JPH0967395A - 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 - Google Patents
抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法Info
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- JPH0967395A JPH0967395A JP22362895A JP22362895A JPH0967395A JP H0967395 A JPH0967395 A JP H0967395A JP 22362895 A JP22362895 A JP 22362895A JP 22362895 A JP22362895 A JP 22362895A JP H0967395 A JPH0967395 A JP H0967395A
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 交叉反応ないし非特異反応を抑制しつつ検体
のserotypeを簡便且つ正確に判定して、インターフェロ
ン治療の効果の正確な予測等を可能とする。 【解決手段】 下記式（１）、（２）又は（３）に示さ
れるアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合物と、Ｃ型
肝炎ウィルス（ＨＣＶ）抗体との特異的結合性を利用し
て、イムノアッセイ法により検体中のＨＣＶ抗体を測定
する。 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔ
ｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａ
ｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ
- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （１） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２） Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）
のserotypeを簡便且つ正確に判定して、インターフェロ
ン治療の効果の正確な予測等を可能とする。 【解決手段】 下記式（１）、（２）又は（３）に示さ
れるアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合物と、Ｃ型
肝炎ウィルス（ＨＣＶ）抗体との特異的結合性を利用し
て、イムノアッセイ法により検体中のＨＣＶ抗体を測定
する。 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔ
ｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａ
ｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ
- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （１） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２） Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎
ウィルス）関連抗体の測定に有用な抗原ペプチド化合物
および免疫学的測定方法に関する。
ウィルス）関連抗体の測定に有用な抗原ペプチド化合物
および免疫学的測定方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】地球上には種々のウィルスが存在してお
り、そのうちの幾つかは病原体である。例えば、ウィル
ス性肝炎の原因となる肝炎ウィルスは、輸血、注射ある
いは出産等の際に感染することが知られている。
り、そのうちの幾つかは病原体である。例えば、ウィル
ス性肝炎の原因となる肝炎ウィルスは、輸血、注射ある
いは出産等の際に感染することが知られている。
【０００３】輸血はヒトの生命維持のための重要な一手
段であるが、この輸血によってウィルス性肝炎が発症し
た例が、現在まで数多く報告されている。このウィルス
性肝炎は、一般にＡ型、Ｂ型および非Ａ非Ｂ型に分類さ
れている。
段であるが、この輸血によってウィルス性肝炎が発症し
た例が、現在まで数多く報告されている。このウィルス
性肝炎は、一般にＡ型、Ｂ型および非Ａ非Ｂ型に分類さ
れている。
【０００４】従来においては、Ｂ型肝炎ウィルス（ＨＢ
Ｖ）も輸血時のウィルス性肝炎の原因として知られてい
た。近年このＨＢＶの存在を検出する検査試薬が開発さ
れ、輸血前に簡便にＨＢＶの存在を確認することが可能
となったため、輸血によるＨＢＶ感染者は皆無となっ
た。一方、明らかにウィルス性でありながら、それまで
肝炎を起こす原因として考えられていたＡ型肝炎ウィル
ス（ＨＡＶ）によるＡ型でもＨＢＶによるＢ型でもない
肝炎（非Ａ非Ｂ型；nonAnonB型）の存在も知られていた
が、その発生源（ウィルス）を確認することは、従来は
困難とされていた。
Ｖ）も輸血時のウィルス性肝炎の原因として知られてい
た。近年このＨＢＶの存在を検出する検査試薬が開発さ
れ、輸血前に簡便にＨＢＶの存在を確認することが可能
となったため、輸血によるＨＢＶ感染者は皆無となっ
た。一方、明らかにウィルス性でありながら、それまで
肝炎を起こす原因として考えられていたＡ型肝炎ウィル
ス（ＨＡＶ）によるＡ型でもＨＢＶによるＢ型でもない
肝炎（非Ａ非Ｂ型；nonAnonB型）の存在も知られていた
が、その発生源（ウィルス）を確認することは、従来は
困難とされていた。
【０００５】１９８９年に、Choo, Q-L.ら（Science,
244 , 359-362, 1989 ）および Kuo,G.ら（Science, 2
44 , 362-364, 1989 ）によって、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィ
ルスの存在が明らかにされた。この肝炎ウィルスはＨＣ
Ｖ（Ｃ型肝炎ウィルス）と命名されたが、このＨＣＶは
ヒトとチンパンジ−のみに感染することが、以前から報
告されていた。
244 , 359-362, 1989 ）および Kuo,G.ら（Science, 2
44 , 362-364, 1989 ）によって、非Ａ非Ｂ型肝炎ウィ
ルスの存在が明らかにされた。この肝炎ウィルスはＨＣ
Ｖ（Ｃ型肝炎ウィルス）と命名されたが、このＨＣＶは
ヒトとチンパンジ−のみに感染することが、以前から報
告されていた。
【０００６】上記文献においては、以下のような実験が
記載されている。すなわち、患者に投与されて非Ａ非Ｂ
型肝炎を発症させた血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤
をチンパンジ−No. １に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた。更に該チンパンジ−の肝臓からの抽出物をチン
パンジ−No. ２に投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた後、チンパンジ−No. ２の血漿を抽出した。ま
た、このチンパンジ−No. ２の血漿を更にチンパンジ−
No. ３に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認した。こ
の発症が確認された血漿に対して、目的とするウィルス
をフラビノウィルスと想定してウィルス粒子の濃縮操作
(Bradley, D. W.ら: Gastroenterology,88 : 773-779,
1989) を行い、ウィルスのＲＮＡを抽出した。このよ
うにして得たＲＮＡに基づいてｃＤＮＡを合成し、λgt
11ライブラリ−を作製した。このλgt11ライブラリ−に
対して、回復期のチンパンジ−血清や非Ａ非Ｂ型慢性肝
炎患者血清を用いたイムノスクリ−ニングを行い、反応
するクロ−ンの選択を行った。この結果、5-1-1 と称さ
れるクロ−ンのみがＨＣＶに由来するｃＤＮＡ断片であ
ることが確認された。
記載されている。すなわち、患者に投与されて非Ａ非Ｂ
型肝炎を発症させた血液凝固第VIII因子製剤と同じ製剤
をチンパンジ−No. １に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた。更に該チンパンジ−の肝臓からの抽出物をチン
パンジ−No. ２に投与し、同様に非Ａ非Ｂ型肝炎を発症
させた後、チンパンジ−No. ２の血漿を抽出した。ま
た、このチンパンジ−No. ２の血漿を更にチンパンジ−
No. ３に投与し、非Ａ非Ｂ型肝炎の発症を確認した。こ
の発症が確認された血漿に対して、目的とするウィルス
をフラビノウィルスと想定してウィルス粒子の濃縮操作
(Bradley, D. W.ら: Gastroenterology,88 : 773-779,
1989) を行い、ウィルスのＲＮＡを抽出した。このよ
うにして得たＲＮＡに基づいてｃＤＮＡを合成し、λgt
11ライブラリ−を作製した。このλgt11ライブラリ−に
対して、回復期のチンパンジ−血清や非Ａ非Ｂ型慢性肝
炎患者血清を用いたイムノスクリ−ニングを行い、反応
するクロ−ンの選択を行った。この結果、5-1-1 と称さ
れるクロ−ンのみがＨＣＶに由来するｃＤＮＡ断片であ
ることが確認された。
【０００７】上述した操作は、特公平２−５００８８０
号公報にも記載されており、遺伝子配列も明らかにされ
ている。また、日本でもＨＣＶの遺伝子配列に関する報
告がなされている（Journal of virology, 65(3) , 11
05〜1113, 1991）。
号公報にも記載されており、遺伝子配列も明らかにされ
ている。また、日本でもＨＣＶの遺伝子配列に関する報
告がなされている（Journal of virology, 65(3) , 11
05〜1113, 1991）。
【０００８】１９９０年６月の日本肝臓学会において、
ＨＣＶ構造領域の遺伝子配列が自治医科大学の岡本らに
よって明らかにされた（第２６回日本肝臓学会予稿集、
１９９０年）。１９９０年７月の日本癌学会において
は、岡本らと同様に、ＨＣＶの構造領域の遺伝子配列が
明らかされた（第４９回日本癌学会予稿集、１９９０
年）。これらの発表を比較すると、ＨＣＶコア領域に関
しては遺伝子の変異がほとんどないが、ＨＣＶエンベロ
−ブ領域の遺伝子配列に関しては、両者間で若干の相違
が認められる。
ＨＣＶ構造領域の遺伝子配列が自治医科大学の岡本らに
よって明らかにされた（第２６回日本肝臓学会予稿集、
１９９０年）。１９９０年７月の日本癌学会において
は、岡本らと同様に、ＨＣＶの構造領域の遺伝子配列が
明らかされた（第４９回日本癌学会予稿集、１９９０
年）。これらの発表を比較すると、ＨＣＶコア領域に関
しては遺伝子の変異がほとんどないが、ＨＣＶエンベロ
−ブ領域の遺伝子配列に関しては、両者間で若干の相違
が認められる。
【０００９】その後、ＨＣＶ構造領域のコア抗原とＨＣ
Ｖ非構造領域の抗原部位とを組み合わせた抗体検査が提
案され（臨床病理, 40(12), 1245-1251,1992）、このよ
うな抗体検査により、ほぼ完全にＨＣＶ抗体陽性者のス
クリーニングを行うことが可能となった。
Ｖ非構造領域の抗原部位とを組み合わせた抗体検査が提
案され（臨床病理, 40(12), 1245-1251,1992）、このよ
うな抗体検査により、ほぼ完全にＨＣＶ抗体陽性者のス
クリーニングを行うことが可能となった。
【００１０】一方、ＨＣＶ検査と平行してＣ型肝炎のイ
ンターフェロンによる治療が行われるようになったが、
ＨＣＶの遺伝子型(genotype)の種類により、インターフ
ェロン治療の効果が異なることが判明している。このge
notypeの分類は、Okamoto H.: 肝胆膵, 24, 7-14（199
2）によって明らかにされており、Ｉ型（Proc. Natl.Ac
ad. Sci. USA, 88, 2451-2455, 1991 ）、II型（Journa
l of virology, 65(3) , 1105〜1113, 1991）、III 型
（Journal of General Virology, 72, 2697-2704,199
1）およびIV型（Virology, 188 , 331-341, 1992 ）に
分類されている。更に、岡本らにより、Ｖ型までのgeno
typeの分類が示された（医学の歩み、１７１（１４）、
９９４〜９９８頁（１９９４年））。
ンターフェロンによる治療が行われるようになったが、
ＨＣＶの遺伝子型(genotype)の種類により、インターフ
ェロン治療の効果が異なることが判明している。このge
notypeの分類は、Okamoto H.: 肝胆膵, 24, 7-14（199
2）によって明らかにされており、Ｉ型（Proc. Natl.Ac
ad. Sci. USA, 88, 2451-2455, 1991 ）、II型（Journa
l of virology, 65(3) , 1105〜1113, 1991）、III 型
（Journal of General Virology, 72, 2697-2704,199
1）およびIV型（Virology, 188 , 331-341, 1992 ）に
分類されている。更に、岡本らにより、Ｖ型までのgeno
typeの分類が示された（医学の歩み、１７１（１４）、
９９４〜９９８頁（１９９４年））。
【００１１】１９９３年６月に行われた日本肝臓学会で
は、genotypeＩ型およびII型（インターフェロン治療：
２０％有効）は、genotypeIII 型およびIV型（インター
フェロン治療：８０％有効）に比べ、インターフェロン
の治療効果が低いことが報告された（第２９回日本肝臓
学会予稿集、第５５頁、１９９３年）。一方、上記した
genotypeＶ型については症例が稀であるため、このＶ型
に対するインターフェロンの治療効果は明らかでない。
は、genotypeＩ型およびII型（インターフェロン治療：
２０％有効）は、genotypeIII 型およびIV型（インター
フェロン治療：８０％有効）に比べ、インターフェロン
の治療効果が低いことが報告された（第２９回日本肝臓
学会予稿集、第５５頁、１９９３年）。一方、上記した
genotypeＶ型については症例が稀であるため、このＶ型
に対するインターフェロンの治療効果は明らかでない。
【００１２】
【発明が解決しようとする課題】インターフェロンの投
与は脱毛や発熱などの強い副作用が伴うことが多く、患
者への負担が大きいため、治療前のＨＣＶgenotypeの判
定はインターフェロン投与効果の予測に極めて重要であ
る。しかしながら、従来のgenotype判定法においては、
「患者検体中のＨＣＶのＲＮＡ抽出、これに対応するｃ
ＤＮＡの合成、該ｃＤＮＡのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖
