JPH09504541A

JPH09504541A - ５‐フルオロウラシル誘導体

Info

Publication number: JPH09504541A
Application number: JP7513100A
Authority: JP
Inventors: レスリーボイド，フランク; アンソニークレニツキー，トーマス
Original assignee: ザ、ウェルカム、ファウンデーション、リミテッド
Priority date: 1993-11-05
Filing date: 1994-11-04
Publication date: 1997-05-06
Also published as: GB9322795D0; AU8066194A; US5843917A; WO1995012606A1; EP0726904A1

Abstract

(57)【要約】式（Ｉ）：Ｘ‐Ｌ‐Ｙ、（II）：Ｘ‐（Ｌ‐Ｙ）_nおよび（III）：Ｘ‐Ｌ‐（Ｙ）_n（上記式中、Ｘはウラシルレダクターゼ不活化剤又はそのプロドラッグであり、Ｙは５‐フルオロウラシル又はそのプロドラッグであり、ＬはＸおよびＹ双方に共有結合された連結基であり、ｎは少くとも２である）の新規化合物、医学上、特にがん化学療法上のこのような化合物の使用、このような化合物を含有した医薬組成物、およびこのような化合物の製造方法が開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】５‐フルオロウラシル誘導体本発明は、抗悪性腫瘍剤、特に５‐フルオロウラシル（５‐ＦＵ）に共有結合された、医学上、特にがん化学療法上、有用なある種の酵素不活化剤を含んでなる化合物に関する。５‐フルオロウラシルは１９５７年以来がん化学療法に用いられている。感受性腫瘍には乳癌、胃腸悪性疾患および頭頚部のがんがあり、５‐フルオロウラシルは放射線増感剤としても用いられる。５‐フルオロウラシルは酵素ジヒドロチミジンデヒドロゲナーゼ（ウラシルレダクターゼ）により肝臓で急速に代謝される（半減期８〜２０分）。５‐（２‐ブロモビニル）ウラシル（ＢＶＵ）はジヒドロチミジンデヒドロゲナーゼの阻害剤であって、５‐フルオロウラシルの代謝を遅らせて、その抗腫瘍活性を高めることが報告されている（Cancer Research, 46，1094,1986）。５‐（２‐ブロモビニル）‐２′‐デオキシウリジン（インビボでＢＶＵに代謝される）は５‐フルオロウラシルと、５‐フルオロウラシルのプロドラッグである５‐デオキシ‐５‐フルオロウリジンの抗腫瘍活性を高めることが報告されている(Biochemical Pharmacology,38: 2885,1989)。ＷＯ９２／０４９０１ではウラシルレダクターゼの不活化剤として有用な５‐ 置換ウラシル誘導体について開示しており、それらは血漿中５‐フルオロウラシルのレベルおよび半減期を増加させて、５‐フルオロウラシルの活性を高める。これらの誘導体は被治療体間において５‐フルオロウラシル血漿レベルに関し通常みられる偏りも減少させる。５‐エチニルウラシルはウラシルレダクターゼの不活化剤としてＢＶＵより１００倍強力である。有用な化合物はウラシルレダクターゼ不活化部分を５‐フルオロウラシル部分又はそのプロドラッグと共有結合させることにより製造できることが、今般見出された。したがって、第一の態様において、本発明は下記式の化合物を提供する：Ｘ‐Ｌ‐Ｙ（Ｉ）上記式中、Ｘはウラシルレダクターゼ不活化剤又はそのプロドラッグを表し、Ｙは５‐フルオロウラシル又はそのプロドラッグを表し、ＬはＸおよびＹ双方に共有結合された連結基である。好ましくは、Ｘは５‐置換または５，６‐ジヒドロ ‐５‐置換ウラシル誘導体であり、５‐置換基はブロモ、ヨード、シアノ、ハロ置換Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ハロ置換Ｃ_2-6アルケニル基、Ｃ_2-6アルキニル基、ハロ置換Ｃ_2-6アルキニル基である。これらの化合物は、被治療体、例えばヒトのような哺乳動物に投与されるとき、ウラシルレダクターゼ不活化剤と５‐フルオロウラシル抗悪性腫瘍剤自体との双方を供給する。このため、単一の活性剤が被治療体に投与されるだけでよい。加えて、これらの化合物はそれらが経口投与できるという利点を有している。５‐フルオロウラシルは通常経口投与できないが、それは胃腸管でウラシルレダクターゼにより破壊されるからである。５‐ＦＵを供給して経口投与できる単一剤がここに提供される。Ｃ_2-6アルケニルまたはＣ_2-6アルキニル基とは直鎖または分岐鎖アルケニルまたはアルキニル基を意味し、後者はＣ_2-6シクロアルキル基で置換されたアルケニルまたはアルキニル基を含む。アルケニルまたはアルキニル基上のハロゲン置換基は、好ましくはブロモ、クロロまたはヨードである。ハロ置換エテニルおよびエチニル基が特に好ましい。通常１つだけのハロ置換基が存在する。好ましいハロ置換アルケニル基は１位で置換されている。ウラシル誘導体部分は、５‐換基がＣ_2-6アルキニル基（場合によりハロ置換されている）、好都合にはＣ_2-4アルキニル基、好ましくはエチニルまたはプロピニル基であるものが好ましい。好ましい１‐ハロアルケニルおよびアルキニル誘導体において、多重結合は１位にある。前記のような化合物の一部を形成する特に好ましいウラシル誘導体は５‐エチニルウラシルおよび５‐プロピニルウラシルである。他のこのような不活化剤には以下がある：５‐シアノウラシル５‐ブロモエチニルウラシル５‐（１‐クロロビニル）ウラシル５‐ヨードウラシル５‐ヘキス‐１‐イニル（５‐ｈｅｘ‐１‐ｙｎｙｌ）ウラシル５‐ビニルウラシル５‐トリフルオロメチルウラシル５‐ブロモウラシル５‐フルオロウラシルのプロドラッグとはインビボで５‐フルオロウラシルに代謝される化合物であり、それには５‐フルオロウリジン、５‐フルオロ‐２‐ デオキシウリジン、５‐フルオロ‐２‐デオキシシチジン、５′‐デオキシ‐５ ‐フルオロウリジン、１‐（２‐テトラヒドロフラニル）‐５‐フルオロウラシルおよび１‐Ｃ_1-8アルキルカルバモイル‐５‐フルオロウラシル誘導体がある。ウラシルレダクターゼ不活化剤のプロドラッグとは、インビボで対応ウラシルレダクターゼ不活化剤に代謝される化合物である。このようなプロドラッグには、上記５‐置換ウラシル化合物に相当する核酸塩基を含んだヌクレオシドアナログも含まれる。例えば、ハロ（例えばクロロもしくはフルオロ）、アルコキシ、アミノまたはチオのような２′‐または３′‐置換基を有していてもよいリボース、２′‐デオキシリボース、アラビノースまたは他の開裂しうる糖部分を含んだヌクレオシド誘導体。このようなヌクレオシド誘導体の具体例は１‐（６‐Ｏ‐アラビノフラノシル）‐５‐エチニルウラシルおよび１‐（６‐Ｏ‐アラビノフラノシル）‐５‐プロピ‐１‐イニルウラシルである。他のウラシル誘導体プロドラッグには５‐エチニル‐２‐ピリミジノンがある。連結基Ｌの性質は、化合物が被治療体に投与されると、活性成分が放出されるようなものであるべきである。これにより、本発明による化合物の分解により、５‐フルオロウラシルおよびウラシルレダクターゼ不活化剤の双方またはそれらのプロドラッグが放出される。好ましい態様において、５‐フルオロウラシル部分およびウラシルレダクターゼ不活化剤部分は双方ともヌクレオシドの形で提供され、これらは被治療体に投与されると連結が壊れて活性成分を放出するように連結されている。５‐フルオロウラシルおよびウラシルレダクターゼ不活化剤と一緒にこのようなヌクレオシドを形成できる適切な糖部分には、リボース、２′‐デオキシリボース、アラビノースおよび５′‐Ｃｌ‐２′‐デオキシリボースがある。適切な連結基Lの例にはサクシネート基、ピロホスフェート基、タートレート基、モノ‐、ジ‐またはトリホスフェート基およびアミド基があるが、サクシネートおよびホスフェート基が一般的に特に適切である。本発明の好ましい化合物の例には以下がある： ‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）５‐エチニルウリジン‐５‐フルオロ‐１‐（β‐Ｄ‐アラビノフラノシル）ウラシルコハク酸５′，２′‐ジエステル（１‐β‐Ｄ‐アラビノフラノシルウラシル）、および一般的に、前記のような化合物の適切な用量は、０．１〜１０００ｍｇ／受容者の体重ｋｇ／日の範囲内、好ましくは０．１〜２００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲内で５‐フルオロウラシルまたはそのプロドラッグを投与するような用量である。最も好ましくは、０．１〜５０ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲内の用量である。ウラシル誘導体成分について、適切な用量は０．０１〜５０ｍｇ／受容者の体重ｋｇ／日、特に０．０１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内である。更に好ましくは、ウラシル誘導体として０．０１〜０．４ｍｇ／体重ｋｇ／日を与えるような用量であるべきである。したがって、前記のような化合物の適切な用量は、０．０４〜４０００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲内、好ましくは０．０４〜８００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲内、最も好ましくは０．４〜２００ｍｇ／体重ｋｇ／日の範囲内である。化合物の性質からみて、化合物の分解による５‐フルオロウラシルまたはそのプロドラッグとウラシル誘導体との投与量が前記範囲内に入るように、５‐フルオロウラシル部分またはそのプロドラッグの数を増加させることは、更に連結基をつけることにより可能であることが理解されるであろう。したがって、本発明は下記式（II）および（III）の化合物も提供する：Ｘ‐（Ｌ‐Ｙ）_n （II）およびＸ‐Ｌ‐（Ｙ）_n （III）上記式中、Ｘ、ＬおよびＹは前記のとおりであり、ｎは少くとも２である。好ましくは、ｎは２〜１０の範囲である。簡潔化のために、“前記のような化合物”という用語は、式（Ｉ）、（II）および（III）の化合物を表すために以下で用いることとする。別の態様において、本発明は医学用に、特にがん化学療法に用いられる前記のような化合物を提供する。更に別の態様において、本発明はがん化学療法用薬剤の製造のための前記のような化合物の使用を提供する。その薬剤は乾癬、リウマチ様関節炎またはヒトパピローマウイルス感染の治療にも有用であろう。