JPH09512011A

JPH09512011A - 診断的画像化のための造影剤

Info

Publication number: JPH09512011A
Application number: JP7526989A
Authority: JP
Inventors: ダニエルエム．スコット，; ランドールビー．ラウファー，
Original assignee: エピックスメディカル，インコーポレイテッド
Priority date: 1994-04-15
Filing date: 1995-04-13
Publication date: 1997-12-02
Also published as: AU2276495A; WO1995028179A1; US5582814A

Abstract

(57)【要約】 1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸の常磁性金属錯体およびその薬学的に受容可能な塩は、組織特異的MRI造影剤として、そして特に肝臓胆管MRI造影剤として有効である。

Description

【発明の詳細な説明】診断的画像化のための造影剤発明の技術分野本発明は、診断的核磁気共鳴画像化（MRIまたはＭＲ画像化）に関する。特に、本発明は、患者に投与することにより、MRIにより得られる患者の器官および組織の画像におけるコントラストを増強し得る新規化合物に関する。本発明はまた、これらの化合物を含有する薬剤組成物ならびにMRI造影増強のための化合物および組成物の製造および使用方法に関する。発明の背景核磁気共鳴画像化（MRI）は、今日の医学における最も有用な診断手段の１つである。この技術は、原子核が、磁場を用いて検出され得る磁気モーメントを有するという発見に基づいている。磁場中に置くと、核自体は、磁場の方向と同方向、あるいは逆方向のいずれかに磁気モーメントを整列させる様式で配列する。磁場と逆方向に整列する核（いわゆるβスピン核）は、磁場と同方向に整列する核（いわゆるαスピン核）よりも高エネルギーである。αスピン核とβスピン核との間のエネルギー差は、印可した磁場の強度に直接比例する。このエネルギー差を測定するために、核を電磁波に曝す。低エネルギーαスピン核は電磁波を吸収し、磁場と逆方向に（または磁場と同方向の整列の範囲外に）「フリップ（fl ip）」して高エネルギーβスピンとなる。「共鳴周波数」として知られている吸収波の周波数は、α−βエネルギー差を示す。あるいは、高エネルギーβスピン核または非整列核は、電磁波の放出を伴って低エネルギーαスピン状態に「緩和」し得る。任意の核に対する共鳴周波数および緩和速度（緩和速度(1/T₁)について測定する；T₁は非整列核が緩和するのに要する時間である）の両方とも、核を取り巻く磁気環境に依存する。例えば、堅固な（強い）電子殻内の核は、外部磁場から遮蔽され、そしてその結果として、弱い電子殻内の核と比較してより小さいα−βエネルギー差を有する。さらに、他の常磁性核の近傍に位置する核は、このような緩和機構が得られない核よりも速く緩和し、かつ高い緩和速度を有する。診断的MRIにおいて情報源として最も一般的に使用されるのは水のプロトンの核磁気緩和速度の差である。水は、軟組織中に遍在して見出される。水の水素原子は常磁性核（プロトン）を有し、この常磁性核は共鳴周波数に曝され、そして緩和速度測定されると、それらの身体的微細環境に関して直接的な情報を提供する。次いで、この情報はコンピューター技術により処理されて、詳細な解剖学的画像が得られ得る。これらの画像を検査することにより、存在し得る疾病または異常組織、外傷および骨折、あるいは他の機能不全の存在が示され得る。驚くべきことではないが、特定の組織のMR画像化は、他のものよりも困難である。これは低いコントラストを生じる任意の数の因子に起因し得、その結果得られるMR画像の解像度が不完全である。このような問題を克服するための以前の努力が、いわゆる造影増強剤の発見へと導いた。代表的には、このような試薬は、その近傍の水のプロトンの緩和速度を変化させ得る常磁性金属イオンを含む。患者に投与すると、金属含有造影剤は、患者の代謝および排泄経路に依存して種々の器官により吸収される。吸収されると、造影剤は、それが残留する器官または組織中の水のプロトンの緩和速度を変化させる。従って、その器官または組織の MR画像は、より低濃度の常磁性試薬を含むかまたは全く含まない隣接組織に比較して増強された造影を達成する。しかし、大部分の常磁性金属の急性毒性のため、常磁性金属の通常の無機塩は造影剤として不充分である。この問題の解決は、有機キレートリガンドまたは金属イオン封鎖剤を使用することである。金属との錯体形成により、有機キレートリガンドは遊離の毒性金属の放出を防止し、かつ非毒性常磁性担体として作用することによりプロトン緩和を増強する。