JPH0967377A - 癌遺伝子機能抑制剤 - Google Patents
癌遺伝子機能抑制剤Info
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- JPH0967377A JPH0967377A JP7222279A JP22227995A JPH0967377A JP H0967377 A JPH0967377 A JP H0967377A JP 7222279 A JP7222279 A JP 7222279A JP 22227995 A JP22227995 A JP 22227995A JP H0967377 A JPH0967377 A JP H0967377A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】現在までに知られている阻害物質には見られな
い作用機構を有する、臨床応用が可能な薬剤を提供する
こと。 【構成】キョウチクトウ科のエルヴァタミア・ミクロフ
ィラ（Ervatamia microphylla Kerr）から抽出された化
学式（１）で示される癌遺伝子機能抑制能を有する物質
を有効成分として含有する。 【化１】
い作用機構を有する、臨床応用が可能な薬剤を提供する
こと。 【構成】キョウチクトウ科のエルヴァタミア・ミクロフ
ィラ（Ervatamia microphylla Kerr）から抽出された化
学式（１）で示される癌遺伝子機能抑制能を有する物質
を有効成分として含有する。 【化１】
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、癌遺伝子機能抑制活性
を有する化合物を有効成分として含有する抗癌剤に関す
る。
を有する化合物を有効成分として含有する抗癌剤に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】細胞の発癌やプロモーションの過程で、
癌遺伝子が重要な役割を果していることが知られてい
る。癌遺伝子は、正常細胞の染色体ＤＮＡ上にあるプロ
ト癌遺伝子に点突然変異、転座、増幅などの異常が起こ
ることによって発生し、これまでに７０種あまりが見出
されている。その中でもｒａｓ癌遺伝子は大腸癌、乳
癌、白血病などから見出され、ヒト癌組織全体の２０％
位に存在するといわれる代表的なものである。そこで、
このｒａｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する物質が、新し
いコンセプトの癌治療薬として期待されている。現在ま
でに、そのような阻害物質としては放線菌から単離され
たオキザノシン（Ｎ.Ｓhimadaら、The Journalof Antib
iotics,34,1216-1218,1981）、かびから単離されたコン
パクチン（Ｏ.Ito ら、Cancer Research,49,996-1000,1
989）などが知られている。
癌遺伝子が重要な役割を果していることが知られてい
る。癌遺伝子は、正常細胞の染色体ＤＮＡ上にあるプロ
ト癌遺伝子に点突然変異、転座、増幅などの異常が起こ
ることによって発生し、これまでに７０種あまりが見出
されている。その中でもｒａｓ癌遺伝子は大腸癌、乳
癌、白血病などから見出され、ヒト癌組織全体の２０％
位に存在するといわれる代表的なものである。そこで、
このｒａｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する物質が、新し
いコンセプトの癌治療薬として期待されている。現在ま
でに、そのような阻害物質としては放線菌から単離され
たオキザノシン（Ｎ.Ｓhimadaら、The Journalof Antib
iotics,34,1216-1218,1981）、かびから単離されたコン
パクチン（Ｏ.Ito ら、Cancer Research,49,996-1000,1
989）などが知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、これまでに発
見されたｒａｓ癌遺伝子作用阻害物質は、いずれも安定
性や毒性に問題があり、臨床応用可能なものはまだな
い。そのため、現在までに知られている阻害物質には見
られない作用機構を有する、臨床応用が可能な薬剤の開
発が望まれている。
見されたｒａｓ癌遺伝子作用阻害物質は、いずれも安定
性や毒性に問題があり、臨床応用可能なものはまだな
い。そのため、現在までに知られている阻害物質には見
られない作用機構を有する、臨床応用が可能な薬剤の開
発が望まれている。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、臨床応用