反応）法による増幅、電気泳動法を用いる増幅ｃＤＮＡ
のバンドの確認」という、通常４８時間以上にもおよぶ
複雑な工程を経てgenotypeが決定されていたため、長い
時間と高いコストとが必要とされていた。
与は脱毛や発熱などの強い副作用が伴うことが多く、患
者への負担が大きいため、治療前のＨＣＶgenotypeの判
定はインターフェロン投与効果の予測に極めて重要であ
る。しかしながら、従来のgenotype判定法においては、
「患者検体中のＨＣＶのＲＮＡ抽出、これに対応するｃ
ＤＮＡの合成、該ｃＤＮＡのＰＣＲ（ポリメラーゼ連鎖
反応）法による増幅、電気泳動法を用いる増幅ｃＤＮＡ
のバンドの確認」という、通常４８時間以上にもおよぶ
複雑な工程を経てgenotypeが決定されていたため、長い
時間と高いコストとが必要とされていた。
【００１３】一方、遺伝子組み替えの方法を用いて製造
した抗原（約３００個のアミノ酸からなる）を用いて、
患者血清中のＨＣＶ抗体が２つのタイプ（serotype）に
分類できることが報告されている（肝胆膵、２２、８８
３〜８８９、１９９１年）が、この分類は、上記した
（インターフェロン治療の判定に重要な）genotypeとの
対応の点において必ずしも充分ではなかった。このsero
typeは血清型であり、遺伝子配列３個で１個のアミノ酸
と認識されるため、genotypeよりもserotypeの方が少な
い数の分類となる。
した抗原（約３００個のアミノ酸からなる）を用いて、
患者血清中のＨＣＶ抗体が２つのタイプ（serotype）に
分類できることが報告されている（肝胆膵、２２、８８
３〜８８９、１９９１年）が、この分類は、上記した
（インターフェロン治療の判定に重要な）genotypeとの
対応の点において必ずしも充分ではなかった。このsero
typeは血清型であり、遺伝子配列３個で１個のアミノ酸
と認識されるため、genotypeよりもserotypeの方が少な
い数の分類となる。
【００１４】上述したように、インターフェロン投与に
は多額の費用がかかるが、このインターフェロン投与の
前提となる上記genotypeの判定にも多額の費用がかかる
という欠点があった。治療前にＨＣＶのgenotype判定を
簡便に行うことが可能であれば、インターフェロン投与
効果を簡便に予測することが可能となり、インターフェ
ロンの投与方法や治療指針を計画的に策定することがで
き、更には患者への精神的、肉体的、並びに経済的負担
を軽減することができるため、簡便なＨＣＶのgenotype
判定が切望されていた。
は多額の費用がかかるが、このインターフェロン投与の
前提となる上記genotypeの判定にも多額の費用がかかる
という欠点があった。治療前にＨＣＶのgenotype判定を
簡便に行うことが可能であれば、インターフェロン投与
効果を簡便に予測することが可能となり、インターフェ
ロンの投与方法や治療指針を計画的に策定することがで
き、更には患者への精神的、肉体的、並びに経済的負担
を軽減することができるため、簡便なＨＣＶのgenotype
判定が切望されていた。
【００１５】したがって本発明の目的は、ＨＣＶのgeno
typeＩ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、
genotypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定
を可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原を提供することにあ
る。
typeＩ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、
genotypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定
を可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原を提供することにあ
る。
【００１６】本発明の他の目的は、ＨＣＶのgenotypeＩ
型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、genoty
peＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非特異
反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨＣＶ
抗体測定用抗原を提供することにある。
型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、genoty
peＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非特異
反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨＣＶ
抗体測定用抗原を提供することにある。
【００１７】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法
を提供することにある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法
を提供することにある。
【００１８】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定法を提供するこ
とにある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定法を提供するこ
とにある。
【００１９】本発明の更に他の目的は、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測
定法を提供することにある。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測
定法を提供することにある。
【００２０】
【課題を解決するための手段】本発明者は鋭意研究の結
果、ＨＣＶ抗原部位に基づく特定のアミノ酸配列（少な
くとも６個のアミノ酸を含む配列）を用いてＨＣＶ抗体
型（serotype）の判定を行うことが、ＨＣＶのgenotype
Ｉ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、geno
typeＶ型との簡便な区別を可能とするのみならず、抗原
−抗体反応に伴う交叉反応ないし非特異反応を効果的に
抑制して、上述した目的の達成に極めて効果的であるこ
とを見出した。
果、ＨＣＶ抗原部位に基づく特定のアミノ酸配列（少な
くとも６個のアミノ酸を含む配列）を用いてＨＣＶ抗体
型（serotype）の判定を行うことが、ＨＣＶのgenotype
Ｉ型およびII型と、genotypeIII 型およびIV型と、geno
typeＶ型との簡便な区別を可能とするのみならず、抗原
−抗体反応に伴う交叉反応ないし非特異反応を効果的に
抑制して、上述した目的の達成に極めて効果的であるこ
とを見出した。
【００２１】本発明の抗原ペプチド化合物は上記知見に
基づくものであり、より詳しくは、下記式（１）で示さ
れる配列に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少
なくとも６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴
とするものである。
基づくものであり、より詳しくは、下記式（１）で示さ
れる配列に含まれるアミノ酸配列であって、連続した少
なくとも６個のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴
とするものである。
【００２２】Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１） 更に、本発明によれば下記式（２）で示される配列に含
まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個
のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペ
プチド化合物が提供される。
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１） 更に、本発明によれば下記式（２）で示される配列に含
まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個
のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペ
プチド化合物が提供される。
【００２３】Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ
- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ-
Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇ
ｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉ
ｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ
- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （２） 更に、本発明によれば下記式（３）で示される配列に含
まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個
のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペ
プチド化合物が提供される。
- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ-
Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇ
ｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉ
ｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ
- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （２） 更に、本発明によれば下記式（３）で示される配列に含
まれるアミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個
のアミノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペ
プチド化合物が提供される。
【００２４】Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ
- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ-
Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌ
ｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・
（３） 更に、本発明によれば上記式（１）、（２）および／又
は（３）に記載の抗原ペプチドを担体に結合させ、抗原
−抗体反応を利用して該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体
を結合させ、更に抗原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗
体に標識リガンドを結合させることにより、上記検体中
のＨＣＶ抗体を測定することを特徴とするＨＣＶ抗体の
免疫学的測定法が提供される。
- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ-
Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌ
ｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・
（３） 更に、本発明によれば上記式（１）、（２）および／又
は（３）に記載の抗原ペプチドを担体に結合させ、抗原
−抗体反応を利用して該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体
を結合させ、更に抗原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗
体に標識リガンドを結合させることにより、上記検体中
のＨＣＶ抗体を測定することを特徴とするＨＣＶ抗体の
免疫学的測定法が提供される。
【００２５】ここに、「リガンド」とは、抗原および／
又は抗体に対して特異的な結合性を有する物質（例えば
抗体および／又は抗原）をいう。
又は抗体に対して特異的な結合性を有する物質（例えば
抗体および／又は抗原）をいう。
【００２６】上述した従来のgenotype判定においては、
ＨＣＶ遺伝子の配列自体を利用してＨＣＶの型判定を行
っているが、本発明においては、ＨＣＶに固有の抗原部
位に対する抗体の型（serotype）を利用してＨＣＶの型
判定を行っている。このような抗体型の判定は、従来の
genotype判定（ＨＣＶのＲＮＡ抽出→ｃＤＮＡの合成→
該ｃＤＮＡのＰＣＲ法による増幅→電気泳動法を用いた
増幅バンドの確認）に比べて著しく短時間で行うことが
でき、しかも作業工程も単純であるため、本発明によれ
ば、簡便且つ低コストのＨＣＶ型（genotype）の判定方
法を提供することができる。
ＨＣＶ遺伝子の配列自体を利用してＨＣＶの型判定を行
っているが、本発明においては、ＨＣＶに固有の抗原部
位に対する抗体の型（serotype）を利用してＨＣＶの型
判定を行っている。このような抗体型の判定は、従来の
genotype判定（ＨＣＶのＲＮＡ抽出→ｃＤＮＡの合成→
該ｃＤＮＡのＰＣＲ法による増幅→電気泳動法を用いた
増幅バンドの確認）に比べて著しく短時間で行うことが
でき、しかも作業工程も単純であるため、本発明によれ
ば、簡便且つ低コストのＨＣＶ型（genotype）の判定方
法を提供することができる。
【００２７】上記した従来の血清型判定法（約３００個
のアミノ酸からなる抗原を用いる）と比較して、本発明
においては、抗原−抗体反応に伴う交叉反応ないし非特
異反応が効果的に抑制されている。
のアミノ酸からなる抗原を用いる）と比較して、本発明
においては、抗原−抗体反応に伴う交叉反応ないし非特
異反応が効果的に抑制されている。
【００２８】本発明によれば、上記した（１）〜（３）
のいずれかのペプチドを用いることにより、従来からの
ＨＣＶ−genotypeの（Ｉ型およびII型）と、（III 型お
よびIV型）との判定に加え、更にgenotypeＶ型の検出な
いし判定が可能となる。
のいずれかのペプチドを用いることにより、従来からの
ＨＣＶ−genotypeの（Ｉ型およびII型）と、（III 型お
よびIV型）との判定に加え、更にgenotypeＶ型の検出な