有効であるためには、MRI造影剤（常磁性金属−リガンド錯体）はいくつかの基準を満足しなければならない。それらは毒性金属の放出が妨げられるように安定であり、かつ高い生成定数を有しなければならない。それらは患者へのそれらの投与を容易にするに十分に水溶液に可溶でなければならない。そして、それらは溶液中の水のプロトンの緩和速度を効果的に増強し得なければならない。効率は一般的には「緩和性（relaxivity）」について測定され、これはmMの単位で測定した常磁性錯体の濃度当たりの緩和速度の増加として定義される。 Griesらは、米国特許第4,647,447号に診断剤として使用するための錯体を記載ジエチレントリアミン五酢酸とガドリニウム（III）との錯体である。米国特許第4,899,755に、LaufferおよびBradyは、MRI増強について、特定の組織を標的にするためにどのように常磁性金属−リガンド錯体が設計され、そして合成され得るかを記載している。この組織特異的アプローチは、以前に報告されている非特異的方法にいくつかの改良を提供する。定性的には、組織特異的試薬は、肝臓および輸胆管のような標的組織のより良好なMR画像を提供する。定量的には、組織特異的造影剤は低濃度で使用され、非特異的試薬をより高い用量で用いて観察される画像増強と同様の画像増強を達成し得る。従って、以前には検出され得ない（または検出が困難である）肝臓腫瘍または胆管系における機能不全は、肝臓胆管特異的造影剤を使用して検出され得る。当該分野の非特異的方法における別の改良が、米国特許第4,880,008号において提供されており、ここで造影剤の緩和性増強による、特定の組織タンパク質への非共有結合の改良が示されている。この戦略は、結合タンパク質を含む特定の組織の標的化を可能にするだけでなく、（タンパク質結合試薬の改良された緩和性増強により）以前に可能であった用量より低用量で画像増強を提供する。これらの進歩にも関わらず、MRI造影剤には、有利な安定性、溶解性、緩和性増強およびタンパク質結合特性を組織特異的薬物速度論プロフィルと組み合わせる必要が残っている。発明の要旨本発明は、組織特異的MRI造影剤として有用な改良された化合物、これらの化合物を含有する組成物およびそれらを使用するための方法を提供する。特に、本発明は、哺乳動物の器官および組織のMRIにおいてコントラストの改良された組織特異的増強に有用かつ有効な試薬として、1-（p-n-ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸の常磁性金属錯体およびその薬学的に受容可能な塩を提供する。発明の詳細な説明本発明の組織特異的造影剤は、常磁性金属と1-（p-n-ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸との錯体およびその薬学的に受容可能な塩を含有する。１位での立体化学はＲまたはＳであり得、そして常磁性錯体はラセミ体またはエナンチオマー的に純粋な形態で使用され得る。本発明の好適な常磁性金属は、Gd(I II)、Fe(III)、Mn(IIおよびIII)、Cr(III)、Cu(II)、Dy(III)、Tb(III)、Ho(III )、Er(III)およびEu(III)からなる群から選択される。最も好適な常磁性金属はG d(III)である。本発明の薬学的に受容可能な塩は、無機酸および塩基または有機酸および塩基から誘導される塩を包含する。このような酸塩には以下のものが包含される：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゾエート、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、酪酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ショウノウスルホン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、フマル酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、2-ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、2-ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、シュウ酸塩、パモエート（pamoate）、ペクチン酸塩、過硫酸塩、3-フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、吉草酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、トシレートおよびウンデカン酸塩。