JPH09509961A

JPH09509961A - 細胞接着抑制剤およびｈｉｖ抑制剤としてのベンゾチオフェン、ベンゾフランおよびインドールチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノン

Info

Publication number: JPH09509961A
Application number: JP7523448A
Authority: JP
Inventors: ブーシエリ，デイアン・ハリス; コナー，デイビツド・トマス; クラーマー，ジエイムズ・バーナード; ウナングスト，ポール・チヤールズ
Original assignee: ワーナー−ランバート・コンパニー
Priority date: 1994-03-07
Filing date: 1995-01-30
Publication date: 1997-10-07
Also published as: EP0749434A1; CZ292009B6; BG62698B1; DK0749434T3; SK114196A3; TJ252B; ZA951844B; DE69513961T2; MD1688G2; DE69513961D1; SK282962B6; HU9602451D0; CA2181354A1; GR3032861T3; PL180457B1; GEP19991835B; KR100325881B1; KR100338017B1; FI963462A7; HUT77403A

Abstract

(57)【要約】式(Ｉ)のベンゾチオフェン、ベンゾフランおよびインドールチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノンを血管内皮への白血球の接着を抑制することから炎症性疾患の治療のための有効な治療薬である薬剤として記載し、その調製方法も記載する。これらの化合物はヒト免疫不全ウイルス(HIV)の活性化も抑制する。

Description

【発明の詳細な説明】細胞接着抑制剤およびHIV抑制剤としてのベンゾチオフェン、ベンゾフランおよびインドールチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノン〔発明の背景〕本発明は内皮細胞への白血球の接着（adhesion）を防止するために用いる新しいベンゾチオフェン、ベンゾフランおよびインドールチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノンおよび薬学的に許容されるその塩に関する。血管内皮への白血球の接着は炎症の発生に関連している。接着過程に引き続き周囲の組織への白血球の経内皮移行およびその後の組織損傷が起こる。この初期の接着相互作用をブロックする化合物は関節リュウマチ、骨関節炎、喘息および乾癬のような炎症性疾患の治療に有効であると期待される。その他の適応症の例として、成人の呼吸窮迫症候群、再灌流性障害、虚血、潰瘍性大腸炎、脈管炎、アテローム性動脈硬化症、炎症性腸疾患および腫瘍転移が含まれるが、これに限定されない。接着受容体は３種類の主な物質族、即ち、セレクチン、免疫グロブリンスーパーファミリーおよびインテグリンに分類される（Nature，346：426(1990)）。これらの３種類の構成員は、炎症の間の白血球の接着の媒介に関与している（この分野の参考文献として、Thrombosis and Hemostasis（血栓と止血）65(3)；223( 1991)、Clinical and Experimental Allergy（臨床実験アレルギー）、20：619( 1990)、Transplantation（移植）、48：727（1989）、Bioche-mical Pharm.，40 (8)：1683（1990）を参照）。内皮細胞白血球接着分子−１（ELAM−１またはＥ−セレクチン）は細胞一細胞接着を促進する糖蛋白のセレクチン族の１員である。Ｅ−セレクチンは、サイトカイン類、例えばインターロイキン−１（IL−１）または腫瘍壊死因子α（TNF−α）またはその他の炎症媒介物質、例えばリポ多糖類(LPS)による内皮細胞の刺激の４時間後に内皮細胞表面で最大に発現されると報告されている（Pro．Nat．Acad．Sci.，84： 9238(1987)）。細胞間接着分子−１（ICAM−１）は免疫グロブリンスーパーファミリーの１員である。これもやはり、刺激の12〜24時間後に起こる最大発現により上方調節（ upregulate）される。内皮細胞が炎症媒介物質で刺激されてから４時間後にＥ− セレクチンおよびICAM−１は共に細胞表面に存在することが解っている（J．Cli n．Invest.，82：1746(1988)およびJ．Immun.，137：1893(1986)，Blood，78：2 721(1991)）。本発明のベンゾチオフェン、ベンゾフランおよびインドールチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノンはインビトロ検定においてTNFαにより刺激されたヒト臍静脈内皮細肪（HUVECS）への好中球の接着を抑制することが解っている。本発明はまた、感染したヒト中に潜伏するヒト免疫不全ウイルス（HIV）の活性化を抑制することによりHIVに感染したヒトを治療するための新しいチアゼピノン、オキサゼピノンおよびジアゼピノンに関する。ヒト免疫不全ウイルス（HIV）発症過程は複雑であり、まだ完全に解明されていない。ウイルスのライフサイクルは理論的には求心性（afferent）および遠心性（efferent）の要素に分けられている。ウイルスの結合、融合、逆転写、および最終的には組み込みが、ライフサイクルの求心的要素を包含する事象に含まれる。個体におけるHIV一次感染に関与するものはHIVライフサイクルの求心的要素であり、一般的には、その後に臨床症状を伴って、あるいは伴うことなくウイルス血症の爆発的発症が起こる。多くの治療方法が開発され、求心的事象の間の介入手段として検討されている。例えば、Mitsuya H，Broder S，の“Inhibition of the In Vitro Infectivit y and Cytopathic Effect on Human T-lymphotropic Virus Type III／lymphade nopathy Virus-associated Virus（HTLV−III／LAV）by 2′,3′−Dideoxynucle osides(2′,3′−ジデオキシヌクレオシドによるヒトＴリンパ球栄養性III型ウイルス／リンパ腺病ウイルス関連ウイルス（HTLV−III／LAV）に対するインビトロ感染性の抑制および細胞毒性作用)”、Proc．Natl．Acad．Sci．(USA)，83：1 911-1915（1986）に記載されている。求心性要素の種々の段階は有効な治療介入のための可能性をもたらすが、これらの時点における介入のみでは不十分であることが明らかになってきている。HI Vに感染し、求心的段階を経て疾患が進行した後、個体は数年間に渡る場合も有る長期間の臨床潜伏期間を経験し、個体は良好な健康状態で有り続ける。この時点では末梢血液細胞中ではウイルス血症およびウイルス複製は低いか全く無い程度である。しかしながら、もっと後の時点においては、疾患は最終的に進行して治療不可能な致命的な免疫抑制（AIDS）になる。このような後期の事象はHIV感染の遠心的段階の臨床症状である。 HIVライフサイクルの遠心的要素にはHIVプロウイルスが正しく転写し、翻訳し、組み立てそしてヴィリオンを作成するために必要な事象が包含される。HIV感染細胞が非兆候的な非HIV発現段階から兆候的なHIV発現段階に進行するために必要な事象の発症を活性化と呼んでいる。現時点では、活性化のための遠心的要素および細胞的基礎理論は完全には理解されていない。しかしなお、新しい治療薬および方法が開発されAIDSへの進行に対抗するために臨床無兆候段階に適用されれば、百万人と推定される感染したが臨床的には潜伏している個体に希望を与えることができる。