いし判定が可能となる。
【００２９】本発明によれば、このようなＨＣＶタイプ
の更なる細分化が可能となることにより、感染経路の分
析にも有用な情報を得ることができる。
の更なる細分化が可能となることにより、感染経路の分
析にも有用な情報を得ることができる。
【００３０】後述する実施例の方法によりserotype判定
を行った結果、上記したgenotypeＶ型（serotypeIII 型
に相当する）は日本では稀であるが、アジア諸国や欧米
諸国ではむしろ主要な型であることが見出された（タイ
では、およそ半数がserotypeIII 型であった）。
を行った結果、上記したgenotypeＶ型（serotypeIII 型
に相当する）は日本では稀であるが、アジア諸国や欧米
諸国ではむしろ主要な型であることが見出された（タイ
では、およそ半数がserotypeIII 型であった）。
【００３１】
【発明の実施の形態】以下、必要に応じて図面を参照し
つつ、本発明を詳細に説明する。
つつ、本発明を詳細に説明する。
【００３２】本明細書においては、アミノ酸配列の表記
においては、Ｎ末端（左側）からＣ末端（右側）へ記載
する（例えば、以下のアミノ酸配列（１）においては、
ＡｒｇがＮ末端、ＰｒｏがＣ末端である）。また、本明
細書においては、下記に示すアミノ酸表記を用いる。
においては、Ｎ末端（左側）からＣ末端（右側）へ記載
する（例えば、以下のアミノ酸配列（１）においては、
ＡｒｇがＮ末端、ＰｒｏがＣ末端である）。また、本明
細書においては、下記に示すアミノ酸表記を用いる。
【００３３】 （アミノ酸の一文字表記および三文字表記） ＜略号＞ ＜名称＞ ＜略号＞ ＜名称＞ Ａｓｐ Ｄ アスパラギン酸 Ｖａｌ Ｖ バリン Ａｓｎ Ｎ アスパラギン Ｍｅｔ Ｍ メチオニン Ｔｈｒ Ｔ トレオニン Ｉｌｅ Ｉ イソロイシン Ｓｅｒ Ｓ セリン Ｌｅｕ Ｌ ロイシン Ｇｌｕ Ｅ グルタミン酸 Ｔｙｒ Ｙ チロシン Ｇｌｎ Ｑ グルタミン Ｐｈｅ Ｆ フェニルアラニン Ｐｒｏ Ｐ プロリン Ｔｒｐ Ｗ トリプトファン Ｇｌｙ Ｇ グリシン Ｌｙｓ Ｋ リジン Ａｌａ Ａ アラニン Ｈｉｓ Ｈ ヒスチジン Ｃｙｓ Ｃ システイン Ａｒｇ Ｒ アルギニン （抗原ペプチド化合物）本発明の抗原ペプチド化合物
は、下記式（１）（アミノ酸４８個）、（２）（アミノ
酸３１個）、または（３）（アミノ酸２２個）で示され
る配列に含まれる配列であって、少なくとも６個の連続
したアミノ酸からなる配列を有するペプチド化合物であ
る。
は、下記式（１）（アミノ酸４８個）、（２）（アミノ
酸３１個）、または（３）（アミノ酸２２個）で示され
る配列に含まれる配列であって、少なくとも６個の連続
したアミノ酸からなる配列を有するペプチド化合物であ
る。
【００３４】Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１）（ｃｋｋ−ｎ５１；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＩＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱ ＡＱ
ＶＩＡ ＨＱＦＫＥ ＫＶＬ） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２）（ｃｋｋ−ｎ５２；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＥＡＦＤＥ ＭＥＥＣＳ ＱＡＲＰＹ
ＩＥＱＡＱ ＶＩＡＨＱＦＫＥＫＶ Ｌ） Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）（ｃｋｋ
−ｎ５３；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＳＱＡＲＰ ＹＩＥＱＡ ＱＶＩＡＨ
ＱＦＫＥＫ ＶＬ） 本発明者の知見によれば、上記式（１）、（２）又は
（３）で示されるアミノ酸４８、３１ないし２２個から
なる配列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であっ
て、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む配列は、
本発明においてペプチド（１）、（２）および／又は
（３）と同様に、抗原として好適に使用可能である。こ
のような「種々の長さのアミノ酸配列」を構成するアミ
ノ酸の個数は、ＨＣＶの識別性と、交叉反応・非特異反
応の抑制とのバランスの点からは、１０個以上（更には
２２個以上）であることが好ましい。
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１）（ｃｋｋ−ｎ５１；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＩＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱ ＡＱ
ＶＩＡ ＨＱＦＫＥ ＫＶＬ） Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２）（ｃｋｋ−ｎ５２；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＥＡＦＤＥ ＭＥＥＣＳ ＱＡＲＰＹ
ＩＥＱＡＱ ＶＩＡＨＱＦＫＥＫＶ Ｌ） Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）（ｃｋｋ
−ｎ５３；ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＳＱＡＲＰ ＹＩＥＱＡ ＱＶＩＡＨ
ＱＦＫＥＫ ＶＬ） 本発明者の知見によれば、上記式（１）、（２）又は
（３）で示されるアミノ酸４８、３１ないし２２個から
なる配列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であっ
て、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む配列は、
本発明においてペプチド（１）、（２）および／又は
（３）と同様に、抗原として好適に使用可能である。こ
のような「種々の長さのアミノ酸配列」を構成するアミ
ノ酸の個数は、ＨＣＶの識別性と、交叉反応・非特異反
応の抑制とのバランスの点からは、１０個以上（更には
２２個以上）であることが好ましい。
【００３５】上記した「種々の長さのアミノ酸配列」の
具体例（アミノ酸６個以上）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
具体例（アミノ酸６個以上）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
【００３６】上記ペプチド化合物（１）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａ
ｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅ
ｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ
- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ-
Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇ
ｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉ
ｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ） （一文字表記：ＮＱＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶＬＹＥＡＦ
ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲＰＹＩＥＱＡＱＶＩＡ ＨＱＦ
ＫＥ）上記ペプチド化合物（２）に含まれるアミノ酸配列 Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓ
ｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ
- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ-
Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ （一文字表記：ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱＡＱ
ＶＩＡ ＨＱＦＫＥＫＶＬ）上記ペプチド化合物（３）に含まれるアミノ酸配列 Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ （一文字表記：ＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱＡＱＶＩＡ ＨＱ
ＦＫＥＫ） 本発明者の知見によれば、上記した（１）、（２）又は
（３）の配列を「含む」ペプチドも、上記（１）、
（２）又は（３）と同様に抗原として好適に使用可能で
ある。このようなペプチドを構成するアミノ酸の数は、
化学的に合成する場合には４０個以下であることが好ま
しく、リコンビナント法を用いて得る場合には１００個
以下であることが好ましい。
ノ酸配列 Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａ
ｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅ
ｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ
- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ-
Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇ
ｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉ
ｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ） （一文字表記：ＮＱＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶＬＹＥＡＦ
ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲＰＹＩＥＱＡＱＶＩＡ ＨＱＦ
ＫＥ）上記ペプチド化合物（２）に含まれるアミノ酸配列 Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓ
ｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ
- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ-
Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ （一文字表記：ＤＥＭＥＥＣＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱＡＱ
ＶＩＡ ＨＱＦＫＥＫＶＬ）上記ペプチド化合物（３）に含まれるアミノ酸配列 Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ （一文字表記：ＳＱＡＲ ＰＹＩＥＱＡＱＶＩＡ ＨＱ
ＦＫＥＫ） 本発明者の知見によれば、上記した（１）、（２）又は
（３）の配列を「含む」ペプチドも、上記（１）、
（２）又は（３）と同様に抗原として好適に使用可能で
ある。このようなペプチドを構成するアミノ酸の数は、
化学的に合成する場合には４０個以下であることが好ま
しく、リコンビナント法を用いて得る場合には１００個
以下であることが好ましい。
【００３７】上述した抗原ペプチド化合物（少なくとも
６個のアミノ酸を含むペプチド化合物）を得る方法は特
に制限されない。該ペプチド化合物は化学的に合成して
もよく、また遺伝子工学的手法（例えば遺伝子組替え技
術、すなわちリコンビナント法）を用いて製造してもよ
い。化学的手法を用いる場合、中間生成物の精製等が容
易な点からは、固相法によりアミノ酸を連結することが
好ましく、更には自動ペプチド合成機（例えば、アプラ
イド・バイオシステムズ社製の４３０Ａペプチド合成
機）を用いて合成することが好ましい。
６個のアミノ酸を含むペプチド化合物）を得る方法は特
に制限されない。該ペプチド化合物は化学的に合成して
もよく、また遺伝子工学的手法（例えば遺伝子組替え技
術、すなわちリコンビナント法）を用いて製造してもよ
い。化学的手法を用いる場合、中間生成物の精製等が容
易な点からは、固相法によりアミノ酸を連結することが
好ましく、更には自動ペプチド合成機（例えば、アプラ
イド・バイオシステムズ社製の４３０Ａペプチド合成
機）を用いて合成することが好ましい。
【００３８】（抗原ペプチド化合物の抗原性の確認）上
記したペプチド化合物（１）、（２）および（３）の配
列は、ＨＣＶのＮＳ４領域のアミノ酸配列からの抗原部
位の抽出に基づいて見出したものである（後述の実施例
１を参照）。本発明者は、更に、これらのペプチド化合
物（１）、（２）および（３）を用いた酵素免疫測定法
（ＥＬＩＳＡないしＥＩＡ）によりＨＣＶgenotypeの検
査を行い、別途ＨＣＶgenotypeの判定を行った患者の検
体を用いて、その特異性を確認した（後述の実施例４お
よび５を参照）。
記したペプチド化合物（１）、（２）および（３）の配
列は、ＨＣＶのＮＳ４領域のアミノ酸配列からの抗原部
位の抽出に基づいて見出したものである（後述の実施例
１を参照）。本発明者は、更に、これらのペプチド化合
物（１）、（２）および（３）を用いた酵素免疫測定法
（ＥＬＩＳＡないしＥＩＡ）によりＨＣＶgenotypeの検
査を行い、別途ＨＣＶgenotypeの判定を行った患者の検
体を用いて、その特異性を確認した（後述の実施例４お
よび５を参照）。
【００３９】（他の抗原ペプチド化合物）上述したペプ
チド化合物（１）、（２）および／又は（３）（いずれ
もＨＣＶのＮＳ４領域に対応する配列）を用いることに
より、後述するようにserotypeの判定が充分可能である
が、serotype判定の一層の精度向上ないし適用範囲拡大
の点からは、上記ペプチド化合物（１）、（２）および
／又は（３）と、他の抗原ペプチド化合物とを組合わせ
ることが好ましい。このような「他の抗原ペプチド化合
物」としては、下記のペプチド（４）〜（９）が挙げら
れる。
チド化合物（１）、（２）および／又は（３）（いずれ
もＨＣＶのＮＳ４領域に対応する配列）を用いることに
より、後述するようにserotypeの判定が充分可能である
が、serotype判定の一層の精度向上ないし適用範囲拡大
の点からは、上記ペプチド化合物（１）、（２）および
／又は（３）と、他の抗原ペプチド化合物とを組合わせ
