JPH10139665A

JPH10139665A - トログリタゾンを含有するグルタチオン還元酵素活性増強剤

Info

Publication number: JPH10139665A
Application number: JP24641897A
Authority: JP
Inventors: Tomihisa Yokoyama; 富久横山; Toshihiko Fujiwara; 俊彦藤原; Hiroyoshi Horikoshi; 大能掘越; Shinji Yoshioka; 慎二吉岡
Original assignee: Sankyo Co Ltd
Current assignee: Sankyo Co Ltd
Priority date: 1996-09-12
Filing date: 1997-09-11
Publication date: 1998-05-26

Abstract

(57)【要約】【課題】グルタチオン還元酵素活性増強剤を提供す
る。【解決手段】トログリタゾン又はその薬理上許容され
る塩を含有する、グルタチオン還元酵素活性増強剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、トログリタゾン又
はその薬理上許容される塩を含有する、優れたグルタチ
オン還元酵素活性増強剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】グルタチオンは生体内組織に幅広く存在
し、細胞内の主な還元剤であり、酸化還元的代謝におい
て、重要な役割を担っている。特に、還元型グルタチオ
ン（ＧＳＨ）は、その分子内に存在するチオール基によ
り、種々の細胞防御及び修復機構において重要な役割を
担っている。グルタチオンパーオキシダーゼは、ＧＳＨ
による過酸化物（過酸化水素や過酸化脂質など）の還元
反応を触媒する酵素であり、抗酸化物機構における重要
な酵素である。一方グルタチオン還元酵素は、酸化され
たグルタチオン（酸化型グルタチオン：ＧＳＳＧ）を、
ＮＡＤＰＨ存在下に、還元してＧＳＨに再生する酵素で
ある。

【０００３】これらの化合物及び酵素を含む抗酸化物機
構によって、細胞は酸化促進物（例えば、上記過酸化物
及び遊離ラジカルなど）の有害な作用から保護されてい
る。酸化促進物及び抗酸化物機構間の均衡が前者優位と
なったときに、酸化的ストレスが生じる [J.Appl.Physi
ol. 1996 Nov., 81(5), 2199-2202 頁] 。その酸化的ス
トレスは様々な疾患に関与しており、例えば、虚血性心
疾患；白内障；特発性肺線維症；慢性腎不全；パーキン
ソン病、アルツハイマー病、てんかん、筋萎縮性側索硬
化症、脳虚血のような、末梢神経及び中枢神経を含む神
経系の疾患；並びに胃潰瘍に関連しているとの報告があ
る [J.Appl.Physiol. 1996 Nov., 81(5), 2199-2202
頁; Free Radical Biology & Medicine, Vol.21, No.6,
845-853頁(1996 年); Free Radical Biology & Medici
ne, Vol.20, No.7, 925-931 頁(1996 年); Gastoroente
rology, 112, 855-863頁(1997 年)]。

【０００４】また、ＷＯ９４／１２５２７には、内因性
ＧＳＨの合成を促進する化合物が、酸化的な組織障害、
特に過剰の遊離ラジカルによる障害に関する病的状態の
ようなグルタチオンの欠乏によって起こる様々な疾患の
治療に適するとの開示があり、そのような疾患の例とし
て、アルコールの多飲、生体異物、放射線による障害、
肝疾患によっておこる細胞内の酸化状態、薬及び化学物
質による中毒、重金属による中毒、脳の生理学的な加齢
（例えば、記憶及び学習能力の喪失のような、酸化性物
質に対する防御機構の変化によるグルタチオン濃度の減
少のために起こる脳の衰退であるパーキンソン病）、並
びに、急性及び慢性の神経変性疾患（急性の病状として
は、急性の虚血状態、特に大脳の発作、低血糖症、及び
てんかん発作；慢性の病状としては、筋萎縮性側索硬化
症、アルツハイマー病、ハンチントン舞踏病）、免疫機
構の機能異常、特に癌の免疫治療、不妊症、特に雄性不
妊があげられている。更に、その化合物は、遊離ラジカ
ルの主たる原因となる虚血状態に続く器官の再灌流にも
適すると開示されている。更に、特開昭６４−２６５１
６号には、グルタチオン濃度を上昇させる化合物が、白
内障、肝疾患及び腎疾患をはじめとする各疾患の治療及
び予防に有用であると開示されている。

