JPH10500417A

JPH10500417A - Ｎｏ−合成酵素阻害剤としてのテトラヒドロプテリジン誘導体の使用

Info

Publication number: JPH10500417A
Application number: JP7530022A
Authority: JP
Inventors: プフライデラー，ヴオルフガング; シユミツト，ハーラルト; ヘニング，ライナー
Original assignee: ヘキスト・アクチエンゲゼルシヤフト
Priority date: 1994-05-24
Filing date: 1995-05-11
Publication date: 1998-01-13
Anticipated expiration: 2024-07-01
Also published as: US6858612B1; WO1995032203A2; ATE214068T1; WO1995032203A3; DE4418097A1; ES2173185T3; EP0760818A1; EP0760818B1; PT760818E; JP4287506B2; DE59510094D1

Abstract

(57)【要約】本発明は、一酸化窒素レベルがの増加により引起こされる疾病の治療のための一酸化窒素合成酵素阻害剤である、式Ｉ (式中、Ｘは、Ｏ、又はNHであり、R⁴は、例えば水素、フェニル又はR^4a-CH₂-基であり、R^4aは、例えば水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-NR¹¹R¹²基又は-OR¹³基であり、R¹、R²、R³、R⁵、R⁶、R⁷、R¹¹、R¹²及びR¹³は、請求項１で与えられた意味を有する)のプテリジン誘導体の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 NO−合成酵素阻害剤としてのテトラヒドロプテリジン誘導体の使用本発明は、内因性の一酸化窒素の生成を調節する能力により、一酸化窒素レベルが妨害されることより特徴づけられる症状を予防及び制御するのに有効な薬剤である、式Ｉのプテリジン誘導体に関する。一酸化窒素（NO）はすべての種類の生理学的な過程で重要な役割を果たしている（例えば、R．Henning，Nachr．Chem．Tech．Lab．41(1993)，413；H.H.H.W． Schmidt et al.，Biochim．Biophys．Acta 1178(1993)，153参照）。これは、例えば血管の平滑筋における弛緩作用を有し、それにより血圧の調節に実質上関与する。これは血小板凝集阻害により血液凝固を制御し、例えば長期に記憶を持続させる脳の神経伝達物質として関与する。又、NOは末梢神経系のNA NC神経の伝達物質としても機能する。マクロファージは、感染を防御するために NOの細胞毒性作用を利用する。内因性のNOは、少なくとも三つの異なるNO合成酵素アイソエンザイムによりアルギニンから生成される（例えば、J.F．Kerwin，Jr.，M．Heller，Med．Res．R ev．14(1994)，23参照)。これらは、生体内での局在化、Ca²⁺／カルモジュリンによる調節能、エンドトキシンとサイトカインによる誘導性に関して相違する。カルシウム依存性の構成NO合成酵素は、例えば内皮（III型）及び脳（Ｉ型）で見出され、そこで血圧及び凝固の調節と伝達プロセスに関与する。サイトカイン誘導性で、カルシウム非依存性のもの（II型）はマクロファージ、平滑筋細胞、及び肝細胞に存在する。長期間にわたり比較的多量のNOを産生することができ、そして炎症性プロセスとマクロファージの細胞毒性作用の原因とされる。 NOバランスが妨害されると非常に危険な疾病や損傷が生ずる。敗血症又は出血性ショックでNOが過剰に生成されると、かなり病的な血圧低下を引き起こす。過剰なNO産生は、１型糖尿病とアテローム性動脈硬化症の形成に関与し、また脳虚血後のグルタメート誘導性の神経毒性の原因であると思われる。更に、シトシンの脱アミノ化の結果、DNA損傷が高濃度のNOにより生じる。内因性のNOの欠乏により間接的に又は直接的に引き起こされる疾患の例としては、高血圧、鬱血性疾患、冠動脈性心臓病及び拡張性機能障害がある。このような症状の治療に対してNO産生の調節をする試みが、現在までアルギニン類縁体を用いて実施されてきた（GB-A-2240041；WO-A-93／13055）。更に、文献に記載されている潜在性NO合成酵素阻害剤は、Ｎ−イミノエチルオルニチン（ McCall et al.，Br．J．Pharmacol．102(1991)，234)、アミノグアニジン（T.P ．Misko et al.，Eur．J．Pharmacol．233(1993)，119; EP-A-547588）及び７− ニトロインダゾール（P.K．Moore et al.，Br．J．Pharmacol．108(1993)，296 ）である。種々のプテリジン誘導体は天然に存在し、又、薬学的に活性な化合物としてプテリジン誘導体の使用が記載されている。