発明の他の実施態様は、少なくとも１つの安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を培養し、細胞壁タンパク質を分離し、分離した細胞壁タンパク質を精製し、次いで純粋な細胞壁タンパク質を抗体誘発物質として実験動物に注入して免疫グロブリンを誘発させることにより生成される少なくとも１つの免疫グロブリンを含有するシュードモナス・エルギノーザ感染症に対する治療剤、およびその治療剤の調製方法に関する。以下に続く本発明の詳細な説明がさらに良く理解され、そして当該分野への本発明の寄与が十分に認められ得るように、上記に本発明のさらに適切で重要な特徴をまとめた。さらに以下に記載の本発明の特徴は、本発明の請求の範囲の主旨を形成している。当業者は、本明細書中に開示された概念および特定の実施態様が、本発明と同様の目的を行うために他の構成を改変または設計するための基礎として、容易に利用され得ることを理解し得る。さらに、当業者は、このような同意義の構成は、請求の範囲で説明している本発明の意図および範囲から逸脱されないことを理解し得る。図面の簡単な説明本発明の本質および目的を完全に理解するために、添付の図面に関与する以下の詳細な説明を参考とすべきである：図１は、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から分離した精製細胞壁タンパク質のSDS-PAGEの結果を示す；および図２は、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の細胞壁タンパク質を静脈内注射した雄マウスの体重変化を表すグラフである。発明を実施するための最良の形態シュードモナス・エルギノーザのFisher-Devlin免疫タイプは、タイプ１からタイプ７までの７タイプに分類される。本発明において、Fish er免疫タイプの１〜７を有するシュードモナス・エルギノーザ株が、シュードモナス・エルギノーザ感染患者の大部分(すなわち90〜95％以上)の血液中でそれらが検出されているという事実に基づいて、弱毒化のための株として選択される。特に、シュードモナス・エルギノーザの７タイプの中で、タイプ１およびタイプ３が、シュードモナス・エルギノーザ感染患者中で最も頻繁に検出される株である。しかし、本発明の教示は、予防または治療を提供するためにシュードモナス・エルギノーザのあらゆる株に対して使用され得る。本発明の安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、シュードモナス・エルギノーザ株の７タイプをそれぞれ、シュードモナス・エルギノーザ感染症であると決定される患者の血液から純粋状態で単離し、次いで、単離した株を精製手順を繰り返して弱毒化することにより入手され得る。このようにして入手した安全な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、全部で７タイプであり、そしてそれぞれ、CFCPA 10142(Fisherタイプ１)、CFCPA 20215(Fisherタイプ２)、CF CPA 30720(Fisherタイプ３)、CFCPA 40057(Fisherタイプ４)、CFCPA 50243(Fish erタイプ５)、CFCPA 60534(Fisherタイプ６)、CFCPA 70018(Fisherタイプ７)と命名した。ここで、CFCPAは、「Cheil Food and Chemical Pseudomonas aerugin osa」の頭文字であり、それは発明者が本発明を行ったCheil Food and C hemicals Inc.、およびもととなる株の名前のシュードモナス・エルギノーザから構成されている。上記の精製手順を繰り返すことにより入手した弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、相当する親株と実質的に同一の表現型および微生物学的特性を有するが、弱毒化前の親株に存在するどんな病原性よりも、むしろシュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防用のワクチン抗原の調製において、有用な新規の特性を示す。従って、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、新規な微生物株とみなされる。故に、これらの株は、1993年５月12日にブダペスト条約における国際寄託機関であるKorean Federation of Culture Collectionsの the Korean Culture Center of Mioroorganisms(以下KCCM)に、CFCPA 10142に対するKCCM 10029、CFCPA 20215に対するKCCM 10030、CFCPA 30720に対するKCCM 1 0031、CFCPA 40057に対するKCCM 10032、CFCPA 50243に対するKCCM10033、CFCPA 60534に対するKCCM 10034、およびCFCPA 70018に対するKCCM 10035の受託番号で寄託された。弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を生成するための精製手順は、一般的に株が所望のLD₅₀値を示すまで繰り返し行われる。精製手順または工程の回数は、技術者の熟練のレベル、親株の毒性などに依存して変わるが、精製工程は、好ましくは３〜７回行われる。例えば、シュードモナス・エルギノーザのLD₅₀が、少なくとも２×10⁷細胞になるまで行われる。本発明に従って、このようにして得られた新規の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株のマウス中のLD₅₀のレベルは、好ましくは2.0×10⁷ 細胞以上である。本発明は、シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する免疫化のためのワクチンも提供し、それは上記のようにして得られた本発明の新規な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株のそれぞれから純粋状態で細胞壁タンパク質を分離し、次いで、分離した細胞壁タンパク質をさらに精製し、そしてこのようにして得られた精製細胞壁タンパク質を、特定の混合比で、好ましくは免疫化が求められる所望のシュードモナス・エルギノーザ株それぞれに由来の細胞壁タンパク質の等量を、配合することにより調製される。すなわち、それぞれの株に対する使用量は、特定の宿主タイプ中の株に対して免疫化を誘発するのに十分である。さらに、本発明は、弱毒化シュードモナス・エルギノーザが、あるシュードモナス・エルギノーザ株塊を得るために最適生育条件を維持しながら発酵槽中でインキュベートされることで特徴づけられる、シュードモナス・エルギノーザに対する免疫化のためのワクチンの調製方法を提供する。得られた微生物塊は、所望の細胞壁タンパク質を得るために、有機溶媒で処理することによる細胞壁タンパク質の抽出、分子量に基づく分画、超遠心分離を包含する一連の手順に従って処理される。７タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に由来する得られた細胞壁タンパク質は、所望の比における適切な構成、好ましくは等量で、互いに配合される。上記の本発明のワクチンの調製方法は、以下のように要約され得る。以下に、本発明のワクチン組成物を、それらの調製方法を参照してより具体的に説明する。本発明のシュードモナス・エルギノーザに対する予防用のワクチンを調製するために、第１の工程において７タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株、すなわちCFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、CFCPA 40057、CFCPA 5024 3、CFCPA 60534、およびCFCPA 70018のそれぞれが、適切な大きさの発酵槽中でインキュベートされる。この目的のための培養培地としては、ダイズトリプシンブロス(tryptic soy broth)、または、好ましくは以下に記載の特別の培地が、上記のシュードモナス・エルギノーザのインキュベーションには適切である。特別な培地は、グルコース(30g/l)、ペプトン(15g/l)、MgSO₄(0.5g/l)、CaCO₃ (5g/l)、KH₂PO₄(1g/l)、FeSO₄(5mg/l)、CuSO₄(5mg/l)、およびZnSO₄(5mg/l)を含有する。この特別の培地は、シュードモナス・エルギノーザ株を培養するために本発明の発明者らによって独自に設計されており、新規な培地である。従って、この特別な培地は、本発明の範囲内に含まれる。シュードモナス・エルギノーザ株を、この特別な培地で培養する場合、乾燥した細菌塊の重さに基づくと、細菌塊の収率はダイズトリプシンブロス中で培養した細菌量より少なくとも30％高い。従って、このような特別の培地の使用は、好ましい実施態様である。このような細菌塊インキュベーション工程において、最適化培養条件は：温度37℃、通気率１vvm(体積／体積．分)および接種体積は培養培地溶液の５％v/v、そしてインキュベーションは最初の２時間は100rpm、次いで10〜20時間、好ましくは12〜16時間は600rpmの速度での撹拌下で行う。インキュベーションが完了すると、第２工程において、沈殿した細菌細胞が、遠心分離などの方法により培養液から分離される。分離された細菌細胞は、第３工程において、微生物を不活性化するために、そして同時に細胞壁脂質成分を除去するために有機溶媒で処理される。