JPH10271996A

JPH10271996A - 水チャンネル活性を有する新規ポリペプチド及びｄｎａ配列

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Publication number: JPH10271996A
Application number: JP9094845A
Authority: JP
Inventors: Kousaku Ookubo; 公策大久保; Hiroshi Kuriyama; 洋栗山; Shiro Mita; 四郎三田; Shigehiro Ishida; 成弘石田
Original assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Current assignee: Santen Pharmaceutical Co Ltd
Priority date: 1997-03-28
Filing date: 1997-03-28
Publication date: 1998-10-13
Anticipated expiration: 2017-03-28
Also published as: EP1013665A4; US6780983B2; DE69831584T2; ES2249825T3; EP1013665A1; ATE304553T1; US20020123611A1; US6252046B1; DE69831584D1; EP1013665B1; WO1998043997A1; JP3418085B2

Abstract

(57)【要約】【課題】水チャンネル活性を有する新規な膜タンパク
質及びこれをコードするＤＮＡ配列を提供する。【解決手段】配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列
を含む水チャンネル活性を有する新規ポリペプチド、分
子中に配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列を含む水
チャンネル活性を有するポリペプチドをコードするヌク
レオチド配列、配列表の配列番号２に示すＤＮＡ配列、
及び、配列表の配列番号２に示す塩基配列のうち、塩基
番号１７３〜１１９８でコードされるアミノ酸配列を含
む水チャンネル活性を有するポリペプチド。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、ヒト脂肪組織由来
の水チャンネル活性を有する新規ポリペプチド及びそれ
をコードするＤＮＡ配列に関する。

【０００２】

【従来の技術】細胞膜を介する水の透過は、通常は、細
胞膜の主要構造である脂質２重層を拡散してゆっくりと
行われる。しかしながら、近年、ある種の細胞におい
て、細胞膜を通した早い水の移動が行われることが判明
し、この現象には水を選択的に通す膜タンパク質の関与
が想定された。その後、実際に各種のこのような膜タン
パク質が単離され、このような膜タンパク質は、水チャ
ンネルと称されている。本明細書中、上記水チャンネル
がもつ細胞膜を通した水の選択的透過を行う機能を「水
チャンネル活性」という。なお、上記水チャンネルは、
水のみを選択的に通過させるものであってもよく、水の
みならず、例えば、グリセロールや尿素等の低分子量の
分子をも通過させるものであってもよい。

【０００３】このような水チャンネル活性を有する膜タ
ンパク質としては、アクアポリン（ＡＱＰ）として知ら
れている一群の膜タンパク質が単離されている。また、
現在までに、幾つかのアクアポリンの遺伝子がクローニ
ングされ、ＡＱＰ１〜５、ＦＡ−ＣＨＩＰ、ＡＱＰ−γ
ＴＩＰ等のアクアポリンが哺乳類、両生類、植物等から
発見されている（例えば、佐々木成、「医学のあゆ
み」、１７３巻、９号、１９９５年）。

【０００４】アグレ（Ｐ．Ａｇｒｅ）らは、ＳＣＩＥＮ
ＣＥ誌（ｖｏｌ．２５６、３８５−３８７頁、１９９２
年）において、後にＡＱＰ１と称されることになるＣＨ
ＩＰ２８のインビトロ転写ＲＮＡを注入されたアフリカ
ツメガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）卵母細胞が
水透過性を上昇させることを報告している。バンオスト
（Ｂ．Ａ．ｖａｎＯｏｓｔ）らは、ＳＣＩＥＮＣＥ誌
（ｖｏｌ．２６４、９２−９５頁、１９９４年）におい
て、ヒトＡＱＰ２のアミノ酸配列を開示し、このものが
バソプレシンに依存した尿の濃縮に関与することを示唆
している。