すなわち、 EP-B-108 890は、例えばパーキンソン病のようなカテコールアミン欠損症に由来する疾病の治療をするためのプテリジン誘導体の使用、及びフェニルケトン尿症の治療をするためのプテリジン誘導体の使用に関するものである（E.C．Bigham et al.，Chemistry and Biology of Pteridines(1986)，S.111，Walter de Gruy ter & Co.，Berlin，New York参照）。これらの文献には、又、Ｘが酸素で、R¹ 、R²、R³及びR⁷が同時に水素である式Ｉの化合物が含まれている。天然に存在する5,6,7,8−テトラヒドロビオプテリンとその類縁体のNO産生に対する作用が、例えばKwonら(J．Biol．Chem．264(1989)，20496)、またはGiovanelliら（Proc ．Natl．Acad．Sci．USA 88(1991)，7091）により研究された。更に、テトラヒドロビオプテリンはNO産生を刺激し、そしてNO合成酵素の補助因子である。NO産生の刺激は、又7,8−ジヒドロビオプテリンに対しても見出された。しかしながら、Overfeldら(Br．J．Pharmacol．107(1992)，1008)によれば、5,6,7,8−テトラヒドロビオプテリンはNO産生の阻害作用も有している。その作用は濃度依存的である。 HevelとMarlettaは６−メチル−5,6,7,8−テトラヒドロビオプテリンによるNO 合成酵素活性の増加を報告する（Biochemistry 31(1992)，7160）。これは、単にGiovanelliらにより比較的高濃度で観察されただけである（上記引用文献中）。これらの研究では、種々の他のプテリン誘導体は重要な作用を示さなかった。驚くべきことに、式Ｉのプテリジン誘導体が、特に内因性NO産生に対する抑制調節作用を有し、過剰なNOレベルによって特徴づけられる疾病に対する薬剤として有効であることが見出された。本発明は、一酸化窒素レベルの増加により引き起こされる疾病の予防及び治療のために用いられる式Ｉ（式中、Ｘは、Ｏ、又はNHであり、 R¹は、水素、メチル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ニコチノイル、又は（１−メチル−３−ピリジニオ）カルボニルであり、 R²は、水素、又はメチルであり、 R³は、水素、メチル、エチル、ベンジル、(C₁-C₅)−アルカノイル、未置換ベンゾイル、置換ベンゾイル、ピリドイル、チエニルカルボニル、基の一つ、R⁹R^9aN-CO-基、R⁹R^9aN-CS-基、フェノキシカルボニル、又はベンジルオキシカルボニルであり、 R⁴は、水素、(C₂-C₅)−アルキル、未置換フェニル、置換フェニル、又はR^4a-C H₂-基であり、 R^4aは、水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-S(O)_mR¹⁰基（ｍは１又は２）、-NR¹¹R¹²基、又は-OR¹³基であり、あるいは、 R³とR^4aは、一緒になって-CO-O-基を表し、そのカルボニルの炭素原子はプテリジン分子の５位で結合され、 R⁵は、水素、メチル、又はフェニルであり、 R⁶は、水素、又はメチルであり、 R⁷は、水素、又はメチルであり、 R⁸は、(C₁-C₁₀)−アルキル、又はベンジルであり、 R⁹は、水素、(C₁-C₆)−アルキル、シクロヘキシル、フェニル、又はベンゾイルであり、 R^9aは、水素、メチル、又はエチルであり、 R¹⁰は、メチルであり、 R¹¹とR¹²は、互いに独立に水素、又はメチルであり、 R¹³は、水素、(C₁-C₁₀)−アルキル、２−メトキシエチル、フェニル、３−フェニルプロピル、３−シクロヘキシルプロピル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ヒドロキシアセチル、未置換若しくはアルキル部分でフェニル基により置換された２ −アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイル、又は（(C₁-C₂)−アルコキシ）カルボニルであり、Ａ−は、薬理学上許容される陰イオンである）のプテリジン誘導体、及びその互変異性体と薬理学上許容される塩の使用に関する。アルキル基は、直鎖又は分岐していてもよく、又、アルキル基が他の基にある場合、例えば、アルコキシ、アルキルメルカプト、アルコキシカルボニル、又はアルカノイル基などのアルキル基も直鎖又は分岐していてもよい。本発明により用いられる式Ｉの化合物におけるアルキル基、すなわち、(C₁-C₄)−、(C₂-C₅)− 、(C₁-C₆)−若しくは(C₁-C_I0)−アルキル基、又は他の基におけるアルキル基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ− ブチル、sec−ブチル、tert−ブチル、ｎ−ペンチル、３−メチルブチル、2,2− ジメチルプロピル、ｎ−ヘキシル、ｎ− ヘプチル、ｎ−オクチル、ｎ−ノニル、又はｎ−デシルが挙げられる。