第３工程において、有機溶媒は、好ましくはアセトン、クロロホルム、エタノール、ブタノールなどからなる群から選択され、最も好ましくはアセトンである。引き続き、第４工程には、細胞壁タンパク質の抽出の反復、すなわち５〜６回の抽出が含まれるが、細胞含有物が失われるような細胞自体の破壊は含まれない。この目的のために微生物細胞は、溶液(リン酸緩衝溶液、トリス緩衝溶液など) 中、好ましくはリン酸緩衝溶液中に保持され、そして細胞壁タンパク質を抽出するために、ミキサー、またはホモジナイザーにかけられる。抽出は、好ましくは４℃で、100〜2000rpmでの撹拌により行われる。さらに、所望の細胞壁タンパク質が細胞質中に存在する毒性タンパク質から分離された状態であり得るために、第４工程では細胞の破壊を防ぐように特別注意しなければならない。従って、抽出手順中ずっと、細胞質マーカー酵素として乳酸デヒドロゲナーゼまたはヘキソキナーゼの存在を測定することにより、細胞が破壊されているか否かを継続的に測定する必要がある。その後、上記手順に従って上清中に得られた弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の細胞壁タンパク質は、それらを１回目および２回目の限外濾過にかけることにより分画され、10,000と100,000との間の分子量を有するタンパク質のみが得られる。この工程において、得られた細胞壁タンパク質の分子量が、10,000 〜100,000の範囲内であることが、非常に重要である。この理由は、10,000より小さい分子量の細胞壁タンパク質は、動物実験で決定された所望の予防効果を提供せず、一方100,000より大きい分子量は、高分子リポ多糖(LPS)の存在により毒性効果の原因となり得るからである。 10,000と100,000との間の分子量を有する弱毒化シュードモナス・エルギノーザの７タイプのそれぞれから分離した細胞壁タンパク質は、それぞれ超遠心分離によりさらに精製され、存在し得る考えられる微量なリポ多糖も全て除去される。次いで、全ての細菌性物質を除去する工程が行われ、非病原性で、シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防用ワクチンとして使用するのに十分に純粋な弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の細胞壁タンパク質が最終的に得られる。７タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から得た細胞壁タンパク質は、次いで特定比で配合してワクチンを処方する。弱毒化より前にシュードモナス・エルギノーザ親株の病気が現れる頻度を考慮すると、細胞壁タンパク質の配合は、シュードモナス・エルギノーザ株の少なくとも３タイプ、さらに好ましくは４タイプ以上、そして最も好ましくは７タイプ全てから得た細胞壁タンパク質が混合されなければならない。混合比は、配合すべき細胞壁タンパク質が得られるシュードモナス・エルギノーザ株のタイプにより変わるが、細胞壁タンパク質は、好ましくは等量比で混合される。例えば、本発明の好ましいワクチン組成物は、CFCPA 10142、CFCPA 20215、CF CPA 30720、およびCFCPA 60543から得た細胞壁タンパク質を、１:１:1.5:0.5;１ :１:１:１または0.5:1.5:1.5:0.5の混合比で含有しているか、または、CFCPA 10 142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、CFCPA 40057、CFCPA 50243、CFCPA 60534、CF CPA 70018から得た全ての細胞壁タンパク質を実質的に等量の混合比で含有しているワクチンである。ワクチン中に存在するそれぞれのシュードモナス・エルギノーザ株由来の細胞壁タンパク質混合物の最小量は、計画的な宿主/患者において、免疫化を誘発するのに十分量の最小量である。所望であれば、本発明のシュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防用ワクチンは、上記のように得られた細胞壁タンパク質成分に加えて、薬学的受容可能な賦形剤(例えば、水酸化カルシウム、リン酸カルシウム、ISCOM(免疫刺激複合体)、SAF-1(Syntex Adjuvant Formulation-1)、SAFm(改変Syntex Adjuvant Formulation))および当業者に公知の類似の賦形剤を包含し得る。シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する予防ワクチンとして使用するためには、投与すべき量は、シュードモナス・エルギノーザにさらされ得る被験体の性別、年齢、体重、健康状態などにより変わるが、一般的には各弱毒化株由来の細胞壁タンパク質混合物が0.5〜2.5mgである。この量は、一般的に乾燥重量で 0.1ｇ〜0.5ｇ(湿重量の0.5〜2.5ｇに相当)の細菌塊から得られる。投与の好ましい経路は、筋肉内注射によるものである。本発明の他の局面によると、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から純粋状態で入手した細胞壁タンパク質もまた、実験動物中で免疫グロブリンを誘発するための抗体誘発物質として使用され得る。従って、本発明は、シュードモナス・エルギノーザ感染症を治療するための治療剤を提供する。治療剤には、上記のような分離および精製により得られる純粋状態の細胞壁タンパク質を、シュードモナス・エルギノーザに対する免疫グロブリンの産生を誘発するために実験動物中に注入することにより生成した免疫グロブリンが含有される。具体的には、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から上記で具体的に説明した手順に従って得られた、分離され精製された細胞壁タンパク質は、相関的な抗体の形成を誘発するために、実験動物(ヒツジ、ウサギなど)に接種するのに使用される抗原である。実験動物から血液を集め、次いで血清を分離する。分離された血清を公知の方法で処理し、所望の免疫グロブリンが、精製された状態で得られる。この目的のために、分離された血清からの免疫グロブリンの分離および精製は、関連した技術分野で周知の方法[Practical Immunology第３版、(1989)，292-294を参照のこと]に従って行われ、それは、例えば分離した血清を蒸留水と混合し、混合液をDEAE-セルロース(ジエチルアミノエチル-セルロース)に加えて免疫グロブリンを吸着させ、上清を除去し、次いで免疫グロブリンを吸着したDEAE-セルロースをリン酸緩衝溶液で数回洗浄することによって、精製免疫グロブリンが得られる。シュードモナス・エルギノーザ感染症を治療する治療剤として用いられる免疫グロブリンは、種々の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から分離される細胞壁タンパク質をある特定の比で含有する混合物で、実験動物を免疫することにより得られる。この目的のために、７タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株のそれぞれから得た各細胞壁タンパク質のある特定の比、好ましくは等量の比からなる混合物で、実験動物を免疫することにより得られた、混合免疫グロブリンが用いられ得る。しかし、それぞれの免疫グロブリンの交差反応性を考慮すると、以下の４タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株：CFCPA 1014 2、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534のそれぞれから分離した細胞壁タンパク質の１:１:１:１の比からなる混合物で実験動物を免疫することにより得た免疫グロブリンが、Fisherタイプの１、２、３、４、５、６、および７を有するシュードモナス・エルギノーザ株の全てにより引き起こされる感染症にかなりの治療効果を提供する。これはシュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患を治療するために、好ましい混合免疫グロブリン治療剤である。本発明のシュードモナス・エルギノーザに対する免疫グロブリンは、凍結乾燥形態または液状の薬学的組成物に処方され得、そして必要であれば薬学的に受容可能な担体(例えば、安定剤、保存剤、等張剤など)を含有させる。使用され得る薬学的に受容可能な担体には、好ましくは、凍結乾燥調製物の場合ではマンニトール、ラクトース、サッカロース、ヒトアルブミンなどが包含され、液体調製物の場合は、生理食塩水、注射用の水、リン酸緩衝溶液、水酸化アルミニウムなどが包含される。免疫グロブリンの投与量は、被験体の年齢、体重、性別および一般的な健康状態、シュードモナス・エルギノーザ感染症の重篤性、および投与される混合免疫グロブリンの成分に依存して変わる。免疫グロブリンは、成人に対して静脈に、１日当たり体重1kg当たり0.1mg〜1000mgの量、好ましくは１mg〜100mgの量が一般的に投与される。本発明は、以下の実施例によりさらに具体的に説明されるが、いかなるようにも実施例に限定されない。実施例１：シュードモナス・エルギノーザ感染患者からのシュードモナス・エルギノーザ株の単離およびその同定シュードモナス・エルギノーザ感染患者から採った260の異なる各血液試料から、約１〜５mlのアリコートを無菌的に集め、室温で１時間静置した。この血液を冷蔵庫に４℃で一晩貯蔵した後、1500×g(g：重力)で４℃で10分間遠心分離し、固体物質を除去し、そして上清血清を得た。