【０００５】これらから、グルタチオン還元酵素活性を
増強して、ＧＳＨの供給量を増やす化合物は、上記内因
性ＧＳＨの合成を促進する化合物及びグルタチオン濃度
を上昇させる化合物と同様の効果を奏すると考えられ、
すなわち、上記のような疾患の予防又は治療のために使
用することができると考えられる。

【０００６】ところで、上述のように、白内障も酸化的
ストレスが関与している疾患であり、白内障患者におい
ては水晶体中ＧＳＨの劇的な減少がみられること、並び
に老年者の水晶体、Ｘ線白内障患者の水晶体、及び核白
内障患者の水晶体においては、蛋白質のチオール基が高
度に酸化されていることが報告されている[V.N.Reddy,
Exp.Eye Res. 50, 771-778(1990)] 。したがって、酸化
的ストレスを主たる病因とするこれらの白内障は、グル
タチオン還元酵素活性を増強させることにより、予防又
は治療が可能であると考えられる。

【０００７】一方、糖尿病性白内障は、糖尿病を原因と
する白内障であり、糖尿病合併症の一症例でもある。糖
尿病に罹患している患者においては、ポリオール代謝系
が亢進しており、この現象が糖尿病性白内障などの様々
な糖尿病性合併症の原因であると考えられている。この
ポリオール代謝系においては、細胞内グルコースがアル
ドース還元酵素（ＡＲ）によって、ＮＡＤＰＨ存在下
に、ソルビトールに還元される反応が律速段階であるの
で、ポリオール代謝系が亢進することにより、ソルビト
ールの生成量が上昇する [Satish K.Srivastava et a
l., Proc.Natl.Acad.Sci. 82, 7222-7226(1995)]。この
ソルビトールは生体膜透過性が低いので、細胞内に蓄積
される。ソルビトールが水晶体中に蓄積した場合、浸透
圧が高まり、水晶体は膨張し [Kinoshita et al., Meta
bolism 28-4 sup-1, 462-469(1979)]、浮腫が生じ、細
胞が変性して白内障が発症すると考えられている。従
来、ＡＲを阻害して細胞内ソルビトールの蓄積を抑制す
ることより、白内障を予防又は治療できるとの仮説に基
づいて、多くのＡＲ阻害剤が研究開発されている。

【０００８】これに対し、グルタチオン還元酵素とＡＲ
が共存する場合、前者が優先的にＮＡＤＰＨを消費する
ので、グルタチオン還元酵素活性を増強させることによ
りＡＲの機能が抑制され、その結果、ポリオールの蓄積
が抑制されることが報告されている[Yokoyama et al.,
Exp.Eye Res. 58, 207-218(1994)] 。

【０００９】すなわち、グルタチオン還元酵素活性を増
強させる化合物は、糖尿病性白内障をも予防又は治療可
能であると考えられる。

【００１０】トログリタゾンはインスリン非依存性糖尿
病薬として市販されており、更にその他糖尿病合併症な
ど、種々の疾患の治療又は予防のために用いられ得るこ
とが知られているが、グルタチオン還元酵素活性増強作
用を有することは知られていなかった。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】本発明者らはトログリ
タゾンの医薬としての用途について鋭意研究を行った結
果、トログリタゾンが優れたグルタチオン還元酵素活性
増強作用を有していることを見出して本発明を完成し
た。

【００１２】

【発明を解決するための手段】本発明は、（１）トログリタゾン又はその薬理上許容される塩を
含有する、グルタチオン還元酵素活性増強剤に関する。

【００１３】好適には、（２）還元型グルタチオンの
欠乏によって起こる疾患の予防又は治療のための、
（１）に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤であ
り、更に好適には、（３）酸化的ストレスによって起
こる疾患の予防又は治療のための、（１）に記載のグル
タチオン還元酵素活性増強剤であり、より更に好適に
は、（４）虚血性心疾患の予防又は治療のための、
（１）に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤、
（５）特発性肺線維症の予防又は治療のための、
（１）に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤、
（６）慢性腎不全の予防又は治療のための、（１）に
記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤、（７）酸化
的ストレスによって起こる神経系の疾患の予防又は治療
のための、（１）に記載のグルタチオン還元酵素活性増
強剤、（８）胃潰瘍の予防又は治療のための、（１）
に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤、及び（９）
白内障の予防又は治療のための、（１）に記載のグル
タチオン還元酵素活性増強剤である。