ることが好ましい。このような「他の抗原ペプチド化合
物」としては、下記のペプチド（４）〜（９）が挙げら
れる。
【００４０】Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ
- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ-
Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （４）
（ｃｋｋ−ｎ１、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭ
ＱＬＡ） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ｇｌｎ- Ａｒ
ｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （５）（ｃｋｋ−ｎ
２、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱ
ＲＩＡ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓ
ｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｒｐ
- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（６）（ｃｋｋ−ｎ３、ＮＳ５領域
に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＨ ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ
ＮＬＬＷＲ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａ
ｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ- Ｍｅｔ
- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （７）（ｃｋｋ−ｎ４、ＮＳ５領
域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＧ ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ
ＮＬＦＭＧ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８）（ｃｋｋ−ｃ１、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ
ＴＷＡＱＰ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈ
ｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （９）（ｃｋｋ−ｃ２、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ
ＳＷＧＫＰ） 上記ペプチド（４）〜（９）についても、ＮＳ４領域対
応のペプチド（１）、（２）ないし（３）の場合と同様
にして、抗原性の確認、製造等を行うことができる。
- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ-
Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （４）
（ｃｋｋ−ｎ１、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭ
ＱＬＡ） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ｇｌｎ- Ａｒ
ｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （５）（ｃｋｋ−ｎ
２、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱ
ＲＩＡ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓ
ｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｒｐ
- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（６）（ｃｋｋ−ｎ３、ＮＳ５領域
に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＨ ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ
ＮＬＬＷＲ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａ
ｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ- Ｍｅｔ
- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （７）（ｃｋｋ−ｎ４、ＮＳ５領
域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＧ ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ
ＮＬＦＭＧ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８）（ｃｋｋ−ｃ１、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ
ＴＷＡＱＰ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈ
ｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （９）（ｃｋｋ−ｃ２、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ
ＳＷＧＫＰ） 上記ペプチド（４）〜（９）についても、ＮＳ４領域対
応のペプチド（１）、（２）ないし（３）の場合と同様
にして、抗原性の確認、製造等を行うことができる。
【００４１】また、本発明者の知見によれば、上記式
（４）〜（９）で示されるアミノ酸４０個または２０個
からなる配列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であ
って、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む配列
は、本発明においてペプチド（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）および／又は（９）のいずれかと同様
に、抗原ペプチドとして好適に使用可能である。
（４）〜（９）で示されるアミノ酸４０個または２０個
からなる配列を構成する種々の長さのアミノ酸配列であ
って、少なくとも６個の連続したアミノ酸を含む配列
は、本発明においてペプチド（４）、（５）、（６）、
（７）、（８）および／又は（９）のいずれかと同様
に、抗原ペプチドとして好適に使用可能である。
【００４２】このような種々の長さのアミノ酸配列（ア
ミノ酸６個以上 個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
ミノ酸６個以上 個以下）としては、例えば、下記の
配列が挙げられる。
【００４３】上記ペプチド化合物（４）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐ
ｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒ
ｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・
（１０） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ）
ノ酸配列 Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｐ
ｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｒ
ｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｎ- Ｇｌｕ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・
（１０） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ）
【００４４】
【表１】
【００４５】上記ペプチド化合物（５）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ・・・・・・・・・・
（１１） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ）
ノ酸配列 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ・・・・・・・・・・
（１１） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ）
【００４６】
【表２】
【００４７】上記ペプチド化合物（６）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅ
ｕ- Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（１２） （一文字表記：ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ ＮＬＬＷＲ）
ノ酸配列 Ｖａｌ- Ｓｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅ
ｕ- Ｔｒｐ- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（１２） （一文字表記：ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ ＮＬＬＷＲ）
【００４８】
【表３】
【００４９】上記ペプチド化合物（７）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍ
ｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈ
ｅ- Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （１３） （一文字表記：ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ ＮＬＦＭＧ）
ノ酸配列 Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍ
ｅｔ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈ
ｅ- Ｍｅｔ- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （１３） （一文字表記：ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ ＮＬＦＭＧ）
【００５０】
【表４】
【００５１】上記ペプチド化合物（８）に含まれるアミ
ノ酸配列 Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒ
ｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ （一文字表記：ＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ ＴＷ
ＡＱＰ）上記ペプチド化合物（９）に含まれるアミノ酸配列 Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａ
ｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅ
ｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｐｒｏ （一文字表記：ＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ ＳＷＧ
ＫＰ） 本発明者の知見によれば、上記した（４）ないし（９）
のいずれかの配列を含むペプチド（アミノ酸６個以上か
らなる）も、上記（４）ないし（９）と同様に抗原とし
て好適に使用可能である。このようなペプチドを構成す
るアミノ酸の数は、化学的に合成する場合には４０個以
下であることが好ましく、リコンビナント法を用いて得
る場合には１００個以下であることが好ましい。
ノ酸配列 Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ａｒ
ｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ （一文字表記：ＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ ＴＷ
ＡＱＰ）上記ペプチド化合物（９）に含まれるアミノ酸配列 Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａ
ｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅ
ｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｐｒｏ （一文字表記：ＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ ＳＷＧ
ＫＰ） 本発明者の知見によれば、上記した（４）ないし（９）
のいずれかの配列を含むペプチド（アミノ酸６個以上か
らなる）も、上記（４）ないし（９）と同様に抗原とし
て好適に使用可能である。このようなペプチドを構成す
るアミノ酸の数は、化学的に合成する場合には４０個以
下であることが好ましく、リコンビナント法を用いて得
る場合には１００個以下であることが好ましい。
【００５２】本発明者の知見によれば、上記ペプチド化
合物（１）〜（３）をそれぞれ単独で抗原として用いる
場合、serotype判定の精度の点から、抗原として好まし
い順は以下の通りである。この欄の記載においては、
「（１）、（２）、（３）、（４）および／又は
（５）」をまとめて「ＮＳ４」と表し、「（８）および
／又は（９）」をまとめて「ｃｏｒｅ」と表し、
「（６）および／又は（７）」をまとめて「ＮＳ５」と
表す。
合物（１）〜（３）をそれぞれ単独で抗原として用いる
場合、serotype判定の精度の点から、抗原として好まし
い順は以下の通りである。この欄の記載においては、
