JPH10265407A - 免疫グロブリン製剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 溶液状態においても、保存安定性の良好な免
疫グロブリン製剤を提供する。 【解決手段】 免疫グロブリン５０ｍｇ当たり、血清ア
ルブミンの夾雑量が１０μｇ未満であることを特徴とす
る免疫グロブリン製剤である。この製剤は、陰イオン交
換体による接触処理および／またはコロイド珪酸による
接触処理が施されてなるものである。 【効果】 血清アルブミン量の夾雑量が少ないため、溶
液状態においても不溶性異物の生成が従来のものと比較
して少なく保存安定性が良好なものとなる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、免疫グロブリン製
剤に関し、より詳しくは、保存安定性に優れた免疫グロ
ブリン製剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】血漿蛋白成分であるγ−グロブリンのう
ち、特にＩｇＧを主成分とする免疫グロブリン製剤は、
これまで広く各種感染症の予防並びに治療に役立てられ
てきた。ところで、免疫グロブリンは溶液状態において
不安定であり、免疫グロブリンの凝集、即ち重合体や二
量体の生成により、特に分別操作の間に生じる変性の結
果として、抗補体活性とよばれる免疫グロブリンの補体
結合能力が著しく増加し、人体に静脈内投与すると血清
補体濃度の低下を生じ、あるいはアナフィラキシーショ
ック等の重篤な副作用を起こすことが知られている。従
って、免疫グロブリンは液状製剤ではなく、乾燥製剤、
特に凍結乾燥の態様で製剤化されていた。しかし、乾燥
製剤は使用時には注射用蒸留水等に溶解する必要があっ
たため、簡単に投与することができないという問題があ
った。

【０００３】一方、液状製剤は乾燥製剤に比べると注射
用蒸留水等の溶解の必要性もなく、簡単に投与できる等
の利点があるが、上記の如く免疫グロブリンの安定性に
劣るという欠点があった。従って、溶液状態においても
安定性のある静注用グロブリンの液状組成物の開発が従
来より試みられている。

【０００４】例えば、特開昭６３−１９２７２４号公報
には、低電導度、ｐＨ５．５±０．２、および安定化剤
としてソルビトール使用の組み合わせにより、溶液状態
においても安定性のある静注用グロブリンの液状組成物
が提案されている。また、特開昭５８−４３９１４号公
報においては、免疫グロブリンの凝集物を実質的に含有
せず、免疫血清グロブリンの単量体濃度が約９０％より
も大である免疫グロブリン組成物を得るために、免疫血
清グロブリン溶液のイオン強度を約０．００１未満に、
ｐＨを３．５〜５．０にすることが開示されている。

【０００５】また、特開昭６３−８３４０号公報は、免
疫血清グロブリンを約５．４に等しいか、またはそれ以
下のｐＨにおいて冷エタノール分画法を用いることによ
り、人間の血漿源から調製し、次いでこの免疫血清グロ
ブリンを、感染性のレトロウィルスを実質的に含まない
よう、少なくとも約３日間、約４．２５に等しいかまた
はそれ以下のｐＨにおいて貯蔵するか、または約６．８
に等しいかまたはそれ以下のｐＨで少なくとも４５℃の
温度下に貯蔵する工程を含んでなる、後天性ウィルスを
実質的に含まない免疫血清グロブリンの製造方法を開示
する。しかし、この発明は、レトロウィルスの不活性化
を目的としており、調製された免疫グロブリン製剤にお
いて免疫グロブリンの凝集が改善されたという報告はさ
れていない。

【０００６】また、特開平７−２３８０３６号公報は、
安定性を改善するために、酸処理あるいは室温保存によ
り免疫グロブリンの凝集、即ち、重合体だけでなく二量
体の増加をも抑制することを開示している。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】このように、免疫グロ
ブリンは、本来不安定な蛋白質であるために、液状組成
物を調製した際の安定性が最も懸念される課題の１つで
あり、本発明は、このような課題を解決するものであ
り、その目的は、溶液状態においても保存安定性の良好
な免疫グロブリン製剤を提供するものである。