可能な阻害物質を得るために、癌細胞の形態を正常化さ
せる作用を指標としてスクリーニングすることにより、
植物由来でｒａｓ癌遺伝子物質の作用を阻害する物質の
探索を行った結果、熱帯植物エルヴァタミア・ミクロフ
ィラ（Ervatamia microphylla Kerr）の葉の抽出物にｒ
ａｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する活性があることを発
見し、活性成分を特定することにより化学式（１）で表
される化合物を得、本発明を完成させた。
可能な阻害物質を得るために、癌細胞の形態を正常化さ
せる作用を指標としてスクリーニングすることにより、
植物由来でｒａｓ癌遺伝子物質の作用を阻害する物質の
探索を行った結果、熱帯植物エルヴァタミア・ミクロフ
ィラ（Ervatamia microphylla Kerr）の葉の抽出物にｒ
ａｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する活性があることを発
見し、活性成分を特定することにより化学式（１）で表
される化合物を得、本発明を完成させた。
【０００５】
【化２】
【０００６】すなわち、本発明は有効成分として化学式
（１）で表される化合物および任意に医薬上許容可能な
担体等を含有する抗癌剤を提供する。エルヴァタミア・
ミクロフィラから単離された本発明の物質の分子量は７
７８である。以下、本明細書中、この物質を「conophyl
lidine」と称する。conophyllidineは、シリカゲル薄層
クロマトグラフィーでは、展開系クロロホルム：メタノ
ール＝２０：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：２、トル
エン：アセトン＝２：１において、それぞれＲｆ値は
０.５０、０.４６、０.６４である。また、ＦＡＢマス
スペクトルの結果から、分子量は７７８であることがわ
かった。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定結果およびカッ
プリングについての測定結果よりスペクトルのピークの
帰属を行った結果および先のＦＡＢマススペクトルの結
果から、この物質は同じくエルヴァタミア・ミクロフィ
ラから単離されたconophylline（T.S.Kamら、Journal o
f Natural Products,56,1865-1871,1993）のエポキシド
の部分が二重結合になったconophyllidineであることが
明らかになった。この化合物の構造は上記化学式（１）
で表される。
（１）で表される化合物および任意に医薬上許容可能な
担体等を含有する抗癌剤を提供する。エルヴァタミア・
ミクロフィラから単離された本発明の物質の分子量は７
７８である。以下、本明細書中、この物質を「conophyl
lidine」と称する。conophyllidineは、シリカゲル薄層
クロマトグラフィーでは、展開系クロロホルム：メタノ
ール＝２０：１、ヘキサン：酢酸エチル＝１：２、トル
エン：アセトン＝２：１において、それぞれＲｆ値は
０.５０、０.４６、０.６４である。また、ＦＡＢマス
スペクトルの結果から、分子量は７７８であることがわ
かった。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルの測定結果およびカッ
プリングについての測定結果よりスペクトルのピークの
帰属を行った結果および先のＦＡＢマススペクトルの結
果から、この物質は同じくエルヴァタミア・ミクロフィ
ラから単離されたconophylline（T.S.Kamら、Journal o
f Natural Products,56,1865-1871,1993）のエポキシド
の部分が二重結合になったconophyllidineであることが
明らかになった。この化合物の構造は上記化学式（１）
で表される。
【０００７】conophyllidineを、ｒａｓ癌遺伝子等の癌
遺伝子を有する癌細胞に与えると、癌細胞の形態が正常
化され、かつその増殖が阻止されたので、本物質は癌遺
伝子産物の作用を阻害する効果を有することが判明し
た。conophyllidineが癌細胞の増殖を５０％抑制する濃
度（ＩＣ50）は、癌細胞の種類によって異なるが、約
０.０５〜０.２μｇ／ｍｌであった。
遺伝子を有する癌細胞に与えると、癌細胞の形態が正常
化され、かつその増殖が阻止されたので、本物質は癌遺
伝子産物の作用を阻害する効果を有することが判明し
た。conophyllidineが癌細胞の増殖を５０％抑制する濃
度（ＩＣ50）は、癌細胞の種類によって異なるが、約