【０００５】石橋らは、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌（９１巻、６２６９−６２７３
頁、１９９４年）において、腎集合管由来のＡＱＰ３の
遺伝子の塩基配列を開示し、コードされるアミノ酸配列
を記載している。石橋らは、ＡＱＰ３のｃＲＮＡを注入
したアフリカツメガエル卵母細胞の水透過性を測定して
水チャンネル活性を確認している。石橋らは、このＡＱ
Ｐ３は、水のみならず、尿素やグリセロール等の非イオ
ン性小分子をも輸送することを報告している。

【０００６】ユング（Ｊ．Ｓ．Ｊｕｎｇ）らは、Ｐｒｏ
ｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ誌（９１巻、
１３０５２−１３０５６頁、１９９４年）において、Ａ
ＱＰ４を単離したことを報告している。このＡＱＰ４
は、哺乳類の脳中に最も多量に存在し、水銀抵抗性を有
することが知られている。レイナ（Ｓ．Ｒａｉｎａ）ら
は、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．誌（２７０巻、１９０８
−１９１２頁、１９９５年）において、ラットの唾液腺
由来のＡＱＰ５のｃＤＮＡを調製し、その塩基配列及び
コードするアミノ酸配列を開示している。レイナ（Ｓ．
Ｒａｉｎａ）らは、ＮＰＡ配列の存在を利用してｃＤＮ
Ａのクローニングを行い、ｃＲＮＡがアフリカツメガエ
ル卵母細胞の水透過性を昂進することを観測してその機
能を確認している。

【０００７】上述のアクアポリンファミリーは、哺乳類
の水代謝に関与しているものと考えられており、例え
ば、ＡＱＰ２は、腎集合管管腔膜にのみ存在が確認され
ており、バソプレシン−尿濃縮系と深く関連しているこ
とが示されており、腎疾患との関連が認められている。
従って、このような水チャンネル活性を有する膜タンパ
ク質は、水と関連する疾患に対する新しい治療法の開発
を検討するうえで重要である。

【０００８】ところで、上述のアクアポリンファミリー
は、腎、脳、胆、眼、腸、唾液腺、気管支等の各種器官
にその発現部位を確認されているが、その他の器官や組
織、特に、脂肪組織における水チャンネル活性を有する
膜タンパク質の存在は報告されていない。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】上述の現状に鑑み、本
発明は、水チャンネル活性を有する新規な膜タンパク質
及びこれをコードするＤＮＡ配列を提供することを目的
とする。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本発明は、配列表の配列
番号１に示すアミノ酸配列を含む水チャンネル活性を有
する新規ポリペプチドである。本発明は、また、分子中
に配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列を含む水チャ
ンネル活性を有するポリペプチドをコードするヌクレオ
チド配列そのものでもある。更に、本発明は、配列表の
配列番号２に示すＤＮＡ配列である。更にまた、本発明
は、配列表の配列番号２に示す塩基配列のうち、塩基番
号１７３〜１１９８でコードされるアミノ酸配列を含む
水チャンネル活性を有するポリペプチドでもある。以
下、本発明を詳述する。

【００１１】本発明のポリペプチドは、配列表の配列番
号１に示すアミノ酸配列を含む。このポリペプチドは、
アスパラギン−プロリン−アラニンの３アミノ酸からな
る配列をアミノ酸番号１９５〜１９７に有している。し
かし、従来知られているＡＱＰに共通して見られるよう
な、このアスパラギン−プロリン−アラニン配列が２度
出現するという特徴は、本発明のポリペプチドにはみら
れない。上記ポリペプチドは、アフリカツメガエル（Ｘ
ｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）卵母細胞の水透過性を上
昇させることから、水チャンネル活性を有するものであ
ることを確認するすることができる。