【０００８】本発明者らは、このような事情を考慮し
て、さらに研究を進めた結果、免疫グロブリン画分中に
微量夾雑する血清アルブミン量をさらに低減することに
より、免疫グロブリンの保存安定性をさらに改善できる
ことを見出し、本発明を完成するに至った。

【０００９】

【課題を解決するための手段】本発明は、以下の通りで
ある。 (1)免疫グロブリン５０ｍｇ当たり、血清アルブミンの
夾雑量が１０μｇ以下であることを特徴とする免疫グロ
ブリン製剤。 (2)３７℃、３９日間の溶液状態での保存後に不溶性異
物を生じないことを特徴とする免疫グロブリン製剤。

【００１０】

【発明の実施の形態】次に本発明を詳細に説明する。本
発明の免疫グロブリン製剤に使用される免疫グロブリン
の態様としては、特に限定されるものではないが、公知
の手法により調製され得るものを用いることができる。
例えば、出発原料として免疫グロブリンを含む画分から
調製されたもの、具体的には、コーンのエタノール分画
により得られる画分II＋III 、画分IIや、免疫グロブリ
ンを含むこれらと同等の画分のペースト等が挙げられ
る。これらの画分を水性溶媒に懸濁して、免疫グロブリ
ンが抽出される方法が例示される。この時、当該画分の
少なくとも２倍容量以上、好ましくは５倍容量以上の水
性媒体が使用される。ここで使用される水性媒体として
は、水や、塩化ナトリウム、塩酸、酢酸、リン酸または
これらの塩等を含有する水溶液が好ましく、また、ｐＨ
は４〜７、イオン強度０．００１〜０．１Ｍが好まし
い。

【００１１】また、免疫グロブリンは、ポリエチレング
リコール処理型、ｐＨ４処理型、イオン交換樹脂処理型
等の非化学修飾型；アルキル化型、スルホン化型等の化
学修飾型；プラスミン、ペプシン、トリプシン等の酵素
で処理された酵素処理型等であってもよく、中でも非化
学修飾型の免疫グロブリンが好ましく用いられる。

【００１２】本発明において非化学修飾型の免疫グロブ
リンとは、以下の諸性状を有するものをいう。 (1)自然のままで何らの修飾や変化も受けておらず、従
って免疫グロブリンのフラグメントであるFab 、F(ab')
₂ 、Fc等を含まない。 (2)抗体価の低下がなく、同時に抗体スペクトルの低下
もない。 (3)抗補体作用（補体結合性）が日本国生物学的製剤基
準で安全とみなされる２０単位（ＣＨ５０値）よりも十
分に低い。

【００１３】このような非化学修飾型の免疫グロブリン
は、自然状態のもので、しかも抗補体価の低いものであ
れば、いかなる方法にて得たものであってもよい。

【００１４】非化学修飾型の免疫グロブリンの調製方法
は公知の手法により行えばよい。例えば、エタノール分
画、ポリエチレングリコール分画（特開昭５３−４７５
１５号公報）、ポリエチレングリコールとヒドロキシエ
チルスターチの組み合わせによる分画（特開昭５１−９
１３２１号公報）、酸処理（特開昭５７−３２２２８号
公報）、陰イオン交換体処理（特表昭５９−５０１５４
６号公報、特開昭６０−４２３３６号公報）、加熱処理
とポリエチレングリコール分画の組合せ（特開昭６３−
１８３５３９号公報）、液状製剤化（特開昭５８−４３
９１４号公報、特開昭６３−１９７２７４号公報）等が
例示される。

【００１５】また上記方法により得られた免疫グロブリ
ンに加熱処理を施すことが好ましい。例えば、液状加熱
方法としては、安定化剤として高濃度の糖または糖アル
コールを用いる方法（特開昭６１−１９１６２２号公
報）、安定化剤として高濃度のソルビトールを用い、低
イオン強度、酸性ｐＨで行う方法（特開昭６３−１４６
８３２号公報）等が例示される。また、乾燥加熱方法と
しては、安定化剤としてグリシン、ポリエチレングリコ
ール、塩化ナトリウム、マンニトール等を用いる方法
（特開昭６１−７８７３０号公報）、安定化剤として二
糖類、糖アルコールを用いる方法（特開昭６２−２２８
０２４号公報、特開昭６３−２８３９３３号公報）等が
例示される。