【００１４】特に、（９）に記載のグルタチオン還元酵
素活性増強剤において、好適には、（１０）白内障が
水晶体中にポリオールが蓄積することによって起こる白
内障、水晶体中に高分子量蛋白質が蓄積することによっ
て起こる白内障又は水晶体中に過酸化物が蓄積すること
によって起こる白内障である、（９）に記載のグルタチ
オン還元酵素活性増強剤であり、更に好適には、（１
１）白内障が水晶体中に高分子量蛋白質が蓄積するこ
とによって起こる白内障又は水晶体中に過酸化物が蓄積
することによって起こる白内障である、（９）に記載の
グルタチオン還元酵素活性増強剤であり、より更に好適
には、（１２）白内障が老人性白内障である、（９）
に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤であり、最も
好適には、（１３）白内障が糖尿病性ではなく、老人
性白内障である、（９）に記載のグルタチオン還元酵素
活性増強剤である。

【００１５】本発明において、「還元型グルタチオンの
欠乏によって起こる疾患」とは、アルコールの多飲、生
体異物又は放射線による障害；肝疾患によっておこる細
胞内の酸化状態；薬及び化学物質による中毒；重金属に
よる中毒；脳及び神経変性疾患（脳虚血、大脳の発作、
低血糖症、てんかん、筋萎縮性側索硬化症、アルツハイ
マー病、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病）のよう
な神経系の疾患；免疫機構の機能異常、特に癌の免疫治
療；不妊症、特に雄性不妊；虚血性心疾患；白内障；特
発性肺線維症；慢性腎不全；並びに胃潰瘍のような疾患
を示す。

【００１６】「酸化的ストレスによって起こる疾患」と
は、上記「神経系の疾患」、虚血性心疾患、白内障、特
発性肺線維症、慢性腎不全、及び胃潰瘍を示し、「酸化
的ストレスによって起こる神経系の疾患」とは、上記
「神経系の疾患」を示す。

【００１７】「ポリオール」の語は、糖がアルドース還
元酵素（ＡＲ）によって還元されて生成する糖アルコー
ルを意味し、そのような糖アルコールとしては、例え
ば、ソルビトール、ガラクチトールをあげることができ
る。

【００１８】「水晶体中にポリオールが蓄積することに
よって起こる白内障」としては、特に、糖尿病性白内
障、糖白内障及びガラクトース白内障をあげることがで
きる。

【００１９】「高分子量蛋白質」の語は、分子中に少な
くとも１つのチオール基を有するペプチド又は蛋白質
が、そのチオール基を介して、分子内もしくは分子間の
ジスルフィド結合を形成することにより生成する蛋白質
を意味する。更に、「分子中に少なくとも１つのチオー
ル基を有するペプチド又は蛋白質」には、陽イオン運搬
能及び膜透過能に関連する細胞膜蛋白質のうちチオール
基を有するものも含まれる。

【００２０】「水晶体中に高分子量蛋白質が蓄積するこ
とによって起こる白内障」としては、特に、老人性白内
障、Ｘ線白内障、核白内障をあげることができる。

【００２１】「過酸化物」の語は、スーパーオキサイド
（Ｏ₂ ^-）、ハイドロキシラジカル（^・ＯＨ）及び一重項
酸素（singlet oxygen; ^・Ｏ₂ ）、ペルオキシラジカ
ル、アルコキシラジカルなどの酸化的遊離ラジカル；並
びに過酸化水素（Ｈ₂ Ｏ₂ ）、及び過酸化脂質などの、
酸化的遊離ラジカルを放出し得る化合物を意味する。

【００２２】「水晶体中に過酸化物が蓄積することによ
って起こる白内障」としては、特に、老人性白内障をあ
げることができる。

【００２３】「糖尿病性ではなく、老人性」の白内障と
は、加齢によって起こる白内障であって糖尿病を病因と
しないもの、すなわち糖尿病にかかっていない老齢者に
発症する白内障を意味する。

