JPH09503220A - セロトニン伝達を調節する化合物、診断及び治療用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、以下のペプチド配列： ｛配列中、ＸがＨ又はAla又はLeu-Ser-Alaを表し、ＹがOH、又は１〜10アミノ酸をもつペプチド配列であってそのカルボキシ末端がNH₂基によりアミド化され又は置換若しくは非置換ヒドロキシカルビルオキシ残基によりエステル化されているものを表す。但し、ＸとＹは、それぞれ、同時に、ＨとOHを表さない。｝により表される化合物に関する。また、本発明は、そのペプチド結合基-CO-NH-がプロテアーゼの酵素分解に抵抗する結合基により置換され、又はそのペプチド骨格が酵素分解に抵抗するペプチド結合を作る１以上の介在基を含んで成るような対応化合物にも関する。また、配列X-Leu-Y｛配列中、ＸとＹが上述の定義をもつ。｝により表されるペプチドのものとその空間構造が同じである基を含んで成る化合物についても記載する。

Description

【発明の詳細な説明】 セロトニン伝達を調節する化合物、診断及び治療用途 本発明の対象は、セロトニン伝達を調節する特性をもつ化合物並びにこれらの 化合物の診断及び治療用途である。 脳セロトニン作動系(serotoninergic system)は、1949／50の経過にわたり発 見されたセロトニン（serotonine）又は５−ヒドロキシトリプタミン（５−hydr oxytryptamine（５−ＨＴ）を使用する脳及び末梢神経伝達系である。 中枢レベルにおいては、この系は、それがひじょうに高濃度である（全ての細 胞体が、脳の後方領域、縫線核(raphe)内にある）という点で特殊であり、そし てそこでは、それが脳の全領域に実際に向けられている。それは、その軸索に添 うひじょうに高レベルの結節状構造（varicosity）（又はニーロン端の均等物） を特徴とし；この配置は他の脳神経系との相互作用の、その点を増やす。さらに 、この結節状構造のひじょうに大きな部分は、いずれのシナプス特性をも示さな い、すなわち、これらの“末端(ends)”により放出される５−HTが、一定距離に 位置する標的（レセプター）に拡散し、そして到達するであろう；このメカニズ ムは、このアミンについて高いアフィニティーをもつ特別なレセプターの使用を 必要とする。この構造的配置は脳の全ニューロン細胞を制御する機能のために、 そして結果としてその中枢神経系の恒常性の維持において不可欠な役割のために 、極めて好ましい。 この制御を行うために、５−HT系は、かなり多様な特異的レセプターを使用す る。いくつかのファミリーが実際に含まれ、その中のいくつかは、よく特徴付け られており（５−HT，５−HT₂，５−HT ₃ ，５−HT₄）、そしてかなり最近同定された他のものは未だよく知られていない （５−HT₅，５−HT₆，５−HT₇）。これらのいくつかは多数のサブタイプにより 表され；これは特に５−HT、ファミリーについてそうであり、それはこれらの部 位についての５−HTのナノモル・アフィニティーを特徴として、そしてサブタイ プ５−HT_1A，_B，_D，_E，_Fを含んで成る。 上記５−HT_1Bと５−HT_1Dタイプのレセプターは、セロトニン作動性及び非セロ トニン作動性末端上にあり、そこでは、それらは、これらの末端内に含まれる神 経伝達物質の放出を調節し、特に、それらは、５−HTそれ自体の放出を調節する ことができ(自己レセプタ−(auto receptors))、そしてこの場合において、セロ トニン作動性神経伝達の活性において決定的な役割を演じる。 基礎的な視点から、セロトニン作動系は、多くの生理学的機能、そして多くの 病因、そして特に抑うつ性の（depressive）症侯群に関連する。 抑うつ症は、それに捧られた多くの研究にも抱らず未だほとんど知られていな い精神医学的失調である。しかしながら、全てではないがほとんどの抑うつ症が セロトニン作動系に関連することが現在きわめてはっきりしており、そして特に 、セロトニン作動欠陥と自殺との間の関係が存在すると一般的に認められている 。 さらに、抗抑うつ薬は、それらのかなりの数について、セロトニン作動系と相 互作用し、そして最も有効であり、かつ最小の不所望効果を有する最新のものは 、ほとんど“セロトニン作動（serotoninergic）”タイプを有する。これらの物 質は、全て、さまざまなメカニズムにより、セロトニン作動性伝達の容易化をも たらす（モノアミン・オキシダーゼの阻害剤、再捕獲の阻害剤、５−HT_1Aアゴニ スト）。しかしながら、一方において、それらの効力は、限定され 、そして他方において、それらは未だ、それらの多くについて、実質的な副作用 を有しており、そして最終的には、それらの遅延作用は実質的である（＞２週間 ）。 文献中の、そして本発明者らによる最近の結果は、５−HT_1B/1Dレセプターが 抑うつ症侯群及び抗抑うつ剤の作用機作において主要な役割を演じることができ ることを示している。それらはアセチルコリンの放出を調節するだけでなく５− HTそれ自体の放出をも調節し、そしてそれにより、抑うつ症侯群におけるその重 要性が知られているセロトニン作動伝達を有効に調節することが実際に示された 。さらに、それらは、非競合的なやり方でたぶん相互作用する抗抑うつ薬の標的 であり；言い換えれば抗抑うつ薬は５−HT_1B/1Dレセプターの別の部位を認識す るが、後者と密に相互作用性であると考えられる。 本発明者らの研究は、特定の５−HTレセプター、特に５−HTそれ自体の放出を 調節する５−HT_1B/1Dレセプターの働きと相互作用することができるレセプター 部位を認識する脳内因性化合物の同定を許容した。 同定された脳内因性化合物はテトラペプチドの配列： Leu-Ser-Ala-Leu（配列LSAL） である。 本発明者らは、上記LSAL配列又は修飾LSAL配列の一部を含んで成るペプチドの 活性をもテストし、そしてこれらの化合物が未だ５−HT_1B/1Dレセプターについ て良好な活性をもつことを示した。一般に、NH₂−末端の修飾（例えば、アセチ ル化）はその５−HTレセプターに対する低いリガンド活性をもつ化合物を導き、 一方、COOH末端の修飾は、未だ実質的な活性をもつペプチドを得ることを可能に する。 例えば、LSAL配列のCOOH末端への配列Gly-G1y-Gly-Tyrの付加は、実質的な活 性を未だにもつ化合物を得ることを可能にする。