JPH10179150A - 肝細胞培養方法及び薬物代謝能測定方法 - Google Patents
肝細胞培養方法及び薬物代謝能測定方法Info
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- JPH10179150A JPH10179150A JP9215246A JP21524697A JPH10179150A JP H10179150 A JPH10179150 A JP H10179150A JP 9215246 A JP9215246 A JP 9215246A JP 21524697 A JP21524697 A JP 21524697A JP H10179150 A JPH10179150 A JP H10179150A
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Landscapes
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 肝細胞を生体内と類似の環境に保った後、培
養液にフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５
０の発現誘導作用を有する化合物を投与することによ
り、フェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０
の酵素活性の発現を誘導し、さらにフェノバルビタール
誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素活性が発現されて
いる培養細胞を用いて、薬物代謝能を測定する方法を提
供することである。 【解決手段】 テロペプチドが取り除かれたもしくは還
元剤で処理されたI型コラーゲンを主成分とするゲルを
培養床として用い、かつ０．５〜３体積％のＤＭＳＯと
フェノバルビタール誘導型のチトクロームＰ−４５０の
発現誘導作用を有する化合物を含有した培養液を用いる
肝細胞培養方法。
養液にフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５
０の発現誘導作用を有する化合物を投与することによ
り、フェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０
の酵素活性の発現を誘導し、さらにフェノバルビタール
誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素活性が発現されて
いる培養細胞を用いて、薬物代謝能を測定する方法を提
供することである。 【解決手段】 テロペプチドが取り除かれたもしくは還
元剤で処理されたI型コラーゲンを主成分とするゲルを
培養床として用い、かつ０．５〜３体積％のＤＭＳＯと
フェノバルビタール誘導型のチトクロームＰ−４５０の
発現誘導作用を有する化合物を含有した培養液を用いる
肝細胞培養方法。
Description
【発明の属する技術分野】本発明は、生体外で肝細胞の
培養において、フェノバルビタール誘導型のチトクロー
ムＰ−４５０の維持が可能となる培養方法及び薬物代謝
能測定方法に関するものである。
培養において、フェノバルビタール誘導型のチトクロー
ムＰ−４５０の維持が可能となる培養方法及び薬物代謝
能測定方法に関するものである。
【従来の技術】従来、新規の化学物質や医薬品の安全性
毒性試験は動物の個体を使って行われてきており、薬物
の動態と代謝や生体内の物質の合成について検討が行わ
れている。特に肝細胞の物質の吸収、代謝、排泄への関
与が重要とされている。しかし、動物を用いた実験で
は、検査結果の定量化や因果関係の判定が困難である等
の欠点を有し、一種類の物質に多数の動物個体を必要と
する。そのため、血清に含まれる不明成分がないシンプ
ルにモデル化されていて、使用する実験動物の数を削減
した細胞培養による実験が試みられている。肝細胞を生
体外に取り出して培養実験を行うことに関しては、３次
元的な肝細胞の凝集塊を形成させて、肝細胞の形態を生
体内と類似の環境を保つ方法が考えられている。当該分
野において重要課題とされていることは、培養した肝細
胞の機能が生体内における肝細胞の機能と同様に維持さ
れることである。この課題を解決するために初代培養肝
細胞を用いた３次元培養方法が行われており、細胞間基
質を構成するタンパク質や生体適合性を有する高分子化
合物を培養容器表面にコートしたり或いはゲルを構築し
て培養床を形成し、これに肝細胞を接触させて凝集塊を
形成する培養法が開発されはじめている。例えば、スフ
