JPH10501241A

JPH10501241A - 造影用テクネチウム−９９ｍ標識ペプチド

Info

Publication number: JPH10501241A
Application number: JP8501223A
Authority: JP
Inventors: ディーン，リチャード・ティ; バットラム，スコット; マックブライド，ウィリアム; リスター−ジェイムズ，ジョン; シビテロ，エドガー・アール
Original assignee: ダイアテック・インコーポレイテッド
Priority date: 1994-06-03
Filing date: 1995-06-01
Publication date: 1998-02-03
Also published as: PT762901E; CA2191950C; AU697048B2; EP0762901B9; DE69534943T2; KR970703171A; CN1090973C; ES2263153T3; EP0762901A1; ATE323511T1; CN1154072A; KR100235136B1; WO1995033498A1; ZA954547B; CA2191950A1; US5997844A; US6074627A; DK0762901T3; DE69534943D1; AU2778395A

Abstract

(57)【要約】本発明は、放射標識ペプチドおよびかかるぺプチドを製造する方法に関する。特に、本発明は、ペプチド、かかるペプチドを製造するための方法およびキット、ならびに、ペプチドのアミノ酸側鎖を介して特異的な結合ペプチドに共有結合した放射標識結合部分を介してテクネチウム−９９ｍ（Ｔｃ−９９ｍ）で標識した哺乳動物の体内部位をイメージ化するために、かかるペプチドを用いる方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】造影用テクネチウム−９９ｍ標識ペプチド発明の背景１．発明の分野本発明は、放射線診断薬およびペプチド、ならびに標識された放射性診断薬の製造方法に関する。さらに詳細には、本発明は、ペプチド、かかるペプチドを製造するための方法およびキット、ならびにテクネチウム−９９ｍ（Ｔc−９９ｍ）との中性錯体を形成する放射性標識結合部分を介してＴc−９９ｍで標識した哺乳動物体における部位を造影するためにかかるペプチドを使用するための方法に関する。２．従来技術の説明核医学の分野では、少量の内部投与された放射性標識したトレーサー化合物（放射性トレーサーまたは放射性医薬と称される）の分布を検出することによって、ある種の病的状態が位置確認されるか、または、その程度が評価される。これらの放射性医薬の検出方法は、一般的に、造影または放射性造影方法として知られている。放射性造影において、放射性標識は、ガンマ線放射用放射性核種であり、放射性トレーサーは、ガンマ線検出用カメラを用いて位置確認される(このプロセスは、しばしば、ガンマシンチグラフィーと称される)。造影部位は、放射性トレーサーが病的部位に局在化するように選択される（陽性造影と称される）か、または、別法としては、該放射性トレーサーがかかる病的部位に特異的には局在化しないように選択される（陰性造影と称される）ので、検出可能である。ヒトにおける最適な放射性造影のために多くの因子を考慮しなければならない。検出効率を最大にするために、１００〜２００keＶ範囲でガンマエネルギーを放射する放射性核種が好ましい。患者への吸収放射量を最小にするために、放射性核種の物理的半減期は、造影方法が許す限り短くあるべきである。実験がいつでもおよび何時でも行われるように、臨床部位で常に利用可能な放射性核種の供給源を有するのが好都合である。 ⁶⁷Ｇa、^99mＴc(Ｔc−９９ｍ)、¹¹¹Ｉn、¹²³Ｉ、¹²⁵Ｉおよび¹⁶⁹Ｙbを含む種々の放射性核種は、放射性造影に有用であることが知られている。Ｔc−９９ｍは、それが１４０keＶでガンマ線を放射し、６時間の物理的半減期を有しており、モリブデン−９９／テクネチウム−９９ｍジェネレーターを用いてon-siteで容易に利用可能であるので、好ましい核種である。放射性標識ペプチドを用いるイメージング方法の感度は、放射性ペプチドの特異的結合が関心のある領域に放射性シグナルを集中するので、当該技術分野で知られている他の放射性医薬よりも非常に高い。関心のある標的に特異的に結合する小さな合成ペプチドは、放射性トレーサーのための基剤として好都合に用いられてもよい。これは、以下の理由のためである：１．それらは、化学的に合成される（細菌または哺乳動物細胞のような生物系におけるそれらの産生、またはタンパクのフラグメントのような生物学的に誘導された物質からの単離を必要とすることと反対である）；２．それらは、小さく、したがって、非標的結合放射性トレーサーは、体から迅速に排除され、これにより、バックグラウンド（非標的）放射性を減少させ、標的を良好に定義させる；３．小さなペプチドは、特定の結合部位に対するそれらの親和性を最適にするために化学的に容易に操作される。小さな容易に合成される標識ペプチド分子は、慣用の放射性医薬として好ましい。