JPH0980052A - 抗体結合不溶性固体の保存法 - Google Patents
抗体結合不溶性固体の保存法Info
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】
【課題】動物種が異なった抗原性物質を測定した場合で
も、測定値に差が生じにくい抗体結合不溶性固体を提供
する。 【解決手段】測定の対象となる抗原性物質を認識する抗
体を不溶性固体に結合し、次いで酢酸緩衝液中に保存す
る方法。
も、測定値に差が生じにくい抗体結合不溶性固体を提供
する。 【解決手段】測定の対象となる抗原性物質を認識する抗
体を不溶性固体に結合し、次いで酢酸緩衝液中に保存す
る方法。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、被検試料液中の抗
原性物質を測定するヘテロジーニアス免疫測定法に用い
る抗体結合不溶性固体の保存方法に関する。
原性物質を測定するヘテロジーニアス免疫測定法に用い
る抗体結合不溶性固体の保存方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、生物体液中の物質を測定するため
にヘテロジーニアス免疫測定法が知られている。ヘテロ
ジーニアス免疫測定法では、検量線を作成するために使
用する標準物質に用いる抗原性物質の動物種と、測定の
対象となる抗原性物質の動物種とが異なる場合がある。
たとえば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編集、医
学書院）１９８２年、２１３頁には、ヒトのインスリン
を測定する時の標準物質としてブタのインスリンが用い
られることが記載されている。
にヘテロジーニアス免疫測定法が知られている。ヘテロ
ジーニアス免疫測定法では、検量線を作成するために使
用する標準物質に用いる抗原性物質の動物種と、測定の
対象となる抗原性物質の動物種とが異なる場合がある。
たとえば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編集、医
学書院）１９８２年、２１３頁には、ヒトのインスリン
を測定する時の標準物質としてブタのインスリンが用い
られることが記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、不溶性
固体に結合する抗体の親和性が、各動物種の抗原性物質
に対して異なる場合、測定の対象となる抗原性物質と標
準物質の動物種が違うと、正確な測定値が得られないと
いう問題が生じる。
固体に結合する抗体の親和性が、各動物種の抗原性物質
に対して異なる場合、測定の対象となる抗原性物質と標
準物質の動物種が違うと、正確な測定値が得られないと
いう問題が生じる。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記問題
を解決すべく鋭意検討した結果、抗体結合不溶性固体を
酢酸緩衝液に保存することにより、動物種間差がある抗
原性物質を測定した時も正確に測定することができるこ
とを見いだし、本発明に到達した。
を解決すべく鋭意検討した結果、抗体結合不溶性固体を
酢酸緩衝液に保存することにより、動物種間差がある抗
原性物質を測定した時も正確に測定することができるこ
とを見いだし、本発明に到達した。
【０００５】即ち本発明は、動物種間差のある抗原性物
質を認識する抗体を不溶性固体に結合し、次いで酢酸緩
衝液中に浸漬することを特徴とする抗体結合不溶性固体
の保存法である。
質を認識する抗体を不溶性固体に結合し、次いで酢酸緩
衝液中に浸漬することを特徴とする抗体結合不溶性固体
の保存法である。
【０００６】本発明において、測定の対象となる抗原性
物質としては、動物種間差のある抗原性物質、すなわ
ち、動物種で構造に差があり、抗体の特異性により反応
性が異なる抗原性物質があげられる。これらのうち、特
に高精度の測定系が要求されるホルモン、酵素の測定に
本発明の方法は好適であり、たとえばインスリン、エラ