【００１６】本発明で使用される免疫グロブリンの由来
は特に限定されず、具体的にはヒト、マウス、ラット等
が挙げられるが、好ましくはヒトである。このような免
疫グロブリンの具体例として、例えばポリエチレングリ
コール処理ヒト免疫グロブリン等が例示される。

【００１７】本発明の免疫グロブリン製剤は、血清アル
ブミンがある程度除去されたものであり、その夾雑量が
少ない。血清アルブミンの除去方法としては、以下の陰
イオン交換体による接触処理方法、コロイド珪酸による
接触処理方法等が挙げられる。

【００１８】Ａ）陰イオン交換体による処理方法 陰イオン交換体で接触処理して非吸着画分を回収する方
法である。 (i)陰イオン交換体の調製 陰イオン交換体は、陰イオン交換基を不活性担体に結合
したものであるが、陰イオン交換基としてはジエチルア
ミノエチル（ＤＥＡＥ）基、四級アミノエチル（ＱＡ
Ｅ）基等を、不活性担体としてはアガロース、セルロー
ス、デキストラン、ポリアクリルアミド等を用いること
ができる。その結合は公知の方法で行われる。

【００１９】(ii)処理方法 免疫グロブリン画分を適当な水性溶媒に溶解する。水性
媒体は、ｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）、低イオン強度
（特に０．０００１〜０．１Ｍ）であることが好まし
い。このような水性媒体としては、塩化ナトリウム水溶
液、注射用蒸留水、酢酸緩衝液等が挙げられる。調製さ
れた免疫グロブリン溶液は、その蛋白濃度が１〜１５ｗ
／ｖ％（特に３〜１０ｗ／ｖ％）、ｐＨ４〜７（特にｐ
Ｈ５〜６）となることが好ましい。

【００２０】次いで、この免疫グロブリン溶液を、上記
水性媒体で平衡化した陰イオン交換体と接触処理する。
その処理に際してはバッチ法、カラム法のどちらを用い
てもよい。例えば、バッチ法では、陰イオン交換体１ｍ
ｌに対して免疫グロブリン溶液１０〜１００ｍｌ程度と
混合させ、０〜４℃で３０分〜２時間程度攪拌した後、
遠心分離（６０００〜８０００ｒｐｍ、１０〜３０分
間）して上清を回収する。カラム法でも、陰イオン交換
体１ｍｌに対して免疫グロブリン溶液１０〜１００ｍｌ
程度接触させ、非吸着画分を回収する。

【００２１】Ｂ）コロイド珪酸処理による方法 コロイド珪酸で接触処理して非吸着画分を回収する方法
である。 (i)吸着剤 吸着剤として用いられるコロイド珪酸としては、シリカ
ゲル、軽質無水珪酸、ケイソウ土、酸性白土、ベントナ
イト、カオリン、珪酸アルミン酸マグネシウム等が挙げ
られる。好適には、軽質無水珪酸（商品名エアロジル
（日本エアロジル社製）、商品名デリピト（ゼータ社
製）等）が用いられる。

【００２２】(ii)処理条件 精製された免疫グロブリンを適当な水性溶媒に溶解す
る。水性媒体は、ｐＨ４〜７（特にｐＨ５〜６）、低イ
オン強度（特に０．０００１〜０．１Ｍ）であることが
好ましい。このような水性媒体としては、陰イオン交換
体で述べたものと同様の水性媒体が挙げられる。調製さ
れた免疫グロブリン溶液は、その蛋白濃度が１〜１５ｗ
／ｖ％（特に３〜１０ｗ／ｖ％）、ｐＨ４〜７（特にｐ
Ｈ５〜６）となることが好ましい。

【００２３】この免疫グロブリン溶液は、本発明の目的
に反しない範囲で、通常医薬品に用いられる薬理的に許
容される添加剤（例えば、担体、賦形剤、希釈剤等）、
安定化剤または製薬上必要な成分を含有してもよい。