しかしながら、そのTyr残基が ヨウ素化されている同一配列の付加は、その５−HTレセプターについてのリガン ド活性をもはやもたない化合物を導く。たぶんそれは、このように修飾されたペ プチドのそのレセプターへの結合を妨害するヨウ素原子の大きなサイズのためで ある。 従って、本発明の対象は、以下のペプチド配列： X Leu Y ｛配列中、ＸはＨ又はAla又はLeu-Ser-Hlaを表し、ＹはOH、又は１〜10アミノ酸 をもつペプチド配列を表し、そのカルボキシ末端がNH₂基によりアミド化され又 は置換又は非置換ヒドロキシカルビルオキシ残基によりエステル化されている。 但し、ＸとＹは、それぞれ同時にＨとOHを表わさな。｝により表される化合物、 並びに、そのペプチド結合基-CO-NH-がプロテアーゼの酵素的分割に抵抗する結 合基により置換され、又は酵素的分解に抵抗するペプチド結合を作る１以上の介 在基をそのペプチド骨格が含んで成るような対応化合物である。 従って、ペプチド結合基(-CO-NH-)は、有利には、結合基-CO-NR′-，-CR₁R₂-C R₃R₄-，-CO-CR₁R₂-｛Ｒ₁，Ｒ₂，Ｒ₃とＲ₄は同じ又は異なることができ、Ｈ又は Ｃ₁−Ｃ₆アルキル基、特にメチル基を表し、そしてＲ′がＣ₁−Ｃ₆アルキル基を 表す。｝により置換される。 ペプチド骨格内に介在されることができる基の中に、以下の基、-CR₁R₂-，-NR₁ -及び-O-｛Ｒ₁とＲ₂は先に定義したものである。｝を挙げることができる。 ヒドロキシアルビルオキシ残基は、特にアルキルオキシ、アルケ ニルオキシ又はアルキニルオキシ基であって、直鎖又は分枝鎖であり、１〜10炭 素原子をもち、非置換又はOH，NH₂，NO₂，Cl，Br，Ｆ，CF₃から選ばれた１以上 の基により置換されたもの、例えば基OCH₃，OC₂H₅，OCHOH-CH₃，OCHOH-CH₂OH，O CH₂CH₂NH₂，OC₃H₇その他を意味すると理解される。 本発明の対象は、より特に、以下のペプチド配列： Leu-Ser-Ala-Leu-Z ｛配列中、ＺはOH，NH₂、非置換又は置換ヒドロカルビルオキシ残基、又は１〜1 0アミノ酸をもつペプチド配列を表す。｝により表される化合物、並びにそのペ プチド結合がプロテアーゼによる酵素分解に抵抗性である結合により置換され、 又はそのペプチド骨格が酵素分解に抵抗性のペプチド結合を作る１以上の介在基 を含んで成るような対応化合物である。 Ｚのアミノ酸の性質は、重要ではなく、その制限は、（遺伝子によりコードさ れていない）修飾されたアミノ酸が関連するとき、それらが（ヨウ素原子の半径 のものより大きなサイズをもつ）バルキーな基により置換されていないというこ とである。 本発明に係る化合物は、特に、以下の配列： Ala-Leu； Leu-Ser； Ala-Leu-Ser； Leu-Ser-Ala-Leu； Leu-Ser-Ala-Leu-OCH₃； Leu-Ser-Ala-Leu-NH₂； Leu-Ser-Ala-Leu-Gly-Gly-Gly-Tyr； のペプチド； 並びにそのペプチド結合が先に定義したような結合により置換され ；又はその骨格が先に定義したような介在基を含んで成るような類似の化合物を 含んで成る。 最も活性のある化合物は、その構成アミノ酸がＬ型であり、すなわち、先に定 めたペプチド構造について天然型であるものである。 本発明に係る化合物は、以下に記載するように凍結乾燥された脳からの抽出又 はより有利には慣用のペプチド合成により、例えばそれらが天然ペプチドだけで あるときMERRIFIELDの固相法により、又はあるいは、アミノ酸の末端基の修飾及 びこのように得られた残基の縮合により調製され、連続残基間の結合に関連する もの以外の反応性官能基は、当業者によく知られた保護基の助けを借りて先に保 護されている。 本発明に係るペプチドの調製の１例に従って、そのアミン官能基がtert−ブチ ルオキシカルボニル基により保護されているCOOH末端の第１残基を、そのカルボ キシル基を介して樹脂に付着させ、次に、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸 によりその樹脂を洗浄することによりそのアミン官能基を脱保護した後に、その アミノ官能基が上記のように保護されている第２アミノ酸残基をジメチルホルム アミド中で結合させる；本発明に係るペプチド部分を構成するであろうアミノ酸 残基はこのように順番に付着される。脱保護後、Ｎ−末端残基のアミン官能基を ジイソプロピルエチルアミンの存在中過剰の無水酢酸の作用によりアセチル化す ることができる。 アミノ酸の反応性側鎖を例えばそのヒドロキシル側鎖について、ベンジル基に より保護することができる。 この保護基を除去した後、本発明に係るペプチドを例えばフッ化水素酸により その固体支持体から除去する。この粗生成物を凍結乾燥し、そして中程度の圧力 において液体クロマトグラフィーに供する、これは、実際に純粋な生成物を得る ことを可能にする；次に後 者は高速液体クロマトグラフィーにより並びにそのアミノ酸組成の分析により、 そして質量分析により特徴付けられる。 特徴付けしたペプチドは、その自己レセプター(そしてまた異種レセプター(he tero-receptors))とその相互作用を通じてセロトニン作動伝達を調節する特性を 有し、そしてその５−HT系が有害に関連するさまざまな精神医学的病因（ストレ ス、不安、抑うつ、強迫神経症、食欲失調、不眠症、挙動失調、攻撃性その他） において重要な役割を演じる。 本発明の対象は、配列Leu-Ser-Ala-Leu(LSAL)の内因性ペプチドがそれに付着 するレセプターのためのリガンドとして作用することができる化合物であって、 その空間的構造が以下の配列： X-Leu-Y ｛配列中、ＸとＹは先に定めたものであり、ＸとＹはそれぞれ同時にＨとOHを表 わさい。｝により表されるペプチドのものに実質的に同一である基を含んで成る ことを特徴とする化合物でもある。 このような化合物は、上記ペプチドLSALのアゴニスト又はアンタゴニストであ ることができる。 “実質的に同一の空間的”構造は、そのレセプターに結合する基を形成する原 子の平均位置がその対応ペプチドを形成する原子の平均位置から多くとも５％、 そして好ましくは多くとも２％だけ異なることを、本発明の目的のために意味す ると理解される。 好ましい化合物の中に、その空間的構造が以下のジ−、トリ−及びテトラペプ チドに実質的に同一である基を含んで成るものを掲げることができる： Ala-Leu Leu-Ser Ala-Leu-Ser Leu-Ser-Ala-Leu 本発明に係る化合物は、J．