別の態様において、本発明は、前記のような化合物の有効量を上記哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物におけるがん治療方法を提供する。一方、前記のような化合物の有効量を必要な哺乳動物に投与することからなる、悪性腫瘍を減少または阻害する方法が提供される。他の態様において、本発明は更に：ａ）前記のような化合物の有効量を哺乳動物に投与することからなる、乾癬、リウマチ様関節炎またはヒトパピローマウイルス感染の治療または予防方法、ｂ）前記のような化合物の有効量を哺乳動物に投与することからなる、５‐ＦＵの毒性を減少させる、および／または効力を増強させる、および／または治療係数を増加させる方法、ｃ）ウラシルレダクターゼ不活化剤が５‐エチニルウラシルまたはそのプロドラッグである前記のような化合物を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物で５‐エチニルウラシルを形成させる方法、およびｄ）前記のような化合物を哺乳動物に投与することからなる、哺乳動物で５‐ フルオロウラシルを形成させる方法を提供する。好ましくは、哺乳動物はヒトである。所要量の化合物が単位剤形で投与される。望ましい用量が適切な間隔で投与される１回、２回またはそれ以上のサブ用量として供されることが好ましい。これらのサブ用量は、例えば１〜２００ｍｇの化合物を含有した単位剤形で投与される。化合物は医薬組成物の形で投与されることが好ましい。このため、別の態様において、本発明は少くとも１種の薬学上許容されるキャリアまたは賦形剤および場合により１種以上の他の治療成分とともに前記のような化合物を含んでなる医薬組成物を提供する。各キャリアまたは賦形剤は、組成物の他成分と適合して患者に有害でないという意味で“薬学上許容”されねばならない。組成物には経口、経直腸、経鼻、局所（経口腔、経皮および舌下を含む）、経膣および非経口（皮下、筋肉内、静脈内および皮内を含む）投与用に適合させたものがある。組成物は好ましくは単位剤形で供され、調剤業界で周知の方法により製造される。このような方法では、一種以上の補助成分からなるキャリアと活性成分とを混合する工程を含んでなる。一般的に、組成物は活性成分を液体キャリアまたは微細固体キャリアあるいは双方と均一かつ完全に混合し、その後必要ならば製品を成形することにより製造される。経口投与に適した本発明の組成物は、各々が既定量の活性成分を含有したカプセル、サチェット（sachet）または錠剤のような個別単位；粉末または顆粒；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液；あるいは水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョンとして供される。活性成分はボーラス、舐剤または軟膏として供してもよい。経口投与が好ましい経路である。錠剤は、場合により一種以上の補助成分とともに、圧縮または成形により作られる。圧縮錠剤は、場合により結合剤（例えば、ポビドン、ゼラチン、ヒドロキシプロピルメチルセルロース）、滑沢剤、不活性希釈剤、保存剤、崩壊剤（例えば、デンプングリコール酸ナトリウム、架橋ポビドン、架橋ナトリウムカルボキシメチルセルロース）、界面活性剤または分散剤と混合して、粉末または顆粒のような易流動形として活性成分を適切な機械で圧縮することにより製造される。成形錠剤は、不活性液体希釈剤で湿潤された粉末化合物の混合物を適切な機械で成形することにより作られる。錠剤は場合によりコートするかまたは刻み目をつけてもよく、例えば望ましい放出プロフィルを与えるために様々な割合でヒドロキシプロピルメチルセルロースを用いて、活性成分の制御された放出が行えるように処方してもよい。カプセルは、場合により一種以上の添加剤と共に適切な充填機で緩くまたは圧縮粉末を充填することにより作られる。適切な添加剤の例には、錠剤の場合で、ポビドン、ゼラチンのような結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤および崩壊剤がある。カプセルは、活性成分のゆっくりしたまたは制御された放出を行うように、ペレットまたは別個のサブユニットを含有させて処方してもよい。これは薬物＋押出助剤（例えば、微結晶セルロース）＋ラクトースのような希釈剤の湿潤混合物を押出して球状化させることにより行える。こうして作られた球体は徐放性質を出すために半透過性膜（例えば、エチルセルロース、Eudragit WE30D）でコートすることができる。口内の局所投与用組成物には、香味化基剤、通常スクロースおよびアラビアゴムまたはトラガカントゴム中に活性成分を含んだロゼンジ；ゼラチン、グリセリンまたはスクロースおよびアラビアゴムのような不活性基剤中に活性成分を含んだ香錠；適切な液体キャリア中に活性成分を含んだ洗口液がある。直腸投与用の組成物は、例えばカカオ脂またはサリチレートを含んだ適切な基剤での坐薬として供される。膣投与用の組成物は、活性成分に加えて、当業界で適切と知られるようなキャリアを含有したペッサリー、タンポン、クリーム、ゲル、パスタ、フォームまたはスプレー処方物として供される。非経口投与用の組成物には、組成物を受容者の血液と等張にする溶質と酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤を含有してもよい水性および非水性等張滅菌注射溶液；懸濁剤および増粘剤を含有してもよい水性および非水性滅菌懸濁液がある。組成物は単位用量またはマルチ用量密封容器、例えばアンプルおよびバイアルで供して、使用直前に滅菌液体キャリア、例えば注射用水の添加のみを要するフリーズドライ（凍結乾燥）条件下で貯蔵してもよい。即席注射溶液および懸濁液も前記された種類の滅菌粉末、顆粒および錠剤から調製してよい。好ましい単位投薬処方物は、活性成分の前記のような１日用量分または単位、１日サブ用量分、あるいはその適切なフラクションを含有したものである。式（Ｉ）の化合物は新規であり、したがってこれら化合物の製造方法は本発明の別な態様を提供する。式（Ｉ）の化合物は、ウラシルレダクターゼ不活化剤またはそのプロドラッグ、あるいはウラシルレダクターゼ不活化剤またはそのプロドラッグの一保護誘導体を化合物Ｌ′‐Ｙ（Ｙは前記のとおりであるかまたはその保護誘導体であり、Ｌ′はウラシルレダクターゼ阻害剤と反応して連結基Ｌを形成することができる基である）と反応させ、その後必要時に脱保護することにより製造される。適切な保護基は当業者により知られ、それにはtert‐ブチルジメチルシリルクロリド、トリメチルシリルアセチレンまたはｐ‐アニシルクロロジフェニルメタン（メトキシトリチル）がある。上記カップリング反応は、カップリング試薬、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）またはジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）の存在下、ピリジンのような極性非プロトン溶媒中で行われる。反応は−５〜１００℃の非極限温度、最も適切には室温で行われる。保護基の除去方法は当業界で知られる方法により行われ、例えばメタノール中でDowex 50W-X8〔Ｈ⁺〕を用いるイオン交換はトリチル基を除くために使用でき（C.Malange,Chem.Ind.(1987)856）、シリル保護基はアセトニトリル中でテトラエチルアンモニウムフルオリドを用いて除かれる(S.Hanessian et al.,Can.J.Chem.(1975)53,2975)。基Ｌ′は、適切な極性非プロトン溶媒、例えば１，３‐ジメチル‐３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２（１Ｈ）‐ピリミジノン（ＤＭＴＨＰ）の存在下で、連結基を形成できる化合物と化合物Ｙとの反応により基Ｙに結合される。反応は− ２５〜１００℃の非極限温度、最も適切には−５℃〜室温で行われる。連結基を形成できる化合物には無水コハク酸、オキシ塩化リンがある。ＸおよびＹが双方ともヌクレオシドプロドラッグである式（Ｉ）の化合物のこのような製造方法は、スキーム１を参考にすることにより更に明確に理解される。ＸおよびＹが対称リンカーで結合された化合物を製造するためには、ＸおよびＹが双方ともヌクレオシドプロドラッグである式（Ｉ）の化合物の製造についてスキーム２で記載されたように、ＸおよびＹの双方が連結基と反応させられて、二種の得られた化合物が式（Ｉ）の化合物を与えるために結合される。式Ｌ′‐Ｙの中間体は新規であり、したがって本発明の別な態様を提供する。例１オキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）の製造（ａ）５′‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン５‐フルオロ‐２′‐デオキシウリジン（Uniled States Biochemical Corpor ation,Cleveland,Ohio 44120）（６．００ｇ、２４．４mmol）およびイミダゾール（Aldrich Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）３．６５ｇ（５．３６mmo l）をフレーム乾燥（flame dried）丸底フラスコ内で無水ＤＭＦ２５ｍｌに溶解した。tert‐ブチルジメチルシリルクロリド(Aldrich)４．０ｇ（２６．８mmol ）をすべて一度に加え、フラスコをシーラムストッパーでキャップし、溶液を３日間にわたり磁気撹拌した。その後、飽和水性炭酸水素ナトリウム１００ｍｌを溶液中に注ぎ、混合液を酢酸エチル２×２００ｍｌで抽出した。酢酸エチル層を水２００ｍｌで洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。得られた残渣をジクロロメタン中シリカゲル（３５０ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（４．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにジクロロメタン中１％メタノール１Ｌで溶出し、ジクロロメタン中１．５％メタノール１Ｌ、その後ジクロロメタン中２％メタノール３Ｌで連続的に溶出し、最後にジクロロメタン中３％メタノール３．５Ｌで溶出させた。生成物画分をプールし、溶媒を蒸発させて、白色粉末として所望生成物６．