「（１）、（２）、（３）、（４）および／又は
（５）」をまとめて「ＮＳ４」と表し、「（８）および
／又は（９）」をまとめて「ｃｏｒｅ」と表し、
「（６）および／又は（７）」をまとめて「ＮＳ５」と
表す。
【００５３】好ましい順： ｃｏｒｅ＞ＮＳ４＞ＮＳ５ 一方、上記ペプチド化合物ｃｏｒｅ、ＮＳ４、およびＮ
Ｓ５のいずれか２種類を組合わせて抗原として用いる場
合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ましい
順は以下の通りである。
Ｓ５のいずれか２種類を組合わせて抗原として用いる場
合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ましい
順は以下の通りである。
【００５４】好ましい順：（ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ４）＞
（ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ５） また、上記ペプチド化合物ｃｏｒｅ、ＮＳ４、およびＮ
Ｓ５のいずれか３種類を組合わせて抗原として用いる場
合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ましい
順は以下の通りである。
（ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ５） また、上記ペプチド化合物ｃｏｒｅ、ＮＳ４、およびＮ
Ｓ５のいずれか３種類を組合わせて抗原として用いる場
合、serotype判定の精度の点から、抗原として好ましい
順は以下の通りである。
【００５５】好ましい順： （ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ４）
＋（ＮＳ５）＞（ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ５）＋（ＮＳ４） （ＨＣＶ抗体の測定方法）上記した抗原ペプチド化合物
のＨＣＶ抗体との特異的結合性を利用して、試料ないし
検体中のＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することが可能で
ある。本発明において使用する免疫学的測定法は特に制
限されないが、例えば、公知のイムノアッセイ法を特に
制限なく使用することが可能である。このようなイムノ
アッセイ法としては、例えば、酵素免疫測定法、放射免
疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）等が使
用できる。このイムノアッセイにおいては公知の測定技
術（例えば、競合法、二抗体法、サンドイッチ法等）を
特に制限なく使用することが可能である。このような公
知の測定技術に関しては、文献（ＥＩＡに関しては、例
えば、石川榮治「酵素免疫測定法」（第３版）、１８０
頁、医学書院）を参照することができる。
＋（ＮＳ５）＞（ｃｏｒｅ）＋（ＮＳ５）＋（ＮＳ４） （ＨＣＶ抗体の測定方法）上記した抗原ペプチド化合物
のＨＣＶ抗体との特異的結合性を利用して、試料ないし
検体中のＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することが可能で
ある。本発明において使用する免疫学的測定法は特に制
限されないが、例えば、公知のイムノアッセイ法を特に
制限なく使用することが可能である。このようなイムノ
アッセイ法としては、例えば、酵素免疫測定法、放射免
疫測定法（ＲＩＡ）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ）等が使
用できる。このイムノアッセイにおいては公知の測定技
術（例えば、競合法、二抗体法、サンドイッチ法等）を
特に制限なく使用することが可能である。このような公
知の測定技術に関しては、文献（ＥＩＡに関しては、例
えば、石川榮治「酵素免疫測定法」（第３版）、１８０
頁、医学書院）を参照することができる。
【００５６】本発明によれば、上記抗原ペプチド化合物
を用いてＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することにより、
検体のＨＣＶ抗体の種類（serotype）を判定することが
できる（例えば後述するように、ＨＣＶのserotypeがgr
oup I 、group II、ないしgroup III のいずれであるか
判定できる）。後述するように、ＨＣＶserotypeのgrou
p I はＨＣＶgenotype IおよびIIに対応し、ＨＣＶsero
typeのgroup IIはＨＣＶgenotype IIIおよびIVに対応
し、ＨＣＶserotypeのgroup III はＨＣＶgenotypeＶに
対応するため、簡便なＨＣＶgenotypeの判定が可能とな
る。
を用いてＨＣＶ抗体を免疫学的に測定することにより、
検体のＨＣＶ抗体の種類（serotype）を判定することが
できる（例えば後述するように、ＨＣＶのserotypeがgr
oup I 、group II、ないしgroup III のいずれであるか
判定できる）。後述するように、ＨＣＶserotypeのgrou
p I はＨＣＶgenotype IおよびIIに対応し、ＨＣＶsero
typeのgroup IIはＨＣＶgenotype IIIおよびIVに対応
し、ＨＣＶserotypeのgroup III はＨＣＶgenotypeＶに
対応するため、簡便なＨＣＶgenotypeの判定が可能とな
る。
【００５７】上記イムノアッセイにおいては、必要に応
じて、上記抗原ペプチド化合物を担体（ないし支持体）
に結合ないし固相化して、そのＨＣＶ抗体との特異的結
合性を利用して、ＨＣＶ抗原に対する抗体の種類（すな
わちＨＣＶのserotype）を判定することができる。この
際の担体ないし支持体としては、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、好ましくは分子量５万から１０万程度のポ
リペプチド、マイクロプレ−トのウェル、好ましくは直
径０．１μｍから６ｍｍ程度のポリスチレンボ−ル（な
いしポリスチレンビーズ）等が好ましく用いられる。
じて、上記抗原ペプチド化合物を担体（ないし支持体）
に結合ないし固相化して、そのＨＣＶ抗体との特異的結
合性を利用して、ＨＣＶ抗原に対する抗体の種類（すな
わちＨＣＶのserotype）を判定することができる。この
際の担体ないし支持体としては、ウシ血清アルブミン
（ＢＳＡ）、好ましくは分子量５万から１０万程度のポ
リペプチド、マイクロプレ−トのウェル、好ましくは直
径０．１μｍから６ｍｍ程度のポリスチレンボ−ル（な
いしポリスチレンビーズ）等が好ましく用いられる。
【００５８】上記ペプチド（１）〜（３）は、上述した
ようにＨＣＶ抗体測定に好適に用いることができるが、
更には、例えばＨＣＶに対するワクチン製造用の抗原な
いし免疫原として用いることも可能である。この場合の
ワクチンは、例えば、遺伝子工学的手法を用いて作製す
ることができる（リコンビナント法）。
ようにＨＣＶ抗体測定に好適に用いることができるが、
更には、例えばＨＣＶに対するワクチン製造用の抗原な
いし免疫原として用いることも可能である。この場合の
ワクチンは、例えば、遺伝子工学的手法を用いて作製す
ることができる（リコンビナント法）。
【００５９】以下、実施例に基づき本発明を更に具体的
に説明する。
に説明する。
【００６０】
【実施例】実施例１ （Hydrophilicity Valueによる抗原部位の特定）Geoffr
ey RS, Nature, 302 , 490-495 （1983）で合成された
抗原性を有するペプチドの配列と、ＨＣＶの遺伝子配列
（第２６回日本肝臓学会予稿集、１９９０年；第４９回
日本癌学会予稿集、１９９０年；Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA,88, 2451-2455, 1991 ；Journal of virology,
65(3) , 1105〜1113, 1991；Journal of General Viro
logy, 72, 2697-2704,1991；Virology, 188 , 331-34
1,1992 ）とに基づき、ＨＣＶの非構造領域および構造
領域のアミノ酸配列を決定した。
ey RS, Nature, 302 , 490-495 （1983）で合成された
抗原性を有するペプチドの配列と、ＨＣＶの遺伝子配列
（第２６回日本肝臓学会予稿集、１９９０年；第４９回
日本癌学会予稿集、１９９０年；Proc. Natl. Acad. Sc
i. USA,88, 2451-2455, 1991 ；Journal of virology,
65(3) , 1105〜1113, 1991；Journal of General Viro
logy, 72, 2697-2704,1991；Virology, 188 , 331-34
1,1992 ）とに基づき、ＨＣＶの非構造領域および構造
領域のアミノ酸配列を決定した。
【００６１】このように求めたアミノ酸配列に基づき、
その抗原部位をHopp TP, Proc. Natl. Acad. Sci. 78,
3824-3828 （1981）の方法で算出した。より具体的に
は、各アミノ酸のHydrophlicity Value を用い、以下の
ようにして行った。
その抗原部位をHopp TP, Proc. Natl. Acad. Sci. 78,
3824-3828 （1981）の方法で算出した。より具体的に
は、各アミノ酸のHydrophlicity Value を用い、以下の
ようにして行った。
【００６２】上記により求めたＨＣＶを構成するアミノ
酸配列に基づき、連続する６個のアミノ酸の Hyrdrophi
licity Valueを合計した。この計算をＨＣＶアミノ酸配
列の全領域について行い、親水性および疎水性の強度を
算出した。親水性が高い部分を、抗原性を示す部位とし
た。
酸配列に基づき、連続する６個のアミノ酸の Hyrdrophi
licity Valueを合計した。この計算をＨＣＶアミノ酸配
列の全領域について行い、親水性および疎水性の強度を
算出した。親水性が高い部分を、抗原性を示す部位とし
た。
【００６３】この際、Jack K., Mol. Biol. 157, 105
（1982）に示されている HydropathyValue や Alan M
S., Science, 227, 429（1985）に示されている Antige
nicityValue 等も、上記Hydrophilicity Valueと同様に
算出することが可能であった。
（1982）に示されている HydropathyValue や Alan M
S., Science, 227, 429（1985）に示されている Antige
nicityValue 等も、上記Hydrophilicity Valueと同様に
算出することが可能であった。
【００６４】上記Hydrophilicity Valueを用いた計算に
より求めた結果を図１（ｃｏｒｅ領域）、図２（ＮＳ４
領域）および図３（ＮＳ５領域）のグラフに示す。
より求めた結果を図１（ｃｏｒｅ領域）、図２（ＮＳ４
領域）および図３（ＮＳ５領域）のグラフに示す。
【００６５】上記図１で得られた結果に基づいてＣ型肝
炎の抗原となり得る領域を抽出し、更に、このようにし
て求めた領域のうち、genotype IおよびgenotypeIIで共
通のアミノ酸配列を有する領域と、genotype IIIおよび
genotype IVで共通のアミノ酸配列を有する領域とを求
めた。更に、genotypeＩ、II、III およびIV型とは異な
るＶ型のアミノ酸配列を有する領域をも求めた。
炎の抗原となり得る領域を抽出し、更に、このようにし
て求めた領域のうち、genotype IおよびgenotypeIIで共
通のアミノ酸配列を有する領域と、genotype IIIおよび
genotype IVで共通のアミノ酸配列を有する領域とを求
めた。更に、genotypeＩ、II、III およびIV型とは異な
るＶ型のアミノ酸配列を有する領域をも求めた。
【００６６】この結果、このような条件を満たした抗原
のアミノ酸配列として、ＮＳ４領域に関して下記のｃｋ
ｋ−ｎ５１、ｃｋｋ−ｎ５２、およびｃｋｋ−ｎ５３が
求められた。
のアミノ酸配列として、ＮＳ４領域に関して下記のｃｋ
ｋ−ｎ５１、ｃｋｋ−ｎ５２、およびｃｋｋ−ｎ５３が
求められた。
【００６７】Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１）ｃｋｋ−ｎ５１ Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２）ｃｋｋ−ｎ５２ Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）ｃｋｋ−
ｎ５３実施例２ （Ｃ型肝炎の抗原の作製）上記したＨＣＶの抗原ペプチ
ド化合物（ｃｋｋ−ｎ５１）、（ｃｋｋ−ｎ５２）、
（ｃｋｋ−ｎ５３）、（ｃｋｋ−ｎ１；構造式（４））
および（ｃｋｋ−ｎ１；構造式（５））を以下に示す方
法で合成した。
- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ-
Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐ
ｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・
・・・・・ （１）ｃｋｋ−ｎ５１ Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２）ｃｋｋ−ｎ５２ Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３）ｃｋｋ−
ｎ５３実施例２ （Ｃ型肝炎の抗原の作製）上記したＨＣＶの抗原ペプチ
ド化合物（ｃｋｋ−ｎ５１）、（ｃｋｋ−ｎ５２）、
（ｃｋｋ−ｎ５３）、（ｃｋｋ−ｎ１；構造式（４））
および（ｃｋｋ−ｎ１；構造式（５））を以下に示す方
法で合成した。
【００６８】ペプチドの合成は、自動ペプチド合成機Ap
plied Biosystems 430A Peptide Synthesizer を用い、
t-Boc アミノ酸の対称性無水物を試薬として用いて行っ
た。得られた合成ペプチドをアニソ−ル・ジメチルサル
ファイド・パラチオクレゾ−ル内に溶解した後、フッ化
水素酸の存在下で、０〜５℃で１時間反応させて脱保護
を行った（S. Sakakibara, Bull. Chem. Soc. Jpn. 4
0, 2164（1967）参照）。
plied Biosystems 430A Peptide Synthesizer を用い、
t-Boc アミノ酸の対称性無水物を試薬として用いて行っ
た。得られた合成ペプチドをアニソ−ル・ジメチルサル
ファイド・パラチオクレゾ−ル内に溶解した後、フッ化
水素酸の存在下で、０〜５℃で１時間反応させて脱保護
を行った（S. Sakakibara, Bull. Chem. Soc. Jpn. 4