【００２４】尚、上記「還元型グルタチオンの欠乏によ
って起こる疾患」のうち、一度発症すると正常状態に、
完全には戻らない疾患があるが、それらの疾患の「治
療」とは、その病状の進行の阻止又は遅延を意味する。

【００２５】トログリタゾンは下記式（Ｉ）：

【００２６】

【化１】

【００２７】を有する化合物である。本発明に示す薬理
上許容される塩とは、トログリタゾンは、塩にすること
が出来るので、その塩をいい、その様な塩としては、好
適にはナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、のよう
なアルカリ金属塩；カルシウム塩のようなアルカリ土類
金属塩を挙げることができる。

【００２８】トログリタゾンは、その分子内に２つの不
斉炭素を有するので、４種類の異性体が存在する。本発
明の化合物においては、これらの異性体およびこれらの
異性体の混合物がすべて単一の式、即ち上記式（Ｉ）で
示されている。従って、本発明はこれらの異性体および
これらの異性体の混合物をもすべて含むものである。

【００２９】トログリタゾン又はその薬理上許容される
塩は、大気中に放置したり、又は、再結晶をすることに
より、水分を吸収し、吸着水が付いたり、水和物となる
場合があり、そのような水和物も本発明に包含される。

【００３０】

【発明の実施の形態】本発明のグルタチオン還元酵素活
性増強剤はトログリタゾン又はその薬理上許容される塩
を含有している。トログリタゾンは、特開昭６０−５１
１８９号に記載の方法によって製造することができる。

【００３１】トログリタゾン又はその薬理上許容される
塩の投与形態としては、例えば錠剤、カプセル剤、顆粒
剤、散剤もしくはシロップ剤等による経口投与、または
注射剤もしくは座剤等による非経口投与をあげることが
できる。これらの製剤は賦形剤、滑沢剤、結合剤、崩壊
剤、安定剤、矯味矯臭剤などの添加剤を用いて周知の方
法で製造される。

【００３２】ここに、賦形剤としては、例えば乳糖、白
糖、ぶどう糖、マンニトール、ソルビトールのような糖
誘導体；トウモロコシデンプン、バレイショデンプン、
α−デンプン、デキストリン、カルボキシメチルデンプ
ンのような澱粉誘導体；結晶セルロースのようなセルロ
ース誘導体；アラビアゴム；デキストラン；プルラン；
などの有機系賦形剤；および軽質無水珪酸、合成珪酸ア
ルミニウム、珪酸カルシウム、メタ珪酸アルミン酸マグ
ネシウムのような珪酸塩誘導体；燐酸水素カルシウムの
ような燐酸塩；炭酸カルシウムのような炭酸塩；硫酸カ
ルシウムのような硫酸塩；などの無機系賦形剤をあげる
ことができる。滑沢剤としては、例えばステアリン酸、
ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウムの
ようなステアリン酸金属塩；タルク；コロイドシリカ；
ビーガム、ゲイ蝋のようなワックス類；硼酸：アジピン
酸；硫酸ナトリウムのような硫酸塩；グリコール；フマ
ル酸；安息香酸ナトリウム；ＤＬ−ロイシン；ラウリル
硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウムのようなラ
ウリル硫酸塩；無水珪酸、珪酸水和物のような珪酸類；
および、上記澱粉誘導体などをあげることができる。結
合剤としては、例えばヒドロキシプロピルセルロース、
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロ
リドン、マクロゴールおよび前記賦形剤と同様の化合物
をあげることができる。崩壊剤としては、例えば低置換
度ヒドロキシプロピルセルロース、カルメロース、カル
メロースカルシウム、内部架橋クロスカルメロースナト
リウムのようなセルロース誘導体；カルボキシメチルス
ターチナトリウム、架橋ポリビニルピロリドンのような
化学修飾されたデンプン・セルロース類をあげることが
できる。安定剤としては、例えばメチルパラベン、プロ
ピルパラベンのようなパラオキシ安息香酸エステル類；
クロロブタノール、ベンジルアルコール、フェニルエチ
ルアルコールのようなアルコール類；塩化ベンザルコニ
ウム；フェノール、クレゾールのようなフェノール類；
チメロサール；デヒドロ酢酸；およびソルビン酸をあげ
ることができる。矯味矯臭剤としては、例えば通常使用
される、甘味料、酸味料、香料等をあげることができ
る。

