JPH0987192A - 抗ヒト免疫不全ウイルス剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】後天性免疫不全症候群の発症予防あるいは治療
に有効な抗ヒト免疫不全ウイルス剤を提供する。 【解決手段】メレミア・ペルタータ（Merremia peltat
a）の抽出物、及びイポメア・アクアティカ（Ipomoea a
quatica）の抽出物を含有する抗ヒト免疫不全ウイルス
剤である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は抗ヒト免疫不全ウイ
ルス剤、更に詳しくはメレミア・ペルタータの抽出物及
びイポメア・アクアティカの抽出物を含有する抗ヒト免
疫不全ウイルス剤に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】ヒト免疫不全ウイルス（Human Immunode
ficiency Virus：以下、ＨＩＶという）は、ヒトの免疫
系全体に異常を引き起こすレトロウイルスの一種であ
る。ＨＩＶに感染すると、免疫機能が低下するために感
染症に極めて罹患し易くなり、カリニ肺炎などの日和見
感染症やカポジ肉腫などの悪性腫瘍を併発し、ついには
死に至る。このため、この疾患は後天性免疫不全症候群
（エイズ、Acquired Immune Deficiency Syndrome）と
呼ばれている。

【０００３】現在、世界で使用されているエイズ治療薬
は、ＡＺＴ（３'−アジド−２',３'−ジデオキシチミジ
ン）、ｄｄＩ（２',３'−ジデオキシイノシン）、ｄｄ
Ｃ（２',３'−ジデオキシシチジン）の３種類である。
これらはすべて核酸系化合物であり、逆転写酵素阻害剤
である。しかし、エイズ治療薬は長期にわたり患者に投
与する必要があり、これらの薬剤が正常なＤＮＡ合成も
阻害して骨髄抑制作用や発癌などの重篤な副作用を起こ
すことが問題となっている。また、耐性ウイルスの出現
という新たな問題もあり、これに対しては別のメカニズ
ムによる薬剤との併用療法が期待されている。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】エイズ治療薬は、患者
への長期投与が前提となるのでＨＩＶの増殖を抑制する
と同時に副作用の少ない薬剤の提供が必要である。ま
た、限られた薬剤のみの投与だけでは、薬剤耐性ウイル
スの出現や投与量増加による副作用の増強といった問題
があり、多種類の薬剤が開発されることが必要である。

【０００５】本発明の目的は、原料の安全性が確認され
ているメレミア・ペルタータ（Merremia peltata）抽出
物を含有する抗ヒト免疫不全ウイルス剤を提供すること
である。また、本発明の目的は、原料の安全性が確認さ
れているイポメア・アクアティカ（Ipomoea aquatica）
抽出物を含有する抗ヒト免疫不全ウイルス剤を提供する
ことである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、植物由来
の抗ＨＩＶ活性物質の探索を行った結果、熱帯植物のメ
レミア・ペルタータ（Merremia peltata）の抽出物およ
びイポメア・アクアティカ（Ipomoea aquatica）の抽出
物にＨＩＶの増殖を抑制する活性があることを見い出
し、本発明を完成させた。すなわち本発明は、メレミア
・ペルタータ抽出物を含有することを特徴とする抗ヒト
免疫不全ウイルス剤である。また、本発明は、イポメア
・アクアティカ抽出物を含有することを特徴とする抗ヒ
ト免疫不全ウイルス剤である。

【０００７】メレミア・ペルタータは、ヒルガオ科に属
する熱帯植物であって、主に東南アジアに生息し、塊茎
は肥大し食用となり、また民間薬としても用いられてい
る。原料植物は、保存、運搬等の理由から乾燥したもの
が好ましく、また、抽出に際しては粉砕したものが好ま
しい。

【０００８】イポメア・アクアティカは、ヒルガオ科に
属する熱帯植物である。熱帯地域の沼地や湿地、水田地
帯に広く野生し、しばしば野菜として栽培される。原料
植物は、保存、運搬等の理由から乾燥したものが好まし
く、また、抽出に際しては粉砕したものが好ましい。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明のメレミア・ペルタータの
抽出物は、メレミア・ペルタータの乾燥もしくは生の塊
茎に、通常の抽出操作、すなわち溶媒を使用して抽出す
る等の操作を施して抽出液として得ることができる。あ
るいは、このようにして得た抽出液から、減圧下での溶
媒の留去、凍結乾燥、噴霧乾燥、アルコール沈殿等の慣
用の手段により粉末化してもよい。