上述で得た血清をリン酸緩衝溶液 (１リットルにつきNaH₂PO₄ 1.15g、KCl 0.2g、KH₂PO₄ 0.2g、NaCl 8.766g)で1:1 0(血清：溶液)の比に希釈し、次いで予め調製しておいた1.0〜1.5％の寒天を加えたダイズトリプシンブロス培養プレート上に塗抹した。培養プレートを、好気的条件下で37℃の定常温度に維持したインキュベーター中で12時間またはそれ以上インキュベートした。このようにして得た培養物を新鮮な培養プレートに移し、次いで所望の微生物を公知の微生物純粋単離法によって純粋状態で単離した［ Thomas D．BrockおよびMichael T．Madigan，Biology of Microorganisms(1988) ，第５版、32〜33頁，Prentice Hall，Englewood Cliffs，New Jerseyを参照のこと］。単離したシュードモナス・エルギノーザ株について、それらの血清学的特徴付けおよび免疫学的特徴付けは既に開示されており(Bergey's Manualを参照のこと )、それらの同定はJ．Gen．Microbiol，130，631-644，1984に記載の分析法に従って市販の分析キットを用いて決定され得る。各シュードモナス・エルギノーザ株を５mlのダイズトリプシンブロスを含む試験管に接種し、次いで好気的条件下て37℃でインキュベートし、細菌量を650nm の可視光下で約2.0以上の吸光度が維持されるように調整した。１mlのアリコートをこの培養液から無菌的に採取し、6000×gで４℃で10分間遠心分離した。上清培養液を除去し、沈殿した微生物を同じ量の滅菌食塩水を加えることにより懸濁した。キットに含まれる試験血清およびコントロール血清( 正常ウサギ血清)の各15μlを96ウエルマイクロプレートの各ウエルに加え、上述で得た微生物懸濁液15μlと混合し、10〜30分以内で凝集が起こるかどうかを測定した。この研究では、凝集陽性のウエル中の微生物株がそこに加えられた血清と同一の血清タイプを有するので、単離した微生物の同定は容易に達成され得た。実施例２：各々の単離したシュードモナス・エルギノーザ株からの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の選択ワクチンの調製に用いる安全な微生物を得るのにシュードモナス・エルギノーザ株を弱毒化するために、異なる免疫タイプを有する各々のシュードモナス・エルギノーザ株に対し１つの株を選択し、次いで繰り返し精製することにより弱毒化した。この手順では、毒性シュードモナス・エルギノーザ GN 11189株(Episome Inst itute，Japan)に対するコントロールを選択した。これは、体重20〜25gの雄ICR マウスにGN 11189の2. 0×10⁶細胞を静脈内(または腹腔内)注射した後３日以内に100％の致死率を示す。上述で選択した異なる免疫タイプを有するシュードモナス・エルギノーザ株を、実施例１と同じ条件下で液体ダイズトリプシンブロスで培養し、次いで6000× gで４℃で10分間遠心分離した。得られた細胞沈殿物を10mlの生理食塩水に懸濁し、上記と同じ条件下で再び遠心分離し、次いで新鮮な生理食塩水で希釈して細胞含量を１ml当たり５×10⁵、５×10⁶、５×10⁷、および５×10⁸に調整した。各細胞希釈液を10匹のICRマウスからなる１グループに静脈内(または腹腔内)経路を通して投与した。コントロールグループには、GN 11189株を、コントロール動物当たり2.0×10⁶細胞の量で投与した。コントロールグループにおいて３日以内の致死率が100である時点で、シュードモナス・エルギノーザ株を、最も高い細胞濃度で生存していたICRマウスから無菌的に単離した。単離したシュードモナス・エルギノーザ株をダイズトリプシン寒天プレート培地上に再び塗抹した。上述のような微生物純粋単離法に従って、各微生物株を純粋状態に単離した。最初に弱毒化した微生物の７種全部を、少なくとも2.0×10⁷細胞となる所望の LD₅₀が各微生物株に対して得られるまで、上記の方法に従ってICRマウスに約３〜７回繰り返し投与した。各々の最終的に弱毒化されたシュードモナス・エルギノーザ株の安全価(LD₅₀として表される)を以下の表２に挙げる。上述のような７種の微生物すべてが少なくとも2.0×10⁷細胞のLD₅₀値を示した。従って、弱毒化微生物が選択されることが確認され得た。実施例３：弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の同定減菌セトリミド10％(w/v)を液体栄養培地(pH7.2-7.4)に加え、これをオートクレーブで121℃で15分間蒸気滅菌することにより、最終濃度0.3％(v/v)にまで調製した。このようにして得た培地の10mlアリコートを無菌的に採取し、次いで試験管中に入れ、上記実施例２に従って純粋状態で単離した弱毒化化シュードモナス・エルギノーザ株をそれぞれ一滴ずつ接種し、次いで30〜37℃で12〜16時間接種培養した。微生物の増殖が生じる試験管から、培養液0.5mlを採取し、シュードモナス・エルギノーザ単離培地としてセトリミド寒天培地のプレート上に塗抹し、次いでこのプレートをインキュベートした。色素形成によりシュードモナス・エルギノーザとして最初に同定したコロニーを、フルオレセイン検出用のシュードモナス・エルギノーザ寒天培地(プロテオースペプトンNo.3(オキソイド)２％、グリセロール(２回蒸留)１％、K₂HPO₄( 無水)0.15％、MgSO₄・7H₂O 0.15％、寒天1.5％(w/v)、pH7.2)、次いでピオシアニン検出用のシュードモナス・エルギノーザ寒天培地(ペプトン（Difco）２％、グリセロール（２回蒸留）１％、K₂SO₄(無水)１％、MgCl₂(無水)0.14％、寒天1.5 ％(w/v)、pH7.2)上に移してインキュベートし、そして次いでシュードモナス・エルギノーザ株の存在を決定するために形態的試験、栄養要求性、およびオキシダーゼ試験のために再び試験した。選択したシュードモナス・エルギノーザ株のタイプは、IATS分類システムに従ってシュードモナス・エルギノーザ抗原キット (Difco Laboratories，Detroit，Michigan，USAにより製造)を用いることにより決定し、次いでFisher免疫−血清タイプにより分類した。これらの結果を以下の表３に記載する。実施例４：弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の生理学的特性 (1)実施例２に従って弱毒化した７種類のシュードモナス・エルギノーザ株のそれぞれについて、異なるpH値に依存する増殖速度を決定した。各微生物株を、 pH値7.2で50mlのダイズトリプシンブロスへ接種し、次いで好気的条件下37℃で1 2〜16時間、200rpmの撹拌速度でプレインキュベートした。プレインキュベートした各細菌塊株を、pH3.0、pH5.0、pH7.0、およびpH9.0の新鮮なダイズトリプシンブロスの各500mlに、最終濃度が１％(v/v)となるように接種し、次いで上記と同様の条件下37℃で発酵槽中でインキュベートした。この間、２時間の間隔で、各培養から試料を得、次いで分光光度計を用いて試料の吸光度を600nmで測定することによって、細菌塊の濃度を決定した。これらの結果を以下の表４に記載する。表４から理解され得るように、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、過度に酸性の条件下(例えば、pH3.0)では増殖しなかったが、pH5.0〜pH9. 0の培地条件では、実質的に同一または類似の増殖速度を示した。従って、本発明では、７種類全ての微生物が、pHの広い範囲内で非常に良好に増殖し得る。 (2)上記の(1)と同様の方法に従って、シュードモナス・エルギノーザ株の増殖速度を温度変化に対して決定した。７種類の各弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を、pH値7.0で50mlのダイズトリプシンブロスへ接種し、次いで好気的条件下37℃で12〜16時間、200rpmの撹拌速度でプレインキュベートした。プレインキュベートした各株を、pH値7.0で500mlのダイズトリプシンブロスに接種し、次いで上記と同様の条件下、25℃、30℃、37℃、および42℃の異なる温度で維持した発酵槽中でインキュベートした。この間、分光光度計を用いて培養液の吸光度を600nmで測定することによって、各発酵槽中の増殖速度を決定した。結果を表５に記載する。表５から理解され得るように、７種類全ての弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、37℃で最大の増殖を示し、そして30℃、25℃でもまた良好な増殖を示した。しかしながら、42℃では、７種類の各シュードモナス・エルギノーザ株は、他の温度での増殖速度と比較すると、相対的にゆっくりとした増殖速度を示した。 (3)弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の増殖速度に対する炭素源の効果を、以下の実験により決定した。７種類の各弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を、pH値7.0で50mlのダイズトリプシンブロスへ接種し、次いで好気的条件下37℃で12〜16時間、200rpmの撹拌速度でインキュベートした。次いで、無菌条件下４℃で10分間、6000×gで培地を遠心分離して細菌塊を得、次いでこれを10m lの生理食塩水に再懸濁した。上記で得た微生物懸濁液各50μlを、(以下に示すような)異なる炭素源を含む5mlのM9培地(Na₂HPO₄ 7H₂O 12.8g、KH₂PO₄ 3g、NaCl 0.5g、NH₄Cl 1g)にそれぞれ接種し、次いで12時間インキュベートした。