本発明の要旨従って、本発明は、下記式(Ｉ)：〔式中、R₁、R₂、R₃およびR₄は相互に独立して、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、トリフルオロメチル、ニトロまたは-NR₈R₉であり、ここでR₈およびR₉は相互に独立して水素または低級アルキルであり； R₅およびR₆は相互に独立して、水素、低級アルキルまたはフェニルであり；ＸはＯ、S(O)_nまたはNR₇であり；ＹはＯ、S(O)_nまたはNR₈であり； R₇は水素、低級アルキル、フェニル、ベンジル、CH₂OR₈またはハロで置換された低級アルキル、フェニル、ベンジルであり； R₈は水素、低級アルキルまたはフェニルであり；ｎは０、１または２の整数であるが；ただし、 1) ＸがNHであり、ＹがNHであり、R₁がＨであり、R₃がＨでありそしてR₄がBr である場合は、R₂はメチルではなく； 2) ＸがNHであり、ＹがNHであり、R₁、R₃およびR₄がＨである場合は、R₂はメトキシでもエトキシでもなく；そして、 3) ＸがNHであり、ＹがＳである場合は、R₁、R₂、R₃およびR₄の少なくとも１つはＨではない〕の化合物または薬学的に許容されるその酸付加塩である。本発明は薬学的に許容される担体と共に上記式Ｉの化合物の治療有効量を含有する薬学的組成物を包含する。本発明の第３の態様は、単位剤形の上記式Ｉの化合物を含有する薬学的組成物を内皮細胞への白血球の接着の抑制により媒介される疾患の治療の必要な宿主に投与することを包含する上記疾患の治療方法である。好ましい実施態様は式Ｉの化合物の抗炎症量を投与することを包含するヒトにおける炎症性疾患の治療方法である。本発明の第４の態様は、単位剤形の上記式Ｉの化合物を含有する薬学的組成物をHIV感染宿主に投与することを包含する上記宿主の治療方法である。詳細な記述本発明の式Ｉの化合物の定義において使用する用語を以下の通り定義する。低級アルキルおよび低級アルコキシとは、炭素原子１〜４個を有する直鎖または分枝鎖のアルキルまたはアルコキシ基を指し、例えば、メチル、エチル、プロピル、ｉ−プロピル別称（メチル）エチルおよびｔ− ブチル別称1,1−（ジメチル）エチル、そしてこれらに対応して、例えばメトキシ、エトキシ、ｉ−プロポキシ別称１−（メチル）エトキシ等を包含する。ハロゲンとはフッ素、塩素、臭素またはヨウ素を包含する。式Ｉの化合物は、更に薬学的に許容される酸付加塩を形成することができる。これらの形態は全て本発明の範囲内に包含される。式Ｉの化合物の薬学的に許容される酸付加塩には、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、フッ化水素酸、亜リン酸等の無機酸から誘導される塩、並びに、脂肪族モノ−およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、アルカン二酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族のスルホン酸等のような非毒性有機酸から誘導される塩が包含される。このような塩には、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、リン酸１水素塩、リン酸２水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、トリフルオロ酢酸塩、プロピオン酸塩、カプリル酸塩、イソ酪酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、トルエンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩等が包含される。更にまた、アミノ酸塩、例えば、アルギネート（arginate）等、およびグルコン酸塩、ガラクツロン酸塩、Ｎ− メチルグルタミンの塩も包含される（例えばBerge S.M.，等“Pharmaceutical Salts（薬剤塩）”、Journal of Pharmaceutical Science，66:１−19（1977）参照）。上記塩基性化合物の酸付加塩は、従来の方法で塩を形成するための所望の酸の十分な量に遊離の塩基形態を接触させることにより製造する。遊離の塩基形態は、従来の方法で塩形態を塩基に接触させ、遊離の塩基を単離することにより再生してよい。遊離の塩基形態は、極性溶媒中の溶解度のような特定の物理的特性において幾分その対応する塩形態とは異なっているが、その他の点においては、塩は本発明の目的のためにはその対応する遊離塩基と同等である。本発明の化合物の特定のものは、非溶媒和形態並びに水和形態を包む溶媒和形態で存在できる。一般的に、水和形態を含む溶媒和形態は、非溶媒和形態と同等であり、本発明の範囲内に包含されるものとする。本発明の好ましい実施態様はR₁、R₃およびR₄が水素であり、そしてR₂が上記したような式Ｉの化合物である。本発明のより好ましい実施態様は、R₁、R₃およびR₄が水素であり；R₂が水素または低級アルコキシであり；ＸがＯ、S(O)_nまたはNR₇であり；ＹがＯまたはS(O)_n であり；R₇が水素または低級アルキルであり、そしてｎが０、１または２であるような式Ｉの化合物である。特に価値ある化合物は以下：2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔１〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン−5(4H)−オン、2,3−ジヒドロ−〔１〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−5(4H)−オン、2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔１〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4-チアゼピン−5(4H)−オン−１−オキシド、3,4− ジヒドロ−９−メトキシ−６−メチル−2H−1,4−オキサゼピノ〔6,7-b〕−インドル−5(6H)−オン、2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オン、2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f 〕−1,4−オキサゼピン−５−オン、2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−６−オキシド−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕オキサゼピン−５−オン、2,3−ジヒドロ−９ −メトキシ−２−メチル−１−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン− ５−オン、2,3−ジヒドロ−7,8,9,10−テトラクロロ−1H−ベンゾチエノ〔2,3-f 〕−1,4−オキサゼピン−５−オン、3,4−ジヒドロ−８−ニトロ−６−ｔ−ブチル−2H−1,4−オキサゼピン〔6,7-b〕インドル−5(6H)−オン、3,4−ジヒドロ− ９−イソプロポキシ−６−フェノキシメチル−2H−1,4−オキサゼピン〔6,7-b〕インドル−5(6H)−オン塩酸塩、3,4−ジヒドロ−8,10−ジブロモ−６−（３−クロロベンジル−2H−1,4−オキサゼピノ〔6,7-b〕インドル−5(6H)−オン、2,3− ジヒドロ−８−クロロ−1H−ベンゾフラノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５− オン、メタンスルホネート、2,3−ジヒドロ−1,2,3−トリメチル−1H-ベンゾフラノ〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オン、および2,3−ジヒドロ−３−ヘキシル−1H−ベンゾフラノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン−５−オンである。