０.０５〜０.２μｇ／ｍｌであった。
【０００８】本発明の抗癌剤に使用される医薬上許容可
能な担体としては、例えば天然もしくは合成ケイ酸アル
ミニウム、微結晶セルロース、タルク、デキストリン、
澱粉、乳糖などの賦形剤、及び植物油、プロピレングリ
コールなどの希釈剤があげられる。これに加えて、その
他の任意成分として、医薬上許容可能な安定剤、コーテ
ィング剤、懸濁化剤、乳化剤、溶解補助剤、保存剤、緩
衝剤、甘味剤なども存在させ得る。これらの添加剤とし
ては、公知のものを適宜組み合わせて使用し得る。また
剤形としては粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤
などの任意形態で用いられる。本発明の抗癌剤は主とし
て経口投与されるが、本発明は投与方法によって限定さ
れない。成人１日当りの投与量は投与方法及び病状等に
よって異なる。主たる投与方法である経口投与の場合
は、成人１日当り１００〜５００ｍｇが通常の投与量で
ある。しかし、本発明は投与量によって限定されない。
能な担体としては、例えば天然もしくは合成ケイ酸アル
ミニウム、微結晶セルロース、タルク、デキストリン、
澱粉、乳糖などの賦形剤、及び植物油、プロピレングリ
コールなどの希釈剤があげられる。これに加えて、その
他の任意成分として、医薬上許容可能な安定剤、コーテ
ィング剤、懸濁化剤、乳化剤、溶解補助剤、保存剤、緩
衝剤、甘味剤なども存在させ得る。これらの添加剤とし
ては、公知のものを適宜組み合わせて使用し得る。また
剤形としては粉剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤
などの任意形態で用いられる。本発明の抗癌剤は主とし
て経口投与されるが、本発明は投与方法によって限定さ
れない。成人１日当りの投与量は投与方法及び病状等に
よって異なる。主たる投与方法である経口投与の場合
は、成人１日当り１００〜５００ｍｇが通常の投与量で
ある。しかし、本発明は投与量によって限定されない。
【０００９】エルヴァタミア・ミクロフィラ（Ervatami
a microphylla Kerr) はキョウチクトウ科の小木であ
り、東南アジアに自生し、あるいは一部栽培されてい
る。原料植物は、保存、運搬等の理由から乾燥してもよ
く、その場合は天日で、あるいは６０℃以下のオーブン
で乾燥するのが好ましい。また、成分の抽出に際しては
粉砕したものが好ましい。抽出に用いる溶媒としては非
極性溶媒が好ましく、特に炭化水素溶媒またはハロゲン
化炭化水素溶媒が好ましい。炭化水素溶媒としては例え
ばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ベンゼ
ン、トルエン、キシレンなどが挙げられ、特にヘキサン
が好ましい。またハロゲン化炭化水素溶媒としては、例
えばクロロホルム、二塩化メチレン、四塩化炭素などが
挙げられ、特にクロロホルムが好ましい。最も好ましい
溶媒はクロロホルムである。もちろん、これらの溶媒類
に限定されるものではなく、conophyllidineを安定に抽
出し得る溶媒はすべて使用することができる。溶媒の量
は特に限定されないが、conophyllidineが抽出され得る
量であればよく、一般に乾燥粉砕したエルヴァタミア・
ミクロフィラ１００ｇ当り５００〜１５００ｍｌであ
る。抽出温度も特に限定されないが、本化合物が分解を
起こすことなく安定に抽出され得る温度であればよく、
好ましくは室温〜６０℃である。抽出時間は温度により
異なるが、例えば室温で抽出する場合２〜２０時間であ
る。なお、抽出は抽出率に応じて２回以上繰り返しても
よい。
a microphylla Kerr) はキョウチクトウ科の小木であ
り、東南アジアに自生し、あるいは一部栽培されてい
る。原料植物は、保存、運搬等の理由から乾燥してもよ
く、その場合は天日で、あるいは６０℃以下のオーブン
で乾燥するのが好ましい。また、成分の抽出に際しては
粉砕したものが好ましい。抽出に用いる溶媒としては非
極性溶媒が好ましく、特に炭化水素溶媒またはハロゲン
化炭化水素溶媒が好ましい。炭化水素溶媒としては例え
ばペンタン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ベンゼ
ン、トルエン、キシレンなどが挙げられ、特にヘキサン
が好ましい。またハロゲン化炭化水素溶媒としては、例
えばクロロホルム、二塩化メチレン、四塩化炭素などが
挙げられ、特にクロロホルムが好ましい。最も好ましい
溶媒はクロロホルムである。もちろん、これらの溶媒類
に限定されるものではなく、conophyllidineを安定に抽