Med．Chem.，Vol．37，No．9，pp．1233 to 1251 及びJ．Med．Chem.，Vol．37，No．10，pp．1385-1401中に記載されたように、 コンピューター・モデリング及びモデリング後に得られた構造を使用する慣用の 化学合成により、本発明に係るペプチドの空間的構造から調製される。 有利には、これらの化合物は、さらに、この同一部位に対し活性な公知の抗抑 うつ薬分子の空間構造に基づいて調製される。 このモデリング技術は、特に、（最近知られた抗抑うつ薬に反して）アミンの 輸送部位に影響をしないが５−HT_1B/1Dレセプターにより担持されるユニークな アロステリック部位に影響する分子の構造を定め、そして特徴付けすることを可 能にする。 本発明の対象は、血液脳関門を横切ることができる先に定めたような化合物を 含んで成る治療的組成物でもある。 血液脳関門を横切るために、ペプチドは、好ましくは、プロドラッグの形態、 特にグリコシル・ホスホトリエステル型の形態であって、そのペプチドが、J．M ED．CHEM．92，Vol．35，p．30-39中に記載されたように、例えばロイシンを通 じてホスフェート基に結合されているような形態で投与される。 このようなプロドラッグ、及び一般に、本発明に係る化合物をインビボにおい て放出することができる前駆体分子が、他の本発明に係る対象を構成する。 上記治療組成物は有利には、セロトニン作動系が関連する病因、特にセロトニ ン作動伝達の欠陥にリンクした病因において使用される。 従って、本発明に係る組成物は、特に、抑うつ症の治療において、さらに抗抑 うつ薬により最近カバーされる全ての徴候、例えば強 迫神経症失調、一般的不安、パニック発作、食欲失調、不眠症、衝動性、性的失 調、攻撃性、そしてセロトニン作動伝達を容易にする化合物のためのより一般的 なものにおいて使用されることができる。 本発明に係る組成物は有利には、注射可能な又は経口形態又はいずれかの他の 公知の医薬形態において提供される。 有効な治療的投与量は、治療されるべき病因の性質及び重度、並びにその患者 の体重及び年齢に依存して当業者により容易に決定される。本発明に係る化合物 は毒性でない。それらは、当業者によく知られた医薬として許容される媒体又は 賦形剤に添加される。 本発明の対象は、患者においてセロトニン作動系にリンクする症状のインビト ロにおける診断のための方法であって、以下の配列： Leu-Ser-Ala-Leu のペプチドをその患者からの生物学的液体中で検定されることを特徴とする方法 でもある。 この検定は、上記生物学的サンプルを本発明に係るペプチドに対して特異的に 向けられた抗体と接触するようにもっていき、そしてこのように形成された抗原 −抗体複合体を検出することを含んで成る免疫学的方法により特に行われる。 これらの方法は、RIA，RIPA又はLRMA型の放射−免疫学的方法、又は例えばELI SA型の免疫酵素法に基づくことができる。 上記生物学的液体は血液、尿又は脊髄液であることができる。 上記抗体は、モノクローナル又はポリクローナル及び構成成分、並びにそれら のFab，Fab′，Ｆ(ab′)₂及びFc断片、他の本発明の対象であることができる。 これらの抗体は、本発明に係るペプチドを免疫原性担体ペプチド又はタンパク 質に結合させることにより得られる。 本発明の対象は、セロトニン作動伝達における欠陥、特にマスクされた抑うつ 症にリンクした病因が疑われる患者からの体液中で本発明に係るペプチドを検出 するための診断キットであって、先に定めたような少なくとも１の抗体及び場合 によりその検定を行うための試薬を含んで成るキットでもある。 本発明に係るペプチドは５−HTの再捕獲の部位に対して不活性であることが証 明された。再捕獲の部位に対して活性でない脳内因性因子の存在は、活性に関し て対照標準を構成し、そしてそれ故、その５−HT_1B/1D部位に対する再捕獲効果 と相互作用効果の間の区別にある、抗抑うつ物質の選択方法を具現化することを 可能にする。 この方法は公知の抗抑うつ薬に適用され、そして新規医薬の開発を許容する。 実施において、再捕獲効果と５−HT_1B/1Dに対する効果との間の区別は、一方 において、抗抑うつ薬の増加量とシナプトソーム内の５−HTの捕獲の間の結合の 阻害テストをその５−HTを放射ラベルしながら行い、そして他方において、これ らのレセプターに特異的な放射ラベルされたリガンドの存在中抗抑うつ薬の量を 変化させることにより５−HT_1B/1Dに対して同一タイプのテストを行い、そして それぞれのKi値又はより一般的にはそのIC₅₀値を測定することにより、行われる ことができる。 ５−HT_1B/1Dに対して選択的活性をもつ抗抑うつ薬の選択は、再捕獲テストに おいて高Ki又は低IC₅₀をもち、そして逆に、５−HT_1B/1Dのペプチド認識部位へ の結合の阻害のテストにおいて低Ki又は高IC₅₀をもつ物質により指図されるであ ろう。上記放射標識付け（トリチウム化）されたペプチドも、ペプチドの認識の ための特異的部位を同定し、そして特徴付けするために、そしてそれ故、それら のKiを測定し、そして後者を５−HTの捕獲を阻害するためのこれら の同一物質について得られたKi値と比較することによりこのペプチドを置換する （それと競合する）（又は再捕獲阻害剤、例えば³Ｈ−パロキセチン（paroxetin e）を置換する）さまざまな物質の能力について直接的に研究するために容易に 使用されることができる。 他の本発明の対象は、ペプチドLSALのための５−HT_1B/1Dレセプター部位のリ ガンドの検出方法であって、以下の段階が行われることを特徴とする方法でもあ る： −場合により同定されていない分子又は、各種分子を含む混合物を、その表面 に５−HT_1B/1Dレセプターを発現する組換え体細胞と、５−HT_1B/1Dレセプターと その分子との間の相互作用を、後者がその５−HT_1B/1Dレセプターについてのア フィニティーをもつ場合に、許容する条件下で本発明に係る化合物の存在中で、 接触するようにもっていき； −そのレセプターに結合した本発明に係る化合物の量を検出し； −それから、その分子への可能性のある付着を演澤する。 段階。 この方法は、ペプチドLSALのアゴニスト又はアンタゴニストの検出のために使 用されることができる。 