塩基塩には、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウム塩およびカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウム塩、マグネシウム塩および亜鉛塩）、有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミン塩、N-メチル-D-グルカミン）との塩、およびアミノ酸（例えば、アルギニン、リシンなど）との塩などが包含される。さらに、塩基性窒素含有基は、低級ハロゲン化アルキル（例えば、塩化メチル、塩化エチル、塩化プロピル、塩化ブチル、臭化メチル、臭化エチル、臭化プロピル、臭化ブチル、ヨウ化メチル、ヨウ化エチル、ヨウ化プロピル、およびヨウ化ブチル）；硫酸ジアルキル（例えば、硫酸ジメチル、硫酸ジエチル、硫酸ジブチルおよび硫酸ジアミル）；長鎖ハロゲン化物（例えば、塩化デシル、塩化ラウリル、塩化ミリスチル、塩化ステアリル、臭化デシル、臭化ラウリル、臭化ミリスチル、臭化ステアリル、ヨウ化デシル、ヨウ化ラウリル、ヨウ化ミリスチル、およびヨウ化ステアリル）、ハロゲン化アラルキル（例えば、臭化ベンジル、および臭化フェネチル）などの試薬で４級化され得る。それによって水溶性または油溶性あるいは分散性生成物が得られる。本発明の好適な塩は、N-メチル-D-グルカミン塩、カルシウム塩およびナトリウム塩である。本発明の薬剤組成物は、任意の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントまたはビヒクルと共に本発明の任意の錯体、またはその薬学的に受容可能な塩を含有する。本発明の薬剤組成物に使用され得る薬学的に受容可能なキャリア、アジュバントおよびビヒクルは、以下のものを包含するがこれらに限定されない：イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、血清タンパク質（例えば、ヒト血清アルブミン）、緩衝物質（例えば、ホスフェート）、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、TRIS（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、飽和植物脂肪酸の部分グリセリド混合物、水、塩または電解質（例えば、硫酸プロタミン、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩）、コロイドケイ酸、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロースベースの物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン−ポリオキシプロピレンブロックポリマー、ポリエチレングリコールおよびラノリン。本発明によると、薬剤組成物は注射可能な滅菌調製物（例えば、注射可能な滅菌水性または油性懸濁液）の形態であり得る。この懸濁液は、適切な分散剤または湿潤剤および懸濁剤を用いて当該分野で公知の技術に従い処方され得る。注射可能な滅菌調製物はまた、非毒性の非経口的に受容可能な希釈剤または溶媒の注射可能な滅菌溶液または懸濁液（例えば、1,3-ブタンジオール溶液として）であり得る。使用され得る受容可能なビヒクルおよび溶媒は、水、リンガー溶液および等張塩化ナトリウム溶液である。さらに、滅菌不揮発性油が溶媒または懸濁媒体として都合良く使用される。この目的のために、合成モノまたはジグリセリドを含む任意の穏和な不揮発性油が使用され得る。オレイン酸およびそのグリセリド誘導体のような脂肪酸は、天然の薬学的に受容可能な油（例えば、オリーブ油またはヒマシ油）と同様に注射可能物の調製において、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンが有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、Ph. He lv または類似のアルコールのような長鎖アルコール希釈剤または分散剤を含み得る。本発明の化合物および薬剤組成物は、経口、非経口、吸入噴霧により、局所、直腸、鼻、口腔粘膜、膣または移植したリザーバーを介して、従来の非毒性の薬学的に受容可能なキャリア、アジュバンドおよびビヒクルを含む用量処方で投与され得る。本明細書で使用される用語「非経口」は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液包内、胸骨内、硬膜下腔内、肝臓内、病巣内および頭蓋内注射または注入技術を包含する。