どのような場合に細胞接着抑制剤またはHIV活性化抑制剤の適応症となるかを決定するためには、当然ながら、対象となる特定の症状およびその重症度、並びに投与対象の年齢、性別、体重等を考慮することが必要であり、そして、この決定は担当医師の専門的知識により可能である。医療用途のためには、治療効果を達成するための式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその酸付加塩の必要量は、当然ながら、特定の化合物、投与経路、投与対象の哺乳類、および特定の対象疾患により変化する。好ましい実施態様においては、本発明は治療の必要な対象に抗炎症作用量を投与することを包含する。関節炎または浮腫のような炎症性疾患に罹患しているヒトを治療するための方法を提供する。前述の症状を有する、または有すると考えられる哺乳類に対する式Ｉの化合物または薬学的に許容されるその酸付加塩の適当な用量はkg体重当たり化合物0.1μg〜500mgである。全身投与の場合は、用量はkg体重当たり化合物0.5 〜500mg、最も好ましい用量は哺乳類の体重kg当たり0.5〜50mgであり、１日２〜３回投与する。例えば皮膚や眼に対する局所投与の場合は、適当な用量はkg体重当たり化合物0.1ng〜100μg、典型的には約0.1μg／kgである。一般的に何等かの原因による関節炎や炎症の治療や予防のための経口投与の場合は、式Ｉの化合物または生理学的に許容されるその酸付加塩の適当な用量は、前節において特定した通りであるが、最も好ましくは、kg体重当たり１mg〜10mg であり、最も好ましい用量は哺乳類の体重kg当たり１mg〜５mgであり、例えば、１〜２mg／kgである。通常の専門知識を有する医師または治療対象となる症状を防止したり進行を停止させるための化合物の有効量を容易に決定し、処方することができる。そのような作業において、医師または獣医はまず比較的低用量を用い、その後、最大応答が得られるまで用量を増加させることができる。成分活性を単独で投与することもできるが、式Ｉの化合物または薬理学的に許容されるその酸付加塩および薬理学的に許容される担体を含有する薬学的製剤として使用するのが好ましい。このような製剤は本発明の更に別の特徴を構成する。家畜用およびヒトを対象とする医療用途の両方に対する本発明の製剤は、薬学的に許容される担体および場合により他の治療成分（１つまたは複数）と共に活性成分を含有する。担体（１つまたは複数）は、製剤の別の成分と適合性を有し、投与対象に対して悪影響を及ぼさないという意味で「許容できる」ものでなければならない。製剤には、経口投与、肺投与、眼投与、直腸投与、非経腸投与（以下、筋肉内、および静脈内を含む）、関節内投与、局所投与、鼻投与、または舌下投与に適する剤形を包含する。このような製剤は、この技術分野で知られている長時間作用する製剤も含むものとする。製剤は好都合には、単位剤形としてよく、製薬分野で良く知られた何れかの方法で製造してよい。全ての方法において、１つ以上の添加物成分を構成する担体と活性成分を組合わせる段階が含まれる。一般的に、製剤は、活性成分を液体担体または微粉状固体担体または両者と均一にそして緊密に混合し、その後、必要に応じて、生産物を所望の製剤に成形することにより製造する。経口投与に適する本発明の製剤は、各々が所定の量の活性成分を含有するカプセル、カシェ剤、錠剤またはロゼンジのような個別単位の形態；粉末または顆粒形態；水性液体または非水性液体の溶液または懸濁液の形態；または、水中油型エマルジョンまたは油中水型エマルジョンの形態であってよい。活性成分はまた巨丸、舐剤、またはペーストであってもよい。血管内皮細胞への白血球接着の抑制剤として、そして、これによる炎症関連疾患または症状の治療における本発明の化合物の有用性は、種々の標準的試験方法におけるその有効性により明らかにされる。各方法および試験例の結果を以下に記載する。細胞間接着分子−１／HUVEC発現検定（ICAM-1）およびＥ−セレクチン／HUVEC発現検定（ESEL）の方法細胞培養Ｔ−25組織培養フラスコに入ったヒト臍帯内皮細胞（HUVEC）をCloneticsより入手し、入手後１〜３日間37℃、５％炭酸ガス下で生育させた。次に５〜10分間 0.025％トリプシン／0.01％EDTA 10mlでＴ−25を洗浄し、洗浄液を棄てることによりHUVECを分裂させた。更に10mlのトリプシン／EDTA溶液を添加し、フラスコの側面をペンシルイレーザーでたたきながら２〜４分間細胞を振とうした。次にフラスコの内容物を培地40mlの入った50ml容の遠沈管に入れた。培地はヒドロコルチゾン（２mg／ｌ）、表皮生育因子（0.05μg／ｌ）、ウシ脳抽出物（12mg／ｌ）およびHycloneより入手した熱不活性化ウシ胎児血清（６％）を含有するClo neticsより購入した内皮細胞基礎培地とした。細胞を10〜15分間15℃で遠心分離し、上澄みを捨て、細胞を新しい培地に再懸濁した。細胞を同様の方法で２回洗浄し、次に96穴の組織培養プレートに接種した。サイトカイン刺激全面生長に到達して５日以内に、細胞を腫瘍壊死因子α（TNFα）(Genzyme)で刺激して最終培地濃度140U／mlとし、４時間37℃でインキュベートした。４時間のインキュベーションの後、培地を除去し、ケモカイン生産の分析まで保存した。細胞を３回カルシウムおよびマグネシウムのないリン酸塩緩衝食塩水で洗浄した。次に、15分間ウエルに10％緩衝ホルマリンを添加することにより単一培養物を固定した。固定後、細胞を３回、２％ウシ血清アルブミンを含有するDulbeccoの変性Eagle培地(Gibco)(DMEM／２％BSA )で洗浄し、一夜冷蔵した。 ELISA DMEM／２％BSAに溶解したネズミモノクローナル抗ヒト ICAM-1（Ｒ＆Ｄ Syste ms，Cat No．BBA-4）またはネズミモノクローナル抗ヒトＥ−セレクチン（Ｒ＆Ｄ Systems，Cat No．BBA-2）を各ウエルに0.5μg／mlで添加し、２時間37℃でインキュベートした。次にHUVEC単一培養物をDMEM／２％BSAで４回洗浄した。ペルオキシダーゼ結合ヒツジ抗マウスIgG(Cappel)を添加し（１：30,000希釈）、3 7℃で１時間インキュベートした。次に細胞をDMEMで４回洗浄した。発色試薬（B iorad）を固定細胞に添加し、室温で15分間インキュベートした。２％シュウ酸溶液で反応を停止し、titertekプレートリーダーで414nmの吸光度を測定した。化合物の試験化合物を30ミリモルの濃度でDMSOに溶解し、培地で希釈して最終試験濃度とした。TNFα適用の30分前に培地に溶解した化合物をHUVECに投与した。非刺激HUVE Cの吸光度をTNFα刺激細胞の吸光度から差し引いた後に、抑制％を求めた。溶媒投与細胞の吸光度と薬剤投与細胞の吸光度を比較することにより、抑制％を求めた。IC₅₀は線形回帰分析により求めた。 TNFα刺激ヒト臍静脈内皮細胞へのヒト好中球接着の抑制の測定方法細胞培養継代培養２代目のHUVEC（Clonetics Corporations，San Diego，California， CC-2617）をCorning（Corning glass works，Corning，NewYork）の96穴細胞培養プレートに、約５×10³個／ウエルで接種し、添加物含有内皮細胞基礎培地（E BM，MCDB-131，Clonetics，10ng／ml EGF，１μg／mlヒドロコルチゾン、0.4％ウシ脳抽出物、５％ウシ胎児血清）中で全面生長となるまで生育させた。検定を行う１日前に、典型的には、接種後３日に、培養物に0.2ml／ウエルの添加物含有EBM（S-EBM）を再供給した。被験化合物の調製被験化合物を1.0mMの濃度で10mlの保存溶液として調製した。化合物をまず0.1 mlのDMSO中可溶化した後、9.9mlのS-EBMを添加した。次に薬剤調製物を１段階で 66.6μMの濃度まで希釈した。