【００１２】上記ポリペプチドは、このポリペプチドの
アミノ酸配列をコードするヌクレオチド配列に基づい
て、ｉｎｖｉｖｏ又はｉｎｖｉｔｒｏに構成された
タンパク合成系により翻訳されて生成することができ
る。本発明のヌクレオチド配列は、上記ポリペプチドの
アミノ酸配列をコードする領域から実質的になり、必要
に応じてプロモーター領域等のその他の領域を含んでい
てもよい。遺伝情報に基づくタンパク合成は、遺伝子で
あるＤＮＡの情報がＲＮＡポリメラーゼによるＤＮＡに
依存するＲＮＡ合成の結果ｍＲＮＡに転写される。そし
て、このｍＲＮＡが、ｔＲＮＡを含むタンパク合成系で
アミノ酸配列に翻訳される。従って、本発明のヌクレオ
チド配列は、ＤＮＡ配列のみならず、ＲＮＡ配列をも含
むものである。また、あるアミノ酸に対応するコドン
は、通常、１つ又は複数存在することが知られているの
で、上記ヌクレオチド配列は唯一のものではなく、同一
のアミノ酸をコードする同義の他のコドンで置換されて
いるヌクレオチド配列であってもよいことは当然であ
る。

【００１３】上記ポリペプチドは、配列表の配列番号２
に示すＤＮＡ配列が有する遺伝情報に基づいて形成する
ことができる。上記ポリペプチドは、上記配列表の配列
番号２に示す核酸塩基配列のうち、塩基番号１７３〜１
１９８でコードされている。上記配列表の配列番号２の
ＤＮＡ配列のうち、上記塩基番号以外の核酸塩基配列
は、非コーディング領域である。このうち、塩基番号１
２３４〜１２３９には、ＡＡＴＡＡＡからなるポリアデ
ニレイションコンセンサス配列が存在する。なお、上記
配列番号２に示すＤＮＡ配列の読み取り枠の他の可能性
については、コードされるポリペプチドがいずれも極め
て小さいので、水チャンネル機能を発揮することができ
ないと考えられるので、排除することができる。上記核
酸塩基の全長配列は、ＧｅｎＢａｎｋ中にもｄｂＥＳＴ
中にも該当する配列が存在しないことが本発明者らによ
って確認されている。

【００１４】本発明のポリペプチドは、脂肪組織におけ
る水チャンネル活性を有するものである。脂肪組織は、
生体の種々の部位に分布するが、本発明のポリペプチド
は、その脂肪組織での水の移動をコントロールする作用
を有し、種々の部位における脂肪組織の機能を正常に保
つ効果が期待される。

【００１５】

【発明の実施の形態】上記配列番号２のＤＮＡ配列は、
ヒト脂肪組織からクローニングして得られるｃＤＮＡの
塩基配列に該当する。ヒト脂肪組織は、脂肪を貯蔵して
エネルギー貯蔵をはかる組織である。この脂肪組織にお
いては、各種のタンパク質が生成されていることが知ら
れている。この脂肪組織において実際に発現している遺
伝子、言い換えれば、この脂肪組織におけるｍＲＮＡの
組成を忠実に写し取ることができるｃＤＮＡライブラリ
ーとして、３′−ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡライブラリー
が知られている。この３′−ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡラ
イブラリーは、ｍＲＮＡのポリ（Ａ）からその上流にあ
る制限酵素認識部位であるＭｂｏＩ部位までの３′末端
だけの決められた領域を含むものであって、ＰＣＲ法に
よる鋳型の調製に適している。従って、このライブラリ
ーから、クローンを抽出し、それを用いてこの脂肪組織
の完全なｃＤＮＡライブラリーから、アミノ酸のコード
領域を含むより長い塩基配列を決定することにより、脂
肪組織において実際に生成されているタンパク質に関す
る遺伝情報を得ることが可能となる。本発明の上記配列
番号２のＤＮＡ配列は、このようにしてクローニングし
て見出されたものである。以下、上記ｃＤＮＡをヒト脂
肪組織からクローニングして得る方法を、詳細に説明す
る。