患者に直接注射することができ、病理的部位に局在させることによって該病理的部位を造影するであろう小さな合成標識ペプチドが明らかに必要である。放射性標識ペプチドは、従来技術において開示されている。Ｅgeら、Ｕ.Ｓ.特許第４,８３２,９４０号には、局在したＴリンパ球を造影するための放射性標識ペプチドが開示されている。Ｏlexaら、１９８２、欧州特許出願第８２３０１７００９号には、架橋結合したフィブリンから単離したフラグメントＥ₁、架橋結合したフィブリンから単離したフラグメントＥ₂、ならびにフラグメントＥ₁およびＥ₂の間のアミノ酸配列中間体を有するペプチドから選択される医薬的に許容される放射性標識ペプチドが開示されている。Ｒanbyら、１９８８、ＰＣＴ／ＵＳ８８／０２２７６には、放射性標識化合物をフィブリンに共有結合させることからなる動物におけるフィブリン付着を検出するための方法が開示されている。Ｈadleyら、１９８８、ＰＣＴ／ＵＳ８８／０３３１８には、（ａ）患者に標識弱毒化血栓崩壊性タンパクを投与する工程（ここで、標識は、フィブリン結合ドメイン以外の血栓崩壊性タンパクの一部に選択的に結合される）；（ｂ）患者において標識血栓崩壊性タンパクの分布のパターンを検出する工程からなるin v ivoでのフィブリン−血小板クロットの検出方法が開示されている。Ｌeeら、１９８９、ＰＣＴ／ＵＳ８９／０１８５４には、動脈造影のための放射性標識ペプチドが開示されている。Ｓobel、１９８９、ＰＣＴ／ＵＳ８９／０２６５６には、放射性標識した酵素的に不活性な組織プラスミノーゲン活性化因子を用いる動物における１個以上の血栓部位を位置確認するための方法が開示されている。Ｓtuttle、１９９０、ＰＣＴ／ＧＢ９０／００９３３には、in vivoでアルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）結合部位に結合する能力を有する、配列アルギニン−グリシン−アスパラギン酸（ＲＧＤ）からなる３〜１０個のアミノ酸を含有する放射性標識ペプチドが開示されている。Ｍaraganoreら、１９９１、ＰＣＴ／ＵＳ９０／０４６４２には、（ａ）阻害部分；（ｂ）リンカー部分；および（ｃ）陰イオン結合部位部分からなる放射性標識血栓阻害剤が開示されている。Ｒodwellら、１９９１、ＰＣＴ／ＵＳ９１／０３１１６には、「分子認識単位」の「エフェクタードメイン」とのコンジュゲートが開示されている。Ｔubisら、１９６８、Ｉnt.Ｊ.Ａppl.Ｒad.Ｉsot．１９：８３５−８４０には、ペプチドをテクネチウム−９９ｍで標識することが開示されている。Ｓundrehagen、１９８３、Ｉnt.Ｊ.Ａppl.Ｒad.Ｉsot．３４：１００３には、ポリペプチドをテクネチウム−９９ｍで標識することが開示されている。ポリペプチドを放射性標識するためのキレート剤の使用、ペプチドをＴc−９９ｍで標識するための方法は、従来技術で知られており、同時係属中のＵ.Ｓ.特許出願第０７／６５３,０１２号および第０７／８０７,０６２号に開示されている（出典明示により本明細書の一部とする）。放射性イメージングのために最適ではあるが、Ｔc−９９ｍの化学は、全体として、他の元素の化学ほど研究されておらず、このために、テクネチウムによる放射性標識方法は、豊富ではない。Ｔc−９９ｍは、通常、モリブデン−９９／テクネチウム−００ｍジェネレーターから、Ｔc−９９ｍペルテクニタート（Ｔc Ｏ₄ ^-；＋７価酸化状態のテクネチウム）として得られる。しかしながら、ペプチドを放射性標識するために、Ｔc−９９ｍペルテクニタートは、別の形態に転換しなければならない。テクネチウムは、水溶液中で安定なイオンを形成しないので、それは、不溶性二酸化テクネチウムに転換するかまたはペルテクニタートに戻される分解を防止するために充分な速度論的および熱力学的安定性を有する配位錯体の形態でかかる溶液中に保持されなければならない。Ｔc−９９ｍのかかる配位錯体（＋１〜＋６酸化状態）が知られている。しかしながら、これらの錯体の多くは、配位錯体の分子幾何学により放射性標識のために不適切である。放射性標識化のためには、テクネチウムイオンの周囲の供与基の全てが単一のキレートリガンドによって提供されるキレートとして形成されるべき配位錯体のために特に好都合である。これは、キレートＴc−９９ｍを、キレーターとペプチドの間に単一のリンカーを介してペプチドに共有結合させる。これらのリガンドは、しばしば、キレート部分およびリンキング部分を有する二官能性キレート剤と称される。かかる化合物は、従来技術で知られている。Ｂyrneら、Ｕ.Ｓ.特許第４,４３４,１５１号には、造影されるべき器官または組織において局在化する能力を有する末端アミノ含有化合物に放射性核種を結合させることができるホモシステインチオラクトン誘導二官能性キレート化剤が開示されている。Ｆritzberg、Ｕ.Ｓ.特許第４,４４４,６９０号には、２,３−ビス(メルカプトアセトアミド)プロパノアートに基づく一連のテクネチウム−キレート化剤が開示されている。Ｂyrneら、Ｕ.Ｓ.特許第４,５７１,４３０号には、造影されるべき器官または組織において局在化する能力を有する末端アミノ含有化合物に放射性核種を結合させることができる放射性核種をキレート化するための新規ホモシステインチオラクトン二官能性キレート化剤が開示されている。