JPH0687736A

JPH0687736A - 抗癌剤

Info

Publication number: JPH0687736A
Application number: JP4264311A
Authority: JP
Inventors: Kazuo Umezawa; 一夫梅澤; Masaya Imoto; 正哉井本; Shigeru Oba; 茂大場; Takashi Koyano; 喬小谷野; Yoshiko Komiyama; 淑子小宮山
Original assignee: Tonen Corp
Current assignee: Tonen General Sekiyu KK
Priority date: 1992-09-07
Filing date: 1992-09-07
Publication date: 1994-03-29

Abstract

(57)【要約】【構成】有効成分として１−メトキシ−２−ホルミル
−３−ヒドロキシアントラキノンを含有する抗癌剤。【効果】１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキ
シアントラキノンは、癌細胞の増殖を阻止し、その形態
を正常化させる活性を有し、抗癌剤として有効に使用で
きる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、１−メトキシ−２−ホ
ルミル−３−ヒドロキシアントラキノンを含有する抗癌
剤、及び、熱帯植物（Morinda citrifolia L.）から
の１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアント
ラキノンの単離方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】癌遺伝子は、プロト癌遺伝子に点突然変
異、転座、増幅などの異常が起こることで発生し、種々
のヒト腫瘍において存在している例が数多く見い出さ
れ、腫瘍の形成に重要な役割を果たしていると考えられ
ている。癌遺伝子は、ｓｒｃ、ｒａｓ、ｍｙｃなどに代
表されるいくつかのグループに分類されている。

【０００３】ｒａｓ癌遺伝子の発現は、多くのヒト腫瘍
組織においてみられ、このｒａｓ癌遺伝子産物の作用を
阻害する物質が癌治療薬として期待されている。現在ま
でに、そのような阻害物質として放線菌から単離された
オキザノシン[N. Shimada ら, J. Antibiotics, 34(9),
1216-1218 (1981) 、O. Itoら, Cancer Research,49,
February 15, 996-1000 (1989)] 、かびから単離され
たコンパクチン[A. Endoら, FEBS Lett., 72, 323-326
(1976)]などが知られている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】しかし、現在までに知
られているｒａｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する物質
は、いずれも安定性や毒性に問題があり、臨床応用可能
なものはまだないといってよい。そのため、現在までに
知られている阻害物質には見られない構造あるいは作用
機構を有する、臨床応用が可能な薬剤の開発が望まれて
いる。

【０００５】本発明者らは、臨床応用可能な阻害物質を
得るために、癌細胞の形態を正常化させる作用を指標と
してスクリーニングすることにより、植物由来のｒａｓ
癌遺伝子産物の作用を阻害する物質の探索を行った結
果、熱帯植物モリンダ・シトリフォリアの抽出液にｒａ
ｓ癌遺伝子産物の作用を阻害する活性があることを発見
し、本発明を完成させた。

【０００６】本発明の目的は、有効成分として１−メト
キシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアントラキノンを
含有する抗癌剤を提供することである。

【０００７】本発明の別の目的は、１−メトキシ−２−
ホルミル−３−ヒドロキシアントラキノンの単離方法を
提供することである。

【０００８】

【課題を解決するための手段】本発明は、有効成分とし
て１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアント
ラキノン及び任意に医薬上許容可能な坦体等を含有する
抗癌剤を提供する。

【０００９】１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロ
キシアントラキノンは、下記の構造を有するアントラキ
ノン誘導体である。

【００１０】

【化１】

【００１１】上記化合物は、ｒａｓ癌遺伝子産物の作用
を阻害する効果を有することが判明した。本化合物を癌
細胞に与えると、癌細胞の形態が正常化され、かつ、そ
の増殖が阻止される。

【００１２】本化合物を５及び10μｇ／ｍｌの濃度で加
えた培地で、癌細胞（形質転換した細胞）を培養したと
ころ、細胞の癌形態が正常状態に戻った。

【００１３】また、本化合物の、癌細胞の細胞増殖を５
０％抑制する濃度（ＩＣ₅₀）は、癌細胞の種類によって
異なるが、約7.5 〜２μｇ／ｍｌであった。

【００１４】本発明の抗癌剤に使用される医薬上許容可
能な坦体としては、例えば天然もしくは合成ケイ酸アル
ミニウム、微結晶セルロース、タルク、デキストリン、
澱粉、メタケイ酸アルミン酸マグネシウム、乳糖などの
賦形剤、及び、植物油、プロピレングリコールなどの希
釈剤が挙げられる。これに加えて、その他の任意成分と
して、医薬上許容可能な安定剤、崩壊剤、コーティング
剤、懸濁化剤、乳化剤、溶解補助剤、保存剤、緩衝剤、
甘味剤なども存在させ得る。これらの添加剤としては、
公知のものを適宜組み合せて使用し得る。また、剤形と
しては、紛剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、注射剤など
の任意形態で用いられる。