【００１６】上記方法としては、例えば、Ｂｉｏｃｈｉ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２
１，２８６−２８９（１９９６）等に記載されている方
法等が知られている。これによれば、まず、脂肪組織か
ら全ＲＮＡを分離し、必要に応じてポリ（Ａ）ＲＮＡま
で精製する。この精製には、市販の精製キットを使用す
ることができ、例えば、オリゴ（ｄＴ）−セルロースと
各種のバッファーとを組み合わせたファルマシア社製Ｑ
ｕｉｃｋｐｒｅｐｍＲＮＡｐｕｒｉｆｉｃａｔｉ
ｏｎｋｉｔ等を好適に使用することができる。次に、
２本鎖ｃＤＮＡをｐＵＣ１９系のベクタープライマーを
用いて合成し、合成した２本鎖ｃＤＮＡを制限酵素Ｍｂ
ｏＩ（認識塩基配列：ＧＡＴＣ）によって選択的に切断
する。このとき、ベクター分子側のＧＡＴＣ配列は、ｄ
ａｍ⁺細菌中で複製することによってメチル化をうけて
Ｇ^mＡＴＣとすることができるので、ＭｂｏＩで切断さ
れることはない。切断されたｃＤＮＡをＥ．ｃｏｌｉリ
ガーゼによって自己環状化することにより、ポリ（Ａ）
から、最も近いＭｂｏＩ部位までのｃＤＮＡのフラグメ
ントを含むプラスミドが完成する。このプラスミドを大
腸菌に入れて培養し、形質転換させた大腸菌のコロニー
を選択する。次に、適当なＰＣＲプライマーを使用して
上記コロニー中のｃＤＮＡをＰＣＲ法により増幅する。

【００１７】一方、ｐＵＣ１９系のベクタープライマー
を用いて合成した全長の２本鎖ｃＤＮＡをＴ４ポリメラ
ーゼを用いて５′末端で切断し、Ｔ４リガーゼで環状化
した後大腸菌に導入して形質転換させる。こうして形質
転換させたコロニーから、上記３′−ｄｉｒｅｃｔｅｄ
ＤＮＡライブラリーから上述の方法により得られた脂肪
組織に特異的なｃＤＮＡをラベル化したものをプローブ
として用いてスクリーニングすることにより、所望のコ
ロニーを得る。このコロニー中の挿入ｃＤＮＡを適当な
ＰＣＲプライマーを使用してＰＣＲ法により増幅する。
増幅産物を精製してソニケーションした後、Ｍ１３ファ
ージ中にサブクローニングする。

【００１８】このようにしてクローニングされたｃＤＮ
Ａは、例えば、プライマー色素を反応させ、精製したも
のを自動シークエンサー等を使用する等の方法により解
析してその塩基配列を決定することができる。かくし
て、本発明のＤＮＡ配列を得ることができる。

【００１９】本発明のポリペプチドは、水チャンネル活
性を有している。上記水チャンネル活性は、アフリカツ
メガエル（Ｘｅｎｏｐｕｓｌａｅｖｉｓ）卵母細胞の
水透過性の上昇をもたらすことを観察することにより確
認することができる。アフリカツメガエル卵母細胞は、
ＡＱＰファミリーの遺伝子が発現していないことが知ら
れており、これに注入したｍＲＮＡによって引き起こさ
れる水透過性の上昇を容易に確認することができるの
で、水チャンネル活性の確認に広く使用されている。例
えば、石橋らは、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ誌（９１巻、６２６９−６２７３頁（１９９
４年））において、ＡＱＰ３のｃＤＮＡをｐＳＰ６４Ｔ
由来のＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔベクターに挿入し、Ｔ７Ｒ
ＮＡポリメラーゼを使用してｃＲＮＡを合成し、このｃ
ＲＮＡをアフリカツメガエル卵母細胞に注入した場合、
注入後４８−６２時間のインキュベーションにより水の
透過性が増加し、また、体積増加が生じたことを観察し
て、水チャンネル機能を確認している。