経口投与される場合、本発明の薬剤組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液または水溶液を包含するがこれらに限定されない任意の経口的に受容可能な投与形態で投与され得る。経口使用についての錠剤の場合には、一般的に使用されるキャリアはラクトースおよびコーンスターチを包含する。ステアリン酸マグネシウムのような滑剤もまた代表的には添加される。カプセル形態での経口投与については、有用な希釈剤には、ラクトースおよび乾燥コーンスターチが包含される。水性懸濁液が経口使用に必要とされる場合には、活性成分は乳化剤および懸濁剤と組み合わされる。所望であれば、特定の甘味剤、着香剤または着色剤もまた添加され得る。あるいは、直腸投与の坐剤の形態で投与される場合、本発明の薬剤組成物は、試薬を適切な非刺激賦形剤と混合することにより調製され得る。この賦形剤は室温では固体であるが直腸温度では液体であり、それゆえ直腸中で溶融して薬剤を放出する。このような物質には、ココアバター、蜜ロウおよびポリエチレングリコールが包含される。前記したように、本発明の薬剤組成物はまた、特に処置の標的が局所投与により容易に影響を受けやすい領域または器官（目、皮膚、または下部の腸管を包含する）を包含する場合に、局所的に投与され得る。適切な局所処方は、これらの領域または器官のそれぞれについて容易に調製される。下部の腸管に対する局所投与は、直腸坐剤処方（上記参照）または適切な浣腸処方とされ得る。局所経皮パッチがまた使用され得る。局所投与については、薬剤組成物は、１種またはそれ以上のキャリアに懸濁または溶解した活性成分を含む適切な軟膏に処方され得る。本発明の化合物の局所投与のためのキャリアは、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ワックスおよび水を包含するがこれらに限定されない。あるいは、この薬剤組成物は、１種またはそれ以上の薬学的に受容可能なキャリアに懸濁または溶解した活性成分を含む適切なローションまたはクリームに処方され得る。適切なキャリアは、鉱油、ソルビタンモノステアレート、ポリソルベート60、セチルエステルワックス、セテアリールアルコール（cetearyl alcohol）、2-オクチルドデカノール、ベンジルアルコールおよび水を包含するがこれらに限定されない。目の使用については、この薬剤組成物は、ベンジルアルコニウムクロリド（be nzylalkonium chloride）のような保存剤を含むかまたは含まない、等張の、pH を調節した滅菌生理食塩液中の微小化した懸濁液として、あるいは好ましくは等張の、pHを調節した滅菌生理食塩溶液として処方され得る。あるいは、目の使用については、薬剤組成物はワセリンのような軟膏に処方され得る。鼻エーロゾルまたは吸入による投与については、本発明の薬剤組成物は、薬剤処方の分野の周知の技術に従って調製され、そしてベンジルアルコールまたは他の適切な保存剤、バイオアベイラビリティーを増強する吸収増強剤、フルオロカーボン、および／または他の従来の可溶化剤または分散剤を用いた生理食塩水溶液として調製され得る。キャリア物質と合わされて単一の投与形態を形成し得る活性成分の量は、処置される宿主、MR画像化装置の感度、画像実験の標的組織、投与の特定の様式および使用の意図される効果に応じて変化する。しかし、特定の患者に対する特定の投薬処方は、使用される特定の試薬の活性（誘導された緩和性）、年齢、体重、一般的な健康、性別、食事、投与時間、排泄速度、薬剤の組み合わせ、および担当医の判断を包含する種々の因子に依存する。活性成分化合物が１日当たり約0.1μmol/kg体重と約1000μmol/kg体重との間、好ましくは１日当たり約0.5μmol/kg体重と約300μmol/kg体重との間である投薬レベルが有用である。代表的な調製物は、約１mM〜1000mMの間の活性錯体を含む。好ましくは、このような調製物は約10mM〜500mMの間の活性錯体を含む。保存安定性を維持するため、造影剤の安全性を増強し毒性金属（またはリガンド）のインビボでの放出を防止するため、本発明の１つの実施態様によると、本組成物は、遊離の有機リガンド、または過剰の1-（p-n-ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸およびそのようなリガンドの薬学的に受容可能な塩［例えば、カルシウム、ナトリウムおよびメグルミン（N-メチル-D-グルカミン）塩ならびにカルシウムナトリウム塩のような複塩］をさらに含む。薬学的に受容可能な組成物は、０％〜５％（モル比）、好ましくは０％〜１％、そして最も好ましくは０％〜0.5％の間の過剰の有機リガンドまたはその薬学的に受容可能な塩を含む。