スターゼ、神経特異エノラーゼ、ペプシノーゲンがあげ
られ、更に好ましくは動物種で構造の差が大きいインス
リンである。不溶性固体に結合する抗体としては、測定
の対象となる抗原性物質を認識するモノクローナル抗体
あるいはポリクローナル抗体のいずれも用いることがで
きる。
物質としては、動物種間差のある抗原性物質、すなわ
ち、動物種で構造に差があり、抗体の特異性により反応
性が異なる抗原性物質があげられる。これらのうち、特
に高精度の測定系が要求されるホルモン、酵素の測定に
本発明の方法は好適であり、たとえばインスリン、エラ
スターゼ、神経特異エノラーゼ、ペプシノーゲンがあげ
られ、更に好ましくは動物種で構造の差が大きいインス
リンである。不溶性固体に結合する抗体としては、測定
の対象となる抗原性物質を認識するモノクローナル抗体
あるいはポリクローナル抗体のいずれも用いることがで
きる。
【０００７】不溶性固体としては、特開平２−２０５７
７４号公報記載の不溶性固体があげられる。これらのう
ち好ましいものは、簡便且つ安定して抗体が結合でき、
更に、取扱いが容易なガラス（ガラスビーズ、ガラス試
験管、ガラスシャーレなど）、及びプラスチック（プラ
スチックビーズ、プラスチックチューブ、プラスチック
トレイなど）である。ガラスを用いた場合は、ガラスが
プラスチックより硬いため、傷がつきにくい点や変形し
にくい点で好ましい。
７４号公報記載の不溶性固体があげられる。これらのう
ち好ましいものは、簡便且つ安定して抗体が結合でき、
更に、取扱いが容易なガラス（ガラスビーズ、ガラス試
験管、ガラスシャーレなど）、及びプラスチック（プラ
スチックビーズ、プラスチックチューブ、プラスチック
トレイなど）である。ガラスを用いた場合は、ガラスが
プラスチックより硬いため、傷がつきにくい点や変形し
にくい点で好ましい。
【０００８】不溶性固体上に抗体を結合させる方法は、
特開平２−２０５７７４号公報記載の方法と同様でよ
い。即ち、ガラスとモノクローナル抗体を化学的に結合
させる方法（たとえば、米国特許第４２８０９９２号明
細書及び同第３６５２７６１号明細書）、及びプラスチ
ックに抗体を物理吸着させる方法（たとえば、イー・エ
ングバール、ジェー・ジョンソン、ピー・パールマン；
バイオキミカ バイオフィジカ アクタ(E.Engvall,J.J
onson,P.Parlmann;Biochimica Biopysica Acta),251
巻、1971年、427〜434頁記載の方法）がある。
特開平２−２０５７７４号公報記載の方法と同様でよ
い。即ち、ガラスとモノクローナル抗体を化学的に結合
させる方法（たとえば、米国特許第４２８０９９２号明
細書及び同第３６５２７６１号明細書）、及びプラスチ
ックに抗体を物理吸着させる方法（たとえば、イー・エ
ングバール、ジェー・ジョンソン、ピー・パールマン；
バイオキミカ バイオフィジカ アクタ(E.Engvall,J.J
onson,P.Parlmann;Biochimica Biopysica Acta),251
巻、1971年、427〜434頁記載の方法）がある。
【０００９】一般に酢酸緩衝液のｐＨは３．１〜８．０
であるが、本発明においては、酢酸緩衝液のｐＨを通常
４．０〜６．０、好ましくは４．５〜５．５に調整する
必要がある。ｐＨが６．０を越えると動物種の異なる抗
原性物質に対する親和性の差が大きくなり、その結果正
確な測定値が得られなくなり、また、ｐＨが４．０未満
では、不溶性固体に結合した抗体が変性失活するので測
定感度が悪くなり問題となる。
であるが、本発明においては、酢酸緩衝液のｐＨを通常
４．０〜６．０、好ましくは４．５〜５．５に調整する
必要がある。ｐＨが６．０を越えると動物種の異なる抗
原性物質に対する親和性の差が大きくなり、その結果正
確な測定値が得られなくなり、また、ｐＨが４．０未満
では、不溶性固体に結合した抗体が変性失活するので測
定感度が悪くなり問題となる。
【００１０】本発明の酢酸緩衝液の濃度は通常０．００