他の本発明の対象は、ペプチドLSALのための５−HT_1B/1Bレセプター部位の調 節物質（アンタゴニスト又はアゴニスト）の検出方法であって、以下の段階が行 われることを特徴とするものに関する： −場合により同定されていない分子又は又は各種分子を含む混合物を、その表 面に５−HT_1B/1Dレセプターを発現する組換え細胞と、その５−HT_1B/1Dレセプタ ーと本発明に係る化合物の間の相互作用を許容する条件下、その本発明に係る化 合物の存在中、接触するようにもっていき； −そのレセプターに対する本発明に係る化合物の活性を真似る又 は拮抗することができる分子を検出する、 段階。 上述のような方法に従って得られたリガンドは、精神医学的失調、例えば抑う つ症、循環失調、例えば偏頭痛、又は免疫学的失調であって５−HT_1B/1Dレセプ ターにリンクするものの治療において有用な治療組成物の活性成分として使用さ れることができる。 本発明に係る化合物は、５−HT_1B/1Dレセプター及び、より特にこれらのレセ プター上の内因性ペプチド結合部位を標識付けするための診断ツールとしても有 用である。 このために、本発明に係る放射標識された化合物を含んで成る診断組成物が陽 電子射出断層撮影スキャナーを使用する画像形成技術において有利に使用される 。 本発明に係るペプチドLeu-Ser-Ala-Leuの単離と特徴付け、このペプチドLeu-S er-Ala-Leuの５−HT_1B/1Dレセプターに対する結合特性及び薬理学的活性は、添 付図面を参照して以下に説明する。ここで： −図１は、〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオールとの結合相互作用を表す。 〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオールの結合は、HOYER D．et al.，Eur．J．Phar macol．118，1-12(1985)中に記載されたように測定された。 −図１Ａは、0.3nM〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオールの存在中100μｌの全容 量において37℃において60分間インキュベートされた(ラット脳皮質膜（50μｇ のタンパク質))により得られた結果を表す。 上記インキュベーションを、５mM Tris-HClバッファー、pH7.5であって、154m M NaCl,１μＭパルジリン(pargyline)，30μＭイ ソプロテレノール(isoproterenol)を含むものの中で、そして各種濃度のペプチ ド（10^-13〜１０^-8Ｍ）において行った。各点は、５つの独立測定値の平均±標 準偏に対応する。 −図１Ｂは、0.3nM〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオールの存在中37℃において60 分間インキュベートされた、５−HT_1Bレセプター遺伝子によりトランスフェクト されたNIH 3T3細胞の膜（50μｇのタンパク質）により得られた結果を表す。結 合を図１Ａに従って測定した。 −図１Ｃは、１nMにおけるペプチドを含む（○）又は含まない（●）〔¹²⁵Ｉ 〕シアノピンドールオールの増加濃度（0.06〜0.35nM）の存在中、100μｌの全 容量中37℃において60分間インキュベートされたラット脳皮質膜（50μｇのタン パク質）から得られた結果を表す。各点は、３つの独立した測定値の平均±標準 偏差に対応する。 −図１Ｄは、飽和の曲線のスキッチャード(Scatchard)曲線を表す。 図２は、フォルスコリン(forskolin)により刺激されたアデニルイル・シクラ ーゼ活性に対するLSALの効果の結果を表す。 マウス５−HT_1Bレセプター遺伝子を発現するNIH 3T3細胞膜を、３mM MgCl₂と0 .2mM EGTAを含む50mM Tris-HClバッファー、pH7.4(TMEバッファー)中、懸濁し、 そして、Dounceホモジェナイザーによりホモジェナイズした。 アデニルイル・シクラーゼ活性を、0.1mM〔α−³²Ｐ〕ATP（１μCi），１mM M gCl₂，50μＭ GTP，10μＭフォルスコリン、100mM NaCl，10mMセオフィリン（th eophylline），20mMホスホフレアチニン、0.2mg／mlクレアチニン・キナーゼ、 １mM〔³Ｈ〕cAMP（＝15,000 cpm／テスト）及び試験されるべき物質を含む100μ ｌの最 終容量中の50μｌ（30−50μｇのタンパク質の）ホモジェネートのアリコート画 分について測定した。 膜を30℃において20分間インキュベートした。この反応を、50mM Tris-HClバ ッファー中に溶解した５mM ATP，５mM cAMP及び１％ドデシル硫酸ナトリウム、2 00μｌの添加により停止させた。 形成された〔³²Ｐ〕cAMPを、Salmon et al．により記載された２つのカラム・ クロマトグラフィー法(De Vivo and Mauyani(J．Pharmacol．Exp．Therap．238 ，248-253(1986)により修正された、Adv．Cyclic Nucteotide Res.，10，35-55( 1979))により単離された。 −図２Ａは、0.1μＭ５−HTの存在中フォルスコリンにより刺激された酵素活 性に対する、その濃度の関数としてのLSALの効果を表す。 −図２Ｂは、LSALの非存在（●……●）、又はLSAL（I0^-9Ｍ）の存在（○…… ○）中、フォルスコリンにより刺激された酵素活性に対する５−HTの効果の投与 量−応答曲線を表す。 −図３は、ラット脳海馬のシナプトソーム内のセロトニンの放出に対するペプ チドの効果を表す。結果を、ペプチドの非存在中の〔³Ｈ〕５−HT放出のパーセ ンテージ（Ｐ₂／Ｐ₁比）において表す。各点は、３〜６の別個の海馬ホモジェネ ートの助けにより得られた３連測定値の平均±標準偏差である。 使用される方法は、以下の修正を伴って先に記載した方法(BOLANOS-JIMENEZ B ．et al.，Eur．J．Pharmacol．242，1-6(1993))である：〔³Ｈ〕アセチル−コ リンを60nM〔³Ｈ〕５−HTにより置換し、そして0.01％アスコルビン酸をそのイ ンキュベーション培地に添加した。 １．ペプチドLeu-Ser-Ala-Leuの単離と精製 識別基準として、FR−2,657,784中に記載されたようなラット脳シナプトソー ムの膜の５−HT_1B/1Dレセプターによる５−HTの認識と相互作用する、有効因子 の能力を使用して、活性化合物を、ラット、ウマ及びウシ脳抽出物から精製した 。この精製の方法論は、ゲル濾過による分離、正又は逆相又はあるいはイオン交 換を含んだ。 