可溶化および希釈はポリスチレン容器中で行った。 HUVECの刺激組み換えヒト腫瘍壊死因子−α（TNF，Genzyme，Boston，Massa-chusetts，co de TNF-H）をS-EBM中400U／mlで調製した。保存TNFをDulbeccoのリン酸塩緩衝食塩水(PBS，Gibco，Grand Island，NewYork)＋0.1％ BSA中20,000U／mlに調製し −70℃で保存した。HUVECを加温無添加EBM 0.2mlで１回洗浄し、次に33.3μMの被験化合物の存在下200U／ml TNFで37℃で４時間刺激した。これは、400U／mlTN F 0.1mlおよび66.6μM被験化合物0.1mlを添加することにより行った。これらの添加はHUVEC単層を破壊しないようにゆっくり行った。各化合物を６ウエルで試験した。無刺激（溶媒対照）および被験化合物未投与でTNF刺激の区も各プレートに設けた。好中球の標識 HUVECに好中球を添加する１時間前、好中球（５×10⁶／ml）を、ハンクエ平衡塩類溶液＋0.45％ BSA中、５μMカルセイン−AM(Mole-cular Probes，Eugene，O regon)で37℃で30分間標識した。保存カルセインは無水DMSO中５mMに調製し、− 20℃でデシケーター中に保存した。インキュベーション終了時、細胞を２回冷HB SSで洗浄し、添加物含有EBM中１×10⁶個／mlの最終濃度で再懸濁した。 HUVECへの好中球の添加４時間の刺激の終了時、および、HUVEC単層への好中球の添加の直前に、プレートを加温無添加EBM 0.2mlで洗浄してTNFと薬剤を除去した。好中球（１×10⁵ 個）を処理したウエルの各々にゆっくり添加し、37℃で30分間インキュベートした。インキュベーション終了時に、プレートを加温無添加EBM 0.2mlで２回洗浄し、次にプレートスキャニングのために0.1mlを最終添加した。相対的蛍光の測定相対的蛍光はMillipore Cytofluor 300システム（励起＝480、発光＝530、感度＝４）を用いて測定した。計算 HUVECのTNF刺激により好中球接着が未刺激HUVECへの接着よりも300％増大した場合に、検定を有効とした。結果はTNF刺激接着の抑制％の平均として現した。これらの化合物の幾つかを33.3μM、10.0μM、3.3μMおよび1.0μMの濃度で試験してIC₅₀値を求めた。抑制値の平均の線形回帰分析を用いてIC₅₀を求めた。本発明の特定の化合物で得られた結果を表Ｉに示す。本発明の化合物、特に式IIIの化合物は、感染哺乳類中に潜伏するヒト免疫不全ウイルス（HIV）の活性化を抑制することが解っており、従って、AIDSの治療において有用である。臨床無兆候期間のウイルス学的な、そして細胞レベルの原因を理解しようとする過程において、HIVは慢性的に感染した細胞の貯留集団において休眠中または非発現性のプロウイルスとして存在することが解った。HIVの特定の種類であるH IV-1は、ウイルスが慢性的に感染したＴリンパ球の貯留集団において休眠中または非発現性のプロウイルス集団として存在することを示す多くの異なる研究プロジェクトの研究対象となっている。しかしながら非発現ウイルス状態を維持するために必要な核および生化学的な機序に関するより詳細な部分はこの概設の範囲外であり、いずれかの参考文献に記載されているものである（Mechanisms of HI V-1 Latency（HIV-1 潜伏の機序）、Bednarik等、AIDS ６：３−16（1992）参照）。近年まで、HIVは臨床無兆候期間は慢性的に感染した細胞の全ての貯留集団において休眠中または非発現性であると考えられていた。末梢血液細胞中ではウイルス血症およびウイルス複製が低いか、ないしは、全く観察されないような水準であることが観察されていたため、HIV疾患は臨床無兆候期間は非活動性であるという印象がもたれていた。しかしながらある科学者のグループが真の微生物学的潜伏の状態はHIV感染の過程には存在しないことを発見した（Fauci A.S.等.，HIV Infection is Active and Progressive in Lymphoid Tissue Duri ng the Clinically Latent Stage of disease（HIV感染は疾患の臨床潜伏段階ではリンパ組織中活動性であり進行性である）、Nature362：355-358(1993)）。科学者等は臨床潜伏期の末梢血液対リンパ器官中のウイルス負荷とウイルス複製の水準には矛盾が有ることを報告している。従ってこれらの所見に基づいて、科学者等は「末梢血液は、特にHIV感染の臨床経過の早期の時点ではHIV疾患の実際の状態を正確に反映するものではない。実際は、末梢血液中の容易に測定できるウイルスパラメーターによる疾患の活動性の証拠が殆ど無く患者が臨床潜伏期にある場合であってもHIV疾患は活動性であり進行性である」ことを発見している。不可避的に、HIVの疾患状態は、臨床潜伏無兆候期から発現性活動性の兆候期へ進行する。幾つかの異なるモデルを使用することにより、実験上の潜伏期から HIVが活性化する際に関与する細胞経路が解明され始めている。Butera等のAIDS 、６：994(1992)によれば、潜伏の細胞モデルの多くがサイトカイン投与によりH IV-1を発現するように誘導できる。このことは微生物学的潜伏状態において、HI V-1は複製を開始する前に細胞外刺激を受け入れる体制に有ることを示している。このシグナルは、可溶性サイトカインのその受容体との相互作用を介して媒介されうるのみならず、細胞−細胞連絡の間に起こる受容体−受容体相互作用またはＵＶ光への曝露および熱ショックのような細胞ストレスを介することもできる。さらに、細胞外誘導シグナルは、HIV-1活性化細胞は近傍の潜伏細胞を活性化しながら自己の発現も進行できるように、自己分泌（autocrine）または副分泌（paracrine）の態様で発生されることができる。上の分野の技術者は、HIVの活性化に関与するものとして別の因子も検討している。ある研究によれば、HIV感染細胞において12−Ｏ−テトラデカノイルホルボール−13−アセテート（TPA）がCD4下方調節およびウイルス発現を媒介している（Hamamoto等、Biochem．Biophys．Res．Commun.，164：339-344(1989)）。興味深いことに、Hamamotoはまた、TPA−媒介CD4下方調節およびHIV発現の強化に対する強力なプロティンキナーゼＣ阻害剤スタウロスポリン、Ｈ−７およびUCN- 01の作用を検討している。スタウロスポリンはこれらの作用の両方に対する有効なTPA抑制剤であることがわかっている。 HIV-1の発現をもたらす組み込みウイルスへの原形質膜からの活性化シグナルの媒介に関与する細胞経路は、更に不明な点が多い。最近潜伏HIVの活性化を防止できる化合物を評価するための信頼できる簡単な系が開発されたことが1991年 11月３〜７日のNational Cooperative Discovery Grant（NCDDG）／AIDS（P．Fe orino，S.T．Butera，T.M．FolksおよびR.F．Schinazi）で報告された。検定系ではOM-10.1細胞株が用いられ、これは腫瘍壊死因子−αによるHIV-1の活性化までCD4＋で有り続けるような独特の慢性感染プロ骨髄球クローンである。細胞表面におけるCD4＋の発現および逆転写酵素の活性化が、ウイルス発現を定量するためのマーカーとして用いられている。あるいは、当業者の良く知るプロテアーゼ活性のような他のHIVマーカーを用いることもできる。OM-10.1細胞はウイルス活性化までCD4＋で有り続け、そして腫瘍壊死因子の誘導に応答するため、これらを用いてCD4＋下方調節（細胞表面上のCD4＋の発現の低下）およびHIV-1の発現を防止する能力について薬理学的な実験を好都合にかつ迅速に行うことができる。急性また慢性的に感染した細胞の何れかに対する抗ウイルス特性を有することが解っている種々の化合物がHIV発現を防止する能力を、これらOM-10.1細胞において調べた。