ェロイド培養法（日本動物実験代替法学会第５回大会要
旨集ｐ３０〜３３（’９１））や、マトリゲル培養法
（日本動物実験代替法学会第５回大会要旨集ｐ３８〜４
１（’９１））を利用した方法がある。しかしながら、
スフェロイド培養方法の場合、２〜３週間以上の長期培
養によるスフェロイド中心部の細胞壊死や、内部細胞へ
の物質の浸透性に問題がある。マトリゲル培養法では、
マトリゲルの構成物が完全に解明されておらず、添加し
た被検物質の単独の効果なのか明確でない場合がある。
またこれらの培養法では、重要な肝細胞特異機能の指標
となる物質の合成や代謝の検出ができないなど、生体内
の肝細胞の状態の再現には十分には至ってい。特にフェ
ノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素活
性に関する機能の発現が不明成分を含まない培養系で維
持された報告はない。
毒性試験は動物の個体を使って行われてきており、薬物
の動態と代謝や生体内の物質の合成について検討が行わ
れている。特に肝細胞の物質の吸収、代謝、排泄への関
与が重要とされている。しかし、動物を用いた実験で
は、検査結果の定量化や因果関係の判定が困難である等
の欠点を有し、一種類の物質に多数の動物個体を必要と
する。そのため、血清に含まれる不明成分がないシンプ
ルにモデル化されていて、使用する実験動物の数を削減
した細胞培養による実験が試みられている。肝細胞を生
体外に取り出して培養実験を行うことに関しては、３次
元的な肝細胞の凝集塊を形成させて、肝細胞の形態を生
体内と類似の環境を保つ方法が考えられている。当該分
野において重要課題とされていることは、培養した肝細
胞の機能が生体内における肝細胞の機能と同様に維持さ
れることである。この課題を解決するために初代培養肝
細胞を用いた３次元培養方法が行われており、細胞間基
質を構成するタンパク質や生体適合性を有する高分子化
合物を培養容器表面にコートしたり或いはゲルを構築し
て培養床を形成し、これに肝細胞を接触させて凝集塊を
形成する培養法が開発されはじめている。例えば、スフ
ェロイド培養法（日本動物実験代替法学会第５回大会要
旨集ｐ３０〜３３（’９１））や、マトリゲル培養法
（日本動物実験代替法学会第５回大会要旨集ｐ３８〜４
１（’９１））を利用した方法がある。しかしながら、
スフェロイド培養方法の場合、２〜３週間以上の長期培
養によるスフェロイド中心部の細胞壊死や、内部細胞へ
の物質の浸透性に問題がある。マトリゲル培養法では、
マトリゲルの構成物が完全に解明されておらず、添加し
た被検物質の単独の効果なのか明確でない場合がある。
またこれらの培養法では、重要な肝細胞特異機能の指標
となる物質の合成や代謝の検出ができないなど、生体内
の肝細胞の状態の再現には十分には至ってい。特にフェ
ノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素活
性に関する機能の発現が不明成分を含まない培養系で維
持された報告はない。
【発明が解決しようとする課題】そこで本発明では、以
上のような従来技術の問題点を解決するために、以前に
提案した動物細胞培養方法、すなわち、テロペプチドを
取り除いたI型コラーゲンのゲルを培養床とし、特定の
物質を添加した培養液とした培養法（特開平３−４７８
０号公報）や還元処理された 型コラーゲンのゲルを培
養床とした培養法（特開平６−２９２５６５号公報）を
用い、肝細胞を生体内と類似の環境に保った後、培養液
にフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の
発現誘導作用を有する化合物を投与することにより、フ
ェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素
活性の発現を誘導し、さらにフェノバルビタール誘導型
チトクロームＰ−４５０の酵素活性が発現されている培
養細胞を用いて、薬物代謝能を測定する方法を提供する
ことである。
上のような従来技術の問題点を解決するために、以前に
提案した動物細胞培養方法、すなわち、テロペプチドを
取り除いたI型コラーゲンのゲルを培養床とし、特定の
物質を添加した培養液とした培養法（特開平３−４７８
０号公報）や還元処理された 型コラーゲンのゲルを培
養床とした培養法（特開平６−２９２５６５号公報）を
用い、肝細胞を生体内と類似の環境に保った後、培養液
にフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の
発現誘導作用を有する化合物を投与することにより、フ
ェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０の酵素
活性の発現を誘導し、さらにフェノバルビタール誘導型
チトクロームＰ−４５０の酵素活性が発現されている培
養細胞を用いて、薬物代謝能を測定する方法を提供する
ことである。
【課題を解決するための手段】本発明は、テロペプチド
を取り除いたもしくは還元剤で処理されたI型コラーゲ
ンをゲル化してなるコラーゲンゲルを培養床とし、培養
液にＤＭＳＯとフェノバルビタール誘導型チトクローム
Ｐ−４５０の発現誘導作用を有する化合物が添加されて
いることを特徴とする肝細胞培養方法であり、さらには
本発明の培養方法を用いた薬物代謝能測定方法である。
を取り除いたもしくは還元剤で処理されたI型コラーゲ
ンをゲル化してなるコラーゲンゲルを培養床とし、培養
液にＤＭＳＯとフェノバルビタール誘導型チトクローム
Ｐ−４５０の発現誘導作用を有する化合物が添加されて
いることを特徴とする肝細胞培養方法であり、さらには
本発明の培養方法を用いた薬物代謝能測定方法である。
【発明の実施に形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明に使用される培養床の主成分の原料であるI型コ
ラーゲンは動物種、由来組織に限定されることはなく、
適宜のものを使用できる。テロペプチドを取り除く方法
としては、生体由来の酵素であるペプシンを使用する方
法がある。また還元剤については水素化ホウ素ナトリウ
ム等の水溶液が利用可能なものであって、エステルやア
ミドの還元は起こさず、アルデヒド基の還元を起こすも
のはすべて使用可能であり、適宜のものを使用できる。
培養床はテロペプチドを取り除いた或いは還元剤で処理
されたI型コラーゲンを主成分とし、当該コラーゲンを
単独使用するものもしくは適宜の基質材料を共存せしめ
たもののいずれであっても使用可能であり、その主成分
であるコラーゲンをゲル化させて、コラーゲンゲルの状
態で培養床として使用する。ゲル形成の方法は、テロペ
プチドを取り除いた或いは還元剤で処理されたI型コラ
ーゲンを主成分とする所望濃度のコラーゲン溶液を調製
し、当該溶液を緩衝液などを用いて中性にし、２０℃以
上、望ましくは３７℃で静置すると数時間でゲル化す
る。培養液は、一般の動物細胞培養で広く用いられてい
る培養液で好適なものを選択し、当該溶液にＤＭＳＯを
０．５〜３体積％、及びフェノバルビタール誘導型のチ
トクロームＰ−４５０の発現誘導作用を有する化合物を
適宜の濃度で添加したものを使用できる。まず本発明に
使用される培養床と一般の動物細胞培養で広く用いられ
ている培養液で好適なものにＤＭＳＯを０．５〜３体積
％添加した培養液を使用して、肝細胞を培養し凝集塊を
形成させる。肝細胞の凝集塊の形成方法は、肝細胞を培
養基材の上に播くだけでよく、播種後、数時間〜１日で
肝細胞は培養基材の上面に接着し、２〜３日後に凝集塊
を形成する。肝細胞については、初代培養肝細胞、株化
肝細胞に適用可能であり肝由来の細胞であればその種類
は特に限定されるものではないが、初代培養肝細胞を用
いたほうが好適である。肝細胞の凝集塊を形成した後、
培養液を本発明に使用される培養液に切替て培養を続行
する。以上の培養法によって、培養肝細胞において、フ
ェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０が発現
し合成され、薬物代謝酵素の活性の維持が可能となる。
さらに本発明による培養方法で培養されている肝細胞
に、被検物質を投与して肝細胞の機能を評価することに
よって安全性毒性試験評価に利用することが可能であ
る。
本発明に使用される培養床の主成分の原料であるI型コ
ラーゲンは動物種、由来組織に限定されることはなく、
適宜のものを使用できる。テロペプチドを取り除く方法
としては、生体由来の酵素であるペプシンを使用する方
法がある。また還元剤については水素化ホウ素ナトリウ
ム等の水溶液が利用可能なものであって、エステルやア
ミドの還元は起こさず、アルデヒド基の還元を起こすも
のはすべて使用可能であり、適宜のものを使用できる。
培養床はテロペプチドを取り除いた或いは還元剤で処理
されたI型コラーゲンを主成分とし、当該コラーゲンを
単独使用するものもしくは適宜の基質材料を共存せしめ
たもののいずれであっても使用可能であり、その主成分
であるコラーゲンをゲル化させて、コラーゲンゲルの状
態で培養床として使用する。ゲル形成の方法は、テロペ
プチドを取り除いた或いは還元剤で処理されたI型コラ
ーゲンを主成分とする所望濃度のコラーゲン溶液を調製