診断的画像化において過剰のキレートリガンドを用いる組成物の使用は、国際特許公開WO 90/03804、欧州特許公開EP-A-0463644および欧州特許公開EP-A- 454078ならびに米国特許第5,078,986号により詳細に開示されている。本発明の組織特異的造影剤は、従来の技術を用いて容易に得られ得る。スキーム１は、ガドリニウム（III）-１-（p-n-ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸ジメグルミン塩（MS-264）の調製プロセスの代表的な実施例を説明する。以下の合成プロセスが、本発明の造影剤または中間体が合成され得る全ての方法の包括的なリストとして意図されないことは当業者に理解される。以下のプロセスのさらなる方法または改変は、当業者に明らかである。 4-n-ブチルアニリンから出発して、プロセスはジアゾ化、続いてアクリロニトリルまたは等価物（例えば、アクリル酸のアルキルエステル）との金属触媒によるカップリングを含む。生成物をp-n-ブチルフエニルアラニンに変換し、次いでこれを処理してそのエチレンジアミンアミドを得る。公知の還元剤、好ましくはボラン−THF錯体を用いてアミドをアミンに還元して、ジエチレントリアミンのp -n-ブチルベンジル誘導体を得る。この化合物の窒素原子をt-ブチルブロモアセテートのようなブロモ酢酸のアルキルエステルを用いてアルキル化し、エステル加水分解して所望の有機リガンドを得る。常磁性金属との錯体形成は、当該分野で周知の任意の方法を用いて達成され得る。スキーム１は、N-メチル-D-グルカミン存在下でのリガンドと酸化ガドリニウムとの反応を含むそのような方法の例を提供する。Gd₂O₃の代わりに他の常磁性金属オキシドまたは塩、そして、N-メチルグルカミンの代わりに他の塩基を用いる同様の方法は、本発明のさらなる常磁性造影剤を提供する。光学活性造影剤もまた、スキーム１に示すプロセスにおいて、例えば光学活性 p-n-ブチルフェニルアラニンを用いて、あるいは他の光学活性中間体を用いて調製され得る。この場合には、光学活性中間体は、対応するラセミ混合物の分割からあるいは立体選択的合成から生じ得る。ラセミ混合物の分割および光学活性化合物の立体選択的合成の両方の方法とも周知であり、そして本明細書にさらなる説明を必要としない。本発明の造影剤は、驚くべきことに哺乳動物の組織のMRIにおいて有効かつ組織特異的である。従って、本発明は、哺乳動物の器官および組織のMR画像の組織特異的造影増強のための方法を提供する。特に、この方法は肝臓胆管系のMR画像の造影増強を可能にする。例えば、本発明の好適な造影剤であるMS-264は、以前に開示されている構造的に類似の造影剤（実施例の項を参照のこと）に比べ、驚くべき優れた肝臓および胆汁特異性を示す。MS-264はまた、腫瘍および血液プールの組織特異的画像化に使用され得る。造影剤の投与後、NMR画像化が行なわれる。パルスシーケンスの選択（反転回復、IR；スピンエコー、SE；勾配エコー（gradient echo）、GE；ターボフラッシュ（turbo FLASH）；など）および画像パラメーターの値（エコー時間、TE；反転時間、TI；繰り返し時間、TR；フリップエンゼル（flip angel）など）は、求める診断の情報により制御される。一般的に、T₁を測定することを望むならば、TEはT₁重みを最大にするために30ミリ秒未満（あるいは最小値）であるべきである。逆に、T₂を測定することを望むならば、TEは競合するT₁の影響を最小にするために30ミリ秒より大きくあるべきである。TIおよびTRは、T₁重み画像とT₂重み画像との両方に対してほぼ同一である。TIおよびTRは、一般的にそれぞれ約20 0ミリ秒〜600ミリ秒および100ミリ秒〜1000ミリ秒のオーダーである。 MRI造影剤として有用である錯体を形成するリガンドが、診断的Ｘ線画像化のためのキレート錯体にも使用され得ることが周知である。従って、本発明の別の実施態様によれば、1-（p-n-ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸の金属錯体およびその薬学的に受容可能な塩は、診断的Ｘ線画像化に使用される。本発明がより十分に理解され得るために、以下の実施例を示す。これらの実施例は、例示の目的のみであり、いかなるうえにおいても本発明の範囲を限定するようには解釈されない。実施例ラット肝臓細胞質ゾルにおける緩和性 0.25Mスクロース／0.01Mリン酸緩衝液（pH7.4）中でラット肝臓（25％w/v）をホモジナイズし、100,000gで90分間４℃で遠心分離し、そして加圧限外濾過により上澄みを濃縮して、インビボに近い細胞質ゾルタンパク質濃度（５％〜10％）を得ることにより、ラット肝臓細胞質ゾルを調製した。