５Ｍ〜１．０Ｍ、好ましくは０．０５Ｍ〜０．２Ｍであ
る。なお、抗体結合不溶性固体の保存安定性を増強させ
るために、酢酸緩衝液に無機塩類（塩化ナトリウム、塩
化カリウムなど）、タンパク質（牛血清アルブミン、Ｉ
ｇＧなど）、防腐剤などを適量添加して用いることがで
きるが、この場合も、後からｐＨを４．０〜６．０に調
整することが必要である。
５Ｍ〜１．０Ｍ、好ましくは０．０５Ｍ〜０．２Ｍであ
る。なお、抗体結合不溶性固体の保存安定性を増強させ
るために、酢酸緩衝液に無機塩類（塩化ナトリウム、塩
化カリウムなど）、タンパク質（牛血清アルブミン、Ｉ
ｇＧなど）、防腐剤などを適量添加して用いることがで
きるが、この場合も、後からｐＨを４．０〜６．０に調
整することが必要である。
【００１１】本発明において、効果を発現させるために
は、測定の対象となる抗原性物質を認識する抗体結合不
溶性固体を、少なくとも１２時間以上酢酸緩衝液に浸漬
することが好ましい。通常、抗体を不溶性固体に結合
後、測定に使用するまで緩衝液中に浸漬する。
は、測定の対象となる抗原性物質を認識する抗体結合不
溶性固体を、少なくとも１２時間以上酢酸緩衝液に浸漬
することが好ましい。通常、抗体を不溶性固体に結合
後、測定に使用するまで緩衝液中に浸漬する。
【００１２】ヘテロジーニアス免疫測定法としては、文
献［たとえば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編
集、医学書院）1982年］記載のサンドウィッチ法、競合
法や特開平６−１３００６３記載の測定法を用いること
ができる。サンドウィッチ法は、 被検体液中の測定の対象となる抗原性物質に 不溶性固体と結合しており、且つこの抗原性物質を認
識する抗体と この抗原性物質を認識する標識抗体を結合させて得た
免疫複合体中の標識物質量を測定することにより抗原性
物質の量を測定する方法である。競合法は、 被検体液中の測定の対象となる抗原性物質に 不溶性固体と結合しており且つこの抗原性物質を認識
する抗体と 標識されている抗原性物質を結合させて得た免疫複合
体中の標識物質量を測定することにより抗原性物質の量
を測定する方法である。
献［たとえば、酵素免疫測定法第２版（石川栄治ら編
集、医学書院）1982年］記載のサンドウィッチ法、競合
法や特開平６−１３００６３記載の測定法を用いること
ができる。サンドウィッチ法は、 被検体液中の測定の対象となる抗原性物質に 不溶性固体と結合しており、且つこの抗原性物質を認
識する抗体と この抗原性物質を認識する標識抗体を結合させて得た
免疫複合体中の標識物質量を測定することにより抗原性
物質の量を測定する方法である。競合法は、 被検体液中の測定の対象となる抗原性物質に 不溶性固体と結合しており且つこの抗原性物質を認識
する抗体と 標識されている抗原性物質を結合させて得た免疫複合
体中の標識物質量を測定することにより抗原性物質の量
を測定する方法である。
【００１３】抗体に標識する標識物質としては、特開平
２−２０５７７４号公報記載の標識物質（酵素、放射線
同位元素、蛍光物質、化学発光物質など）を用いること
ができる。このうち好ましいものは、抗体標識が容易
で、且つ高い感度が得られるペルオキシダーゼ及び125
Ｉである。
２−２０５７７４号公報記載の標識物質（酵素、放射線
同位元素、蛍光物質、化学発光物質など）を用いること
ができる。このうち好ましいものは、抗体標識が容易
で、且つ高い感度が得られるペルオキシダーゼ及び125
Ｉである。
【００１４】
【発明の実施の形態】以下、実施例により本発明を更に
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００１５】
実施例 インスリンに対する抗体を結合したガラスビーズの検量
線とヒト血清中インスリンの測定を行った。 （１）ｐＨ５．５酢酸緩衝液の作製 ０．１Ｍ酢酸水溶液に０．１Ｍ酢酸ナトリウム水溶液を
加えｐＨを５．５に調整した水溶液を作製した。この水