【００２４】安定化剤としては、グルコース等の単糖
類、サッカロース、マルトース等の二糖類、マンニトー
ル、ソルビトール等の糖アルコール、塩化ナトリウム等
の中性塩、グリシン等のアミノ酸、ポリエチレングリコ
ール、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン共重
合体（プルロニック）、ポリオキシエチレンソルビタン
脂肪酸エステル（トゥイーン）等の非イオン系界面活性
剤等が例示され、１〜１０ｗ／ｖ％程度添加されている
ことが好ましい。

【００２５】次いで、この免疫グロブリン溶液を上記の
吸着剤と接触処理する。接触条件としては、免疫グロブ
リン濃度１〜１００ｇ／リットル（好ましくは１０〜１
００ｇ／リットル）に対して吸着剤量１〜３０ｇ／リッ
トルが使用される。本処理はバッチ法、カラム法のどち
らでも行われ得るが、好ましくはバッチ法を用いる。バ
ッチ法の場合の条件としては、例えば、５〜２５℃、５
分〜１時間程度、混和、攪拌される。その後、濾過また
は遠心分離により上清（非吸着画分）を回収する。

【００２６】このように、血清アルブミンの除去された
免疫グロブリン製剤は、免疫グロブリン５０ｍｇ当たり
血清アルブミンの夾雑量が１０μｇ以下、好ましくは５
μｇ以下の性状を有するものであり、例えば、免疫グロ
ブリンの５ｗ／ｖ％濃度の溶液状態においては、血清ア
ルブミンの夾雑量が１０μｇ／ｍｌ以下、好ましくは５
μｇ／ｍｌ以下の性状を有する。このような性状の免疫
グロブリン製剤は、従来のものと比較して保存安定性が
良好となり、例えば、３７℃、３９日の保存において
も、不溶性異物の生成が極めて少ないものとなる。ま
た、免疫グロブリン製剤中の血清アルブミンの定量法と
しては公知のものが利用でき、例えばＥＬＩＳＡ法、マ
ンシーニー法、比濁法等が採用され得る。

【００２７】本発明の免疫グロブリン製剤は、液状製剤
の場合は、そのままで、あるいは適当な溶媒（例えば、
注射用蒸留水、生理食塩水、ブドウ糖液等）で希釈して
使用され、乾燥製剤の場合は、上記免疫グロブリン溶液
を凍結乾燥をした後、使用時に適当な溶媒（例えば、注
射用蒸留水等）に溶解して使用される。

【００２８】本発明の免疫グロブリン製剤の投与経路
は、通常注射であり、特に静脈内投与が好ましい。本発
明の免疫グロブリン製剤の投与量は、体重１ｋｇ当たり
免疫グロブリンとして５０〜１０００ｍｇ／日を、１〜
数日間連日静脈内投与することが標準的であるが、症
状、性別、体重等に応じて投与量を増減すればよい。

【００２９】

【実施例】本発明をさらに詳細に説明するために、実施
例および実験例を挙げるが、本発明はこれらによって何
ら限定されるものではない。 実施例１ コーン氏の冷アルコール分画法で得られた画分II＋III
のペースト１ｋｇを０．６％塩化ナトリウム１０リット
ルに溶解し、１Ｎ−塩酸でｐＨ３．８に調整し、４℃で
６０分間攪拌して酸処理を行った。この溶液に平均分子
量４０００のポリエチレングリコールを５００ｇ添加し
て溶解しつつ、これに１Ｎ−水酸化ナトリウムを添加し
てｐＨを徐々に上昇させて、最終的にはｐＨ５．０に調
整した。その後直ちに遠心分離により沈殿を除いて澄明
な上清を得た。この上清に平均分子量４０００のポリエ
チレングリコール７００ｇを追加し、緩やかに攪拌しな
がら１Ｎ−水酸化ナトリウムでｐＨ８．０に調整し、沈
殿した免疫グロブリンを遠心分離により回収した。免疫
グロブリンは、例えば生理食塩水または０．０２Ｍ酢酸
緩衝液に０．６％塩化ナトリウムおよび２％マンニット
を添加した溶液に溶解させた。免疫グロブリン５ｗ／ｖ
％溶液を無水シリカを担持したフィルター（ゼータデリ
ピット キュノ社製）に通して、非吸着画分を回収し
た。さらに、除菌濾過、凍結乾燥を行うことにより、臨
床に使用できる静注用免疫グロブリン製剤を得た。この
ようにして得られた免疫グロブリン製剤の５ｗ／ｖ％溶
液中の混入アルブミンは、マンシーニー法により定量し
たところ、１０μｇ／ｍｌ以下であった。

