JPH09510204A - 磁気共鳴画像化造影剤としての気体入りミクロスフェア - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）造影剤として使用される新規な気体入りミクロスフェアが提供される。

Description

【発明の詳細な説明】 磁気共鳴画像化造影剤としての気体入りミクロスフェア 発明の背景 発明の分野 この発明は、磁気共鳴画像化の分野に関し、さらに詳細には、磁気共鳴画像化 （ＭＲＩ）のための造影剤としての安定化された気体入りミクロスフェアの使用 に関する。 いろいろな画像化技術が、人の疾患を診断するために使用されてきた。使用さ れた最初の画像化技術の一つはＸ線であった。Ｘ線において、患者の身体の生成 された画像は、身体構造の種々の密度を反映する。この画像化技術の診断効力を 改良するために、造影剤が、周囲組織と比較して、対象組織の密度を増大させ、 対象組織をＸ線においてより可視化するために使用されている。例えば、バリウ ムとヨウ素化造影剤が、食道、胃、腸及び直腸を透視するために、Ｘ線胃腸研究 のために広範に使用される。同様に、これらの造影剤は、Ｘ線コンピュータ連動 断層撮影研究（即ち、コンピュータ援用断層撮影又はＣＡＴ）のために使用され 、胃腸管の透視を改良し、例えば、脈管又はリンパ節の如く、管とそれに隣接し た構造の間にコントラストを提供する。そのような造影剤は、食道、胃、腸及び 直腸の内側の密度を増大させることができ、周囲構造からの胃腸系の識別を可能 にする。 磁気共鳴画像化（ＭＲＩ）は、Ｘ線とは異なり、電離放射線を使用しない比較 的新しい画像化技術である。コンピュータ援用断層撮影（ＣＡＴ）と同様に、Ｍ ＲＩは、身体の断層画像を撮影するが、ＭＲＩは、任 意の走査平面（即ち、軸方向、冠状縫合、矢状縫合又は直交）において画像を撮 影することができる付加的な利点を有する。不幸にも、身体に対する診断様相と してのＭＲＩの全効用は、新規の又は優れた造影剤の必要性によって阻害される 。適切な薬なしでは、ＭＲＩを使用して、標的組織を隣接組織から弁別すること は、しばしば困難である。より良い造影剤が利用されたならば、造影ツールとし てのＭＲＩの総体的な有用性は、改良され、この様相の診断精度は、非常に高め られるであろう。 ＭＲＩは、身体の画像を撮影するために、磁界、高周波エネルギーと磁界こう 配を使用する。組織間のコントラスト又は信号強度差分は、Ｔ１（縦）及びＴ２ （横）緩和値と、組織のプロトン密度（有効には、遊離水含有量）を反映する。 造影剤の使用によって患者の部位における信号強度を変化させる際に、幾つかの 接近方法が利用される。例えば、造影剤は、Ｔ１、Ｔ２又はプロトン密度のいず れかを変化させるように設計される。 先行技術の簡単な説明 過去において、ＭＲＩに対する常磁性造影剤が、主に注目された。常磁性造影 剤は、縦（Ｔ１）及び横（Ｔ２）緩和率を増大させるために、主磁界内の小さな 局所磁石として作用する不対電子を含む。大部分の常磁性造影剤は、多くの場合 に、有毒な金属イオンである。毒性を減少させるために、これらの金属イオンは 、一般に、配位子を使用してキレート化される。合成常磁性金属イオン複合体は 、低毒性を有する。金属酸化物、最も顕著には酸化鉄がまた、ＭＲＩ造影剤とし て試験された。例えば、２０ｎｍ径よりも小さな酸化鉄の小粒子は常磁性緩和特 性を有するが、支配的効果は、体積磁気感受性による。このため、磁粉は、Ｔ２ 緩和において支配的な効果を有する。ニトロキシドは、同様に常磁性の別のクラ スのＭＲＩ造影剤である。これらは、比較的低い緩和度を有し、一般に、ＭＲＩ 造影剤として常磁性イオンよりも効果がない。これらの造影剤のすべては、ある 使用情況において毒性作用を受ける可能性があり、これらのいずれも、灌流造影 剤としての使用のために理想的ではない。 現ＭＲＩ造影剤は、多数の制限を被る。例えば、正造影剤は、固有のぜん動動 作と、呼吸又は心臓血管作用の動作から生ずる画像雑音の増大を顕示することが 知られる。Ｇｄ−ＤＴＰＡの如くポジティブ造影剤は、信号強度が、使用された パルスシーケンスとともに、剤の濃度に依るという一層複雑になる。例えば、胃 腸管からの造影剤の吸収は、十分に高い濃度の常磁性種が使用されないならば、 特に、小腸の遠位部分において、画像の解釈を複雑にする（Ｋｏｒｎｍｅｓｓｅ ｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．Ｉｍａｇｉｎｇ，６：１２４（１９ ８８））。比較により、ネガティブ造影剤は、パルスシーケンスにおける変動に 感応せず、より一貫的なコントラストを提供する。しかし、高濃度において、フ ェライトの如く微粒子は、例えば、腸液の吸収が行われ、超常磁性材料が濃縮さ れる結腸において、特に明らかである磁気感受性の人為物を生ずる。ネガティブ 造影剤は、一般に、脂肪に対して優れたコントラストを顕示するが、Ｔ１重付け 画像において、ポジティブ造影剤は、正常組織に対して優れたコントラストを呈 示する。多くの病理組織は、正常組織よりも長いＴ１とＴ２を呈示するために、 それらは、Ｔ１重付け画像において暗く、Ｔ２重付け画像において明るく見える 。これは、理想的な造影剤が、Ｔ１重付け画像において明るく、Ｔ２重付け画像 に おいて暗く見えるべきことを示す。現在利用可能なＭＲＩ造影剤の多くは、これ らの二重基準を満たさない。 毒性は、現造影剤での別の問題である。いずれの薬剤でも、毒性はあるが、毒 性は、一般に、用量に関連する。フェライトでは、しばしば、経口投与の後のお う吐とともに、膨満と血清における鉄の過渡的上昇の兆候がある。常磁性造影剤 Ｇｄ−ＤＴＰＡは、錯化剤ジエチレントリアミンペンタ酢酸と結合したガドリニ ウムの有機金属錯体である。結合していない遊離ガドリニウムイオンは、高毒性 である。さらに、例えば、胃が酸を分泌し、腸がアルカリを放出する胃腸管の特 異性は、胃腸使用中のｐＨの変化の結果として、錯体からの遊離ガドリニウム又 は他の常磁性剤のデカプリングと分離の可能性を高める。確かに、常磁性剤の用 量の最小化は、潜在的な毒性作用を最小にするために重要である。 磁気共鳴画像化において使用される新規の及び／又は向上した造影剤が、必要 とされる。本発明は、なかんずく、この重要な目的に向けられる。 １９９０年４月１０日に提出された出願番号第０７／５０７，１２５号に対す る上記のＭＲＩ造影剤における研究において、ＭＲＩ造影剤としてポリマー組成 と常磁性又は超常磁性剤との組み合わせにおいて気体がいかに使用されるかが、 開示された。そこでは、該ポリマーによって安定化された気体が、Ｔ２重付け画 像における信号強度を減少させるために、有効な磁気感受性造影剤としていかに 機能するか、そしてそのような系が、胃腸ＭＲＩ造影剤として使用されるために 、特に有効であることが示された。 Ｗｉｄｄｅｒ他の公表された出願ＥＰ−Ａ−０ ３２４ ９３８は、 熱変成生体適合性蛋白質、例えば、アルブミン、ヘモグロビンおよびコラーゲン 、から生成された安定化された微気泡型の超音波造影剤を開示する。 また、１９９１年Ｎａｐａ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ ｍｅｅｔｉｎｇ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｏｃｉｅｔｙ ｆｏｒ Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ｉ ｎ ＭｅｄｉｃｉｎｅにおいてＭｏｓｅｌｅｙ他によって為されたと考えられる 提示があり、”Ｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅｓ：Ａ Ｎｏｖｅｌ ＭＲ Ｓｕｓｃｅ ｐｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｎｔｒａｓｔ Ａｇｅｎｔ”と題する抄録において要 約される。使用された微気泡は、ヒトアルブミンのシェルで被覆された空気を含 む。本発明の安定化された気体入りミクロスフェアは、示唆されない。 しかし、脈管内使用に対して、発明者達は、最適結果のために、気体が軟質化 合物で安定化されることが有利であることを見いだした。アルブミンの如き蛋白 質は、気泡を安定化するために使用されるが、得られる気泡シェルは、脆性で、 非軟質である。これは、幾つかの理由のために望ましくない。まず、脆性被覆は 、気泡が膨張及び崩壊する能力を制限する。気泡は、身体内の種々の圧力部位に 出会う（例えば、心臓を通った循環により静脈系から動脈に移動する）ために、 脆性シェルは破壊し、気体は失われる。これは、有益なコントラストが気泡造影 剤から生体内で得られる有効な時間期間を制限する。また、そのような脆性破壊 片は、潜在的に有毒である。さらに、アルブミンの如く、脆性被覆の非軟質性と 、得られる堅い気泡は、生体内で圧力を測定することを極めて困難にする。 Ｑｕａｙの公表された出願ＷＯ ９３／０５８１９は、高Ｑ数を有す る気体が、安定な気体を形成するために理想的であることを開示するが、開示は 、本発明における如く、安定化と被包化よりも、気体の安定化に限定される。３ １ページに記載された好ましい実施態様において、ソルビトールが、粘度を増大 させるために使用され、これは、溶液における微気泡の寿命を延ばすと言われる 。また、含まれた気体が、あるＱ数又は拡散率因子を有することは、本発明の本 質的な必要条件ではない。 Ｌａｎｚａ他の公表された出願ＷＯ ９３／２０８０２は、バイレヤーの間の 水性空間を増大させたマルチラメラーリポソームであるか、又は非同心式におい てバイレヤー内にリポソームを入れ子にし、こうして、内部的に分離されたバイ レヤーを含む音反射性オリゴラメラ リポソームを開示する。超音波画像化を高 めるために、また、患者へ投与されたリポソームにおいて送達された薬剤を監視 する際の、超音波造影剤としての使用も記載されている。 Ｄ’Ａｒｒｉｇｏの米国特許第４，６８４，４７９号と第５，２１５，６８０ 号は、それぞれ、気体入り液体エマルジョンと脂質被覆微気泡を開示する。 本発明に例えば、安定化された気体入りミクロスフェアは、ＭＲＩに対して極 めて有効な非毒性造影剤であることが、発見された。 発明の要約 本発明は、磁気共鳴画像化のために使用される造影剤に向けられ、該造影剤は 、安定化された気体入りミクロスフェアを含んでなり、かつ気体は、生体適合性 気体、例えば、窒素又はペルフルオロプロパンであるが、気体前駆物質、例えば 、ペルフルオロオクチルブロミドに由来するものであってもよく、そしてミクロ スフェアは、安定化化合物、例えば、 生体適合性脂質又はポリマーから形成されることにより安定化されている。本発 明は、気体入りミクロスフェアの気体を形成するために、気体前駆物質を使用す ることにより、実施することができ、しばしば相当な付随する利点を有する。こ れらの気体前駆物質は、多数の因子によって活性化しうるが、好ましくは、温度 により活性化される。そのような気体前駆物質は、選択活性化又は転移温度にお いて、液体から気体に相を変化させる化合物である。こうして、活性化は、活性 化又は転移温度よりも低い点から高い点へ化合物の温度を増大させることにより 行われる。脂質は、モノレヤー又はバイレヤーの形態であり、そしてモノ又はバ イレヤー脂質は、一連の同心モノ又はバイレヤーを形成するために使用される。 こうして、脂質は、単一ラメラーリポソーム（一つのモノレヤー又はバイレヤー 脂質から成る）、オリゴラメラーリポソーム（２つ又は３つのモノレヤー又はバ イレヤー脂質から成る）、又は多重ラメラーリポソーム（３つを超えるモノレヤ ー又はバイレヤー脂質から成る）を形成するために使用されうる。好ましくは、 生体適合性脂質は、リン脂質を含んでなる。場合によって、造影剤は、常磁性及 び／又は超常磁性造影剤を含み、好ましくはミクロスフェアによって被包されて いてもよい。また、場合によって、造影剤は、さらに、液体フルオロカーボン化 合物、例えば、ペルフルオロカーボン、を含んでいてもよく、こうしてミクロス フェアをさらに安定化させる。好ましくは、フルオロカーボン液体は、ミクロス フェアによって被包される。 本発明はまた、磁気共鳴画像化造影剤として使用される安定化された気体又は 気体前駆物質入り脂質ベースミクロスフェアを調製するための方法であり、気体 又は気体前駆物質の存在下において、脂質の水性懸濁 液（即ち、脂質安定化化合物）を撹拌し、気体又は気体前駆物質入りミクロスフ ェアを生ずる段階を含んでなる方法に関する。望ましくは、撹拌段階は、好まし い最終生成物を達成するために、脂質のゲルから液晶への相転移温度よりも低い 温度において実施される。 気体前駆物質が使用される場合に、気体前駆物質入りミクロスフェア組成は、 一般に、気体前駆物質が、患者への投与まで液体である温度において維持される 。投与時において、温度は、所望ならば、患者に投与される気体及び結果物たる 気体入りミクロスフェアを形成するために、気体前駆物質を活性化するために上 昇される。別法として、気体前駆物質入りミクロスフェアは、所望ならば、温度 を上昇させることなく、投与され、そして気体前駆物質は、患者の体温の結果と して、気体を形成するようにされてもよい。組成物は、投与の前に、必要ならば 、撹拌される。 本発明は、さらに、特に灌流中、患者の内部部位の画像、なかでも血管系（心 臓血管を含む）の画像と、該患者の胃腸部位の画像を提供する方法であって、（ ｉ）上記の造影剤を患者へ投与することと、（ii）該部位の可視画像を得るため に、磁気共鳴画像化を使用して、患者を走査することとを含む方法に関する。 最後に、本発明はまた、特に灌流中、患者における、なかでも血管系（心臓血 管部位を含む）と、該患者の胃腸部位における疾患組織の存在を診断するための 方法であって、（ｉ）上記の造影剤を患者へ投与することと、（ii）部位におけ る疾患組織の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して、患者を走査す ることとを含む方法を含む。 発明のこれらと他の態様は、次の図面に関連して行われる、次の詳細 な説明からより明らかになるであろう。 図面の簡単な説明 第１図は、１０ミクロンの概略平均直径を有する安定化された気体入りミクロ スフェアの顕微鏡写真である。 第２図は、本発明の安定化された気体入りミクロスフェアを含んでなるＭＲＩ 造影剤をろ過及び／又は分配するための装置の概略図である。 第３図は、第２図の装置の部分の分解図である。 第４図は、該ミクロスフェアを包囲する磁性化領域における気体入りミクロス フェア径の影響を示すグラフである。磁性化領域（即ち、磁気感受性領域）は、 矢印によって示された横の部位によって示される。図示された如く、ミクロスフ ェアによって生じた磁気感受性効果又は磁性化領域は、ミクロスフェア径に対し て一定の関係を有する。ミクロスフェア径は、圧力の増大により減少し、磁気感 受性領域において比例して大きな減少を生ずる。弾力感圧性のミクロスフェアに 対して、ミクロスフェア径／磁気感受性動力学のこの現象は、ＭＲＩにより生体 内の圧力を非侵襲性に評価するために使用される。 第５図は、種々の気体に対する１／Ｔ₂（秒）対気体濃度の間の関係のグラフ 図である。気体入りミクロスフェアの試料は、種々の気体を使用して調製された 。それから、気体入りミクロスフェアは、Ｂｒｉｎｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｅｃ II ４．７ Ｔｅｓｌａ スキャナー（Ｂｒｕｋｅｒ，Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，ＭＡ ）を使用して、磁気共鳴により走査された。Ｔ２測定値が、スピンエコーシーケ ンスＴＲ＝８００ｍｓｅｃとＴＥ＝３０、４５、６０、７５と９０ｍｓｅｃと、 信号強度測定に対するこう配エコーシーケンスＴＲ＝６０ｍｓｅｃ、ＴＥ＝８、 ４０％フ リップで、試料を走査することにより行われた。第５Ａ図は、ペルフルオロプロ パン（ＰＦＰ）、ネオン、酸素、空気及び窒素ガスに対する１／Ｔ₂対気体濃度 を示す。第５Ｂ図は、キセノン、アルゴン、六フッ化イオウ（ＳＨＦ）、及びペ ルフルオロブタン（ＰＦＢ）ガスに対する１／Ｔ₂対気体濃度を示す。 第６図は、気体入りミクロスフェアサイズに対する圧力の影響の図である。 第７図は、０、５０、１００、１５０、２００、２５０、及び３００ｍｍＨｇ の上昇及び下降圧力を使用して、２．５％体積のネオンを含有する気体入りミク ロスフェアの１／Ｔ２（秒）に対する圧力の影響を示すグラフである。 第８図は、０、５０、１００、１５０、２００、２５０、及び３００ｍｍＨｇ の上昇及び下降圧力を使用して、２．５％体積のペルフルオロプロパン（ＰＦＰ ）を含有する気体入りミクロスフェアの１／Ｔ２（秒）における圧力の影響を示 すグラフである。 第９図は、０、５０、１００、１５０、２００、２５０、及び３００ｍｍＨｇ の上昇及び下降圧力を適用して、窒素気体入りミクロスフェアを使用するこう配 エコーパルスシーケンスの信号強度に対する圧力の影響を示すグラフ図である。 発明の詳細な説明 本発明は、なかんずく、安定化された気体入りミクロスフェアに向けられる。 特定の操作理論によって拘束されることは意図されないが、本発明は、気相、液 相及び固相が、異なる磁気感受性を有するという事実に少なくとも部分的による と考えられる。例えば、気体と水の界面にお いて、磁性領域は、変化され、これは、例えば、水素原子核のスピンの位相ずれ を生ずる。画像化において、これは、気／水界面に隣接して、信号強度の減少と して見られる。この効果は、Ｔ２重付け画像においてより目立ち、こう配エコー パルスシーケンスにおいて最も顕著である。効果は、狭帯域幅拡張読出しパルス シーケンスを使用することにより、増大される。こう配エコーパルスシーケンス におけるエコー時間が長いほど、効果は大きくなる（即ち、信号損失度及び量は より大きくなる）。 本発明の安定化された気体入りミクロスフェアは、この相磁気感受性差分と、 ここで詳細に記載される他の特性にも依ると考えられ、高性能レベル磁気共鳴画 像化造影剤を提供する。ミクロスフェアは、気体入りミクロスフェアを確立させ 、その後、磁気共鳴画像化において使用されるために必要とされた時間期間に対 してサイズと形状を保有させる安定化化合物のマトリックスから形成される、即 ち、作出される。これらの安定化化合物は、最も一般には、水の存在において、 モノレヤー又はバイレヤー等、及びミクロスフェアを形成させる疎水／親水特性 を有するものである。こうして、以下で希釈液と呼ばれる、水、生理食塩水、又 は他の水ベース媒体が、一般に、本発明の安定化された気体入りミクロスフェア 造影剤の態様である。 安定化化合物は、事実、多様な望ましい属性を安定化されたミクロスフェアへ 付与する化合物のマトリックスである。例えば、基本的な安定化化合物の溶解又 は分散に役立つ化合物が、都合が良いことが判明した。安定化されたミクロスフ ェアのさらに他の要素は、ミクロスフェアが作られた時点において気体であるか 、又は温度の如く活性化因子に応答して、液相から気相に変換される気体前駆物 質である。本発明の安定化さ れた気体入り造影剤の多様な態様が、ミクロスフェアを含んでなる気体を始とし て、以下に記載される。 気体及び気体前駆物質 発明のミクロスフェアは、気体及び／又は気体前駆物質を被包する。本明細書 で使用される場合、用語「気体入り及び／又は気体前駆物質入り」とは、本発明 が向けられたミクロスフェアが、少なくとも約１０％の気体及び気体前駆物質、 好ましくは、少なくとも約２５％の気体及び気体前駆物質、より好ましくは、少 なくとも約５０％の気体及び気体前駆物質、さらに好ましくは、少なくとも約７ ５％の気体及び気体前駆物質、最も好ましくは、少なくとも約９０％の気体及び 気体前駆物質を含んでなる内部容積を有する。使用に際し、気体の存在が重要で ある場合に、内部ミクロスフェア容積が、少なくとも約１０％の気体、好ましく は、少なくとも約２５％、５０％、７５％、最も好ましくは、少なくとも約９０ ％の気体を含むことが好ましい。 多様な生体適合性気体及び気体前駆物質のいずれも、本発明の気体及び気体前 駆物質入りミクロスフェアにおいて使用できる。そのような気体としては、例え ば、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、アルゴン、フッ素、キセノン、ネオン、ヘ リウム、又はそれらの任意のすべての組み合わせである。そのような気体の中で 、窒素が好ましい。同様に、多様なペルフルオロカーボン、ハイドロフルオロカ ーボン、及び六フッ化イオウの如く多様なフッ素化気体化合物が、気体入りミク ロスフェアの調製において使用される。また、Ｑｕａｙの公表された出願ＷＯ ９３／０５８１９において議論され、そこで記載された高「Ｑ」因子気体を含む 気体も使用でき、この開示は、引用することにより本明細書の内容とな る。さらに、常磁性気体又は¹⁷Ｏの如く気体が、使用される。すべての気体の中 で、ペルフルオロカーボンと六フッ化イオウが好ましい。適切なペルフルオロカ ーボン気体は、例えば、ペルフルオロブタン、ペルフルオロシクロブタン、ペル フルオロメタン、ペルフルオロエタン、ペルフルオロプロパンとペルフルオロペ ンタンであり、最も好ましくは、ペルフルオロプロパンである。また、ペルフル オロカーボン気体の如く、異なるタイプの気体と、酸素等の別のタイプの気体の 混合物が、好ましい。事実、気体の組み合わせは、磁気共鳴画像化応用において 特に有益であると考えられる。下記の実施例における表３は、脂質ミクロスフェ アにおける種々の気体に対するＲ２（１／Ｔ２／ｎｍｏｌ／Ｌ．ｓｅｃ−１）を 示す（Ｒ２緩和値が高いほど、ＭＲＩ造影剤としてより有効である）。表３が示 す如く、異なる気体入りミクロスフェアの緩和度において劇的な差異がある。 気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアが、安定化化合物から作られるとい う必要条件に拘わらず、高安定気体が、同様に使用されることが好ましい。高安 定気体とは、水性媒体において低い（限定）溶解性と拡散性を有する気体から選 択された気体を意味する。ペルフルオロカーボンの如く気体は、拡散性が低く、 比較的不溶解性であり、それ自体、水性媒体において気泡の形態へ安定化しやす い。 