次いで、各培養液に対して600n mで吸光度を測定することによって、微生物の増殖の程度を決定した。弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の炭素源に依存する増殖特性は、一般のシュードモナス・エルギノーザ株の炭素源に依存する増殖特性(Bergey's Manualを参照のこと)と実質的に類似したパターンを示した。しかしながら、シュードモナス・エルギノーザは一般にマンノースを用いないと報告されているが、本発明の弱毒シュードモナス・エルギノーザは、マンノース含有培地でいくらかの増殖を示した。上記から理解され得るように、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を、炭素源、窒素源、無機化合物、アミノ酸、ビタミン類、および他の栄養源を含有する従来の培地中で、好気的条件下、選択された温度、pHなどでインキュベートすることにより、細菌塊が得られ得る。得られた細菌塊に由来の細胞壁タンパク質は、シュードモナス・エルギノーザワクチンの調製のために用いられる。弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株をインキュベートするための炭素源としては、種々の炭水化物(例えば、グルコース、マンニトール、フルクトースなど)、種々の有機酸(例えば、酢酸、ピルビン酸、乳酸など)が用いられ得る。窒素源としては、種々の有機および無機アンモニウム塩、ペプトン、酵母エキス、カゼイン加水分解産物、および他の窒素含有物質が用いられ得る。無機化合物としては、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、硫酸鉄(II)、硫酸銅(I)、硫酸亜鉛、リン酸水素カリウムおよびリン酸二水素カリウムなどが用いられ得る。好ましくは、例えば、平板培養または液体培養(例えば、振盪培養または通気撹拌培養)によって、好気的条件下25〜3 7℃でインキュベートする。培地のpH値は、好ましくは、インキュベートしている間pH５〜９に維持される。好ましくは、12〜16時間インキュベートした培養液の遠心分離により得られる細胞塊が、本明細書中に今後記載するようなワクチンを調製するための出発材料として用いられる。実施例５：弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株のインキュベーション (1)以下のように、５Lの発酵槽中で、実施例２に従って得られるシュードモナス・エルギノーザの細菌塊を塊生成のためにインキュベートした。蒸留水１Lあたり30ｇのダイズトリプシンブロスを溶解して得られる培地溶液2.5LをpH7.2に調節し、滅菌し、次いで５Lの発酵槽に入れる。インキュベーションの条件は以下のようであった：インキュベートする温度は37℃であった；通気率は１vvmであった；接種量は、培養液に対し、実施例２から得られる弱毒シュードモナス・エルギノーザ細菌塊５％(v/v)であった；そして撹拌速度を最初の２時間は100rp mに維持し、この後600rpmの一定の撹拌速度で12〜16時間インキュベーションを続けた。得られた細菌塊の量は、シュードモナス・エルギノーザ株のタイプに依存していくぶん異なっていたが、平均の収量は、培養液１リットルあたり細菌塊が約８ｇ(乾燥重量)であった。 (2)弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の各７タイプを、上記の(1)と同様のインキュベーション条件下でインキュベートした。ただし、グルコース(30ｇ/l)、ペプトン(15ｇ/l)、MgSO₄(0.5ｇ/l)、Ca CO₃(5ｇ/l)、KH₂PO₄(1ｇ/l)、FeSO₄(５mg/l)、CuSO₄(５mg/l)、およびZnSO₄(５m g/l)からなる、シュードモナス・エルギノーザを培養するための特別な培地を培地として用いた。この特別培地を用いると、約10.4ｇ〜10.5ｇ(乾燥重量)の細菌塊が、各微生物株に対して得られた。従って、この特別培地を用いることによって、ダイズトリプシンブロスを用いるときの量よりも少なくとも30％(乾燥重量基準)多い収量の細菌塊が提供され得る。実施例６：弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に由来の細胞壁タンパク質の部分精製シュードモナス・エルギノーザに対するワクチンを調製するために、７種類の各弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に由来の細胞壁タンパク質を部分的に精製した。本明細書中では今後、タイプ３の株(すなわち、CFCPA 30720(KCCM 10 031))を代表例として用いる。しかしながら、他の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株もまた、部分的に精製した細胞壁タンパク質を得るために、以下の精製法と同様の方法が適用され得る。上記の実施例４(2)に用いたような特別培地2.5Lを５Lの発酵槽に入れ、次いで上記と同様のインキュベーション条件を維持しながら12〜16時間インキュベートした。インキュベーションが完結すると、2.5Lの培養液を４℃で20分間6000×g で遠心分離し、上清を除去した。沈殿した細胞をリン酸緩衝溶液(１リットルあたり、Na₂HPO₄ 1.15ｇ、KCl 0.2ｇ、KH₂PO₄ 0.2ｇ、NaCl 8.766ｇ、pH7.2)中、４ ℃で再懸濁し、再度円心分離し、次いで同じリン酸緩衝溶液で洗浄した。こうして得られた細胞130ｇに、元の湿潤細胞容積に関して３倍容量(約390ml)のアセトンを加え、そしてこの混合物を４℃で12時間またはそれ以上静置した。沈殿細胞からアセトンを除去し、そして元の湿潤細胞容積に関して２倍容量(約260ml)の新鮮なアセトンを残渣に再び加えた。得られた混合物を５〜10分間撹拌し、次いで４℃で20分間8000×gで遠心分離した。上清のアセトンを除去し、そして同量のアセトンを残渣に加えた。混合物を撹拌し、そして上記と同様に遠心分離し、上清を除去した。沈殿細胞を室温でプレート上で乾燥し、アセトンを除去した。上記と同様のリン酸緩衝溶液250mlを加えることにより乾燥した微生物を再懸濁し、最終濃度を10％(v/v)に調節し得る。得られた混合物を、４℃の温度を維持しながら10分間500〜1500rpmの速度のホモジナイザーで処理し、細胞壁タンパク質を抽出した。得られた懸濁液を8000〜10000×gで30分間遠心分離し、上清を得た。沈殿細胞を分離し、同量のリン酸緩衝溶液を加えることにより再び懸濁し、次いで上記の１回目の抽出と同様の条件下で２回目の抽出を行い、上清を得た。１回目の抽出法と同様の条件を用いることによって、細胞壁タンパク質を５〜６回繰り返し抽出し、このとき、いかなる細胞も破壊(溶解)しないように注意した。細胞の破壊は、細胞質マーカーとしての特定タンパク質(すなわち、乳酸デヒドロゲナーゼまたはヘキソキナーゼ)を測定することにより決定され得る。抽出した上清(その各々は、細胞壁タンパク質が細胞質タンパク質である乳酸デヒドロゲナーゼおよびヘキソキナーゼを混入せずに抽出されているかを確認するために試験される)を集め、撹拌し、次いで最後に４℃で30分間10000×gで再度遠心分離し、透明な上清を得た。このようにして得られたタンパク質溶液は、実質的に純粋な細胞壁タンパク質からのみ構成されており、そしてこれをタンパク質定量アッセイでタンパク質濃度が１mg/ml 〜２mg/mlのレベルに維持されるように調整した。さらに、タンパク質溶液の純度を10〜15％濃度の勾配電気泳動法により決定した。結果として、10,000〜100, 000の範囲の分子量を有する所望の細胞壁タンパク質が存在することが同定され得た（図１を参照のこと）。実施例７：粗タンパク質の純精製１〜２mg/mlの濃度の粗細胞壁タンパク質溶液が有効成分のみを含有して精製されるように、以下のプロセスを行った。まず、２〜2.5Lの粗細胞壁タンパク質溶液を、Pellicon Cassette Systemにおいて分子量100,000遮断膜フィルターに通し、100,000を超える分子量を有するタンパク質分子を除去した。このプロセスに従えば、100,000以下の分子量を有するタンパク質は濾液として回収され、そして100,000より大きい分子量を有するタンパク質は、100,000以下の分子量を有する少量の分子から分離されるように絶えず循環された。結果として、タンパク質溶液を最初の容積の10〜20％まで濃縮し、そして20〜 25L(タンパク質溶液の最初の容積の10倍量)の滅菌したリン酸緩衝溶液(１リットルあたり、Na₂HPO₄1.15ｇ、KCl 0.2ｇ、KH₂PO₄ 0.2ｇ、NaCl 8.766ｇ)で首尾よく洗浄し、100,000以下の分子量を有するタンパク質の90％以上を回収した。濾液として分離した100,000以下の分子量を有するタンパク質を、上記と同じ系(sy stem)において分子量10,000遮断膜フィルターに通し、10,000未満の分子量を有するタンパク質および他の不純物を除去し、そして同時に、10,000〜100,000の分子量を有するタンパク質を１mg/mlの濃度になるまで濃縮した。最後に、上清を超遠心分離し、上記で得た上清中におそらく微量存在するであろうリポ多糖(LPS)および細胞壁関連フラグメントを除去した。超遠心分離を４ ℃で３時間180,000×g〜200,000×gで行う。沈殿物を除去した後、得られた上清を0.2μmのフィルターで濾過して滅菌し、250〜260mgのタンパク質組成物を得た。この組成物は、シュードモナス・エルギノーザの感染に対する予防用ワクチンに使用される。