0, 2164（1967）参照）。
【００６９】脱保護により得られた粗結晶を２Ｎ酢酸に
溶解してエーテルで抽出し、抽出物を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥物をＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ
ー）を用いて精製した。
溶解してエーテルで抽出し、抽出物を凍結乾燥した。こ
の凍結乾燥物をＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ
ー）を用いて精製した。
【００７０】このＨＰＬＣ精製は、カラム（SISEIDO カ
プセルパックＣ18ＳＧ１２０、直径４６ｍｍ、長さ２５
０ｍｍ）を用い、純水中に０．１％トリフルオロ酢酸
（Trifluoroacetic acid；ＴＦＡ）と５％アセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）が含まれる溶液と、純水中に０．１％
ＴＦＡと５０％アセトニトリルが含まれる溶液とを用
い、流量１２ｍｌ／ｍｉｎで移動相にグラジェントをか
けることによって行った。
プセルパックＣ18ＳＧ１２０、直径４６ｍｍ、長さ２５
０ｍｍ）を用い、純水中に０．１％トリフルオロ酢酸
（Trifluoroacetic acid；ＴＦＡ）と５％アセトニトリ
ル（ＣＨ3 ＣＮ）が含まれる溶液と、純水中に０．１％
ＴＦＡと５０％アセトニトリルが含まれる溶液とを用
い、流量１２ｍｌ／ｍｉｎで移動相にグラジェントをか
けることによって行った。
【００７１】この際に得られたクロマトグラムを図４
（ｃｋｋ−ｎ５２）に示す。
（ｃｋｋ−ｎ５２）に示す。
【００７２】上記と同様にして、合成抗原ペプチドｃｋ
ｋ−ｎ１（４０）、ｎ２（４０）、ｎ５１、およびｎ５
３を用いて精製した。この際に得られたクロマトグラム
を図５（ｃｋｋ−ｎ５１）に示す。
ｋ−ｎ１（４０）、ｎ２（４０）、ｎ５１、およびｎ５
３を用いて精製した。この際に得られたクロマトグラム
を図５（ｃｋｋ−ｎ５１）に示す。
【００７３】上記と同様にして、下記に示す合成抗原ペ
プチドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４（ＮＳ５領域ペ
プチド）；およびｃｋｋ−ｃ１およびｃｋｋ−ｃ２（２
０アミノ酸からなるｃｏｒｅ領域ペプチド）を、それぞ
れ合成した。
プチドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４（ＮＳ５領域ペ
プチド）；およびｃｋｋ−ｃ１およびｃｋｋ−ｃ２（２
０アミノ酸からなるｃｏｒｅ領域ペプチド）を、それぞ
れ合成した。
【００７４】Ｉｌｅ- Ｉｌｅ- Ｌｅｕ- Ｓｅｒ- Ｇｌｙ
- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ-
Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （４）
（ｃｋｋ−ｎ１、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭ
ＱＬＡ） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ｇｌｎ- Ａｒ
ｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （５）（ｃｋｋ−ｎ
２、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱ
ＲＩＡ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓ
ｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｒｐ
- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（６）（ｃｋｋ−ｎ３、ＮＳ５領域
に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＨ ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ
ＮＬＬＷＲ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａ
ｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ- Ｍｅｔ
- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （７）（ｃｋｋ−ｎ４、ＮＳ５領
域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＧ ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ
ＮＬＦＭＧ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８）（ｃｋｋ−ｃ１、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ
ＴＷＡＱＰ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈ
ｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （９）（ｃｋｋ−ｃ２、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ
ＳＷＧＫＰ） 上記した種々の抗原ペプチドと、ＨＣＶの抗原領域との
関係を図６および図７に模式的に示す。
- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ａｌａ- Ｉｌｅ- Ｖａｌ- Ｐｒｏ-
Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ｇｌｕ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇ
ｌｎ- Ｇｌｕ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ｈｉｓ- Ｌｅｕ
- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ｇｌｙ-
Ｍｅｔ- Ｇｌｎ- Ｌｅｕ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （４）
（ｃｋｋ−ｎ１、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＩＩＬＳＧ ＲＰＡＩＶ ＰＤＲＥＬ
ＬＹＱＥＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＨＬ ＰＹＩＥＱ ＧＭ
ＱＬＡ） Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ａｌａ- Ｓｅｒ- Ａｒｇ- Ａｌａ- Ａｌａ- Ｌ
ｅｕ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ- Ｇｌｙ- Ｇｌｎ- Ａｒ
ｇ- Ｉｌｅ- Ａｌａ・・・・・・・・・・・ （５）（ｃｋｋ−ｎ
２、ＮＳ４領域に対応） （一文字表記：ＬＨＶＮＱ ＲＡＶＶＡ ＰＤＫＥＶ
ＬＹＥＡＦ ＤＥＭＥＥＣＡＳＲＡ ＡＬＩＥＥ ＧＱ
ＲＩＡ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｈｉｓ- Ｖａｌ- Ｓ
ｅｒ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｐ- Ｌｅｕ- Ｉｌ
ｅ- Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｌｅｕ- Ｔｒｐ
- Ａｒｇ・・・・・・・・・・（６）（ｃｋｋ−ｎ３、ＮＳ５領域
に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＨ ＶＳＰＤＡ ＤＬＩＥＡ
ＮＬＬＷＲ） Ｃｙｓ- Ｔｈｒ- Ｔｈｒ- Ｈｉｓ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ａ
ｌａ- Ｔｙｒ- Ａｓｐ- Ｖａｌ- Ａｓｐ- Ｍｅｔ- Ｖａ
ｌ- Ａｓｐ- Ａｌａ- Ａｓｎ- Ｌｅｕ- Ｐｈｅ- Ｍｅｔ
- Ｇｌｙ・・・・・・・・・・・ （７）（ｃｋｋ−ｎ４、ＮＳ５領
域に対応） （一文字表記：ＣＴＴＨＧ ＫＡＹＤＶ ＤＭＶＤＡ
ＮＬＦＭＧ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｇｌ
ｕ- Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ｔｈｒ- Ｔｒｐ- Ａｌａ- Ｇｌｎ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （８）（ｃｋｋ−ｃ１、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＡＲ ＲＰＥＧＲ
ＴＷＡＱＰ） Ｇｌｙ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｐｒｏ- Ｉｌｅ- Ｐ
ｒｏ- Ｌｙｓ- Ａｓｐ- Ａｒｇ- Ａｒｇ- Ｓｅｒ- Ｔｈ
ｒ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ- Ｓｅｒ- Ｔｒｐ- Ｇｌｙ- Ｌｙｓ
- Ｐｒｏ・・・・・・・・・・・ （９）（ｃｋｋ−ｃ２、ｃｏｒｅ
領域に対応） （一文字表記：ＧＲＲＱＰ ＩＰＫＤＲ ＲＳＴＧＫ
ＳＷＧＫＰ） 上記した種々の抗原ペプチドと、ＨＣＶの抗原領域との
関係を図６および図７に模式的に示す。
【００７５】実施例３ （ELISA 用プレートの作製）実施例２で得たＮＳ４領域
の抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ１を、０．１５ＭＮａＣｌ−
０．１０ＭＮａ2 ＨＰＯ4 - ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2
Ｏ緩衝液（ＰＢＳ）ｐＨ７．０に、１μｇ／ｍｌの濃度
となるように溶解した。このペプチド溶液を、９６−ウ
エルマイクロプレート（商品名：ELISA PLATE 68667 、
ＮＵＮＣ社製）に１ウエルあたり１００μｌずつ分注
し、３７℃で６０分間静置して上記抗原ペプチドをマイ
クロプレートに固相化した。
の抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ１を、０．１５ＭＮａＣｌ−
０．１０ＭＮａ2 ＨＰＯ4 - ＮａＨ2 ＰＯ4 ・２Ｈ2
Ｏ緩衝液（ＰＢＳ）ｐＨ７．０に、１μｇ／ｍｌの濃度
となるように溶解した。このペプチド溶液を、９６−ウ
エルマイクロプレート（商品名：ELISA PLATE 68667 、
ＮＵＮＣ社製）に１ウエルあたり１００μｌずつ分注
し、３７℃で６０分間静置して上記抗原ペプチドをマイ
クロプレートに固相化した。
【００７６】余剰の前記ペプチド溶液を除去した後、マ
イクロプレートを０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で３
回洗浄した。洗浄液を除去した後、濃度０．１％のゼラ
チンの０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）溶液を１ウエル
あたり３００μｌずつ分注し、３７℃６０分間静置して
ゼラチンをプレート上にコーティングした。余剰の前記
ゼラチン溶液を除去した後、濃度０．０５％のＴｗｅｅ
ｎ２０を含有する０．０１ＭＰＢＳ溶液（ｐＨ７．０）
で３回洗浄した。
イクロプレートを０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で３
回洗浄した。洗浄液を除去した後、濃度０．１％のゼラ
チンの０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）溶液を１ウエル
あたり３００μｌずつ分注し、３７℃６０分間静置して
ゼラチンをプレート上にコーティングした。余剰の前記
ゼラチン溶液を除去した後、濃度０．０５％のＴｗｅｅ
ｎ２０を含有する０．０１ＭＰＢＳ溶液（ｐＨ７．０）
で３回洗浄した。
【００７７】このようにしてゼラチンをコーティングし
たプレートを２５℃で６時間乾燥した後、４℃で検体分
析時まで保存した。
たプレートを２５℃で６時間乾燥した後、４℃で検体分
析時まで保存した。
【００７８】実施例４ （検体の分析）検体（２０種類）は、予め株式会社エス
アールエル八王子ラボラトリーにおいて、文献記載（Ok
amoto H.、肝胆膵, 24, 7-14（1992）；Chayama, K., T
subota, A., Arase, Y., et al., J. Gastroenterol. H
epatol. ８，１５０〜１５６（１９９３））のＰＣＲを
用いる方法を用いてＨＣＶ genotype の検査を行い、Ｈ
ＣＶgenotypeの判定を得た。
アールエル八王子ラボラトリーにおいて、文献記載（Ok
amoto H.、肝胆膵, 24, 7-14（1992）；Chayama, K., T
subota, A., Arase, Y., et al., J. Gastroenterol. H
epatol. ８，１５０〜１５６（１９９３））のＰＣＲを
用いる方法を用いてＨＣＶ genotype の検査を行い、Ｈ
ＣＶgenotypeの判定を得た。
【００７９】このようにしてＰＣＲ法によりＨＣＶgeno
typeの判定を行った検体を用いて、以下のようにして実
施例２で得た抗原ペプチドの特異性を確認した。この検
討においては、実施例３で作製した抗原ペプチド固相化
マイクロプレートを用い、以下のような手順で分析を行
った。
typeの判定を行った検体を用いて、以下のようにして実
施例２で得た抗原ペプチドの特異性を確認した。この検
討においては、実施例３で作製した抗原ペプチド固相化
マイクロプレートを用い、以下のような手順で分析を行
った。
【００８０】上記した各検体をそれぞれ０．０１％ＢＳ
Ａおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５０倍に希釈して、各ウエル
に１００μｌずつ分注して、上記抗原ペプチドと３７℃
で６０分間反応させた（抗原ペプチド−ＨＣＶ抗体の反
応）。
Ａおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有する０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５０倍に希釈して、各ウエル
に１００μｌずつ分注して、上記抗原ペプチドと３７℃
で６０分間反応させた（抗原ペプチド−ＨＣＶ抗体の反
応）。