溶液に１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミン、０．９Ｗ／Ｖ％塩
化ナトリウム、０．１Ｗ／Ｖ％アジ化ナトリウムを加え
た後、１ＭＨＣｌ又は１ＭＮａＯＨを適量加えてｐＨを
５．５に再調整し、抗体結合不溶性固体を浸漬する緩衝
液を作製した。 （２）インスリン酵素免疫測定試薬の製造 ａ）抗インスリン抗体結合ガラスビーズの作製 米国特許第652761号明細書の方法に従い、ガラスビーズ
の表面に抗インスリン抗体（ダコ社製）をコーティング
した。コーティング後、上記のｐＨ５．５酢酸緩衝液中
に浸漬した。 ｂ）ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体の作製 抗インスリン抗体（ダコ社製）を文献［エス・ヨシタ
ケ、エム・イマガワ、イー・イシカワ、他；ジェイ．バ
イオケム(S.YOSHITAKE,M.IMAGAWA,E.ISHIKAWA,et.al.;
J.Biochem.),92巻,1982年,1413-1424頁］に記載の方法
にてペルオキシダーゼと結合し、ペルオキシダーゼ標識
抗インスリン抗体を得た。この試薬は通常免疫反応用緩
衝液で１０〜５０００倍に希釈して使用した。 ｃ）ヒト及びブタインスリン標準溶液の調製 ヒトインスリン（ノボ社）を１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミ
ン含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で、濃度
が０、１０、５０、１２５、２５０μＵ／ｍｌとなるよ
うに希釈した。同様にブタインスリン（ノボ社）を濃度
が０、１０、５０、１２５、２５０μＵ／ｍｌとなるよ
うに希釈した。
線とヒト血清中インスリンの測定を行った。 （１）ｐＨ５．５酢酸緩衝液の作製 ０．１Ｍ酢酸水溶液に０．１Ｍ酢酸ナトリウム水溶液を
加えｐＨを５．５に調整した水溶液を作製した。この水
溶液に１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミン、０．９Ｗ／Ｖ％塩
化ナトリウム、０．１Ｗ／Ｖ％アジ化ナトリウムを加え
た後、１ＭＨＣｌ又は１ＭＮａＯＨを適量加えてｐＨを
５．５に再調整し、抗体結合不溶性固体を浸漬する緩衝
液を作製した。 （２）インスリン酵素免疫測定試薬の製造 ａ）抗インスリン抗体結合ガラスビーズの作製 米国特許第652761号明細書の方法に従い、ガラスビーズ
の表面に抗インスリン抗体（ダコ社製）をコーティング
した。コーティング後、上記のｐＨ５．５酢酸緩衝液中
に浸漬した。 ｂ）ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体の作製 抗インスリン抗体（ダコ社製）を文献［エス・ヨシタ
ケ、エム・イマガワ、イー・イシカワ、他；ジェイ．バ
イオケム(S.YOSHITAKE,M.IMAGAWA,E.ISHIKAWA,et.al.;
J.Biochem.),92巻,1982年,1413-1424頁］に記載の方法
にてペルオキシダーゼと結合し、ペルオキシダーゼ標識
抗インスリン抗体を得た。この試薬は通常免疫反応用緩
衝液で１０〜５０００倍に希釈して使用した。 ｃ）ヒト及びブタインスリン標準溶液の調製 ヒトインスリン（ノボ社）を１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミ
ン含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）で、濃度
が０、１０、５０、１２５、２５０μＵ／ｍｌとなるよ
うに希釈した。同様にブタインスリン（ノボ社）を濃度
が０、１０、５０、１２５、２５０μＵ／ｍｌとなるよ
うに希釈した。
【００１６】（３）免疫反応用緩衝液の作製 １Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミン、０．９Ｗ／Ｖ％塩化ナト