【００１５】本発明の抗癌剤は主として経口投与される
が、本発明は投与方法によって限定されない。成人１日
当たりの投与量は投与方法及び病状等によって異なる。
主たる投与方法である経口投与の場合では、体重１kg・
１日当たり50〜500 mgが通常の投与量である。しかし、
本発明は投与量によって限定されない。

【００１６】本発明は、また、モリンダ・シトリフォリ
アからの１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシ
アントラキノンの単離方法を提供する。この方法は、モ
リンダ・シトリフォリアから１−メトキシ−２−ホルミ
ル−３−ヒドロキシアントラキノンを溶媒抽出し、次い
で精製することを包含する。

【００１７】モリンダ・シトリフォリア（Morinda ci
trifolia L. 、アカネ科、日本名ヤエヤマアオキ）は、
白色の花をもつ小木であり、東南アジアに自生し、ある
いは一部栽培されている。原料植物は、保存、運搬等の
理由から乾燥したものが好ましく使用される。また、抽
出に際しては粉砕したものが好ましい。

【００１８】抽出に用いる溶媒としては、非極性溶媒が
好ましく、特に、炭化水素溶媒又はハロゲン化炭化水素
溶媒が好ましい。炭化水素溶媒としては、例えば、ペン
タン、ヘキサン、ヘプタン、オクタン、ベンゼン、トル
エン、キシレンなどが挙げられ、特にヘキサンが好まし
い。また、ハロゲン化炭化水素溶媒としては、例えば、
クロロホルム、メチレンクロライド、四塩化炭素などが
挙げられ、特にクロロホルムが好ましい。最も好ましい
溶媒はクロロホルムである。もちろん、これらの溶媒類
に限定されるものでなく、本活性成分を安定に抽出し得
る溶媒は全て本発明の方法の範囲に含まれる。

【００１９】溶媒の量は特に限定されないが、本活性成
分が抽出され得る量であればよく、一般に、乾燥粉砕し
たモリンダ・シトリフォリア 100ｇ当たり 200〜1000ｍ
ｌである。抽出温度も特に限定されないが、本化合物が
分解を起こすことなく安定に抽出され得る温度であれば
よく、好ましくは室温〜60℃である。抽出時間は温度に
より異なるが、例えば室温で抽出する場合 2〜20時間で
ある。なお、抽出は抽出率に応じて２回以上繰り返して
もよい。

【００２０】得られた抽出物は精製される。精製は、例
えば、抽出物を一旦濃縮した後にクロマトグラフィーに
よって行うことができる。

【００２１】クロマトグラフィーは好ましくはカラムク
ロマトグラフィー、ゲル瀘過クロマトグラフィー、高速
液体クロマトグラフィー、液−液向流分配クロマトグラ
フィー、薄層クロマトグラフィー又はこれらの組み合せ
を包含し得る。適切に使用し得る坦体及び溶媒系はそれ
ぞれ、カラムクロマトグラフィーの場合例えばMerckSil
icagel 60（メルク社製）及びヘキサン：酢酸エチル＝1
0：１(v/v) である。しかし、クロマトグラフィー、坦
体及び溶媒系の種類は上記のものに限定されない。

【００２２】さらに、再結晶化を適用してもよい。この
目的の溶媒としては、例えばジクロロメタンとヘキサン
の混合液が好適である。

【００２３】１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロ
キシアントラキノン自体は、Gopalakirhsnanら、J. In
dian Chem. Soc., 67(5), 390-393(1990)に記載されて
おり、化学合成によって得ることも可能であろう。