【００８１】反応後、マイクロプレートを０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、濃度０．１μｇ／２０
ｍｌのペルオキシダ−ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ＫＰＬ
社製）を１００μｌずつ各ウェルに注入し、３７℃で６
０分間反応させた（ＨＣＶ抗体−ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体の反応）。
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、濃度０．１μｇ／２０
ｍｌのペルオキシダ−ゼ標識抗ヒトＩｇＧ抗体（ＫＰＬ
社製）を１００μｌずつ各ウェルに注入し、３７℃で６
０分間反応させた（ＨＣＶ抗体−ＰＯＤ標識抗ヒトＩｇ
Ｇ抗体の反応）。
【００８２】反応後、マイクロプレートを０．０５％Ｔ
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、各ウェルに０．０２３
％過酸化水素、および０．００５％ｏ−フェニレンジア
ミン（ＯＰＤ）を含有する０．１Ｍクエン酸−Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 緩衝液を１００μｌずつ分注し３７℃で３０分間
反応させた（ペルオキシダ−ゼの活性測定反応）。反応
後、５Ｎ硫酸を５０μｌずつ添加して反応を停止させ、
波長４９１ｎｍの吸光度（ＡＢＳないしＯＤ）を分光光
度計（商品名：プレ−トリ−ダ−、日本インターメッド
社製ＮＪ−２００１）で測定した。
ｗｅｅｎ２０含有０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で５
回洗浄し、洗浄液を除去した後、各ウェルに０．０２３
％過酸化水素、および０．００５％ｏ−フェニレンジア
ミン（ＯＰＤ）を含有する０．１Ｍクエン酸−Ｎａ2 Ｈ
ＰＯ4 緩衝液を１００μｌずつ分注し３７℃で３０分間
反応させた（ペルオキシダ−ゼの活性測定反応）。反応
後、５Ｎ硫酸を５０μｌずつ添加して反応を停止させ、
波長４９１ｎｍの吸光度（ＡＢＳないしＯＤ）を分光光
度計（商品名：プレ−トリ−ダ−、日本インターメッド
社製ＮＪ−２００１）で測定した。
【００８３】実施例５ （抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ２、ｎ５２を用いた検体の測
定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ１に代え
て、実施例２で得た抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ２又はｎ５
２を用いた以外は、実施例３と同様にして抗原ペプチド
ｃｋｋ−ｎ２またはｎ５２を固相化したマイクロプレー
トを作製した。このようにして得たマイクロプレートを
用いた以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenoty
peの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ１に代え
て、実施例２で得た抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ２又はｎ５
２を用いた以外は、実施例３と同様にして抗原ペプチド
ｃｋｋ−ｎ２またはｎ５２を固相化したマイクロプレー
トを作製した。このようにして得たマイクロプレートを
用いた以外は実施例４と同様にして、予めＨＣＶgenoty
peの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
【００８４】次いで、上記実施例４および本実施例で得
られた吸光度の測定データに基づいて、serotype判定を
行った。
られた吸光度の測定データに基づいて、serotype判定を
行った。
【００８５】この際のserotype判定においては、抗原ペ
プチドｃｋｋ−ｎ１（serotype１に対応するペプチド）
を用いた場合の吸光度と、抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ２
（serotype２に対応するペプチド）を用いた場合の吸光
度と、抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ５２（serotype３に対応
するペプチド）を用いた場合の吸光度とを比較して、い
ずれか一つの吸光度の値が、他の吸光度の値の１．５倍
以上であった場合に、吸光度が高かったもののタイプ
（ｃｋｋ−ｎ１であればserotype１、ｃｋｋ−ｎ２であ
ればserotype２、ｃｋｋ−ｎ５２であればserotype３）
とした。ここで用いた判定方法を下記の表５にまとめて
示す。
プチドｃｋｋ−ｎ１（serotype１に対応するペプチド）
を用いた場合の吸光度と、抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ２
（serotype２に対応するペプチド）を用いた場合の吸光
度と、抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ５２（serotype３に対応
するペプチド）を用いた場合の吸光度とを比較して、い
ずれか一つの吸光度の値が、他の吸光度の値の１．５倍
以上であった場合に、吸光度が高かったもののタイプ
（ｃｋｋ−ｎ１であればserotype１、ｃｋｋ−ｎ２であ
ればserotype２、ｃｋｋ−ｎ５２であればserotype３）
とした。ここで用いた判定方法を下記の表５にまとめて
示す。
【００８６】
【表５】
【００８７】上記により得られたserotype判定結果を、
下記表６（検体の希釈率は５０倍）に示す。
下記表６（検体の希釈率は５０倍）に示す。
【００８８】
【表６】
【００８９】上記した表６において、各列のデータの意
味は以下の通りである。
味は以下の通りである。
【００９０】第１列：検体番号 第２〜４列：ＮＳ４領域抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ１（第
２列、ＮＳ４−１） 、ｃｋｋ−ｎ２（第３列、Ｎ
Ｓ４−２）、およびｃｋｋ−ｎ５２（第４列、 Ｎ
Ｓ４−３）のそれぞれを用いた場合の検体の陽性
（●）、または陰性 （○）の区別。。
２列、ＮＳ４−１） 、ｃｋｋ−ｎ２（第３列、Ｎ
Ｓ４−２）、およびｃｋｋ−ｎ５２（第４列、 Ｎ
Ｓ４−３）のそれぞれを用いた場合の検体の陽性
（●）、または陰性 （○）の区別。。
【００９１】上記表６（Ｎ＝２０）のserotype判定結果
中、”１”は１型、”２”は２型、”０”は陰性（判定
不能）、”１＋２”は混在型（すなわち、いずれか一方
の吸光度の値も、他方の吸光度の値の１．５倍未満であ
り、ＯＤ値がcutoff値以上であった場合）、”０”は判
定不能を示す。
中、”１”は１型、”２”は２型、”０”は陰性（判定
不能）、”１＋２”は混在型（すなわち、いずれか一方
の吸光度の値も、他方の吸光度の値の１．５倍未満であ
り、ＯＤ値がcutoff値以上であった場合）、”０”は判
定不能を示す。
【００９２】上記で得られたserotype判定の結果をまと
めて、genotype判定結果（図５（表１）中、第９列”ge
notype”に示す）と比較したところ、以下の対応関係が
得られた（Hepatology, 16( 4) ,886, 1992参照）。
めて、genotype判定結果（図５（表１）中、第９列”ge
notype”に示す）と比較したところ、以下の対応関係が
得られた（Hepatology, 16( 4) ,886, 1992参照）。
【００９３】 （表中、「genotypeＶ」は、ＰＣＲ法によるgenotype判
定においてＶ型と判定されたものを示す。）実施例６ （抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４を用い
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−
ｎ１に代えて、実施例２で得たＮＳ５領域の抗原ペプチ
ドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４をそれぞれ用いた以
外は、実施例３と同様にしてそれぞれの抗原ペプチドを
固相化したマイクロプレートを作製した。
定においてＶ型と判定されたものを示す。）実施例６ （抗原ペプチドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４を用い
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−
ｎ１に代えて、実施例２で得たＮＳ５領域の抗原ペプチ
ドｃｋｋ−ｎ３およびｃｋｋ−ｎ４をそれぞれ用いた以
外は、実施例３と同様にしてそれぞれの抗原ペプチドを
固相化したマイクロプレートを作製した。
【００９４】このようにして得たマイクロプレートを用
いた以外は実施例４および５と同様にして、予めＨＣＶ
genotypeの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
いた以外は実施例４および５と同様にして、予めＨＣＶ
genotypeの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
【００９５】本実施例の方法によるserotype判定におい
ては、実施例５の場合と同様に、吸光度（ｃｋｋ−ｎ
３）と、吸光度（ｃｋｋ−ｎ４）とを比較して、いずれ
か一方の値が他方の値の１．５倍以上であった場合に、
吸光度の高い方のタイプ（ｃｋｋ−ｎ３の方であればse
rotype１、ｃｋｋ−ｎ４の方であればserotype２）とし
た。
ては、実施例５の場合と同様に、吸光度（ｃｋｋ−ｎ
３）と、吸光度（ｃｋｋ−ｎ４）とを比較して、いずれ
か一方の値が他方の値の１．５倍以上であった場合に、
吸光度の高い方のタイプ（ｃｋｋ−ｎ３の方であればse
rotype１、ｃｋｋ−ｎ４の方であればserotype２）とし
た。
【００９６】上記により得られたserotype判定結果を、
前述した表６の第５〜６列に示す。
前述した表６の第５〜６列に示す。
【００９７】本実施例で得られたserotype判定の結果を
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
【００９８】上記した表６において、各列のデータの意
味は以下の通りである。
味は以下の通りである。
【００９９】第５〜６列：ＮＳ５領域抗原ペプチドｃｋ
ｋ−ｎ３（第５列、ＮＳ５−１） 、およびｃｋｋ
−ｎ４（第６列、ＮＳ５−２）のそれぞれを用いた場合
の 検体の陽性（●）、または陰性（○）の区別。
ｋ−ｎ３（第５列、ＮＳ５−１） 、およびｃｋｋ
−ｎ４（第６列、ＮＳ５−２）のそれぞれを用いた場合
の 検体の陽性（●）、または陰性（○）の区別。
【０１００】 実施例７ （抗原ペプチドｃｋｋ−ｃ１およびｃｋｋ−ｃ２を用い
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−
ｎ１に代えて、実施例２で得たｃｏｒｅ領域の抗原ペプ
チドｃｋｋ−ｃ１およびｃｋｋ−ｃ２（いずれもアミノ
酸２０個からなるペプチド）をそれぞれ用いた以外は、
実施例３と同様にしてそれぞれの抗原ペプチドを固相化
したマイクロプレートを作製した。
た検体の測定）実施例３で用いた抗原ペプチドｃｋｋ−
ｎ１に代えて、実施例２で得たｃｏｒｅ領域の抗原ペプ
チドｃｋｋ−ｃ１およびｃｋｋ−ｃ２（いずれもアミノ
酸２０個からなるペプチド）をそれぞれ用いた以外は、
実施例３と同様にしてそれぞれの抗原ペプチドを固相化
したマイクロプレートを作製した。
【０１０１】このようにして得たマイクロプレートを用
いた以外は実施例４および５と同様にして、予めＨＣＶ
genotypeの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
いた以外は実施例４および５と同様にして、予めＨＣＶ
genotypeの判定を行った検体（２０種類）を分析した。
【０１０２】上記により得られたserotype判定結果を、
前述した表６の第７〜８列に示す。
前述した表６の第７〜８列に示す。
【０１０３】本実施例の方法によるserotype判定におい
ては、実施例５の場合と同様に、吸光度（ｃｋｋ−ｃ
１）と、吸光度（ｃｋｋ−ｃ２）とを比較して、いずれ
か一方の値が他方の値の１．５倍以上であった場合に、
吸光度の高い方のタイプ（ｃｋｋ−ｃ１の方であればse
rotype１、ｃｋｋ−ｃ２の方であればserotype２）とし
た。
ては、実施例５の場合と同様に、吸光度（ｃｋｋ−ｃ
１）と、吸光度（ｃｋｋ−ｃ２）とを比較して、いずれ
か一方の値が他方の値の１．５倍以上であった場合に、
吸光度の高い方のタイプ（ｃｋｋ−ｃ１の方であればse
rotype１、ｃｋｋ−ｃ２の方であればserotype２）とし
た。
【０１０４】本実施例で得られたserotype判定の結果を
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
まとめて、genotype判定結果と比較したところ、実施例
４および５の結果と同様に、以下の対応関係が得られ
た。
【０１０５】上記した表６において、各列のデータの意
味は以下の通りである。
味は以下の通りである。
【０１０６】第７〜８列：ｃｏｒｅ領域抗原ペプチドｃ
ｋｋ−ｃ１（第７列、ｃｏｒｅ−１）、およびｃｋｋ−
ｃ２（第８列、ｃｏｒｅ−２）のそれぞれを用いた場合
の検体の陽性（●）、または陰性（○）の区別。
ｋｋ−ｃ１（第７列、ｃｏｒｅ−１）、およびｃｋｋ−
ｃ２（第８列、ｃｏｒｅ−２）のそれぞれを用いた場合
の検体の陽性（●）、または陰性（○）の区別。
【０１０７】第９列：serotype判定結果。
【０１０８】第１０列：genotype判定結果。
【０１０９】 上述したように本発明によれば、従来のserotype判定方
法では判定不能であったgenotypeＶ型も、ｃｋｋ−ｎ５
１又はｃｋｋ−ｎ５２を用いることにより、serotypeII
I 型として判定可能となった。
法では判定不能であったgenotypeＶ型も、ｃｋｋ−ｎ５
１又はｃｋｋ−ｎ５２を用いることにより、serotypeII
I 型として判定可能となった。
【０１１０】上述したようにgenotypeＩおよび genotyp
e IIは serotype Ｉと良く相関し、genotype IIIおよび
genotype IVは serotype IIと良く相関し、更にgenoty
peＶはserotype IIIと良く相関していた。
e IIは serotype Ｉと良く相関し、genotype IIIおよび
genotype IVは serotype IIと良く相関し、更にgenoty
peＶはserotype IIIと良く相関していた。
【０１１１】
【発明の効果】上述したように本発明によれば、ＨＣＶ
に固有の特定のアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合