【００３０】実施例２ ヒト血漿から冷エタノール法により得られたコーン画分
II＋III １ｋｇに水１０リットルを加え、ＩｇＧを抽出
し、この上清１００ｍｌ当たりソルビトール５０ｇを添
加し、ｐＨ５．５に調整した後、６０℃で１０時間加熱
処理した。その後ｐＨ５．５に調整した後、冷注射用水
にてこの液を３倍に希釈し、ポリエチレングリコール
（平均分子量４０００）を終濃度が８％となるように添
加し、２℃で遠心分離を行い上清を得た。この上清を１
Ｎ−水酸化ナトリウムを添加してｐＨ８．８に調整した
後、ポリエチレングリコール（平均分子量４０００）を
終濃度が１２％となるように添加し、２℃で遠心分離を
行い、沈殿したＩｇＧ画分を得た。このＩｇＧ画分を注
射用水に溶解し、この溶液に、注射用水で平衡化したＤ
ＥＡＥ−セファデックスを添加（溶液５０ｍｌ当たり２
ｍｌ）し、０〜４℃の条件下で約１時間接触処理し、処
理後濾過することによりＤＥＡＥ−セファデックスを除
去して濾過液（ＩｇＧ溶液）を回収した。このＩｇＧ溶
液を注射用水で５ｗ／ｖ％ＩｇＧ溶液に調整し、酢酸ナ
トリウムでこの溶液のｐＨを約５．５に調整し、さらに
ソルビトールを終濃度が５％となるように添加した。こ
の水溶液（伝導度約１ｍｍｈｏ）を、実施例１と同様に
無水シリカを担持したフィルターに通して非吸着画分を
回収した。さらに除菌濾過し、静注用免疫グロブリン液
状製剤を得た。このようにして得られた５ｗ／ｖ％Ｉｇ
Ｇ溶液中の混入アルブミンは、マンシーニー法により定
量したところ、５μｇ／ｍｌであった。

【００３１】実験例１ 本発明の免疫グロブリン製剤（５ｗ／ｖ％溶液）につい
て、コロイド珪酸による処理を行った場合と、行わなか
った場合とで、免疫グロブリン溶液中の血清アルブミン
の夾雑量、および３７℃、３９日間の保存後の不溶性異
物の生成の度合を比較した。コロイド珪酸による処理は
実施例に記載の方法に準じた。血清アルブミンの定量は
マンシーニー法を用いた。不溶性異物は目視にて観察し
た。結果を表１に示す。

【００３２】

【表１】

【００３３】以上の結果より、コロイド珪酸により処理
された免疫グロブリン製剤は、血清アルブミン量が極め
て少なく、３７℃、３９日間保存しても不溶性異物が観
察されないことがわかる。

【００３４】

【発明の効果】以上の説明で明らかなように、本発明の
免疫グロブリン製剤は、血清アルブミン量の夾雑量が少
ないため、溶液状態においても不溶性異物の生成が従来
のものと比較して少なく保存安定性が良好なものとな
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 上村 八尋 大阪府枚方市招提大谷２丁目25番１号 株 式会社ミドリ十字中央研究所内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 免疫グロブリン５０ｍｇ当たり、血清ア
   ルブミンの夾雑量が１０μｇ以下であることを特徴とす
   る免疫グロブリン製剤。
2. 【請求項２】 ３７℃、３９日間の溶液状態での保存後
   に不溶性異物を生じないことを特徴とする免疫グロブリ
   ン製剤。