Ｂyrneら、Ｕ.Ｓ.特許第４,５７５,５５６号には、造影されるべき器官または組織において局在化する能力を有する末端アミノ含有化合物に放射性核種を結合させることができる放射性核種をキレート化するための新規ホモシステインチオラクトン二官能性キレート化剤が開示されている。Ｄavisonら、Ｕ.Ｓ.特許出願第４,６７３,５６２号には、主に腎機能モニターリング剤として用いられるビスアミド−ビスチオ−リガンドおよびその塩のテクネチウムキレート錯体が開示されている。Ｎicolottiら、Ｕ.Ｓ.特許第４,８６１,８６９号には、抗体などの生物分子とのコンジュゲートを形成するのに有用な二官能性カップリングが開示されている。Ｆritzbergら、Ｕ.Ｓ.特許第４,９６５,３９２号には、タンパクを標識するための種々のＳ−保護メルカプトアセチルグリシルグリシンをベースとするキレート剤が開示されている。Ｆritzbergら、欧州特許出願第８６１００３６０.６号には、テクネチウム標識イメージング剤の製造のために有用なジチオール、ジアミノまたはジアミドカルボン酸またはアミン錯体が開示されている。Ｄeanら、１９８９、ＰＣＴ／ＵＳ８９／０２６３４には、タンパクおよびペプチドを放射性標識するための二官能性カップリング剤が開示されている。Ｆlanaganら、欧州特許出願第９０３０６４２８.５号には、１組の有機キレート分子を介する合成ペプチドフラグメントのＴc−９９ｍ標識化が開示されている。Ａlbertら、欧州特許出願ＷＯ９１／０１１４４には、成長因子、ホルモン、インターフェロンおよびサイトカインに関しており、放射性核種キレートグループに共有的に結合する特異的認識ペプチドからなる放射性標識ペプチドを用いる放射性イメージングが開示されている。Ｄean、同時係属中のＵ.Ｓ.特許出願第０７／６５３,０１２号には、in vivo で放射性イメージングするための特異的結合ペプチドに共有的に結合したＴc− ９９ｍキレートグループからなるペプチドの製造のための試薬および方法が開示されている（出典明示により本明細書の一部とする）。ＢaidooおよびＬever、１９９０、Ｂioconjugate Ｃhem.１：１３２−１３７には、陽イオンテクネチウム錯体を与えるビスアミンビスチオール基を用いる生物分子を標識するための方法が開示されている。システインまたはメルカプト酢酸などのチオール含有部分を簡単に添加することによってペプチドを放射性標識することが可能である。かかる方法は、従来技術に開示されている。Ｓchochatら、Ｕ.Ｓ.特許第５,０６１,６４１号には、少なくとも１個の「ペンデント」スルフィドリル基からなるタンパクの直接放射性標識が開示されている。Ｄeanら、同時係属中のＵ.Ｓ.特許第０７／８０７,０６２号には、遊離チオールを含有する付着基によりペプチドを放射性標識することが開示されている（出典明示により本明細書の一部とする）。Ｇoedemansら、ＰＣＴ出願ＷＯ８９／０７４５６には、環状チオール化合物、特に、２−イミノチオランおよび誘導体を用いて放射性標識することが開示されている。Ｔhornbackら、ＥＰＣ出願第９０４０２２０６.８号には、チオール含有化合物、特に、２−イミノチオランを用いる放射性標識タンパクまたはペプチドの製造および使用が開示されている。Ｓtuttle、ＰＣＴ出願ＷＯ９０／１５８１８には、ＲＧＤ含有オリゴペプチドのＴc−９９ｍ標識化が開示されている。Ｂurnsら、１９８５、欧州特許出願第８５１０４９５９.３号には、小さな中性Ｔc−９９ｍ脳イメージング剤を製造するためのビスアミンビスチオール化合物が開示されている。Ｋungら、１９８６、欧州特許出願第８６１０５９２０.２号には、小さなＴc −９９ｍイメージング剤を製造するためのビスアミンビスチオール化合物が開示されている。Ｂergsteinら、１９８８、欧州特許出願第８８１０２２５２.９号には、小さなＴc−９９ｍイメージング剤を製造するためのビスアミンビスチオール化合物が開示されている。Ｂrysonら、１９８８、Ｉnorg.Ｃhem．２７：２１５４−２１６１には、過剰のリガンドに対して不安定なテクネチウム−９９の中性錯体が開示されている。Ｍisraら、１９８９、Ｔet.Ｌet．３０：１８８５−１８８８には、放射性標識のためのビスアミンビスチオール化合物が開示されている。Ｂrysonら、１９９０、Ｉnorg.Ｃhem．２９：２９４８−２９５１には、中性Ｔc−９９錯体を形成する２つのアミド基、チオール基および置換ピリジンを含有するキレート剤が開示されている。Ｔaylorら、１９９０、Ｊ.Ｎucl.Ｍed．３１：８８５（Ａbst）には、脳イメージングのための中性Ｔc−９９ｍ錯体が開示されている。ペプチドを放射性標識するためのキレート化剤の使用、およびペプチドをＴc −９９ｍで標識化するための方法は、従来技術で知られており、同時係属中のＵ .Ｓ.特許出願第０７／６５３,０１２号、第０７／８０７,０６２号、第０７／８７１,２８２号、第０７／８８６,７５２号、第０７／８９３,９８１号、第０７／９５５,４６６号、第０８／０１９,８６４号、第０８／０７３,５７７号、第０８／２１０,８２２号、第０８／２３６,４０２号および第０８／２４１,６２５号に開示されており、血栓を造影するためのシンチグラム造影剤として有用な放射性標識したペプチドは、従来技術で知られており、同時係属中のＵ.