気体前駆物質の使用は、本発明の随意的な実施態様である。特に、ペルフルオ ロカーボンは、気体前駆物質としての使用のために適することがわかった。熟練 者は認める如く、所定のペルフルオロカーボンは、気体及び気体前駆物質入りミ クロスフェアを作るために、気体前駆物質として、即ち、本発明のミクロスフェ アが最初に作られた液体状態におい て使用されるか、又は直接に気体として、即ち、気体状態において使用される。 そのようなペルフルオロカーボンが気体又は液体であるかは、もちろん、液相／ 気相転移温度又は沸点に依存する。例えば、より好ましいペルフルオロカーボン の一つは、２７℃の液相／気相転移温度又は沸点を有するペルフルオロペンタン であり、通常の室温において液体であるが、温度が液相／気相転移温度又は沸点 よりも高い人体の環境において気体になることを意味する。こうして、標準状況 下で、ペルフルオロペンタンは、気体前駆物質である。さらに他の例として、ペ ルフルオロペンタンの次に近い同族体として、ペルフルオロブタンとペルフルオ ロヘキサンがある。ペルフルオロブタンの液相／気相転移温度は、４℃であり、 ペルフルオロヘキサンのそれは、５７℃であり、前者を潜在的に気体前駆物質に し、一般に気体としてより有益にするが、後者は、一般に、その高沸点のために 、異常な状況下を除いて、気体前駆物質である。 本発明の別の態様は、本発明のミクロスフェアの使用の温度において液体にな るフッ素化化合物、なかでもペルフルオロカーボン化合物の使用であり、該気体 及び気体前駆物質入りミクロスフェアの安定化を促進又は向上させる。そのよう なフッ素化化合物としては、ＤｕＰｏｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｗｉｌｍｉｎｇｔ ｏｎ，ＤＥ）によって製造されるフッ素化界面活性剤、例えば、Ｚｏｎｙｌ^TM、 並びに液体ペルフルオロカーボンの如く、多様な液体フッ素化化合物がある。好 ましくは、フッ素化化合物は、ペルフルオロカーボンである。付加的な安定剤と して使用される適切なペルフルオロカーボンとしては、ペルフルオロオクチルブ ロミド（ＰＦＯＢ）、ペルフルオロデカリン、ペルフルオロドデカリン、 ペルフルオロオクチルイオジド、ペルフルオロトリプロピルアミン、及びペルフ ルオロトリブチルアミンがある。一般に、６炭素原子長を超えるペルフルオロカ ーボンは、気体ではなく、即ち、ガス状ではなく、むしろ標準体温において、液 体であり、即ち、液状である。しかし、これらの化合物は、付加的に、本発明に おいて使用された安定化された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアを調製 する際に使用される。好ましくは、このペルフルオロカーボンは、ペルフルオロ オクチルブロミド又はペルフルオロヘキサンであり、室温において液状である。 存在する気体は、例えば、窒素又はペルフルオロプロパンであるか、又はペルフ ルオロカーボン、例えば、ペルフルオロペンタンである気体前駆物質から誘導さ れる。その場合、本発明のミクロスフェアは、所与の例に対して、ペルフルオロ プロパン（気体）又はペルフルオロペンタン（気体前駆物質）とペルフルオロオ クチルブロミド（液体）であるペルフルオロカーボンの混合物から調製される。 いずれの理論によっても拘束される意図はないが、液体フッ素化化合物が、気体 とミクロスフェアと膜表面の間の界面において位置すると考えられる。こうして 、安定化化合物の内面において液体フッ素化化合物、例えば、ミクロスフェアを 形成するために使用された生体適合性脂質のさらに他の安定層が形成され、この ペルフルオロカーボン層はまた、気体がミクロスフェア膜を通って拡散するのを 防止する目的に役立つ。本発明における文脈内での気体前駆物質は、製造及び／ 又は保管温度において液体であるが、少なくとも使用時間中、気体になる。 こうして、ペルフルオロカーボンの如く、液体フッ素化化合物は、本発明のミ クロスフェアを作るために通常使用される気体又は気体前駆物 質と組み合わされた時、気体又は気体前駆物質単独では達成されない付加的な安 定度を与えることが発見された。こうして、ペルフルオロカーボン気体前駆物質 、例えば、ペルフルオロペンタンの如く気体又は気体前駆物質を、液−気相転移 温度が患者の体温よりも高い患者への投与の後に、液体のままであるペルフルオ ロカーボン、例えば、ペルフルオロオクチルブロミドとともに使用することは、 本発明の範囲内にある。 生体適合性気体又は気体前駆物質は、安定化された気体及び気体前駆物質入り ミクロスフェアを形成するために使用される。「生体適合性」とは、人の患者の 組織へ導入された時、アレルゲン性応答と疾病状態を含む非許容毒性を示さない 、好ましくは不活性の、気体又は気体前駆物質を意味する。そのような気体又は 気体前駆物質はまた、本明細書に記載されるような、気体及び気体前駆物質入り ミクロスフェアを作るために適切である。 気体又は気体前駆物質入りミクロスフェアのサイズは、ここで記載された安定 化化合物が使用される時、安定化され、そしてミクロスフェアのサイズは、特定 の意図したＭＲＩ最終用途のために調整される。例えば、脈管構造の磁気共鳴画 像化は、せいぜい約３０μ径、好ましくはより小さく、例えば、せいぜい約１２ μ径のミクロスフェアを必要とする。気体入りミクロスフェアのサイズは、所望 ならば、マイクロエマルシフィケーション、渦流化、押し出し、ろ過、超音波処 理、均質化、反復冷凍及び解凍サイクル、規定サイズの孔を通した加圧下の押し 出し、及び類似の方法を含む、多様な手順によって調整される。 脈管内使用に対して、ミクロスフェアは、一般に、３０μ以下の平均径であり 、好ましくは１２μ以下の平均径である。標的脈管内使用に対 して、例えば、腫瘍の如くある組織へ結合するために、ミクロスフェアは、認め られるところ、１ミクロン以下、１００ｎｍ以下の径でさえある。腸溶性、即ち 、胃腸内使用に対して、ミクロスフェアは、ずっと大きく、例えば、最大１ミリ メートルの大きさであるが、２０μ〜１００μ平均径のミクロスフェアが、好ま しい。 上記の如く、本発明の実施態様はまた、それらの調製、形成及び使用に関して 、温度によって活性化される気体前駆物質をも含むことができる。さらに、標準 体温（３７℃）に比較的近い温度以下において液状から気体状への相転移を受け る一連の気体前駆物質と、１０ミクロンの最大サイズのミクロスフェアを形成す るために必要とされる乳化小滴のサイズを掲げる表が以下に提示される。 出典：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ．Ｗｅ ａｓｔ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｒ．Ｌｉｄｅ，ｅｄｓ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄａ（１９８９−１９９０） また、規定サイズのミクロスフェアを形成するために使用されるうる気体前駆 物質を含むリストが以下で提示される。しかし、リストは、その目的のために他 の気体前駆物質を使用することも可能であるために、限定的であるものではない 。事実、多種多様な用途に対して、少なくともある使用時点において気体を提供 するように、適切な温度を通過することにより、気相への相転移を受けることが できる限り、事実上任意の液体が、気体前駆物質を作るために使用される。本発 明において使用される適切な気体前駆物質は、次のものである。ヘキサフルオロ アセトン、イソプロピルアセチレン、アレン、テトラフルオロアレン、三フッ化 ホウ素、イソブタン、１，２−ブタジエン、２，３−ブタジエン、１，３−ブタ ジエン、１，２，３−トリクロロー２−フルオロー１，３−ブタジエン、２−メ チルー１，３−ブタジエン、ヘキサフルオロー１，３−ブタジエン、ブタジイン 、１−フルオローブタン、２−メチルーブタン、デカフルオロブタン、１−ブテ ン、２−ブテン、２−メチル−１−ブテン、３−メチル−１−ブテン、ペルフル オロー１−ブテン、ペルフルオロー２−ブテン、４−フェニルー３−ブテンー２ −オン、２−メチルー １−ブテンー３−イン、硝酸ブチル、１−ブチン、２−ブチン、２−クロロー１ ，１，１，４，４，４−ヘキサフルオローブチン、３−メチルー１−ブチン、ペ ルフルオロー２−ブチン、２−ブロモーブチルアルデヒド、硫化カルボニル、ク ロトノニトリル、シクロブタン、メチルーシクロブタン、オクタフルオローシク ロブタン、ペルフルオローシクロブテン、３−クロロシクロペンテン、オクタフ ルオロシクロペンテン、シクロプロパン、１，２−ジメチルーシクロプロパン、 １，１−ジメチルシクロプロパン、１，２−ジメチル−シクロプロパン、エチル シクロプロパン、メチルシクロプロパン、ジアセチレン、３−エチルー３−メチ ル、ジアジリジン、１，１，１−トリフルオロジアゾエタン、ジメチルアミン、 ヘキサフルオロジメチルアミン、ジメチルエチルアミン、ビスー（ジメチルホス フィン）アミン、ペルフルオロヘキサン、２，３−ジメチル−２−ノルボルナン 、ペルフルオロジメチルアミン、塩化ジメチルオキソニウム、１，３−ジオキソ ランー２−オン、４−メチルー１，１，１，２−テトラフルオロエタン、１，１ ，１−トリフルオロエタン、１，１，２，２−テトラフルオロエタン、１，１， ２−トリクロロー１、２、２−トリフルオロエタン、１，１−ジクロロエタン、 １，１−ジクロロ−１，２，２，２−テトラフルオロエタン、１，２−ジフルオ ロエタン、１−クロロ−１，１，２，２，２−ペンタフルオロエタン、２−クロ ロ−１，１−ジフルオロエタン、１，１−ジクロロ−２−フルオロエタン、１− クロロ−１，１，２，２−テトラフルオロエタン、２−クロロ−１，１−ジフル オロエタン、クロロエタン、クロロペンタフルオロエタン、ジフルオロトリフル オロエタン、フルオロエタン、ヘキサフルオロエタン、ニトロペンタフルオロエ タン、ニトロソペンタフルオロ エタン、ペルフルオロエチルアミン、エチルビニルエーテル、１，１−ジクロロ エタン、１，１−ジクロロー１，２−ジフルオロエタン、１，２−ジフルオロエ タン、メタン、トリフルオロメタンスルホニルクロリド、トリフルオロメタンス ルホニルフルオリド、ブロモジフルオロニトロソメタン、ブロモフルオロメタン 、ブロモクロロフルオロメタン、ブロモトリフルオロメタン、クロロジフルオロ ニトロメタン、クロロジニトロメタン、クロロフルオロメタン、クロロトリフル オロメタン、クロロジフルオロメタン、ジブロモジフルオロメタン、ジクロロジ フルオロメタン、ジクロロフルオロメタン、ジフルオロメタン、ジフルオロヨー ドメタン、ジシラノメタン、フルオロメタン、ヨードメタン、ヨードトリフルオ ロメタン、ニトロトリフルオロメタン、ニトロソトリフルオロメタン、テトラフ ルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、トリフルオロメタン、２−メチルブ タン、メチルエーテル、メチルイソプロピルエーテル、乳酸メチル、亜硝酸メチ ル、硫化メチル、メチルビニルエーテル、ネオン、ネオペンタン、窒素（Ｎ₂） 、亜酸化窒素、１，２，３−ノナデカン−トリカルボン酸−２−ヒドロキシトリ メチルエステル、１−ノネンー３−イン、酸素（Ｏ₂）、１，４−ペンタジエン 、ｎ−ペンタン、ペルフルオロペンタン、４−アミノー４−メチルペンタン−２ −オン、１−ペンテン、２−ペンテン（シス）、２−ペンテン（トランス）、３ −ブロモペント−１−エン、ペルフルオロペント−１−エン、テトラクロロフタ ル酸、２，３，６−トリメチルピペリジン、プロパン、１，１，１，２，２，３ −ヘキサフルオロプロパン、１，２−エポキシプロパン、２，２−ジフルオロプ ロパン、２−アミノプロパン、２−クロロプロパン、ヘプタフルオロ−１−ニト ロプロパン、ヘプタフルオロ −１−ニトロソプロパン、ペルフルオロプロパン、プロペン、ヘキサフルオロプ ロパン、１，１，１，２，３，３−ヘキサフルオロ−２，３−ジクロロプロパン 、１−クロロプロパン、クロロプロパン−（トランス）、２−クロロプロパン、 ３−フルオロプロパン、プロピン、３，３，３−トリフルオロプロピン、３−フ ルオロスチレン、六フッ化イオウ、イオウ（ジ）−デカフルオリド（Ｓ₂Ｆ₁₀） 、２，４−ジアミノトルエン、トリフルオロアセトニトリル、過酸化トリフルオ ロメチル、硫化トリフルオロメチル、六フッ化タングステン、ビニルアセチレン 、ビニルエーテル、及びキセノン。 すでに示されたペルフルオロカーボンは、気体又は気体前駆物質と、付加的な 安定化化合物としての使用のために好ましい。そのようなペルフルオロカーボン 組成において、飽和ペルフルオロカーボン、不飽和ペルフルオロカーボン、及び 環状ペルフルオロカーボンが含まれる。通常好ましい飽和ペルフルオロカーボン は、式CnＦ_2n+2を有し、ここで、ｎは１〜１２であり、好ましくは２〜１０であ り、より好ましくは４〜８であり、最も好ましくは５である。適切な飽和ペルフ ルオロカーボンの例は、次のものである。テトラフルオロメタン、ヘキサフルオ ロエタン、オクタフルオロプロパン、デカフルオロブタン、ドデカフルオロペン タン、ペルフルオロヘキサン、及びペルフルオロヘプタンである。式Ｃ_nＦ_2n、 ここでｎは３〜８、好ましくは３〜６を有する環状ペルフルオロカーボンがまた 、好ましく、例えば、ヘキサフルオロシクロプロパン、オクタフルオロシクロブ タンとデカフルオロシクロペンタンである。 限定された溶解度の気体を使用することにより、ミクロスフェアの効力を最適 化することは、本発明の一部である。限定された溶解度とは、 周囲水性媒体における溶解度のために、ミクロスフェアから拡散する気体の能力 を意味する。水性媒体における大きな溶解度は、気体が該ミクロスフェアから拡 散する傾向を有する如く、ミクロスフェアにおける気体にこう配を課する。他方 、水性媒体における低い溶解度は、ミクロスフェアからの気体の拡散が妨げられ る如く、ミクロスフェアと界面の間のこう配を減少又は除去する。好ましくは、 ミクロスフェアにおいてトラップされた気体は、酸素の溶解度、即ち、３２部の 水において１部の気体、よりも低い溶解度を有する。Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｇａｓ Ｄａｔａ Ｂｏｏｋ，１９６６，Ｍａｔｈｅｓｏｎ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｉｎｃ ．を参照せよ。さらに好ましくは、ミクロスフェアにおいてトラップされた気体 は、空気よりも低い水における溶解度を有する。なおさらに好ましくは、ミクロ スフェアにおいてトラップされた気体は、窒素よりも低い水における溶解度を有 する。 安定化化合物 一つ以上の安定化化合物が使用され、ミクロスフェアを形成し、気体又は気体 前駆物質の継続した被包化を保証する。ペルフルオロプロパン又は六フッ化イオ ウの如く、比較的不溶性の非拡散性気体に対してさえも、改良ミクロスフェア製 法が、一つ以上の安定化化合物が気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアの形 成において使用される時、獲得される。これらの化合物は、サイズ、形状及び／ 又は他の属性に関して、ミクロスフェアの安定性と保全性を維持する。 ここで使用された用語「安定」又は「安定化」とは、ミクロスフェアが、減成 に実質的に耐性がある、即ち、使用期間に対してミクロスフェア構造、あるいは 被包気体又は気体前駆物質の損失に耐性があることを 意味する。典型的に、発明のミクロスフェアは、良好な貯蔵寿命を有し、しばし ば通常環境条件下で、少なくとも約２又は３週間の期間に対してその原構造の少 なくとも約９０パーセント体積を保有するが、この期間は、少なくとも一月、好 ましくは、少なくとも２月、さらに好ましくは、少なくとも６月、なおさらに好 ましくは、１８月、最も好ましくは３年であることが、好ましい。こうして、気 体及び気体前駆物質入りミクロスフェアは、一般に、通常環境条件下におけるよ りも高又は低い温度と圧力の如く、時々は悪条件下さえも、良い貯蔵寿命を有す る。 本発明のミクロスフェアの安定性は、該ミクロスフェアが作られる材料に少な くとも部分的に帰せられ、しばしば、付加的な安定添加剤を使用することは必要 ではないが、そうすることは随意的であり、しばしば好ましい。そしてそのよう な付加的な安定化剤とそれらの特性は、ここで詳細に説明される。本発明におい て使用されたミクロスフェアが構成される材料は、好ましくは生体適合性脂質又 はポリマー材料であり、これらの中で、生体適合性脂質が、特に好ましい。加え て、処方の容易さのために、即ち、投与の直前にミクロスフェアを生成する能力 のために、これらのミクロスフェアは、インサイチューで便利に作られる。 発明のミクロスフェアを調製する際に使用される脂質とポリマーは、生体適合 性である。「生体適合性」とは、人の患者の組織へ導入された時、アレルゲン性 応答と疾病状態を含む非許容毒性を生じない脂質又はポリマーを意味する。好ま しくは、脂質又はポリマーは、不活性である。 生体適合性脂質 生体適合性脂質材料に対して、そのような脂質材料は、しばしば「両親媒性」 （即ち、極性脂質）と呼ばれるものであることが好ましく、一 方において、親油性、即ち、疎水性であり、他方において、同時に、疎油性、即 ち、親水性である物質の組成を意味する。 親水基は、水に対して親和力を有する荷電体又は他の基である。天然及び合成 リン脂質は、本発明において使用された安定化ミクロスフェアを調製する際に有 益な脂質の例である。それらは、親水性の荷電リン酸塩「頭」基を、疎水性の長 い炭化水素尾に結合してなる。この構造により、リン脂質は、単一バイレヤー（ ユニラメラー）配置を達成することができ、この場合、非水溶性炭化水素尾のす べては、相互に接触し、高荷電リン酸塩頭領域を極水性環境と自由に相互作用さ せる。一連の同心バイレヤー、即ち、オリゴラメラーとマルチラメラー、が可能 であると認められ、そしてそのような配置はまた、本発明の見地であると考えら れる。そのようなバイレヤー配置を形成する能力は、本発明において有益な脂質 材料の一つの特徴である。 脂質は、代替的に、モノレヤーの形態であり、そしてモノレヤー脂質は、単一 モノレヤー（ユニラメラー）配置を形成するために使用される。また、モノレヤ ー脂質は、一連の同心モノレヤー、即ち、オリゴラメラー又はマルチラメラーを 形成するために使用され、そのような配置も、本発明の範囲内にあると考えられ る。 また、本発明の安定化されたミクロスフェアの達成のために、ミクロスフェア が、安定化化合物として使用された脂質のゲルから液晶への相転移温度よりも低 い温度において調製されることは、都合が良いことがわかった。この相転移温度 は、脂質バイレヤーがゲル状態から液晶状態へ変換する温度である。例えば、Ｃ ｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７４ ２４９，２ ５１２−２５２１を参照せ よ。 一般に、ゲル状態から液晶状態への相転移温度が高いほど、気体及び気体前駆 物質入りミクロスフェアは、所定の温度においてより不浸透性になる。飽和ジア シル−ｓｎ−グリセロー３−ホスホコリンの主鎖融解転移に対して、Ｄｅｒｅｋ Ｍａｒｓｈ，ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｂｉｌａｙｅｒ ｓ （ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，ＦＬ １９９０）、ｐ．１ ３９を参照せよ。いろいろな脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度は、技 術における当業者には容易に明らかになり、例えば、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ， ｅｄ．，Ｌｉｐｏｓｏｍｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．Ｉ，１−１８（Ｃ ＲＣ Ｐｒｅｓｓ，１９８４）において記載される。次の表は、代表的な脂質と それらの相転移温度を列挙する。 ＊Ｄｅｒｅｋ Ｍａｒｓｈ，”ＣＲＣ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｌｉｐｉｄ Ｂｕｌａｙｅｒｓ”，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉ ｄａ（１９９０），ｐａｇｅ１３９ 気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアが形成される脂質へ、少なくとも少 量の、即ち、全脂質の約１〜約１０モルパーセント、の負荷電脂質を混入するこ とにより、本発明において使用されたミクロスフェアの安定性を高めることが、 可能であることがわかった。適切な負荷電脂質としては、例えば、ホスファチジ ルセリン、ホスファチジン酸と脂肪 酸がある。そのような負荷電脂質は、融合することにより破裂するミクロスフェ アの傾向を中和することにより、付加安定性を設ける、即ち、負荷電脂質は、ミ クロスフェアの外面において、他のミクロスフェアにおける同様の荷電外側層に よって反発される一様な負荷電層を確立する傾向がある。このようにして、ミク ロスフェアは、相互に接触するほど近接し、しばしば、それぞれのミクロスフェ アの膜又は皮の破裂と、接触するミクロスフェアの単一のより大きなミクロスフ ェアへの合併につながるのを防止される傾向がある。この合併プロセスの継続は 、もちろん、ミクロスフェアの大きな減成につながる。 ミクロスフェアを形成するために使用される脂質材料又は他の安定化化合物は また、好ましくは、軟質であり、これは、気体及び気体前駆物質入りミクロスフ ェアに関して、例えば、ミクロスフェアよりも小さなサイズの開口を通過するた めに、その形状を変更する構造の能力を意味する。 本発明において使用される安定化されたミクロスフェアを調製するために脂質 を選択する際に、非常に多様な脂質が、それらの構成のために適切であることが わかる。特に有益なのは、リポソーム製法のために適切であるとして、当業者に 公知の材料又はその組み合わせである。使用された脂質は、天然、合成又は半合 成起源である。 