【００３３】更に、本発明のトログリタゾンを含有する
グルタチオン還元酵素活性増強剤は、眼に局所的に投与
することができる。眼への局所的投与に適した剤形とし
ては、薬剤を投与した後にほぼ完全な状態で残存する固
形挿入剤の形、または涙液に溶解するかまたは他の方法
で崩壊する崩壊性挿入剤であり、例えば溶液、懸濁液、
ゲル、眼軟膏及び固形挿入剤などをあげることができ
る。

【００３４】これらの眼科用組成物の処方は、下限値と
しては、０．０１％、好適には０．１％で、上限値とし
ては、１０％、好適には５％で、トログリタゾン又はそ
の薬理上許容される塩を含むことができる。

【００３５】眼科用組成物は、無毒の眼科用無機又は有
機担体を含んでいてもよく、典型的な眼科用組成物のた
めの担体としては、例えば水、低級アルカノールまたは
アラルカノールのような水と混和する溶剤と水との混合
物、植物油、ポリアルキレングリコール、石油を基剤と
するジェリー、エチルセルロース、オレイン酸エチル、
カルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、
ミリスチン酸イソプロピル及びその他の通常に使用する
受容可能な担体をあげることができる。また眼科用組成
物は、乳化剤、防腐剤、湿潤剤、賦形剤などのような無
毒の補助物質、例えばポリエチレングリコール２００、
３００、４００及び６００、カーボワックス１０００、
１５００、４０００、６０００及び１００００、ｐ−ヒ
ドロキシ安息香酸メチル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸プロ
ピルのようなｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、低温殺
菌性を持つことが知られており且つ使用して無毒な、第
四級アンモニウム化合物（例えば、塩化ベンゼトニウ
ム、塩化ベンザルコニウム）、フェニル水銀塩のような
抗菌剤、チメロサール、メチル及びプロピルパラベン、
ベンジルアルコール、フェニルエタノール、食塩、ホウ
酸ナトリウム、酢酸ナトリウムのような緩衝剤成分、グ
ルコン酸緩衝剤、及びソルビタンモノラウレート、トリ
エタノールアミン、ポリオキシエチレンソルビタンモノ
パルミチレート、ジオクチルナトリウムスルホスクシネ
ート、モノチオグリセロール、チオソルビトール、エチ
レンジアミン四酢酸などを含むこともできる。

【００３６】更に適当な眼科用賦形剤を使用することが
でき、それらには通常のリン酸緩衝賦形剤（例えば、リ
ン酸ナトリウム緩衝剤、リン酸カリウム緩衝剤）、等張
性ホウ酸賦形剤、等張性食塩賦形剤、等張性ホウ酸ナト
リウム賦形剤などが含まれる。

【００３７】本発明において、トログリタゾン又はその
薬理上許容される塩の投与量は症状、年齢、投与方法等
によって異なるが、例えば経口投与の場合には、成人に
対して１日あたり、下限として０．１ｍｇ（好ましくは
１ｍｇ）、上限として、１０００ｍｇ（好ましくは５０
０ｍｇ）を１回または数回に分けて、症状に応じて投与
することが望ましい。静脈内投与の場合には、成人に対
して１日当たり、下限として０．０１ｍｇ（好ましくは
０．１ｍｇ）、上限として、５００ｍｇ（好ましくは２
００ｍｇ）を１回または数回に分けて、症状に応じて投
与することが望ましい。

【００３８】トログリタゾン又はその薬理上許容される
塩を含有する製剤は、例えば次の方法により製造するこ
とができる。

【００３９】製剤例１．散剤トログリタゾン５ｇ、乳糖８９５ｇおよびトウモロ
コシデンプン１００ｇをブレンダーで混合すると、散
剤が得られる。

【００４０】製剤例２．顆粒剤トログリタゾン５ｇ、乳糖８６５ｇおよび低置換度
ヒドロキシプロピルセルロース１００ｇを混合した
後、１０％ヒドロキシプロピルセルロース水溶液３００
ｇを加えて練合する。これを押し出し造粒機を用いて造
粒し、乾燥すると顆粒剤が得られる。