特に、(C₁ -C₅)−アルカノイルの例としては、ホルミル、アセチル、プロピオニル、ｎ− ブチリル、ｉ−ブチリル、ｎ−バレロイル、３−メチル−ｎ−ブチリル、又は2, 2−ジメチルプロピオニルである。(C₁-C₂)−アルコキシとしては、メトキシとエトキシである。未置換、又はアルキル部分でフェニル基により置換された２−アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイルとしては、アミノ酸、すなわちグリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、ノルバリン、ノルロイシン、フェニルグリシン、又はフェニルアラニンの対応する基である。置換されたフェニル基とベンゾイル基はモノ−、又はポリ−置換されていてもよく、好ましくはモノ−乃至はトリ−置換されている。その置換基は所望の位置で置換されていてよく、個々の置換基は、例えばオルト−、メタ−、パラ−位で置換されてよい。多置換の場合、それらの置換基は同一、又は異なっていてもよい。それらの置換基としては、例えば、(C₁-C₄)−アルキル、(C₁-C₄)−アルコキシ、アミノ、(C₁-C₄)−アルキルアミノ、ジ−（(C₁-C₄)−アルキル）アミノ、(C₁ -C₅)−アルカノイルアミノ、ニトロ、又はハロゲンであり、２個のニトロ基まで存在していてもよい。ハロゲンとしては、例えば、フッ素、塩素、臭素又はヨウ素である。ピリドイルとしては、２−、３−、又は４−ピリドイルであり、好ましくは３ −ピリドイル（＝ニコチノイル）である。チエニルカルボニルとしては、２−、又は３−チエニルカルボニルであってよい。式HA（その陰イオンは、本発明で用いられる式Ｉの化合物に存在していてもよい）の酸の例としては、塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、酢酸、プロピオン酸、安息香酸、乳酸、酒石酸、クエン酸、マ製薬上の観点から適当な別の無機酸又は有機酸の陰イオンでもあり得るし、そして、式Ｉの化合物が酸付加塩の形態である場合には、し、又はそれとは異なっていてもよい。式Ｉの化合物は、種々の互変異性体、又は種々の立体異性体であってもよい。本発明は全ての互変異性体の使用ばかりでなく、全ての立体異性体、例えば純粋なエナンチオマー、エナンチオマー混合物、ラセミ体、純粋なジアステレオマー、ジアステレオマー混合物、又はシス／トランス異性体等の使用も含む。Ｘは、好ましくは酸素である。 R¹とR²は、好ましくは同時に水素若しくはメチルであり、又はR²が水素で、R¹ が同時に(C₁-C₅)−アルカノイル、特にアセチル、ｉ−ブチリル若しくはピバロイル、又はニコチノイル、又は（１−メチル−３−ピリジニオ）カルボニルである。特に好ましくは、R¹とR²が同時に水素であるか、又はR²が水素で、R¹が同時にｉ−ブチリルである。 R³は、好ましくは水素、アシル基又は（チオ）カルバモイル基である。ここで、アシル基は、好ましくは(C₁-C₅)−アルカノイル、特にホルミル、アセチル、ピバロイル、未置換又はモノ−、ジ−、若しくはトリ−置換ベンゾイル、チエニルカルボニル、同様にニコチノイルと次の基（式中、R⁸は、好ましくはメチル、ｎ−オクチル又はベンジル）であり、そして置換ベンゾイル基の好ましい置換基はハロゲン及びメトキシである。カルバモイル基R⁹R^9aN-CO-において、R⁹は、好ましくは水素、(C₁-C₄)−アルキル、特にter t−ブチル、同様にシクロヘキシル及びフェニルであり、R^9aは、同時に水素である。又はR⁹とR^9aは、同時にメチルである。チオカルバモイル基R⁹R^9aN-CS-において、R⁹は、好ましくは水素、(C₁-C₄)−アルキル、特にメチル又はエチル、同様にフェニル及びベンゾイルであり、R^9aは、同時に水素である。特に好ましくは、R³は、水素、Ｎ−フェニルチオカルバモイル基、未置換ベンゾイル基、ニコチノイル基、又はニコチノイル基の窒素上でアルキル化若しくはベンジル化により後から誘導された３−ピリジノカルボニル基、又はピリジン環の１位でアルキル化若しくはベンジル化された1,4−ジヒドロ−３−ピリジルカルボニル基である。 R⁴は、好ましくは水素、フェニル、アセチルアミノ基で、特にパラ−アセチルアミノ基で置換されたフェニル、又はR^4a-CH₂-基である。 R^4aは、好ましくは水素、又は-OR¹³基である。R⁴が水素、又はR^4aが水素である場合、R³が同時にアシル基、又は（チオ）カルバモイル基である場合が特に好ましい。 R⁵は、好ましくは水素である。 R⁷は、好ましくは水素である。 R^9aは、好ましくは水素である。 R¹³は、好ましくは水素、(C₁-C₁₀)−アルキル、又はアシル基であり、特に、( C₁-C₅)−アルカノイル、又は未置換若しくはアルキル部分でフェニル基により置換された２−アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイルである。特に好ましくは、R¹³は、 (C₁-C₁₀)−アルキル、又は(C₁-C₅)−アルカノイル、特にアセチルである。