本発明において使用された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアを調製す るために使用される脂質としては、限定するものではないが、脂肪酸、リソ脂質 、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリストイルホスファチジルコリン、 ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジラウロイルホスファチジルコリン 、ジパルミトイルホスファチジルコ リン（ＤＰＰＣ）、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）を含む飽 和及び不飽和脂質を有するホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジル エタノールアミンとジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ ）の如くホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチ ジルグリセロール、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリンの如くス フィンゴ脂質、ガングリオシドＧＭ１とＧＭ２の如く糖脂質、グルコ脂質、スル ファチド、糖スフィンゴ脂質、ジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）の 如くホスファチジン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、オレイン酸、ポリエチレ ングリコール、即ち、ＰＥＧ化脂質、キチン、ヒアルロン酸、又はポリビニルピ ロリドンの如くポリマーを保持する脂質、スルホン化単、二、オリゴ又は多糖類 を保持する脂質、コレステロール、コレステロール硫酸とコレステロールヘミコ ハク酸、トコフェロールヘミコハク酸、エーテル及びエステル結合脂肪酸を有す る脂質、ポリマー化脂質（非常に多数が技術において公知である）、ジアセチル リン酸、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、カルジオリピン、６〜８炭素長の 短鎖脂肪酸を有するリン脂質、非対称アシル鎖（例えば、６炭素の１アシル鎖と １２炭素の別のアシル鎖）を有する合成リン脂質、セラミド、ポリオキシエチレ ン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪アルコール、ポリオキシエチレン脂 肪アルコールエーテル、ポリオキシエチレン化ソルビタン脂肪酸エステル、グリ セロールポリエチレングリコールオキシステアリン酸、グリセロールポリエチレ ングリコールリシノール酸、エトキシル化ダイズステロール、エトキシル化ひま し油、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンポリマー、及びポリオキシエ チレン脂肪酸ステアリン酸の如 くニオソームを含む非イオンリポソーム、コレステロール硫酸、コレステロール 酪酸、コレステロールイソ酪酸、コレステロールパルミチン酸、コレステロール ステアリン酸、ラノステロール酢酸、エルゴステロールパルミチン酸、及びフィ トステロールｎ酪酸を含むステロール脂肪族酸エステル、コレステロールグルク ロニド、ラノステロールグルクロニド、７−デヒドロコレステロールグルクロニ ド、エルゴステロールグルクロニド、コレステロールグルコン酸、ラノステロー ルグルコン酸、及びエルゴステロールグルコン酸を含む糖酸のステロールエステ ル、ラウリルグルクロニド、ステアロイルグルクロニド、ミリストイルグルクロ ニド、ラウリルグルコン酸、ミリストイルグルコン酸、及びステアロイルグルコ ン酸を含む糖酸とアルコールのエステル、スクロースラウラート、フルクトース ラウラート、スクロースパルミタート、スクロースステアラート、グルクロン酸 、グルコン酸、アカール酸、及びポリウロン酸を含む糖類と脂肪族酸のエステル 、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘデラゲニン、オレアノール酸、及びジギ トキシゲニンを含むサポニン、グリセロールジラウラート、グリセロールトリラ ウラート、グリセロールジパルミタート、グリセロール、及びグリセロールトリ パルミタート、グリセロールジステアラート、グリセロールトリステアラート、 グリセロールジミリスタート、グリセロールトリミリスタートを含むグリセロー ルエステル、ｎデシルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール 、セチルアルコール、及びｎオクタデシルアルコールを含む長鎖アルコール、６ −（５−コレステンー３β−イルオキシ）−１−チオーβ−Ｄ−ガラクトピラノ シド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレステンー３β−イルオキシ ）ヘキシルー６−アミノー６−デ オキシー１−チオーβ−Ｄ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステンー３β −イルオキシ）ヘキシルー６−アミノー６−デオキシー１−チオーα−Ｄ−マノ ピラノシド、１２−（（（７’−ジエチルアミノクマリンー３−イル）カルボニ ル）メチルアミノ）−オクタデカン酸、Ｎ−［１２−（（（７’−ジエチルアミ ノクマリンー３−イル）カルボニル）メチルーアミノ）オクタデカノイル］−２ −アミノパルミチン酸、コレステリル（４’−トリメチルーアンモニオ）ブタン 酸、Ｎ−スクシニルジオレオイルホスファチジルエタノール−アミン、１，２− ジオレオイルーｓｎ−グリセロール、１，２−ジパルミトイルーｓｎ−３−スク シニルグリセロール、１，３−ジパルミトイルー２−スクシニルグリセロール、 １−ヘキサデシルー２−パルミトイルーグリセロリンエタノールアミンとパルミ トイルホモシステイン、及び／又はそれらの組み合わせである。 所望ならば、ＤＯＴＭＡ、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイロキシ）プロピル −Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド、ＤＯＴＡＰ、１，２−ジオレ オイロキシ−３−（４’−トリメチルーアンモニオ）ブタノイルーｓｎ−グリセ ロールが使用される。一般に、リポソームにおけるカチオン脂質対非カチオン脂 質のモル比は、例えば、１：１０００、１：１００、好ましくは、２：１〜１： １０、より好ましくは、１：１〜１：２．５の範囲であり、最も好ましくは、１ ：１である（モル量カチオン脂質対モル量非カチオン脂質、例えば、ＤＰＰＣ、 の比）。非常に多様な脂質は、カチオン脂質がミクロスフェアを構成するために 使用される時、非カチオン脂質を含む。好ましくは、この非カチオン脂質は、ジ パルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジル エタノールアミン、又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミンである。 上記のカチオン脂質の代わりに、ポリリシン又はポリアルギニンの如くカチオン ポリマーを保持する脂質、並びにホスホン酸アルキル、ホスフィン酸アルキル、 及び亜リン酸アルキルがまた、ミクロスフェアを構成するために使用される。 最も好ましい脂質は、リン脂質であり、好ましくは、ＤＰＰＣ、ＤＰＰＥ、Ｄ ＰＰＡとＤＳＰＣであり、最も好ましくは、ＤＰＰＣである。 加えて、気体及び気体前駆物質入り混合ミセルの形態における本発明において 使用された安定化ミクロスフェアを調製するために使用される飽和及び不飽和脂 肪酸の例は、直線又は分岐形態において、好ましくは、１２〜２２炭素原子を含 む分子である。イソプレノイド単位及び／又はプレニル基から成る炭化水素が、 同様に使用される。適切な飽和脂肪酸の例は、限定されるものではないが、ラウ リン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸及びステアリン酸である。使用される不飽 和脂肪酸の例は、限定的ではないが、ラウロレイン酸、フィセテリン酸、ミシス トレイン酸、パルミトレイン酸、ペトロセリン酸及びオレイン酸である。使用さ れる分岐脂肪酸の例は、限定的ではないが、イソラウリン酸、イソミリスチン酸 、イソパルミチン酸及びイソステアリン酸である。飽和及び不飽和基のほかに、 気体及び気体前駆物質入り混合ミセルはまた、５炭素イソプレノイド及びプレニ ル基から成る。 生体適合性ポリマー 本発明において使用される気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアを調製す るための安定化化合物として有益な生体適合性ポリマーは、天然、半合成（修飾 天然）又は合成起源のいずれかである。ここで使用さ れた如く、用語ポリマーは、２つ以上の繰返し単量体単位、好ましくは１０以上 の繰返し単量体単位からなる化合物を表記する。ここで使用された句半合成ポリ マー（又は修飾天然ポリマー）は、ある方式で化学的に修飾された天然ポリマー を表記する。本発明における使用のために適する例示の天然ポリマーは、天然に 発生する多糖類である。そのような多糖類は、例えば、アラビナン、フルクタン 、フカン、ガラクタン、ガラクツロナン、グルカン、マンナン、キシラン（例え ば、イヌリン）、レバン、フコイダン、カラゲニン、ガラトカロロース、ペクチ ン酸、ペクチン、アミロース、プルラン、グリコーゲン、アミロペクチン、セル ロース、デキストラン、プストラン、キチン、アガロース、ケラタン、コンドロ イタン、デルマタン、ヒアルロン酸、アルギン酸、キサンタンゴム、デンプン、 及びエリトロース、トレオース、リボース、アラビノース、キシロース、リキソ ース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース 、ガラクトース、タロース、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシ コース、フルクトース、ソルボース、タガトース、マンニトール、ソルビトール 、ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、セロビオース、グリシ ン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、 アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒスチジン、グルクロン 酸、グルコン酸、グルコ糖酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、 ガラクトサミン、ノイラミン酸、天然に発生するそれらの誘導体等のアルドース 、ケトース、酸又はアミンの一つ以上を含むものの如く多様な他の天然単独重合 体又はヘテロ重合体である。例示の半合成ポリマーは、カルボキシメチルセルロ ース、ヒドロキシメチルセルロ ース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、及びメトキシ セルロースである。本発明における使用のために適する例示の合成ポリマーは、 ポリエチレン（例えば、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレン、及びポ リエチレンテレフタレート）、ポリプロピレン（例えば、ポリプロピレングリコ ール）、ポイウレタン（例えば、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ポリ塩化ビ ニル、ポリビニルピロリドン）、ナイロンの如くポリアミド、ポリスチレン、ポ リ乳酸、フッ素化炭化水素、フッ素化炭素（例えば、ポリテトラフルオロエチレ ン）、ポリメチルメタクリレート、及びそれらの誘導体である。そのようなポリ マーベースミクロスフェアの調製方法は、その開示が参照として完全にここに取 り入れられたＵｎｇｅｒ米国特許第５，２０５，２９０号において記載及び参照 されたものの如く、当該技術分野において公知な情報と本開示が結合される時、 本開示をいったん習得したならば、当業者には容易に明らかにあるであろう。 好ましくは、胃腸管において使用されることを意図される時、使用されたポリ マーは、比較的高い水結合力を有するものである。例えば、胃腸部位において使 用された時、高水結合力を有するポリマーは、非常に多量の遊離水を結着させ、 胃腸管を通して大容積の液体をポリマーに保持させ、これにより、管を充填及び 膨張させる。充填及び膨張した胃腸管は、部位のより明確な写真を撮影させる。 加えて、胃腸部位の画像化が望ましい時、好ましくは、使用されたポリマーは、 胃腸部位で実質的に減成及び吸収されないものである。胃腸管内の代謝と吸収の 最小化が、管からの造影剤の除去と、この減成の結果として、管内の気体の形成 を避けるために好ましい。さらに、特に胃腸内用途が考えられる場合に、 ポリマーは、好ましくは、空気を置換させ、ポリマー組成内の大きな気泡の形成 を最小にすることができる如くである。 本発明の特に好ましい実施態様は、安定化された気体及び気体前駆物質入りミ クロスフェアが形成される安定化化合物が、３つの成分、（１）中性（例えば、 非イオン又は両性イオン）脂質、（２）負荷電脂質、及び（３）親水性ポリマー を保持する脂質を具備する、ミクロスフェアである。好ましくは、該負荷電脂質 の量は、存在する全脂質の１モルパーセントよりも多く、そして親水性ポリマー を保持する脂質の量は、存在する全脂質の１モルパーセントよりも多い。また、 該負荷電脂質は、ホスファチジン酸であることが好ましい。親水性ポリマーを保 持する脂質は、望ましくは、該ポリマーに共有結合された脂質であり、そして該 ポリマーは、好ましくは、約４００〜約１００、０００の平均分子量の重量を有 する。該親水性ポリマーは、好ましくは、ポリエチレングリコール、ポリプロピ レングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、及びそれらの コポリマーから成るグループから選択される。ＰＥＧ又は他のポリマーは、アミ ド、カルバメート、又はアミン結合の如く、共有結合を通して、ＤＤＰＥ又は他 の脂質へ結合される。代替的に、エステル、エーテル、チオエステル、チオアミ ド又はジスルフィド（チオエステル）結合が、例えば、コレステロール又は他の リン脂質へポリマーを結合するための、ＰＥＧ又は他のポリマーとともに使用さ れる。親水性ポリマーがポリエチレングリコールである場合に、そのようなポリ マーを保持する脂質は、ポリエチレングリコールの略語「ＰＥＧ」を参照する「 ＰＥＧレート化」であると言われる。親水性ポリマーを保持する該脂質は、好ま しくは、ジパルミトイルホスファチジルエタノー ルアミン−ポリエチレングリコール５０００、即ち、約５０００の平均分子量の 平均重量のポリエチレングリコールポリマーを結びつけたジパルミトイルホスフ ァチジルエタノールアミン脂質（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ５０００）、又はジステアロ イルーホスファチジルエタノールアミン−ポリエチレングリコール５０００であ る。 本発明によって考えられたミクロスフェアの好ましい実施態様は、例えば、７ ７．５モルパーセントジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）を含み 、１２．５モルパーセントのジパルミトイルホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）と、 １０モルパーセントのジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−ポリエ チレングリコール−５０００（ＤＰＰＥ／ＰＥＧ５０００）を有する。それそれ 、８２／１０／８比のモルパーセントにおけるこれらの組成がまた、好ましい。 ＤＰＰＣ成分は、ホスファチジル部分が負に荷電され、コリン部分が正に荷電さ れるために、有効に中性である。結果的に、負に荷電されたＤＰＰＡ成分は、付 加薬として、負に荷電された脂質に関する上記の機構による安定化を高めるため に添加される。第３成分ＤＰＰＥ／ＰＥＧは、ＤＰＰＥ部によりミクロスフェア の脂質膜又は皮に結合されたＰＥＧレート化材料を設け、ＰＥＧ部は、ミクロス フェア膜又は皮を自由に包囲し、これにより、その機能がそのような異物を減成 させることである身体における多様な酵素及び他の内因性薬への物理的障壁を形 成する。また、ＰＥＧレート化材料は、水への構造的類似性により、異物を包囲 して取り除く傾向がある人の免疫系のマクロファージの作用を破棄することがで きる。結果は、安定化ミクロスフェアがＭＲＩ造影剤として機能する時間の増大 である。 他の補助的安定化化合物 調製されたミクロスフェアがここで提示された安定化と他の基準を満たすなら ば、上記の生体適合性脂質とポリマーのほかに、物質の組成を使用して、安定化 された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアを調製することはまた、本発明 の一部であると考えられる。これらの組成は、基本かつ基礎的であり、即ち、安 定化された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアを生成又は確立するための 主な基礎を形成する。他方、それらは、補助であり、即ち、基本的な安定化化合 物の機能性を高めるか、又は基本的な安定化化合物によって与えられたもののほ かに、所望の特性に寄与する補助又は補足剤として作用する。 しかし、問題の化合物の機能性は、経験的に、即ち、安定化されたミクロスフ ェアの生成に関して生じた結果により決定されるために、所定の化合物が基本又 は補助剤であるかを判定することは、常に可能であるわけではない。これらの基 本及び補助化合物がいかに機能するかの例として、生体適合性脂質と水又は塩水 の単純な組み合わせが、振り動かした時、しばしば、滅菌のためのオートクレー ブ処理に続いて、曇り溶液を与えることが観察された。そのような曇り溶液は、 造影剤として機能するが、美的に反感があり、非溶解又は非分散脂質粒子の形態 において不安定性を意味する。こうして、プロピレングリコールが、脂質粒子の 分散又は溶解を促進することにより、この曇りを取り除くために添加される。プ ロピレングリコールはまた、ミクロスフェア膜又は皮における表面張力を増大さ せることにより、ミクロスフェア形成及び安定性を改良する増長薬として機能す る。プロピレングリコールは、さらに、ミクロスフェアの膜又は皮を被覆し、こ うして付加的な安定性を設ける付加層として機能することが可能である。そのよ うな基本又は補助的な安定 化化合物の例として、使用される従来の界面活性剤がある。Ｄ’Ａｒｒｉｇｏの 米国特許第４，６８４，４７９号と第５，２１５，６８０号を参照せよ。 付加的な補助及び基本的な安定化化合物は、本明細書において提示された必要 条件と指示により、安定化化合物としての使用のために適する、落花生油、カノ ラ油、オリーブ油、サフラワー油、コーン油、又は摂取性であることが一般に公 知な他の油の如く剤を含む。 加えて、混合ミセル系を作るために使用された化合物は、基本又は補助的な安 定化化合物としての使用のために適し、これらは、限定的ではないが、ラウリル トリメチルアンモニウムブロミド（ドデシルー）、セチルトリメチルアンモニウ ムブロミド（ヘキサデシルー）、ミリスチルトリメチルアンモニウムブロミド（ テトラデシルー）、アルキルジメチルベンジルアンモニウムクロリド（アルキル ＝Ｃ₁₂、Ｃ₁₄、Ｃ₁₆）、ベンジルジメチルドデシルアンモニウムブロミド／クロ リド、ベンジルジメチルヘキサデシルアンモニウムブロミド／クロリド、ベンジ ルジメチルテトラデシルアンモニウムブロミド／クロリド、セチルジメチルエチ ルアンモニウムブロミド／クロリド、又はセチルピリジニウムブロミド／クロリ ドである。 本発明において使用された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアは、ここ で記載された多様な付加又は補助安定剤の中から選ぶことにより、サイズ、溶解 度及び熱安定性に応じて制御されることがわかった。これらの薬は、脂質被覆と の物理的相互作用だけでなく、気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアの表面 の粘度と表面張力を修正する能力により、ミクロスフェアのこれらのパラメータ に影響を与える。従って、 本発明において使用された気体及び気体前駆物質入りミクロスフェアは、例えば 、非常に多彩な次の一つ以上の添加により、有利に修飾され、さらに安定化され る。即ち、（ａ）限定的ではないが、炭水化物とホスホリル化及びスルホン化誘 導体、好ましくは４００〜１００、０００の範囲の分子量を有するポリエーテル 、好ましくは２００〜５０、０００の範囲の分子量を有するジ及びトリヒドロキ シアルカンとそれらのポリマーを含む粘度条件剤と、（ｂ）限定的ではないが、 アカシア、コレステロール、ジエタノールアミン、グリセリルモノステアラート 、ラノリンアルコール、レシチン、モノ及びジグリセリド、モノエタノールアミ ン、オレイン酸、オレイルアルコール、ポロキサマー（例えば、ポロキサマー１ ８８、ポロキサマー１８４、及びポロキサマー１８１）、ポリオキシエチレン５ ０ステアラート、ポリオキシ３５カストール油、ポリオキシ１０オレイルエーテ ル、ポリオキシ２０セトステアリルエーテル、ポリオキシ４０ステアラート、ポ リソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート ８０、プロピレングリコールジアセテート、プロピレングリコールモノステアラ ート、ナトリウムラウリル硫酸、ナトリウムステアラート、ソルビタンモノラウ ラート、ソルビタンモノオリエート、ソルビタンモノパルミタート、ソルビタン モノステアラート、ステアリン酸、トロールアミン、及び乳化ワックスを含む、 所望の修飾と一層の安定化を達成するために脂質と関連して使用される乳化及び ／又は可溶化剤と、（ｃ）限定的ではないが、アカシア、寒天、アルギン酸、ア ルミニウムモノステアラート、ベントナイト、マグマ、カルボマー９３４Ｐ、カ ルボキシメチルセルロース、カルシウム及びナトリウム及びナトリウム１２、カ ラゲナン、セルロース、デキストラン、 ゼラチン、グアーガム、ローカストビーンガム、ヴィーガム、ヒドロキシエチル セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マグネシウム−アルミニウ ム−シリケート、メチルセルロース、ペクチン、ポリエチレンオキシド、ポビド ン、プロピレングリコールアルギナーテ、二酸化ケイ素、アルギン酸ナトリウム 、トラガカントガム、キサンタンガム、α−ｄ−グルコノラクトン、グリセロー ル及びマンニトールを含む脂質で使用される懸濁及び／又は強粘剤、（ｄ）ポリ エチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリビニル アルコール（ＰＶＡ）、ポリプロピレングリコール、及びポリソルベートの如く 使用される合成懸濁剤と、（ｅ）限定的ではないが、ソルビトール、プロピレン グリコール、及びグリセロールを含む張度増長剤ある。 