細胞質ゾル中のGd(III) 錯体の緩和性を、温度可変プローブを備えたBruker 20MHz Minispecを用いて37 ℃で測定した。10データ点を有する反転−回復パルスシーケンスをT₁測定のために使用した。種々の濃度（0.01mM〜0.5mM）のキレートを有する溶液の1/T₁緩和速度を決定した。キレートの低濃度での1/T₁の限界勾配対濃度のプロットをs^-1m M^-1単位でとり、これを細胞質ゾル中のキレートの緩和性（R1）とした。結果を表１（Bn=ベンジル）に要約する。より高い緩和性値は、細胞質ゾルタンパク質に対するより高い結合親和性および／または結合した場合のより大きな緩和性を意味する。麻酔されていない成体の雄Sprague Dawleyラット（200g〜300g）に、¹⁵³Gdで標識した50μmol/kgのガドリニウムキレートを尾静脈中に注射した。注射後１分、５分および30分でラット（時間当たり約３匹）を頚部脱臼により（CO₂により麻酔している間に）安楽死させた。肝臓をガンマ線計数器を用いて¹⁵³Gdについて分析した。肝臓中の注射用量パーセント（％ID）を各時間点について測定し、そして平均肝臓％ID時間曲線下全面積（integrated area under the mean liver %ID time curve;AUC）を計算した。５分間の時間について、切り取った肝臓の1/T₁プロトン緩和速度を、上記のように20MHz、37℃で測定した。より高い1/T₁値は、T₁重み画像（T₁-weighted ima ge）におけるより大きなMRIシグナル強度に関連し、そして肝臓への試薬のより大きな取り込みおよび／または肝臓の微細環境におけるより大きな緩和性に起因する。結果を表２に要約する。ウサギ肝臓の取り込み麻酔した（ペントバルビタール、35mg/kg、腹腔内）成体のウサギ（2.5kg〜４ kg）に、50μmol/kgの¹⁵³Gd標識キレート（約30μCi/kg）をカニューレを挿入した末端部の耳静脈を介して投与した。ウサギ（化合物当たり１羽）を、光電ピークエネルギーを100keV +/- 20％にセットし、そして低エネルギー平行ホールコリメーター（low energy parallel hole collimator）を備えたガンマ線カメラ下に仰臥に置いた。キレート投与直後、自動平面全身シンチグラフィー（dynami c planar whole body scintigraphy）を少なくとも１時間にわたり、５分ごとに行った。画像を64×64マトリクス中に得、そして所見領域（ROI）分析を画像1.5 2ソフトウエアパッケージ（国立衛生研究所）を用いて行った。５分間隔での肝臓におけるパーセント注射用量（％ID）を、肝臓ROI中の計数を身体中の総計数で割ることにより計算した。結果を表３およびグラフ１に要約する。サル肝臓の取り込み２個の成体の雄カニクイザル（cynomolgus monkey）を、¹⁵³Gdで標識した50μ mol/kgのキレート（約40μCi/kg）の静脈内注射後にシンチグラフィー的に画像化した。全ての試薬を各々異なった日に各サルに与えた。サルをケタミン塩酸塩で麻酔し（筋肉内、作用させるため）、挿管しそしてイソフルラン（0.5％〜２％）で保持し、そして化合物の投与前にガンマ線カメラの下に仰臥に置いた。画像を得、そして上記のように分析した。結果を表４ならびにグラフ２および３に要約する。サルにおける胆汁排泄シンチグラフ画像化に用いた２匹の成体の雄カニクイザル（cynomolgus monke y）に、異なる日に、¹⁵³Gdで標識した50μmol/kgのキレート（約40μCi/kg）を静脈内ボーラスで注射した。画像研究の完了後、動物を代謝ケージに置き、そしてそれらの排泄尿および排泄便のすべてを、化合物投与後24時間および48時間においてガンマ線計数器を用いて測定した。活性の平均回収は注射した用量の68％であった。結果を表５に要約する。 MS-264の合成 α−クロロ−β−ｐ−ｎ−ブチルフェニルプロピオニトリル（２） 1.5モル（237mL）の4-n-ブチルアニリンをアセトン（1500mL）中に溶解した。溶液を10℃まで冷却し、そして水（150mL）および濃塩酸（300mL）を加えた。水（200mL）中の硝酸ナトリウム（69.0g、1.73mol）を冷却した上記溶液に滴下した。この溶液を固体酢酸ナトリウムを加えることによりpH４に調節した。アクリロニトリル（148mL、2.25mol）を加え、続いて水50mL中のCuCl₂・2H₂O（38.4g）を加えた。反応混合物を40℃まで加熱し、そしてこの温度で３時間撹拌した。水層をエーテルで抽出した。合わせた有機層を水および飽和NaHCO₃水溶液で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。