R¹³が、(C₁-C₁₀)−アルキルである場合、ｎ−アルキル基、同様にｉ−プロピル、ｉ− ブチル及びtert−ブチルが好ましい。１又はそれより多くの置換基が好ましい意味を有している式Ｉの化合物の使用は好ましい。一酸化窒素レベルの増加により引起こされる疾病の予防及び治療のために、式Ia （式中、Ｘは、Ｏ、又はNHであり、 R¹は、水素、メチル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ニコチノイル、又は（１−メチル−３−ピリジニオ）カルボニルであり、 R²は、水素、又はメチルであり、 R³は、水素、メチル、エチル、ベンジル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ベンゾイル、ニコチノイル、基の一つ、R⁹NH-CO-基、R⁹NH-CS-基、又はベンジルオキシカルボニルであり、 R^4aは、水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-S(O)_mR¹⁰基（ｍは１又は２）、-NR¹¹R¹²基、又は-OR¹³基であり、あるいは、 R³とR^4aは、一緒になって-CO-O-基であり、そのカルボニルの炭素原子はプテリジン分子の５位で結合され、 R⁵とR⁶は、互いに独立に、水素、又はメチルであり、 R⁷は、水素、又はメチルであり、 R⁸は、(C₁-C₁₀)−アルキル、又はベンジルであり、 R⁹は、水素、(C₁-C₆)−アルキル、シクロヘキシル、フェニル、又はベンゾイルであり、 R¹⁰は、メチルであり、 R¹¹とR¹²は、互いに独立に、水素、又はメチルであり、 R¹³は、水素、(C₁-C_I0)−アルキル、２−メトキシエチル、フェニル、３−フェニルプロピル、３−シクロヘキシルプロピル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ヒドロキシアセチル、未置換、若しくはアルキル部分でフェニル基により置換された２−アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイル、又は（(C₁-C₂)−アルコキシ）カルボニルであり、のプテリジン誘導体、及びその互変異性体と薬理学上許容される塩の使用は更に好ましい。本発明により用いられる式Ｉの特に好ましい化合物は、R¹、R²、R³、R⁵、R⁶、及びR⁷が同時に水素であり、R⁴がR^4a-CH₂-基である。ここで、R^4aはアミノ基、メチルアミノ基、ジメチルアミノ基、(C₁-C₁₀)−アルコキシ基、又はアセトキシ基である。更に、特に好ましい化合物は、R²、R⁴、R⁵、R⁶、及びR⁷が同時に水素であり、R¹が水素、又はイソブチリルであり、R³がアシル基、又は（チオ）カルバモイル基である。更に又、式Ｉの化合物で特に好ましいのは、R²、R⁶、及びR⁷が同時に水素であり、R¹が水素、又はイソブチリルであり、R³がアシル基であり、R⁴がフェニル、又はアセチルアミノ基、特にパラ−アセチルアミノ基で置換されたフェニルであり、R⁵が水素、又はフェニルである。式Ｉの化合物は公知であり、公知な方法、又はそれに準じた方法により製造される。式Ｉのプテリジン誘導体を合成する公知な方法としては、例えばGabriel- Isaiの方法、Taylorの方法がある（例えばD.J．Brown，Fused Pyrimidines III ，Pteridines（E.C．Taylor and A．Weissberger(Ed.)，Wiley & Sons，New Yor k）参照）。式Ｉの化合物の詳細な製造法は、例えばEP-A-108 890、Hermann Mic hael Traubの論文(Dissertation der Universit舩 Konstanz，Deutschland(1987 ))、又はJ．Med．Chem．30(1987)，40等に記載されている。本発明で使用される式Ｉの化合物は無機酸又は有機酸と塩を形成できる。薬理学的に許容される酸付加塩を形成するための適切な塩は、例えば塩酸、臭化水素酸、ナフタレンジスルホン酸、特に1,5−ナフタレンジスルホン酸、リン酸、硝酸、硫酸、しゅう酸、乳酸、酒石酸、酢酸、サリチル酸、安息香酸、ぎ酸、プロピオン酸、ピバリン酸、ジエチル酢酸、マロン酸、コハク酸、ピメリン酸、フマル酸、マレイン酸、りんご酸、スルファミン酸、フェニルプロピオン酸、グルコン酸、アスコルビン酸、イソニコチン酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、クエン酸、アジピン酸である。式Ｉの化合物は１つ又はそれより多くの、例えば２つ又は３つ、特に２つの酸等価物を付加することができる。酸付加塩は、その成分を配合することによる通常の方法で、好適には溶媒又は希釈剤中で製造することができる。酸付加塩は、陰イオン交換により別の塩に変酸基を有する式Ｉの化合物は無機又は有機塩基と共に塩を形成することができる。その塩基の例としては、例えばアルカリ金属塩、特にナトリウムとカリウム塩、又はアンモニウム塩、特にアンモニウム窒素上の有機基との塩である。