水性希釈薬 上記の如く、ミクロスフェアが性質において脂質である場合に、安定化ミクロ スフェアの特定の所望の成分は、疎水性／親水性のために、脂質を誘導するある 種類の水性環境であり、そのような環境において達成される最も安定な構成のミ クロスフェアを形成する。そのような水性環境を創成するために使用される希釈 薬は、限定的ではないが、安定化ミクロスフェアの生成と維持又はＭＲＩ造影剤 としての使用に干渉しない消イオン化又は任意の数の溶解塩等を含有する水、及 び通常の塩水及び生理的塩水である。 常磁性及び超常磁性造影剤 本発明のさらに他の実施態様において、発明の安定化された気体入りミクロス フェアベース造影剤は、さらに、ＭＲＩに対する造影剤の効力を増大させるため に役立つ、従来の造影剤の如く付加造影剤を具備する。 そのような多数の造影剤は、当業者には周知であり、常磁性及び超常磁性造影剤 を含む。 本発明における使用のために適する例示の常磁性造影剤は、安定な遊離基（例 えば、安定なニトロキシド）と、所望ならば塩の形態であるか、あるいは錯化薬 （親油性誘導体を含む）又は蛋白質巨大分子に共有又は非共有結合される遷移ラ ンタニド及びアクチニド元素である。 好ましい遷移ランタニド及びアクチニド元素は、Ｇｄ（III）、Ｍｎ（II）、 Ｃｕ（II）、Ｃｒ（III）、Ｆｅ（II）、Ｆｅ（III）、Ｃｏ（II）、Ｅｒ（II） 、Ｎｉ（II）、Ｅｕ（III）とＤｙ（III）である。さらに好ましくは、元素は、 Ｇｄ（III）、Ｍｎ（II）、Ｃｕ（II）、Ｆｅ（II）、Ｆｅ（III）、Ｅｕ（III ）とＤｙ（III）であり、特に、Ｍｎ（II）とＧｄ（III）である。 これらの元素は、所望ならば、マンガン塩、例えば、塩化マンガン、炭酸マン ガン、酢酸マンガン、マンガングルコナートとマンガンヒドロキシルアパタイト の如くマンガンの有機塩と、鉄塩、例えば、硫化鉄、塩化第二鉄の如く第二鉄塩 、等の塩の形態である。 これらの元素は、所望ならば、錯化剤（親油性誘導体を含む）又は蛋白質巨大 分子へ共有又は非共有結合される。好ましい錯化剤は、例えば、ジエチレントリ アミンーペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）、エチレン−ジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ） 、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンーＮ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’−テ トラ酢酸（ＤＯＴＡ）、１，４，７，１０−テトラアザシクロドデカンーＮ，Ｎ ’，Ｎ”−トリ酢酸（ＤＯ３Ａ）、３，６，９−トリアザー１２−オクサー３， ６，９−トリカルボキシメチレンー１０−カルボキシー１３−フェニル−トリデ カン酸（Ｂ −１９０３６）、ヒドロキシベンジルエチレンージアミン−二酢酸（ＨＢＥＤ） 、Ｎ，Ｎ’−ビス（ピリドキシルー５−ホスフェート）エチレンジアミン、Ｎ， Ｎ’−ジアセテート（ＤＰＤＰ）、１，４，７−トリアザシクロノナンーＮ，Ｎ ’，Ｎ”−トリ酢酸（ＮＯＴＡ）、１，４，８，１１−テトラアザシクロテトラ デカン−Ｎ，Ｎ’，Ｎ”，Ｎ”’−テトラ酢酸（ＴＥＴＡ）、クリプタンド（即 ち、大環状錯体）、及びデスフェリオキサミンである。さらに好ましくは、錯化 剤は、ＥＤＴＡ、ＤＴＰＡ、ＤＯＴＡ、ＤＯ３Ａとクリプタンドであり、最も好 ましくは、ＤＴＰＡである。好ましい親油性錯体は、錯化剤ＥＤＰＡ、ＤＯＴＡ 等のアルキル化誘導体であり、例えば、ＥＤＴＡ−ＤＤＰ、即ち、Ｎ，Ｎ’−ビ スー（カルボキシーデシルアミドメチルーＮ−２，３−ジヒドロキシプロピル） −エチレンジアミンーＮ，Ｎ’−ジアセテート、ＥＤＴＡ−ＯＤＰ、即ち、Ｎ， Ｎ’−ビス−（カルボキシーオクタデシルアミド−メチル−Ｎ−２，３−ジヒド ロキシプロピル）−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジアセテート、ＥＤＴＡ−Ｌ ＤＰ Ｎ，Ｎ’−ビス−（カルボキシ−ラウリルアミドメチル−Ｎ−２，３−ジ ヒドロキシプロピル）−エチレンジアミン−Ｎ，Ｎ’−ジアセテート、等、１９ ９２年５月２２日に提出された米国特許第８８７，２９０号において記載された ものがあり、この特許の開示は、引用することにより本明細書の内容となる。好 ましい蛋白質巨大分子は、アルブミン、コラーゲン、ポリアルギニン、ポリリシ ン、ポリヒスチジン、γ−グロブリンとβ−グロブリンである。さらに好ましく は、蛋白質巨大分子は、アルブミン、ポリアルギニン、ポリリシンとポリヒスチ ジンである。 適切な錯体は、こうして、Ｍｎ（II）−ＤＴＰＡ、Ｍｎ（II）−ＥＤ ＴＡ、Ｍｎ（II）−ＤＯＴＡ、Ｍｎ（II）−ＤＯ３Ａ、Ｍｎ（II）−クリプタン ド、Ｇｄ（III）−ＤＴＰＡ、Ｇｄ（III）−ＤＯＴＡ、Ｇｄ（III）−ＤＯ３Ａ 、Ｇｄ（III）−クリプタンド、Ｃｒ（III）−ＥＤＴＡ、Ｃｕ（II）−ＥＤＴＡ 又は鉄−デスフェリオキサミンであり、特に、Ｍｎ（II）−ＤＴＰＡ又はＧｄ（ III）−ＤＴＰＡである。 ニトロキシドは、ニトロキシド分子における一つの不対電子のために、Ｔ１及 びＴ２緩和率を増大させる常磁性造影剤である。ＭＲＩ造影剤として所与の化合 物の常磁性効力は、常磁性原子核又は分子における不対電子数、具体的に、不対 電子数の平方に少なくとも部分的に関連される。例えば、ガドリニウムは、７個 の不対電子を有し、そしてニトロキシド分子は、唯一の不対電子を有する。こう して、ガドリニウムは、一般に、ニトロキシドよりもずっと強力なＭＲＩ造影剤 である。しかし、造影剤の効力を評定するための別の重要なパラメータである有 効相関時間は、ニトロキシドに潜在的な高められた緩和度を与える。有効相関時 間が、プロトンのラーモア振動数に非常に近い時、緩和率は、劇的に増大する。 タンブリング率が、例えば、常磁性造影剤を大形構造に付与することにより、低 速にされる時、それは、より低速に転がり、これにより、水のプロトンの緩和を 促進するためにエネルギーをより有効に伝達する。しかし、ガドリニウムにおい て、電子スピン緩和時間は、迅速であり、低速回転相関時間が緩和度を増大させ る程度を制限する。しかし、ニトロキシドに対して、電子スピン相関時間は、よ り有利であり、緩和度における大きな増大が、これらの分子の回転相関時間を遅 くすることにより達せられる。本発明の気体入りミクロスフェアは、低速回転相 関時間と、緩和度の合成的改良の目標を達するために理想的である。特定の動作 理 論によって拘束されることは意図しないが、ニトロキシドは、例えば、アルキル 誘導体を作ることにより、気体入りミクロスフェアの周囲を被覆するように設計 されるために、合成相関時間は最適化されると考えられる。さらに、本発明の合 成造影剤は、緩和度を最大にする幾何学的構成である磁気球体として見られる。 所望ならば、ニトロキシドは、ニトロキシド２，２，５，５−テトラメチルー １−ピロリジニロキシ、遊離基、及び２，２，６，６−テトラメチルー１−ピペ リジニロキシ、遊離基（ＴＭＰＯ）の如く、アルキル化又は誘導体化される。 本発明における使用のために適する例示の超常磁性造影剤は、磁区を生ずる金 属酸化物及び硫化物、純鉄、（磁鉄鉱の如く）磁気酸化鉄の如く強磁性又はフェ リ磁性化合物、γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、マンガンフェライト、コバルトフェライトとニッ ケルフェライトである。 上記の常磁性及び超常磁性造影剤の如く造影剤は、ミクロスフェア内の成分と して、又はミクロスフェアを含んでなる造影剤において使用される。それらは、 ミクロスフェアの内部空間内にトラップされ、ミクロスフェアを有する溶液とし て投与され、又はミクロスフェア壁を形成する安定化化合物に混入される。 例えば、所望ならば、常磁性又は超常磁性剤は、安定化化合物、なかでもミク ロスフェアの脂質壁へ混入されたアルキル化又は他の誘導体として交付される。 特に、ニトロキシド２，２，５，５−テトラメチルー１−ピロリジニロキシ、遊 離基、及び２，２，６，６−テトラメチルー１−ピペリジニロキシ、遊離基は、 多数の異なる結合を介して、メチル基、例えば、アセチロキシ基、によって占有 されない環の位置において 長鎖脂肪酸により付加生成物を形成する。そのような付加生成物は、本発明のミ クロスフェアの壁を形成する安定化化合物、なかでも脂質性の化合物へ非常に混 入されやすい。 造影剤における常磁性剤及び／又は超常磁性剤の一つ以上の混合物も、同様に 、使用される。 上記の常磁性及び超常磁性剤はまた、所望ならば、別々に共投与される。 本発明において使用された気体入りミクロスフェアは、超常磁性剤の有効な担 体、例えば、酸化鉄、として役立つだけでなく、磁気感受性造影剤の効果を拡大 するように見える。超常磁性造影剤は、金属酸化物、特に、酸化鉄であるが、磁 性領域を生ずる可変量のマンガン、コバルトとニッケルを含有する酸化マンガン と酸化鉄が含まれる。これらの剤は、ナノ又は微粒子であり、非常に高い体積磁 気感受性と横緩和率を有する。例えば１００ｎｍ径の大きな粒子は、Ｒ１緩和度 よりもずっと高いＲ２緩和度を有するが、例えば１０〜１５ｎｍ径の小さな粒子 は、いくらか低いＲ２緩和度を有し、ずっと平衡したＲ１及びＲ２値を有する。 ３〜５ｎｍ径の最小粒子、例えば、単結晶酸化鉄粒子は、低いＲ２緩和度を有す るが、多分、最も平衡したＲ１及びＲ２緩和率を有する。フェリチンはまた、非 常に高い緩和率の超常磁性鉄のコアを被包するように処方される。本発明におい て使用された安定化気体入りミクロスフェアは、従来の酸化鉄ベースＭＲＩ造影 剤の効力と安全性を高めることが発見された。 酸化鉄は、ミクロスフェアが作られる安定化化合物へ単純に混入される。特に 、酸化鉄は、１９９２年２月１８日に発行された米国特許第５， ０８８，４９９号において記載された如く、脂質ベースミクロスフェアの壁へ混 入され、例えば、ミクロスフェアの表面へ吸着され、又はミクロスフェアの内部 にトラップされる。本発明は作用形態に関して特定理論に限定される意図はない が、ミクロスフェアは、幾つかの機構によって超常磁性造影剤の効力を増すと考 えられる。まず、ミクロスフェアは、酸化鉄粒子の見かけ磁気濃度を増すように 機能すると考えられる。第２に、ミクロスフェアは、常磁性及び超磁性剤のＭＲ Ｉ造影剤の見かけ回転相関時間を増大させ、その結果、緩和率が増大されると考 えられる。最後に、ミクロスフェアは、造影剤の見かけ磁区を増大させる新規な 機構により動作するように見え、すぐ下記の様式で動作すると考えられる。 ミクロスフェアは、懸濁媒体、即ち、造影剤の水性懸濁液と、胃腸投与の場合 における胃腸液と、血管内注入又は別の体腔への注入の場合に血又は他の体液か らの種々の磁気感受性の軟質球形領域として考えられる。フェライト又は酸化鉄 粒子を考察する時、これらの剤は、コントラストにおいて粒子サイズ従属効果を 有する、即ち、酸化鉄粒子の粒子径に従属することが注目される。この現象は、 非常によくあり、しばしば、水分子の「永続」緩和と呼ばれる。物理的用語にお いて記載されると、この緩和機構は、常磁性原子又は常磁性分子又は諸分子が存 する分子錯体の有効サイズに依存する。一つの物理的説明は、常磁性イオンによ って摂動された回転磁気比ｇを有する、スピン１／２原子核のＴ₁及びＴ₂緩和時 間への常磁性寄与を規定する次のＳｏｌｏｍｏｎ−Ｂｌｏｅｍｂｅｒｇｅｎ方程 式において記載される。 １／Ｔ₁Ｍ＝（２／１５）Ｓ（Ｓ＋１）γ²ｇ²β²／ｒ⁶［３γ_c／（１＋ω₁ ²γ_c ² ）＋７γ_c／（１＋ω_s ²γ_c ²）］＋（２／３）Ｓ（Ｓ＋１） Ａ²／ｈ²［γ_e／（１＋ω_s２γ_e ²）］ そして １／Ｔ₂Ｍ＝（１／１５）Ｓ（Ｓ＋１）γ²ｇ²β²／ｒ⁶［４γ_c＋３γ_c／（１ ＋ω₁ ²γ_c ²）＋１３γ_c／（１＋ω_s ²γ_c ²）］＋（１／３）Ｓ（Ｓ＋１）Ａ²／ｈ² ［γ_e／（１＋ω_s２γ_e ²）］ ここで、 ｓ＝電子スピン量子数 ｇ＝電子ｇ係数 β＝Ｂｏｈｒ磁子 ω₁とω_s（＝６５７ｗ₁）＝核スピンと電子スピンに対するラーモア角歳差運動 周波数 ｒ＝イオン−核距離 Ａ＝超微細結合定数 γ_cとγ_e＝それぞれ双極及びスカラー相互作用に対する相関時間 ｈ＝プランクの定数 例えば、Ｓｏｌｏｍｏｎ，Ｉ．Ｐｈｙｓ．Ｒｅｖ．９９，５５９（１９５５）と Ｂｌｏｅｍｂｅｒｇｅｎ，Ｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．２７，５７２，５９５ （１９５７）を参照せよ。 数個の大きな粒子は、一般に、主に、大きな相関時間により、非常に多数の小 さな粒子よりもずっと大きな効果を有する。しかし、酸化鉄粒子を非常に大きく したならば、それらは、毒性になり、肺を塞栓させ又は相補的カスケード系を活 性化させる。さらに、問題なのは粒子の全サイズではなく、特に、その縁又は外 面における粒子径である。磁区又は磁気感受性効果は、粒子の表面から指数的に 降下する。一般的に言えば、 （空間を通した）双極緩和機構の場合において、この指数的降下は、ｒ⁶従属性 を示す。文字的に解釈すると、常磁性表面から４オングストロームはなれた水分 子は、同一常磁性表面から２オングストロームはなれた水分子よりも６４倍小さ く影響される。コントラスト効果を最大にすることにおける理想的状況は、酸化 鉄粒子を中空にし、軟質にし、できる限り大きくすることである。今まで、これ を行うことは、可能ではなかった。さらに、これらの利益は、多分、今まで認識 されなかった。ミクロスフェアの内面又は外面を造影剤で被覆することにより、 個別造影剤、例えば、酸化鉄ナノ粒子又は常磁性イオンが比較的小さな構造であ るとしても、造影剤の有効性は、非常に向上される。そうする際に、造影剤は、 効果的にずっと大きな球形として機能し、この場合、有効磁区は、ミクロスフェ アの径によって決定され、ミクロスフェアの表面において最大である。これらの 薬は、軟質、即ち、コンプライアンスの利点を与える。硬質ミクロスフェアは、 肺又は他の器官に逗留し、有毒反応を引き起こすが、これらの軟質ミクロスフェ アは、毛細管をずっと容易にすべり通る。 さらに、本発明のミクロスフェアベース造影剤は、生体内でＮＭＲにより非侵 襲的に圧力を測定するために使用される。上記の如く、磁区は、ミクロスフェア の径に依存する。ミクロスフェアが、それらの軟質により、生体内の高圧力の部 位に達する時、それらは、直径が減少し、緩和度は減少する。１／Ｔ２＊（非再 集束緩和率における効果）又は信号強度を測定することにより、生体内で非侵襲 的に圧力における効果を暗示することができる。 具体的に、添付の図面に示された如く、磁気活性ミクロスフェアは、 磁気共鳴画像化による圧力を推定するために使用される。ミクロスフェアは、体 積磁気感受性を増大させ、従って、Ｔ２緩和、さらにＴ２＊緩和を増大させる。 静磁界こう配の効果は、（１８０°高周波再集束パルスにより）スピンエコー実 験において主に補償されるために、気泡の効果は、静磁界効果が補償されないＴ₂ ＊重付けパルスシーケンスよりもＴ₂において目立たない。圧力の増大は、ミク ロスフェアの損失又は（可溶性気体に対して）ミクロスフェア破裂、並びにミク ロスフェア径の減少を生じる。従って、１／Ｔ₂は、圧力の増大とともに減少す る。圧力の解放後、残留ミクロスフェアの幾つかは、再膨張し、１／Ｔ₂は、わ ずかに再び増大する。約８０％ＰＦＰと２０％空気から成るミクロスフェアは、 高安定性を示し、圧力の解放後、基準線に復帰する圧力により１／Ｔ₂のわずか な低下を示す（即ち、ミクロスフェアは、安定であるが、わずかな１／Ｔ₂圧力 を示す。）こう配エコー画像が獲得され、信号強度が測定される時、これらの効 果は、ずっと著しい。信号強度は、圧力の増大とともに増大する（１／Ｔ₂＊は 圧力の増大とともに減少する。）実験は、比較的迅速に行われる（こう配エコー 画像を撮影するために、Ｔ₂を測定する時間の１０分の１よりも少ない時間が必 要である）ために、圧力への露呈持続時間は、ずっと少なく、窒素ミクロスフェ アは、圧力解放後、ほぼ基準線に復帰する（即ち、ミクロスフェアの非常にわず かな損失がある）。従って、こう配エコーにおける信号強度は、環境圧力への復 帰において、ほぼ基準線に降下する。こうして、ＭＲＩ又は超音波による圧力の 測定のために、気泡は、圧力の増大によりばらばらにこわれるか、又は安定であ るが、圧力の増大により気泡径を減少させるように設計される。ＭＲＩ気泡半径 は、１／Ｔ₂＊に影響を与えるた めに、この関係は、ＭＲＩにより圧力を推定するために使用される。 こうして、本発明は、さらに、局部組織へ気体入りミクロスフェアへ投与する ことと、１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を確認するために磁気共鳴画像化 を使用して、該局部組織を走査することと、該局部組織における圧力を推定する ために、他の既知の１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値と該１／Ｔ２、１／Ｔ ２＊又は信号強度値を比較することとを含む、患者の局部組織における圧力を決 定するための方法を提供する。既知の１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値は、 （患者への投与の前に）予適用であるか、既知の圧力、温度及び／又はミクロス フェア半径において取られた１／Ｔ２、１／Ｔ２＊、又は信号強度値であるか、 あるいは患者の別の局部組織において取られた１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強 度値である。こうして、１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値の比較の後、圧力 推定値は、対象の局部組織における絶対圧力、又は対象の局部組織と別の局部組 織の間の圧力の変化から作成される。 同様に、当業者は認める如く、本開示をいったん習得したならば、圧力を測定 するための上記のプロセスはまた、患者の局部組織における温度を決定する際に 都合良く使用される。こうして、本発明は、さらに、局部組織へ気体入りミクロ スフェアへ投与することと、１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を確認するた めに、磁気共鳴画像化を使用して、該局部組織を走査することと、該局部組織に おける温度を推定するために、他の既知の１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値 と該１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を比較することとを含む、患者の局部 組織における温度を決定するための方法を提供する。 調製方法 本発明において使用される安定化された気体入りミクロスフェアは、多数の適 切な方法により調製される。これらは、ミクロスフェアが気体を充填される場合 と、ミクロスフェアが気体前駆物質を充填される場合に対して、別々に以下に記 載されるが、気体及び気体前駆物質を有するミクロスフェアは、本発明の一部で ある。 気体の使用法 好ましい実施態様は、気体入りミクロスフェアを形成するために、脂質のゲル から液晶への相転移温度よりも低い温度における気体の存在下で、安定化化合物 、好ましくは脂質を含む水溶液を撹拌する段階を具備する。ここで使用された如 く、用語撹拌及びその変形は、気体が局所周囲環境から水溶液へ導入される如く 、水溶液を振とうさせる動作を意味する。振とうは、ミクロスフェア、特に安定 化されたミクロスフェアを形成するために十分な力でなければならない。振とう は、渦巻き、水平又は上下動作による如く、渦流による。様々な形式の動作が、 組み合わされる。また、振とうは、水性脂質溶液を入れた容器を振とうさせるか 、又は容器自体を振とうさせずに、容器内の水溶液を振とうさせることにより行 われる。さらに、振とうは、手動又は機械で行われる。使用される機械的シェー カは、例えば、ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｃｅｒｒｉｔｏｓ，ＣＡ）シェ ーカ台、又は優れた結果を与えることが判明したＣｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｅｎｔａ ｌ Ｍｆｇ．Ｌｔｄ．，Ｌｙｏｎｓ，ＩｌｌからのＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇシェーカ の如く、シェーカ台である。ある形態の振とう又は渦巻化が、好ましい大きさの 範囲内の安定なミクロスフェアを作るために使用されることが、本発明の好まし い実施態様 である。振とうが好ましく、また、振とうが、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ機械的シェー カを使用して実施されることが好ましい。