出し得る溶媒はすべて使用することができる。溶媒の量
は特に限定されないが、conophyllidineが抽出され得る
量であればよく、一般に乾燥粉砕したエルヴァタミア・
ミクロフィラ１００ｇ当り５００〜１５００ｍｌであ
る。抽出温度も特に限定されないが、本化合物が分解を
起こすことなく安定に抽出され得る温度であればよく、
好ましくは室温〜６０℃である。抽出時間は温度により
異なるが、例えば室温で抽出する場合２〜２０時間であ
る。なお、抽出は抽出率に応じて２回以上繰り返しても
よい。
【００１０】得られた抽出物からconophyllidineが精製
される。精製は、例えば、抽出物を一旦濃縮した後にク
ロマトグラフィーによって行うことができる。クロマト
グラフィーは好ましくはカラムクロマトグラフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー、液−液向流分配クロマトグラフィー、薄層クロマト
グラフィー又はこれらの組み合わせを包含し得る。カラ
ムクロマトグラフィーとしては、例えば担体としてメル
ク・シリカゲル６０（Merck silicagel 60；商品名、メ
ルク社製）等のシリカゲル、溶媒としてクロロホルム：
メタノール＝１００：１を用いることができる。またゲ
ル濾過クロマトグラフィーとしては担体としてトヨパー
ルＨＷ−４０（；商品名、東ソー社製）、溶媒としてメ
タノールを用いることができる。しかし、クロマトグラ
フィー、担体及び溶媒の種類は上記のものに限定されな
い。そして、conophyllidineの構造を解析した結果、化
学式（１）で表されることが判明した。以下、実施例に
より本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はその実
施例に限定されるものではない。
される。精製は、例えば、抽出物を一旦濃縮した後にク
ロマトグラフィーによって行うことができる。クロマト
グラフィーは好ましくはカラムクロマトグラフィー、ゲ
ル濾過クロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィ
ー、液−液向流分配クロマトグラフィー、薄層クロマト
グラフィー又はこれらの組み合わせを包含し得る。カラ
ムクロマトグラフィーとしては、例えば担体としてメル
ク・シリカゲル６０（Merck silicagel 60；商品名、メ
ルク社製）等のシリカゲル、溶媒としてクロロホルム：
メタノール＝１００：１を用いることができる。またゲ
ル濾過クロマトグラフィーとしては担体としてトヨパー
ルＨＷ−４０（；商品名、東ソー社製）、溶媒としてメ
タノールを用いることができる。しかし、クロマトグラ
フィー、担体及び溶媒の種類は上記のものに限定されな
い。そして、conophyllidineの構造を解析した結果、化
学式（１）で表されることが判明した。以下、実施例に
より本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はその実
施例に限定されるものではない。
【００１１】
１．エルヴァタミア・ミクロフィラからの活性物質の抽
出 ６０℃のオーブンで乾燥したエルヴァタミア・ミクロフ
ィラの葉８５ｇを破砕した後、２ｌの三角フラスコに入
れ、クロロホルム８５０ｍｌを加えて室温で５時間攪拌
した。溶媒を新しくして同様の操作をくり返し、計３回
の抽出を行った。３回分の抽出液を合せて減圧下にクロ
ロホルム溶媒を留去し、得られた抽出物をさらに凍結乾
燥して褐色の粉末１０.５ｇを得た。この粉末を次の精
製の原料とした。
出 ６０℃のオーブンで乾燥したエルヴァタミア・ミクロフ
ィラの葉８５ｇを破砕した後、２ｌの三角フラスコに入
れ、クロロホルム８５０ｍｌを加えて室温で５時間攪拌
した。溶媒を新しくして同様の操作をくり返し、計３回
の抽出を行った。３回分の抽出液を合せて減圧下にクロ
ロホルム溶媒を留去し、得られた抽出物をさらに凍結乾
燥して褐色の粉末１０.５ｇを得た。この粉末を次の精
製の原料とした。
【００１２】２．抽出物からの活性物質の精製 抽出物４.９７ｇを少量のクロロホルムに溶かし、少量
のシリカゲル（メルク・シリカゲル６０、以下同様）を
加え、減圧下にクロロホルムを留去した後、これをカラ
ムに充填した３５ｇのシリカゲルの上にチャージし、ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：１で溶出した。この溶出液を
減圧下で乾燥させたところ、重量は１３１.２ｍｇであ
った。この溶出物を「４．conophyllidineの各種細胞に
対する形態変化誘導効果」に示す細胞形態変化誘導試験
に付したところ、形態正常化活性が認められた。