それを、以下の表中に要約する： 得られた画分の特徴付けを、本質的に、NMR分析、アミノ酸分析及びアミノ酸 配列決定に基づいて行った。この精製化合物はLeu-Ser-Ala-Leuから成る。 同一画分をウマとウシの脳からも得た。これはこのペプチドが哺乳類で保存さ れていることを意味する。 ２．５−HT_1B/1Dレセプターとの上記精製ペプチドの相互作用 合成ペプチドLSALを、脳抽出物から得られた精製画分の効果を“真似る”その 能力についてテストした。LSALは、10^-11Ｍに近いIC₅₀及び10^-9Ｍの濃度におい て生じる30〜50％の最大阻害効果をもって、５−HT₁レセプターへの〔³Ｈ〕５− HTの結合を阻害する。使用された実験条件下、主に５−HT_1B/1D部位を表す５−H T_lnonAへの結合は、同一IC₅₀をもって、以下の表２中に表されるように、75％の 最大値まで阻害される。 後者の観察は、５−HT_1B/1Dレセプターが上記ペプチドに特に感受性であるこ とを示す。従って、その５−HT_1Bレセプターが〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオー ルにより特異的に標識されたラット脳組織ホモジェネートに対して行い、その相 互作用は、図１Ａに表すように、10^-11ＭのIC₅₀と60％阻害の最大効果に対応し た。 さらに、５−HT_1Dレセプターに対するこのペプチドの活性をモルモットにおい て、そして〔³Ｈ〕５−HTの助けをかりてヒト脳に対して立証した。IC₅₀の値は 再び10^-11Ｍであった。これらの結果は、インビトロにおいて、５−HT_1B/1Dレセ プターがLSALペプチドの標的を構成することを強く示唆する。 このペプチドの活性を、マウス５−HT_1Bレセプター遺伝子によりトランスフェ クトされたNIH 3T3細胞内での５−HT_1Bレセプターへの結合についても評価した 。 このペプチドの阻害効果は、脳組織ホモジェネートにおいて観察 されたものにひじょうに近似していた（図１Ｂ）。 その最大効果は、10^-11ＭのIC₅₀値をもって〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオール の特異的結合の70％阻害に対応する。この結果は明らかに、LSALが５−HT_1Bレセ プターと直接的に相互作用することを立証する。 ５−HT_1B/1Dレセプターとの上記テトラペプチドの相互作用のタイプをさらに 研究するために、放射標識されたリガンドについての飽和曲線を、上記ペプチド の存在中で確立した。得られた結合結果は、ペプチドの阻害活性が非競合的相互 作用に対応することを示唆する（図１Ｃ，１Ｄ）。 この結果は、５−HT_1Bレセプターを標識付けするための〔³Ｈ〕５−HT、及び 〔¹²⁵Ｉ〕シアノピンドールオールを用いて観察され、そして５−HT結合部位と は別のものであるが密に関連するペプチドについての特異的部位の存在の先の仮 説に従う。 部分的に精製された画分の薬理学的特異性を、ラット脳ホモジェネートを使用 してその後の精製の間に研究した。このテストを、上記ペプチドが他の５−HTレ セプター、又は他の神経伝達物質のものと相互作用するか否かについて決定する ために、合成LSALを使用して行った。 この５−HT_1Aレセプターは、５−HT_1B/1Dへの結合に強く拮抗するペプチド濃 度において影響されなかった。 同様に、５−HT_1E，５−HT_1F，５−HT₂及び５−HT₃レセプターへの放射リガン ドの結合は影響されなかった（表２）、これは、試験したセロトニン作動性レセ プターの中で、５−HT_1B/1Dクラスだけが上記ペプチドに対して感受性であった ことを示す。各種神経伝達物質レセプター：α−及びβ−アドレナリン作動性、 ドーパミン作動性、ムスカリン作動性、ヒスタミン作動性、オピエート（opia te）及びベンゾジアゼピン・レセプターへの、他の特異的放射リガンドの結合を 検査した。これらのレセプターへの結合は、５−HT_1B/1Dレセプターへの結合の ための最大阻害効果をもつ濃度においてLSALにより有意に減少されなかった（表 ２）。 表２についての凡例： ラット脳大脳膜(200μｇ)を、１nMペプチドの存在中又は非存在中、各種放射 リガンド（表参照）と共に25℃において30分間インキュベートした。 セロトニン作動性レセプターについて使用される各種結合条件は上記のもので ある（PALACIOS J．M．et al.，Methods in Neurosciences 12，238-262(1993) ）。他の結合については、そのインキュベーション培地は、120mM NaCl、及び50 mM KCl（〔³Ｈ〕スピロペリドール、〔³Ｈ〕キヌクリジニル・ベンジレート、〔³ Ｈ〕ナロキソン）、又は４mM CaCl₂及び４mM MgCl₂（〔³Ｈ〕フルニトラゼパン ）、又は120mM NaCl，５mM KCl，2.5mM CaCl₂及び１mM MgSo₄（〔³Ｈ〕パラゾシ ン）、又は90mM NaCl（〔³Ｈ〕ジヒドロアルプレノールオール）を含む50mM Tri s-HCl pH7.4から成る。 各点は、５つの独立した測定値の平均±標準偏差に対応する。 同定されたテトラペプチドは、シナプトソーム調製物における５−HTの再捕獲 (recapture)に対していずれの他の効果も示さなかった。さらに、他の神経伝達 物質（又はそれらの前駆体）、例えば、コリン、GABA、ヒスタミン、ドーパミン 、及びノラドレナリン（noradrenaline）の再捕獲に対していずれの効果も示さ なかった。この結果は、このペプチドは、アミンの輸送と相互作用すると先に疑 われた内因性化合物とは異なる。 ５−HT_1B/1Dタイプのレセプターへの〔³Ｈ〕５−HT又は〔¹²⁵Ｉ〕シアノピン ドールオールの結合も、対応のIC₅₀値をもつ以下のペプチドにより阻害される： -Ala-Leu IC₅₀＝10^-6Ｍ -Leu-Ser IC₅₀＝10^-5Ｍ -Ala-Leu-Ser IC₅₀＝10^-6Ｍ。 比較により、ペプチドAla-Leu-Leu-Serは実施されたテストにおいてのみ不活 性であることが証明された。 ペプチドAla-Leuは、そのＬ型（天然型）において活性であり、そしてそのＤ 型において実際に全く活性を示さない。 Ala-LeuとLeu-Ser画分も高い相互作用特異性を示した。