【００１０】本発明のメレミア・ペルタータの抽出物を
得るには、抽出溶媒に水またはメタノール、エタノール
等のアルコール類を用いるのが望ましいが、これらに限
らず、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロエ
タン、ペンタン、ヘキサン、酢酸エチル、酢酸メチル、
エーテル等が使用できる。抽出の条件は、特に限定され
ないが、水を用いる場合は、乾燥させたメレミア・ペル
タータ５０ｇ当たり１００〜１０００mlを加え、２５〜
１００℃の温度で０.５〜２４時間抽出する。またメタ
ノールを用いる場合は、乾燥させたメレミア・ペルター
タ５０ｇ当たり１００〜１０００mlを加え、２５〜６０
℃の温度で０.５〜２４時間抽出する。抽出は、２回以
上繰り返してもよい。

【００１１】また、本発明のイポメア・アクアティカの
抽出物は、イポメア・アクアティカの乾燥、もしくは生
の全草に通常の抽出操作、すなわち溶媒を使用して抽出
する等の操作を施して抽出液として得ることができる。
あるいは、このようにして得た抽出液から、減圧下での
溶媒の留去、凍結乾燥、噴霧乾燥、アルコール沈殿等の
慣用の手段により粉末化してもよい。

【００１２】本発明のイポメア・アクアティカの抽出物
を得るには、抽出溶媒に水またはメタノール、エタノー
ル等のアルコール類を用いるのが望ましいが、これらに
限らず、ベンゼン、トルエン、クロロホルム、ジクロロ
エタン、ペンタン、ヘキサン、酢酸エチル、酢酸メチ
ル、エーテル等が使用できる。抽出の条件は、特に限定
されないが、水を用いる場合は、乾燥させたイポメア・
アクアティカ５０ｇ当たり１００〜１０００mlを加え、
２５〜１００℃の温度で０.５〜２４時間抽出する。ま
たメタノールを用いる場合は、乾燥させたイポメア・ア
クアティカ５０ｇ当たり１００〜１０００mlを加え、２
５〜６０℃の温度で０.５〜２４時間抽出する。抽出
は、２回以上繰り返してもよい。

【００１３】このようにして得られた各抽出物は、単独
もしくは他の組成物と混合して、本発明の抗ヒト免疫不
全ウイルス剤として用いられる。

【００１４】本発明の抗ヒト免疫不全ウイルス剤は、公
知の製剤技術により製剤化して、静脈内注射、筋肉注射
等の非経口、経口投与、あるいは経皮的吸収等により投
与することができる。剤型は投与方法に適した形態とす
ればよく注射剤、エキス剤、浸剤、散剤、カプセル剤、
座剤、ハップ剤等の形態が例示できる。

【００１５】本発明の抗ヒト免疫不全ウイルス剤の投与
量は、症状、投与方法、投与時期、投与期間、患者の年
齢等により異なるが、一般的には、成人１日当たり、経
口投与で１００〜５００mg程度が好適である。しかし、
本発明は投与量によって限定されない。

【００１６】本発明の抗ヒト免疫不全ウイルス剤は、Ｈ
ＩＶ感染が疑われるとき、あるいは感染が確認されたと
きに、発症を予防するために投与することができる。ま
たは、エイズ発症後に治療剤として投与することができ
る。

【００１７】

【実施例】

（実施例１）メレミア・ペルタータの抽出物の調製およ
びＨＩＶ増殖抑制作用の測定 抽出物の調製 メレミア・ペルタータの塊茎の乾燥物をグラインダーで
粉砕したのち、クロロホルム、メタノール、熱水で順次
抽出した。すなわち、上記の乾燥粉砕試料３０ｇを１リ
ットル三角フラスコに入れ、クロロホルム３００mlを加
え、スターラーで攪拌しながら室温で２時間抽出した
後、吸引濾過によりクロロホルム抽出液と抽出残渣を得
た。抽出残渣に新しい溶媒を加え同様の操作を繰り返
し、計３回のクロロホルム抽出を行った。

【００１８】つぎにクロロホルム抽出残渣にメタノール
３００mlを加え、スターラーで攪拌しながら室温で２時
間抽出した後、吸引濾過によりメタノール抽出液と抽出
残渣を得た。抽出残渣に新しい溶媒を加えて同様の操作
を繰り返し、計３回のメタノール抽出を行った。

【００１９】最後にメタノール抽出残渣を２リットルビ
ーカーに移し、純水３００mlを加え２時間加熱抽出し
た。加熱抽出後、吸引濾過により熱水抽出液と抽出残渣
を得た。抽出残渣に新しい溶媒を加え同様の操作を繰り
返し、計３回の熱水抽出を行った。このようにして得た
各抽出液をそれぞれまとめ、減圧下で溶媒留去し、各抽
出物を得た。