９ｇ（１９．１mmol）を得た；Ｒｆ０．３４（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ₃）δ８．８５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０４（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ_F,H＝６．４Ｈｚ），６．３８‐６．３５（ｄｄ重複，１Ｈ，Ｈ１′），４．５０‐４．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），４．０８‐４．０６（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．９７ ‐３．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５，Ｊ＝２．４Ｈｚ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ），３．８６‐３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５″，Ｊ＝２．０Ｈｚ，Ｊ＝１１．４Ｈｚ），２．５４‐２．３８（ｍ，１Ｈ，Ｈ２″），２．１８‐２．１１（ｍ，１Ｈ，Ｈ２ ″），０．９３（ｓ，９Ｈ，tert‐ブチル），０．１５（ｓ，６Ｈ，シリルメチル）．（ｂ）５′‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐３′‐Ｏ‐（３‐カルボキシプロピオニル）‐２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン５′‐Ｏ‐（terl‐ブチルジメチルシリル）‐２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン４．０ｇ（１１．０mmol）を、丸底フラスコ中無水ピリジン２５ｍｌにそのヌクレオシドを２回に分けて溶解し、ロータリーエバポレーターでピリジンを蒸発させることにより乾燥させた。ピリジン２０ｍｌに再溶解されたこうして乾燥した保護ヌクレオシドに、一度に４‐ジメチルアミノピリジン０．５４ｇ（４．４mmol）および９０分間かけて３回に分けて無水コハク酸（Aldrich Chemic al Company,Milwaukee,WI 53233）０．８４ｇ（８．４mmol）を加えた。２．５時間撹拌後、更に等量の４‐ジメチルアミノピリジンを加えた。フラスコをシーラムストッパーで密封し、混合液を一夜撹拌した。この後、ピリジンをトルエン４×５０ｍｌとの共蒸発によりロータリーエバポレーターで除去し、黄褐色泡状物を得た。泡状物をジクロロメタン１００ｍｌに溶解し、冷水性１０％クエン酸３×１００ｍｌ、その後水１００ｍｌで抽出した。ジクロロメタン層を硫酸マグネシウムで乾燥し、ロ過し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、黄褐色泡状物３．９ｇを得た。この泡状物を最少量のジクロロメタンに溶解し、ジクロロメタン中シリカゲル（３５０ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（４．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにクロロホルム１Ｌで溶出し、その後クロロホルム中１％メタノール１Ｌで溶出させた。メタノールのパーセンテージは各連続リットル毎に１％増加させた。生成物はクロロホルム中２〜１０％メタノールの画分中に溶出した。生成物画分をプールし、溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、白色固体物２．０ｇ（４．３mmol）を得た：m.p.１３３．４‐１３５．３℃ （ｃ）５′‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐２′‐デオキシ‐５‐ヨードウリジン５‐ヨード‐２′‐デオキシウリジン（United States Biochemical Corporat ion,Cleveland,Ohio 44120）（１０．０ｇ、２８．２mmol）およびイミダゾール（Aldrich Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）４．２３ｇ（６２．１mmol ）をフレーム乾燥丸底フラスコ中の無水ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）５０ｍｌに溶解した。tert‐ブチルジメチルシリルクロリド(Aldrich)４．７ｇ（３１．０mmol）をすべて一度に加え、フラスコをシーラムストッパーでキャップし、溶液を１１日間にわたり磁気撹拌した。この後、反応混合液を水性飽和炭酸水素ナトリウム３００ｍｌ中に注ぎ、酢酸エチル４×１５０ｍｌで抽出した。酢酸エチル抽出液をプールし、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロ過し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣をジクロロメタン中シリカゲル（３５０、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（４．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにジクロロメタン２Ｌで溶出し、その後ジクロロメタン中１％メタノール２Ｌ、ジクロロメタン中２％メタノール２Ｌ、最後にジクロロメタン中３％メタノール１Ｌで段階溶出させた。純粋な生成物画分をプールし、溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、白色粉末８．８ｇ（１８．８mmol）を得た；Ｒｆ０．３０（９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．３０‐８．２０（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．１０（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．３２‐６．２７（ｄｄ重複，１Ｈ，Ｈ１′），４．４９‐４．４６（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），４．１０‐４．０７（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．９４‐３．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５″，Ｊ_5″,5′ ＝１１．５Ｈｚ，Ｊ_5″,4′＝２．６Ｈｚ），３．８５ ‐３．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５′，Ｊ_5′,5″＝１１．５Ｈｚ，Ｊ_5′,4′＝２．３Ｈｚ），２．４５‐２．４２（ｍ，１Ｈ，Ｈ２″），２．４１‐２．３８（ｍ，１Ｈ，Ｈ２′），０．９６（ｓ，９Ｈ，tert‐ブチル），０．９３（ｓ，３Ｈ，シリルメチル），０．９２（ｓ，３Ｈ，シリルメチル）．（ｄ）１‐（５‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐２‐デオキシ‐β‐Ｄ ‐エリトロペントフラノシル‐５‐（２‐（トリメチルシリル）エチニル）ウラシル）窒素雰囲気下でジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）５０ｍｌ中５′‐Ｏ‐（tert ‐ブチルジメチルシリル）‐２′‐デオキシ‐５‐ヨードウリジン５．０ｇ（１０．７mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）０．６２ｇ（３．３mmol）およびトリエチルアミン３．３ｇ（４．６ｍｌ、３２．８mmol）の溶液にトリメチルシリルアセチレン４．８ｇ（７．０ｍｌ、４９．３mmol）およびテトラキス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）(Aldrich Chem1cal Company,Milwaukee,WI 53233)１．９ｇ（１．６mmol）を加えた。暗色混合液を室温で一夜磁気撹拌した。ＤＭＦを真空下ロータリーエバポレーターで除去し、暗色油状残渣をクロロホルム１００ｍｌに溶解し、水性５％エチレンジアミン四酢酸ニナトリウム塩２×１５０ｍｌ、その後水１×１５０ｍｌで抽出した。クロロホルム層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロ過し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。残渣を最少量のクロロホルムに溶解し、クロロホルム中シリカゲル（３５０ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（４．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムをクロロホルム２Ｌ、その後クロロホルム中１％メタノール３．５Ｌで溶出させて、所望生成物を溶出させた。ロータリーエバポレーターで溶媒の除去後、生成物２．７ｇ（６．２mmol）を黄褐色固体物として得た：Ｒｆ０．５１（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ₃）δ８．１５‐８．１０（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９７（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．３４‐６．２９（ｄｄ重複，１Ｈ，Ｈ１′），４．５１‐４．４８（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），４．１０‐４．０８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．９５‐３．９０（ｄｄ，１Ｈ，Ｈ５″，Ｊ_5″,5′＝１１．４Ｈｚ，Ｊ_5″,4′＝２．６Ｈｚ），３．８５‐３．８０（ｄｄ１Ｈ，Ｈ５′，Ｊ_5′,5″＝１１．４Ｈｚ，Ｊ_5′,4′＝２．