のシリカゲル（メルク・シリカゲル６０、以下同様）を
加え、減圧下にクロロホルムを留去した後、これをカラ
ムに充填した３５ｇのシリカゲルの上にチャージし、ヘ
キサン：酢酸エチル＝１：１で溶出した。この溶出液を
減圧下で乾燥させたところ、重量は１３１.２ｍｇであ
った。この溶出物を「４．conophyllidineの各種細胞に
対する形態変化誘導効果」に示す細胞形態変化誘導試験
に付したところ、形態正常化活性が認められた。
【００１３】続いてこの活性画分を少量のメタノールに
溶解させ、不溶沈澱物を取り除いた後、予めメタノール
で平衡化したトヨパールＨＷ−４０にチャージしてゲル
濾過クロマトグラフィーを行った。１００％メタノール
で溶出させて３ｍｌずつ集めた画分を薄層クロマトグラ
フィーで分析し、クロロホルム：メタノール＝２０：１
で展開してＲｆ＝０.５０（ＵＶ）に認められた黒色の
画分を集めて減圧下で乾燥したところ、重量は４.７ｍ
ｇであった。さらにこの画分を高速液体クロマトグラフ
（カラム：PEGASIL ODS、センシュー科学、溶出溶媒：8
0％メタノール）で分画し、各画分を上述の細胞形態変
化誘導試験に付し、形態正常化活性が認められた画分を
集め白色の粉末１.３ｍｇ（以下この物質をconophyllid
ineと称する）を得た。
溶解させ、不溶沈澱物を取り除いた後、予めメタノール
で平衡化したトヨパールＨＷ−４０にチャージしてゲル
濾過クロマトグラフィーを行った。１００％メタノール
で溶出させて３ｍｌずつ集めた画分を薄層クロマトグラ
フィーで分析し、クロロホルム：メタノール＝２０：１
で展開してＲｆ＝０.５０（ＵＶ）に認められた黒色の
画分を集めて減圧下で乾燥したところ、重量は４.７ｍ
ｇであった。さらにこの画分を高速液体クロマトグラフ
（カラム：PEGASIL ODS、センシュー科学、溶出溶媒：8
0％メタノール）で分画し、各画分を上述の細胞形態変
化誘導試験に付し、形態正常化活性が認められた画分を
集め白色の粉末１.３ｍｇ（以下この物質をconophyllid
ineと称する）を得た。
【００１４】３．精製物の構造解析 １）マススペクトルの解析 ＦＡＢマススペクトルの測定結果を図１に示す。図１の
ポジティブスペクトルにおいて779.5(m/z)に（Ｍ＋Ｈ）
+のピークが得られていることから、分子量は７７８で
あることが分かった。 ２）1Ｈ-ＮＭＲスペクトルの解析1 Ｈ-ＮＭＲスペクトルを測定した結果を図２に、カップ
リングについて調べた結果を図３に示す。スペクトルの
ピークの帰属を行った結果とマススペクトルの結果とを
併せて考えると、この物質はconophyllineのエポキシド
の部分が二重結合になったconophyllidineであると同定
された。
ポジティブスペクトルにおいて779.5(m/z)に（Ｍ＋Ｈ）
+のピークが得られていることから、分子量は７７８で
あることが分かった。 ２）1Ｈ-ＮＭＲスペクトルの解析1 Ｈ-ＮＭＲスペクトルを測定した結果を図２に、カップ
リングについて調べた結果を図３に示す。スペクトルの
ピークの帰属を行った結果とマススペクトルの結果とを
併せて考えると、この物質はconophyllineのエポキシド
の部分が二重結合になったconophyllidineであると同定
された。
【００１５】４．conophyllidineの各種細胞に対する形
態変化誘導効果 温度感受性Ｋirsten肉腫ウイルスで形質転換したラット
腎細胞であるＫ−ｒａｓts−ＮＲＫ細胞（米国ＮＩＨ）
は、癌細胞の形態を示す３３℃及び正常細胞の形態を示
す３９℃において、５％仔牛血清（Gibco Laboratories
社製）を含むダルベッコ変法イーグル培地（日水製薬
(株)製）にグルタミン０.６ｇ／ｌ、カナマイシン０.２
ｇ／ｌ、ＮａＨＣＯ3 ２.２５ｇ／ｌを加えたものを培
養液として、５％ＣＯ2インキュベーター中で培養し
た。また正常なラット腎細胞であるＮＲＫ−４９細胞
（大日本製薬(株)）、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞（ＪＣＲ
Ｂ細胞バンク）、Ｋirsten肉腫ウイルス及びＨarvey 肉
腫ウイルスで形質転換したＫ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細
胞、Ｈ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞及びＮ−ｒａｓ−Ｎ
ＩＨ３Ｔ３細胞（東京大学医科学研究所）ならびにＳｒ
ｃ癌遺伝子の発現しているＲＳＶ−ＮＲＫ細胞（昭和薬
科大学）は、３７℃において同様に培養した。各種細胞