この好ましい方法により、往復動作が 、気体入りミクロスフェアを発生するために使用されることが好ましい。動作は 、弧の形態における往復動作であることは、さらに好ましい。動作が、約２°〜 約２０°の弧の形態における往復動作であることは、なお好ましく、そして弧が 約５°〜約８°であることはさらにいっそう好ましい。動作が、６°〜約７°、 さらに詳細には約６．５°における往復動作であることは、最も好ましい。往復 動作率とその弧は、形成された気体入りミクロスフェアの量と大きさを決定する ために不可欠であると考えられる。往復動作の数、即ち、全サイクル振動数が、 毎分約１０００〜約２０，０００の範囲内にあることは、本発明の好ましい実施 態様である。より好ましくは、往復動作又は振動数は、２５００〜８０００であ る。上記のＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇは、１０秒毎に２０００乳棒打ち、即ち、毎分６ ０００振動を設ける機械的シェーカである。もちろん、振動数は、撹拌される内 容物の質量に依存し、質量が大きいほど、振動数は少ない。振とうを生ずるため の別の手段は、高速又は高圧下で発せられた気体の作用を含む。 また、好ましくは、より多量な水溶液により、全力量は、相応して増大される ことが理解される。活発な振とうは、毎分少なくとも約６０振とう動作として規 定され、好ましい。毎分少なくとも６０〜３００回転の渦巻きは、より好ましい 。毎分３００〜１８００回転における渦巻きは、最も好ましい。振とうによる気 体入りミクロスフェアの形成は、視覚的に検出される。所望の安定化ミクロスフ ェアレベルを形成するために必要な脂質の濃度は、使用された脂質の形式により 変化し、定型的な 実験によって容易に決定される。例えば、好ましい実施態様において、本発明の 方法により安定化されたミクロスフェアを形成するために使用された１，２−ジ パルミトイル−ホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍ ｌ〜約３０ｍｇ／ｍｌの塩水であり、より好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約 ２０ｍｇ／ｍｌの塩水であり、そして最も好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ ｍｇ／ｍｌの塩水である。好ましい実施態様において使用されたジステアロイル ホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）の濃度は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ ／ｍｌの塩水であり、より好ましくは、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約２０ｍｇ／ｍｌ の塩水であり、最も好ましくは、約１ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの塩水であ る。 上記の簡単な振とう方法のほかに、より精巧であるが、そのために好ましくな い方法も使用され、引用することにより本明細書の内容となる、１９９３年６月 １１日に提出された米国特許出願第０７６，２５０号において記載されたものの 如く、例えば、液晶振とう気体滴注プロセスと真空乾燥気体滴注プロセス等があ る。そのようなプロセスが使用される時、気体入りされる安定化されたミクロス フェアは、技術における当業者には明らかになる多様な従来のリポソーム製法技 術のいずれかを使用して、気体滴注の前に調製される。これらの技術は、凍結解 凍とともに、超音波処理、キレート透析、均質化、溶剤注入、マイクロエマルシ ョン、自発形成、溶剤蒸発、フランス圧力セル技術、制御洗浄剤透析、及び他の 技術を含み、各技術は、治療、化粧又は他の薬剤が、合成有極脂質ベースミクロ スフェアにおいて被包され、網状におかれ、又は付着される如く、所望の活性成 分を含有する溶液において、多様な様式においてミ クロスフェアを調製することを含む。Ｍａｄｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍｉ ｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ ｏｆ Ｌｉｐｉｄｓ，１９９０ ５３，３ ７−４６を参照せよ。この開示は、参照として完全にここに取り入れられる。 上記の方法により調製された気体入りミクロスフェアは、１ミクロン〜１００ μの範囲のサイズを取る。加えて、押し出し及び滅菌手順の後、撹拌又は振とう 段階は、残り溶液においてほとんど又は全く残留しない無水脂質相（Ｂａｎｇｈ ａｍ，Ａ．Ｄ．，Ｓｔａｎｄｉｓｈ，Ｍ．Ｍ．＆ Ｗａｔｋｉｎｓ，Ｊ．Ｃ．（ １９６５）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１３，２３８−２５２）気体入りミクロスフ ェアを生成する。生じた気体入りミクロスフェアは、一年以上の間、室温での保 管において安定である。 気体入りミクロスフェアの大きさは、所望ならば、マイクロエマルション、渦 巻き、押し出し、ろ過、超音波処理、均質化、反復凍結解凍サイクル、規定サイ ズの孔を通した圧力下の押し出し、及び同様の方法を含む多様な手順によって調 整される。また、大きさのいっそうの修正の試行なしに、形成された本発明のミ クロスフェアを使用することが望ましい。 気体入りミクロスフェアは、フィルターを通した簡単な押し出しプロセスによ って整粒される。フィルター孔サイズは、生じた気体入りミクロスフェアのサイ ズ分布を制御する。２つ以上のカスケード、即ち、スタックされたフィルターの 組、例えば１０μと８μ、を使用することにより、気体入りミクロスフェアは、 ７〜９μｍに中心を置く非常に狭いサイズ分布を有する。ろ過後、これらの安定 化された気体入りミクロス フェアは、２４時間以上の間安定である。 整粒又はろ過段階は、懸濁液が、使用前に、滅菌ガラス瓶から取り除かれる時 、又はより好ましくは、フィルター組立体が、使用中、注射器自体へ組み込まれ る時、フィルター組立体の使用により達成される。ミクロスフェアを整粒する方 法は、筒、少なくとも一つのフィルター、及び針を具備する注射器を使用するこ とを含み、該筒と該針の間で該注射器へ嵌合わされた該フィルターを通して該筒 から該ミクロスフェアを押し出し、これにより、本発明によりＭＲＩ造影剤とし てミクロスフェアを使用する中途において患者へ投与される前に、該ミクロスフ ェアを整粒することを含む押し出し段階によって実施される。押し出し段階はま た、該ミクロスフェアを該注射器へ引き入れることを含み、この場合、フィルタ ーは、注射器への進入により、ミクロスフェアを整粒するために同様にして機能 する。別法は、他の手段によってすでに整粒されたミクロスフェアを注射器に満 たすことであり、この場合、フィルターは、所望サイズ範囲内又は所望の最大サ イズのミクロスフェアのみが、注射器からの押し出しにより後に投与されること を保証するために機能する。 整粒又はろ過段階を実施するために使用される装置に典型的に、第２図におい て示された注射器及びフィルターの組み合わせがある。この装置は、筒４とプラ ンジャー６を具備する、注射器１２へ直接に嵌合わされ、これにより、使用点に おいてカスケードろ過を可能にするカスケードフィルターハウジング１０から成 る。 第３図は、フィルターに関する一層の詳細を示す。フィルターハウジング１０ は、雄ねじを有する下方カラー２２と雌ねじを有する雌カラー１４の間に組み込 まれたカスケードフィルター組立体２４を具備する。 下方カラー２２は、注射器１２へ容易にそれを固着させるルアロックを据え付け 、そして上方カラー１４は、針２６を据え付けられる。カスケードフィルター組 立体２４の分解図がまた、第３図において示される。それは、２つの連続するフ ィルター１６と２０を具備し、フィルター２０は、フィルタ０１６の上流に配さ れる。好ましい実施態様において、上流フィルタ０２０は、”ＮＵＣＬＥＰＯＲ Ｅ”１０μｍフィルターであり、そして下流フィルター１６は、”ＮＵＣＬＥＰ ＯＲＥ”８μｍフィルターである。２つの０．１５ｍｍの金属メッシュ円板１５ が、好ましくは、フィルター１６の両側に設置される。好ましい実施態様におい て、フィルター１６と２０は、Ｔｅｆｌｏｎ^TMＯリング１８を用いて、最小１５ ０μｍだけ離間される。 好ましい実施態様において、安定化化合物溶液又は懸濁液は、フィルターを通 して押し出され、該溶液又は懸濁液は、振とうの前に、熱滅菌される。いったん 気体入りミクロスフェアが形成されると、それらは、上記の如く、整粒のために ろ過される。これらの段階は、気体入りミクロスフェアの形成の前に、例えば、 無水安定化化合物の量を縮小し、こうして、気体入りミクロスフェアの相当に大 きな収量を設けるとともに、患者への投与の用意ができた滅菌気体入りミクロス フェアを設ける利点を提供する。例えば、ガラス瓶又は注射器の如く混合槽は、 ろ過された安定化化合物、なかでも脂質懸濁液を満たされ、そして懸濁液は、そ の後、例えば、オートクレーブで処理することにより、混合槽内で滅菌される。 気体は、滅菌槽を振とうすることにより、気体入りミクロスフェアを形成するた めに、脂質懸濁液へ滴注される。好ましくは、滅菌槽は、気体入りミクロスフェ アが、患者との接触前にフィルターを通過する如 く位置付けられたフィルターを装備する。 フィルターを通して安定溶液、なかでも脂質溶液を押し出す好ましい方法の第 １段階は、乾燥された化合物を破壊し、水和作用のためにより大きな表面積を露 出させることにより、無水化合物の量を減少させる。好ましくは、フィルターは 、約０．１〜約５μｍ、より好ましくは、約０．１〜約４μｍ、さらに好ましく は、約０．１〜約２μｍ、最も好ましくは、約１μｍの孔サイズを有する。無水 化合物、なかでも脂質は、非一様サイズの無定形塊として出現し、望ましくない 。 第２段階の滅菌は、ＭＲＩ画像化のために患者へ容易に投与される組成を設け る。好ましくは、滅菌は、熱滅菌により、好ましくは、少なくとも約１００℃の 温度において溶液をオートクレーブ処理することにより、さらに好ましくは、約 １００℃〜約１３０℃、なおさらに好ましくは、約１１０℃〜約１３０℃におい て、さらにいっそう好ましくは、約１２０℃〜約１３０℃において、最も好まし くは、約１３０℃においてオートクレーブ処理することにより、達成される。好 ましくは、加熱は、少なくとも約１分間、より好ましくは、約１〜約３０分間、 なおさらに好ましくは、約１０〜約２０分間、最も好ましくは、１５分間行われ る。 所望ならば、代替的に、上記の第１及び第２段階は、反転されるか、又は２つ の段階の一方のみが使用される。 気体入りミクロスフェアの破裂を生じさせる温度における熱滅菌以外のプロセ スにより滅菌が行われる場合に、滅菌は、気体入りミクロスフェアの形成に続い て行われ、好ましい。例えば、ガンマ放射が、気体入りミクロスフェアが形成さ れる前及び／又は後に使用される。 気体前駆物質の使用法 上記の実施態様のほかに、投与される個体の組織の温度、光、ｐＨ又は他の特 性による活性化により、脂質ベースミクロスフェアにおいてトラップされた液体 から気体の状態への相転移を受け、本発明において使用される安定化された気体 入りミクロスフェアを生成するために膨張する、脂質ベースミクロスフェアにお いて含まれる気体前駆物質を使用することができる。この技術は、１９９３年１ １月３０日に提出された特許出願０８／１６０，２３２と、１９９３年１１月３ ０日に提出された０８／１５９，６８７において詳細に記載され、両特許明細書 は、引用することにより本明細書の内容となる。気体前駆物質入りミクロスフェ アを調製するための技術は、一般に、気体前駆物質が気体の代わりに用いられる ことを除いて、気体入りミクロスフェアの製法のために記載されたものに類似す る。 気体前駆物質を活性化する好ましい方法は、温度による。活性化又は転移温度 、及び同様の用語は、気体前駆物質の液−気相転移が行われる気体前駆物質の沸 点を参照する。有益な気体前駆物質は、約−１００℃〜７０℃の範囲において沸 点を有する気体である。活性化温度は、各気体前駆物質に特有である。約３７℃ の活性化温度又は人体の体温は、本発明の気体前駆物質のために好ましい。こう して、液体の気体前駆物質は、活性化され、３７℃において気体になる。しかし 、気体前駆物質は、本発明の方法において使用される液相又は気相である。本発 明において使用されるＭＲＩ造影剤を調製する方法は、液体がミクロスフェアへ 混入される如く、気体前駆物質の沸点よりも低い温度において実施される。加え て、該方法は、気体がミクロスフェアへ混入される如く、気体前駆物質の沸点に おいて行われる。低い沸点を有する気体前駆物質に対して、 液体の前駆物質は、低温に冷却したマイクロフリュイダイザーを使用して、乳状 化される。沸点はまた、液体形式において前駆物質を使用するために、液体媒体 における溶剤を使用して、低下される。さらに、温度がプロセスを通じて上昇さ れる方法が実施され、これにより、プロセスは、液体としての気体前駆物質で開 始し、気体で終了する。 気体前駆物質は、使用前、保管中、又は製造中、生体内で、患者又は動物に移 入することにより、標的組織又は体液において自然に気体を形成するように選択 される。温度活性化された気体前駆物質入りミクロスフェアを生成する方法は、 気体前駆物質の沸点よりも低い温度において実施される。この実施態様において 、気体前駆物質は、製造中相転移が発生しないように、ミクロスフェア内にトラ ップされる。代わりに、気体前駆物質入りミクロスフェアは、気体前駆物質の液 相において製造される。相転移の活性化は、温度が前駆物質の沸点を超える時、 任意の時点において行われる。また、液体の気体前駆物質の小滴における液体の 量を知ると、気態に達したミクロスフェアのサイズが決定される。 別法として、気体前駆物質は、使用前に予形成される安定な気体入りミクロス フェアを生成するために使用される。この実施態様において、気体前駆物質は、 それぞれの気体前駆物質の液一気相転移温度よりも低い温度において懸濁及び／ 又は安定剤を収納する容器へ付加される。温度が超過され、エマルジョンが気体 前駆物質と液体溶液の間に形成される時、気体前駆物質は、液状から気体状への 転移を受ける。この加熱と気体形成の結果として、気体は、懸濁液の上の頭空間 における空気を排除し、気体前駆物質の気体、周囲気体（例えば、空気）をトラ ップし、又は気態の気体前駆物質と周囲空気を共トラップする気体入り脂質球面 を形成する。この相転移は、ＭＲＩ造影剤の最適混合及び安定化のために使用さ れる。例えば、気体前駆物質、ペルフルオロブタンは、生体適合性脂質又は他の 安定化化合物においてトラップされ、そして温度が、４℃（ペルフルオロブタン の沸点）よりも高く上昇される時、安定化化合物にトラップされたフルオロブタ ンが生ずる。付加例として、気体前駆物質フルオロブタンは、グリセロール又は プロピレングリコールの如く乳化及び安定剤を含有する水性懸濁液において懸濁 され、市販の渦流器において渦流される。渦巻きは、気体前駆物質が液体である 十分に低い温度において始められ、試料の温度が液状−気体状への相転移温度よ りも上昇される時、継続される。そうする際に、前駆物質は、マイクロエマルシ ョンプロセス中、気態へ変換される。適切な安定剤の存在において、驚くべきこ とに、安定な気体入りミクロスフェアが生ずる。 従って、気体前駆物質は、生体内で気体入りミクロスフェアを形成するように 選択され、あるいは製造プロセス、保管、又は使用前の時点において、自然位に おいて気体入りミクロスフェアを生成するように設計される。 この発明の一層の実施態様として、気体前駆物質の液体を水性エマルジョンへ 予備形成し、既知サイズを維持することにより、いったん気体への転移が行われ たならば、微気泡の最大サイズが、理想的な気体法則を使用することにより推定 される。気体前駆物質から気体入りミクロスフェアを作る目的のために、気相は 、瞬時に形成されると仮定され、新しく形成されたミクロスフェアにおける気体 は、液体（一般に水性）への拡散により消耗されない。こうして、エマルジョン における既知の液体容積から、実際に、気体ミクロスフェアのサイズに対する上 限を予測 することができる。 本発明により、規定サイズの液体小滴を含有する脂質と気体前駆物質の如く安 定化化合物のエマルジョンは、気体前駆物質の沸点である特定温度に達すること により、小滴が、規定サイズの気体入りミクロスフェアへ膨張する如く、定式化 される。溶液への気体拡散、大気への気体損失、及び圧力上昇の効果等の因子は 、理想的な気体法則が説明できない因子であるために、規定サイズは、実サイズ の上限を表す。 理想的な気体法則と、液態から気態への転移における気泡の容積の増大を算出 するための方程式は、次の如くである。 ＰＶ＝ｎＲＴ ここで、 Ｐ＝大気圧 Ｖ＝容積リットル ｎ＝気体のモル数 Ｔ＝温度°Ｋ Ｒ＝理想気体定数＝２２．４Ｌ気圧ｄｅｇ^-1ｍｏｌｅ^-1 液体のエマルジョンにおける液体の容積、密度、及び温度の知識により、液体 の前駆物質の量（例えば、モル数）と液体の前駆物質の容積が、先験的に、算出 され、気体へ変換された時、既知容積のミクロスフェアへ膨張する。算出容積は 、気体入りミクロスフェアへの瞬時の膨張と、膨張の時間での気体の無視可能な 拡散を仮定して、気体入りミクロスフェアのサイズに対する上限を反映する。 こうして、前駆物質小滴が球形であるエマルジョンの液状での前駆物質の安定 化のために、前駆物質小滴の容積は、方程式 容積（球形）＝４／３πｒ³ によって決定される。 ここで、 ｒ＝球形の半径 こうして、いったん容積が予測されたならば、所望の温度において液体の密度 を知ると、小滴における液体（気体前駆物質）の量が決定される。より詳細には 、次が適用される。 Ｖ_gas＝４／３π（ｒ_gas）³ 理想気体法則により ＰＶ＝ｎＲＴ 代入により、 Ｖ_gas＝ｎＲＴ／Ｐ_gas 又は （Ａ） ｎ＝４／３［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ から、ｎ＝４／３［πｒ_gas ³Ｐ／ＲＴ］＊ＭＷ_n 液体容積に逆変換すると、 （Ｂ） Ｖ_liq＝［４／３［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ］＊ＭＷ_n／Ｄ］ ここで、Ｄ＝前駆物質の密度 液体小滴の径に対して解くと、 （Ｃ） 直径／２＝［３／４π［４／３＊［πｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ］＊ＭＷ_n／Ｄ ］^1/3 簡単にすると、 直径＝２［［ｒ_gas ³］Ｐ／ＲＴ［ＭＷ_n／Ｄ］］^1/3 本発明においてＭＲＩ造影剤として使用される所望サイズのミクロス フェアを調製するさらなる手段として、安定化化合物／前駆物質液体小滴の体積 、とくに半径の知識により、気体前駆物質小滴を適切な直径の球形に整粒するた めに、適切なサイズのフィルターを使用することができる。 代表的な気体前駆物質は、規定サイズ、例えば１０μ径のミクロスフェアを形 成するために使用される。この例において、ミクロスフェアは、人体の血流にお いて形成され、こうして、一般温度は、３７℃又は３１０°Ｋである。１気圧の 圧力において、方程式（Ａ）を使用して、７．５４×１０^-17モルの気体前駆物 質が、１０μ径のミクロスフェアの体積を満たすために必要とされる。 上記の算出量の気体前駆物質と、７６．１１の分子量、３２．５℃の沸点、２ ０℃において０．７７８９グラム／Ｌ^-1の密度を有する１−フルオロブタンを使 用すると、さらに計算により、５．７４×１０^-15グラムの前駆物質は、１０μ ミクロスフェアに対して必要とされることが予測される。さらに外挿し、密度の 知識を備えると、方程式（Ｂ）により、さらに、８．４７×１０^-16ｍＬｓの液 体前駆物質が、１０μの上限を有するミクロスフェアを形成するために必要であ ることが予測される。 最後に、方程式（Ｃ）を使用して、０．０２７２μの半径又は０．０５４４μ の対応する直径を有する脂質小滴のエマルジョンが、１０μミクロスフェアの上 限を有する気体前駆物質入りミクロスフェアを作るために必要とされる。 この特定サイズのエマルジョンは、適切な大きさのフィルターの使用によって 容易に達成される。加えて、規定サイズの気体前駆物質小滴を 形成するために必要なフィルターのサイズによって見られる如く、フィルターの サイズはまた、可能な細菌性汚染物を取り除くために十分であり、こうして、滅 菌ろ過としても使用できる。 本発明の方法においてＭＲＩ造影剤として使用された気体入りミクロスフェア を調製するためのこの実施態様は、温度によって活性化されたすべての気体前駆 物質へ適用される。事実、溶剤系の凝固点の低下は、０℃よりも低い温度におい て液−気相転移を受ける気体前駆物質の使用を可能にする。溶剤系は、気体前駆 物質の懸濁液のための媒体を設けるように選択される。例えば、緩衝塩水におい て混和性の２０％プロピレングリコールは、水のみの凝固点よりも十分に低い凝 固点低下を示す。プロピレングリコールの量を増大させるか、又は塩化ナトリウ ムの如く物質を添加することにより、凝固点は、さらに低下される。 適切な溶剤系の選択は、物理的方法によっても同様に説明される。ここで溶質 と呼ばれる固体又は液体の物質が、例えば、水ベース緩衝液の如く溶剤において 溶解される時、凝固点は、溶液の組成による量だけ低下される。こうして、Ｗａ ｌｌによって規定される如く、次の方程式により溶剤の凝固点低下を表すことが できる。 Ｉｎｘ_a＝Ｉｎ（１−ｘ_b）＝ΔＨ_fus／Ｒ（１／Ｔ_o−１／Ｔ） ここで、 ｘ_a＝溶剤のモル分率 ｘ_b＝溶質のモル分率 ΔＨ_fus＝溶剤の融解熱 Ｔ_o＝溶剤の標準凝固点 溶剤の標準凝固点は、方程式を解くことから得られる。ｘ_bが、ｘ_aに 関して小さいならば、上記の方程式は、 と書き直される。上記の方程式は、温度変化ΔＴがＴ₂に比べて小さいことを仮 定する。上記の方程式は、溶質の濃度（溶剤１０００ｇ中のモル数）は、重量モ ル濃度ｍにより表される。こうして、 ここで、 Ｍａ＝溶剤の分子量 ｍ＝１０００ｇ中のモル数における溶質の重量モル濃度 こうして、分率ｘ_bを代入すると、 ΔＴ＝［Ｍ_aＲＴ_o ²／１０００ΔＨ_fus］ｍ 又はΔＴ＝Ｋ_fｍ、ここで、 Ｋ_f＝Ｍ_aＲＴ_o ²／１０００ΔＨ_fus Ｋ_fは、モル凝固点と呼ばれ、一気圧の圧力において水に対して１．