１Ｈｚ），２．４１‐２．３７（ｍ，１Ｈ，Ｈ２″），２．１６‐２．１１（ｍ，１Ｈ，Ｈ２″），１．８６（ｓ，９Ｈ，Ｃ（ＣＨ₃）₃），０．２０（ｓ，９Ｈ，アセチレンＳｉ（ＣＨ₃）₃ ），０．１５（ｓ，３Ｈ，シリルメチル），０．１３（ｓ，３Ｈ，シリルメチル）．（ｅ）５‐フルオロ‐５″‐（２‐（トリメチルシリル）エチニル）‐３′，メチルシリル）‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）既にフレーム乾燥された丸底フラスコ中で、無水ピリジン５ｍｌに１‐（５‐ Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル‐５‐（２‐（トリメチルシリル）エチニル）ウラシル）０．５１ｇ（１．１mmol）および５′‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐３′‐Ｏ‐ （３′‐カルボキシプロピオニル）‐２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン０．４９ｇ（１．１mmol）を溶解させた。この溶液にジシクロヘキシルカルボジイミド（Aldrich Chemlcal Company,Milwaukee,WI 53233）０．４６ｇ（２．２mmo l）を加え、溶液を一夜磁気撹拌した。翌日、ピリジンをロータリーエバポレーターで除去し、橙褐色シロップを氷冷酢酸エチルに再懸濁した。ジシクロヘキシル尿素を真空ロ過により除去し、酢酸エチルをロータリーエバポレーターで連続的に除去した。残渣を最少量のジクロロメタンに再溶解し、ジクロロメタン中シリカゲル（３５０ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（４．５× ３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを不純生成物の溶出のためにジクロロメタン２Ｌ、その後ジクロロメタン中１．５％メタノール４Ｌで溶出させた。生成物を中空気圧下でヘキサン中に充填されたシリカ１００ｇで再クロマトグラフィーに付し、ヘキサン中５〜５０％酢酸エチルの増加段階勾配により溶出させた。ロータリーエバポレーターで溶媒の除去後に、生成物０．６０ｇ（０．６８mmol）を白色粉末として得た;Ｒｆ０．５４（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）;m.p.１３９．８℃。再固化させると２０８‐２１０℃で溶融する。（ｆ）５‐エチニル‐５″‐フルオロ‐３′，３″‐Ｏ‐サクシニルビス（１‐ （２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）サクシニルビス（１‐（２‐デオキシ‐５‐Ｏ‐（tert‐ブチルジメチルシリル）‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）０．９０ｇ（１．０mmol）をアセトニトリル２５ｍｌ中水和テトラエチルアンモニウムフルオリド（Aldric h Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）３．３当量で処理し、環境温度で一夜磁気撹拌した。翌日、更に１当量のフルオリド試薬を加え、溶液を更に数時間撹拌させた。次いで溶液をジクロロメタン中で充填されたシリカゲル１００ｇ（２３０〜４００メッシュ）カラム（２．５×３０ｃｍ）に直接適用した。カラムをジクロロメタン５００ｍｌ、その後ジクロロメタン中１〜５％メタノールの段階勾配で溶出させた。一夜後、５％メタノール画分から沈殿して、ロ過および乾燥後に分析上純粋な生成物１５６ｍｇを得た。合わせた母液を一緒にして蒸発させ、乾燥後に更に２７０ｍｇの生成物を得て、全部で０．４２６ｇ（０．７３mm ol）となった：m.p.２２９．５‐２３０．６℃。¹ＨＮＭＲ（ＤＭＳＯ‐ｄ₆） δ１１．９‐１１．６（ｂｓ，２Ｈ，Ｎ３Ｈ＆Ｎ３″Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｈ６″，Ｊ_F,H＝７．１Ｈｚ），６．１４．１４（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ），４．０４４．０１（ｍ，２Ｈ，Ｈ４′ 例２５‐エチニル‐５″‐フルオロ‐３′，３″‐Ｏ‐サクシニルビス（１‐（２‐ デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）の製造（ａ）２′‐デオキシ‐５‐フルオロ‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン５‐フルオロ‐２′‐デオキシウリジン（United States Biochemical Corpor ation,Cleveland,Ohio 44120）（１．０ｇ、４．１mmol）を丸底フラスコ内で無水ピリジン３０ｍｌに２回に分けて懸濁し、ピリジンを５０℃およびオイルポンプ真空下でロータリーエバポレーターで除去した。こうして乾燥されたデオキシリボヌクレオシドをピリジン４１ｍｌに再溶解し、氷水浴で約５℃に冷却した。溶液を磁気撹拌した。溶液に４‐ジメチルアミノピリジン０．０６当量（３０ｍｇ、０．２４mmol）およびトリエチルアミン１．４当量（０．８ｍｌ、５．７mm ol）をすべて一度に加えた。これにｐ‐アニシルクロロジフェニルメタン（Aldr ich Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）１．２当量（１．５ｇ、４．９mmo l）を４５分間毎に１／４ずつ加えた。ｐ‐アニシルクロロジフェニルメタンの最終添加後、氷浴を環境温度まで徐々に加温させた。反応液をシーラムストッパーで密封し、一夜磁気撹拌した。この後、更に３５０ｍｇのｐ‐アニシルクロロジフェニルメタンを加え、反応液を更に８時間撹拌した。次いで反応液を分液漏斗で水１００ｍｌ中に注ぎ、ジエチルエーテル４×１００ｍｌで抽出した。ジエチルエーテルをロータリーエバポレーターで除去した。粗製物質２．４gを最少量のジクロロメタンに溶解し、ジクロロメタン中シリカゲル（１００ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（２．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにジクロロメタン２Ｌ、その後ジクロロメタン中３％メタノール１Ｌで溶出して、生成物を溶出させた。溶媒の蒸発後、生成物を白色泡状物として得た（１．８ｇ、３．２mmol）：Ｒｆ０．４２（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１１．８７（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．８８（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ_F,H＝６．８５Ｈｚ），７．４２‐７．２３（ｍ，１０Ｈ，ＡｒＨ），６．９０（ｄ，２Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．８９Ｈｚ），６．１４‐６．１２（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｈ１′），５．３４（ｄ，１Ｈ，３′ＯＨ，Ｊ＝４．５７Ｈｚ），４．２７（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），３．８８（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．７５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ₃），３．３４‐３．２５（ｍ，１Ｈ，Ｈ５′），３．１６‐３．１２（ｍ，１Ｈ，Ｈ５″），２．２６‐２．１６（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″＆Ｈ２′ ）．（ｂ）２′‐デオキシ‐５‐ヨード‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン５‐ヨード‐２′‐デオキシウリジン（United States Biochemical Corpora tion,Cleveland,Ohio 44120）（１．０ｇ、２．８mmol）を丸底フラスコ内で無水ピリジン３０ｍｌに２回に分けて懸濁し、ピリジンを５０℃およびオイルポンプ真空下でロータリーエバポレーターで除去した。こうして乾燥されたデオキシヌクレオシドをピリジン２８ｍｌに再溶解し、氷水浴で約５℃に冷却した。溶液を磁気撹拌した。溶液に４‐ジメチルアミノピリジン０．０６当量（２０ｍｇ、０．１６mmol）およびトリエチルアミン１．４当量（０．５５ｍｌ、４．０mmol ）をすべて一度に加え、その後ｐ‐アニシルクロロジフェニルメタン（Aldrich Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）１．２当量（１．０ｇ、３．４mmol）を４５分間毎に１／４ずつ加えた。ｐ‐アニシルクロロジフェニルメタンの最終部分の添加後、氷浴を環境温度まで徐々に加温させた。反応液をシーラムストッパーで密封し、一夜磁気撹拌した。この後、更に２５０ｍｇのｐ‐ アニシルクロロジフェニルメタンを加え、反応液を更に８時間撹拌した。次いで反応液を分液漏斗で水１００ｍｌ中に注ぎ、ジエチルエーテル４×１００ｍｌで抽出した。ジエチルエーテル抽出液を冷却し、溶媒をロータリーエバポレーターで除去した。粗製物質２．４ｇを最少量のジクロロメタンに溶解し、シリカゲル（ジクロロメタン中１００ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（２．５×３０ｃｍ）に適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにジクロロメタン１Ｌ、その後ジクロロメタン中１％メタノール１Ｌ、最後にジクロロメタン中５％メタノール１Ｌで溶出して、生成物を溶出させた。溶媒の蒸発後、生成物を灰白色泡状物として得た（１．３ｇ、１．９mmol）：Ｒｆ０．４８（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１１．７５（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．