Ｓ.特許出願第０７／８８６,７５２号、第０７／８９３,９８１号および第０８／０４４ ,８２５号ならびに国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ９２／００７５７、ＰＣＴ／ＵＳ９２／１０７１６、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０２３２０、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０３６８７、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０４７９４、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０５３７２、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０６０２９、ＰＣＴ／ＵＳ９３／０９３８７、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０１８９４、ＰＣＴ／ＵＳ９４／０３８７８およびＰＣＴ／ＵＳ９４／０５８９５に開示されている（出典明示により本明細書の一部とする）。発明の要約本発明は放射活性に標識したペプチドであるシンチグラフィーイメージング剤を提供する。本発明の放射性標識されたペプチドは、イン・ビボにて標的に特異的に結合するペプチドからなり、放射性同位元素に結合する放射性標識結合部に共有結合している。放射性標識結合部がペプチドからなるアミノ酸残基の側鎖に共有結合することが本発明の利点である。多くの理由からこの共有結合の態様が有利である。第１に、ペプチドのアミノ酸構成部の側鎖との共有結合により、特定の結合ペプチドの特定の結合特性を有する共有結合した放射性標識結合部の干渉が回避される。第２に、このアレンジメントは、遊離アミノまたはカルボキシ末端を有しないことにより、本明細書に開示されている環状ペプチドを、シンチグラフィーイメージング剤として有用である放射性標識結合部と一緒に用いることを可能となる。第３に、構成アミノ酸の側鎖に対する共有結合は、本発明のシンチグラフィーイメージング剤が最適な効能の増加および抗原性の減少等を達成するようにより柔軟に設計することができるようになる。アミノ酸側鎖への結合はまた、放射性標識部をアミノ酸コンジュゲートとして合成の間に、またはペプチドの合成が完了した後に、ペプチドに加えらることを可能とする。最後に、環状ペプチドはエキソプロテアーゼ消化に対して耐性であることが知られており、そのためイン・ビボにおけるかかるペプチドの改良された安定性が本発明のシンチグラフィーイメージング剤に組み込まれる。本発明の第１の態様にて、放射性標識されたペプチドは哺乳動物の体内の部位をイメージングする能力を提供する。該ペプチドはアミノ酸配列を有する特定の結合ペプチドおよび該ペプチドに共有結合する放射性標識結合部からなる。さらには、放射性標識結合部は該ペプチドからなるアミノ酸の側鎖に共有結合する。好ましい具体例において、放射性標識結合部は、アミンまたはチオールからなる側鎖を有するアミノ酸の側鎖に共有結合する。そのアミノ酸は、好ましくは、リシンまたはホモシステインである。別の好ましい具体例において、放射性標識はテクネチウム−９９ｍである。本発明の一の態様は、哺乳動物の体内の部位をイメージするためのシンチグラフィーイメージング剤を製造するための試薬であって、放射性標識結合部がペプチドのアミノ酸のアミノ酸側鎖を介してペプチドに共有結合する特定の結合ペプチドからなり、その放射性標識結合部が、式：Ｃ(ｐｇｐ)^s−(ａａ)−Ｃ(ｐｇｐ)^s Ｉ［ここに、Ｃ(ｐｇｐ)^sは保護システインであり、（ａａ）はチオール基を含有しないいずれの第一α−またはβ−アミノ酸をも意味する］で示される試薬を提供する。好ましい具体例において、アミノ酸はグリシンである。もう一つ別の態様において、本発明は哺乳動物の体内の部位をイメージするためのシンチグラフィーイメージング剤を調製するための試薬であって、放射性標識結合部がペプチドのアミノ酸のアミノ酸側鎖を介してペプチドに共有結合する特定の結合ペプチドからなり、放射性標識結合部が、式：Ａ−ＣＺ(Ｂ)−{(Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n−Ｘ II ［式中、ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；Ｒ¹ 