再活性化過程を干渉すると考えられる生化学的経路と相互作用を有する幾つかの化合物も調べた。検討結果はNICDDG／AIDS（San Diego，Californi a）のポスターにおいて1991年11月３〜７日に発表されている。検討した48化合物中、3′−フルオロ−3′−デオキシチミジン（FLT）、インターフェロンＹおよびデスフェリオキサミンがHIV-1の活性化の適切な抑制剤であると考えられている。式Ｉの代表的な化合物である2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−ジアゼピン−5(4H)−オンは、OM-10.1細胞において、0.21μ MのIC₅₀の抑制を示した（表Ｉ）。本発明の化合物は更に、好中球の流入を抑制する能力を測定するために用いられる標準的なインビボ検定において活性を示し、これにより炎症症状を治療するために有用であることが明らかになった。逆受動Arthus胸膜炎検定と呼ばれる試験において、雄性雑種Wistarラット（220〜245g、Charles River Laboratories ）を16〜18時間絶食させた。溶媒（１：１エタノール：食塩水）または溶媒に溶解した本発明の化合物を静脈内投与した。ラットを浅くエーテル麻酔し、食塩水中ウシ血清アルブミン（BSA）2.5mgを静脈内注射した。静脈内注射直後、肋骨間に小型の切開部を設け、PBS中ウサギIgG画分抗BSA（Dulbeccoリン酸塩緩衝食塩水（PBS）中10mg／ml）0.2mlを20ゲージの経口投与針を用いて胸腔に注射した。次に切開部を９mmのステンレス創傷クリップを用いて閉鎖した。４時間後、ラットを二酸化炭素で安楽死させ、胸腔をPBS中0.325％のフェノールレッド溶液２ml で洗浄した。滲出液−緩衝液を胸腔から採取して分析に付した。白血球（＞90％好中球）をコールターカウンターで計数した。胸腔滲出液の容量を染料希釈法で測定した（Carter G.W．等、J．Pharm．Pharmacol．34：66-67(1982)）。薬剤投与群を溶媒投与群と比較しスチューデントのｔ検定で統計学的有意差を調べた。実施例１の化合物を上記試験で評価した場合に以下の抑制が観察された。チオグリコレート誘導好中球流入検定と称される別のインビトロ試験において、雌性Balb／ｃ血族勾配マウスを７匹の群で飼育し、試験中飼料と水を自由摂取させた。マウスに溶媒（0.5％ヒドロキシプロピルメチルセルロース＋0.2％ツイーン80）または溶媒中に溶解または懸濁した本発明の化合物を経口投与した。投与１時間後、マウスをジエチルエーテル吸入により麻酔し、食塩水中３％チオグリコレート1.0mlを腹腔内注射した。チオグリコレート注射２時間後、マウスを二酸化炭素窒息により安楽死させ、10U／mlヘパリンナトリウムおよび0.1％BSA を含有するDulbeccoのPBS ６mlを注射した。腹腔をマッサージし、腹腔を切開して15mlの遠沈管に液を採取した。一部を各マウスから採取して検体としての検体中の細胞総数をコールターカウンター（ZBi型、Colter Instrument，Hialeah，F lorida）を用いて計数した。２番目の検体を採取してCytospin ２（Shandon Inc .，Pittsburgh，Pennsylvania）を用いた顕微鏡検査に付し、その後、染色（Wri ght染色変法）を行った。血液学的分画を行って腹腔内に溢出した好中球の百分率を測定した。実施例１の化合物をこの検定で評価した場合に、好中球流入は10mg／kgで26.1 ％抑制、30mg／kgで31.9％抑制および100mg／kgで34.3％抑制された。本発明の化合物は以下の方法で製造される。第１の一般的方法では、出発物質として、構造１の３−ヒドロキシ、チオールまたはアミノベンゾ〔ｂ〕チオフェン、ベンゾフランまたはインドール−２−カルボキシレートエステル（スキーム１）が必要になる。３−ヒドロキシベンゾ〔ｂ〕チオフェン−２−エステルは、文献記載の通り調製される〔Connor D.T．等、J．Med．Chem.， 35：958(1992)〕。３−チオベンゾ〔ｂ〕チオフェン−２−カルボキシレートエステルは1,8−ジアザビシクロ〔5.4.0〕−ウンデク−７−エン（DBU）のような塩基およびN,N′−ジメチルホルムアミドまたはテトラヒドロフランのような溶媒の存在下、チオアセトアミドによる同様の３−クロロ誘導体の処理により調製される〔Connor D.T．等、J．Med．Chem.，35：958（1992）〕。３−アミノベンゾ〔ｂ〕チオフェン−２−カルボキシレートエステルは、知られた一般的な方法〔Beck J.R.，J．Org．Chem.，37：3224(1972)〕により調製される。３−ヒドロキシ−インドール−２−カルボキシレートエステルは、Unangst P.C．等（J．He terocyclic Chem.，24：811(1987)）およびMoyerM.P．等（J．Org．Chem.，51： 5106(1986)）の方法のような知られた方法により調製される。３−チオインドール−２−カルボキシレートエステルはUnangst P.C．等(J．Hetero-cyclic Chem. ，24：811(1987))；Atkinson J.G.等（Synthesis，480(1988)）；およびNagaraj an K．等(Indian J．Chem.，20B：672(1981)）の方法のような知られた方法で調製される。３−アミノインドール−２−カルボキシレートエステルはSimakov S. V.等(Khim.-Farm．Zu.，17：1183(1983))の方法のような知られた方法で調製される。形態１の化合物の本発明の化合物への変換はスキーム１に示す通りである。エステルを０〜80℃でテトラヒドロフラン、アセトニトリルまたはジメチルスルホキシド中、カリウムｔ−ブトキシドのような塩基の存在下ブロモアセトニトリルのようなα−ハロ置換アセトニトリル誘導体で処理し、形態２のエステルとする。ニトリル基を相当する第１アミンまで還元し、得られた中間体３を環化してラクタム４とする。好ましい変換は高められた温度および圧力で、トリエチルアミンのような塩基の存在下、テトラヒドロフランのような溶媒中でラネーコバルト触媒を用いた化合物２の水素化である。これらの条件下、化合物４が化合物２から直接得られる。中間体３を単離する場合は、これを塩基性条件下、好ましくはメタノール中NaOMe存在下、または、酸性条件下好ましくはポリリン酸存在下、高められた温度で環化して化合物４とする。本発明の化合物の幾つかを合成する間、ヒドロキシ、アミノおよびカルボキシのような反応性の基は、分子中の別の部位で所望の反応を行う際に望ましくない副反応からこれらを保護するような誘導体に変換することが必要または望ましい場合が有る。このような保護されたヒドロキシ、アミノおよびカルボキシ基は従来の方法で容易に脱保護される。ヒドロキシ、アミノおよびカルボキシのような反応性の基を保護する作用のある一般的に用いられる化学的部分およびその連結および後の除去のための方法は、GreeneおよびWutsのProtective Group in Orga nic Synthesis(有機合成における保護基)(John Wiley & Sons，Inc.，New York ，1991)に記載されている。例えば、３−アミノ、３−ヒドロキシまたは３−チオインドール、ベンゾチオフェンまたはベンゾフラン（スキーム１の化合物１）を、ｔ−ブトキシカルボニル（Boc）またはベンジルオキシカルボニル（Cbz）のような適当な保護基（PG）でアミノ基の保護されたβ−ハロエチレンアミンと反応させることができる。上記した条件と同じ条件下の反応により形態５の化合物が得られる。標準的条件下、即ち、BOCの除去のためにはトリフルオロ酢酸または水性の酸の存在下、または、Cbzの除去のためには水素化分解により化合物５を脱保護（即ちP G除去）することにより前記したとおり環化される形態３の化合物が得られる。