０２（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），７．４３‐７．２３（ｍ，１０Ｈ，ＡｒＨ），６．９１（ｄ，２Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．８９Ｈｚ），６．１３‐６．Ｏ８（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｈ１′），５．３２（ｄ，１Ｈ，３′ＯＨ，Ｊ＝４．５７Ｈｚ），４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），３．９１（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．７５（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ₃），３．３４‐３．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ５′＆Ｈ５″），２．２６‐２．１７（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″＆Ｈ２）．（ｃ）２′‐デオキシ‐５‐エチニル‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン２′‐デオキシ‐５‐ヨード‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン（１．２ｇ、１．８mmol）を無水Ｎ，Ｎ‐ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）６ｍｌに溶解し、溶液を３０分間にわたり窒素で激しく脱酸素化した。磁気撹拌溶液にビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）クロリド１４２ｍｇ（０．２０mmol）、ヨウ化銅（Ｉ）７６ｍｇ（０．４０mmol）、トリメチルシリルアセチレン０．５３ｍｌ（５．４０mmol）およびトリエチルアミン（Aldrich Chemical Company,Milwaukee,WI 53233）０．５６ｍｌ（４．０mmol）を加えた。翌日、同一量のビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）クロリド、ヨウ化銅（Ｉ）、トリメチルシリルアセチレンおよびトリエチルアミンを加えた。反応液を更に５時間撹拌してから、分液漏斗で酢酸エチル１００ｍｌ中に注いだ。酢酸エチル溶液を水性５％エチレンジアミン四酢酸ニナトリウム塩３×３０ｍｌで抽出し、水１×３０ｍｌで洗浄した。酢酸エチルをロータリーエバポレーターで除去して、黒色泡状物を得た。この泡状物をアセトニトリル５ｍｌに溶解し、水和テトラエチルアンモニウムフルオリド（Aldrich Chemical Company,Mil waukee,WI 53233 ）２２２ｍｇ（１．５mmol）を加え、溶液を１時間磁気撹拌した。この後、反応混合液をクロロホルム中シリカゲル（１００ｇ、２３０〜４００メッシュ）で充填されたカラム（２．５×３０ｃｍ）に直接適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムを初めにクロロホルム１Ｌ、その後クロロホルム中１％メタノール１Ｌ、最後にクロロホルム中２．５％メタノール１Ｌで溶出して、生成物を溶出させた。適切な生成物画分を合わせ、溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、淡褐色泡状物７６９ｍｇ（１．５mmol）を得た：Ｒｆ０．２３（シリカ、９５：５クロロホルム：メタノール）；ＩＲ（１％ＫＢｒ）アセチレン炭素-炭素伸縮２１１０ｃｍ^-1；ＭＳ（ＥＩ，Ｃｌ）５２４（Ｍ）．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１１．６９（ｓ，１Ｈ，ＮＨ），７．９４（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），７．４１‐７．２１（ｍ，１０Ｈ，ＡｒＨ），６．９０（ｄ，２Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．９Ｈｚ），６．１１‐６．０７（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｈ１′），５．３０（ｄ，１Ｈ，３′ＯＨ，Ｊ＝４．６Ｈｚ），４．２４（ｍ，１Ｈ，Ｈ４′），３．７４（ｓ，３Ｈ，ＯＣＨ₃），３．４１‐３．１１（ｍ，重複水ピーク，Ｈ５′＆Ｈ５″），２．２７‐２．１８（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″＆Ｈ２′）．（２‐デオキシ‐５‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）磁気撹拌棒を備えた５０ｍｌフレーム乾燥丸底フラスコに２′‐デオキシ‐５ ‐フルオロ‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン７２６ｍｇ（１．３ mmol）、４‐ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）３２ｍｇ（０．２６mmol）および無水コハク酸１４３ｍｇ（１．４mmol）を加えた。混合液をセプタム下で密封されたピリジン６ｍｌに溶解し、一夜磁気撹拌した。翌日、更にＤＭＡＰ３０ｍｇおよび無水コハク酸３０ｍｇを加え、反応液を更に２４時間撹拌した。３日目に２′‐デオキシ‐５‐エチニル‐５′‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）ウリジン１．０５ｇ（５．１mmol）を加え、混合液を一夜撹拌した。翌日、ジシクロヘキシル尿素を焼結ガラス漏斗で吸引ロ過により除去し、酢酸エチルで洗浄した。ロ液を酢酸エチルと水に分配した。酢酸エチル層を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ロ過し、ロータリーエバポレーターで蒸発させた。標題化合物を連続中空気圧(９〜１２psi)シリカゲル（１００ｇ、２３０〜４００メッシュ）カラム（２．５×３０ｃｍ）クロマトグラフィーによりジクロロメタン、次いでクロロホルム中１％、その後３％メタノールで溶出させることにより得た。溶媒の蒸発後、生成物を白色泡状物として得た（０．２７ｇ、０．２２mmol）；Ｒｆ０．３５（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１２．００‐１１．６８（２ｂｓ２Ｈ，Ｎ３Ｈ＆Ｎ３″Ｈ），７．９７（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），７．８９（ｄ，１Ｈ，Ｈ″６，Ｊ_F,H＝６．８Ｈｚ），７．４０‐７．２０（ｍ，１０Ｈ，ＡｒＨ），６．８８（ｄ，２Ｈ，ＡｒＨ，Ｊ＝８．８Ｈｚ），６．１８‐６．１０（ｍ，（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル） ‐デオキシ‐５‐Ｏ‐（４‐メトキシトリチル）‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）０．１３０ｇ（０．１１mmol）を丸底フラスコ内で無水メタノール１０ｍｌに溶解した。メタノール洗浄Dowex-50WX8(Ｈ⁺形、２０〜５０メッシュ、J.T.Baker)４００ｍｇを加え、混合液を５５℃で４時間加温した。溶液をロ過して樹脂を除去し、ビーズをメタノールで洗浄した。ロ液をロータリー蒸発して乾固させた。灰白色固体物をジクロロメタンに懸濁し、吸引ロ取し、ジクロロメタン、その後水で洗浄し、５０℃で一夜真空オーブンで乾燥した。灰白色固体物０．０３５ｇ（０．０５９mmol）を得た。¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１２．０（ｂｓ，２Ｈ，Ｎ３Ｈ＆Ｎ３″Ｈ），８．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｈ″６，Ｊ_F,H＝７．１Ｈｚ），，４．１４（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ），４．０４‐４．０１（ｍ，２Ｈ，２．６５（ｓ，４Ｈ，サクシネート），２．３３‐２．２６（ｍ，４Ｈ，Ｈ２′ 例３５′‐クロロ‐２′，５′‐ジデオキシ‐５‐ジデオキシ‐５‐フルオロウリジ製造（ａ）２′‐デオキシ‐５‐（２‐（トリメチルシリル）エチニル）ウリジン標題化合物はMorris J.Robbins and Philip J.Barr,J.Org.Chem.,1983,48,185 4-1862の操作に従い製造した。５‐ヨード‐２′‐デオキシウリジン（U.S.Biochemical Corp.,Cleveland,Oh lo）（２．７mmol）、ジメチルホルムアミド（８ｍｌ）およびトリエチルアミン（０．６ｍｌ）の混合液をフレーム乾燥１００ｍｌ丸底フラスコ内で磁気撹拌しながら１０分間かけて急速なＮ₂流で脱酸素化した。この脱酸素化溶液にヨウ化銅（Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WI）（１．０mmol）、ビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（II）クロリド(Aldrich)（０．５mmol）および（トリメチルシリル）アセチレン(Aldrich)（５．４mmol）を加えた。混合液を室温で一夜磁気撹拌したところ、ＴＬＣ（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）で明らかなように出発ヌクレオシドはなかった。ＤＭＦを環境温度で真空ポンプで除去した。粗製物質をクロロホルム中３％メタノールで充填された７０ｇシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）カラム（２．５×３０ｃｍ）にクロロホルムで適用した。中空気圧(９〜１２psi)下で、カラムをクロロホルム中３％メタノール１Ｌ、その後クロロホルム中５％メタノールILで溶出させた。１００ｍｌ画分を集めた。