、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは直鎖または分岐鎖あるいは環状低級アルキル；ｎは０、１または２であり、ここに（ペプチド）は２ないし約１０個のアミノ酸のペプチドであって、（１）Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＸはＳＨであって、ｎは１または２であり；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＢはＳＨであって、ｎは１または２であり；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＸはＳＨであって、ｎは０または１であり；（４）ＡがＨまたはＲ⁴であって、ＢがＳＨである場合、Ｘは−ＮＨＲ³または −Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり、ＸがＳＨである場合、ＢはＮＨＲ³または −Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣで、ＢはＳＨであり；（６）Ｚがメチル、Ｘがメチル、ＡがＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣであり、ＢがＳＨである場合、ｎは０であり；（７）ＢがＳＨで、ＸがＳＨである場合、ｎは０以外の数であり；ここにチオール基は還元された形態であり、（アミノ酸）はチオール基を有しないいずれの第一α−またはβ−アミノ酸であってもよい。この態様の本発明の特定の具体例において、放射性標識結合基は、すなわち、式： IIａ．-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-(Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ} IIｂ．-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-(Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)² IIｃ．-(第一α,ω-またはβ,ω-ジアミノ酸)-(アミノ酸)¹-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ (Ｒ¹Ｒ²)_n-Ｘ}または IIｄ．-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(第一α,β-またはβ, γ-ジアミノ酸) ［式中、（アミノ酸）¹および（アミノ酸）²は、各々、独立して、チオール基を含有しない、天然に存在する、修飾した、置換したまたは変換したα−またはβ −アミノ酸；ＡはＨ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；ＢはＨ、ＳＨまたは −ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；ＺはＨまたはＲ⁴；ＸはＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ(Ｒ³)−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは直鎖または分岐鎖あるいは環状低級アルキル；ｎは０１または２のいずれかの整数；（ペプチド）は２ないし約１０のアミノ酸のペプチドであって；（１）Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ( Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＸはＳＨであって、ｎは１または２であり；（２）Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)である場合、ＢはＳＨであって、ｎは１または２であり；（３）ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＮＨＯＣ、(アミノ酸またはペプチド)−ＯＯＣであり、ＸはＳＨであって、ｎは０または１であり；（４）ＡがＨまたはＲ⁴であって、ＢがＳＨである場合、Ｘは −ＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり、ＸがＳＨである場合、ＢはＮＨＲ³または−Ｎ(Ｒ³)−(アミノ酸またはペプチド)であり；（５）ＸがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣで、ＢはＳＨであり；（６）Ｚがメチル、Ｘがメチル、ＡがＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣであり、ＢがＳＨである場合、ｎは０であり；（７）ＢがＳＨで、ＸがＳＨである場合、ｎは０以外の数であり；ここにチオール基は還元された形態である。もう一つ別の具体例において、本発明は哺乳動物の体内の部位をイメージするための放射性標識されたペプチドであって、放射性標識結合部がペプチドのアミノ酸のアミノ酸側鎖を介してペプチドに共有結合する特定の結合ペプチドからなり、その放射性標識結合ペプチドが、式：｛本発明の目的のために、この構造を有する放射性標識結合部を、ピコリン酸（Ｐic）ベース部と称する｝または｛本発明の目的のために、この構造を有する放射性標識結合部をピコリルアミン（Ｐica）ベース部と称する｝［式中、ＸはＨまたは保護基；（アミノ酸）はいずれかのアミノ酸；放射性標識結合部はペプチドに共有結合し、放射性標識結合部と放射性標識の複合体は電気的に中性である］で示されるペプチドを提供する。