別の方法では、アルコール系溶媒中エチレンイミンと形態１の化合物を反応させることにより、直接化合物３を得る(Nagarajan K．等、Indian J．Chem.，20B： 672(1981))。形態４の化合物に至る第２の一般的な方法（スキーム２）は相当する３−ハロ誘導体６を出発物質とする。炭酸カリウムのような塩基の存在下、ピリジンのような溶媒中でエチレンジアミンおよび酸化第二銅と化合物６を反応させることにより、ＹがNHである形態３の化合物が得られる（Hiremath S.P．等、Proc．Nat ．Acad．Sci.，India，60：367(1990)）。DBUのような塩基の存在下、ジメチルホルムアミドのような溶媒中でシステアミンと化合物６を反応させることにより、ＹがＳである形態３の化合物が得られる。カリウムｔ−ブトキシドまたはカリウムハイドライドのような塩基の存在下、テトラヒドロフランのような溶媒中でニトロエタノールと化合物６を反応させることにより形態７の化合物が得られる。その後ニトロ基を還元してアミンとすることによりＹがＯであるような形態３の化合物が得られる。上記例の幾つかにおいては、化合物３を単離せず化合物４が直接得られる場合がある。第３の一般的方法（スキーム３）もまた、３−ハロ誘導体６を用いている。適当に保護されたアミノ、ヒドロキシまたはチオール基をβ位に有する第一アミンで３−ハロ誘導体を処理してアミド基を形成し、形態７の中間体とする。脱保護し、次いで環化することにより形態４の化合物とする。β位に適当な脱離基を有するアミンを添加しながら３−ヒドロキシ、チオールまたはアミノ、化合物を用いて同様の反応過程を開始する。次に得られた形態８の中間体を環化して化合物４とする。ＸがＳでありＹがＯまたはNRであるような形態４の化合物は、酸化の程度を決定する反応条件を用いながらｍ−クロロ過安息香酸（ｍ−CPBA）またはオキサジリジンのような酸化剤を用いて相当するスルホキシドおよび／またはスルホン９に変換できる（スキーム４）。ＹがＳであるような形態４の化合物については、同じ酸化により形態10のスルホキシドまたはスルホンの何れかが得られる。スキーム１〜４の記載に含まれる条件および記載の変更例は、既知であるか、当業者の良く知る類似の反応から容易に決定できる。以下の実施例は本発明化合物の製造を説明するものである。実施例１ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン− 5(4H)−オン DMF 20ml中のメチル３−クロロ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２− カルボキシレート（500mg、1.95ミリモル）〔知られた３−クロロ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボニルクロリドのメタノールとの反応により調製〔J．Med．Chem.，35：958(1992)〕〕の室温溶液に、塩酸システアミン（ 885mg、7.79ミリモル）次いでDBU（2.33ml、15.58ミリモル）を添加した。反応混合物を1.5時間室温で撹拌し、次に70℃に加温した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水性塩酸、水および塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上に乾燥し、濾過し、真空下に濃縮した。粗生成物をヘキサンおよび酢酸エチルから再結晶させ、2,3−ジヒドロ−９−メトキシ〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン−5(4H)−オンを74％収率で得た。融点209〜209.5℃ 実施例２ 2,3−ジヒドロ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−5(4H)−オン THF 50ml中の３−(シアノメトキシ)ベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸のメチルエステル(405mg、1.64ミリモル)〔J．Hetero．Chem.，12：1037(1975) 〕、Et₃N 0.5mlおよびRaCo 0.50gの混合物を1200psiの水素下100℃で加熱した。反応混合物を真空下に濃縮した。１：１ヘキサン：酢酸エチル〜全酢酸エチルの勾配溶離によるカラムクロマトグラフィーにより2,3−ジヒドロ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−5(4H)−オンを55％収率で得た。融点244 〜245℃ 実施例３ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン −5(4H)−オン−１−オキシド AcOH 18ml中の2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕− 1,4−チアゼピン−5(4H)−オン（200mg、0.75ミリモル）およびNaBO₃-4H₂O（116 mg、0.75ミリモル）の混合物を一夜室温で撹拌した。反応混合物を濾過し、水60 mlを濾液に添加した。濾過により2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3- f〕−1,4−チアゼピン−5(4H)−オン−１−オキシドを69％収率で得た。融点215 〜216℃（分解）実施例４ 3,4−ジヒドロ−９−メトキシ−６−メチル−2H−1,4−オキサゼピノ〔6,7-b〕 −インドル-5(6H)−オンＡ．メチル３−（シアノメトキシ）−５−メトキシ−１−メチル−1H-インドール−２−カルボキシレートジメチルスルホキシド60ml中カリウムｔ−ブトキシド（3.2g、29ミリモル）の懸濁液を３−ヒドロキシ−５−メトキシ−１−メチル−1H−インドール−２−カルボキシレート（5.6g、24ミリモル；Unangst P.C．等、J．Heterocyclic Chem. ，24：811(1987)）で少しずつ処理した。混合物を15分間撹拌し、クロロアセトニトリル（4.8ml、5.7g、76ミリモル）を滴下添加した。混合物を90分間80℃に加熱し、冷却し、氷水800gに投入した。沈澱した固体を濾過し、10％メタノール −水で洗浄し、水性アセトニトリルから再結晶させて生成物3.9g（60％）を得た。融点136〜137℃ Ｂ．加圧反応容器中テトラヒドロフラン35ml中のメチル３−（シアノメトキシ） −５−メトキシ−１−メチル−1H-インドール−２−カルボキシレート（0.60g、 2.2ミリモル）およびトリエチルアミン(0.40ml、0.29g、2.9ミリモル）の混合物をラネ−コバルト触媒（0.40g）で処理した。反応容器を水素（590psi）で加圧し10時間80℃に加熱した。冷却した反応混合物を濾過し、濾液を蒸発させた。油状の残存物をメタノール50mlに溶解し、ナトリウムメトキシド（0.80g、15ミリモル）を溶液に添加した。混合物を３時間還流下に加熱し、次に冷却し、蒸発させた。残存物を酢酸エチル75mlおよび塩水150mlの間に分配した。水層を数回新しい酢酸エチルで抽出した。合わせた有機層を塩水で洗浄し、乾燥（無水硫酸ナトリウム）し、蒸発させた。粗生成物の残留物をフラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、ジクロロメタン中５％メタノールで溶離）で精製し、生成物0.18g（33％）を得た。酢酸エチル−ヘキサンから再結晶した試料は融点184〜186℃であった。実施例５ 2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オン３−（２−アミノエチルアミノ）ベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル塩酸塩メタノール15ml中の２−（4,5−ジヒドロ−1H−イミダゾール−２−イル）ベンゼンチオール（1.00g、5.62ミリモル）〔Hegen，H.