【００２０】本発明のＤＮＡ配列がコードするポリペプ
チドは、ｉｎｖｉｔｒｏに構成された大腸菌のタンパ
ク合成系によって合成したポリペプチドのアミノ酸配列
を解析することにより確認することができる。この場
合、新生化学実験講座１（東京化学同人発行）２２〜２
４頁記載の方法により、発現産物のＮ末端とＣ末端の配
列を確認する方法を採用することができる。

【００２１】

【実施例】以下に実施例を掲げて本発明を更に詳細に説
明するが、本発明はこれら実施例にのみ限定されるもの
ではない。

【００２２】実施例１ＤＮＡの塩基配列の決定最近、発現している遺伝子の同定だけではなく、その発
現頻度や発現量の検討が可能な、ＲＮＡのポリ（Ａ）か
らその上流の制限酵素ＭｂｏＩ部位までの３′末端だけ
の決められた領域を含む３′−ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡ
ライブラリー（ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔ．，２，１７
３−１７９（１９９２））を用いて、脂肪組織に特異的
なコラーゲン様因子のＤＮＡをクローニングしたことが
報告されている（Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒ
ｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，２２１，２８６−２８９（１９
９６））。上記報告に記載された方法に準じ、脂肪組織
に特異的な３′−ｄｉｒｅｃｔｅｄＤＮＡライブラリー
を用いて、本発明のＤＮＡの塩基配列を決定した。方法ヒト脂肪組織からＱｕｉｃｋｐｒｅｐｍＲＮＡｐ
ｕｒｉｆｉｃａｔｏｎｋｉｔを用いて分離・精製したポ
リ（Ａ）⁺ＲＮＡに逆転写酵素を加えた後、ｐＵＣ１９
系のベクターであるｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔを含むλＺ
ＡＰＩＩに組み込んで大腸菌に導入した。そこへ、脂肪
組織に特異的な部分ＤＮＡをプローブとしてスクリーニ
ングを行い、形質転換された大腸菌のコロニーを得た。
次いで、２種のプライマー（ＳＫ：５′ＣＧＣＴＣＴＡ
ＧＡＡＣＴＡＧＴＧＧＡＴＣ３′、Ｔ７：５′ＧＴＡＡ
ＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧＣ３′）とともに
ＰＣＲ（ＰｏｌｙｍｅｒａｓｅＣｈａｉｎＲｅａｃ
ｔｉｏｎ；９５℃で３０秒・５０℃で３０秒・７０℃で
６０秒のサイクルを１５サイクルした後、９５℃で３０
秒・７０℃で６０秒のサイクルを１５サイクル）を行
い、ソニケーション処理をした後、Ｍ１３にサブクロー
ニングした。ここへプライマー色素を加え精製した後、
自動シークエンサーでＤＮＡの塩基配列を解析した。配
列表の配列番号２に得られた塩基配列を示した。

【００２３】実施例２水透過性についての検討ＡＱＰファミリーの水透過性の検討については、ＡＱＰ
ファミリーの遺伝子が発現していないことが知られてい
るアフリカツメガエルの卵母細胞にＲＮＡを導入した
後、低張な培養液中における卵母細胞の表面積及び体積
変化から水透過性を算出している報告が、ＡＱＰ１（Ｓ
ｃｉｅｎｃｅ，２５６，３８５−３８７（１９９２））
及びＡＱＰ３（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ，９１，６２６９−６２７３（１９９４））
についてなされている。そこで、上記文献に記載された
方法に準じて本発明のＤＮＡでコードされる膜タンパク
の水の透過性について検討した。実験方法実施例１でヒト脂肪組織から得られたＲＮＡ（１０ｎ
ｇ）をマイクロインジェクションしたアフリカツメガエ
ル卵母細胞を、等張な培養液（約２００ｍＯｓｍ）中、
２０℃で３日間培養した。この培養卵母細胞を低張な培
養液（約４０ｍＯｓｍ）中へ移動した。移動２０秒後及
び４０秒後に写真撮影を行い、画像解析装置を用いて卵
母細胞の断面積及び体積を求めた。膜タンパクの水透過
性は、下記の式により算出した。