リウム含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を免
疫反応用緩衝液に用いた。 （４）ヒト及びブタインスリン標準溶液の測定。 標準溶液又は被検試料５０μｌ、免疫反応用緩衝液４５
０μｌを入れた試験管に抗インスリン抗体結合ガラスビ
ーズを１個入れインキュベーション（３７℃、１５分
間）したのち、生理食塩水にてビーズを洗浄した。次
に、ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体含有免疫反
応用緩衝液５００μｌ中にビーズを移しインキュベーシ
ョン（３７℃、１５分間）した。再度、生理食塩水にて
ビーズを洗浄したのち、ビーズを基質溶液（過酸化水素
含有オルトーフェニレンジアミン溶液）５００μｌ中に
移しインキュベーション（３７℃、１５分間）したの
ち、１．５規定硫酸水溶液３ｍｌを加えて反応を停止し
た。この液の４９２ｎｍの吸光度を測定し、ビーズに結
合した酵素の酵素活性を測定した。ヒト及びブタインス
リン標準溶液０、１０、５０、１２５、２５０Ｕ／ｍｌ
の吸光度を読み取り、それぞれ検量線を作成し、図１に
示した。次ぎにヒト血清の測定を行いそれぞれの検量線
から濃度を読み取り表１に示した。
リウム含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を免
疫反応用緩衝液に用いた。 （４）ヒト及びブタインスリン標準溶液の測定。 標準溶液又は被検試料５０μｌ、免疫反応用緩衝液４５
０μｌを入れた試験管に抗インスリン抗体結合ガラスビ
ーズを１個入れインキュベーション（３７℃、１５分
間）したのち、生理食塩水にてビーズを洗浄した。次
に、ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体含有免疫反
応用緩衝液５００μｌ中にビーズを移しインキュベーシ
ョン（３７℃、１５分間）した。再度、生理食塩水にて
ビーズを洗浄したのち、ビーズを基質溶液（過酸化水素
含有オルトーフェニレンジアミン溶液）５００μｌ中に
移しインキュベーション（３７℃、１５分間）したの
ち、１．５規定硫酸水溶液３ｍｌを加えて反応を停止し
た。この液の４９２ｎｍの吸光度を測定し、ビーズに結
合した酵素の酵素活性を測定した。ヒト及びブタインス
リン標準溶液０、１０、５０、１２５、２５０Ｕ／ｍｌ
の吸光度を読み取り、それぞれ検量線を作成し、図１に
示した。次ぎにヒト血清の測定を行いそれぞれの検量線
から濃度を読み取り表１に示した。
【００１７】
【図１】
【００１８】
【表１】
【００１９】比較例 実施例と比較するために、抗インスリン抗体結合ガラス
ビーズを実施例（１）のｐＨ５．５酢酸緩衝液の代わり
に下記のｐＨ７．２のリン酸緩衝液に浸漬した時の検量
線とヒト血清中インスリンの測定を実施例（２）〜
（４）と同様の方法で行った。結果を図１及び表１に示
した。 （１）ｐＨ７．２リン酸緩衝液の作製 ０．０５Ｍリン酸カリウム水溶液に０．０５Ｍリン酸２
ナトリウム水溶液を加えｐＨを７．２に調整した水溶液
を作製した。この水溶液に１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミ
ン、０．９Ｗ／Ｖ％塩化ナトリウム、０．１Ｗ／Ｖ％ア
ジ化ナトリウムを加えた後、１ＭＨＣｌ又は１ＭＮａＯ
Ｈを適量加えてｐＨを７．２に再調整し、抗体結合不溶
性固体を浸漬する緩衝液を作製した。
ビーズを実施例（１）のｐＨ５．５酢酸緩衝液の代わり
に下記のｐＨ７．２のリン酸緩衝液に浸漬した時の検量
線とヒト血清中インスリンの測定を実施例（２）〜
（４）と同様の方法で行った。結果を図１及び表１に示
した。 （１）ｐＨ７．２リン酸緩衝液の作製 ０．０５Ｍリン酸カリウム水溶液に０．０５Ｍリン酸２
ナトリウム水溶液を加えｐＨを７．２に調整した水溶液
を作製した。この水溶液に１Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミ
ン、０．９Ｗ／Ｖ％塩化ナトリウム、０．１Ｗ／Ｖ％ア