式Ｉの化合物によるNO放出の阻害は、BredtとSnyder及びSchmidtらの研究に基づいた活性分析試験により測定された（D.S．Bredt and S.S．Snyder，Isolatio n of nitric oxide synthase，acalmodulin-requireing enzyme，Proc．Natl．A cad．Sci．USA 87(1990)，682；H.H.H.W．Schmidt et al.，Purification of as oluble isoform of guanylyl cyclase-activating factorsynthase，Proc．Natl ．Acad．Sci．USA 88(1991)，365参照）。精製されたNO合成酵素(NOS)に対する、この試験では、NO形成間に得られた共生成物であるＬ−シトルリンを定量的に測定する。これは、酵素反応の基質として³H−放射性標識されたＬ−アルギニンを使用してなされ、反応後、³H-L-シトルリンとNOが得られた。酵素のインキュベーションが終了した後、生成したＬ−シトルリンを反応混合物のイオン交換クロマトグラフィーにより未反応のＬ−アルギニンから除去する。そして、液体シンチレーション測定により測定されたその³H−活性はＬ−シトルリン量に対応する。更に、その方法の詳細を以下に述べる。 NOレベルが増加することにより引き起こされる疾病、そして本発明による式Ｉの化合物で治療され、又は予防され得る疾病は、特に病的な血圧低下であり、これは、例えば敗血症、又は出血性ショック、サイトカインによる腫瘍若しくはガンの治療、又は肝硬変により生ずる。更に、関節リウマチ、及び特に潰瘍性大腸炎のような炎症性疾患、同様にインスリン依存性糖尿病と移植組織の拒絶反応にも適用される。又、次の疾病は一酸化窒素の産生の増加に関係し、本発明により治療又は予防することができる。心臓血管系の領域では、動脈硬化症、虚血後の組織損傷と梗塞障害、再潅流障害、コクサッキー・ウイルス感染に基づく心筋炎、及び心筋症がある。神経組織／中枢神経組織の領域では、種々の病因（神経炎の型成）の神経炎、脳脊髄炎、ウイルス性神経変性疾患、アルツハイマー病、痛覚過敏、てんかん、及び片頭痛、腎臓の領域では、急性の腎不全と種々の病因の腎炎、特に糸球体腎炎である。更に加えて、胃、及び子宮／胎盤領域における治療、及び精子の固有運動性に影響を及ぼす治療にも、式Ｉの化合物が使用できる。式Ｉの化合物及びその薬理学的に許容される塩を、生化学及び薬理学研究において補助剤として研究及び診断方法で使用することができ、この化合物は動物、好ましくは哺乳類、特に好ましくはヒトに、それ自体治療剤として、相互に混合物として、又は経口又は非経口用として許容される医薬製剤の形で投与することができる。この製剤は、少なくとも式Ｉの化合物又はその塩を有効量含む活性成分として、通常の製薬上、無害の賦形剤及び添加剤を加えて投与され得る。治療剤は、経口用として、例えば丸剤、錠剤、ラック錠、コーティング錠、ハード又はソフトゼラチンカプセル、溶液、シロップ、乳化液、懸濁液、又はエアロゾル混合物で投与される。しかしながら、投与は、直腸に、例えば坐薬の形態で、又は非経口的に、例えば注射液又は注入液の形態で、又は経皮的に、例えば軟膏又はチンキ剤の形態で行われる。又、その医薬製剤は、活性な化合物と賦形剤に加えて、例えば希釈剤、増量剤、膨化剤、結合剤、滑剤、湿潤剤、安定剤、乳化剤、防腐剤、甘味剤、着色剤、香味剤、芳香剤、緩衝物質、及び溶媒、可溶化剤、蓄積作用を生じるための試薬、同様に浸透圧を変えるための塩、コーティング剤、又は抗酸化剤のような添加剤を含有することができる。この製剤は、二種又はそれ以上の式Ｉの化合物、又はそれらの薬理学上許容される塩、及び他の治療上有効な物質を含有することもできる。このような他の治療上有効な物質とは、例えばプロプラノロール、ピンドロール、メトプロロールのようなβ−受容体遮断剤、例えばカルボクロメンのような血管拡張剤、例えばバルビツール酸誘導体、1,4−ベンゾジアゼピン、メプロバメートのようなトランキライザー、例えばクロロチアジドのような利尿剤、例えばジギタリス製剤のような強心剤、例えばヒドララジン、ジヒドララジン、ラミプリル、プラゾシン、クロニジン、ラウオルフィアアルカロイドのような血圧降下剤、例えばベザフィブラート、フェノフィブラートのような血中の脂肪酸レベルを低下させる薬剤、例えばフェンプロコウモンのような血栓症予防剤、例えばコルチコーステロイド、サリチル酸誘導体、又はプロピオン酸誘導体、例えばイブプロフェンのような抗炎症剤、例えばペニシリン、セファロスポリンのような抗生物質、例えば有機硝酸塩、シドノンイミン又はフロキサンのようなNO供与体等である。投与量は、広範囲で変えられ、個々のケース毎に個々の条件で適用される。一般に、経口投与の場合、人に対する一日の投与量は、0.5〜100mg、好ましくは１〜20mgが適当である。他の投与形態の場合にも、一日の投与量は同様の範囲、すなわち一般に人に対して0.5〜100mgの量である。一日の投与量は何回かに分けられ、例えば２〜４回の投与に分けることができる。