残渣を減圧で分別蒸留した。生成物を166.3g（収率50％）の橙色オイルとして、115℃〜130℃ ２mmHgで集めた。α−クロロ−β−ｐ−ｎ−ブチルフェニルプロピオン酸（３） α-クロロ-β-p-ブチルフェニルプロピオニトリル２（166g、0.750mol）を、還流温度で16時間、240mLのギ酸および160mLの濃 HClと撹拌した。反応混合物を冷却し、300mLの水で希釈し、そして酢酸エチルで洗浄した。酢酸エチル溶液を水、飽和NaCl水溶液で洗浄し、Na₂SO₄で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。大部分のオイルを放置して固化させた。この固体をヘキサンから２回再結晶して、139.0g（0.58mol、収率77％）の白色固体（融点52.7℃〜53.6℃）を得た。ｐ−ｎ−ブチルフェニルアラニン（４） α-クロロ-β-p-ブチルフェニルプロピオン酸３（128g、0.534mol）を、800mL の30％アンモニア水中に懸濁させた。この反応物を堅く栓をしたフラスコ中で、 40℃で４日間撹拌した。室温まで冷却した後、沈殿物を粗ガラスフリットを通して濾過することにより取り除いた。固体をエタノール、続いてジエチルエーテルで十分に洗浄した。固体を減圧下で乾燥して、54.3g（0.245mol、収率46％）のp -ブチルフェニルアラニンを白色固体として得た。固体を２N HClから再結晶して、白色固体（融点218℃〜223℃）を得た。ｐ−ｎ−ブチルフェニルアラニンメチルエステル塩酸塩（５）ブチルフェニルアラニン４（4.20g、19.0mmol）を、50mLの乾燥メタノール中に懸濁させた。この溶液をHClガスで飽和し、そして２時間還流した。溶液を冷却し、次いで400mLのジエチルエーテルに加えた。得られた固体を減圧濾過により集め、そしてエーテルで洗浄した。固体を最小容量のメタノール中に再溶解し、そして前記のようにエーテル中で沈澱させて3.45g（12.7mmol、収率67％）の白色固体（融点164.5℃〜165.1℃）を得た。ｐ−ｎ−ブチルフェニルアラニンエチレンジアミンアミド（６）ブチルフェニルアラニンメチルエステル塩酸塩５（3.45g、12.7mmol）を65mL のエチレンジアミン中に溶解し、そして室温で16時間撹拌した。エチレンジアミンを減圧でエバポレーションにより取り除いた。残渣を1N NaOHと酢酸エチルとの間に分配し、そして水層を酢酸エチルで３回洗浄した。合わせた有機溶液をNa₂ SO₄で乾燥し、濾過し、そして濃縮して、2.76gの橙色オイル（収率83％）を得た。¹H NMR(CDCl₃)δ7.50(br.s,1H)、7.15(s,4H)、3.60(dd,1H)、3.38-3.17(3H) 、2.85-2.50(5H)、1.58(m,2H)、1.42-1.24(6H)、0.93(t,3H)。１−ｐ−ｎ−ブチルベンジルジエチレントリアミン三塩酸塩（７）ブチルフェニルアラニンエチレンジアミンアミド６（2.76g、10.5mmol）を50m LのTHF中に溶解した。ボラン・THF（50mL、1.0M）を、撹拌している上記溶液にゆっくり加えた。次いでこの反応物をアルゴン下で16時間還流し、そしてメタノールを注意深く加えてクエンチした。反応混合物を減圧下で濃縮した。乾燥エタノール（75mL）を加え、そして溶液を０℃にてHClガスで飽和した。この混合物を24時間還流し、その後溶液を冷却し、そして濃縮した。エチルエーテルを濃縮した溶液に加え、そして得られた沈殿物を減圧濾過により集め、そしてエーテルて洗浄して、3.45g（9.6mmol、92％）の白色固体を得た。分析C₁₅H₂₇N₃・3HClに対する計算値：C,50.22；H,8.43；N,11.71；Cl,29.64、測定値：C,50.16；H,8.4 4；N,11.76；Cl,29.57。１−ｐ−ｎ−ブチルベンジルジエチレントリアミンペンタ−ｔ−ブチルアセテート（８）ブチルベンジルジエチレントリアミン三塩酸塩７（3.45g、9.62mmol）を50mL の乾燥DMF中に懸濁した。ジイソプロピルエチルアミン（25mL、144mmol）、続いて12.5mL（77mmol）のt-ブチルブロモアセテートを加えた。反応物をアルゴン下、室温で16時間撹拌した。DMFおよび過剰の試薬を減圧下でエバポレーションにより取り除いた。残渣をNaHCO₃濃厚水溶液とクロロホルムとの間に分配した。有機溶液を水および飽和水性NaClでそれぞれ１回洗浄し、Na₂SO₄で乾燥し、濾過し、そして減圧下で濃縮した。粗生成物を１：１の酢酸エチル：ヘキサン中でシリカゲルを通して濾過した。再濃縮後、生成物を6.88g（8.39mmol、収率87％）の薄黄色オイルとして得た。