JPH10104201A - ゲル電気泳動法 - Google Patents
ゲル電気泳動法Info
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- JPH10104201A JPH10104201A JP8256590A JP25659096A JPH10104201A JP H10104201 A JPH10104201 A JP H10104201A JP 8256590 A JP8256590 A JP 8256590A JP 25659096 A JP25659096 A JP 25659096A JP H10104201 A JPH10104201 A JP H10104201A
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Abstract
動ゲルに試料をロードして、電気泳動を行う方法を提供
することを目的とする。 【解決手段】 本発明では、試料として、例えば蛍光物
質により標識化され、サンガー法により試料に応じて末
端に塩基Ａ，Ｇ，Ｔ，Ｃのいずれかがくるように処理さ
れたＤＮＡ断片（サンガー反応物）を用い、これら試料
をナイロン、ニトロセルロース、ポリビニリデンジブロ
リドなどからなる膜１０に添加する。この膜１０を加熱
したヒートブロック１１上に置き、９５℃にて３〜５分
間加熱して膜１０上の試料を変性させる（図２(a) ）。
膜１０上の試料を変性させた後、膜１０を電気泳動ゲル
２のゲル上端部に密着させるようにおき（図２(b) ）、
電気泳動を短時間行い、試料（サンガー反応物）をゲル
上端部に押し込む（図２(c) ）。この後、膜片を取り除
き、通常の電気泳動を再開する。
Description
に調製された核酸断片試料を電気泳動ゲルに注入して電
気泳動させるゲル電気泳動法に関する。
析する場合ゲル電気泳動法が行われている。ゲル電気泳
動法は、ゾーンの安定化をはかるために寒天や、分子ふ
るい効果のあるポリアクリルアミド、デンプンなどのゲ
ルを支持体として泳動させるものである。このゲル電気
泳動法により、例えば核酸の塩基配列を決定する場合に
は、先ずサンガー法により得られた末端塩基（Ａ，Ｇ，
Ｃ，Ｔ）別の核酸断片試料を、溶液状態のままシリンジ
を用いてゲルの上部へ末端塩基別にマニュアルでローデ
ィングする。このとき、１回の泳動で７サンプルを処理
する場合には、１サンプルにつき末端塩基Ａ，Ｇ，Ｃ，
Ｔの４レーンがあるので、７×４＝２８レーン分をロー
ディングする必要がある。これらを行うのには、熟練者
がどんなに手早く行っても、１レーン当たり１５秒要
し、合計２８×１５＝４２０秒＝７分かかり、一般の者
では通常１０〜１５分かかっているのが現状である。
に電気泳動を行い、サンガー反応物（核酸断片試料）を
ゲル上端部に押し込み、サンガー反応物が立体構造を取
らないようにしている。なお、“立体構造を取る”と
は、ＤＮＡが非変性状態になることをいう。
方法では、実際はローディングされたサンガー反応物が
室温で溶液状態となるため、一部のサンガー反応物が電
気泳動が始まる前に立体構造をとっていた。その結果
“コンプレッション（縮合）”という現象が起こり、そ
の箇所については、正しいＤＮＡの塩基配列結果が得ら
れないという課題が生じている。そこで、本発明は、試
料に悪影響を与えない新規な方法で電気泳動ゲルに試料
をロードして、電気泳動を行う方法を提供することを目
的とする。
決するため、試料を膜上に添加し、乾燥後該膜を電気泳
動ゲルにロードして電気泳動を行うことを特徴とするゲ
ル電気泳動法を提供する。ここで、試料とは、例えばサ
ンガー法やマキサムギルバード法により処理された核酸
断片試料の他、通常の前処理操作を行った核酸、タンパ
ク質などの試料が該当する。膜は、試料を吸着させるも
のならば何でもよく、例えばナイロン、ニトロセルロー
ス、ポリビニリデンジブロリドなどを用いることができ
る。膜は、電気泳動ゲル上端部に密着するように、縦、
横ともゲル断面より小さく作成することが好ましい。膜
のサイズとしては、例えば縦０．２５ｍｍ、横１５ｃ
ｍ、厚さ０．１ｍｍのものを用いることができる。試料
を膜に添加するのは、マイクロシリンジ、ピペット等の
公知の手法により行うことができる。添加する試料量
は、試料の種類により異なるが、例えばサンガー反応物
の場合は、２．０〜３．５μｌ添加する。
乾燥は、試料がサンガー反応物の場合には、反応物（Ｄ
ＮＡ）が変性状態になる温度条件、例えば９５℃にて３
〜５分間加熱して行う。そうすれば、膜上にサンガー反
応物が変性状態のまま吸着されることになり、電気泳動
の際サンガー反応物が立体構造をとることがない。
ガー反応物の場合、立体構造をとる前という意味で、乾
燥のための温度条件は、上記に限定されず、例えば８０
〜９５℃で、３〜１０分加熱すれば良い。加熱手段とし
ては、例えばヒートブロック、面ヒータ等の公知のもの
を用いることができる。また、サンガー反応物以外の試
料の場合には、その試料の変性条件にあった温度で加熱
する。
ル、デンプンゲル、ポリアクリルアミドゲル、ＳＤＳ−
ポリアクリルアミドゲル、アガロースゲルなどを用いる
ことができるが、これらに限定されない。電気泳動ゲル
に膜上の試料をロードするには、膜を電気泳動ゲル上端
部に密着して短時間電気泳動を行うことにより行うこと
ができる。
するという意味で、電気泳動法では慣用されている用語
である。
説明する。図１は、本発明の方法を実施するためのゲル
電気泳動装置の概略図を示しており、２は電気泳動ゲル
である。電気泳動ゲル２は、例えばポリアクリルアミド
ゲルを一対のガラス板に挟持しており、電気泳動ゲル２
の両端は電極槽４、６に浸され、電極槽４、６には、電
解液、例えばTris-HCl緩衝液が収容されている。電極槽
４、６の間には泳動電源８によって泳動電圧が印加され
る。