医薬製剤を製造するために、製薬上不活性な無機、又は有機の賦形剤が用いられる。丸剤、錠剤、コーティング錠、及びハードゼラチンカプセルを製する場合には、乳糖、コーンスターチ又はその誘導体、タルク、ステアリン酸又はその塩等が用いられる。ソフトゼラチンカプセル及び坐薬用の賦形剤は、例えば脂肪、ロウ、半固体状又は液体ポリオール、天然油又は硬化油等が用いられる。溶液及びシロップ製剤用の適切な賦形剤としては、例えば水、しょ糖、転化糖、グルコース、ポリオール等である。注射剤用の適切な賦形剤としては、例えば水、アルコール、グリセロール、ポリオール又は植物性油等である。現在まで、式Ｉの種々のプテリジン誘導体の薬理学的な作用又は医薬用途は知られていない。このような化合物に対して、本発明は初めて医薬的な適用を与えるものである。本発明は、又、薬理学的に活性な化合物として、式Ｉ（式中、Ｘは、Ｏ、又はNHであり、 R¹は、水素、メチル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ニコチノイル、又は（１−メチル−３−ピリジニオ）カルボニルであり、 R²は、水素、又はメチルであり、 R³は、水素、メチル、エチル、ベンジル、(C₁-C₅)−アルカノイル、未置換ベンゾイル、置換ベンゾイル、ピリドイル、チエニルカルボニル、基の一つ、R⁹R^9aN-CO-基、R⁹R^9aN-CS-基、フェノキシカルボニル、又はベンジルオキシカルボニルであり、 R⁴は、水素、(C₂-C₅)−アルキル、未置換フェニル、置換フェニル、又はR^4a-C H₂-基であり、 R^4aは、水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-S(O)_mR¹⁰基（ｍは１又は２）、-NR¹¹R¹²基、又は-OR¹³基であり、あるいは、 R³とR^4aは、一緒になって-CO-O-基を表し、そのカルボニルの炭素原子はプテリジン分子の５位で結合され、 R⁵は、水素、メチル、又はフェニルであり、 R⁶は、水素、又はメチルであり、 R⁷は、水素、又はメチルであり、 R⁸は、(C₁-C_I0)−アルキル、又はベンジルであり、 R⁹は、水素、(C₁-C₆)−アルキル、シクロヘキシル、フェニル、又はベンゾイルであり、 R^9aは、水素、メチル、又はエチルであり、 R¹⁰は、メチルであり、 R¹¹とR¹²は、互いに独立に水素、又はメチルであり、 R¹³は、水素、(C₁-C₁₀)−アルキル、２−メトキシエチル、フェニル、３−フェニルプロピル、３−シクロヘキシルプロピル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ヒドロキシアセチル、未置換若しくはフェニル基によりアルキル部分で置換された２ −アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイル、又は（(C₁-C₂)−アルコキシ）カルボニルであり、のプテリジン誘導体、及びその互変異性体と薬理学上許容される塩に関する。但し、Ｘが酸素で、同時にR⁴がR^4a-CH₂-の場合、置換基R¹、R²、R³及びR⁷の少なくとも一は水素以外のものを意味するものとする。次の実施例は本発明により用いられる式Ｉの化合物である。その「塩」の列で、何モルかの酸、及び何モルかの結晶水が示されている場合には、式Ｉのプテリジン誘導体の活性な化合物１モル当たりに対してである。その実施例では、次の短縮形が用いられる。 Me ＝メチル Et ＝エチル iPr ＝イソプロピル iBu ＝イソブチル tBu ＝ tert-ブチル Ph ＝フェニル Py ＝３−ピリジル実施例１実施例２実施例３実施例４実施例５実施例６実施例７実施例８実施例９実施例 10 実施例 11 実施例 12 実施例 13 実施例 14 実施例 15 実施例 16 実施例 17 実施例 18 実施例 19 実施例 20 実施例 21 実施例 22 実施例 23 実施例 24 実施例 25 実施例 26 実施例 27 実施例 28 実施例 29 実施例 30 実施例 31 実施例 32 実施例 33 実施例 34 実施例 35 実施例 36 実施例 37 実施例 38 実施例 39 実施例 40 実施例 41 実施例 42 実施例 43 実施例 44 実施例 45 実施例 46 実施例 47 実施例 48 実施例 49 実施例 50 実施例 51 実施例 52 実施例 53 実施例 54 実施例 55 実施例 56 実施例 57 実施例 58 実施例 59 実施例 60 実施例 61 実施例 62 実施例 63 実施例 64 実施例 65 実施例 66 実施例 67 実施例 68 実施例 69 実施例 70 実施例 71 実施例 72 実施例 73 実施例 74 式の化合物実施例 75 実施例 76 実施例 77 実施例 78 実施例 79 実施例 80 実施例 81 実施例 82 実施例 83 実施例 84 実施例 85 実施例 86 実施例 87 実施例 88 実施例 89 実施例 90 実施例 91 実施例 92 実施例 93 実施例 94 実施例 95 実施例 96 実施例 97 実施例 98 実施例 99 実施例 100 実施例 101 実施例 102 実施例 103 実施例 104 実施例 105 実施例 106 実施例 107 実施例 108 実施例 109 実施例 110 実施例 111 実施例 112 実施例 113 精製された一酸化窒素合成酵素（NOS）の活性阻害の測定精製されたNOSによりNOの形成間に得られた共生成物Ｌ−シトルリンを、この活性分析試験で定量的に測定する。