８６度／ 単位のモル濃度に等しい。上記の方程式は、本発明において使用された気体前駆 物質入りミクロスフェア溶液のモル凝固点を正確に決定するために使用される。 こうして、上記の方程式は、凝固点低下を推定し、溶剤凝固温度を適切な値に 低下させるために必要な液体又は固体溶質の適切な濃度を決定するために適用さ れる。 温度活性化された気体前駆物質入りミクロスフェアを調製する方法は、 （ａ）本発明において使用された気体前駆物質入りミクロスフェアの水性懸濁液 を渦巻かせることを含む。この方法の変形は、振とう前に随意的にオートクレー ブ処理することと、気体前駆物質と脂質の水性懸濁液 を随意的に加熱することと、懸濁液を含む槽を随意的に通気させることと、随意 的に振とうさせ、あるいは気体前駆物質ミクロスフェアを自発的に形成させ、気 体前駆物質入りミクロスフェア懸濁液を冷却することと、約０．２２μのフィル ターを通して気体前駆物質と脂質の水性懸濁液を随意的に押し出すこととを含み 、代替的に、ろ過が、約０．２２μのフィルターが使用される如く、生ずるミク ロスフェアの生体内の投与中行われる。 （ｂ）本発明の気体前駆物質入りミクロスフェアの水性懸濁液が撹拌によって 乳状化され、患者への投与の前にミクロスフェアを形成するために加熱されるマ イクロエマルション方法、 （ｃ）加熱及び／又は撹拌によって脂質懸濁液において気体前駆物質を形成し 、これにより、密でない気体前駆物質入りミクロスフェアは、膨張し、槽におけ る他のミクロスフェアを変位させ、空気を放出するように槽を通気させることに より、溶液の頂部へ浮揚する。 （ｄ）上記の方法のいずれにおいても、気体前駆物質の水性懸濁液と生体適合 性脂質の如く安定化化合物を入れるために密封槽を使用し、該懸濁液は、気体前 駆物質の相転移温度よりも低い温度において維持され、続いて、随意的に振とう させて、相転移温度よりも高い温度に移すようにオートクレーブ処理し、あるい は気体前駆物質ミクロスフェアを自発的に形成させ、これにより、密封槽におけ る膨張気体前駆物質が、該槽における圧力を上昇させ、気体入りミクロスフェア 懸濁液を冷却する。 凍結乾燥は、振とう気体滴注方法の前に、安定化化合物から水と有機性材料を 取り除くために有益である。乾燥気体滴注方法は、ミクロスフェアから水を取り 除くために使用される。加温後、乾燥ミクロスフェアに おける気体前駆物質を前トラップする（即ち、乾燥の前）ことにより、気体前駆 物質は膨張し、ミクロスフェアを満たす。気体前駆物質はまた、真空化された後 、乾燥ミクロスフェアを満たすために使用される。乾燥ミクロスフェアが、ゲル 状態から液晶への相転移温度よりも低い温度において保たれる時、乾燥室は、気 態における気体前駆物質をゆっくりと満たされ、例えば、ペルフルオロブタンが 、生体適合性脂質の相転移温度である、４℃（ペルフルオロブタンの沸点）〜４ ０℃の温度においてジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）から成る 乾燥ミクロスフェアを満たすために使用される。この場合、約４℃〜約５℃の温 度においてミクロスフェアを満たすことが、最も好ましい。 温度活性化された気体前駆物質入りミクロスフェアを調製するための好ましい 方法は、脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度よりも低い温度において、 気体前駆物質の存在において、生体適合性脂質の如く安定化化合物を有する水溶 液を振とうさせることを含む。本発明はまた、気体前駆物質の存在において、生 体適合性脂質の如く安定化化合物を含む水溶液を振とうさせることと、ＭＲＩ画 像化用途のために生ずる気体前駆物質入りミクロスフェアを分離することとを含 む、気体前駆物質入りミクロスフェアを調製するための方法の使用を企図する。 上記の方法によって調製されたミクロスフェアは、ここでは、ゲル状態振とう気 体前駆物質滴下方法によって調製された気体前駆物質入りミクロスフェアと呼ば れる。 先行技術の従来の水含リポソームは、液晶状態における生体適合性系において 軟質であり、こうして有益であるために、それらを作成するために使用された脂 質の相転移温度よりも高い温度において定型的に形成 される。例えば、Ｓｚｏｋａ ａｎｄ Ｐａｐａｈａｄｊｏｐｏｕｌｏｓ，Ｐｒ ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１９７８，７５，４１９４−４１９８を参 照せよ。対照的に、ここで記載された好ましい実施態様により作成されたミクロ スフェアは、気体前駆物質を充填され、気体形成後の気体前駆物質が、水溶液よ りも圧縮性で、柔軟であるために、より大きなたわみ性を伝える。こうして、気 体前駆物質入りミクロスフェアは、ゲル状態が硬質であるとしても、脂質の相転 移温度よりも低い温度において形成された時に、生体系において使用される。 本発明によって企図された方法は、温度活性化された気体前駆物質の存在にお いて、生体適合性脂質の如く安定化化合物を含む水溶液を振とうさせる。ここで 使用された如く、振とうは、気体前駆物質が、局所周囲環境から水溶液へ導入さ れる如く、水溶液を撹拌する動作として規定される。水溶液を撹拌し、気体前駆 物質の導入を生ずる任意の形式の動作が、振とうのために使用される。振とうは 、一定の時間期間の後、適切な数のミクロスフェアの形成を許容するために十分 な力でなければならない。好ましくは、振とうは、３０分、好ましくは、２０分 以内、より好ましくは、１０分以内の如く短い時間期間内に、ミクロスフェアが 形成される如く、十分な力である。振とうは、マイクロエマルション、微流動化 、例えば、水平又は上下動作の渦流（渦巻き等）による。液状での気体前駆物質 の添加の場合に、上記の振とう方法のほかに、超音波処理が使用される。さらに 、様々な形式の操作が、組み合わされる。また、振とうは、脂質水溶液を入れる 容器を振とうさせるか、又は容器自体を振とうさせずに、容器内の水溶液を振と うさせることにより行われる。さらに、振とうは、手動又は機械で行われる。使 用される機械的シェ ーカは、例えば、ＶＷＲ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ（Ｃｅｒｒｉｔｏｓ，ＣＡ）シ ェーカ台の如くシェーカ台、特に良い結果を与えることがわかったマイクロフリ ュイダイザー、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ^TM（Ｃｒｅｓｃｅｎｔ Ｄｅｎｔａｌ Ｍａ ｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｌｙｏｎｓ，ＩＬ）、機械的塗料ミキサ、 並びに他の公知の機械である。振とうを生じさせるための別の手段は、高速又は 高圧下で発せられた気体前駆物質の作用を含む。好ましくは、より多量な水溶液 により、全力量は、相応して増大されることが理解される。活発な振とうは、毎 分少なくとも約６０振とう操作として規定され、好ましい。活発な振とうの例と して、毎分少なくとも１０００回転の渦巻きは、より好ましい。毎分１８００回 転における渦巻きは、最も好ましい。 振とうによる気体前駆物質入りミクロスフェアの形成は、水溶液の頂部におけ る泡の存在によって検出される。これは、泡の形成により、水溶液の容積の減少 と結合される。好ましくは、泡の最終体積は、水性脂質溶液の初期体積の少なく とも約２倍である。より好ましくは、泡の最終体積は、水溶液の初期体積の少な くとも約３倍である。よりいっそう好ましくは、泡の最終体積は、水溶液の初期 体積の少なくとも約４倍である。最も好ましくは、水性脂質溶液のすべてが、泡 へ変換される。 振とう時間の必要な持続時間は、泡の形成の検出によって決定される。例えば 、５０ｍｌの遠心分離管における１０ｍｌの脂質溶液は、約１５〜２０分の間、 又は気体前駆物質入りミクロスフェアの粘度が、渦流にされた時、側壁にもはや 付着しない如く十分に濃くなるまで、渦巻かれる。この時点において、泡は、気 体前駆物質入りミクロスフェアを含む溶液を３０〜３５ｍｌのレベルまで上昇さ せる。 安定化化合物、なかでも好ましい泡レベルを形成するために必要な脂質の濃度 は、使用された生体適合性脂質の如く安定化化合物の形式により変化し、本開示 をいったん習得したならば、技術における当業者によって容易に決定される。例 えば、好ましい実施態様において、発明によって企図された方法により気体前駆 物質入りミクロスフェアを形成するために使用された１，２−ジパルミトイルホ スファチジルコリン（ＤＰＰＣ）の濃度は、約２０ｍｇ／ｍｌ〜約３０ｍｇ／ｍ ｌの塩水である。好ましい実施態様において使用されたジステアロイルホスファ チジルコリン（ＤＳＰＣ）の濃度は、約５ｍｇ／ｍｌ〜約１０ｍｇ／ｍｌの塩水 である。 具体的には、２０ｍｇ／ｍｌ〜３０ｍｇ／ｍｌの濃度におけるＤＰＰＣは、振 とうにより、懸濁液容積のみよりも４倍大きな全容積の懸濁液及びトラップされ た気体前駆物質を生ずる。１０ｍｇ／ｍｌの濃度におけるＤＳＰＣは、振とうに より、液体懸濁液容積が全くない全容積を生じ、完全に泡を含む。 本開示をいったん習得した当業者には、出発原料として使用された脂質と他の 安定化化合物、又はミクロスフェア最終生成物は、本発明によって企図された方 法の実施前及び後に、処置されることが理解される。例えば、生体適合性脂質の 如く安定化化合物が、水和され、それから、凍結乾燥され、凍結解凍サイクルを 通して処理され、又は単に水和される。好ましい実施態様において、脂質は、水 和され、それから、凍結乾燥され、又は水和され、それから、凍結解凍サイクル を通して処理され、それから、気体前駆物質入りミクロスフェアの形成前に、凍 結乾燥される。 本発明によって企図された方法により、限定されないが、空気の如く、 気体の存在がまた、局所周囲大気によって設けられる。局所周囲大気は、密封容 器内又は非密封容器における大気であり、外部環境である。代替的に、例えば、 気体は、脂質水溶液を有する容器へ又は脂質水溶液自体へ注入又は付加され、空 気以外の気体を設ける。空気よりも重くない気体は、密封容器へ付加されるが、 空気よりも重い気体は、密封又は非密封容器へ付加される。従って、本発明は、 気体前駆物質とともに、空気及び／又は他の気体の共トラップを含む。 安定化化合物を取扱う節においてすでに述べた如く、本発明によって企図され た好ましい方法は、使用された脂質のゲル状態から液晶状態への相転移温度より も低い温度において実施される。「ゲル状態から液晶状態への相転移温度」とは 、脂質バイレヤーがゲル状態から液晶状態へ変換される温度を意味する。例えば 、Ｃｈａｐｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１９７４，２４９ ，２５１２−２５２１を参照せよ。 こうして、上記の安定化ミクロスフェア前駆物質は、主体の組織への適用によ っていったん活性化されると、本発明において使用された他の安定化ミクロスフ ェアと同様にして使用され、この場合、温度又はｐＨの如く因子は、気体を発生 させるために使用される。この実施態様は、気体前駆物質が、該主体の標準体温 の近くで液−気の相転移を受け、これにより、気相への転移を受けるために該主 体組織の温度によって活性化されるものである。さらに好ましくは、この方法は 、主体組織が、約３７℃の標準体温を有する人体組織であり、気体前駆物質が、 ３７℃の近くで液−気の相転移を受けるものである。 本発明において使用された安定化された気体入りミクロスフェアの製 法に係わる上記の実施態様のすべては、これらのプロセスが、気体滴注段階前又 は懸濁液内の感温性気体前駆物質の温度調整気体変換の前に行われるならば、オ ートクレーブ又は滅菌ろ過によって滅菌される。代替的に、一つ以上の抗菌剤及 び／又は保存剤が、安息香酸ナトリウム、すべての第四級アンモニウム塩、アジ 化ナトリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、ソルビ酸、アスコルビルパ ルミタート、ブチル化ヒドロキシアニソール、ブチル化ヒドロキシトルエン、ク ロロブタノール、デヒドロアセト酸、エチレンジアミン、モノチオグリセロール 、安息香酸カリウム、メタ重亜硫酸カリウム、カリウムソルベート、重亜硫酸ソ ーダ、二酸化イオウ、及び有機水銀塩の如く、造影剤の処方に含まれる。照射に よる如く、他の従来の手段によって達成されるそのような滅菌は、滅菌されたミ クロスフェアが侵襲性状況下の画像化のために使用される場合、例えば、血管内 又は腹膜内で必要である。適切な滅菌手段は、滅菌された気体入りミクロスフェ アとそれらの使用の本説明によって教示された熟練者には明らかであろう。造影 剤は、一般に、水性懸濁液の如く保管されるが、乾燥したミクロスフェア又は乾 燥した脂質球体の場合には、造影剤は、使用の前に、再構成される調製のできた 乾燥粉末として保管される。 使用方法 磁気共鳴画像化（ＭＲ１）における造影剤として使用される新規な安定化され た気体入りミクロスフェアは、ＭＲＩが使用されるすべての領域における使用の ために適切であることがわかる。しかし、安定化ミクロスフェアは、灌流画像化 のために特に有益であり、そしてまた、生体内の非侵襲性圧力情報を獲得するた めに使用される。 本発明により、一般に患者を画像化する及び／又は具体的に患者における疾患 組織の存在を診断する方法が提供される。本発明の画像化プロセスは、患者へ発 明の造影剤を投与し、それから、患者の内部部位及び／又はその部位における疾 患組織の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して、患者を走査するこ とにより、実施される。患者の部位とは、患者の全体又はその患者の特定領域又 は部分を意味する。造影剤は、心臓血管部位又は胃腸部位の画像を提供する際に 特に有益であるが、脈管構造を画像化する際に、あるいは技術における当業者に は容易に明らかになる他の方法においてより広く使用される。ここで使用された 如く、心臓血管部位は、心臓によって規定された患者の部位と、心臓に直接につ ながる脈管構造を表示する。ここで使用された如く、句胃腸部位又は胃腸管は、 食道、胃、小及び大腸、及び直腸によって規定された患者の部位を含む。ここで 使用された如く、句脈管構造は、身体又は身体の器官又は一部における血管（動 脈、静脈等）を表記する。患者は、任意の哺乳動物であるが、最も好ましくは、 人である。 当業者は認める如く、本発明において使用される安定化された気体入りミクロ スフェアの投与は、多様な投薬形式を使用して、血管内、経口的、直腸による等 において実施される。走査される部位が心臓血管部位である時、発明の造影剤の 投与は、好ましくは、血管内から行われる。走査される部位が胃腸部位である時 、発明の造影剤の投与は、好ましくは、経口的又は直腸から行われる。投与され る有益な投薬と特定の投与形態は、年齢、体重及び走査される特定の哺乳動物と その部位、及び使用される発明の特定の造影剤により変化する。典型的に、用量 は、低レベルにおいて開始され、所望のコントラストの向上が達成されるまで増 大される。滅菌気体入りミクロスフェアの多様な組み合わせは、媒体の緩和作用 を修正し、又は（経口投与剤の場合に）粘度、浸透度又は嗜好性の如く特性を変 更するために使用される。本発明の磁気共鳴画像化方法を実施する際に、造影剤 は、単独、あるいは他の診断、治療又は他の薬剤と組み合わせて使用される。そ のような他の薬剤としては、香味又は着色物質の如く賦形剤がある。使用される 磁気共鳴画像化技術は、従来通りであり、例えば、Ｄ．Ｍ．Ｋｅａｎ ａｎｄ Ｍ．Ａ．Ｓｍｉｔｈ，Ｍａｇｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ Ｉｍａｇｉｎｇ ： Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，（Ｗｉｌｌｉ ａｍ ａｎｄ Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｂａｌｔｉｍｏｒｅ １９８６）において記載 される。企図されたＭＲＩ技術は、限定的ではないが、核磁気共鳴（ＮＭＲ）と 電子スピン共鳴（ＥＳＲ）を含む。好ましい画像化様相は、ＮＭＲである。上記 の如く、投与の経路と気体入りミクロスフェアの有用性の領域は、血液容積空間 、即ち、脈管構造に単に限定されない。ＭＲＩは、ミクロスフェアが、胃腸管を 画像化するために口から摂取されるならば、本発明において使用された気体入り ミクロスフェアで達成される。また、これらの安定化された気体ミクロスフェア の直腸投与は、直腸、下行結腸、横行結腸、上行結腸、並びに虫垂を含む下方胃 腸管の良好な画像化を生ずる。この直腸経路を介して、空腸と、思うに、回腸の 画像化を達成することができる。同様に、直接腹膜内投与が、腹膜を可視化する ために達成される。また、安定化された気体ミクロスフェアは、管とエウスタキ オ管を可視化し、穿孔が存在するならば、内耳を可視化することができる如く、 耳管へ直接に投与されると考えられる。また、安定化された気体ミクロスフェア が、ＭＲＩによる鼻中隔と鼻腔 の可視化に役立つように、鼻腔内に投与されることが考えられる。 本発明のミクロスフェア造影剤の投与の他の経路、及び画像化が向上される組 織領域は、限定的ではないが、１）鼻部、洞及び洞様毛細血管を含む鼻路及び洞 を鼻腔内で画像化することと、２）気管、気管支、細気管支及び肺を含む気道の 残部を鼻腔内と経口により画像化することと、３）聴覚路とエウスタキオ管、鼓 膜、外耳と内耳、及び耳管を蝸牛内で画像化することと、４）視覚に付随した部 位を眼内で画像化することと、５）腹膜を腹腔内で可視化することと、６）例え ば、膀胱造影を行うか又は尿管逆流の存在を確かめるために、限定的ではないが 、尿道、膀胱、尿管、腎臓、腎脈管構造等を含む領域を介して生殖路のすべての 部位を嚢内で画像化することとを含む。 また、本発明において使用された気体入りミクロスフェアを使用し、ＭＲＩに おける気体前駆物質入り安定化ミクロスフェアの使用により局部組織の温度を監 視することができることが発見された。すでに記載された如く、スピン＝１／２ の磁性核の磁区は、気体と周囲の水ベース媒体、例えば血液の間の界面において 変化される。気体前駆物質が液−気相転移温度を通して移動される時、磁性領域 が変化されることが発見された。これは、グレースケール画像として、又は組織 の体積磁気感受性を写像することにより、ＭＲＩにおいて可視化される。液−気 相転移温度の先行の知識により、ＭＲＩによる気泡の可視化により局部組織の加 熱度を決定することができる。こうして、本発明は、安定化された気体入りミク ロスフェアを用いて人又は動物検体の体内の局部組織の温度を判定するための方 法において、（ａ）随意的に気体の存在において、温度の上昇に応答して、液一 気の相転移を受ける一つ以上の気体前駆物質 の存在において脂質の水性懸濁液を撹拌することにより、安定化されたミクロス フェア前駆物質を調製し、これにより、液相気体前駆物質を満たされたミクロス フェアを含む該前駆物質が形成される段階と、（ｂ）該検体の組織へ前段階にお いて調製された該安定化されたミクロスフェア前駆物質を投与する段階と、（ｃ ）該組織の同時性磁気共鳴画像化とともに、気相への転移を受ける如く、その温 度を上昇させることにより該気体前駆物質を活性化させる段階と、（ｄ）磁気共 鳴画像の向上が、気体前駆物質の相転移温度において行われることを観察し、こ れにより、該局部組織の温度を判定する段階とを含んでなる方法を含む。該気体 前駆物質の温度の上昇は、それが投与された該組織による自然加熱の結果として 発生するか、又は該局部組織へ適用された超音波、マイクロ波エネルギー、又は 他のエネルギー源の使用による加熱の結果である。 ＭＲＩは、血管流量率を測定するために現在使用できるが、今まで、人又は他 の動物の体内の圧力を測定するために、その使用は示唆されなかった。本発明の さらに別の態様は、本発明の気体入りミクロスフェアとＭＲＩ技術を使用するこ とにより、そのような目的を達成することである。ここで記載された如く、軟質 気体入りミクロスフェアを使用することにより、ＭＲＩにより、生体内で圧力を 非侵襲的に測定することができると考えられる。１／Ｔ２＊は、ミクロスフェア の半径の３乗又は潜在的に６乗に比例し、気体入りミクロスフェアは弾性気泡と して機能するために、高圧力の部位において、気泡は圧縮され、半径は、圧力の 増大により相応して減少する。そして、結果として、１／Ｔ２＊もまた、減少す る。こうして、Ｔ２又はＴ２＊重付きＭＲ画像化パルスシーケンスを使用し、身 体の様々な部分、例えば動脈と静脈、において１／Ｔ２ ＊を直接又は間接に監視することにより、圧力の非侵襲性測定を得ることができ る。 従って、安定化された気体入りミクロスフェアを用いて人又は動物検体の体内 の局部組織の圧力を判定するための方法は、（ａ）一つ以上の気体及び／又は気 体前駆物質の存在において、安定化化合物の水性懸濁液を撹拌することにより、 該安定化されたミクロスフェアを調製し、これにより、該ミクロスフェアが形成 される段階と、（ｂ）該検体の組織へ前段階において調製された該安定化ミクロ スフェアを投与する段階と、（ｃ）該組織を磁気共鳴画像化し、圧力の上昇によ り相応して減少する該ミクロスフェアの半径に比例する１／Ｔ２＊を観察し、１ ／Ｔ２＊を減少させる段階と、（ｄ）体内の様々な部分において１／Ｔ２＊を監 視する段階と、（ｅ）１／Ｔ２＊値と適正な計算の比較により、該局部組織の圧 力を判定する段階とを含んでなる。 すでに述べた如く、第１図は、本発明において使用された安定化された気体入 りミクロスフェアの典型的な顕微鏡写真を示す。この顕微鏡写真において示され た如く、ミクロスフェアの平均径は、約７μである。ミクロスフェアは、飽和ジ パルミトルーホスファチジルコリンから成る一つ以上の脂質モノレヤー又はバイ レヤーから形成される。しかし、他の脂質もまた使用されることが理解される。 それにも拘わらず、こうして選択された脂質のアルキル基は、飽和され、そして 鎖は、１６又は１８炭素原子長であることが好ましい。最も好ましいのは、１６ 炭素原子を有するアルキル鎖である。