【００４１】製剤例３．カプセル剤トログリタゾン５ｇ、乳糖１１５ｇ、トウモロコシ
デンプン５８ｇおよびステアリン酸マグネシウム２
ｇをＶ型混合機を用いて混合した後、３号カプセルに１
８０ｍｇずつ充填するとカプセル剤が得られる。

【００４２】製剤例４．錠剤トログリタゾン５ｇ、乳糖９０ｇ、トウモロコシデ
ンプン３４ｇ、結晶セルロース２０ｇおよびステア
リン酸マグネシウム１ｇをブレンダーで混合した後、
錠剤機で打錠すると錠剤が得られる。

【００４３】製剤例５．点眼剤トログリタゾン２．０ｇリン酸二ナトリウム０．７１６ｇリン酸一ナトリウム０．７２８ｇ塩化ナトリウム０．４００ｇｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル０．０２６ｇｐ−ヒドロキシ安息香酸プロピル０．０１４ｇ滅菌精製水適量水酸化ナトリウム適量 ──────────────────────── 全量１００ｍｌｐＨ７．０として常法により点眼液を調製する。

【００４４】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれらに限定されない。

【００４５】実施例１．還元酵素活性増強作用（１）水晶体器官培養６乃至８週例のＳＤ系雄ラット（日本ＳＬＣ）を二酸化
炭素吸入により窒息死させた後、両眼球を摘出した。こ
の眼球の後部の強膜を切開し、硝子体及び虹彩−毛様体
を除去して、水晶体を取り出した。こうして得られたそ
れぞれの水晶体を、６ウェル組織培養プレート（ＦＡＬ
ＣＯＮ）中で後述するいずれかの培養液３ｍｌに浸
し、培養した。培養は、５％二酸化炭素（空気中）存在
下、湿度１００％、３７℃に保たれた炭酸ガスインキュ
ベーター中で４８時間おこなった。負の対照用の培養液
としては、ペニシリン（２０単位／ｍｌ）及びストレプ
トマイシン（２０μｇ／ｍｌ）を含有するメディウム１
９９（Ｍｅｄｉｕｍ１９９、ＧＩＢＣＯ）を用いた。正
の対照用の培養液としては、上記負の対照用の培養液と
精製水の混合液（８５：１５）でガラクトース（Ｄ−ｇ
ａｌａｃｔｏｓｅ）を溶解し、３０ｍＭの濃度でガラク
トースを含有する溶液を調製して、これを用いた。試験
用の培養液としてはトログリタゾンを１０％アセトン水
に溶解又は懸濁させて、上記正の対照用の培養液に１％
の割合で添加し、この溶液を用いた。該試験用の培養液
はトログリタゾンの濃度が０．２μＭ、２μＭ及び２０
μＭのものをそれぞれ調製して用いた。

【００４６】また、培養した水晶体は凍結して保存し
た。

【００４７】ここで、負の対照用の培養液で培養された
水晶体は、正常状態の水晶体に相当し、正の対照用の培
養液で培養された水晶体は、ガラクトース負荷を受けた
水晶体に相当し、試験用の培養液で培養された水晶体
は、ガラクトース負荷を受け、且つ、トログリタゾンを
投与された水晶体に相当する。

【００４８】（２）グルタチオン還元酵素活性の測定（１）で培養した水晶体を用いて、グルタチオン還元酵
素水溶液を調製し、その酵素活性を測定した。すなわ
ち、凍結したラット水晶体を２ｍｌの蒸留水中でホモジ
ナイズした後、これを遠心分離（１０，０００ｇ、２０
分間）に供して、得られた上清を酵素標本とした。

【００４９】１ｍＭ酸化型グルタチオン（ＧＳＳＧ）
及び１００μＭＮＡＤＰＨを含有するリン酸緩衝液
０．６ｍｌに酵素標本４００μｌを加えて、２５℃で
６分間反応をおこなった。消費されずに反応液中に残っ
たＮＡＤＰＨによる吸光度（３４０ｎｍ：ＯＤ_340nm ）
を測定し、反応前のＯＤ_340nm と反応終了後のＯＤ
_340nm の差（ΔＯＤ_340nm ）をＮＡＤＰＨ消費量とし、
グルタチオン還元酵素活性の指標とした。結果（ΔＯＤ
_340nm ／分／水晶体）を表１に示す。