使用される酵素反応の基質は³H−放射性標識されたＬ−アルギニンであり、反応後、³H−Ｌ−シトルリンとNOが得られる。酵素インキュベーションが終了した後、生成したＬ−シトルリンを、その反応混合物からイオン交換クロマトグラフィーにより未反応のL-アルギニンから除去する。そして、NOS活性の直接の尺度である液体シンチレーションにより測定された³ H−活性はＬ−シトルリン量と一致する。酵素反応をするための基礎媒質は、TEバッファー(トリエタノールアミン、EDT A、pH7.0)である。各インキュベーションの最終体積は100μｌである。その反応混合物は、氷上で次の６成分を混合することで得られる。１．「REAミックス」(pH7.0)（これは、トリエタノールアミン、塩化カルシウム、塩化マグネシウム、EDTA、Ｌ−アルギニン、カルモジュリン、及びフラビンアデニンジヌクレオチド(FAD)を含有する）２．β−ニコチンアミドアデニンジヌクレオチドリン酸、還元型(NADPH)の新たに調製された原液３．(6R)−5,6,7,8−テトラヒドロ−Ｌ−ビオプテリン二塩酸塩原液(BH₄)、又はBH₄-なしの実験のため、これの代わりにTEバッファー４．ブタの小脳、又はブタの肝臓から精製されたNO合成酵素５．Ｌ−［2,3,4,5-³H]−アルギニン二塩酸塩原液（1.5〜2.6 TBq／mmol）６．試験物質インキュベーション体積100μlの成分の最終濃度は、トリエタノールアミン50 mM、EDTA 0.5mM、CaCl₂226μM、MgCl₂ 447μM、Ｌ−アルギニン50μM、カルモジュリン0.5μM、FAD ５μM、NADPH１mM、BH₄（添加する場合）２μM、試験物質10 0μMである。氷上でその成分を混合した後、反応混合物をすぐに水浴中37℃で15 分間インキュベートする。インキュベーションした後、900mlの氷冷した「ストップバッファー」（20mMの酢酸ナトリウム、２mMのEDTA、pH5.5）を加え反応を止め、そしてその混合物（総体積1.0ml）を氷上に置く。未反応の³H-Ｌ−アルギニンを分離するために、その混合物は、事前に２mlのストップバッファーで洗い、安定化しておいた0.8mlのDowex AG 50 WX-8（100〜200メッシュ）のイオン交換カラムに付す。サンプルの仕込み後、カラムは各回１mlの水で二回溶出する。サンプルを展開し、その溶出液をシンチレーション容器に集め、精製する（総体積３ml）。９mlのシンチレーター溶液を３mlの測定用水溶液に加え、その均質な混合物を、Tricarb 2500TR(Packard)液体シンチレーションカウンターでサンプル当たり一分間測定する。試験されたその物質の活性を、コントロールの活性に対する百分率で得る。それぞれの物質がアンタゴニスト（拮抗）作用に対しては、２μMテトラヒドロビオプテリンの存在下、100μMの濃度で試験され、アゴニスト作用に対してはテトラヒドロビオプテリンのない場合NOSで試験される。全てのインキュベーションは三通りの組み合わせで行われる。各実験は様々な酵素製剤で三回繰り返される。その結果は次の表に与えられる。次の実施例は医薬製剤の形態に関する。実施例Ａ１カプセル当たり活性化合物100mgを含有するゼラチンソフトカプセル実施例Ｂ１ml当たり活性化合物2.0mgを含有する注射液実施例Ｃ５ml当たり活性化合物60mgを含有する乳化液実施例Ｄ１坐薬当たり活性化合物40mgを含有する直腸用製剤実施例Ｅ１錠当たり活性化合物40mgを含有する錠剤実施例Ｆ１コーティング錠当たり活性化合物50mgを含有するコーティング錠実施例Ｇハードゼラチンカプセルの内容物を調製する場合、次の処方が適する。実施例Ｈ点滴薬は次の処方により調製され得る（１ml＝20滴中に活性化合物 100mg）。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 31/505 ＡＥＤ 9454−4ＣＡ６１Ｋ 31/505 ＡＥＤＣ０７Ｄ 475/06 9271−4ＣＣ０７Ｄ 475/06

Claims