生ずる気体入りミクロスフェアは、極めて 安定であり、そして空気の如く、比較的拡散性の可溶性気体が、そのようなリポ ソーム膜によって安定化される。 第２図は、本発明の安定化された気体入りミクロスフェアを含むＭＲＩ造影剤 をろ過及び／又は分配するための装置を示す。この装置は、注射器に直接に嵌込 まれるカスケードフィルターから成り、これにより、使用点においてカスケード ろ過を可能にする。 第３図は、フィルターに関する一層の詳細を示す。フィルターハウジングは、 雄ねじを有する下方カラーと雌ねじを有する雌カラーの間に組み込まれたカスケ ードフィルター組立体を具備する。下方カラーは、注射器へ容易に固着され、そ して上方カラーは、針を備え付けられる。カスケードフィルター組立体の分解図 がまた、第３図において示される。それは、２つの連続フィルターを具備し、好 ましい実施態様において、上流フィルターは、”ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”１０μｍ フィルターであり、下流フィルターは、”ＮＵＣＬＥＰＯＲＥ”８μｍフィルタ ーである。２個の０．１５ｍｍ金属網状円板が、好ましくは、下流フィルターの 両側において設置される。好ましい実施態様において、フィルターは、Ｔｅｆｌ ｏｎ^TMＯリングを用いて、最小１５０μｍだけ離間される。 第４図は、水性試料におけるミクロスフェアの信号強度の効果の概略図である 。高速ＧＲＡＳＳ画像化が、１．５ Ｔｅｓｌａ ＧＥ Ｓｉｇｎａ（Ｍｉｌｗ ａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ）において行われた。空気、キセノン及びネノンをトラップ する５、２．５及び１．２５ｍｇ／ｍｌの脂質を含有する試料が、各試料に対し てすべて３つの濃度で、調製された。簡単には、気体入りミクロスフェアが、１ 部グリセロールと１部プロピレングリロールを有する８部標準塩水から調製され た緩衝液において５ｍｇ／ｍｌのジパルミトイルホスファチジルコリンの水性懸 濁液から調製された。ゴム栓を備えた３０ｍｌガラス瓶が、それぞれの気体で満 た され、最高パワー設定６．５において、Ｖｏｒｔｅｘ Ｇｅｎｉｅ−２（Ｓｃｉ ｅｎｔｉｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｉｎｃ．，Ｂｏｈｅｍｉａ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を使用して、１０分間渦流された。生ずる安定化ミクロスフェアは、 Ａｃｃｕｓｉｚｅｒ光学的粒子整粒器（Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ｓｉｚｉｎｇ Ｓｙ ｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｔａ Ｂａｒｂａｒａ，Ｃａｌｆ．）と、Ｒｅｉｃｈｅｒｔ −Ｊｕｎｇモデル１５０光学顕微鏡（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎ ｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｕｆｆａｌｏ，ＮｅｗＹｏｒｋ）を使用して整粒された。各 試料からのミクロスフェアの半分は、８μフィルター（Ｎｕｃｌｅｐｏｒｅ，Ｐ ｌｅａｓａｎｔｏｎ，Ｃａｌｆ．）を通して注射器を使用して手で押し出された 。押し出しなしに調製されたミクロスフェアは、約２０μの平均サイズを有した 。押し出されたミクロスフェアは、約１０μの平均サイズを有した。安定化ミク ロスフェアの各試料の部分は、それから、注射器を部分的に満たす２５ｃｃ注射 器へ入れられた。各試料の一層の部分は、標準塩水で１：２に希釈され、各試料 のさらに他の部分は、標準塩水で１：４に希釈された。非押し出しミクロスフェ アを含有する試料は、押し出されたミクロスフェアよりも大きく、そして大きな ミクロスフェアほど、活発な振とうの後に、溶液の頂部の方に非常に急速に上昇 することが注目された。 発明は、さらに、本発明の実施への実適応を表現する次の作用例において示さ れる。しかし、例は、本発明の範囲を決して制限するものではない。 実施例 実施例１ 気体入りミクロスフェアを使用する磁気共鳴画像化手順 一匹のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙネズミ（約５００ｇｍｓ）が、０．５５ ｍＬの８：５：２、ｖ：ｖ：ｖ、キシラジン２０ｍｇ／ｍＬ、ケタミン１０ｍｇ ／ｍＬとアセプロマジン１００ｍｇ／ｍＬで麻酔された。磁気共鳴画像化が、Ｇ ｒａｄｉｅｎｔ Ｉｎｓｅｒｔ ａｎｄ Ｒａｄｉｏｆｒｅｑｕｅｎｃｙ（ＲＦ ）コイルを装備したＢｒｕｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｅｃ ４．７Ｔｅｓｌａ磁石（Ｂ ｒｕｋｅｒ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｂｏｓｔｏｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔ ｓ）において行われた。前造影画像化が、３２ｍｓｅｃの反復時間（ＴＲ）と８ ｍｓｅｃのエコー時間（ＴＥ）を有する、ＧＲＡＳＳ Ｉｍａｇｉｎｇこう配エ コー高速画像化（ＧＥＦ１）で行われた。鎮静剤を飲ませたネズミが、磁石プロ ーブへ頭を先にして置かれ、そして前造影スピンエコー画像が、こう配挿入及び ＲＦコイルを使用して獲得された。次のパラメータが、使用された。即ち、視野 ＝４ｃｍ、スライス＝３ｍｍ、ＴＥ＝５ｍｓｅｃ、ＴＲ＝３２ｍｓｅｃ、取得数 ＝１である。データは、１２８×１２８マトリックスとして保管された。 ネズミは、尾静脈を介して２３ゲージバタフライカテーテルを入れられた。静 脈の開存性を判定することにより、２．０ｍＬの気体入りミクロスフェアが、ゆ っくりしたＩＶ押しにより注入された（持続時間約１０ｓｅｃ）。完全な画像は 、約８秒を必要とした。気体入りミクロスフェアで得られた画像は、脳における 血管の深い暗化に対して示差的であり、多分、髄膜循環の輪郭を描いた。遅らさ れた画像化、即ち、約２０秒後の画像化は、血管を通った信号強度の復原を示し 、第１パス磁気感受性剤として作用する造影剤の能力を示した。 実施例２ ＭＲＩに対する仮モデルにおいて磁気感受性剤としての気体入りミクロスフェ ア 実施例１における上記の手順が、実施された。２０ｃｃ注射器へ、グリセロー ル：標準塩水（１：２、ｖ：ｖ）から成る１０ｃｃの制御混合液が添加された。 第２注射器へ、７．５ｍＬのグリセロール：標準塩水（１：２、ｖ：ｖ）混合液 と混合された２．５ｍＬの気体入りミクロスフェアが付加された。制御に関して 、気体入りミクロスフェア試料は、走査の頂部においてＭＲＩ画像の暗化をもた らすために示差的であり、頂部へ浮遊された磁気感受性剤を示した。それから、 気体入りミクロスフェア試料の活発な振とうは、制御に関して検査試料画像化の より一様な暗化をもたらすために示差的であることがわかった。５分後、試料は 、制御に関して頂部における画像の同一暗化に対して示差的であり、もう一度、 磁気感受性剤としての活性度を示すことがわかった。 実施例３ 気体入りミクロスフェア ８：１：１体積標準塩水：グリセロール：プロピレングリコールにおいて１０ ｍｇ／ｍｌ脂質の２０ｍｌ溶液が、８２モルパーセントのジアルミトイルホスフ ァチジルコリン（ＤＰＰＣ）：１０モルパーセントジアルミトイルホスファチジ ン酸（ＤＰＰＡ）：８モルパーセントジパルミトイルホスファチジルエタノール アミン−ＰＥＧ８，０００混合物の脂質（全脂質はＡｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ，Ａｌａｂａｓｔｅｒ，Ａｌａ）を使用して調製された。脂質は、 渦流器（ＶＷＲ Ｇｅｎｉｅ−２（１２０Ｖ、０．５ａｍｐ、６０Ｈｚ）Ｓｃｉ ｅｎｔｉ ｆｉｃ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．Ｂｏｈｅｍｉａ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ） において、１０分間振とうされ、約１００ｃｃの泡の高さを生成した。それから 、上記の脂質は、約９００ｃｃの最終容積を生ずるために、８００ｃｃの水にお いてキサンタンガムの０．５重量％懸濁液と混合された。上記の脂質から処方さ れた気体入りミクロスフェアから成る造影剤が、良いコントラストを有し、胃腸 （ＧＩ）管のコントラストに対する摂取のために適すると判断された。 実施例４ 気体入りミクロスフェア 上記の実施例３における手順は、ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳ ＰＣ）が、ＤＰＰＣの代わりに使用されたことを除いて、繰り返された。生ずる ミクロスフェアは、ＤＰＰＣミクロスフェアよりも優れ、ＧＩ ＭＲＩ造影剤と しての摂取のために非常に適切であると判断された。 実施例５ 気体入りミクロスフェア 実施例３と４において使用された上記の手順が、窒素気体が空気の代わりに使 用されたことを除いて、繰り返された。生ずるミクロスフェアは、空気を使用し たものよりも安定であると判断され、即ち、ミクロスフェアを調製するために窒 素気体が使用された時は、空気が使用された時よりも、より大きな泡高さが、Ｄ ＰＰＣミクロスフェアに対して４０℃、ＤＳＰＣミクロスフェアに対して５０℃ における定温放置により維持された。 実施例６ ＭＲＩに対する仮想モデルにおける磁気感受性剤としての気体入りミクロスフ ェア 実施例３〜５において調製されたミクロスフェアベースＧＩ造影剤の試料が、 臨床ＭＲＩ画像化装置において仮想モデルを走査することにより、ＭＲＩ造影剤 として評価された。３つの異なる装置、０．５及び１．５ Ｔｅｓｌａ ＧＥ Ｓｉｇｎａ ｍａｇｎｅｔ（ＧＥ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｌｗ ａｕｋｅｅ，Ｗｉｓ．）と４．７ Ｔｅｓｌａ Ｂｒｕｋｅｒ，Ｂｉｏｓｐｅｃ II（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓ．）が、検査された。Ｔ１ 重付きスピンエコーシーケンス、ＴＲ＝２５０ｍｓｅｃ／ＴＥ＝１２ｍｓｅｃ、 Ｔ２重付き高速スピンエコーパルスシーケンス（０．５及び１．５Ｔｅｓｌａの み）、ＴＲ＝４０００ｍｓｅｃ、ＴＥ＝１９ｍｓｅｃ（エコー列＝４）と１０５ ｍｓｅｃ（エコー列＝１６）、Ｔ２重付きスピンエコーパルスシーケンス、ＴＲ ＝２，５００ｍｓｅｃ／ＴＥ＝２５、５０、７５、１００、１２５と１５０ｍｓ ｅｃを含む、Ｔ１重付きパルスシーケンスが、８キロヘルツの帯域幅を使用して 検査された。Ｔ２重付きスピンエコーパルスシーケンスが、３２キロヘルツの帯 域幅を使用して、繰り返された。こう配エコーパルスシーケンスがまた、ＴＲ＝ ５０ｍｓｅｃ／ＴＥ＝５、１０、１５、２０、２５、３０及び３５ｍｓｅを使用 し、３０度のフリップ角度と８キロヘルツの帯域幅を使用して検査された。上記 は、３２キロヘルツの帯域幅で繰り返された。 得られる画像は、４．７Ｔｅｓｌａマグネットにおいて最も明白で、０．５Ｔ ｅｓｌａよりも１．５Ｔｅｓｌａにおける画像においてより明白な安定化ミクロ スフェアによる仮想モデルにおける減少信号を有する 磁界強度に応した強度の造影を示した。造影効果は、より高いＴ２重付き画像に おいて次第により明白になり、即ち、エコー時間が長いほど、信号損失の程度は より大きい。効果は、ほとんど、０．５ＴｅｓｌａにおけるＴ１重付き画像にお いて示されなかったが、次第に、より多くの信号損失が、１．５Ｔｅｓｌａと、 さらに、４．７ＴｅｓｌａにおけるＴ１重付き画像において明白であった。スピ ンエコー画像変化により、帯域幅は、認められる効果を有さなかった。しかし、 こう配エコー画像において、信号損失の程度は、拡張読出しにおいてずっと目立 ち、即ち、３２キロヘルツ画像よりも、８キロヘルツ画像で狭い帯域幅であった 。より大きなコントラストが、スピンエコー画像におけるよりも、一般のこう配 エコー画像において示された。気体入りミクロスフェアによって生じた造影効果 は、空気及び窒素気体入りミクロスフェア製法に対してほぼ同様であった。 実施例７ 常磁性造影剤を含有する気体入りミクロスフェア ミクロスフェアは、０．７５ミリモル塩化マンガンの溶液が、キサンタムガム の懸濁液へ付加され、それから、ミクロスフェアと混合されたことを除いて、実 施例４と同様にして調製された。ＭＲ画像化が、実施例６と同様に繰り返され、 信号暗化度、即ち、造影効果、は以前よりもずっと顕著であることがわかった。 コントラストは、さらに、最短エコー時間のＴ１重付き画像において示された増 大信号強度と二交換性であることがわかった。比較により、０．７５ミリモル塩 化マンガンの溶液を含有する模型が、走査された。塩化マンガン溶液のみによっ て生じた造影度は、ミクロスフェアと常磁性粒子懸濁液の組み合わせに対するよ りもずっと小さかった。 実施例８ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア 胃腸ＭＲＩでの安定化された気体入りミクロスフェアベース造影剤の上記の実 施例において、ミクロスフェアは、造影剤の摂取の前に予備形成された。これは 非常に効果的であるが、気体前駆物質ベース懸濁液は、嗜好性があり、患者によ って容易に寛容されるように処方される。 前駆物質ＧＩ造影剤処方は、実施例４において記載された２０ｍｇ／ｍｌの濃 度の脂質を、約０．１５Ｌ〜０．３０Ｌの気体を発生するために十分な量により 、２０ｍｇ／ｍｌの落花生油と６００〜１２００μＬのブロモクロロフルオロメ タンと混合することにより調製された。上記は、１０分間渦巻かせることにより 混合されたが、超音波処理も使用され、１００ｃｃの気体前駆物質エマルジョン が、３％重量のプロピレングリコールと３％重量グリセロールを含有するキサン タンゴム０．８５％の懸濁液７５０ｃｃと活発に混合された。それから、上記は 、室温において磁気共鳴画像化によって走査された。ＭＲＩにおいて、前駆物質 懸濁液は、水における０，８５％キサンタンゴムの制御懸濁液と比較して、ほと んどコントラストを有さなかった。 前駆物質造影剤の試料は、それから、４０℃において水浴に入れられ、間欠的 に振とうされた。エマルジョンにおいて気泡が形成されるのが注目された。キサ ンタンゴムの粘性懸濁液のために、気泡は、瞬時に頂部へ浮遊するよりも、懸濁 液内にとどまるように見えた。ＭＲＩにおいて、造影剤は、実施例６におけると 同様のコントラストを有することが判明した。 実施例９ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア １，１ジクロロー１−フルオロエタンが、３８℃における相転移を受けること により、１５０ｍＬｓの気体を発生するために十分な量において使用されたこと を除いて、実施例８と同一の手順が使用された（ＭＷ １１６．９５、ｂｐ３８ ℃、密度＝１．２５ｇ／ｍＬ）。 実施例１０ 気体入りミクロスフェア ８：１：１体積比の標準塩水：グリセロール：プロピレングリコールを含む５ ｍｇ／ｍｌの脂質の５ｍｌ溶液が、７７．５モルパーセントＤＰＰＣ、１２．５ モルパーセントＤＰＰＡ、及び親水性ポリマーに共有結合された脂質である１０ モルパーセントのジパルミトイル−ホスファチジルエタノールアミン−ポリエチ レングリコール（ＤＰＰＥ−ＰＥＧ ５０００）の混合液を使用して調製された 。空気が、脂質をトラップする１８ｍｌガラス瓶から排気され、瓶は、周囲圧力 まで窒素で満たされた。材料は、１２１℃の高圧において１５分間オートクレー ブ処理され、室温まで冷却された。瓶は、２分間、Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇブランド シェーカにおいて振とうされ、約１２ｃｃ体積の気体入りミクロスフェアの濃厚 な泡を生じた。気体入りミクロスフェアのサイズは、Ａｃｃｕｓｉｚｅｒによっ て判定され、次の如く見いだされた。９９．９％の粒子が１５ミクロンよりも小 さな約５μの平均サイズである。 実施例１１ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア 窒素の代わりに、脂質の回りの瓶における頭空間が、周囲圧力までペ ルフルオロブタン（デカフルオロブタン）で満たされ、上記の如くオートクレー ブ処理及び振とうされたことを除いて、実施例１０が、実質的に繰り返され、約 １６ｃｃの気体入りミクロスフェアの容積を生じた。気体入りミクロスフェアの 生ずるサイズは、約２５μにおいて９９．９％カットオフされた約５μの平均サ イズであることが判明した。これらのペルフルオロブタンミクロスフェアの部分 が、３ｃｃ注射器に入れられ、８μフィルター孔サイズを有するフィルターを通 して単一注入された。生ずるミクロスフェアの平均サイズは、約１１μ以下にお いて９９．９％を有する、約３〜５μであった。 実施例１２ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア 実施例１１における上記の手順は、オクタペルフルオロ−シクロブタンで繰り 返され、実施例１１におけるとほぼ同一の結果が得られた。 実施例１３ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア 希釈剤８：１：１の標準塩水：グリセロール：プロピレングリコールの代わり に、５％重量のポリビニルアルコール（ＰＶＡ、約５、０００の平均分子量）を 含む標準塩水が、希釈剤として使用されたことを除いて、実施例１１における上 記の手順が、繰り返された。それから、同一の手順が、ペルフルオロブタン入り ミクロスフェアの形成に対して行われた。気体入りミクロスフェアの平均サイズ は、約３〜４μであったが、９９．９％のカットオフは、ろ過段階なしに、約１ １μにおいてずっと小さかった。 実施例１４ 気体前駆物質を使用して調製された気体入りミクロスフェア ５０マイクロリットルのドデカペルフルオロペンタン（ペルフルオロペンタン 、沸点約２７℃）が、液体脂質懸濁液を含む瓶へ注入されたことを除いて、実施 例１１における上記の手順が繰り返された。この場合に、空気頭部空間が、取り 除かれず、そしてペルフルオロペンタンの注入が、−２０℃において行われた。 それから、瓶は、１２１℃の高圧において１５分間、オートクレーブ処理された 。それから、瓶は、３０℃の定温器に入れられ、温度は平衡にされた。試料は、 Ｗｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇブランドシェーカにおいて２分間振とうされ、その後、全瓶 は、泡で満たされた。この泡の部分は回収され、瓶内の内容物は高圧力にあるこ とが注目された。この泡の部分は、整粒され、５．８μの平均サイズと、１９． １μで９５％のカットオフ、約７５μで９９．９％のカットオフを生じた。この 泡の部分が８μフィルターを備えた注射器を通して押し出された時、平均サイズ は、約３〜４μであり、約１０μにおいて９９．９％カットオフであった。 上記の手順が、空気を含む瓶頭部空間が、気体ペルフルオロペンタンを振とう させる前に排気されたことを除いて、繰り返された時、生ずるミクロスフェアの 平均サイズは、ミクロスフェアが空気を含む頭部空間により加圧下で調製された 時よりも大きかった。 実施例１５ 気体入りミクロスフェアのサイズ分布とＭＲＩ Ｒ２緩和度における種々の気 体の効果 気体入りミクロスフェアの試料が、酸素（Ｏ₂）、空気、窒素（Ｎ₂）、キセノ ン（ルビジウム濃縮超分極）、ネオン、アルゴン、六フッ化イオ ウ（ＳＨＦ又はＳＦ₆）、ペルフルオロプロパン（ＰＦＰ）及びペルフルオロブ タン（ＰＦＢ）気体の別個の雰囲気において、８２％：１０％：８％のモル比に おける５ｍｇ／ｍＬのＤＰＰＣ、ＤＰＰＡとＤＰＰＥ−ＰＥＧ５０００を含む脂 質水溶液を撹拌することにより調製された。試料は、６０秒間、３３００ＲＰＭ においてＷｉｇ−Ｌ−Ｂｕｇ^TMを使用して撹拌された。それから、生ずる気体入 りリポソーム試料が、画像化実験中、リポソームが頂部まで浮遊するのを防止す るために、標準塩水における４％メチルセルロースにおいて懸濁された。 各試料の部分が、プラスチック注射器に入れられ、磁気共鳴画像化のための管 、圧力ゲージと注射器マノメーターを含む放射状アレイ模型保持器内に保持され た。２０％、１０％、５％、２．５％、１．２５％及び０．６２５％体積の各気 体を含有する試料が、Ｂｒｉｎｋｅｒ Ｂｉｏｓｐｅｃ II ４．７ Ｔｅｓｌ ａスキャナー（Ｂｒｕｋｅｒ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、ＭＡ）を使用して、磁気共 鳴によって走査された。Ｔ２測定値が、Ｓｐｉｎ Ｅｃｈｏ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｓ ＴＲ＝８００ｍｓｅｃとＴＥ＝３０、４５、６０、７５及び９０ｍｓｅｃと 、ＴＲ＝６０ｍｓｅｃ、ＴＥ＝８、４０％フリップによる信号強度測定値に対す るこう配エコーシーケンスで、試料を走査することにより行われた。信号強度は 、ＣＲＴモニターにおいて対象部位を選択することにより測定された。Ｔ２測定 値に対して、信号強度データが、プロットされ、そしてＲ２（１／Ｔ２／ｍｍｏ ｌ／Ｌ．ｓｅｃ−１）が、気体のミリモル濃度を判定するために標準気体法則を 使用し、Ｔ／Ｔ２データ対濃度を当てはめることにより、各気体に対して判定さ れた。 Ｒ₂とリポソームサイズにおける多様な気体の効果は、下記の表にお いて示される。種々の気体に対する１／Ｔ₂対気体濃度の関係が、第５Ａ図と第 ５Ｂ図において示される。 実施例１６ 気体入りリポソームのＭＲＩ １／Ｔ２と信号強度に対する圧力の影響 実施例１５の気体入りミクロスフェアが、０、５０、１００、１５０、２００ 、２５０及び３００ｍｍＨｇの圧力への露呈中、走査された。結果は、第６〜９ 図において示される。具体的に、第６図は、気体入りリポソームサイズにおける 圧力の影響を表す図を示す。第７図は、２．５％体積のネオンの１／Ｔ２に対す る効果を示し、そして第８図は、圧力への露呈による２．５％体積のＰＦＰの１ ／Ｔ２に対する効果を示す。第９図は、圧力への露呈により、こう配エコー信号 パルスシーケンスを 使用する、窒素気体入りリポソームの信号強度に対する効果を示す。 実施例１７ 気体入りリポソームのＭＲＩ １／Ｔ２と信号強度に対する圧力の影響 ２０モル％ＰＦＰ、７０モル％空気と１０モル％Ｏ₂気体から成る気体入りリ ポソームの１０ｃｃの懸濁液が、大動脈縮窄症のある患者へ注入された。こう配 エコーパルスシーケンスが、ＭＲＩによって行われ、信号強度が、縮窄において １／Ｔ２＊とともに測定された。縮窄における信号強度の増大又は１／Ｔ２＊の 減少を考察することにより、圧力こう配が、磁気共鳴画像化によって推定される 。 この文書において引用又は記載された各特許の開示、特許出願及び刊行物の内 容は、引用することにより本明細書の内容となる。 本明細書に記載されたもののほかに、発明の多様な変更が、上記の説明から当 業者には明らかになるであろう。そのような変更はまた、添付の請求の範囲の範 囲内に入ることが意図されている。