【００２０】ＨＩＶ増殖抑制作用 ＨＴＬＶ−１（ヒトＴリンパ球指向性ウイルスＩ型）に
持続感染しているＴ細胞株のＭＴ−４細胞は、ＨＩＶに
対して高い感受性を持ち、感染後３〜５日間で細胞変性
効果（ＣＰＥ）が出現し、ほとんどの細胞が死滅する。
ＣＰＥはウイルス増殖のサインであり、光学顕微鏡によ
って容易に観察される。以下の方法でメレミア・ペルタ
ータの抽出物のＨＩＶ増殖抑制作用を調べた。

【００２１】ＭＴ−４細胞にＨＩＶ−１（HTLV-IIIB）
を０.００１ＴＣＩＤ₅₀/cellの割合で１時間感染させた
後、２段階希釈した検体（メレミア・ペルタータの各抽
出物）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％牛胎児血清
および抗生物質を含む）に１.５×１０⁴cells/mlの濃度
で浮遊させ、９６穴丸底マイクロプレートにて１ウェル
あたり２００μlで培養した。なお、対照として薬剤無
添加の培地に浮遊させた感染細胞および非感染細胞を培
養した。培養５日目に検鏡により細胞の成育状態および
ＣＰＥの程度を判定した。その結果、メタノール抽出物
では２５０μg/mlの濃度において非感染細胞と同等の細
胞増殖を示し、ＣＰＥは認められなかった。熱水抽出物
では５００μg/mlの濃度において細胞増殖が認められ、
ＣＰＥは若干認められた。

【００２２】５０％有効濃度（ＥＣ₅₀）および５０％
細胞毒性濃度（ＣＣ₅₀）の測定 上記実験でＨＩＶ増殖抑制が認められた検体をより客観
的に評価するため、ＷＳＴ−１（2-(4-Iodophenyl)-3-
(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazoli
um,monosodium salt)（Chem. Pharm. Bull.,41(6),1118
-1122 (1993)））を用いて抗ＨＩＶ物質の５０％有効濃
度（ＥＣ₅₀）および５０％細胞毒性濃度（ＣＣ₅₀）を測
定した。ＷＳＴ−１は生きた細胞中に取り込まれるとミ
トコンドリアの酵素で還元され黄色の水溶性ホルマザン
に変わる。細胞内で生成されるホルマザンと生細胞数と
は相関することが証明されているので、この色素の比色
定量値（測定波長４５０nm、対照波長６５０nm）を抗Ｈ
ＩＶ効果により生き延びた細胞数の指標（細胞活性）と
して用いることができる。

【００２３】方法は上記実験と同条件の感染細胞および
非感染細胞を２段階希釈した検体を含むＲＰＭＩ１６４
０培地（１０％牛胎児血清および抗生物質を含む）に
１.５×１０⁴cells/mlの濃度でそれぞれ浮遊させ９６穴
丸底マイクロプレートにて１ウェルあたり２００μlで
培養した。対照として薬剤無添加の培地に浮遊させた感
染細胞および非感染細胞を培養した。比色定量は細胞が
集約状態（confluent）になる前の培養４日目に行っ
た。メタノール抽出物について測定を行った結果、非感
染細胞の細胞活性を１００％としたとき、非感染細胞に
対して５０％の細胞毒性を示す濃度（ＣＣ₅₀）は６５６
μg/mlであった。また、非感染対照の細胞活性（１００
％）から感染対照の細胞活性を差し引いた値の５０％相
当の細胞活性を感染細胞に示す濃度（ＥＣ₅₀）は３７９
μg/mlであった。

【００２４】（実施例２）イポメア・アクアティカの抽
出物の調製およびＨＩＶ増殖抑制作用の測定 抽出物の調製 イポメア・アクアティカの全草の乾燥物をグラインダー
で粉砕したのち、クロロホルム、メタノール、熱水で順
次抽出した。すなわち、上記の乾燥粉砕試料３０ｇを１
リットル三角フラスコに入れ、クロロホルム３００mlを
加え、スターラーで攪拌しながら室温で２時間抽出した
後、吸引濾過によりクロロホルム抽出液と抽出残渣を得
た。抽出残渣に新しい溶媒を加え同様の操作を繰り返
し、計３回のクロロホルム抽出を行った。

【００２５】つぎにクロロホルム抽出残渣にメタノール
３００mlを加え、スターラーで攪拌しながら室温で２時
間抽出した後、吸引濾過によりメタノール抽出液と抽出
残渣を得た。抽出残渣に新しい溶媒を加え同様の操作を
繰り返し、計３回のメタノール抽出を行った。

【００２６】最後にメタノール抽出残渣を２リットルビ
ーカーに移し、純水３００mlを加え２時間加熱抽出し
た。加熱抽出後、吸引濾過により熱水抽出液と抽出残渣
を得た。抽出残渣に新しい溶媒を加え同様の操作を繰り
返し、計３回の熱水抽出を行った。こうして得た各抽出
液をそれぞれまとめ、減圧下で溶媒留去し、各抽出物を
得た。