実施例８：異なる免疫タイプを有する弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に由来の細胞壁タンパク質の精製本発明の残りの６種類の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株(すなわち、CFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 40057、CFCPA 50243、CFCPA 60534、およびCFCPA 70018)を、微生物のインキュベーションおよび精製に関して、実施例５、実施例６および実施例７に記載されるような、CFCPA 30720シュードモナス・エルギノーザ株に対するワクチン組成物を調製する方法と同様の方法に従って処理した。こうして得られた最終的なシュードモナス・エルギノーザワクチン組成物は、10〜15％濃度勾配のSDS-PAGEで、CFCPA 30720ワクチン組成物と同様のバンドパターンを示した。さらに、標準分子量マーカーと比較することによって、ワクチン組成物中に含まれる全てのタンパク質は10,000〜100,000 の範囲の分子量を有することが決定され得た（図１）。実施例９：混合抗原による交差防御能試験実施例７および実施例８に記載される方法に従った分離および精製工程後、各弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株由来の細胞壁タンパク質を、体重23〜25 ｇの６週齢ICR雄マウスに0.2mg/kgの量で腹腔内投与し、この動物を免疫した。各グループは10〜15匹の試験動物からなっていた。免疫してから１週間後、ELIS A(酵素結合免疫吸着検定法)を行うために、１グループあたり２〜３匹のマウスから血液を採取した。残りのICRマウスに対しては、各免疫タイプに相当する野生型のシュードモナス・エルギノーザ株を、実施例２の表２に挙げる各微生物株の初期LD₅₀値の10〜50倍量で注入した。各シュードモナス・エルギノーザ株に対する防御効力を１週間継続的に試験した。結果として、全ての試験グループは、相当するシュードモナス・エルギノーザ株に対して防御効果を示し、そして集めた血液全てに対するELISAもまた良好な陽性の値を示した。これらのことは、免疫学的応答が向上したことを意味する。本発明において、任意のタイプのシュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされる感染に対して共通の防御効果を示し得るワクチンを調製するために、４タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株(人体の感染が最も頻繁に検出される３タイプのシュードモナス・エルギノーザ株および感染すると克服するのが困難な１タイプのシュードモナス・エルギノーザ株、すなわち、CFCPA 1014 2、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534)を処理して細胞壁タンパク質を得、これらを等量の割合で配合し、次いで各免疫タイプのシュードモナス・エルギノーザ株に対する交差防御能を試験した。上記のように、４タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から分離した細胞壁タンパク質を、重量基準で等量(1:1:1:1)の割合で配合した。配合した細胞壁タンパク質をICR雄マウスに腹腔内投与し、試験動物を免疫した。コントロールグループには0.3mlのリン酸緩衝溶液(１リットルあたり、Na₂HPO₄ 1.15ｇ、KCl 0.2ｇ、KH₂PO₄ 0.2ｇ、NaCl 8.766ｇ)を与えた。免疫してから１週間後、シュードモナス・エルギノーザワクチンで免疫した試験グループおよびリン酸緩衝溶液で免疫したコントロールグループの各々に、シュードモナス・エルギノーザを、１×10⁸個の細胞から１×10⁴個の細胞まで10倍ごとに希釈した５種類の異なる濃度で腹腔内投与した。１週間後、試験動物の生存数を数え、効力指数(EI)を計算した。これらの結果を以下の表７に示し、効力指数は、試験グループのLD₅₀をコントロールグループのLD₅₀で割った値として定義される。表７から理解され得るように、４種類の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株( すなわち、CFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534)から得た細胞壁タンパク質からなるワクチンは、各免疫タイプのシュードモナス・エルギノーザ株に対して3.0〜18以上のEI値を有する。従って、少なくとも２のEI 値を有するワクチン類が良好な免疫学的効果を有するとみなされることを考慮したとき、本発明のワクチンは、７種類の任意のタイプのシュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされる感染に対して良好な防御効果を示すことが理解され得る。４種類のタンパク質の混合物の代わりに、調製した細胞壁タンパク質の混合物を３タイプの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株(CFCPA 10142、CFCPA 3072 0およびCFCPA 20215)から得(グループＩ)、そして７タイプ全ての弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から調製される細胞壁タンパク質の混合物(グループI I)(全ての細胞壁タンパク質は等量の割合で存在する)を用いたこと以外は、上述の手法に従って、各シュードモナス・エルギノーザの感染に対するこれら２種類のワクチンの交差防御能を試験した。これらの結果を表８に示す。上記の実験結果から理解され得るように、本発明のタンパク質成分混合ワクチンは、互いに異なる免疫タイプを示す少なくとも３種類の異なる弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から調製される細胞壁タンパク質から構成されるので、このワクチンは、１種類のみの共通の抗原と比較すると、任意の免疫タイプのシュードモナス・エルギノーザに対して優れた防御効果を示す。すなわち、本発明のワクチンの効力指数は、弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から選択される微生物の種類および数、それに由来する細胞壁タンパク質の混合比、免疫学的な計画および方法などにより変化するが、本発明のワクチンは、病院および患者に現在見い出されている全てのシュードモナス・エルギノーザ株に対して有効であることが確認され得る。実施例10 ：細胞壁タンパク質の毒性試験シュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる感染に対する予防のためのワクチン成分を調製するために、ワクチン成分として用いられる細胞壁タンパク質自身の安全性、および実施例２に記載されるような微生物株自身の安全性が確保されるべきである。本実施例では、細胞壁タンパク質を部分的に精製し、次いで実験動物(すなわち、マウス)におけるそれらの安全性を試験した。詳細には、各々の弱毒化微生物を、5Lの発酵槽中で培養培地としてダイズトリプシンブロスとインキュベートし、次いで実施例５、６、および７に記載の手順に従って処理した。弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から抽出した細胞壁タンパク質の上清を一緒に集め、４℃で10000×gで30分間再び遠心分離し、溶液中に存在していると思われる微細粒子を除去した。得られた細胞壁タンパク質をAmicon膜フィルターに通して濾過し、10,000から100,000までの範囲の分子量を有する細胞壁タンパク質の混合物を得た。これを1mg/mlのタンパク質濃度に濃縮し、次いで 0.2μmフィルターで滅菌し、毒性試験のためのタンパク質源(source)を得た。毒性試験において、用いた実験動物は、体重20〜22gのICR雄マウスであった。試験グループには、タンパク質源を20mg/kgおよび100mg/kgの量で静脈内注射した。コントロールグループには、25ml/kgの量で生理食塩水を与えた。表９および添付の図２から理解され得るように、試験グループは、投与後第１日目は体重の増加にわずかな抑制を示したが、投与後第２日目およびそれ以後は正常な成長を示し、特定の症状は示さなかった。さらに、７日目およびそれ以後でさえも、各器官において特定の変化または症状は見出され得なかった。実施例11：細胞壁タンパク質の抗原性の決定実施例10と同様にして弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株の部分精製により得られた細胞壁タンパク質を抗原として用い、0.1mg/kgまたは0.2mg/kgの量で ICRマウスに静脈内注射して実験動物を免疫した。免疫化から１週間、マウスグループの各マウスから一定量の血液を採り、集めた血液から血清を分離し、ELIS A法[J．Clin．Microbiol．15，1054-1058，1982]に従って抗体の形成を決定した。最初に、実施例10で調製した100μlの抗原(コーティング緩衝液(NaHCO3 2.85g 、Na₂CO3 1.70g、H₂O 1からなる0.05M炭酸緩衝溶液、pH9.6)中で0.1mg/mlの濃度に調整した)を、96ウエルマイクロプレートの各ウエルに加え、次いで室温で２時間または４℃で12〜14時間のいずれかで反応させ、タンパク質をプレートに付着させた。水溶液を除去した後、200μlの１％ウシ血清アルブミン(BSA)を各プレートウエルに加え、次いで室温で１時間反応させ、タンパク質に結合していないウエル中の残りの部分をブロックした。