におけるconophyllidineの効果は、各細胞を４８穴プラ
スチックプレート（商品名；コースター３５４８、コー
スター社製）に１.０×１０4個／培地０.５ｍｌ／ウェ
ルでまき、５％ＣＯ2 のインキュベーター中で１日培養
後、conophyllidineを加え、その後３日目まで細胞の形
態を観察した。
態変化誘導効果 温度感受性Ｋirsten肉腫ウイルスで形質転換したラット
腎細胞であるＫ−ｒａｓts−ＮＲＫ細胞（米国ＮＩＨ）
は、癌細胞の形態を示す３３℃及び正常細胞の形態を示
す３９℃において、５％仔牛血清（Gibco Laboratories
社製）を含むダルベッコ変法イーグル培地（日水製薬
(株)製）にグルタミン０.６ｇ／ｌ、カナマイシン０.２
ｇ／ｌ、ＮａＨＣＯ3 ２.２５ｇ／ｌを加えたものを培
養液として、５％ＣＯ2インキュベーター中で培養し
た。また正常なラット腎細胞であるＮＲＫ−４９細胞
（大日本製薬(株)）、マウスＮＩＨ３Ｔ３細胞（ＪＣＲ
Ｂ細胞バンク）、Ｋirsten肉腫ウイルス及びＨarvey 肉
腫ウイルスで形質転換したＫ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細
胞、Ｈ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞及びＮ−ｒａｓ−Ｎ
ＩＨ３Ｔ３細胞（東京大学医科学研究所）ならびにＳｒ
ｃ癌遺伝子の発現しているＲＳＶ−ＮＲＫ細胞（昭和薬
科大学）は、３７℃において同様に培養した。各種細胞
におけるconophyllidineの効果は、各細胞を４８穴プラ
スチックプレート（商品名；コースター３５４８、コー
スター社製）に１.０×１０4個／培地０.５ｍｌ／ウェ
ルでまき、５％ＣＯ2 のインキュベーター中で１日培養
後、conophyllidineを加え、その後３日目まで細胞の形
態を観察した。
【００１６】（１）Ｋ−ｒａｓts−ＮＲＫ細胞 Ｋ−ｒａｓts−ＮＲＫ細胞は、３３℃では細胞から幾つ
もの細い突起がみられ、また細胞同士が重なり合って癌
細胞の形態を示し、３９℃では細胞は平らで突起もみら
れず重なり合うこともなく正常細胞の形態を示す。そこ
で、３３℃でconophyllidineを０.１μｇ／ｍｌ添加し
て２４時間培養したところ、突起もなく平らで重なり合
うこともない正常細胞の形態になった。また、３９℃で
は、conophyllidineを添加しなかったものと同様の形態
を示した。 （２）Ｋ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞 癌細胞であるＫ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞は、形が丸く盛り
上がっているが、これにconophyllidine ０.１μｇ／
ｍｌを添加して２４時間培養したところ、細胞の形が平
らになり、接着面積も増して正常細胞の形態になった。 （３）Ｋ，Ｈ，Ｎ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞 癌細胞であるＫ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞及びＨ−ｒ
ａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞はそれぞれ細長い突起状の形態
をしており、さらに細胞同士が重なり合っている。ま
た、Ｎ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞はさらに細長く突起
が伸びた細胞になっている。
もの細い突起がみられ、また細胞同士が重なり合って癌
細胞の形態を示し、３９℃では細胞は平らで突起もみら
れず重なり合うこともなく正常細胞の形態を示す。そこ
で、３３℃でconophyllidineを０.１μｇ／ｍｌ添加し
て２４時間培養したところ、突起もなく平らで重なり合
うこともない正常細胞の形態になった。また、３９℃で
は、conophyllidineを添加しなかったものと同様の形態
を示した。 （２）Ｋ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞 癌細胞であるＫ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞は、形が丸く盛り
上がっているが、これにconophyllidine ０.１μｇ／
ｍｌを添加して２４時間培養したところ、細胞の形が平