【００２４】透過性（ｃｍ／ｓｅｃ）＝〔（Ｖ₄₀−
Ｖ₂₀）／２０〕／〔（Ａ₂₀×１０^-2×４）×１．３８
４〕式中、Ｖ₂₀は、２０秒後の卵母細胞の体積（ｃｍ³）を
表し、Ｖ₄₀は、４０秒後の卵母細胞の体積（ｃｍ³）を
表し、Ａ₂₀は、２０秒後の卵母細胞の断面積（ｍｍ²）
を表す。

【００２５】結果を表１に示した。また、ＲＮＡのかわ
りに精製水をマイクロインジェクションしたときの水透
過性も合わせて示した。

【００２６】なお、上記卵母細胞中における本発明のポ
リペプチドの発現は、ｉｎｖｉｔｒｏで合成した本発
明のポリペプチドを用いて得た兎抗血清により、Ｃ末端
領域における免疫測定方法により確認した。

【００２７】

【表１】

【００２８】表１から明らかなように、本発明のＤＮＡ
配列がコードするポリペプチドは、卵母細胞に注入後、
明瞭な水透過性の上昇をもたらした。このことから、本
発明のポリペプチドは、水チャンネル活性を有すること
が判明した。

【００２９】

【発明の効果】本発明は、新規な水チャンネン活性を有
するタンパク質及び上記タンパク質をコードする新規な
ＤＮＡ配列を提供することができる。上記タンパク質
は、未だ水チャンネルの存在が報告されていないヒト脂
肪組織中から見出されたものである。本発明により、上
記組織が関与する水又は脂肪の代謝における疾患の新た
な治療方法の開発が可能となる。

【００３０】

【配列表】

配列番号：１配列の長さ：３４２配列の型：アミノ酸トポロジー：直鎖状配列の種類：ペプチド配列 Met Val Gln Ala Ser Gly His Arg Arg Ser Thr Arg Gly Ser Lys Met 5 10 15 Val Ser Trp Ser Val Ile Ala Lys Ile Gln Glu Ile Leu Gln Arg Lys 20 25 30 Met Val Arg Glu Phe Leu Ala Glu Phe Met Ser Thr Tyr Val Met Met 35 40 45 Val Phe Gly Leu Gly Ser Val Ala His Met Val Leu Asn Lys Lys Tyr 50 55 60 Gly Ser Tyr Leu Gly Val Asn Leu Gly Phe Gly Phe Gly Val Thr Met 65 70 75 80 Gly Val His Val Ala Gly Arg Ile Ser Gly Ala His Met Asn Ala Ala 85 90 95 Val Thr Phe Ala Asn Cys Ala Leu Gly Arg Val Pro Trp Arg Lys Phe 100 105 110 Pro Val Tyr Val Leu Gly Gln Phe Leu Gly Ser Phe Leu Ala Ala Ala 115 120 125 Thr Ile Tyr Ser Leu Phe Tyr Thr Ala Ile Leu His Phe Ser Gly Gly 130 135 140 Gln Leu Met Val Thr Gly Pro Val Ala Thr Ala Gly Ile Phe Ala Thr 145 150 155 160 Tyr Leu Pro Asp His Met Thr Leu Trp Arg Gly Phe Leu Asn Glu Ala 165 170 175 Trp Leu Thr Gly Met Leu Gln Leu Cys Leu Phe Ala Thr Thr Asp Gln 180 185 190 Glu Asn Asn Pro Ala Leu Pro Gly Thr Glu Ala Leu Val Ile Gly Ile 195 200 205 Leu Val Val Ile Ile Gly Val Ser Leu Gly Met Asn Thr Gly Tyr Ala 210 215 220 Ile Asn Pro Ser Arg Asp Leu Pro Pro Arg Ile Phe Thr Phe Ile Ala 225 230 235 240 Gly Trp Gly Lys Gln Val Phe Ser Asn Gly Glu Asn Trp Trp Trp Val 245 250 255 Pro Val Val Ala Pro Leu Leu Gly Ala Tyr Leu Gly Gly Ile Ile Tyr 260 265 270 Leu Val Phe Ile Gly Ser Thr Ile Pro Arg Glu Pro Leu Lys Leu Glu 275 280 285 Asp Ser Val Ala Tyr Glu Asp His Gly Ile Thr Val Leu Pro Lys Met 290 295 300 Gly Ser His Glu Pro Thr Ile Ser Pro Leu Thr Pro Val Ser Val Ser 305 310 315 320 Pro Ala Asn Arg Ser Ser Val His Pro Ala Pro Pro Leu His Glu Ser 325 330 335 Met Ala Leu Glu His Phe 340