画分１０〜１５が所望生成物を含有していた。生成物画分をプールし、溶媒をロータリーエバポレーターで除去して、吸湿性黄色泡状物として生成物を得た（２．３mmol、収率８５％）：Ｒｆ０．１５（シリカ、９：１クロロホルム：メタノール）。ＩＲ（ＫＢｒ）２１６７ｃｍ^-1、アセチレンＣ≡Ｃ伸縮．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ１１．７‐１１．６（ｂｓ，１Ｈ，Ｎ‐Ｈ），８．２６（ｓ，１Ｈ，Ｈ‐６），６．１１‐６．０７（ｔ，１Ｈ，Ｈ１′，Ｊ＝６．５Ｈｚ），５．２６‐５．２４（ｄ，１Ｈ，３ ′‐ＯＨ，Ｊ＝４．３Ｈｚ），５．１３‐５．０９（ｔ，１Ｈ，５′‐ＯＨ，Ｊ＝５．０Ｈｚ），４．２５‐４．２０（ｍ‐５ライン，１Ｈ，Ｈ３′），３．８０‐３．７６（ｑ，１Ｈ，Ｈ４′），３．６３‐３．５５（ｍ，２Ｈ，Ｈ５″およびＨ５′重複），２．１６‐２．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″およびＨ２′ ），０．２０（ｓ，９Ｈ，Ｓｉ（ＣＨ₃）₃）．（ｂ）２′‐デオキシ‐５‐エチニルウリジン標題化合物はMorris J.Robbins and Philip J.Barr,J.Org.Chem.,1983,48,185 4-1862の操作の修正法に従い製造した。２′‐デオキシ‐５‐（２‐（トリメチルシリル）エチニル）ウリジン（２．４mmol）および水和テトラエチルアンモニウムフルオリド（Aldrich Chemical C o.,Milwaukee,WI）（２．４mmol）の混合液を乾燥アセトニトリル(Aldrich)１０ｍｌ中で１時間磁気撹拌した。溶液をジクロロメタンで充填された１００ｇシリカゲル（２３０〜４００メッシュ）のカラム（２．５×３０ｃｍ）に直接適用した。カラムをジクロロメタン中３％メタノールで溶出させて、溶媒の蒸発後に灰白色固体物として純粋な生成物（１．７mmol、収率７１％）を得た。ＩＲ（ＫＢｒ）２１２０ｃｍ^-1，Ｃ≡Ｃ伸縮．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆ ）δ１１．５８‐１１．６５（ｂｓ，１Ｈ，ＮＨ），８．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．１３‐６．０８（ｔ，１Ｈ，Ｈ１′，Ｊ＝６．５５Ｈｚ），５．２６‐ ５．２４（ｄ，１Ｈ，３′‐ＯＨ，Ｊ＝４．３Ｈｚ），５．１５‐５．１２（ｔ，１Ｈ，５′‐ＯＨ，Ｊ＝４．９０Ｈｚ），４．２６‐４．２１（ｍ‐５ライン，１Ｈ，Ｈ３′），４．１１（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ），３．８２‐３．７９（ｑ，１Ｈ，Ｈ４′），３．６３‐３．５６（ｍ，２Ｈ，Ｈ５″およびＨ５′），２．１５‐２．１２（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″およびＨ２′）．（ｃ）１‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐５‐エチニルウラシル５′‐モノホスフェートおよび１‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐５‐エチニルウラシル３′，５′‐ジホスフェート２′‐デオキシ‐５‐エチニルウリジン（１．７mmol）を２５ｍｌ丸底フラスコ内で乾燥アセトニトリル（Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WI）と数回共蒸発させた。ヌクレオシドを磁気撹拌下で１，３‐ジメチル−３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２（１Ｈ）‐ピリミジノン(Aldrich)５ｍｌに溶解させた。フラスコをシーラムストッパーで密封し、溶液をメタノール氷浴中−１２℃で５分間撹拌した。開封したばかりのアンプルからオキシ塩化リン(Aldrich)３当量（０．４ｍｌ）をヌクレオシド溶液に加えた。５分間の反応時間後、混合液を連続撹拌下水５ｍｌで反応停止させた。３分間後、トリブチルアミン(Aldrich)０．５ｍｌを加えた。生成物混合液を水で希釈し、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで膨潤させたＤＥＡＥ Sephadex ８０ｇに担持させた。カラムを２８０ｎｍでＵＶ検出しながら水性炭酸水素アンモニウムの増加勾配（５０〜５００ｍＭ）で溶出させた。溶出流速をGilson Minipuls 2 蠕動ポンプ(Gilson,Middleton,WI)でコントロールした。第一溶出生成物画分をプールし、４５℃でロータリーエバポレーターで蒸発させた。得られた白色固体物をロータリーエバポレーターで水と何回も共蒸発させ、その後水１５ｍｌに再溶解し、冷凍および凍結乾燥させて、白色モノアンモニウム塩として５′‐モノホスフェート０．３４mmol（収率２０％）を得た。ＨＰＬＣを１０ｍＭ〜１Ｍリン酸アンモニウム、ｐＨ５．５、５％メタノールの直線勾配で３０分間にわたり４．６×１００ｍｍ、５ミクロン、分析強度陰イオン交換カラム（Alltech,Deerfield,IL）で行った。この生成物は３．４分の保持時間（Ｒｔ）を有していた。陰イオンＦＡＢＭＳ（ジチオエリトリトール／ジチオスレイトール）（Ｍ−Ｈ）^-＝３３１．１．³¹ＰＮＭＲ（１２１．４２１ＭＨｚ，¹Ｈデカップリング、８５％リン酸 δ＝０．０，ＤＭＳＯ‐ｄ₆ ）δ０．３２（ｓ，１Ｐ，５′リン酸）．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ７．９７（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．０９‐６．０５（重複ｄｄ，１Ｈ，Ｈ１′），４．２７‐４．２５（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ３′），４．０５（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ），３．８９‐３．８５（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ４′），３．７９‐３．７６（ｍ，２Ｈ，Ｈ５″およびＨ５′），２．１５‐２．０５（Ｈ２″およびＨ２′）．第二生成物が５′‐モノホスフェートの後に溶出した。同一画分を前記のようにプール、蒸発および凍結乾燥させ、出発ヌクレオシドの３′，５′‐ジホスフェート０．６２mmol（収率３７％）を得た。分析ＨＰＬＣ（前記）Ｒｔ＝８．０ min。陰イオンＦＡＢＭＳ（ジチオエリトリトール／ジチオスレイトール）（Ｍ‐Ｈ）^-＝４１１．０．³¹ＰＮＭＲ（１２１．４２１ＭＨｚ，¹Ｈデカップリング、８５％リン酸 δ＝０．０，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ‐０．０１（ｓ，１Ｐ，５′リン酸），−１．０７（ｓ，１Ｐ，３′リン酸）．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ８．００（ｓ，１Ｈ，Ｈ６），６．１０‐６．０５（ｔ，１Ｈ，Ｈ１′，Ｊ＝７．１Ｈｚ），４．７６‐４．７４（ｍ‐広範囲，１Ｈ，Ｈ３′），４．１７‐４．１６（ｓ，１Ｈ，Ｈ４′），４．０６（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ），３．９０‐３．７８（２マルチプル，２Ｈ，Ｈ５″およびＨ５ ′），２．２２‐２．２１（ｍ‐広範囲，２Ｈ，Ｈ２″およびＨ２′）．５′‐モノホスフェートおよび３′，５′‐ジホスフェートをA.L.Chaney and E.P.Marbach,Clin.Chem.,1962,8,130-132のアッセイに従いアンモニアについて調べた。ホスフェートはB.N.Ames,Methods Enzymol.,1966,8,115-118の操作に従いリンについて調べた。（ｄ）ヌクレアーゼＰ１を用いた酵素脱リン酸化による１‐（２‐デオキシ‐β ‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐５‐エチニルウラシル３′，５′‐ジホスフェートからの１‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐ ５‐エチニルウラシル５′‐モノホスフェートの製造水５ｍｌ中１‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐５‐ エチニルウラシル３′，５′‐ジホスフェート（０．５０mmol）にヌクレアーゼＰ１（Penicillium citrinum,Boehringer Mannheim,Indianapolls,IN）１単位／μＬを含有した水性１ＭＺｎＣｌ₂５０μＬおよび３０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ５．０２５０μＬを加えた。混合液を水浴中５０℃で３時間加熱した。生成物を精製し、前記のように特徴付けられた。収率は定量的であった。（ｅ）５′‐クロロ‐２′，５′‐ジデオキシ‐５‐フルオロウリジン３′‐ Ｏ‐ホスフェートおよび２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン３′，５′‐ ジ‐Ｏ‐ホスフェートこれは欧州特許出願第９１０５０２．６号、発明者S.M.Tisdaleら、タイトル抗ウイルス化合物、およびBull.Chem.Soc.Japan(1969),42,350に記載の操作の修正法である。２′‐デオキシ‐５‐フルオロウリジン（４．１mmol）（United States Bioc hemical,Cleveland,OH）を磁気撹拌棒およびキャップ装備バイアル内で１，３‐ ジメチル‐３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２（１Ｈ）‐ピリミジノン(Aldrich )７ｍｌに溶解させた。バイアルを氷‐メタノール浴中で−５℃に冷却した。オキシ塩化リン１．５ｍｌを撹拌溶液に加え、溶液を浴中で７分間撹拌し続けた。次いで反応を水５ｍｌの添加で停止させ、混合液を冷浴中で５分間撹拌した。混合液をトリブチルアミン３０ｍｌ中に注ぎ、水９００ｍｌで希釈し、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで膨潤させたＤＥＡＥ Sephadex ８０ｇに担持させた。