によりサンガー反応物を添加して乾燥させた膜１０を密
着させる。泳動電源８が印加されると、試料は泳動バン
ドとなって泳動方向１４に時間とともに泳動ゲル２中を
泳動して分離されていき、測定部に達する。
ルゴンレーザ１８からの励起光を集光レンズ２０とミラ
ー２１によって照射する励起系と、その励起光ビームが
当たった所に泳動バンド１６があればその泳動バンド１
６の蛍光物質から発せられた蛍光を対物レンズ２２で集
め、干渉フィルタ２４、集光レンズ２６から光ファイバ
束２７を経て光電子増倍管２８で検出する検出系が設け
られている。また、集光レンズ２０、ミラー２１、対物
レンズ２２、干渉フィルタ２４、集光レンズ２６及び光
ファイバ束２７を含む励起・検出系を乗せ、励起光ビー
ム照射位置が泳動方向１４と直交する方向（走査方向２
９）の測定ライン上を一定時間ごとに走査するように機
械的に移動する走査ステージ３０が備えられている。
びＡ／Ｄ変換器３２を経てマイクロコンピュータ３１に
取り込まれる。マイクロコンピュータ３１には、また励
起光ビームが泳動ゲル２上の測定部を照射するときに、
その照射部の位置に対応した信号が走査データとして取
り込まれる。この様にして、走査方向に走査して得られ
た全蛍光信号が場所情報とともにマイクロコンピュータ
３１に取り込まれる。以上の構成で、電気泳動は次のよ
うに行う。試料として、例えば蛍光物質により標識化さ
れ、サンガー法により試料に応じて末端に塩基Ａ，Ｇ，
Ｔ，Ｃのいずれかがくるように処理されたＤＮＡ断片
（サンガー反応物）を用いる。これら試料をナイロン、
ニトロセルロース、ポリビニリデンジブロリドなどから
なる膜１０に添加する。膜１０はゲル上端部に密着する
ように縦、横ともゲル断面より小さ目に切ってある。こ
の膜１０を加熱したヒートブロック１１上に置く（この
状態が図２(a) である）。
〜５分間加熱して膜１０上の試料を変性させた後、膜１
０を電気泳動ゲル２のゲル上端部に密着させるようにお
く（この状態が図２(b) である）。なお、膜１０をゲル
上端部に密着させるときは、図１のゲル電気泳動装置の
電極槽４は取り外してある。
例えば３〜１０分行い、試料（サンガー反応物）をゲル
上端部に押し込む（この状態が図２(c) である）。この
後、膜片を取り除き、通常の電気泳動を再開する。試料
は泳動バンド１６となって泳動方向１４に時間とともに
泳動ゲル２中を泳動して分離されていき、測定部に達す
る。測定部で励起光ビームが当てられ、泳動バンドの蛍
光物質から発せられた蛍光を対物レンズ２２で集め、干
渉フィルタ２４、集光レンズ２６から光ファイバ束２７
を経て光電子増倍管２８で検出される。
が変性状態を保ったまま、電気泳動されるので、立体構
造をとることがなく、コンプレッションが起こらない。
その結果、正しいＤＮＡの塩基配列が解明される。
レーザ ２８…光電子増倍管
Claims (1)
- 【請求項１】 試料を膜上に添加し、乾燥後該膜を電気
泳動ゲルにロードして電気泳動を行うことを特徴とする
ゲル電気泳動法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25659096A JP3675056B2 (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | ゲル電気泳動法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP25659096A JP3675056B2 (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | ゲル電気泳動法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10104201A true JPH10104201A (ja) | 1998-04-24 |
| JP3675056B2 JP3675056B2 (ja) | 2005-07-27 |
Family
ID=17294750
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP25659096A Expired - Fee Related JP3675056B2 (ja) | 1996-09-27 | 1996-09-27 | ゲル電気泳動法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3675056B2 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014042150A1 (ja) * | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 深江化成株式会社 | 保存方法及び保存容器 |
-
1996
- 1996-09-27 JP JP25659096A patent/JP3675056B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2014042150A1 (ja) * | 2012-09-13 | 2014-03-20 | 深江化成株式会社 | 保存方法及び保存容器 |
| CN104620102A (zh) * | 2012-09-13 | 2015-05-13 | 深江化成株式会社 | 保存方法以及保存容器 |
| JPWO2014042150A1 (ja) * | 2012-09-13 | 2016-08-18 | 深江化成株式会社 | 保存方法及び保存容器 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3675056B2 (ja) | 2005-07-27 |
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