なぜなら、結合に対 するそられの阻害効果が、５−HTレセプターの５−HT₁サブタイプについて、そ してより特に５−HT_1B/1Dサブタイプについてみの発揮され；使用した実験条件 下では、それらは、５−HT₂と５−HT₃レセプター又はα−アドレナリン作動性、 β−アドレナリン作動性、ドーパミン作動性、ムスカリン作動性及びヒスタミン 作動性レセプター、ベンゾジアゼピン・レセプター及びオピエート・レセプター に影響を及ぼさない傾向にあった。これらのペプチドも、輸送部位からその標識 を置換する能力を欠いており（〔³Ｈ〕パロキセチン）、そして５−HTの再捕獲 の阻害剤でない。 ペプチドAla-Leuの活性が、さらに、アセチルコリンの誘発放出に対する５−H T_1B/1Dレセプターの阻害作用に対する基本的テストにおいて計測された。 ５−HT_1B/1Dレセプターとの相互作用を示す結合研究の結果と矛盾せずに、ペ プチドLSALがひじょうに低濃度において５−HT_1B/1Dレセプターの調節活性に拮 抗し、そして反対に、高濃度において５−HT_1Bアゴニストの効果を強化したこと が示された。これらの結果は全体として、このペプチドが５−HT_1B/1Dレセプタ ーのアロステリック調節物質(modulater)の役割を演じることができるというこ とを示唆する。 ３）５−HT_1Bレセプターの機能的活性とのLSALの相互作用（変換（transducti on）システム） ５−HT_1B/1Dレセプターは、Ｇ−プロテインに優先的に結合し、 アデニルイル・シクラーゼ（adenylyl cyclase）の活性を阻害することが知られ ている。LSALの相互作用を、NIH 3T3細胞内で発現された５−HT_1Bレセプター刺 激に相関する酵素活性について検査した。 このペプチドは、cAMPの基礎的生産に対していずれの効果をもっていなかった 。しかしながら、それは、フォルスコリンにより刺激されたアデニルイル・シク ラーゼ活性に対する５−HTの阻害効果を有意に増加させた（図２）。この活性は 、ベル変形の投与量−応答曲線をもって、その濃度に依存した。ラット黒質ホモ ジェネートに対する本発明ペプチドの活性は実際に同様であった。これらの結果 は、LSALが５−HT_1Bレセプターの活性と相互作用することをはっきり示す。 ４）５−HT_1B/Dレセプターの細胞機能活性に対する本ペプチドの効果 放射活性アミンにより先にチャージされたラット脳海馬シナプトソームからの 〔³Ｈ〕５−HTの放出に対するペプチドの活性を調べた。 〔³Ｈ〕５−HTのＫ⁺−誘発放出は、10^-11Ｍに近い見かけIC₅₀をもって投与量 −依存のやり方でLSALの存在中、減少された。10^-10Ｍの濃度において観察され た最大効果は、誘発放出の20〜25％阻害に対応し、そして高濃度において減少す る（図３）。 その条件が（平衡における）結合テストのために使用されるものに類似する一 連のテストにおいて、ペプチドLSALは５−HTの作用をもはや強化しないが、反対 に、〔³Ｈ〕５−HTの放出に対するその阻害効果を打ち消す。 これらの結果は、LSALが５−HT_1B/1Dレセプターの活性と相関する細胞機能と 相互作用することを立証する。これらの結果を説明す るための最も可能性のある仮説は、５−HT_1B/1Dレセプターのアロステリック・ モジュレーターとして作用するペプチドLSALが、そのレセプターの活性状態（強 化）又は脱感作状態（阻害）のいずれかに対応するこのレセプターの立体配置の 遷移を引き起こすことができるということである。 ５）インビボにおけるLSALの効果 LSALの挙動効果を調べるためのテストをインビボにおいてマウスにおいて行っ た。 その神経薬理学的研究が、ストレス及び不安にリンクする失調における５−HT_1B レセプターの関連を示すかぎりにおいて、本ペプチドの効果を２つの不安動物 モデルにおいて検査した。 解放空間（Open field）テスト LSALの活性をＣ57／black−６マウスについて開放空間テストにおいて調べた 。雄Ｃ57／BL／６マウス（20−25Ｓ）を使用した。開放空間は25の等しい四角に 分割された白色プラスチック・ボックス（35×35×20cm）から成った。 ５μｌ容量中0.9％生理食塩水溶液５μｌ中の溶解したLSALを、脳室内(icv)ル ートでそのマウス内に注射し、これらをこのボックスの角においた。２分後、横 切った四角の数、行われたＵ−ターン及び固定時間を計測した。これらの結果を 平均±標準偏差として表す。対照との差：^*Ｐ＜0.05，^**Ｐ＜0.005（スチューデ ントｔ検定）。動物当り50μｇ ICVの投与量において、診査活性が、同一条件下 で賦形剤を受容した対照動物と比較して有意に減少された。 上昇十字型ラビリンス 本実験テストは、不安の程度を測定するために使用され、そして２つの支線（ branches）、壁により保護された１及び保護されていない１辺、をもつ上昇ラビ リンス（lahyrinth）から成る。 動物は、それがその入口を避け、そして開放支線において費す時間を減少する とき、不安であると推定される。 20〜24ｇの重さの雄BALB／Ｃマウスを使用した。 上昇十字型ラビリンスを、開放支線と高さ15cmの壁をもつ２つの閉じた同一サ イズの支線（12.5×５cm）をもつプレキシガラス（商標）から作った。これらの 支線は、地面から40cm上に置かれ、５×５cmの中央プラットホームから延びる。 ５μｌの容量中の0.9％における生理食塩水溶液５ml中に溶解されたLSALをicv ルートでマウスに注射した。３時間後、この動物を上記ラビリンスの中央プラッ トホーム上に置いた。支線への各侵入及び各支線において費やした時間を記録し た。テストの経過時間は５分間であった。このラビリンスを各テスト後に掃除し た。 LSALを低光強度の条件下でテストした（BENIAMIN D．et al.，Life Sci．47， 195-203(1990)）。 結果を、開放支線への侵入のパーセンテージ（開放支線内への％侵入）、開放 支線内で費した時間のパーセンテージ（開放支線にお ける％時間）及び支線内への侵入の全数の、平均±標準偏差として表した。対照 との差：^*Ｐ＜0.05，^**Ｐ＜0.01（スチューデントｔ−検定）。 この結果は、使用した実験条件下で、本ペプチドが不安原性（anxiogenic）効 果をもつことを強く示唆する。10μｇのLSALの投与量は、上記サビリンスの非保 護開放支線内への侵入の数を増加させ、上記テスト条件下での本ペプチドの抗− 不安（anxiolytic）効果を示唆する。 強制スイミング・テスト 強制スイミング・テスト(Porsolt)は、いずれの状況下において も、“抑うつ症（depression）”のモデルと同化されることができない簡単なテ ストである。