，Fleig，H．Justus Liebi gs Ann．Chem．11：1994(1975)〕およびクロロメチルアセテート（1.00g、5.62 ミリモル）の溶液を90分間還流下に加熱した。反応混合物を室温に冷却し濾過した。濾液を濃縮乾固し残存物を熱クロロホルムに溶解した。数時間後、形成した沈澱を回収して乾燥した。母液から２回目の収量として結晶が得られ、３−（２ −アミノエチルアミノ）ベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル塩酸塩が全収率61％で得られた。融点219〜220℃ 2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オンメタノール５ml中の３−（２−アミノエチルアミノ）ベンゾ〔b〕チオフェン −２−カルボン酸メチルエステル塩酸塩（339mg、1.18 イリモル）および新しく調製したナトリウムメトキシド（ナトリウム134mg、2.4 8ミリモルから調製）の溶液を18時間還流下に加熱した。冷却後、反応混合物を１Ｎ塩酸25mlで中和し、１時間０℃に冷却した。得られた黄色の結晶性物質を濾過し、数時間60℃で真空下に乾燥し、64％収率で2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オンを得た。酢酸エチル中２％メタノールから酢酸エチル中５％メタノールの勾配溶離によるクロマトグラフィーにより、分析上純粋な2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オンを得た。融点210〜212℃ 実施例６ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4-オキサゼピン−５−オン３−シアノメトキシ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル DMSO 20ml中のメチル３−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン− ２−カルボキシレート(1.00g、4.2ミリモル）〔Connor等、J．Med．Chem．35：9 59(1992)〕の室温溶液に、カリウムｔ−ブトキシド（494mg、4.41ミリモル）次いでブロモアセトニトリル（878μl、12.58ミリモル）を添加した。混合物を1.5 時間室温で撹拌し、酢酸エチルおよび１Ｎ塩酸中に注ぎこんだ。有機層を１Ｎ塩酸、次いで数回塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。濾過し、溶媒を真空下に除去し、酢酸エチル：ヘキサンから残存物を再結晶させ、413mgを得た。母液から更に112mgを得た。融点159.5〜160℃ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4-オキサゼピン−５−オン THF 50ml中の３−シアノメトキシ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２ −カルボン酸メチルエステル（2.5g、9.0ミリモル）の溶液を激しく還流するまで加熱した。ボラン−ジメチルスルフィド（9.0ml、90.2ミリモル）を迅速に添加し、蒸発に応じてTHFを添加しながら25分間加熱を継続した。更にボラン−ジメチルスルフィド（4.0ml）を添加し、10分間加熱を継続した。反応混合物を０ ℃に冷却し、６Ｎ塩酸50mlを慎重に添加した。水素ガスが発生し、反応混合物の温度が上昇した。得られた沈澱を濾過して回収し、水で洗浄し、真空下に一夜乾燥させた。固体（2.3g、8.2ミリモル）をメタノール40ml中のナトリウムメトキシド（ナトリウム1.9g、82.0ミリモルから調製）の新しく調製した溶液に添加した。反応混合物を２時間50℃に加温し、次に２時間還流下に加熱した。室温に冷却した後、沈澱を回収し、冷メタノール、次いで冷ジエチルエーテルで洗浄した。固体を一夜真空下に乾燥し、1.18g(52％)を得た。酢酸エチル：ヘキサンから再結晶させて2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５−オンの分析試料を得た。融点264〜265℃ 実施例７ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−６−オキシド−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕− 1,4-オキサゼピン−５−オン温メタノール100ml中の2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ−〔 2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５−オン（1.00g、4.0 ミリモル）の懸濁液に、30％過酸化水素（8.0ml、80ミリモル）次いで二酸化セレン（445mg、4.01ミリモル）を添加した。反応混合物を３時間室温で撹拌し、次に1.5時間30℃で、その後２時間40℃で加熱した。反応混合物を−40℃に冷却し、形成した沈澱を濾過して集めた。溶離剤として、まず酢酸エチル中５％メタノールを用い、これから徐々に溶媒の極性を上昇させて１：１メタノール：酢酸エチルとしながら、残存物をクロマトグラフィーに付し、生成物338mgを得た。メタノール：酢酸エチルから再結晶させて2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−６− オキシド−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５−オンの分析試料を得た。融点273〜274℃ 実施例８ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−２−メチル−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1, 4-オキサゼピン−５−オン３−（１−シアノエトキシ）−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル DMSO 20ml中のメチル３−ヒドロキシ−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン− ２−カルボキシレート（1.00g、4.2ミリモル）〔Connor等、J．Med．Chem．35： 958(1992)〕の室温溶液に、カリウムｔ−ブトキシド（494mg、4.41ミリモル）次いで２−クロロプロピオニトリル（1.1ml、12.6ミリモル）を添加した。混合物を1.5時間室温で撹拌し、３時間82℃に加温した。反応混合物を酢酸エチルおよび１Ｎ塩酸中に注ぎこんだ。有機層を１Ｎ塩酸、次いで数回塩水で洗浄し、硫酸マグネシウム上に乾燥した。濾過し、溶媒を真空下に除去し、酢酸エチル：ヘキサンから残存物を再結晶させ、853mgを得た。融点127〜129℃ 2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−２−メチル−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1, 2-オキサゼピン−５−オン THF 10ml中の３−（１−シアノエトキシ）−５−メトキシベンゾ〔b〕チオフェン−２−カルボン酸メチルエステル（400mg、1.37ミリモル）の溶液を激しく還流するまで加熱した。ボラン−ジメチルスルフィド（1.4ml、13.7ミリモル）を滴下添加し、蒸発に応じてTHFを添加しながら20分間加熱を継続した。反応混合物を室温に冷却し、６Ｎ塩酸7.5mlを慎重に添加した。５分後、反応混合物を０℃に冷却し、１Ｎ水酸化ナトリウム68.5ml、次いで酢酸エチルを添加した。層を分離させ、有機層を１：１塩水：水、次いで更に塩水で洗浄した。