し、当該溶液を緩衝液などを用いて中性にし、２０℃以
上、望ましくは３７℃で静置すると数時間でゲル化す
る。培養液は、一般の動物細胞培養で広く用いられてい
る培養液で好適なものを選択し、当該溶液にＤＭＳＯを
０．５〜３体積％、及びフェノバルビタール誘導型のチ
トクロームＰ−４５０の発現誘導作用を有する化合物を
適宜の濃度で添加したものを使用できる。まず本発明に
使用される培養床と一般の動物細胞培養で広く用いられ
ている培養液で好適なものにＤＭＳＯを０．５〜３体積
％添加した培養液を使用して、肝細胞を培養し凝集塊を
形成させる。肝細胞の凝集塊の形成方法は、肝細胞を培
養基材の上に播くだけでよく、播種後、数時間〜１日で
肝細胞は培養基材の上面に接着し、２〜３日後に凝集塊
を形成する。肝細胞については、初代培養肝細胞、株化
肝細胞に適用可能であり肝由来の細胞であればその種類
は特に限定されるものではないが、初代培養肝細胞を用
いたほうが好適である。肝細胞の凝集塊を形成した後、
培養液を本発明に使用される培養液に切替て培養を続行
する。以上の培養法によって、培養肝細胞において、フ
ェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０が発現
し合成され、薬物代謝酵素の活性の維持が可能となる。
さらに本発明による培養方法で培養されている肝細胞
に、被検物質を投与して肝細胞の機能を評価することに
よって安全性毒性試験評価に利用することが可能であ
る。
【実施例】以下、実施例により本発明についてさらに具
体的に説明する。０〜４℃の条件下で０．３重量％のペ
プシン処理されたI型コラーゲン酸性溶液と１０倍濃度
のリン酸塩緩衝液と再構成用緩衝液（２．２％ＮａＨＣ
Ｏ３、４．７７％ＨＥＰＥＳ、ＮａOH０．０５Ｎ）を
８：１：１の割合で混合し、培養容器の培養面に１〜３
ｍｍの厚さになるように分注した後、３７℃のインキュ
ベータに静置し加温することで、コラーゲンゲルの培養
床を作成した。Ｌ１５培地にインシュリン１０-7Ｍ、デ
キサメサゾン１０-7Ｍ、ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌ、プロリ
ン３０μｇ／ｍｌ、ＤＭＳＯ２％、亜セレン酸ナトリウ
ム１０-7Ｍを添加したものを調製し、０．２２μｍのフ
ィルターにより濾過滅菌を行ったものを前培養用培養液
として使用した。また、前培養を開始して２日後以降
は、フェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０
を誘導するために使用する培養液に、前述の培養液に誘
導する化合物としてフェノバルビタールナトリウムを１
ｍＭ添加したものを使用した。まず初代肝細胞を６週令
オスのウィスターラットの肝臓よりコラゲナーゼ灌流法
にて採取し、前述のコラーゲンゲルの培養床に５×１０
５個／ｃｍ２の濃度で播種し、３７℃、５％炭酸ガスイ
ンキュベータ内で前培養を行い、肝細胞の凝集塊を形成
した。細胞を播種して２日後に、培養液を前培養用培養
液からフェノバルビタールナトリウムを添加した培養液
に切り替え、培養を継続した。陰性対照として培地を切
り替えない場合の培養も継続した。なお培養液の交換
は、細胞を播種後毎日実施した。細胞を播種してから４
日または７日後に、コラゲナーゼ溶液を用いて培養床の
コラーゲンゲルを溶解し、肝細胞を回収した。培養した
細胞のフェノバルビタール誘導型Ｐ−４５０の酵素活性
を測定するために、細胞に０．１Ｍ−ＫＨ２ＰＯ４を加
え超音波ホモゲナイザーで細胞を破砕し、遠心分離を２
回行いミクロソームを回収した。０．１Ｍ−ＰＢＳ
（−）によるミクロソームの分散液にペントキシレゾル
フィン、ＮＡＤＰＨを加え、励起波長５３０ｎｍ、測定
波長５８５ｎｍの蛍光を経時的に測定し、生成されるヒ
ドロキシレゾルフィンの量を計測した。比較例１とし
て、ペプシン処理されたI型コラーゲンを培養器にコー
トされた培養床を用い、実施例と同様の培養実験を実施
した。比較例２として、実施例の前培養用培養液、フェ
ノバルビタールナトリウムを添加した培養液よりＤＭＳ
Ｏを除いた培養液をそれぞれ作成し、実施例と同様の培
養実験を実施した。結果を図１〜３に示す。実施例で
は、肝細胞は凝集塊を形成し、ヒドロキシレゾルフィン
の生成が確認された。これより、フェノバルビタール誘
導型Ｐ４５０の酵素活性によりペントキシレゾルフィン
が代謝されることが認められた。一方、陰性対照である
フェノバルビタールナトリウムを含まない培養液では、
肝細胞は凝集塊を形成したが、ヒドロキシレゾルフィン