好ましい具体例において、アミノ酸はグリシンであり、Ｘはアセトアミドメチル保護基である。さらに好ましい具体例において、ペプチドはアミノ酸、最も好ましくはグリシンを介して放射性標識結合部に共有結合し、放射性標識はテクネチウム−９９ｍである。本発明のさらに別の具体例において、哺乳動物の体内の部位をイメージするための放射性標識されたペプチドであって、特定の結合ペプチドと、ペプチドのアミノ酸側鎖を介してペプチドに共有結合するビスアミノビスチオール放射性標識結合部とからなるペプチドが得られる。本発明のこの具体例のビスアミノビスチオール放射性標識結合部は、式：［式中、Ｒは、各々、独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅であり；（ｐｇｐ）^sは、各々、独立してチオール保護基またはＨであり；ｍ、ｎおよびｐは、独立して２または３であり；Ａは線状または環状低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリル、組み合わせまたはその置換誘導体；およびＸはペプチドを意味する］、および［式中、Ｒは、各々、独立してＨ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；ｍ、ｎおよびｐは、独立して２または３；Ａは線状または環状低級アルキル、アリール、ヘテロサイクリル、組み合わせまたはその置換誘導体；ＶはＨまたはＣＯ−ペプチド；Ｒ'はＨまたはペプチドを意味する；ただし、ＶがＨである場合、Ｒ'はペプチドであり、Ｒ'がＨである場合、Ｖはペプチドである。］で示される化合物からなる群より選択される。｛本発明の目的のため、これらの構造を有する放射性標識結合部を「ＢＡＴ」部と称する。好ましい具体例において、ペプチドはアミノ酸、最も好ましくはグリシンを介して放射性標識結合部に共有結合し、放射性標識はテクネチウム−９９ｍである。前記した本発明の態様の好ましい具体例において、特定の結合化合物は、３と１００の間のアミノ酸からなるペプチドである。放射性標識の最も好ましい具体例はテクネチウム−９９ｍである。本発明により得られる特定の結合ペプチドは、限定するものではないが、以下の配列を有するペプチドを包含する：本発明の試薬は、特定の結合化合物または放射性標識結合部を多価結合部に共有結合させることで形成される。本発明の多価結合部は、特定の結合化合物または放射性標識結合部に共有結合する能力を有する、少なくとも２個の同一のリンカー官能基を有する。好ましいリンカー官能基は、第一または第二アミン、ヒドロキシル基、カルボン酸基またはチオール反応基である。好ましい具体例において、多価結合部はビス−スクシンイミジルメチルエーテル（ＢＳＭＥ）、４−（２,２−ジメチルアセチル）安息香酸（ＤＭＡＢ）、トリス（スクシンイミジルエチル）アミン（ＴＳＥＡ）、Ｎ｛２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−スクシンイミドエチル）アミノエチル）」−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド（ＢＡＴ−ＢＳ）、ビス−（アセトアミドエチル）エーテル、トリス（アセトアミドエチル）アミン、ビス−（アセトアミドエチル）エーテル、ビス−（アセトアミドメチル）エーテル、α,ε−ビスアセチルリシン、リシンおよび１,８−ビス−アセトアミド−３,６−ジオキサオクタンからなる。本発明はまた、本発明のペプチドとＴｃ−９９ｍの複合体および本発明のペプチドをＴｃ−９９ｍで放射性標識する方法を提供する。本発明で得られる放射性標識された複合体は、本発明のペプチドを還元剤の存在下でＴｃ−９９ｍと反応させることにより形成される。好ましい還元剤は、限定するものではないが、亜ジチオン酸イオン、第一錫イオンおよび第一鉄イオンを包含する。本発明の複合体はまた、ここで得られた予備還元されたＴｃ−９９ｍ複合体をリガンド交換に付すことにより、本発明のペプチドをＴｃ−９９ｍで標識することで形成される。本発明はさらにＴｃ−９９ｍで放射性標識された本発明のペプチドを調製するためのキットを提供する。本発明のペプチドをＴｃ−９９ｍで標識するキットは、本発明の所定量のペプチドと該ペプチドをＴｃ−９９ｍで標識するのに十分な量の還元剤とからなる。本発明は、イン・ビトロ(in vitro)化学合成による本発明のペプチドの製法を提供する。好ましい具体例において、ペプチドは固相ペプチド合成によって合成する。本発明は、イン・ビボ(in vivo)ガンマ・シンチグラフィー・イメージをを得ることによって哺乳動物体内部位をイメージングするためのＴｃ-９９ｍ標識ペプチドの使用方法を提供する。これらの方法は、有効診診断量の本発明のＴｃ- ９９ｍ放射性同位体標識ペプチドを投与し、哺乳動物体内の部位に局在したＴｃ -９９ｍによって放射されるγ線を検出することを特徴とする。本発明の特に好ましい具体例は、以下のある種の好ましい具体例および請求の範囲のより処す会いな記載から明らかとなるであろう。