らになり、接着面積も増して正常細胞の形態になった。 （３）Ｋ，Ｈ，Ｎ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞 癌細胞であるＫ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞及びＨ−ｒ
ａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞はそれぞれ細長い突起状の形態
をしており、さらに細胞同士が重なり合っている。ま
た、Ｎ−ｒａｓ−ＮＩＨ３Ｔ３細胞はさらに細長く突起
が伸びた細胞になっている。
【００１７】これらの細胞にconophyllidineを０.３μ
ｇ／ｍｌ添加してＫ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓでは２日間、
Ｈ−ｒａｓは３日間培養したところ、それぞれ形が平ら
になり、接着面積も増大して正常細胞であるＮＩＨ３Ｔ
３の形態になっているのが観察された。特にＨ−ｒａｓ
では細胞核が大きくなるという顕著な変化が見られた。
ｇ／ｍｌ添加してＫ−ｒａｓ、Ｎ−ｒａｓでは２日間、
Ｈ−ｒａｓは３日間培養したところ、それぞれ形が平ら
になり、接着面積も増大して正常細胞であるＮＩＨ３Ｔ
３の形態になっているのが観察された。特にＨ−ｒａｓ
では細胞核が大きくなるという顕著な変化が見られた。
【００１８】（４）ＲＳＶ−ＮＲＫ細胞 癌細胞であるＲＳＶ−ＮＲＫ細胞は細長い突起状の形態
をしている。これにconophyllidine ０.１μｇ／ｍｌ
を加えて２日間培養したところ、接着面積が増し、細胞
核が大きく見られ、正常細胞であるＮＲＫ−４９細胞に
近い形を示した。
をしている。これにconophyllidine ０.１μｇ／ｍｌ
を加えて２日間培養したところ、接着面積が増し、細胞
核が大きく見られ、正常細胞であるＮＲＫ−４９細胞に
近い形を示した。
【００１９】５．conophyllidineの各種細胞に対する細
胞増殖抑制効果 Ｋ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞を４８穴プラスチックプレート
（コースター社製、以下同様）に１.０×１０4個／培地
０.５ｍｌ／ウェルでまき、５％ＣＯ2インキュベータ
ー中で１日培養後、conophyllidineを加えて培養した。
conophyllidine添加後経日的に培地を除去後トリプシン
を用いて細胞をはがし、培地を加えて均一にした。この
懸濁液の細胞濃度をコールターカウンター（ＺＭ型）を
用いて測定したところ、図４のような結果が得られ、濃
度依存的に細胞増殖抑制効果が認められた。次に、各種
細胞を４８穴プラスチックプレートに１.０×１０4個／
培地 ０.５ｍｌ／ウェルでまき、５％ＣＯ2 インキュベ
ーター中で１日培養した。翌日conophyllidineを加え、
更に３日間培養した後、同様にして細胞数を測定した。
細胞増殖を５０％阻害する濃度（ＩＣ50）を求めた結
果、表１に示したように、各種細胞に対して０.０５〜
０.１８μｇ／ｍｌという低濃度域で細胞増殖抑制効果
を示した。
胞増殖抑制効果 Ｋ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞を４８穴プラスチックプレート
（コースター社製、以下同様）に１.０×１０4個／培地
０.５ｍｌ／ウェルでまき、５％ＣＯ2インキュベータ
ー中で１日培養後、conophyllidineを加えて培養した。
conophyllidine添加後経日的に培地を除去後トリプシン
を用いて細胞をはがし、培地を加えて均一にした。この
懸濁液の細胞濃度をコールターカウンター（ＺＭ型）を
用いて測定したところ、図４のような結果が得られ、濃
度依存的に細胞増殖抑制効果が認められた。次に、各種
細胞を４８穴プラスチックプレートに１.０×１０4個／
培地 ０.５ｍｌ／ウェルでまき、５％ＣＯ2 インキュベ
ーター中で１日培養した。翌日conophyllidineを加え、
更に３日間培養した後、同様にして細胞数を測定した。
細胞増殖を５０％阻害する濃度（ＩＣ50）を求めた結
果、表１に示したように、各種細胞に対して０.０５〜
０.１８μｇ／ｍｌという低濃度域で細胞増殖抑制効果
を示した。
【００２０】 〔表１〕 細 胞 ＩＣ50（μg/ml） Ｋ-ras-NRK ０.０５０ Ｋ-rasts-NRK（３３℃） ０.０７４ Ｋ-rasts-NRK（３９℃） ０.０６２ NRK-４９ ０.０８４ Ｋ-ras-NIH3T3 ０.０７７ Ｎ-ras-NIH3T3 ０.１７ Ｈ-ras-NIH3T3 ０.０９６ NIH3T3 ０.１８ RSV-NRK ０.１６
【００２１】６．conophyllidineの急性毒性 マウスに対する静注毒性のＬＤ50値は表２のようにな