の生成は認められなかった。比較例１、２では肝細胞は
凝集塊を形成せず伸展してしまい、ヒドロキシレゾルフ
ィンの生成も認められなかった。したがって、フェノバ
ルビタール誘導型Ｐ４５０の酵素活性の発現も認められ
なかった。
体的に説明する。０〜４℃の条件下で０．３重量％のペ
プシン処理されたI型コラーゲン酸性溶液と１０倍濃度
のリン酸塩緩衝液と再構成用緩衝液（２．２％ＮａＨＣ
Ｏ３、４．７７％ＨＥＰＥＳ、ＮａOH０．０５Ｎ）を
８：１：１の割合で混合し、培養容器の培養面に１〜３
ｍｍの厚さになるように分注した後、３７℃のインキュ
ベータに静置し加温することで、コラーゲンゲルの培養
床を作成した。Ｌ１５培地にインシュリン１０-7Ｍ、デ
キサメサゾン１０-7Ｍ、ＥＧＦ１０ｎｇ／ｍｌ、プロリ
ン３０μｇ／ｍｌ、ＤＭＳＯ２％、亜セレン酸ナトリウ
ム１０-7Ｍを添加したものを調製し、０．２２μｍのフ
ィルターにより濾過滅菌を行ったものを前培養用培養液
として使用した。また、前培養を開始して２日後以降
は、フェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５０
を誘導するために使用する培養液に、前述の培養液に誘
導する化合物としてフェノバルビタールナトリウムを１
ｍＭ添加したものを使用した。まず初代肝細胞を６週令
オスのウィスターラットの肝臓よりコラゲナーゼ灌流法
にて採取し、前述のコラーゲンゲルの培養床に５×１０
５個／ｃｍ２の濃度で播種し、３７℃、５％炭酸ガスイ
ンキュベータ内で前培養を行い、肝細胞の凝集塊を形成
した。細胞を播種して２日後に、培養液を前培養用培養
液からフェノバルビタールナトリウムを添加した培養液
に切り替え、培養を継続した。陰性対照として培地を切
り替えない場合の培養も継続した。なお培養液の交換
は、細胞を播種後毎日実施した。細胞を播種してから４
日または７日後に、コラゲナーゼ溶液を用いて培養床の
コラーゲンゲルを溶解し、肝細胞を回収した。培養した
細胞のフェノバルビタール誘導型Ｐ−４５０の酵素活性
を測定するために、細胞に０．１Ｍ−ＫＨ２ＰＯ４を加
え超音波ホモゲナイザーで細胞を破砕し、遠心分離を２
回行いミクロソームを回収した。０．１Ｍ−ＰＢＳ
（−）によるミクロソームの分散液にペントキシレゾル
フィン、ＮＡＤＰＨを加え、励起波長５３０ｎｍ、測定
波長５８５ｎｍの蛍光を経時的に測定し、生成されるヒ
ドロキシレゾルフィンの量を計測した。比較例１とし
て、ペプシン処理されたI型コラーゲンを培養器にコー
トされた培養床を用い、実施例と同様の培養実験を実施
した。比較例２として、実施例の前培養用培養液、フェ
ノバルビタールナトリウムを添加した培養液よりＤＭＳ
Ｏを除いた培養液をそれぞれ作成し、実施例と同様の培
養実験を実施した。結果を図１〜３に示す。実施例で
は、肝細胞は凝集塊を形成し、ヒドロキシレゾルフィン
の生成が確認された。これより、フェノバルビタール誘
導型Ｐ４５０の酵素活性によりペントキシレゾルフィン
が代謝されることが認められた。一方、陰性対照である
フェノバルビタールナトリウムを含まない培養液では、
肝細胞は凝集塊を形成したが、ヒドロキシレゾルフィン
の生成は認められなかった。比較例１、２では肝細胞は
凝集塊を形成せず伸展してしまい、ヒドロキシレゾルフ
ィンの生成も認められなかった。したがって、フェノバ
ルビタール誘導型Ｐ４５０の酵素活性の発現も認められ
なかった。
【発明の効果】本発明の培養方法により、培養肝細胞に
おいてフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５
０が発現し合成され、薬物代謝酵素の活性の維持が可能
となる。さらに本発明による培養方法で培養されている
肝細胞に、被検物質を投与して肝細胞の機能を評価する
ことによって安全性毒性試験評価に利用することが可能
である。
おいてフェノバルビタール誘導型チトクロームＰ−４５
０が発現し合成され、薬物代謝酵素の活性の維持が可能
となる。さらに本発明による培養方法で培養されている
肝細胞に、被検物質を投与して肝細胞の機能を評価する
ことによって安全性毒性試験評価に利用することが可能
である。
【図１】実施例で生成されたヒドロキシレゾルフィンに
よる蛍光強度の経時変化を示す。
よる蛍光強度の経時変化を示す。
【図２】比較例１で生成されたヒドロキシレゾルフィン
による蛍光強度の経時変化を示す。
による蛍光強度の経時変化を示す。
【図３】比較例２で生成されたヒドロキシレゾルフィン
による蛍光強度の経時変化を示す。
による蛍光強度の経時変化を示す。
Claims (5)
- 【請求項１】 テロペプチドが取り除かれたもしくは還