この試験では、非免疫マウスの血清をコントロールグループの抗体として用いた。反応が完了すると、プレートを再びリン酸緩衝溶液(pH7.0-7.2)で５〜６回洗浄し、100μlの第二抗体(すなわちウサギ抗マウスIg−ペルオキシダーゼ複合体)を各ウエルに加え、通常温度で１時間反応させた。その後、プレートを、同じリン酸緩衝洗浄溶液(pH7.0-7.2)で７回以上激しく洗浄した。基質として50μlのオルト−フェニレンジアミンジヒドロクロライド( クエン酸−リン酸緩衝溶液(0.1Mクエン酸−リン酸緩衝液、pH5.0)中に0.3〜0.4m g/mlの濃度に調整した)をプレートの各ウエルに加え、光のないところで20分間反応させた。次いで、50μlの１Ｎ硫酸を、それぞれ各ウエルでの反応を停止させるために加えた。次いで、各反応溶液に対し、490nmでの吸光度を分光光度計によって測定した。表10から理解され得るように、試験グループでは、0.1または0.2mg/kgの抗原を投与することにより生じる免疫は、コントロールグループよりも２〜５倍高い。実施例12 ：シュードモナス・エルギノーザの免疫グリブリンの産生実施例７から得たタンパク質溶液をウサギに投与し、相当する免疫グロブリンを産生させた。弱毒化シュードモナス・エルギノーザCFCPA 30720株から得た細胞壁タンパク質を代表例として用いたが、同様の方法が他の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株に適用され得る。実施例７においてCFCPA 30720株から得た細胞壁タンパク質溶液0.5〜１ml(100 〜200μgの細胞壁タンパク質を含む)を用い、アルビノ(albino)ウサギを７日の間隔をおいて３回接種した。次いで、各ウサギから決まった間隔をあけて採血し、血清を分離した。100mlの分離ウサギ血清を300mlの蒸留水と混合し、その混合物を500g(湿重量)のDEAE-セルロースに４℃で加えた。得られた混合物を４℃で１時間徹底的に振盪し、静置し、次いで上清を分離し除去した。残っている残渣を、それぞれ200mlの0.01Mリン酸緩衝溶液(１リットルにつきNa₂HPO₄ 1.15g、KH₂ PO₄ 0.2g、KCl 0.2g、NaCl 8.766g、pH8.0)で３回洗浄し、96％以上の純度を有する免疫グロブリンIgG 600mgを得た。実施例13 ：シュードモナス・エルギノーザ感染に対する免疫グロブリンの治療効果上記実施例12において得られたシュードモナス・エルギノーザ株に対する免疫グロブリンについて、シュードモナス・エルギノーザ感染に対するそれらの治療効果を以下のようにして試験した。その後、10匹のマウスを各グループに用いた。 1.0〜3.0×10⁶細胞のFisher免疫タイプ１、２、３、４、５、６、および７の各病原性シュードモナス・エルギノーザ株を、各マウスに腹腔内注射して、シュードモナス・エルギノーザ感染を引き起こした。感染後２〜６時間以内に、各株について精製した免疫グロブリンを、マウスあたり0.1〜２mgの量で各マウスに静脈内注射し、それらの治療効果を試験した。コントロールグループでは、注射については0.5mlの生理食塩水を、免疫グリブリンの代わりに静脈内注射した。この試験では、用いた免疫グロブリンは、CF CPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534、またはこれらの４種の免疫グロブリンの等量比での混合物であった。結果として、生理食塩水のみを与えたコントロールグループは、48時間以内で 50％以上、そして72時間後では100％の致死率を示した。これに対して、相当する免疫グロブリンを与えた試験グループは、72時間後に80％以上の生存率を示した。従って、免疫グロブリンは、相当するFisher免疫タイプを有する病原性シュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされる感染の治療に有効であることが証明され得た。しかし、単一の免疫グロブリンが、Fisher免疫タイプ４および５を有する病原性シュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされる感染に対する多くの効果を有するわけてはなかった。他方で、４種の免疫グロブリンの1:1:1:1の重量比の組み合わせを与えたマウスグループは、Fisher４タイプおよび５タイプのシュードモナス・エルギノーザ株に対してさえも、それらの交差反応性のために優れた治療効果を示した。従って、本発明の混合免疫グロブリン組成物は、すべてのFisher免疫タイプのシュードモナス・エルギノーザ株により引き起こされる感染に有効な治療剤として用いられ得る。本実験の結果を表11および12にまとめる。実施例14：シュードモナス・エルギノーザ感染に対する混合免疫グロブリンの治療効果実施例13で選択した４種の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株、すなわち、CFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534を、実施例５、６、および７と同様の手順に従ってインキュベートし、そして抽出して、細胞壁タンパク質の混合組成物を得た。次いでこれを、実施例13と同様にして、1.5〜2 mgの量で１週間の間隔をあけて３回ヤギに接種し、混合シュードモナス・エルギノーザ免疫グロブリンを大量に得た。これを公知の方法に従って精製した［Prac tical Immunology，第３版，(1989)，292〜294頁を参照のこと］。種々のFisher免疫タイプの病原性シュードモナス・エルギノーザに対する上述で得た精製混合免疫グロブリンの免疫学的防御効果および治療効果を測定するために、各免疫タイプを有する病原性シュードモナス・エルギノーザ株を、マウス当たり1.0×10⁶から3.0×10⁶細胞の量で、混合免疫グロブリン組成物を既に３回注射したマウスグループ(６グループ：１グループ当たりマウス20匹)、および別のマウスグループ(６グループ：１グループ当たりマウス10匹、免疫グロブリン組成物を投与していない)に接種し、混合免疫グロブリンの免疫学的防御効果を観察した。さらに、別のマウスグループ(６グループ：１グループ当たりマウス1 0匹)に、病原性シュードモナス・エルギノーザ株を最初に接種し、２〜６時間後に、上述で得た混合免疫グロブリン組成物を体重約20〜25gのマウス当たり 0.1〜5mgの量で静脈内注射し、本発明の免疫グロブリン組成物の治療効果を観察した。これらの結果として、本発明の混合免疫グロブリン組成物は、80％以上の免疫学的防御効果、および75％以上の治療効果を示し(７日後の生存率(％)から決定した)、一方、コントロールグループでは３日以内にすべて死亡することが証明され得た。従って、本発明の混合免疫グロブリン組成物は、優れた治療効果および免疫学的防御効果の両方を示す有用な医薬として用いられ得ることが証明され得る。実施例15 ：免疫グロブリンの処方実施例13で選択した４種の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株、すなわち、CFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、およびCFCPA 60534を、実施例５、６、および７と同様にしてインキュベートおよび抽出することにより、細胞壁タンパク質の組み合わせを得、これを実施例14と同様にして雄ヤギに投与して、混合シュードモナス・エルギノーザ免疫グロブリンを得た。これを分離および精製し、次いで種々の薬学的に受容可能な担体を用いて、体重１kg当たり１〜100mg の抗体免疫グロブリンが投与され得るように処方した。処方した免疫グロブリンを、シュードモナス・エルギノーザに感染したマウスに投与し、免疫グロブリンを用いた担体の種類によって免疫グロブリンの効力を決定した。この結果として、液体処方の場合では、担体として注射用の生理食塩水またはリン酸緩衝溶液での免疫グロブリン調製物は高い効力を示し、そして凍結乾燥処方の場合では、担体としてマンニトール、サッカロース、またはラクトースを用いることにより、高効力の免疫グロブリン調製物が提供される。他方で、凍結乾燥処方では、本発明のシュードモナス・エルギノーザ免疫グロブリンと共にヒトアルブミンを用いると免疫グロブリンの効力を下げ、そして液体処方の場合では、薬学的担体として水酸化アルミニウムを用いると低い効力を示す。試験結果を表13にまとめる。実施例16：処方した免疫グロブリン組成物の効力実施例15の試験結果から高い効力を提供することが確認されたリン酸緩衝溶液で処方した免疫グロブリンを、裂傷、火傷、外傷などにおける二次皮膚感染に対する予防および治療剤としての効力を決定するために試験した。火傷試験法［J ．Infect．Dis．131，688-691，1975を参照のこと］に従って、マウスを火傷させた。１mlのリン酸緩衝溶液当たり0.5〜１mgの混合シュードモナス・エルギノーザ免疫グロブリンを含む液体調製物をスプレーに処方し、次いでこれを試験グループのマウスの火傷部分に適用し、免疫グロブリンスプレーでの処理を行わないコントロールグループと比較して、その効果を決定した。この実験の結果として、免疫グロブリン−リン酸緩衝溶液スプレーで処理したマウスグループは、未処理グループよりも顕著に高い生存率を示す。従って、本発明のシュードモナス・エルギノーザ免疫グロブリン含有調製物は、シュードモナス・エルギノーザ感染に対する優れた防御効果および優れた治療効果を示すことが証明され得る。本実験の結果を以下の表14に記載する。上述のように、本発明の各々の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、野生種または病原性種に比較してかなり安全である。