【手続補正書】特許法第１８４条の８ 【提出日】１９９５年１０月１０日 【補正内容】 出典：Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｒｕｂｂｅｒ Ｃｏｍｐａｎｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ａｎｄ Ｐｈｙｓｉｃｓ，Ｒｏｂｅｒｔ Ｃ．Ｗｅ ａｓｔ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｒ．Ｌｉｄｅ，ｅｄｓ．，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ， Ｉｎｃ．Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，Ｆｌｏｒｉｄ ａ（１９８９−１９９０） また、規定サイズのミクロスフェアを形成するために使用される潜在的な気体 前駆物質を含むリストが以下で提示される。しかし、リストは、その目的のため に他の気体前駆物質を使用することも可能であるために、限定的であるものでは ない。事実、多種多様な用途に対して、

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＵ，ＣＡ，ＣＮ，ＪＰ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．気体入りミクロスフェアを含んでなる磁気共鳴画像化のための造影剤。 ２．気体が、空気、窒素、二酸化炭素、酸素、フッ素、ヘリウム、アルゴン、 キセノンとネオンから成る群から選択される請求の範囲１に記載の造影剤。 ３．気体が、フッ素化気体である請求の範囲１に記載の造影剤。 ４．フッ素化気体が、ペルフルオロカーボンと六フッ化イオウから成る群から 選択される請求の範囲３に記載の造影剤。 ５．ペルフルオロカーボン気体が、ペルフルオロプロパン、ペルフルオロブタ ン、ペルフルオロシクロブタン、ペルフルオロメタン、ペルフルオロエタンとペ ルフルオロペンタンから成る群から選択される請求の範囲４に記載の造影剤。 ６．気体が、常磁性気体である請求の範囲１に記載の造影剤。 ７．常磁性気体が、¹⁷Ｏである請求の範囲６に記載の造影剤。 ８．ミクロスフェアが、少なくとも一つの生体適合性脂質から調製される請求 の範囲１に記載の造影剤。 ９．生体適合性脂質が、脂肪酸、リソ脂質、ホスファチジルコリン、ホスファ チジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセロール 、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴ脂質、グリコ脂質、グルコ脂質、ス ルファチド、グリコスフィンゴ脂質、ホスファチジン酸、パルミン酸、ステアリ ン酸、アラキドン酸、オレイン酸、ポリマーを保持する脂質、スルホン化単糖類 を保持する脂質、スルホン化二糖類を保持する脂質、スルホン化オリゴ糖類を保 持する脂質、スルホン化多糖類を保持する脂質、コレステロール、トコフェロー ル、エーテ ル結合脂肪酸を有する脂質、エステル結合脂肪酸を有する脂質、重合化脂質、ジ アセチルリン酸、ジセチルリン酸、ステアリルアミン、カルジオリピン、６〜８ 炭素長の脂肪酸を有するリン脂質、非対称アシル鎖を有する合成リン脂質、セラ ミド、非イオン脂質、ステロール脂肪族酸エステル、糖酸のステロールエステル 、糖酸のエステル、糖アルコールのエステル、糖のエステル、脂肪族酸のエステ ル、サポニン、グリセロールジラウラート、グリセロールトリラウラート、グリ セロールジパルミタート、グリセロール、グリセロールエステル、１０−３０炭 素長のアルコール、６−（５−コレステンー３β−イルオキシ）−１−チオーβ −Ｄ−ガラクトピラノシド、ジガラクトシルジグリセリド、６−（５−コレステ ンー３β−イルオキシ）ヘキシルー６−アミノー６−デオキシー１−チオーβ− Ｄ−ガラクトピラノシド、６−（５−コレステンー３β−イルオキシ）ヘキシル ー６−アミノー６−デオキシルー１−チオーα−Ｄ−マノピラノシド、１２−（ （（７’−ジエチルアミノクマリン−３−イル）カルボニル）メチルアミノ）− オクタデカン酸、Ｎ−［１２−（（（７’−ジエチルアミノクマリンー３−イル ）カルボニル）メチルーアミノ）オクタデカノイル］−２−アミノパルミチン酸 、コレステリル（４’−トリメチルーアンモニオ）ブタン酸、Ｎ−スクシニルジ オレオイルホスファチジルエタノール−アミン、１，２−ジオレオイルーｓｎ− グリセロール、１，２−ジパルミトイルーｓｎ−３−スクシニルグリセロール、 １，３−ジパルミトイルー２−スクシニルグリセロール、１−ヘキサデシルー２ −パルミトイルグリセロリンエタノールアミン、パルミトイルホモシステイン、 カチオン脂質、Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイロキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ， Ｎ−トリメチルアンモニウ ムクロリド、１，２−ジオレオイロキシ−３−（トリメチルアンモニオ）プロパ ン、１，２−ジオレオイル−３−（４’−トリメチル−アンモニオ）ブタノイル ーｓｎ−グリセロール、カチオンポリマーを保持する脂質、リン酸アルキル、ホ スフィン酸アルキル、及びホスホン酸アルキルから成る群から選択される請求の 範囲８に記載の造影剤。 １０．ホスファチジルコリンが、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジミリ ストイルホスファチジルコリン、ジペンタデカノイルホスファチジルコリン、ジ ラウロイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリンとジス テアロイルホスファチジルコリンから成る群から選択され、ホスファチジルエタ ノールアミンが、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミンとジオレオイ ルホスファチジルエタノールアミンから成る群から選択され、スフィンゴ脂質が 、スフィンゴミエリンであり、グリコ脂質が、ガングリオシドＧＭ１とガングリ オシドＧＭ２から成る群から選択され、ポリマーを保持する脂質において、ポリ マーが、ポリエチレングリコール、キチン、ヒアルロン酸とポリビニルピロリド ンから成る群から選択され、ステロール脂肪族酸エステルが、コレステロール硫 酸、コレステロール酪酸、コレステロールイソ酪酸、コレステロールパルミチン 酸、コレステロールステアリン酸、ラノステロール酢酸、エルゴステロールパル ミチン酸とフィトステロールｎ酪酸から成る群から選択され、糖酸のステロール エステルが、コレステロールグルクロニド、ラノステロールグルクロニド、７− デヒドロコレステロールグルクロニド、エルゴステロールグルクロニド、コレス テロールグルコン酸、ラノステロールグルコン酸とエルゴステロールグルコン酸 から成る群から選択され、糖酸のエステルと糖アルコールのエステルが、 ラウリルグルクロニド、ステアロイルグルクロニド、ミリストイルグルクロニド 、ラウリルグルコン酸、ミリストイルグルコン酸とステアロイルグルコン酸から 成る群から選択され、糖のエステルと脂肪族酸のエステルが、スクロースラウリ ン酸、フルクトースラウリン酸、スクロースパルミチン酸、スクロースステアリ ン酸、グルクロン酸、グルコン酸、アカール酸とポリウロン酸から成る群から選 択され、サポニンが、サルササポゲニン、スミラゲニン、ヘデラゲニン、オレア ノール酸とジギトキシゲニンから成る群から選択され、グリセロールエステルが 、グリセロールトリパルミチン酸、グリセロールジステアリン酸、グリセロール トリステアリン酸、グリセロールジミリスチン酸とグリセロールトリミリスチン 酸から成る群から選択され、１０−３０炭素長のアルコールが、ｎ−デシルアル コール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコールとｎ− オクタデシルアルコールから成る群から選択され、カチオンポリマーを保持する 脂質において、カチオンポリマーが、ポリリシンとポリアルギニンから成る群か ら選択される請求の範囲９に記載の造影剤。 １１．脂質が、ジパルミトイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスフ ァチジルエタノールアミンとジパルミトイルホスファチジン酸から成る群から選 択される請求の範囲８に記載の造影剤。 １２．ポリマーポリエチレングリコールが、該ジパルミトイル−ホスファチジ ルエタノールアミンに結合されている請求の範囲１１に記載の造影剤。 １３．脂質が、約０．５〜約３０モルパーセントの全量においてジパルミトイ ルホスファチジルエタノールアミンとホスファチジン酸を含ん でなる請求の範囲８に記載の造影剤。 １４．脂質が、約７０〜約１００モルパーセントの量において、ジパルミトイ ルホスファチジルコリンとジステアロイルホスファチジルコリンから成る群から 選択された脂質を含んでなる請求の範囲８に記載の造影剤。 １５．脂質が、（ｉ）中性脂質と、（ii）負荷電脂質と、（iii）親水性ポリ マーを保持する脂質とを含んでなり、この場合、該負荷電脂質の量が、存在する 全脂質の１モルパーセントよりも大きく、そして親水性ポリマーを保持する脂質 の量が、存在する全脂質の１モルパーセントよりも大きい請求の範囲８に記載の 造影剤。 １６．負荷電脂質が、ホスファチジン酸であり、この場合、親水性ポリマーを 保持する脂質においてポリマーが、約４００〜約１００，０００の平均分子量を 有し、該脂質へ共有結合されている請求の範囲１５に記載の造影剤。 １７．該親水性ポリマーを保持する脂質の該親水性ポリマーが、ポリエチレン グリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルアルコール、ポリビニルピ ロリドン、及びそれらのコポリマーから成る群から選択され、この場合、該親水 性ポリマーを保持する脂質の該脂質が、ジパルミトイルホスファチジルエタノー ルアミンとジステアロイルホスファチジルエタノールアミンから成る群から選択 される請求の範囲１６に記載の造影剤。 １８．脂質が、約７７．５モルパーセントのジパルミトイルホスファチジルコ リン、約１２．５モルパーセントのジパルミトイルホスファチジン酸、及び約１ ０モルパーセントのジパルミトイルホスファチジルエ タノールアミン−ポリエチレングリコール５０００を含んでなる請求の範囲８に 記載の造影剤。 １９．脂質が、約８２モルパーセントのジパルミトイルホスファチジルコリン 、約１０モルパーセントのジパルミトイルホスファチジン酸、及び約８モルパー セントのジパルミトイルホスファチジル−エタノールアミン−ポリエチレングリ コール５０００を含んでなる請求の範囲８に記載の造影剤。 ２０．ミクロスフェアが、多糖類、半合成ポリマーと合成ポリマーから成る群 から選択された少なくとも一つの生体適合性ポリマーから調製されている請求の 範囲１に記載の造影剤。 ２１．多糖類が、アラビナン、フルクタン、フカン、ガラクタン、ガラクツロ ナン、グルカン、マンナン、キシラン、レバン、フコイダン、カラゲニン、ガラ トカロロース、ペクチン酸、ペクチン、アミロース、プルラン、グリコーゲン、 アミロペクチン、セルロース、デキストラン、プストラン、キチン、アガロース 、ケラタン、コンドロイタン、デルマタン、ヒアルロン酸、アルギン酸、キサン タンゴム、デンプン、及びエリトロース、トレオース、リボース、アラビノース 、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース 、グロース、イドース、ガラクトース、タロース、エリトルロース、リブロース 、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボース、タガトース、マンニ トール、ソルビトール、ラクトース、スクロース、トレハロース、マルトース、 セロビオース、グリシン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン、アスパ ラギン、グルタミン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リシン、アルギニン、ヒ スチジン、グルクロン酸、グルコン酸、 グルコ糖酸、ガラクツロン酸、マンヌロン酸、グルコサミン、ガラクトサミン、 ノイラミン酸、天然に発生するそれらの誘導体等のアルドース、ケトース、酸又 はアミンの一つ以上を含む天然ホモ重合体及びヘテロ重合体から成る群から選択 される請求の範囲２０に記載の造影剤。 ２２．半合成ポリマーが、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシメチルセ ルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、メチルセルロース、及びメト キシセルロースから成る群から選択される請求の範囲２０に記載の造影剤。 ２３．合成ポリマーが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリウレタン、ポリ アミド、ポリスチレン、ポリ乳酸、フッ素化炭化水素、フッ素化炭素、及びポリ メチルメタクリレートから成る群から選択される請求の範囲２０に記載の造影剤 。 ２４．ポリエチレンが、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンとポリ エチレンテレフタレートから成る群から選択され、ポリプロピレンが、ポリプロ ピレングリコールであり、ポリウレタンが、ポリビニルアルコール、ポリ塩化ビ ニルとポリビニルピロリドンから成る群から選択され、ポリアミドが、ナイロン であり、そしてフッ素化炭素が、ポリテトラフルオロエチレンである請求の範囲 ２３に記載の造影剤。 ２５．造影剤が、さらに、造影剤を含んでなる請求の範囲１に記載の造影剤。 ２６．造影剤が、常磁性及び超常磁性剤から成る群から選択される請求の範囲 ２５に記載の造影剤。 ２７．造影剤が、常磁性剤である請求の範囲２６に記載の造影剤。 ２８．常磁性剤が、遷移ランタニド及びアクチニド元素から成る群か ら選択された常磁性イオンを含んでなる請求の範囲２７に記載の造影剤。 ２９．常磁性イオンが、Ｇｄ（III）、Ｍｎ（II）、Ｃｕ（II）、Ｃｒ（III） 、Ｆｅ（II）、Ｆｅ（III）、Ｃｏ（II）、Ｅｒ（II）、Ｎｉ（II）、Ｅｕ（III ）とＤｙ（III）から成る群から選択される請求の範囲２８に記載の造影剤。 ３０．常磁性イオンが、Ｍｎ（II）である請求の範囲２９に記載の造影剤。 ３１．常磁性イオンが、塩の形態である請求の範囲２７に記載の造影剤。 ３２．常磁性イオンが、錯化剤又は蛋白質巨大分子に結合されている請求の範 囲２７に記載の造影剤。 ３３．常磁性剤が、ニトロオキシドを含んでなる請求の範囲２７に記載の造影 剤。 ３４．造影剤が、超常磁性剤である請求の範囲２６に記載の造影剤。 ３５．超常磁性剤が、金属酸化物又は金属硫化物を含んでなる請求の範囲３４ に記載の造影剤。 ３６．超常磁性剤が、金属酸化物を含み、この場合、金属が鉄である請求の範 囲３５に記載の造影剤。 ３７．超常磁性剤が、フェリチン、鉄、磁気酸化鉄、γ−Ｆｅ₂Ｏ₃、マンガン フェライト、コバルトフェライトとニッケルフェライトである請求の範囲３４に 記載の造影剤。 ３８．消火性油、混合ミセル系化合物、粘度条件剤、乳化及び／又は可溶化剤 、懸濁及び／又は強粘剤、合成懸濁剤、及び張度増長剤から成 る群から選択された化合物をさらに含んでなる請求の範囲１に記載の造影剤。 ３９．気体が、気体前駆物質から少なくとも部分的に導出される請求の範囲１ に記載の造影剤。 ４０．ミクロスフェアが、ジパルミトイルホスファチジルコリン、グリセロー ルとプロピレングリコールを含む組成から調製される請求の範囲１に記載の造影 剤。 ４１．気体入りミクロスフェアが生ずるまで、気体の存在において生体適合性 脂質の水性懸濁液を撹拌する段階を含んでなる、磁気共鳴画像化造影剤として使 用される気体入りミクロスフェアの調製方法。 ４２．撹拌する段階が、振とう又は渦流することを含む請求の範囲４１に記載 の方法。 ４３．振とうが、弧の形式における往復動作を含む請求の範囲４２に記載の方 法。 ４４．弧が、約２°〜約２０°であり、毎分の往復動作数が、約１０００〜約 ２０，０００である請求の範囲４３に記載の方法。 ４５．弧が、約６°〜約７°であり、毎分の往復動作数が、約５０００〜約８ ，０００である請求の範囲４４に記載の方法。 ４６．段階が、生体適合性脂質のゲルから液晶への相転移温度よりも低い温度 において実施される請求の範囲４２に記載の方法。 ４７．気体前駆物質入りミクロスフェアが生ずるまで、気体前駆物質の存在に おいて生体適合性脂質の水性懸濁液を撹拌する段階と、その後気体入りミクロス フェアが生ずる如く、該気体前駆物質を活性化する段階とを含んでなる、磁気共 鳴画像化造影剤として使用される気体入りミ クロスフェアの調製方法。 ４８．撹拌する段階が、振とう又は渦流することを含む請求の範囲４７に記載 の方法。 ４９．振とうが、アーチの形式における往復動作を含む請求の範囲４８に記載 の方法。 ５０．アーチが、約２°〜約２０°であり、毎分の往復動作数が、約１０００ 〜約２０，０００である請求の範囲４９に記載の方法。 ５１．アーチが、約６°〜約７°であり、毎分の往復動作数が、約５０００〜 約８０００である請求の範囲５０に記載の方法。 ５２．撹拌する段階が、生体適合性脂質のゲルから液晶への相転移温度よりも 低い温度において実施される請求の範囲４７に記載の方法。 ５３．撹拌する段階が、気体の付加的存在下において実施される請求の範囲４ ７に記載の方法。 ５４．（ｉ）請求の範囲１に記載の造影剤を患者へ投与することと、（ii）該 部位の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して、患者を走査すること とを含む、患者の内部部位の画像を撮影する方法。 ５５．部位が、脈管構造である請求の範囲５４に記載の方法。 ５６．部位が、心臓血管部位である請求の範囲５４に記載の方法。 ５７．部位が、胃腸部位である請求の範囲５４に記載の方法。 ５８．（ｉ）請求の範囲１に記載の造影剤を患者へ投与することと、（ii）患 者における疾患組織の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して、患者 を走査することとを含む、患者における疾患組織の存在を診断するための方法。 ５９．走査が、患者の脈管構造である請求の範囲５８に記載の方法。 ６０．走査が、患者の心臓血管部位である請求の範囲５８に記載の方法。 ６１．走査が、患者の胃腸部位である請求の範囲５８に記載の方法。 ６２．走査が、鼻内路、耳道、眼内部位、腹腔部位、腎臓、尿道、及び尿生殖 域から選択された患者の部位である請求の範囲５８に記載の方法。 ６３．（ｉ）気体前駆物質入りミクロスフェアを患者に投与することと、（ii ）気体前駆物質に液体から気体への相転移を起こさせることと、（iii）該部位 の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して患者を走査することとを含 む、患者の内部部位の画像を撮影する方法。 ６４．（ｉ）気体前駆物質入りミクロスフェアを患者に投与することと、（ii ）気体前駆物質に液体から気体への相転移を起こさせることと、（iii）患者に おける疾患組織の可視画像を得るために、磁気共鳴画像化を使用して患者を走査 することとを含む、患者における疾患組織の存在を診断するための方法。 ６５．（ｉ）気体前駆物質入りミクロスフェアを患者に投与することと、（ii ）気体前駆物質に液体から気体への相転移を起こさせ、気体入りミクロスフェア を生ずることとを含む、気体入りミクロスフェアを含んでなる磁気共鳴画像化の ための造影剤を、患者の組織において自然に調製するための方法。 ６６．気体前駆物質が、該患者の標準体温の近くで液体から気体へ相転移する 請求の範囲６３に記載の方法。 ６７．患者の局部組織における圧力を判定するための方法において、（ｉ）気 体入りミクロスフェアを該患者の該局部組織に投与することと、 （ii）１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を確かめるために、磁気共鳴画像化 を使用して該局部組織を走査することと、（iii）該局部組織における圧力を推 定するために、該１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を、他の既知の１／Ｔ２ 又は１／Ｔ２＊値と比較することとを含む方法。 ６８．患者の局部組織における温度を判定するための方法において、（ｉ）気 体入りミクロスフェアを該患者の該局部組織に投与することと、（ii）１／Ｔ２ 、１／Ｔ２＊又は信号強度値を確かめるために、磁気共鳴画像化を使用して該局 部組織を走査することと、（iii）該局部組織における温度を推定するために、 該１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又は信号強度値を、他の既知の１／Ｔ２、１／Ｔ２＊又 は信号強度値と比較することとを含む方法。