しかしながら、それは抗抑うつ薬物質の良好な数の間を区別するメ リットをもつ。しかしながら、いくつかの抗抑うつ薬は、本テストにおいて活性 ではなく、そしていくつかの非−抗抑うつ薬物質がそれにおいて活性であること に留意すべきである。 抗抑うつ薬活性が、本テストにおいて計測される実験条件下、高濃度における ipルートだけでなく、低濃度におけるi.c.v．（脳室ルート）を介して注射され たペプチドAla-Leuは、マウス不動（固定）時間を僅かに減少させ；ノルアドレ ナリン作動性型(ノミフェシン(nomifesine))抗抑うつ薬は、本テストにおけるペ プチドよりもかなり有効であるが、セロトニン作動性抗抑うつ薬も弱い活性をも つことが示された。 水平移動（horizontal locomotor）活動の計測を活動計測装置内で行った。本 ペプチドは、刺激効果をもつ。本テストの間、排便における高い増加（不安に関 連する指標）が本ペプチドを受容した動物において記録された。 しかしながら、これらの全てのテストにおいて、動物における“ストレス”の 初期の状態は、観察された現象の程度において役割を演じているようである。 各シリーズのテストを、食欲についてのジペプチドAla-Leuの効果について行 った。７〜30μｇの本ペプチドのi.c.v.ルートを介しての投与は、マウスにおけ る食餌の消費に対するかなりの効果をもつ。なぜなら、それらが、24時間にわた り、それらの動物により消費される食餌のほとんど半分の減少、並びにこれもま た有意である体重損失を引き起こすからである。 後者の観察は、セロトニン作動性抗抑うつ薬がもっともしばしば 、食餌消費に対する主要な効果、治療される患者においてある者は体重が増加し 、他の者は体重が減少するという事実、並びに、それらの活性がしばしば抑うつ 症を伴う大食(bulimia)又は拒食（anorexia）において発揮されるという事実に 、実際に矛盾しない。 本発明に係るLSAL及び他のペプチドのインビボ投与後に観察されたこれらの挙 動変化は、本ペプチドにより誘導される分子及び細胞変化が中枢神経系の働きに おける変化を有効に導くことを強く示す。事実、LSALは、インビボにおける投与 後に不安を引き起こすことができるようである。LSALは、中枢神経系のレベルに おいて神経伝達物質に対して５−HTにより発揮される制御を細かく調節すること ができる、内因性調節物質(regulater)とみえる。それはたぶん、生理−病理学 的機能（睡眠、体温調節、学習及び記憶、挙動、痛みその他）、並びにセロトニ ン作動系に関連すると強く疑われ又はそう知られた、生理−病理学的メカニズム （ストレス、不安、抑うつ症、攻撃性、栄養失調その他）において主要な役割を 演じる。また、それは血圧及び偏頭痛にリンクした病因において主要な役割を演 じるはずである。なぜなら、５−HT₁タイプ(５−HT−様（たぶん５−HT_D ))レセ プターがヒト脳血管内及び他の平滑筋肉にあるからである。 それは間違いなく免疫応答をも調節する。なぜなら、５−HT_1B/1Dレセプター が免疫応答能のある組織内に存在し、そして５−HTの伝達がその免疫応答と相互 作用することが知られているからである。 ７）本発明に係るペプチドの相対活性 １nMにおける様々なアミノ酸又はペプチドの相対活性を、それぞれ、0.3nM〔^{1 25} Ｉ〕シアノピンドールオールと30nM〔³Ｈ〕５−HTの助けを借りて５−HT_1Bと ５−HT_1B/1Dレセプターについて測定 した。この結合実験を上述のように行った。これらの結果を、LSAL効果のパーセ ンテージとして表す。各値は、５連において行った３つの独立テストの、平均± 標準偏差に対応する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ Ｃ０７Ｃ 229/22 8517−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 5/062 Ｃ０７Ｋ 1/04 8517−4Ｈ 5/083 1/14 8517−4Ｈ 7/06 5/062 0276−2Ｊ Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｄ 5/083 0276−2Ｊ 33/566 7/06 0276−2Ｊ 33/577 Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/53 9051−4Ｃ Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＡＫ 33/566 9454−4Ｃ 49/02 ＡＢＢＣ 33/577 ＡＡＨ (31)優先権主張番号 ９４／０７０７９ (32)優先日 1994年６月９日 (33)優先権主張国 フランス（ＦＲ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＪＰ，ＫＲ，Ｕ Ｓ (72)発明者 マソット，オリビエール フランス国，エフ―94500 シャンピグニ ー―シュール―マルヌ，リュ ユージン― ブルン，15

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．以下のペプチド配列： X Leu Y ｛配列中、ＸがＨ又はAla又はLeu-Ser-Alaを表し、ＹがOH、又は１〜10アミノ酸 をもつペプチド配列であってそのカルボキシ末端がNH₂基によりアミド化され又 は置換若しくは非置換ヒドロキシカルビルオキシ残基によりエステル化されてい るものを表す。但し、ＸとＹは、それぞれ、同時に、ＨとOHを表さない。｝によ り表される化合物並びにそのペプチド結合基-CO-NH-がプロテアーゼの酵素分解 に抵抗する結合基により置換され、又はそのペプチド骨格が酵素分解に抵抗する ペプチド結合を作る１以上の介在基を含んで成るような対応化合物。 ２．以下のペプチド配列： Leu-Ser-Ala-Leu-Z ｛配列中、ＺがOH，NH₂、置換又は非置換ヒドロカルビルオキシ残基、又は１〜1 0アミノ酸をもつペプチド配列を表す。｝により表される化合物、並びにそのペ プチド結合がプロテアーゼによる酵素分解に抵抗性の結合により置換され、又は そのペプチド骨格が酵素分解に抵抗性のペプチド結合を作る１以上の介在基を含 んで成るような対応化合物。 ３．