ジ化ナトリウムを加えた後、１ＭＨＣｌ又は１ＭＮａＯ
Ｈを適量加えてｐＨを７．２に再調整し、抗体結合不溶
性固体を浸漬する緩衝液を作製した。
【００２０】本発明の実施例では、図１、表１で明らか
なように、酢酸緩衝液中に抗体結合不溶性固体を浸漬し
た場合、ヒトインスリンとブタインスリン標準の検量線
の吸光度の差がほとんどないため、ほぼ同じ血清測定値
が得られた。それに対し、比較例ではリン酸緩衝液中に
浸漬した場合、ヒトインスリンとブタインスリン標準の
検量線の吸光度の差が大きく、その結果血清測定値も大
きく異なっていた。したがって、ブタインスリンを標準
に用いた場合、実施例では正確な測定値が得られるが、
比較例では正確な測定値が得られなかった。
なように、酢酸緩衝液中に抗体結合不溶性固体を浸漬し
た場合、ヒトインスリンとブタインスリン標準の検量線
の吸光度の差がほとんどないため、ほぼ同じ血清測定値
が得られた。それに対し、比較例ではリン酸緩衝液中に
浸漬した場合、ヒトインスリンとブタインスリン標準の
検量線の吸光度の差が大きく、その結果血清測定値も大
きく異なっていた。したがって、ブタインスリンを標準
に用いた場合、実施例では正確な測定値が得られるが、
比較例では正確な測定値が得られなかった。
【００２１】
【発明の効果】本発明の酢酸緩衝液中に浸漬した抗体結
合不溶性固体を用いた免疫測定法は、動物種が異なった
抗原性物質を測定した場合でも、測定値に差が生じにく
く優れている。このため、動物種の異なる標準溶液を測
定に使用して測定を行った場合でも、一定の測定値が得
られ、測定の精度を向上させることができる。以上の点
から、本発明は、すべてヘテロジーニアス免疫測定法に
用いる抗体結合不溶性固体に応用でき、特に標準として
動物種の異なる抗原性物質を用いることが多いホルモン
や酵素の測定に用いる抗体結合不溶性固体に有用であ
る。
合不溶性固体を用いた免疫測定法は、動物種が異なった
抗原性物質を測定した場合でも、測定値に差が生じにく
く優れている。このため、動物種の異なる標準溶液を測
定に使用して測定を行った場合でも、一定の測定値が得
られ、測定の精度を向上させることができる。以上の点
から、本発明は、すべてヘテロジーニアス免疫測定法に
用いる抗体結合不溶性固体に応用でき、特に標準として
動物種の異なる抗原性物質を用いることが多いホルモン
や酵素の測定に用いる抗体結合不溶性固体に有用であ
る。
─────────────────────────────────────────────────────
【手続補正書】
【提出日】平成７年１２月２０日
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１６
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１６】（３）免疫反応用緩衝液の作製 １Ｗ／Ｖ％牛血清アルブミン、０．９Ｗ／Ｖ％塩化ナト
リウム含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を免
疫反応用緩衝液に用いた。
リウム含有０．０２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．２）を免
疫反応用緩衝液に用いた。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１７
【補正方法】変更
【補正内容】
【００１７】（４）ヒト及びブタインスリン標準溶液の
測定。 標準溶液又は被検試料５０μｌ、免疫反応用緩衝液４５
０μｌを入れた試験管に抗インスリン抗体結合ガラスビ
ーズを１個入れインキュベーション（３７℃、１５分
間）したのち、生理食塩水にてビーズを洗浄した。次
に、ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体含有免疫反
応用緩衝液５００μｌ中にビーズを移しインキュベーシ
ョン（３７℃、１５分間）した。再度、生理食塩水にて