り、既存植物アルカロイド抗癌剤に比べて毒性が弱いこ
とが確認された。
り、既存植物アルカロイド抗癌剤に比べて毒性が弱いこ
とが確認された。
【００２２】 〔表２〕 化合物名 ＬＤ50（mg/kg） conophyllidine ３２.３ 硫酸ビンクリスチン ２.５ 硫酸ビンデシン ９.１ 硫酸ビンブラスチン １５.２
【００２３】
【発明の効果】化学式（１）で示される熱帯植物エルヴ
ァタミア・ミクロフィラから抽出された本発明の化合物
は、癌細胞の増殖を阻止し、その形態を正常化させる活
性を有し、抗癌剤として有効に使用できる。
ァタミア・ミクロフィラから抽出された本発明の化合物
は、癌細胞の増殖を阻止し、その形態を正常化させる活
性を有し、抗癌剤として有効に使用できる。
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＦＡＢマススペクトルのポジティブスペクト
ルの測定結果
ルの測定結果
【図２】 1Ｈ-ＮＭＲスペクトルの測定結果
【図３】 1Ｈ-ＮＭＲスペクトルの測定結果
【図４】 Ｋ−ｒａｓ−ＮＲＫ細胞に対する細胞増殖抑
制効果
制効果
フロントページの続き (72)発明者 小谷野 喬 神奈川県足柄上郡中井町井ノ口1500番地 テルモ株式会社内 (72)発明者 梅澤 一夫 東京都渋谷区広尾３−１−２−505
Claims (1)
- 【請求項１】 化学式（１）で表される化合物を有効成
分として含有することを特徴とする癌遺伝子機能抑制
剤。 【化１】
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7222279A JPH0967377A (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 癌遺伝子機能抑制剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7222279A JPH0967377A (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 癌遺伝子機能抑制剤 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0967377A true JPH0967377A (ja) | 1997-03-11 |
Family
ID=16779889
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7222279A Pending JPH0967377A (ja) | 1995-08-30 | 1995-08-30 | 癌遺伝子機能抑制剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0967377A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005099485A1 (ja) * | 2004-04-14 | 2005-10-27 | Keio University | 健康食品及びその製造方法、並びに乾燥物又は抽出物 |
| WO2007102467A1 (ja) * | 2006-03-07 | 2007-09-13 | Keio University | コノフィリン及び／又はコノフィリジンの水溶液 |
-
1995
- 1995-08-30 JP JP7222279A patent/JPH0967377A/ja active Pending
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005099485A1 (ja) * | 2004-04-14 | 2005-10-27 | Keio University | 健康食品及びその製造方法、並びに乾燥物又は抽出物 |
| JPWO2005099485A1 (ja) * | 2004-04-14 | 2008-03-06 | 学校法人慶應義塾 | 健康食品及びその製造方法、並びに乾燥物又は抽出物 |
| WO2007102467A1 (ja) * | 2006-03-07 | 2007-09-13 | Keio University | コノフィリン及び／又はコノフィリジンの水溶液 |
| US8178135B2 (en) | 2006-03-07 | 2012-05-15 | Keio University | Aqueous solution of conophylline and/or conophyllidine |
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