【００５０】

【表１】 ──────────────────────────────────── 対照群トログリタゾン添加群負の対照正の対照２μＭ２０μＭ (- カ゛ラクトース) (+ カ゛ラクトース) ────────────────────────────────── 0.027±0.001 0.026±0.001 0.031±0.000 0.031±0.001 ──────────────────────────────────── 表１から明らかなように、トログリタゾンを添加した群
のΔＯＤ_340nm は、負及び正の対照試験におけるそれよ
りも大きく、より多くのＮＡＤＰＨが消費された。すな
わち、トログリタゾンを添加することにより、グルタチ
オン還元酵素活性は増強された。

【００５１】実施例２．アルドース還元酵素（ＡＲ）阻
害作用ＡＲ活性は、実施例１（１）と同様に培養した水晶体を
酵素の起源として、Hayman and Kinoshitaらの方法(J.B
iol.Chem. 240, 877-882(1965)) に準じて測定した。す
なわち、実施例１（１）と同様に培養したラット水晶体
を生理食塩水で洗浄し、０．０５ｍＭＥＤＴＡ液中で
ホモジナイズした。これを遠心分離（１０，０００ｇ、
１５分間）に供して、得られた上清を酵素標品として用
いた。この酵素液を、０．５ｍＭＤＬ−グリセルアル
デヒド、０．４Ｍ硫酸リチウム、０．０５ｍＭＮＡ
ＤＰＨ、６７ｍＭリン酸１水素ナトリウム及び１ｍＭ
ＥＤＴＡを含有する蒸留水溶液に加えて酵素反応を開
始させた。室温で７分間反応を行った後、消費されずに
反応液中に残ったＮＡＤＰＨの吸光度（３４０ｎｍ）を
測定した。反応開始前の吸光度と反応後の吸光度の差を
ＮＡＤＰＨ消費量とし、ＡＲ活性の指標とした。

【００５２】トログリタゾンは０．２μＭ、２μＭの濃
度では、ＡＲ阻害作用を示さなかった。

【００５３】実施例３．水晶体内のポリオール蓄積抑制
作用ガラクトースがＡＲによる還元反応を介して生成するポ
リオールであるガラクチトールの水晶体内の量を測定し
た。

【００５４】すなわち、実施例（１）に準じて培養し、
凍結したラット水晶体を１ｍｌの０．６ｍＭジメチル
メルカプトグルコース（内部標準物質）蒸留水溶液中で
ホモジナイズし、これに氷冷したエタノール２．４ｍ
ｌを添加して、５分間放置した。これを遠心分離（１
０，０００ｇ、５分間）に供して、得られた上清２５
μｌをスクリューキャップバイアルに入れて、凍結乾燥
した。これに７０μｌのピリジン及び２０μｌのフェニ
ルイソシアネートを添加した後、５５℃で５分間インキ
ュベートした。更に２０μｌのメタノールを添加して、
５５℃で１時間インキュベートした。これに９０μｌの
ピリジンを添加して検体とした。これを高速液体クロマ
トグラフィー（移動相；アセトニトリル：エタノール：
水（＝５：２：３）混合液、流速；１ｍｌ／分）に注入
し、分光光度計で吸光度（２４０ｎｍ）を測定し、各水
晶体１個に含まれていたガラクチトールの量を算出し
た。正の対照群におけるガラクチトール量を１００とし
たときの、トログリタゾン添加群におけるガラクチトー
ルの量を表２に示す。

【００５５】

【表２】 ─────────────────────────────── トログリタゾンの０μＭ２μＭ２０μＭ添加濃度（正の対照） ───────────────────────────── ガラクチトール量 100 65±8 47±6 ─────────────────────────────── 表２から明らかなように、トログリタゾンは、水晶体内
のガラクチトール蓄積を濃度依存的に抑制した。