カラムを２６７ｎｍでＵＶ検出しながら水性炭酸水素アンモニウムの増加勾配（５０〜５００ｍＭ）で溶出させた。溶出流速をGilson Minipuls 2 蠕動ポンプ(Gilso n,Middleton,WI)でコントロールした。第一溶出生成物画分をプールし、４５℃ でロータリーエバポレーターで蒸発させた。得られた白色固体物をロータリーエバポレーターで水と何回も共蒸発させ、その後水１５ｍｌに再溶解し、冷凍および凍結乾燥させて、モノアンモニウム塩として５′‐クロロ‐２′，５′‐ジデオキシ‐５‐フルオロウリジン３′‐Ｏ‐ホスフェート１．２mmol （収率２９％）を得た。ＨＰＬＣを１０ｍＭ〜１Ｍリン酸アンモニウム、ｐＨ５．５、５％メタノールの直線勾配で３０分間にわたり４．６×１００ｍｍ、５ミクロン、分析強度陰イオン交換カラム（Alltech,Deerfield,IL）で行った。この生成物は３．６分の保持時間（Ｒｔ）を有していた。陽イオンＦＡＢＭＳ（グリセロール）（Ｍ＋１）⁺＝３４５．１．³¹ＰＮＭＲ（１２１．４２１ＭＨｚ，¹Ｈデカップリング、８５％リン酸 δ＝０．０，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ−０．５６（ｓ，１Ｐ，３′リン酸）．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ ７．９６‐７．９４（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．１５‐６．１３（トリプレット‐広域化，１Ｈ，Ｈ１′），４．５６‐４．５４（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ３′），４．１７‐４．１６（ｂｓ，１Ｈ，Ｈ４′），３．９５‐３．９０（重複マルチプレット，２Ｈ，Ｈ５″およびＨ５′），２．３９‐２．１９（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″およびＨ２′）．第二生成物が５′‐モノホスフェートの後に溶出した。同一画分を前記のようにプール、蒸発および凍結乾燥させ、出発ヌクレオシドの３′，５′‐ジホスフェート０．６２mmol（収率３７％）を得た。分析ＨＰＬＣ（前記）Ｒｔ＝８．５ min。陽イオンＦＡＢＭＳ（グリセロール）（Ｍ＋１）⁺＝４０７．４．³¹ＰＮＭＲ（１２１．４２１ＭＨｚ，¹Ｈデカップリング、８５％リン酸 δ＝０．０，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ−０．３６９（ｓ，１Ｐ，５′リン酸），−１．４５（ｓ，１Ｐ，３′リン酸）．¹ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ‐ｄ₆）δ８．１２‐８．１０（ｄ，１Ｈ，Ｈ６，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．１２‐６．１０（ｔ，１Ｈ，Ｈ１′），４．８２‐４．７９（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），２．２３‐２．２０（ｍ，２Ｈ，Ｈ２″およびＨ２′）．ホスフェートはB.N.Ames,Methods Enzymol.,1966,8,115-118の操作に従いリンについて調べた。このホスホイミダゾリデート操作はDonald E.Hoard and Donald G.Ott,J.Am.C hem.Soc.,1965,87,1785-1788による論文におけるモノホスフェートからトリホスフェートの合成に基づいている。１‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）‐５‐エチニルウラシル（０．６１mmol）の５′‐モノホスフェートをロータリーエバポレーターで４０℃で０．５Ｍトリエチルアンモニウムビカーボネート２×５０ｍｌと共蒸発させて黄褐色泡状物を得た。次いでヌクレオチドを同丸底フラスコ内で乾燥アセトニトリル（Aldrich Chemical Co.,Milwaukee,WI）３×７５ｍｌと共蒸発させた。こうして乾燥されたヌクレオチドを磁気撹拌下で１，３‐ジメチル‐３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２（１Ｈ）‐ピリミジノン(Aldrich)５ｍｌに溶解させた。１，１′‐カルボニルジイミダゾール約５当量（4９８ｍｇ）を溶液に加え、混合液をシーラムストッパーで密封されたフラスコで１時間撹拌した。次いでメタノール１５７μＬを加え、溶液を７５分間撹拌して、過剰の１，１′‐ カルボニルジイミダゾールを壊した。５′‐クロロ‐２′，５′‐ジデオキシ‐５‐フルオロウリジン３′‐Ｏ‐ ホスフェート１．２当量を前記ヌクレオシドにように０．５Ｍトリエチルアンモニウムビカーボネート、その後乾燥アセトニトリルと共蒸発させた。次いで５‐ フルオロヌクレオチドを１，３‐ジメチル‐３，４，５，６‐テトラヒドロ‐２ (１Ｈ)‐ピリミジノン４ｍｌに溶解し、５‐エチニルヌクレオチドホスホルイミダゾリデート混合液に加えた。この新たな混合液を一夜撹拌した。翌日、同様に製造された５‐フルオロヌクレオチド０．２５当量をホスホルイミダゾリデート混合液に追加し、得られた溶液を週末にわたり撹拌した。次いでこの縮合混合液を水性水酸化アンモニウム、ｐＨ９．５１５０ｍｌ中に希釈し、アルカリホスファターゼ（Boehringer Mannheim,Indianapolis,IN）５００μＬを加えて非カップリングヌクレオチドを開裂させ、混合液を一夜撹拌した。翌日、アルカリ溶液を水で全容量６００ｍｌに希釈し、５０ｍＭ炭酸水素アンモニウムで膨潤させたＤＥＡＥ Sephadex ８０ｇに担持させた。カラムを２７０ｎｍでＵＶ検出しながら水性炭酸水素アンモニウムの増加勾配（５０〜５００ｍＭ）で溶出させた。溶出流速をGilson Min1puls 2 蠕動ポンプ(Gilson,Middleton,WI)でコントロールした。画分をＨＰＬＣにより１０ｍＭ〜１Ｍリン酸アンモニウム、ｐＨ２．４、５％メタノールの直線勾配で３０分間にわたり４．６×１００ｍｍ、５ミクロン、分析強度陰イオン交換カラム（Alltech,Deerfield,IL）で分析した。純粋な生成物画分をプールし、水をロータリーエバポレーターで除去した。得られた白色固体物をロータリーエバポレーターで水と何回も共蒸発させ、その後水１５ｍｌに再溶解し、冷凍および凍結乾燥させて、標題生成物０．１８mmol（収率３０％）を得た。分析ＨＰＬＣ（前記）Ｒｔ＝５．６２min。陰イオンＦＡＢＭＳ（ジチオエリトリトール／ジチオスレイトール）（Ｍ‐Ｈ）^-＝６５７．０．³ ¹ ＰＮＭＲ（１ＭＨｚ，¹Ｈデカップリング、８５％リン酸 δ＝０．０，Ｄ₂Ｏ）δ（−）１０．１４‐（−）１０．２７（ｄ，１Ｐ，５′リン酸，Ｊ_p,p＝２１．４８Ｈｚ），（−）１０．９４‐（−）１１．０８（ｄ，１Ｐ，３′リン酸，Ｊ＝２１．４８Ｈｚ）（¹Ｈ‐³¹ＰＨＭＱＣＮＭＲパルス配列により作られた³¹Ｐ測定）．¹ＨＮＭＲ（４００ＭＨｚ，Ｄ₂Ｏ）δ８．０５（ｓ，１Ｈ，Ｈ６″），７．８０（ｄ，１Ｈ，Ｈ‐５，Ｊ＝７．０Ｈｚ），６．１７‐６．１（ｍ，１Ｈ，Ｈ３′），４．４２‐４．４０（ｍ−５ライン，Ｈ３″），４．３３（ｍ，２Ｈ，Ｈ５′ａおよびＨ５′ｂ），３．４４（ｓ，１Ｈ，アセチレンＨ）生成物はB.N.Ames,Methods Enzymol.,1966,8,115-118の操作に従いリンについて調べた。例４方法（ａ）動物投与および５‐ＦＵ尿サンプリング５‐ＦＵおよび５‐ＥＵ塩基およびヌクレオシドを投与直前に脱イオンＨＰＬＣグレード水に溶解した。すべての動物に各化合物について指示mg/kg用量で胃管からｐ．ｏ．で一度に投与した（結果セクションおよび図参照）。５‐ＥＵおよび５‐ＥＵヌクレオシドを５‐ＦＵおよび５‐ＦＵヌクレオシド投与の０．５時間前に動物に投与した。投与は１１ａｍ〜１ｐｍにルーチンで行った。容量約３００μＬを各投与に用いた。ラットは糞尿を分離する個別Nalge代謝ケージに入れて、投与後に１２時間明／暗スケジュールを続けた。マウスも、ケージ当たりマウス５匹で飼育すること以外は同様にして、投与後処置した。各ケージからの尿を０〜２４時間および２４〜４８時間投与後フラクションに集めた。ケージを各フラクションの収集前に脱イオン水で洗浄した。尿および洗液の合わせた容量を脱イオン水で標準容量に調整した。（ｂ）逆相ＨＰＬＣ分析による５‐ＦＵの定量十分に混合された尿サンプル５ｍｌをMillex GS 0.22μｍフィルター（Millip ore Bedford,MA）でロ過し、ＨＰＬＣ分析前に凍結させた。解凍一次ロ過溶液１ｍｌを水２ｍｌで希釈し、粒子をCentrifreeマイクロ分配システム（Amicon Div ision,W.R.Grace and Co.,Beverly MA）を用いてこの希釈ストック溶液から除去した。この溶液１００μＬをWaters 600Eシステムコントローラー、Waters 600 溶媒デリバリーシステム、Watersモデル712 WISP自動サンプルインジェクター、 Waters 484整調吸光度検出器およびWaters 991フォトダイオードアレイ検出器を装備したWaters Associates System（Waters Associates,Milford,MA）でＨＰＬＣにより５‐ＦＵについて定量した。ラット尿中の５‐ＦＵ定量の場合、ＨＰＬＣは２５０×４．６ｍｍ YMC AQ-303 S-5 120A ODS分析カラム（YMC,Morris Pla ins,NJ）または同一寸法のMicrosorb C18分析カラム（Rainin Instrument.Co.,W oburn,MA）で行った。各分析では、カラムを初めに水性５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ４．８および０．５％アセトニトリル（緩衝液Ａ）により０．5m l/minで２５分間、その後水性５０ｍＭ酢酸アンモニウム緩衝液、ｐＨ４．８および６０％アセトニトリル（緩衝液Ｂ）との５０％混合液まで１５分間にわたり直線勾配で均等に溶出させた。次の５分間では直線勾配を１００％緩衝液Ｂまでランし、その後緩衝液Ｂで２０分間均等溶出させた。次いで直線勾配を１００％緩衝液Ａまで１０分間にわたりカラムから溶出させ、０．５ｍｌの流速で２分間保った。次いでカラムを０．