さらに、それらの細胞壁タンパク質は、優れた安全性および交差防御特性、ならびにさらに優れた中和抗体形成能力をも示すので、この細胞壁タンパク質は、シュードモナス・エルギノーザ感染に対する予防用ワクチンとしてだけでなく、シュードモナス・エルギノーザ感染のための治療剤として用いられ得る免疫グロブリンを産生するための実験動物への抗体誘導物質としても用いられ得る。従って、本発明の弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株は、シュードモナス・エルギノーザ感染に対する予防ワクチンおよび治療剤として非常に有用な微生物であることが理解され得る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＴ，ＡＵ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＤＥ，ＥＳ，ＧＢ，ＪＰ，ＮＬ，ＮＯ，ＰＴ，ＲＵ，ＳＥ (72)発明者パク，ワンジェ大韓民国キョンギ―ド，スーウォン―シ 441―370，パルダル―グ，メタン２− ドン，ハンクックエイピーティ．105− 808 (72)発明者ムン，ムサン大韓民国ソウル 138―160，ソンパ― グ，カラク―ドン，183―９，テーウォンビラ 101 (72)発明者ユ，ワンドン大韓民国ソウル 156―020，トンジャク ―ク，テバン―ドン，テーリムエイピーティ．551 (72)発明者ノ，カプス大韓民国ソウル 156―034，トンジャク ―ク，サンド４―ドン，242―101 (72)発明者イ，ドンオク大韓民国ソウル 131―022，トムデムン ―グ，チョンノン２―ドン，127―50 (72)発明者ハ，ソクフン大韓民国ソウル 135―092，カンナム― グ，サムソン２―ドン，エイアイディーエイピーティ． 16―103 (72)発明者ユ，リアン大韓民国キョンギ―ド，クワチョン―シ 427―040，ピョルヤン―ドン，チュゴンエイピーティ． 405―905 (72)発明者イ，ナムジュン大韓民国ソウル 136―103，ソンブク― ク，チョンヌン３―ドン，314―10 (72)発明者チョ，ヤンジェ大韓民国ソウル 156―090，トンジャク ―ク，サダン―ドン，1029―43 (72)発明者ホン，ソンピョ大韓民国ソウル 136―071，ソンブク― ク，アナム―ドン１―ガ，359―75 (72)発明者キム，ジェハク大韓民国キョンギ―ド，クワチョン―シ 427―050，プリム―ドン，41，チュゴンエイピーティ．，804―1003 (72)発明者キム，ダルヒョン大韓民国キョンギ―ド，スーウォン―シ 440―240，チャンアン―グ，ヨンム―ドン，263―30 (72)発明者キム，ヨンギ大韓民国ソウル 131―202，チュンナン ―グ，ミョンモク２―ドン，137―52

Claims

【特許請求の範囲】１．マウスでのLD₅₀が少なくとも2.0×10⁷細胞である弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株であって、シュードモナス・エルギノーザに感染している患者から免疫タイプに従って純粋状態でシュードモナス・エルギノーザを単離する工程、そして該単離した株を繰り返し精製して該株を弱毒化する工程により得られる弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株。２．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 1 0142)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。３．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 2 0215)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。４．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 3 0720)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。５．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 4 0057)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。６．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 5 0243)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。７．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 6 0534)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。８．Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 7 0018)を有する、請求項１に記載のシュードモナス・エルギノーザ株。９．シュードモナス・エルギノーザ感染に対する免疫化のためのワクチンの調製のための、以下の： Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 10142 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 20215 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 30720 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 40057 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 50243)、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 60534 )、および Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 70018 ) からなる群から選択される、少なくとも１株のシュードモナス・エルギノーザ株の使用。１０．シュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患に対して免疫化する方法であって、該方法は、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 10142 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 20215 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 30720 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 40057 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 50243 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 60534 )、および Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 70018 ) からなる群から選択される、少なくとも１つの弱毒化非病原性シュードモナス・エルギノーザ由来の細胞壁タンパク質の混合物を含有する非病原性抗原を、シュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患を防ぐように免疫応答をヒト中で誘発するのに十分な量で免疫化を必要とする該ヒトに注入する方法。１１．弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株由来の前記細胞壁タンパク質が、10,000〜100,000の範囲の分子量を有する、請求項１０に記載の方法。１２．前記細胞壁タンパク質が筋肉内注射により投与される、請求項１０に記載の方法。１３．シュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患に対して免疫応答を誘発するための非病原性ワクチンであって、該ワクチンは、シュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患を防ぐために免疫応答を誘発し、以下の Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 10142 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 20215 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 30720 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 40057 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 50243 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 60534 )、および Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 70018 ) からなる群から選択される、少なくとも１つの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株由来の細胞壁タンパク質の混合物を包含する、ワクチン。