ビーズを洗浄したのち、ビーズを基質溶液（過酸化水素
含有オルト−フェニレンジアミン溶液）５００μｌ中に
移しインキユべ一ション（３７℃、１５分間）したの
ち、１．５規定硫酸水溶液３ｍｌを加えて反応を停止し
た。この液の４９２ｎｍの吸光度を測定し、ビーズに結
合した酵素の酵素活性を測定した。ヒト及びブタインス
リン標準溶液０、１０、５０、１２５、２５０Ｕ／ｍｌ
の吸光度を読み取り、それぞれ検量線を作成し、図１に
示した。次ぎにヒト血清の測定を行いそれぞれの検量線
から濃度を読み取り表１に示した。
測定。 標準溶液又は被検試料５０μｌ、免疫反応用緩衝液４５
０μｌを入れた試験管に抗インスリン抗体結合ガラスビ
ーズを１個入れインキュベーション（３７℃、１５分
間）したのち、生理食塩水にてビーズを洗浄した。次
に、ペルオキシダーゼ標識抗インスリン抗体含有免疫反
応用緩衝液５００μｌ中にビーズを移しインキュベーシ
ョン（３７℃、１５分間）した。再度、生理食塩水にて
ビーズを洗浄したのち、ビーズを基質溶液（過酸化水素
含有オルト−フェニレンジアミン溶液）５００μｌ中に
移しインキユべ一ション（３７℃、１５分間）したの
ち、１．５規定硫酸水溶液３ｍｌを加えて反応を停止し
た。この液の４９２ｎｍの吸光度を測定し、ビーズに結
合した酵素の酵素活性を測定した。ヒト及びブタインス
リン標準溶液０、１０、５０、１２５、２５０Ｕ／ｍｌ
の吸光度を読み取り、それぞれ検量線を作成し、図１に
示した。次ぎにヒト血清の測定を行いそれぞれの検量線
から濃度を読み取り表１に示した。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】図面の簡単な説明
【補正方法】追加
【補正内容】
【図面の簡単な説明】
【図１】 実施例の検量線および比較例の検量線であ
る。
る。
【符号の説明】 ▲黒四角▼ ヒトインスリン ◇ ブタインスリン
Claims (4)
- 【請求項１】 動物種間差のある抗原性物質を認識する
抗体を不溶性固体に結合し、次いで酢酸緩衝液中に浸漬
することを特徴とする抗体結合不溶性固体の保存法。 - 【請求項２】 酢酸緩衝液のｐＨが４．０〜６．０であ
る請求項１記載の保存法。 - 【請求項３】 該抗原性物質がインスリンである請求項
１又は２記載の保存法。 - 【請求項４】 不溶性固体がガラスである請求項１〜３
記載の保存法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26502595A JPH0980052A (ja) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | 抗体結合不溶性固体の保存法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26502595A JPH0980052A (ja) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | 抗体結合不溶性固体の保存法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0980052A true JPH0980052A (ja) | 1997-03-28 |
Family
ID=17411542
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26502595A Pending JPH0980052A (ja) | 1995-09-18 | 1995-09-18 | 抗体結合不溶性固体の保存法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH0980052A (ja) |
-
1995
- 1995-09-18 JP JP26502595A patent/JPH0980052A/ja active Pending
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