有機層を硫酸マグネシウム上に乾燥させ、濾過し、真空下に濃縮した。溶離剤として５：25 ：70 メタノール：ヘキサン：クロロホルム〜10:90 メタノール：クロロホルム〜30:70 メタノール：クロロホルムの勾配を用いて残存物をクロマトグラフィーに付し、生成物135mgを得た。酢酸エチル：ヘキサンから再結晶させることにより、2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−２−メチル−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕 −1,4−オキサゼピン−５−オンの分析試料を得た。融点185〜186℃ 本発明の化合物は炎症、特に関節炎などのような疾患の治療のため、ヒトおよび動物に好都合に経口投与または非経腸投与するために一般的な希釈剤および担体と共に容易に製剤化される。以下の例は典型的な薬学的組成物の調製を説明するものである。実施例９ 250mgカプセルの製造 2,3−ジヒドロ−９−イソプロポキシ−７−クロロ−1H−ベンゾチエノ−〔2,3 -f〕−1,4−オキサゼピン−５−オン（250mg）を乳糖150mgおよびコーンスターチ150mgと均質に混合した。混合物をゼラチンカプセルに封入した。このようなカプセルを関節炎の治療のために毎日１〜３回の割合で経口投与される。実施例10 経口投与用懸濁液の製剤ソルビトール溶液を蒸留水40mlに添加し、オキサゼピノンをそれに懸濁した。サッカリン、安息香酸ナトリウムおよび香味剤を添加し溶解した。蒸留水で容量を100mlとした。シロップml当たりオキサゼピノン５mg含有とした。この経口用製剤は小児の炎症治療に最も適している。実施例11 非経腸投与用溶液の製造プロピレングリコール700mlおよび注射用蒸留水200mlの溶液中、2,3−ジヒドロ−７−ジメチルアミノ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５ −オン20.0gを溶解した。溶液のpHを塩酸で5.5とし、蒸留水で容量を1000mlとした。製剤を滅菌し、各々2.0ml（活性ジアゼピノン40mg相当）の内容量となるように5.0ml容のアンプルに充填し、窒素下に密封した。製剤は炎症患者またはAIDS患者に静脈内投与できる。実施例12 局所用クリームの製造 2,3−ジヒドロ−７−エトキシベンゾフラノ−〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン −５−オン500mgをセチルアルコール15mg、ラウリル硫酸ナトリウム１g、液体シリコーンD.C.200（入手元：Dow Corning C.，Midland，Michigan）40g、滅菌水4 3g、メチルパラベン0.25gおよびプロピルパラベン0.15gと混合した。混合物を一定に撹拌しながら約75℃に加温し、次に、室温に冷却してこれにより、凝固させた。製剤は炎症患者の皮膚表面に適用できる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｄ 487/04 １５１ 9271−4ＣＣ０７Ｄ 487/04 １５１ 498/04 １１６ 7822−4Ｃ 498/04 １１６ 513/04 ３９１ 7822−4Ｃ 513/04 ３９１ (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＧ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＺ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＴ，ＭＤ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＵＡ，ＵＺ (72)発明者クラーマー，ジエイムズ・バーナードアメリカ合衆国オハイオ州 43560．シルベイニア．グレンロツクドライブ7128 (72)発明者ウナングスト，ポール・チヤールズアメリカ合衆国ミシガン州 48105．アンアーバー．ミドルトンドライブ3659

Claims

【特許請求の範囲】１．下記式Ｉ：〔式中、R₁、R₂、R₃およびR₄は相互に独立して、水素、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル、低級アルコキシ、ベンジルオキシ、トリフルオロメチル、ニトロまたは-NR₈R₉であり、ここでR₈およびR₉は相互に独立して水素または低級アルキルであり； R₅およびR₆は相互に独立して、水素、低級アルキルまたはフェニルであり；ＸはＯ、S(O)_nまたはNR₇であり；ＹはＯ、S(O)_nまたはNR₈であり； R₇は水素、低級アルキル、フェニル、ベンジル、CH₂OR₈またはハロで置換された低級アルキル、フェニル、ベンジルであり； R₈は水素、低級アルキルまたはフェニルであり；ｎは０、１または２の整数であるが；ただし、 1) ＸがNHであり、ＹがNHであり、R₁がＨであり、R₃がＨでありそしてR₄が Brである場合は、R₂はメチルではなく； 2) ＸがNHであり、ＹがNHであり、R₁、R₃およびR₄がＨである場合は、R₂はメトキシでもエトキシでもなく；そして、 3) ＸがNHであり、ＹがＳである場合は、R₁、R₂、R₃およびR₄ の少なくとも１つはＨではない〕の化合物または薬学的に許容されるその酸付加塩。２．R₁、R₃およびR₄が水素であるような請求項１記載の化合物。３．R₂が水素または低級アルコキシであり；ＸはＯ、S(O)_nまたはNR₇であり；ＹはＯまたはS(O)_nであり；R₇は水素または低級アルキルであり、そしてｎは０、１または２であるような請求項２記載の化合物。４．2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン−5(4H)−オンである請求項３記載の化合物。５．2,3−ジヒドロ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−5(4H) −オンである請求項３記載の化合物。６．2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−〔1〕ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−チアゼピン−5(4H)−オン−１−オキシドである請求項３記載の化合物。７．3,4−ジヒドロ−９−メトキシ−６−メチル−2H−1,4−オキサゼピノ〔6,7- b〕−インドル−5(6H)−オンである請求項３記載の化合物。８．2,3−ジヒドロ−1H−ベンゾチエノ−〔3,2-e〕−1,4−ジアゼピン−５−オンである請求項３記載の化合物。９．2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−1H−ベンゾチエノ〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５−オンである請求項３記載の化合物。 10．2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−６−オキシド−1H−ベンゾチエノ〔2,3-f〕 −1,4−オキサゼピン−５−オンである請求項３記載の化合物。 11．2,3−ジヒドロ−９−メトキシ−２−メチル−1H−ベンゾチエノ−〔2,3-f〕−1,4−オキサゼピン−５−オンである請求項３記載の化合物。 12．薬学的に許容される担体と共に請求項１記載の化合物治療有効量を含有する薬学的組成物。 13．請求項８記載の薬学的組成物の単位剤形の治療有効量を内皮細胞への白血球の接着により媒介される疾患の治療の必要な宿主に投与することを包含する上記接着を抑制することによる上記疾患の治療方法。 14．治療する疾患が炎症性疾患である請求項13記載の方法。 15．請求項８記載の薬学的組成物の単位剤形の治療有効量をHIV感染哺乳類に投与することを包含する上記哺乳類の治療方法。