１４．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株が、CFCPA 10142、CFCPA 2O215、CFCPA 30720、CFCPA 40057、CFCPA 50243、CFCPA 60534、およびCFCPA 7 0018からなる群から選択される少なくとも３つの株を包含する、請求項１３に記載のワクチン。１５．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株が、CFCPA 10142、CFCPA 2 0215、およびCFCPA 30720からなる、請求項１４に記載のワクチン。１６．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株が、CFCPA 10142、CFCPA 2 0215、CFCPA 30720、および、CFCPA 6053 4からなる群から選択される、請求項１４に記載のワクチン。１７．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株が、CFCPA 10142、CFCPA 2 0215、CFCPA 30720、CFCPA 40057、CFCPA 50243、CFCPA 60534、およびCFCPA 70 018の７タイプである、請求項１４に記載のワクチン。１８．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザのそれぞれ由来の前記細胞壁タンパク質が、等量で存在する、請求項１３〜１７のいずれかに記載のワクチン。１９．薬学的受容可能賦形剤をさらに含有する、請求項１３に記載のワクチン。２０．シュードモナス・エルギノーザ感染症に対する免疫化のための非病原性ワクチンの調製方法であって、以下の工程：ａ）シュードモナス・エルギノーザに感染している患者からシュードモナス・エルギノーザを集める工程；ｂ）純粋状態において少なくとも１種のシュードモナス・エルギノーザを選択し単離する工程；ｃ）純粋な単離されたそれぞれのシュードモナス・エルギノーザを、第１培養培地中でインキュベートする工程；ｄ）それぞれの純粋なインキュベートした株を実験動物中に注入することにより弱毒化し、そしてそれぞれの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株から最も弱毒化された株を選択する工程；ｅ）それぞれの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株を、第２培養培地中でインキュベートする工程；ｆ）該培養培地から該弱毒化シュードモナス・エルギノーザを分離する工程；ｇ）該分離したシュードモナス・エルギノーザを、有機溶媒で処理して細胞壁脂質成分を不活性化し除去する工程；ｈ）該シュードモナス・エルギノーザの細胞が破壊されているか否かを、細胞質マーカー酵素である乳酸デヒドロゲナーゼ、またはヘキソキナーゼの存在を確認することにより同時に測定しながら、該処理したシュードモナス・エルギノーザから該細胞壁タンパク質を抽出する工程；ｉ）該抽出した細胞壁タンパク質を限外濾過して、10,000〜100,000の範囲の分子量を有する細胞壁タンパク質のみを選択する工程；ｊ）該細胞壁タンパク質を超遠心分離して、あらゆるリポ多糖およびあらゆる細菌性物質をさらに除去する工程；ｋ）該選択した細胞壁タンパク質を、純粋状態で回収する工程；およびｌ）該選択した細胞壁タンパク質を抗原性物質として使用して免疫化を誘発し、ワクチンを調製する工程、を包含する、方法。２１．前記抽出が、前記処理したシュードモナス・エルギノーザ細胞を緩衝溶液に入れることにより行われる、請求項２０に記載の方法。２２．前記緩衝溶液が、リン酸緩衝溶液およびトリス緩衝溶液からなる群から選択される、請求項２１に記載の方法。２３．前記細胞壁タンパク質の抽出を、細菌塊を、または前記処理したシュードモナス・エルギノーザ細胞を、ミキサーまたはホモジナイザーにかけて行う、請求項２０に記載の方法。２４．前記ミキサーが、４℃で、100〜2000rpmで行われる、請求項２３に記載の方法。２５．前記抽出が５〜６回行われる、請求項２０に記載の方法。２６．前記有機溶媒が、アセトン、クロロホルム、エタノール、ブタノールからなる群から選択され、そして最も好ましくは、有機溶媒がアセトンである、請求項２０に記載の方法。２７．前記単離されたシュードモナス・エルギノーザ株が、 CFCPA 10142、CFCPA 20215、CFCPA 30720、CFCPA 40057、CFCPA 50243、CFCPA 6 0534、およびCFCPA 70018を包含する、請求項２０に記載の方法。２８．前記第２の培養培地が、ダイズトリプシンブロス、およびグルコース(3 0g/l)、ペプトン(15g/l)、MgSO₄(0.5g/l)、CaCO₃(５g/l)、KH₂PO₄(１g/l)、FeSO₄ (５mg/l)、CuSO₄(５mg/l)、およびZnSO₄(５mg/l)を含有する培養培地からなる群から選択される、請求項２０に記載の方法。２９．前記弱毒化シュードモナス・エルギノーザのインキュベーション条件が、37℃の温度、通気率１vvm(体積/体積・分)、および培養培地溶液の５％v/vの接種体積を包含し、インキュベーションが、最初の２時間は100rpm、続く10〜20 時間、好ましくは12〜16時間は600rpmのの撹拌速度下で行われる、請求項２０に記載の方法。３０．１リットル当たりグルコース30ｇ、ペプトン15ｇ，MgSO₄ 0.5ｇ、CaCO₃ ５ｇ、KH₂PO₄ １ｇ、FeSO₄ 5mg、CuSO₄ ５mg、およびZnSO₄ ５mgを含有する、弱毒化シュードモナス・エルギノーザをインキュベートするためのインキュベーション培地であって、該シュードモナス・エルギノーザは、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 10142 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 20215 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 30720 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 40057 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 50243 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 60534 )、および Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 70018 ) からなる群から選択される、インキュベーション培地。３１．感染症を発現している患者におけるシュードモナス・エルギノーザ感染症を治療するための治療剤であって、該治療剤が少なくとも１つのシュードモナス・エルギノーザ株に対して特異的な少なくとも１つの免疫グロブリンを含有し、ここで、該免疫グロブリンは、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10029(CFCPA 10142 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10030(CFCPA 20215 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10031(CFCPA 30720)、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10032(CFCPA 40057 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10033(CFCPA 50243 )、 Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10034(CFCPA 60534 )、および Korean Federation of Culture Collection 受託番号KCCM 10035(CFCPA 70018 ) からなる群から選択される少なくとも１つの弱毒化シュードモナス・エルギノーザ株由来の細胞壁タンパク質を、該免疫グロブリンの産生を引き起こし、次いでシュードモナス・エルギノーザにより引き起こされる疾患の不利な影響が減少するような免疫応答を該宿主中に誘発するのに十分な量を、好適な宿主に注入することにより誘発された、免疫グロブリンである、治療剤。３２．それぞれFisher免疫タイプ１、２、３、４、５、６、および７に相当するシュードモナス・エルギノーザ株に対する免疫グロブリンを含有する、請求項３１に記載の治療剤。３３．Fisher免疫タイプ１、２、３、４、５、６、および７に相当するいずれか４つのシュードモナス・エルギノーザ株に対する免疫グロブリンを含有する、請求項３１に記載の治療剤。３４．Fisher免疫タイプ１、２、３、４、５、６、および７に相当するいずれか３つのシュードモナス・エルギノーザ株に対する免疫グロブリンを含有する、請求項３１に記載の治療剤。３５．凍結乾燥形態である、請求項３１に記載の治療剤。３６．マンニトール、ラクトース、サッカロース、およびヒトアルブミンからなる群から選択される、適切な薬学的受容可能な担体をさらに包含する、請求項３５に記載の治療剤。３７．適切な薬学的に受容可能な担体をさらに包含する、請求項３１に記載の液状の治療剤。３８．注射、錠剤、カプセル、点眼薬、噴霧薬、または軟膏の形態で薬学的に投与される形に調製された、請求項３１に記載の治療剤。