【００３１】配列番号：２配列の長さ：１２５８配列の型：核酸鎖の数：二本鎖トポロジー：直鎖状配列の種類：ｃＤＮＡｔｏｍＲＮＡ起源生物名：ヒト組織の種類：脂肪組織配列の特徴特徴を表す記号：ｐｅｐｔｉｄｅ存在位置：１７３．．１１９８特徴を決定した方法：Ｅ配列 GGCTCTGGAC TGGGGACACA GGGATAGCTG AGCCCCAGCT GGGGGTGGAA GCTGAGCCAG 60 GGACAGTCAC GGAGGAACAA GATCAAGATG CGCTGTAACT GAGAAGCCCC CAAGGCGGAG 120 GCTGAGAATC AGAGACATTT CAGCAGACAT CTACAAATCT GAAAGACAAA AC ATG GTT 178 Met Val 1 CAA GCA TCC GGG CAC AGG CGG TCC ACC CGT GGC TCC AAA ATG GTC TCC 226 Gln Ala Ser Gly His Arg Arg Ser Thr Arg Gly Ser Lys Met Val Ser 5 10 15 TGG TCC GTG ATA GCA AAG ATC CAG GAA ATA CTG CAG AGG AAG ATG GTG 274 Trp Ser Val Ile Ala Lys Ile Gln Glu Ile Leu Gln Arg Lys Met Val 20 25 30 CGA GAG TTC CTG GCC GAG TTC ATG AGC ACA TAT GTC ATG ATG GTA TTC 322 Arg Glu Phe Leu Ala Glu Phe Met Ser Thr Tyr Val Met Met Val Phe 35 40 45 50 GGC CTT GGT TCC GTG GCC CAT ATG GTT CTA AAT AAA AAA TAT GGG AGC 370 Gly Leu Gly Ser Val Ala His Met Val Leu Asn Lys Lys Tyr Gly Ser 55 60 65 TAC CTT GGT GTC AAC TTG GGT TTT GGC TTC GGA GTC ACC ATG GGA GTG 418 Tyr Leu Gly Val Asn Leu Gly Phe Gly Phe Gly Val Thr Met Gly Val 70 75 80 CAC GTG GCA GGC CGC ATC TCT GGA GCC CAC ATG AAC GCA GCT GTG ACC 466 His Val Ala Gly Arg Ile Ser Gly Ala His Met Asn Ala Ala Val Thr 85 90 95 TTT GCT AAC TGT GCG CTG GGC CGC GTG CCC TGG AGG AAG TTT CCG GTC 514 Phe Ala Asn Cys Ala Leu Gly Arg Val Pro Trp Arg Lys Phe Pro Val 100 105 110 TAT GTG CTG GGG CAG TTC CTG GGC TCC TTC CTG GCG GCT GCC ACC ATC 562 Tyr Val Leu Gly Gln Phe Leu Gly Ser Phe Leu Ala Ala Ala Thr Ile 115 120 125 130 TAC AGT CTC TTC TAC ACG GCC ATT CTC CAC TTT TCG GGT GGA CAG CTG 610 Tyr Ser Leu Phe Tyr Thr Ala Ile Leu His Phe Ser Gly Gly Gln Leu 135 140 145 ATG GTG ACC GGT CCC GTC GCT ACA GCT GGC ATT TTT GCC ACC TAC CTT 658 Met Val Thr Gly Pro Val Ala Thr Ala Gly Ile Phe Ala Thr Tyr Leu 150 155 160 CCT GAT CAC ATG ACA TTG TGG CGG GGC TTC CTG AAT GAG GCG TGG CTG 706 Pro Asp His Met Thr Leu Trp Arg Gly Phe Leu Asn Glu Ala Trp Leu 165 170 175 ACC GGG ATG CTC CAG CTG TGT CTC TTC GCC ATC ACG GAC CAG GAG AAC 754 Thr