【００２４】

【実施例】以下の実施例により、本発明をさらに詳細に
説明するが、本発明はその実施例に限定されるものでな
い。

【００２５】本明細書において、「％」は特記しない限
り重量％を示す。

【００２６】１．有機溶媒によるモリンダ・シトリフォ
リアからの活性物質の抽出天日または60℃のオーブンで乾燥したモリンダ・シトリ
フォリア（Morinda citrifolia L.)の根50ｇを破砕した
後、１ｌの三角フラスコに入れ、クロロホルム200ml を
加えて室温で７時間撹拌した。溶媒を新しくして同様の
操作を繰り返し、計３回の抽出を行った。３回分の抽出
液を合わせて減圧下にクロロホルム溶媒を留去し、得ら
れた抽出物をさらに凍結乾燥して黄褐色の粉末 0.7ｇを
得た。この粉末を次の精製の原料とした。

【００２７】尚、クロロホルム又はヘキサンによる抽出
物には、癌細胞（K-rasts-NRK 細胞）の形態変化誘導活
性が認められたが、メタノール又は水による抽出物に
は、同活性は認められなかった。

【００２８】２．抽出物からの活性物質の精製抽出物200mg を少量のクロロホルムに溶かし、少量のシ
リカゲルに付着させた。溶媒を除去後、カラムにつめた
20g のシリカゲルの上にのせ、ヘキサン：酢酸エチル＝
11：１、10：１、５：１(v/v) のヘキサンと酢酸エチル
の各混合物で順次溶出し、約10mlずつ分画した。活性が
認められた10：１の溶出液で溶離した部分を集め、乾燥
させたところ重量は51.8mgであった。これをメタノール
と混合し、その不溶画分として活性物質35.4mgを得た。

【００２９】更に、結晶化のためこれを少量のジクロロ
メタンに溶かし、数滴のヘキサンを加え、放置したとこ
ろ結晶12.6mgが得られた。

【００３０】３．精製物の物理化学的性質及び構造精製物の物理化学的性質を分析した。結果を下記に示
す。

【００３１】

【表１】

【００３２】これらの物理化学的性質、ＮＭＲスペクト
ル及びＸ線結晶解析により、精製物は化１の構造のアン
トラキノン誘導体であることが判明した。

【００３３】４．癌細胞の形態正常化作用１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアントラ
キノンを５及び10μｇ／ｍｌの濃度で加えた５％の仔牛
血清を含むダルベッコ変法イーグル（ＤＭＥ）培地で、
温度感受性Kirsten 肉腫ウィルスで形質転換したラット
腎細胞(K-ras^ts-NRK) を３日間培養したところ、細胞の
癌形態が正常状態に戻った（図１及び図２）。

【００３４】５．癌細胞の増殖阻害作用１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアントラ
キノンを種々の濃度で含む５％の仔牛血清を含むＤＭＥ
培地を用い、種々の癌細胞（形質転換細胞）を培養し
て、細胞増殖を５０％抑制する濃度（ＩＣ₅₀）を求め
た。結果は下記のとおりであった。

【００３５】

【表２】

【００３６】

【発明の効果】１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒド
ロキシアントラキノンは、癌細胞の増殖を阻止し、その
形態を正常化させる活性を有し、抗癌剤として有効に使
用できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】Ａ．１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロ
キシアントラキノンを含まない培地を用いて K-ras^ts-N
RK細胞を33℃で３日間培養したとき（コントロール）の
生物（細胞）の形態を示す写真である。Ｂ．１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアン
トラキノンを５μｇ／ｍｌの濃度で加えた培地を用いて
K-ras^ts-NRK細胞を33℃で３日間培養したときの生物
（細胞）の形態を示す写真である。

【図２】Ａ．１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロ
キシアントラキノンを10μｇ／ｍｌの濃度で加えた培地
を用いて K-ras^ts-NRK細胞を33℃で３日間培養したとき
の生物（細胞）の形態を示す写真である。Ｂ．１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアン
トラキノンを含まない培地を用いて K-ras^ts-NRK細胞を
39℃で３日間培養したとき（コントロール）の生物（細
胞）の形態を示す写真である。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者小谷野喬埼玉県入間郡大井町西鶴ケ岡一丁目３番１号東燃株式会社総合研究所内 (72)発明者小宮山淑子埼玉県入間郡大井町西鶴ケ岡一丁目３番１号東燃株式会社総合研究所内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】有効成分として１−メトキシ−２−ホル
ミル−３−ヒドロキシアントラキノンを含有する抗癌
剤。
【請求項２】１−メトキシ−２−ホルミル−３−ヒド
ロキシアントラキノンの単離方法であって、モリンダ・
シトリフォリア（Morinda citrifolia L.）から１−
メトキシ−２−ホルミル−３−ヒドロキシアントラキノ
ンを溶媒抽出し、次いで精製することを包含する方法。