図面の簡単な説明図１は、腫瘍を患ったラットにおける^99mＴｃ-Ｐ５８７のイメージを示している。発明の詳細な説明本発明は、アミノ酸側鎖を介して放射性同位体標識-結合基に共有結合したアミノ酸配列よりなり、ここに放射性同位体標識-結合基が放射性同位体に結合する、哺乳動物体内の標的部位をイメージングするためのＴｃ-９９ｍ標識ペプチドを提供する。Ｔｃ-９９ｍでの標識は本発明の利点である。なぜならば、この放射性同位体の核および放射能特性が、それを理想的なシンチグラフィー・イメージング剤とするからである。この放射性同位体は１４０ｋｅＶの単一光子エネルギーを有し、６時間の放射能半減期を有し、⁹⁹Ｍｏ-^99mＴｃジェネレーターから容易に入手可能である。先行技術で公知である他の放射性核種は、より長い(例えば、^IIIＩｎは６７.４時間の半減期を有する)か毒性(例えば、¹²⁵Ｉ)である。本発明により提供されるチオール保護基[(ｐｇｐ)^s]に共有結合するチオールを含むかかる基への放射性同位体標識結合基およびペプチドの結合においては、該チオール-保護基は同一または異なっていてもよく、限定するものではないが: −ＣＨ₂アリール（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ（アリール）₂（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ（アリール）₃（アリールはフェニルまたはアルキルもしくはアルキルオキシ置換フェニル）； −ＣＨ₂−（４−メトキシフェニル）； −ＣＨ−（４−ピリジル）（フェニル）； −Ｃ（ＣＨ₃）； −９−フェニルフルオレニル −ＣＨ₂ＮＨＣＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂ＮＨＣＯＯＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＯＮＨＲ（Ｒは非置換または置換アルキルまたはアリール）； −ＣＨ₂−Ｓ−ＣＨ₂−フェニル；である。好ましい保護基は式−ＣＨ₂−ＮＨＣＯＲ（式中、Ｒは１ないし８個の炭素原子を有する低級アルキル、フェニルもしくは低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシまたはアルコキシカルボニルで置換されたフェニルである）を有する。最も好ましい保護基はアセトアミドメチル基である。本発明の各特異的結合ペプチド含有具体例はアミノ酸の配列からなる。本明細書で用いるアミノ酸なる語は、すべてのＬ-およびＤ-アミノ酸、天然発生および他のアミノ酸を含むことを意図する。本発明のペプチドはイン・ビトロで化学合成し得る。本発明のペプチドは、一般的にアミノ酸シンセサイザー上で有利に調製する。本発明のペプチドは、当業者によく知られている技術を用いて、放射性同位体標識-結合基がイン・ビトロ化学合成の間にペプチドに共有結合するように合成し得る。合成の間に放射性同位体標識-結合基に共有結合するかかるペプチドは有利である。なぜならば、共有結合の特異的部位を決定し得るからである。放射性同位体標識-結合部位が、標的特異的結合ペプチドのアミノ酸側鎖を介して該ペプチドに共有結合することは、本発明の特に有利な点である。このことは、特定のアミノ酸側鎖との共有結合の形成によって放射性同位体標識結合基をペプチドにカップリングさせるか、またはペプチド合成の間に放射性同位体標識 -結合基にコンジュゲートしたアミノ酸の導入を介することによってなし得る。前者の場合においては、例えば、（とりわけ、システイン残基のチオール基のテインの側鎖イオウ原子に共有結合していることは理解されよう。別法として、ペプチド合成の間に、調製したリジン誘導体Ｎα(Ｆmoc)-Ｎε( Ｎ⁹-(ｔ-ブトキシカルボニル)-Ｎ⁶，Ｎ⁹-ビス(２-メチル-２-トリフェニルメチルチオプロピル)-６,９-ジアザノナノイル)リジンを用いることによって、放射性同位体標識-結合基ＢＡＴ(Ｎ⁶,Ｎ⁹-ビス(２-メルカプト-２-メチルプロピル)- ６,９-ジアザノナン酸)を白血球結合ペプチドであるホルミル.Ｍet-Ｌeu-Ｐhe- Ｌys.アミドに導入する。本発明の他の放射性同位体標識結合基は、ペプチド合成の間に標的特異的ペプチドに導入し得る。ピコリン酸-含有放射性同位体標識-結合基はリジンのε-アミノ基に共有結合させて、例えば、αＮ(Ｆmoc)-Lys-εＮ[Ｐic-Ｇly-Ｃys(保護基)]が得られ、これはペプチド鎖のいずれの位置にも導入し得る。この配列は特に有利である。なぜならば、それは、標的結合ペプチドへの導入の簡便な様式を提供するからである。本発明のペプチドで放射性テクネチウムの錯体を形成することにおいて、テクネチウム錯体、好ましくはＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸の塩を、還元剤存在下にて本発明のペプチドと反応させる。好ましい還元剤は、ジチオン酸、第一スズおよび第一鉄イオンが含まれ；最も好ましい還元剤は塩化第一スズである。さらなる好ましい具体例において、該還元剤は固相還元剤である。