Gly Met Leu Gln Leu Cys Leu Phe Ala Thr Thr Asp Gln Glu Asn 180 185 190 AAC CCA GCA CTG CCA GGA ACA GAG GCG CTG GTG ATA GGC ATC CTC GTG 802 Asn Pro Ala Leu Pro Gly Thr Glu Ala Leu Val Ile Gly Ile Leu Val 195 200 205 210 GTC ATC ATC GGG GTG TCC CTT GGC ATG AAC ACA GGA TAT GCC ATC AAC 850 Val Ile Ile Gly Val Ser Leu Gly Met Asn Thr Gly Tyr Ala Ile Asn 215 220 225 CCG TCC CGG GAC CTG CCC CCC CGC ATC TTC ACC TTC ATT GCT GGT TGG 898 Pro Ser Arg Asp Leu Pro Pro Arg Ile Phe Thr Phe Ile Ala Gly Trp 230 235 240 GGC AAA CAG GTC TTC AGC AAT GGG GAG AAC TGG TGG TGG GTG CCA GTG 946 Gly Lys Gln Val Phe Ser Asn Gly Glu Asn Trp Trp Trp Val Pro Val 245 250 255 GTG GCA CCA CTT CTG GGT GCC TAT CTA GGT GGC ATC ATC TAC CTG GTC 994 Val Ala Pro Leu Leu Gly Ala Tyr Leu Gly Gly Ile Ile Tyr Leu Val 260 265 270 TTC ATT GGC TCC ACC ATC CCA CGG GAG CCC CTG AAA TTG GAG GAT TCT 1042 Phe Ile Gly Ser Thr Ile Pro Arg Glu Pro Leu Lys Leu Glu Asp Ser 275 280 285 290 GTG GCG TAT GAA GAC CAC GGG ATA ACC GTA TTG CCC AAG ATG GGA TCT 1090 Val Ala Tyr Glu Asp His Gly Ile Thr Val Leu Pro Lys Met Gly Ser 295 300 305 CAT GAA CCC ACG ATC TCT CCC CTC ACC CCC GTC TCT GTG AGC CCT GCC 1138 His Glu Pro Thr Ile Ser Pro Leu Thr Pro Val Ser Val Ser Pro Ala 310 315 320 AAC AGA TCT TCA GTC CAC CCT GCC CCA CCC TTA CAT GAA TCC ATG GCC 1186 Asn Arg Ser Ser Val His Pro Ala Pro Pro Leu His Glu Ser Met Ala 325 330 335 CTA GAG CAC TTC TAAGCAGAGA TTATTTGTGA TCCCATCCAT TCCCCAATAA 1238 Leu Glu His Phe 340 AGCAAGGCTT GTCCGACAAA 1258

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号ＦＩＣ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＣＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 37/02 ＡＤＮ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19）

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】配列表の配列番号１に示すアミノ酸配列
を含む水チャンネル活性を有する新規ポリペプチド。
【請求項２】分子中に配列表の配列番号１に示すアミ
ノ酸配列を含む水チャンネル活性を有するポリペプチド
をコードするヌクレオチド配列。
【請求項３】配列表の配列番号２に示すＤＮＡ配列。
【請求項４】配列表の配列番号２に示す塩基配列のう
ち、塩基番号１７３〜１１９８でコードされるアミノ酸
配列を含む水チャンネル活性を有するポリペプチド。