【特許請求の範囲】１．式Ｉ（式中、Ｘは、Ｏ、又はNHであり、 R¹は、水素、メチル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ニコチノイル、又は（１− メチル−３−ピリジニオ）カルボニルであり、 R²は、水素、又はメチルであり、 R³は、水素、メチル、エチル、ベンジル、(C₁-C₅)−アルカノイル、未置換ベンゾイル、置換ベンゾイル、ピリドイル、チエニルカルボニル、基の一つ、R⁹R^9aN-CO-基、R⁹R^9aN-CS-基、フェノキシカルボニル、又はベンジルオキシカルボニルであり、 R⁴は、水素、(C₂-C₅)−アルキル、未置換フェニル、置換フェニル、又はR^4a -CH₂-基であり、 R^4aは、水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-S(O)mR¹⁰基（ｍは１又は２）、-NR¹¹R¹²基、又は-OR¹³基であり、あるいは、 R³とR^4aは、一緒になって-CO-O-基を表し、そのカルボニルの炭素原子はプテリジン分子の５位で結合され、 R⁵は、水素、メチル、又はフェニルであり、 R⁶は、水素、又はメチルであり、 R⁷は、水素、又はメチルであり、 R⁸は、(C₁-C₁₀)−アルキル、又はベンジルであり、 R⁹は、水素、(C₁-C₆)−アルキル、シクロヘキシル、フェニル、又はベンゾイルであり、 R^9aは、水素、メチル、又はエチルであり、 R¹⁰は、メチルであり、 R¹¹とR¹²は、互いに独立に水素、又はメチルであり、 R¹³は、水素、(C₁-C₁₀)−アルキル、２−メトキシエチル、フェニル、３− フェニルプロピル、３−シクロヘキシルプロピル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ヒドロキシアセチル、未置換若しくはフェニル基によりアルキル部分でフェニル基により置換された２−アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイル、又は((C₁-C₂)−アルコキシ)カルボニルであり、のプテリジン誘導体、及びその互変異性体と薬理学上許容される塩の、一酸化窒素レベルの増加により引起こされる疾病の予防及び治療のための使用。２．式Ｉにおいて、Ｘが酸素である、請求項１記載の使用。３．式Ｉにおいて、R³が水素、(C₁-C₅)−アルカノイル、未置換のベンゾイル、モノ−、ジ−、又はトリ置換ベンゾイル、チエニルカルボニル、ニコチノイル、基の一つ、R⁹NH-CO-、R⁹NH-CS-、又は(CH₃)₂N-CO-である、請求項１及び／又は請求項２に記載の使用。４．式Ｉにおいて、R⁴が水素、フェニル、アセチルアミノ基又はR⁴-CH₂-基で置換されたフェニルであり、R^4aが好ましくは水素または-OR¹³基であり、R¹³が特に好ましくは(C₁-C₁₀)−アルキル又は(C₁-C₅)−アルカノイルである、請求項１乃至３のいずれかに記載の使用。５．特に敗血症ショックとサイトカインによるガン治療の病的な血圧低下の治療と予防のための請求項１乃至４のいずれかに記載の使用。６．特に潰瘍性大腸炎の炎症性疾患の治療と予防のための請求項１乃至４のいずれかに記載の使用。７．梗塞障害及び／又は再潅流障害の治療と予防のための請求項１乃至４のいずれかに記載の使用。８．移植の拒絶反応の治療と予防のための請求項１乃至４のいずれかに記載の使用。９．アルツハイマー病、てんかん及び片頭痛からなる群から選択された神経系の疾患の治療と予防のための請求項１乃至４のいずれかに記載の使用。 10．薬理学的に活性な化合物として、式Ｉ（式中、Ｘは、Ｏ）又はNHであり、 R¹は、水素、メチル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ニコチノイル、又は（１−メチル−３−ピリジニオ）カルボニルであり、 R²は、水素、又はメチルであり、 R³は、水素、メチル、エチル、ベンジル、(C₁-C₅)−アルカノイル、未置換ベンゾイル、置換ベンゾイル、ピリドイル、チエニルカルボニル、基の一つ、R⁹R^9aN-CO-基、R⁹R^9aN-CS-基、フェノキシカルボニル、又はベンジルオキシカルボニルであり、 R⁴は、水素、(C₂-C₅)−アルキル、未置換フェニル、置換フェニル、又はR^4a -CH₂-基であり、 R^4aは、水素、(C₁-C₄)−アルキルメルカプト、-S(O)mR¹⁰基（ｍは１又は２）、-NR¹¹R¹²基、又は-OR¹³基であり、あるいは、 R³とR^4aは、一緒になって-CO-O-基を表し、そのカルボニルの炭素原子はプテリジン分子の５位で結合され、 R⁵は、水素、メチル、又はフェニルであり、 R⁶は、水素、又はメチルであり、 R⁷は、水素、又はメチルであり、 R⁸は、(C₁-C₁₀)−アルキル、又はベンジルであり、 R⁹は、水素、(C₁-C₆)−アルキル、シクロヘキシル、フェニル、又はベンゾイルであり、 R^9aは、水素、メチル、又はエチルであり、 R¹⁰は、メチルであり、 R¹¹とR¹²は、互いに独立に水素、又はメチルであり、 R¹³は、水素、(C₁-C₁₀)−アルキル、２−メトキシエチル、フェニル、３− フェニルプロピル、３−シクロヘキシルプロピル、(C₁-C₅)−アルカノイル、ヒドロキシアセチル、未置換若しくはアルキル部分でフェニル基により置換された２−アミノ−(C₂-C₆)−アルカノイル、又は((C₁-C₂)−アルコキシ)カルボニルであり、のプテリジン誘導体、及びその互変異性体と薬理学上許容される塩。但し、Ｘが酸素で、同時にR⁴がR^4a-CH₂-の場合、置換基R¹、R²、R³及びR⁷の少なくとも一つは水素以外のものを意味するものとする。