【００２７】ＨＩＶ増殖抑制作用 ＨＴＬＶ−１（ヒトＴリンパ球指向性ウイルスＩ型）に
持続感染しているＴ細胞株のＭＴ−４細胞は、ＨＩＶに
対して高い感受性を持ち、感染後３〜５日間で細胞変性
効果（ＣＰＥ）が出現し、ほとんどの細胞が死滅する。
ＣＰＥはウイルス増殖のサインであり、光学顕微鏡によ
って容易に観察される。以下の方法でイポメア・アクア
ティカ抽出物のＨＩＶ増殖抑制作用を調べた。

【００２８】ＭＴ−４細胞にＨＩＶ−１（HTLV-IIIB）
を０.００１ＴＣＩＤ₅₀/cellの割合で１時間感染させた
後、２段階希釈した検体（イポメア・アクアティカの各
抽出物）を含むＲＰＭＩ１６４０培地（１０％牛胎児血
清および抗生物質を含む）に１.５×１０⁴cells/mlの濃
度で浮遊させ、９６穴丸底マイクロプレートにて１ウェ
ルあたり２００μlで培養した。なお、対照として薬剤
無添加の培地に浮遊させた感染細胞および非感染細胞を
培養した。培養５日目に検鏡により細胞の成育状態およ
びＣＰＥの程度を判定した。その結果、メタノール抽出
物では６２.５μg/mlの濃度において細胞増殖を示し、
ＣＰＥは認められなかった。熱水抽出物では５００μg/
mlの濃度において細胞増殖が認められ、ＣＰＥは若干認
められた。

【００２９】５０％有効濃度（ＥＣ₅₀）および５０％
細胞毒性濃度（ＣＣ₅₀）の測定 上記実験でＨＩＶ増殖抑制が認められた検体をより客観
的に評価するため、ＷＳＴ−１（2-(4-Iodophenyl)-3-
(4-nitrophenyl)-5-(2,4-disulfophenyl)-2H-tetrazoli
um,monosodium salt)（Chem. Pharm. Bull.,41(6),1118
-1122 (1993)））を用いて抗ＨＩＶ物質の５０％有効濃
度（ＥＣ₅₀）および５０％細胞毒性濃度（ＣＣ₅₀）を測
定した。ＷＳＴ−１は生きた細胞中に取り込まれるとミ
トコンドリアの酵素で還元され黄色の水溶性ホルマザン
に変わる。細胞内で生成されるホルマザンと生細胞数と
は相関することが証明されているので、この色素の比色
定量値（測定波長４５０nm、対照波長６５０nm）を抗Ｈ
ＩＶ効果により生き延びた細胞数の指標（細胞活性）と
して用いることができる。

【００３０】方法は上記実験と同条件の感染細胞および
非感染細胞を２段階希釈した検体を含むＲＰＭＩ１６４
０培地（１０％牛胎児血清および抗生物質を含む）に
１.５×１０⁴cells/mlの濃度でそれぞれ浮遊させ９６穴
丸底マイクロプレートにて１ウェルあたり２００μlで
培養した。対照として薬剤無添加の培地に浮遊させた感
染細胞および非感染細胞を培養した。比色定量は細胞が
集約状態（confluent）になる前の培養４日目に行っ
た。メタノール抽出物について測定を行った結果、非感
染細胞の細胞活性を１００％としたとき、非感染細胞に
対して５０％の細胞毒性を示す濃度（ＣＣ₅₀）は１５３
μg/mlであった。また、非感染対照の細胞活性（１００
％）から感染対照の細胞活性を差し引いた値の５０％相
当の細胞活性を感染細胞に示す濃度（ＥＣ₅₀）は２８.
５μg/mlであった。

【００３１】（急性毒性試験）ＩＣＲ系マウスに対する
経口急性毒性試験を実施したところ、メレミア・ペルタ
ータのメタノールおよび熱水抽出物の急性毒性（Ｌ
Ｄ₅₀）は、いずれも１０００mg/kg以上であった。同様
に、イポメア・アクアティカのメタノールおよび熱水抽
出物の急性毒性（ＬＤ₅₀）も、いずれも１０００mg/kg
以上であった。

【００３２】

【発明の効果】メレミア・ペルタータの抽出物およびイ
ポメア・アクアティカの抽出物は、優れたＨＩＶ増殖抑
制作用を有し、抗ヒト免疫不全ウイルス剤として有効に
使用できる。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】メレミア・ペルタータ（Merremia peltat
   a）の抽出物を含有することを特徴とする抗ヒト免疫不
   全ウイルス剤。
2. 【請求項２】イポメア・アクアティカ（Ipomoea aquati
   ca）の抽出物を含有することを特徴とする抗ヒト免疫不
   全ウイルス剤。