物およびこれを用いるＨＣＶ抗体測定方法が提供され
る。
に固有の特定のアミノ酸配列を有する抗原ペプチド化合
物およびこれを用いるＨＣＶ抗体測定方法が提供され
る。
【０１１２】本発明によれば、交叉反応ないし非特異反
応を抑制しつつＮＳ４領域の感度を向上させることによ
り、検体のserotypeを簡便且つ正確に判定することが可
能となる。したがって本発明によれば、ＮＳ４領域の感
度を向上させた正確且つ簡便なserotype判定に基づき、
例えば、インターフェロン治療の効果をあらかじめ予測
することが可能となる。
応を抑制しつつＮＳ４領域の感度を向上させることによ
り、検体のserotypeを簡便且つ正確に判定することが可
能となる。したがって本発明によれば、ＮＳ４領域の感
度を向上させた正確且つ簡便なserotype判定に基づき、
例えば、インターフェロン治療の効果をあらかじめ予測
することが可能となる。
【０１１３】更には、本発明によるＨＣＶ抗体価測定に
基づき、Ｃ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に観察す
ることが可能となる。すなわち、本発明によれば、疫学
的な点からセロタイプを利用することが可能となり、過
去の感染（ＮＳ４領域の抗体価）と、現在の肝炎（ＮＳ
４および／又はＮＳ５領域の抗体価）との関係について
の知見を得ることも可能となる。
基づき、Ｃ型肝炎の治癒ないし治療経過を簡便に観察す
ることが可能となる。すなわち、本発明によれば、疫学
的な点からセロタイプを利用することが可能となり、過
去の感染（ＮＳ４領域の抗体価）と、現在の肝炎（ＮＳ
４および／又はＮＳ５領域の抗体価）との関係について
の知見を得ることも可能となる。
【０１１４】更には、本発明によれば、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定を
可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原が提供される。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定を
可能とするＨＣＶ抗体測定用抗原が提供される。
【０１１５】更には、本発明によれば、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨ
ＣＶ抗体測定用抗原が提供される。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定を可能とするＨ
ＣＶ抗体測定用抗原が提供される。
【０１１６】更には、本発明によれば、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法
が提供される。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能なＨＣＶ抗体の簡便な測定法
が提供される。
【０１１７】更には、本発明によれば、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定法が提供され
る。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能で、しかも交叉反応ないし非
特異反応が抑制されたＨＣＶ抗体の測定法が提供され
る。
【０１１８】更には、本発明によれば、ＨＣＶのgenoty
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測
定法が提供される。
peＩ型およびII型と、genotypeIII型およびIV型と、gen
otypeＶ型との区別が可能な低コストのＨＣＶ抗体の測
定法が提供される。
【図面の簡単な説明】
【図１】実施例１においてＨＣＶのｃｏｒｅ領域に関し
Hydrophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグ
ラフである。
Hydrophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグ
ラフである。
【図２】実施例１においてＨＣＶのＮＳ４領域に関しHy
drophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグラ
フである。
drophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグラ
フである。
【図３】実施例１においてＨＣＶのＮＳ５領域に関しHy
drophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグラ
フである。
drophilicity Valueを計算により求めた結果を示すグラ
フである。
【図４】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（２）（ｃｋｋ−ｎ５２）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
（２）（ｃｋｋ−ｎ５２）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
【図５】実施例２において得られた抗原ペプチド化合物
（１）（ｃｋｋ−ｎ５１）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
（１）（ｃｋｋ−ｎ５１）のＨＰＬＣ分析結果を示すク
ロマトグラムである。
【図６】ＨＣＶの抗原領域と各抗原ペプチドとの関係を
示す模式図である。
示す模式図である。
【図７】ＨＣＶの抗原タイプと各抗原ペプチドとの関係
を示す模式図である。
を示す模式図である。
Claims (11)
- 【請求項１】 下記式（１）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｌｅｕ- Ｈｉｓ- Ｉｌｅ- Ａｓｎ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ａ
ｌａ- Ｖａｌ- Ｖａｌ- Ａｌａ- Ｐｒｏ- Ａｓｐ- Ｌｙ
ｓ- Ｇｌｕ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ- Ｔｙｒ- Ｇｌｕ- Ａｌａ
- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇｌｕ- Ｇｌｕ-
Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔ
ｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａ
ｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ
- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （１） - 【請求項２】 下記式（２）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｇｌｕ- Ａｌａ- Ｐｈｅ- Ａｓｐ- Ｇｌｕ- Ｍｅｔ- Ｇ
ｌｕ- Ｇｌｕ- Ｃｙｓ- Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒ
ｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ
- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ-
Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・
・・・・・・・ （２） - 【請求項３】 下記式（３）で示される配列に含まれる
アミノ酸配列であって、連続した少なくとも６個のアミ
ノ酸からなる配列を含むことを特徴とする抗原ペプチド
化合物。 Ｓｅｒ- Ｇｌｎ- Ａｌａ- Ａｒｇ- Ｐｒｏ- Ｔｙｒ- Ｉ
ｌｅ- Ｇｌｕ- Ｇｌｎ- Ａｒｇ- Ｇｌｎ- Ｖａｌ- Ｉｌ
ｅ- Ａｌａ- Ｈｉｓ- Ｇｌｎ- Ｐｈｅ- Ｌｙｓ- Ｇｌｕ
- Ｌｙｓ- Ｖａｌ- Ｌｅｕ・・・・・・・・・・・ （３） - 【請求項４】 化学的手法を用いて製造した請求項１な
いし３のいずれかに記載の抗原ペプチド化合物。 - 【請求項５】 遺伝子工学的手法を用いて製造した請求
項１ないし３のいずれかに記載の抗原ペプチド化合物。 - 【請求項６】 請求項１ないし３のいずれかに記載の抗
原ペプチドを担体に結合させ、抗原−抗体反応を利用し
て該ペプチドに検体中のＨＣＶ抗体を結合させ、更に抗
原−抗体反応を利用して該ＨＣＶ抗体に標識リガンドを
結合させることにより、上記検体中のＨＣＶ抗体を測定
することを特徴とするＨＣＶ抗体の免疫学的測定法。 - 【請求項７】 前記標識リガンドとして、酵素で標識し
たリガンドを用いる請求項６記載のＨＣＶ抗体の免疫学
的測定法。 - 【請求項８】 前記標識リガンドとして、放射性物質で
標識したリガンドを用いる請求項６記載のＨＣＶ抗体の
免疫学的測定法。 - 【請求項９】 前記標識リガンドとして、蛍光物質で標
識したリガンドを用いる請求項６記載のＨＣＶ抗体の免
疫学的測定法。 - 【請求項１０】 請求項１ないし３のいずれかに記載の
抗原ペプチドから選択されたいずれか２以上の抗原ペプ
チドを用いて、ＨＣＶのセロタイプ（serotype）を判定
する請求項６記載のＨＣＶ抗体の免疫学的測定法。 - 【請求項１１】 請求項１ないし３のいずれかに記載の
ＨＣＶのＮＳ４領域、ｃｏｒｅ領域およびＮＳ５領域に
対応する抗原ペプチドから選択された、異なる領域に対
応する２以上の抗原ペプチドを用いて、ＨＣＶのセロタ
イプ（serotype）を判定する請求項６記載のＨＣＶ抗体
の免疫学的測定法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22362895A JPH0967395A (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 |
| KR1019980701447A KR19990044211A (ko) | 1995-08-31 | 1996-08-29 | 항원 펩타이드 화합물 및 면역학적 측정 방법 |
| EP96928683A EP0852234A1 (en) | 1995-08-31 | 1996-08-29 | Antigenic peptide compounds and immunoassay method |
| PCT/JP1996/002416 WO1997008198A1 (en) | 1995-08-31 | 1996-08-29 | Antigenic peptide compounds and immunoassay method |
| AU68371/96A AU6837196A (en) | 1995-08-31 | 1996-08-29 | Antigenic peptide compounds and immunoassay method |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22362895A JPH0967395A (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0967395A true JPH0967395A (ja) | 1997-03-11 |
Family
ID=16801193
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22362895A Pending JPH0967395A (ja) | 1995-08-31 | 1995-08-31 | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0852234A1 (ja) |
| JP (1) | JPH0967395A (ja) |
| KR (1) | KR19990044211A (ja) |
| AU (1) | AU6837196A (ja) |
| WO (1) | WO1997008198A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2989120A4 (en) | 2013-04-25 | 2017-04-19 | Carmel-Haifa University Economic Corp. | Synthetic anti-inflammatory peptides and use thereof |
| MX2020014243A (es) | 2018-06-19 | 2021-05-12 | Biontech Us Inc | Neoantigenos y usos de los mismos. |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0610436B9 (en) * | 1991-11-21 | 2003-03-26 | Common Services Agency | Hepatitis-c virus testing |
| SG77551A1 (en) * | 1992-03-06 | 2005-04-28 | Innogenetics Nv | Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing |
| JPH07179493A (ja) * | 1993-10-29 | 1995-07-18 | S R L:Kk | 抗原ペプチド化合物および免疫学的測定方法 |
-
1995
- 1995-08-31 JP JP22362895A patent/JPH0967395A/ja active Pending
-
1996
- 1996-08-29 WO PCT/JP1996/002416 patent/WO1997008198A1/ja not_active Ceased
- 1996-08-29 AU AU68371/96A patent/AU6837196A/en not_active Abandoned
- 1996-08-29 EP EP96928683A patent/EP0852234A1/en not_active Withdrawn
- 1996-08-29 KR KR1019980701447A patent/KR19990044211A/ko not_active Withdrawn
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0852234A1 (en) | 1998-07-08 |
| KR19990044211A (ko) | 1999-06-25 |
| AU6837196A (en) | 1997-03-19 |
| WO1997008198A1 (en) | 1997-03-06 |
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