【００５６】実施例４．過酸化脂質低下作用実施例１（１）に準じて培養したラット水晶体中の過酸
化脂質の量を測定した。すなわち、水晶体湿重量を測定
した後、１ｍＭＥＤＴＡを含む５０ｍＭトリス−塩
酸緩衝液（ｐＨ７．６）０．５ｍｌ中でホモジナイ
ズした。これを遠心分離（２，５００ｇ、３０分間）に
供して、得られた上清に含まれる過酸化脂質を測定し
た。測定は過酸化脂質測定用キット（LPO-586, BIOXYTE
CH S.A. 社）を用いて行い、マロンアルデヒド及びヒド
ロキシアルケナールを過酸化脂質の指標として、過酸化
脂質を比色定量した。得られた結果（水晶体１ｇ中の過
酸化脂質量：nmol/g）を表３に示す。

【００５７】

【表３】 ───────────────────────────────── 対照群トログリタゾン添加群負の対照正の対照２μＭ２０μＭ (- カ゛ラクトース) (+ カ゛ラクトース) ─────────────────────────────── 0.68±0.28 5.17±1.09 4.52±0.19 1.25±0.92 ───────────────────────────────── 表３から明らかなように、ガラクトースを負荷すること
により水晶体内の過酸化脂質濃度は上昇するが、その上
昇の程度は、トログリタゾンを添加することにより、濃
度依存的に抑制された。

【００５８】

【発明の効果】実施例１に示されたように、トログリタ
ゾンは、グルタチオン還元酵素活性増強作用を有してお
り、生体内におけるＧＳＨの供給量を増加させることが
できるので、還元型グルタチオンの欠乏によって起こる
疾患の予防又は治療のために用いることができる。更
に、実施例４に示されたように、トログリタゾンは過酸
化脂質を低下させるので、酸化的ストレスによって起こ
る疾患（特に、水晶体における酸化的ストレスによって
起こる疾患である白内障）の予防又は治療のために用い
ることができる。

【００５９】また、実施例１、２及び３の結果から明ら
かなように、トログリタゾンは、ＡＲ阻害活性を示さな
い濃度（２μＭ）においても、グルタチオン還元酵素活
性増強作用及びポリオール蓄積抑制作用を示した。すな
わち、トログリタゾンは、グルタチオン還元酵素活性を
増強することによりポリオール代謝系を抑制し、ポリオ
ールの蓄積を抑制した。したがって、トログリタゾンを
含有するグルタチオン還元酵素活性増強剤は、糖尿病性
白内障のような、細胞内にポリオールが蓄積することに
よって起こる疾患の予防又は治療のために用いることが
できる。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＡ６１Ｋ 31/425 ＡＥＤＡ６１Ｋ 31/425 ＡＥＤ 9/08 9/08 Ｖ // Ｃ０７Ｄ 417/12 ３１１Ｃ０７Ｄ 417/12 ３１１ (72)発明者吉岡慎二東京都品川区広町１丁目２番58号三共株式会社内

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】トログリタゾン又はその薬理上許容される
塩を含有する、グルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項２】還元型グルタチオンの欠乏によって起こる
疾患の予防又は治療のための、請求項１に記載のグルタ
チオン還元酵素活性増強剤。
【請求項３】酸化的ストレスによって起こる疾患の予防
又は治療のための、請求項１に記載のグルタチオン還元
酵素活性増強剤。
【請求項４】虚血性心疾患の予防又は治療のための、請
求項１に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項５】特発性肺線維症の予防又は治療のための、
請求項１に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項６】慢性腎不全の予防又は治療のための、請求
項１に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項７】酸化的ストレスによって起こる神経系の疾
患の予防又は治療のための、請求項１に記載のグルタチ
オン還元酵素活性増強剤。
【請求項８】胃潰瘍の予防又は治療のための、請求項１
に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項９】白内障の予防又は治療のための、請求項１
に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項１０】白内障が水晶体中にポリオールが蓄積す
ることによって起こる白内障、水晶体中に高分子量蛋白
質が蓄積することによって起こる白内障又は水晶体中に
過酸化物が蓄積することによって起こる白内障である、
請求項９に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項１１】白内障が水晶体中に高分子量蛋白質が蓄
積することによって起こる白内障又は水晶体中に過酸化
物が蓄積することによって起こる白内障である、請求項
９に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項１２】白内障が老人性白内障である、請求項９
に記載のグルタチオン還元酵素活性増強剤。
【請求項１３】白内障が糖尿病性ではなく、老人性白内
障である、請求項９に記載のグルタチオン還元酵素活性
増強剤。