元剤で処理されたI型コラーゲンを主成分とするゲルを
培養床として用い、かつ０．５〜３体積％のＤＭＳＯと
フェノバルビタール誘導型のチトクロームＰ−４５０の
発現誘導作用を有する化合物を含有した培養液を用いる
ことを特徴とする肝細胞培養方法。 - 【請求項２】 培養液に血清を含まず、亜セレン酸ナト
リウムを１０-8〜１０-6Ｍ含有する請求項１記載の肝細
胞培養方法。 - 【請求項３】 フェノバルビタール誘導型のチトクロー
ムＰ−４５０の発現誘導作用を有する化合物がフェノバ
ルビタールもしくはフェノバルビタール塩であり、培養
液中に０．５〜３ｍＭ含有する請求項１記載の肝細胞培
養方法。 - 【請求項４】 培養される肝細胞が初代培養肝細胞であ
る請求項１、２又は３記載の肝細胞培養方法。 - 【請求項５】請求項１、２、３又は４記載の肝細胞培養
方法を用いた薬物代謝能測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9215246A JPH10179150A (ja) | 1996-10-22 | 1997-08-08 | 肝細胞培養方法及び薬物代謝能測定方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8-279082 | 1996-10-22 | ||
| JP27908296 | 1996-10-22 | ||
| JP9215246A JPH10179150A (ja) | 1996-10-22 | 1997-08-08 | 肝細胞培養方法及び薬物代謝能測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH10179150A true JPH10179150A (ja) | 1998-07-07 |
Family
ID=26520762
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9215246A Pending JPH10179150A (ja) | 1996-10-22 | 1997-08-08 | 肝細胞培養方法及び薬物代謝能測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH10179150A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2002061120A1 (fr) * | 2001-02-01 | 2002-08-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Procede pour evaluer l'aptitude d'un medicament a produire une enzyme dans des cellules hepatiques |
| US8143009B2 (en) | 2000-06-14 | 2012-03-27 | Vistagen, Inc. | Toxicity typing using liver stem cells |
-
1997
- 1997-08-08 JP JP9215246A patent/JPH10179150A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8143009B2 (en) | 2000-06-14 | 2012-03-27 | Vistagen, Inc. | Toxicity typing using liver stem cells |
| US8512957B2 (en) | 2000-06-14 | 2013-08-20 | Vistagen Therapeutics, Inc. | Toxicity typing using liver stem cells |
| WO2002061120A1 (fr) * | 2001-02-01 | 2002-08-08 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Procede pour evaluer l'aptitude d'un medicament a produire une enzyme dans des cellules hepatiques |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20040312 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20040706 |