¹H NMR(CDCl₃)δ7.15(d,2H)、7.04(d,2H)、3.50-3.35 (10H)、3.09(m,1H)、2.83(m,2H)、2.75-2.45(8H)、1.65-1.10(49H)、0.94(t,3H) 。１−ｐ−ｎ−ブチルベンジルジエチレントリアミン五酢酸（９）ペンタ-t-ブチルエステル８（6.88g、8.39mmol）を１：１のジオキサン：濃 H Cl中に溶解し、そして室温で16時間撹拌した。反応混合物を減圧下で濃縮して、粗生成物を4.79gの黄褐色の泡状物として得た。生成物を40％水アセトニトリル水溶液で10gのC-18 Sep-Pakカートリッジから溶出した。アセトニトリルをエバポレートし、そして得られた水溶液を凍結乾燥して、3.30g（6.12mmol、収率73 ％）の柔毛状白色固体を得た。分析C₂₅H₃₇N₃O₁₀に対する計算値：C,55.65；H,6. 91；N,7.79；測定値：C,55.06；H,6.99；N,7.71；C1,0.00。ガドリニウム（III）１−（ｐ−ｎ−ブチルベンジル）ジエチレントリアミン五酢酸ジメグルミン塩（１０）酸化ガドリニウム（1.99g、5.5mmol）、1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸９（6.00g、10.00mmol[90重量％]）およびN-メチル-D-グルカミン（3.90g、20mmol）を100mLの丸底フラスコに量り取り、そして30mLの蒸留水を加えた。混合物を95℃で６時間撹拌した。得られた濁った溶液を10-g C-18 Sep- レーターで取り除き、得られた白色固体残渣を高真空下、45℃で24時間乾燥した。収量：9.78g（88％）。分析C₃₉H₇₀GdN₅O₂₁に対する計算値：C,42.50；H,6.40 ；N,6.35；Gd,14.27。測定値：C,42.11；H,6.08；N,6.35；Gd,14.03。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＣ０７Ｆ 11/00 9450−4ＨＣ０７Ｆ 11/00 Ａ 13/00 9450−4Ｈ 13/00 Ａ 15/02 9450−4Ｈ 15/02 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ラウファー，ランドールビー. アメリカ合衆国マサチューセッツ 02146，ブルックリン，サムナーロードナンバー２ 23

Claims

【特許請求の範囲】１．常磁性金属と1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸との錯体およびその薬学的に受容可能な塩。２．前記常磁性金属が、Gd(III)、Fe(III)、Mn(II)、Mn(III)、Cr(III)、Cu(II) 、Dy(III)、Tb(III)、Ho(III)、Er(III)およびEu(III)からなる群から選択される、請求項１に記載の錯体。３．前記常磁性金属がGd(III)である、請求項１に記載の錯体。４．ガドリニウム(III)-1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミンペンタアセテートジメグルミン塩。５．前記1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸がラセミ体で存在する、請求項１に記載の錯体。６．1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸が、エナンチオマー的に富化された形態またはエナンチオマー的に純粋な形態で存在する、請求項１に記載の錯体。７．請求項１から６のいずれかに記載の化合物および薬学的に受容可能なキャリア、アジュバンドまたはビヒクルを含有する、薬剤組成物。８．さらに遊離の有機リガンドまたはその薬学的に受容可能な塩を含有する、請求項７に記載の薬剤組成物。９．さらに遊離の有機リガンドあるいはそのカルシウム塩、ナトリウム塩、メグルミン塩またはその複塩を含有する、請求項７に記載の薬剤組成物。１０．前記有機リガンドが1-(p-n-ブチルベンジル)ジエチレントリアミン五酢酸である、請求項８または９に記載の薬剤組成物。１１．哺乳動物の器官および組織のMR画像化において、組織特異的造影を増強するための方法であって、請求項１から６のいずれかに記載の錯体の診断的有効量を投与する工程を包含する、方法。１２．肝臓胆管系のMR画像化の造影増強のための、請求項１１に記載の方法。１３．請求項１から６のいずれかに記載の化合物の、MRI造影剤の製造のための使用。１４．哺乳動物の器官および組織の組織特異的診断Ｘ線画像化のための方法であって、請求項１から６のいずれかに記載の錯体の診断的有効量を投与する工程を包含する、方法。