ペプチド結合基-CO-NH-が-CO-NR′-，-CR₁R₂-CR₃R₄-，-CO-CR₁R₂-から選 ばれた基により置換され、又はペプチド骨格が基-CR₁R₂-，-NR₁-，-O-から選ば れた１以上の介在基をもつ、ここでＲ₁，Ｒ₂，Ｒ₃及びＲ₄は同一又は異なり、Ｈ 又はＣ₁−Ｃ₆アルキル基を表し、そしてＲ′はＣ₁−Ｃ₆アルキル基を表す、よう な請求項１又は２に記載の化合物。 ４．Ala-Leu； Leu-Ser； Ala-Leu-Ser； Leu-Ser-Ala-Leu； Leu-Ser-Ala-Leu-OCH₃； Leu-Ser-Ala-Leu-NH₂； Leu-Ser-Ala-Leu-Gly-Gly-Gly-Tyr； から選ばれた配列を含んで成る、請求項１又は２に記載の化合物、 並びに、そのペプチド結合がプロテアーゼによる酵素分解に抵抗性の結合によ り置換され、又はそのペプチド骨格が酵素分解に抵抗性のペプチド結合を作る１ 以上の介在基を含んで成るような対応化合物。 ５．それらがＬ型であることを特徴とする、請求項１〜４に記載の化合物。 ６．それに配列Leu-Ser-Ala-Leu(LSAL)の内因性ペプチドが結合するレセプタ ーについてのリガンドとして作用することができる化合物であって、それが、そ の空間的構造が以下の配列： X-Leu-Y ｛配列中、ＸとＹが請求項１中で定義したものと同じであり、ＸとＹが、それぞ れ、同時にＨとOHを表さない。｝により表されるペプチドのものと実質的に同じ である基を含んで成ることを特徴とする化合物。 ７．それが、その空間的構造が以下のペプチド： Ala-Leu Leu-Ser Ala-Leu-Ser及び Leu-Ser-Ala-Leu と実質的に同じである基を含んで成ることを特徴とする、請求項６に記載の化合 物。 ８．それが、そのレセプターに結合する基を形成する原子の平均位置がその対 応ペプチドを形成する原子の平均位置から大きくとも５％程だけ異なるような基 を含んで成ることを特徴とする、請求項６又は７記載の化合物。 ９．それが、そのレセプターに結合する基を形成する原子の平均位置がその対 応ペプチドを形成する原子の平均位置から大きくとも２％程異なるような基を含 んで成ることを特徴とする、請求項６又は７記載の化合物。 10．それが、その対応ペプチドの空間構造を使用したコンピューター・モデリ ング及びモデリング後に得られた構造を使用した慣用の化学合成を含むことを特 徴とする、請求項６〜９の中の１項に記載の化合物の製造方法。 11．モデリングが、内因性ペプチドの結合部位に対して活性な抗抑うつ性分子 の空間構造を使用して行われることを特徴とする、請求項10に記載の方法。 12．それが、請求項１〜11の中のいずれか１項に記載の化合物の少なくとも１ を含んで成ることを特徴とする治療用組成物。 13．それが、請求項１〜10の中のいずれか１項に記載の化合物をインビボにお いて放出することができる前駆体分子を含んで成ることを特徴とする治療用組成 物。 14．患者においてセロトニン作動系にリンクした条件のインビトロにおける診 断方法であって、以下の配列： Leu-Ser-Ala-Leu を有するペプチドをその患者からの生物学的液体中で検定すること を特徴とする方法。 15．検定を、前記ペプチドに特異的な抗体の助けを借りて行うことを特徴とす る、請求項14に記載の方法。 16．請求項14において定義したペプチドに対して特異的に向けられたポリクロ ーナル又はモノクローナル抗体、並びにその抗体の断片、特にFab，Fab′，F(ab )₂又はFc断片。 17．それが、請求項16に定義したような抗体又は抗体断片を含んで成ることを 特徴とする、請求項14又は15に記載の方法を行うための診断キット。 18．ペプチドLeu-Ser-Ala-Leuと同一の立体配置部位を占有する抗抑うつ物質 をスクリーニングする方法であって、識別を、一方をにおいて、５−HTの再捕獲 部位へのそれらの結合の間の、そして他方において、５−HT_1B/1D部位へのそれ らの結合の間、阻害のテストにより行うことを特徴とする方法。 19．テストされるべき物質についての阻害定数Ki₁を、請求項１又は２に記載 のペプチドの存在中での結合阻害のテストにより、５−HTの再捕獲を阻害し又は 再捕獲阻害剤を置換するためのこれらと同じ物質の阻害定数Ki₂と、比較するこ とを特徴とする、請求項18に記載の方法。 20．化合物が放射標識された、請求項１又は２に記載の化合物を含んで成る診 断組成物。 21．５−HT_1B/1Dレセプターのペプチド部位を可視化する方法であって、請求 項20に記載の組成物を使用し、そして５−HT_1B/1Dレセプターを陽電子射出断層 撮影スキャナーの助けを借りて可視化することを特徴とする方法。 22．ペプチドLSALについての５−HT_1B/1Dレセプター部位のリガンドの検出方 法であって、以下の： −場合により同定されていない分子又は、各種分子を含む混合物を、その表面 に５−HT_1B/1Dレセプターを発現する組換え体細胞と、５−HT_1B/1Dレセプターと その分子との間の相互作用を、後者がその５−HT_1B/1Dレセプターについてのア フィニティーをもつ場合に、許容する条件下で請求項１〜11のいずれか１項に記 載の化合物の存在下で、接触するようにもっていき； −そのレセプターに結合した本発明に係る上記化合物の量を検出し； −それから、その分子への可能性のある付着を演澤する、から成る段階を行う ことを特徴とする方法。 23．ペプチドLSALのアゴニスト又はアンタゴニストの検出のための、請求項22 に記載の方法。 24．ペプチドLSALについての５−HT_1B/1Dレセプター部位の調節物質の検出方 法であって、以下の： −場合により同定されていない分子又は又は各種分子を含む混合物を、その表 面に５−HT_1B/1Dレセプターを発現する組換え体細胞と、その５−HT_1B/1Dレセプ ターと請求項１〜11の中の１に記載の化合物との間の相互作用を許容する条件下 、請求項１〜11のいずれか１項に記載の化合物の存在中、接触するようにもって いき； −そのレセプターに対する請求項１〜11の中の１に記載の化合物の活性を調節 することができる分子を検出する、 から成る段階を行うことを特徴とする方法。 25．請求項22又は24に記載の方法に従って同定された、ペプチドLSALについて の５−HT_1B/1Dレセプター部位のリガンド又は調節物質(modulator)。 26．活性成分として、請求項25に記載のリガンド又は調節物質を含んで成る治 療組成物。 27．セロトニン作動性結合に対する調節活性をもつ組成物の製造のための、請 求項１〜11の中の１に記載の化合物の使用。