７５ml/minの流速で１５分間かけて緩衝液Ａで平衡化し、その後次のサンプルの注入前に２分間かけて原流速（０．５ml/min）に戻した。溶出液を２６６ｎｍでモニターしたところ、５‐ＦＵは約１６．５分の保持時間を有していた。データはWaters 991ダイオードアレイ検出器および社内ＨＰＬＣデータ分析プログラム（ＣＨＲＯＭ）装備Digital Specialtiesマイクロコンピューターで集めた。ＵＶピーク面積をこれらのシステムで積分し、緩衝液ＡでMicrosorbカラムから均等に溶出した５‐ＦＵの既知水性濃度から作成された標準曲線の場合と比較した。５‐ＦＵについて用いられたモル吸光係数は２６６ｎｍのλ_maxで７０７０Ｍ^-1ｃｍ^-1であった。ＵＶピーク面積 vs ５‐ＦＵ濃度のプロットは５〜１００μＭで直線的であった。５‐ＦＵの全尿回収量は、標準曲線から求めた５‐ＦＵのnmolに希釈倍率３（前記）および回収された尿の標準容量を掛けて求めた。マウス尿中の５‐ＦＵ回収量も前記のように求めたが、３つの例外がある：Ph enomenex 5μm Extrasil C-18カラム（２５０×４．６ｍｍ i.d.；Phenomenex ,Torrance,CA）を用いた；０．５％アセトニトリル含有の水性５０ｍＭギ酸、ｐＨ３．５として緩衝液Ａおよび６０％アセトニトリル含有の水性５０ｍＭギ酸、ｐＨ３．５として緩衝液Ｂによる同一勾配を用いた；標準曲線は既知濃度の５‐ ＦＵを未投与マウス尿中に希釈し、均等条件の代わりに後の方で記載された勾配および緩衝液で溶出することにより作成した。結果（ａ）ヌクレオシドから５‐ＦＵの放出および定量ラットに表１で示されたように５‐ＦＵヌクレオシドで投与する０．５時間前に５‐ＥＵ（２mg/kg,p.o.）で前投与した。５‐ＦＵヌクレオシドを１０または２５mg/kgで投与した。アラビノシドおよび２′，３′‐ジデオキシリボシドは５‐ＦＵの尿回収を検出および定量するためにもっと高い用量を要した。すべてのヌクレオシド例について、５‐ＦＵは２４〜４８時間尿サンプリングではなく０〜２４時間尿のみで検出された。リボシドおよび２′‐デオキシリボシドは５ ‐ＦＵの最良インビボリリーサーであり、５‐ＦＵの尿回収率＞６５％である。（ｂ）ヌクレオシドから５‐ＥＵの放出によるＤＰＤ異化からの５‐ＦＵの保護図１に示されるように、ラットに５‐ＦＵ２５mg/kgで投与前に５‐ＥＵ０．０３mg/kgと様々な５‐ＥＵヌクレオシド０．０３、０．３および３．０mg/kgで経口前投与した。５‐ＦＵは０〜２４時間尿サンプルのみで観察および定量された。５‐ＦＵ用量の約６５％が５‐ＥＵ処置ラットの尿で未変化のまま回収された。５‐ＥＵのリボシドまたは２′‐デオキシリボシド（≧０．０３mg/kg）でラットに前投与すると、５‐ＦＵの高尿回収率（＞４０％）になった。５‐ＦＵの尿回収に関する直接的用量応答は、５‐ＥＵのアラビノシドまたは２′‐デオキシ‐５′‐モノホスフェートがＤＰＤ不活化剤をデリバリーするために用いられたときに観察された。５‐ＦＵの尿回収率は２′，３′‐ジデオキシ‐５‐エチニルウリジンのすべての前投与で＜５％であった。（ｃ）サクシネート結合ヌクレオシドで投与されたラットにおける５‐ＦＵの尿回収ラットにサクシネート結合ヌクレオシドを２５mg/kg ５‐ＦＵ相当量で投与した。原用量中３５％以上の５‐ＦＵが０〜２４時間尿で未変化のまま回収された。５‐ＦＵは２４〜４８時間尿で検出されなかった。（ｄ）サクシネート結合ヌクレオシドで投与されたマウスにおける５‐ＦＵの尿回収これらの研究では、マウスに５‐ＦＵ５mg/kgを投与するか、またはサクシネート結合ヌクレオシドで相当量の５‐ＦＵを投与した。５‐ＦＵの尿回収率が５ ‐ＥＵの存在および不在下で測定された（表２）。塩基５‐ＦＵをデリバリーする前に５‐ＥＵでマウスに前投与しないと、５‐ＦＵは尿中に検出されなかった。マウスに５‐ＥＵで前投与し、その後５‐ＦＵで投与したとき、５‐ＦＵの尿回収率は５０％であった。サクシネート結合ヌクレオシドで投与されたマウスは、結合化合物から生じうる５‐ＦＵのうち２５〜３０％の尿回収率を示した。５ ‐ＥＵで前投与し、その後サクシネート結合ヌクレオシドで投与したマウスから５‐ＦＵ尿回収率の改善はなかった。例５抗腫瘍実験方法ネズミColon ３８によるインビボ抗腫瘍試験を社内で行った。Ｃ５７ＢＬ／６雌性マウスを滅菌硬木寝床の入った滅菌ポリカーボネートフィルターキャップMi croisolatorケージ（Lab Products,Inc.,Maywood,NJ）で飼育した。マウスに滅菌げっ歯動物食とフィルター滅菌水を自由に与えた。これらマウスのすべての取扱いは層流バイオセーフティフード内で行った。Colon ３８がん腫をDevelopmen t Therapeutics Program Tumour Repositoryから得た。マウスにナンバー１３トロカールを用いて腫瘍フラグメント７０ｇをs.c.で移植した。薬物処置なしに腫瘍移植をうけたコントロール群はマウス１０匹であった。下記のような用量および化合物で処置された各群はマウス５匹であった。処置は腫瘍移植後１６日目に開始し、化合物は９日間にわたり１日１回投与した。５‐ＦＵは１５、２０、２５、３０および４０mg/kgで投与した。サクシネート結合ヌクレオシドは４．５、８．９、１７．９、２６．８、３５．７および４４．６mg/kgで投与した。サクシネート結合ヌクレオシドの分子量は５８０．４０であり、この化合物で投与される５‐ＦＵの対応相当量は１．０、２．０、４．０、６．０、９．０および１０．０mg/kgであった。５‐ＦＵおよびサクシネート結合ヌクレオシド用量のサンプルは表３で示されている。腫瘍重量は腫瘍長さおよび幅の測定から１週間に３回計算した。抗腫瘍活性は腫瘍増殖の遅れ日数（Ｔ‐Ｃ）として表示した。Ｔ‐Ｃは、投与初日（１６日目）後腫瘍質量が二倍になる処置動物− コントロール動物での日数の中央値の差異として計算した。無腫瘍生存体はＴ‐ Ｃ計算から除外しなかった。生存マウスは５６日目以後に屠殺した。結果デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシルの抗腫瘍効力サクシネート結合ヌクレオシドの効果は、５‐ＦＵ単独での療法に対してColo n ３８のs.c.移植マウスで実験した。抗腫瘍活性は腫瘍増殖遅延（Ｔ‐Ｃ；方法の箇所参照）として表示した。サクシネート結合ヌクレオシドは用量＞１７．９ mg/kg（4mg/kg ５‐ＦＵおよび５‐ＥＵ相当量）で毒性であった。表３は５‐ＦＵおよびサクシネート結合ヌクレオシドに関する準最良、有効および毒性用量を示している。

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式で表わされる化合物：Ｘ‐Ｌ‐Ｙ（Ｉ）（上記式中、Ｘはウラシルレダクターゼ不活化剤又はそのプロドラッグを表し、Ｙは５‐フルオロウラシル又はそのプロドラッグを表し、ＬはＸおよびＹ双方に共有結合された連結基である）。２．Ｘが５‐置換または５，６‐ジヒドロ‐５‐置換ウラシル誘導体であり、５‐換基がブロモ、ヨード、シアノ、ハロ置換Ｃ_1-4アルキル、Ｃ_2-6アルケニル、ハロ置換Ｃ_2-6アルケニル基、Ｃ_2-6アルキニル基、またはハロ置換Ｃ_2-6アルキニル基である、請求項１に記載の化合物。３．Ｘが５‐エチニルウラシル、５‐プロピニルウラシル、５‐シアノウラシル、５‐ブロモエチニルウラシル、５‐（１‐クロロビニル）ウラシル、５‐ヨードウラシル、５‐ヘキス‐１‐イニルウラシル、５‐ビニルウラシル、５‐トリフルオロメチルウラシル、および５‐ブロモウラシルから選択される、請求項１または２に記載の化合物。４．Ｘが５‐エチニルウラシルまたは５‐プロピニルウラシルである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。 ‐（２‐デオキシ‐β‐Ｄ‐エリトロペントフラノシル）ウラシル）、５‐エチニルウリジン‐５‐フルオロ‐１‐（β‐Ｄ‐アラビノフラノシル）ウラシルコハク酸５′，２′‐ジエステル、（１‐β‐Ｄ‐アラビノフラノシルウラシル）、およびである、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。６．下記式（II）または（III）で表される化合物：Ｘ‐（Ｌ‐Ｙ）_n （II）およびＸ‐Ｌ‐（Ｙ）_n （III）（上記式中、Ｘ、ＬおよびＹは請求項１に記載されたとおりであり、ｎは少くとも２である）。７．医薬として用いられる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（III）の化合物。８．がん化学療法用薬剤の製造のための、請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（III）の化合物の使用。９．請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（III）の化合物の有効量を哺乳動物に投与することを含んでなる、哺乳動物のがんの治療方法。１０．請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（III ）の化合物の有効量を必要とする哺乳動物に投与することからなる、悪性腫瘍を減少または阻害する方法。１１．請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（I）、（II）または（III）の化合物を、少くとも一種の薬学上許容されるキャリアまたは賦形剤および場合により一種以上の他の治療成分とともに含んでなる、医薬組成物。１２．経口投与用である、請求項１１に記載の医薬組成物。１３．請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（III ）の化合物の有効量を、必要とする哺乳動物に投与することからなる、５‐フルオロウラシルの経口投与方法。１４．ウラシルレダクターゼ不活化剤またはそのプロドラッグ、もしくはウラシルレダクターゼ不活化剤またはそのプロドラッグの一保護誘導体を、化合物Ｌ′‐Ｙ（ここで、Ｙは請求項１または６に記載されたとおりであるかまたはその保護誘導体であり、Ｌ′はウラシルレダクターゼ阻害剤と反応して連結基Ｌを形成することができる基である）と反応させ、その後必要に応じて脱保護することからなる、請求項１〜６のいずれか一項に記載の式（Ｉ）、（II）または（II I）の化合物の製造方法。１５．Ｌ′およびＹが請求項１４に記載されたとおりである、式Ｌ′‐Ｙの中間体。