錯体およびかかる錯体を調製する手段は、標識すべき所定量の本発明のペプチドおよび該ペプチドをＴｃ-９９ｍで標識するに十分な量の還元剤を含有する密閉バイアルよりなるキット形態で簡便に提供される。別法として、該錯体は、本発明のペプチドとテクネチウムの予め形成したラービル錯体および移動リガンドとして公知である他の化合物とを反応させることによって形成し得る。該方法はリガンド交換として公知であり、当業者によく知られている。ラービル錯体は、例えば、酒石酸、クエン酸、グルコネートまたはマンニトールのごとき移動リガンドを用いて形成し得る。本発明に有用なＴｃ-９９ｍ過テクネチウム酸塩の中には、ナトリウム塩またはアンモニウム塩のごときアルカリ金属塩、あるいは低級アルキルアンモニウム塩が含まれる。本発明の好ましい具体例において、テクネチウム-標識ペプチド調製用のキットが提供される。本発明のペプチドは、当業者によく知られ以下に記載する方法および手段を用いて化学合成し得る。かくして、調製したペプチドは、３〜１００アミノ酸残基よりなり、放射性同位体標識-結合基に共有結合していて、ここに該放射性同位体標識結合基は放射性同位体に結合する。塩化第一スズまたは固相還元剤のごとき、ペプチドをＴｃ-９９ｍで標識するに十分な量の還元剤を含むバイアルに、適量のペプチドを導入する。(例えば、酒石酸、クエン酸、グルコネートまたはマンニトールのごとき)前記した適量の移動リガンドを含有させることもできる。本発明によるテクネチウム-標識ペプチドは、以下の実施例３に記載する条件下にて適量のＴｃ-９９ｍまたＴｃ-９９ｍ錯体をバイアルに添加することによって調製し得る。本発明によって提供される放射性標識ペプチドは、適量の放射能を有して提供される。Ｔｃ-９９ｍ放射性錯体の形成においては、約０.０１ミリキュリー(ｍＣｉ)〜１００ｍＣｉ/ｍＬの濃度の放射能を含有する溶液中で放射性錯体を形成するのが好ましい。本発明により提供されるテクネチウム-標識ペプチドは、哺乳動物体内の部位を視覚化するのに用いることができる。本発明によれば、テクネチウム-標識ペプチドを単一ユニット注射用量で投与する。滅菌生理食塩水または血漿のごとき当業者に公知であるいずれかの通常の担体を用いて、放射性同位体標識後、注射溶液を調製するために利用して、本発明による種々の組織、腫瘍などを診断的にイメージすることができる。一般的に、投与すべき単位用量は、約０.０１ｍＣｉ〜約１００ｍＣｉ、好ましくは１ｍＣｉ〜２０ｍＣｉの放射能を有する。単位用量で注射すべき溶液は約０.０１ｍＬ〜約１０ｍＬである。静脈内投与後に、組織および腫瘍のイメージングは、数分で起こし得る。しかしながら、所望により、放射性同位体標識ペプチドを患者に注射した後、数時間またはそれより長い時間後にイメージングを起こすこともできる。大部分の例において、十分量の投与用量は、イメージすべき空間に約０.１時間以内で蓄積してシンチフォトを採ることができる。診断目的のシンチグラフィー・イメージングのいずれの従来法も、本発明により利用し得る。本発明により提供されるテクネチウム-標識ペプチドおよび錯体は、生理食塩水媒質のごとき静脈内注射用のいずれの従来の媒質中または血漿媒質中で静脈内投与し得る。また、かかる媒質は、例えば、浸透圧調整用の医薬上許容される塩、緩衝剤、保存料などのごとき従来の医薬調整材を含有することもできる。好ましい媒質の中には、通常の生理食塩水および血漿が含まれる。これらの化合物を製造し標識する方法を以下の実施例でより十分に説明する。これらの実施例は、前記した方法および有利な結果のある種の態様を説明している。これらの実施例は例示的に示されるものであって、限定するものではない。実施例１固相ペプチド合成固相ペプチド合成(ＳＰＰＳ)は、０.２５ミリモル(mmol)スケールで、Ａpplie d Ｂiosystems Ｍodel 431Aペプチド合成器を用い、９−フルオレニルメチルオキシカルボニル(Ｆmoc)アミノ−末端保護を用いて、ジシクロヘキシルカルボジイミド／ヒドロキシベンゾトリアゾールまたは２−(１Ｈ−ベンゾトリアゾル− １−イル)−１,１,３,３−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロリン酸塩／ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＨＢＴＵ／ＨＯＢＴ)でカップリングして、カルボキシ−末端酸のためのｐ−ヒドロキシメチルフェノキシメチルポリスチレン(ＨＭＰ)樹脂またはカルボキシ−末端アミドのためのＲinkアミド樹脂を用いて、行われた。レジン−結合生成物を、１００：５：５：２.５：２の比で調製したトリフルオロ酢酸、水、チオアニソール、エタンジチオール、およびトリエチルシランからなる溶液を用い、１.５〜３時間、室温で通常の方法で切断した。適当な場合には、αＮ−ホルミル基は、９８％ギ酸中の過剰な無水酢酸で切断し、脱保護すること、ならびに、約１８時間撹拌した後ＨＰＬＣ精製することにより誘導した。適当な場合には、Ｎ−末端アセチル基は、２０％ｖ／ｖ無水酢酸でレジンに結合した遊離のＮ−末端アミノペプチドをＮＭＰ（Ｎ−メチルビロリジノン）中で３０分間処理することにより誘導した。適当な場合には、２−クロロアセチルおよび２−ブロモアセチル基を、ＳＰＰＳの間にカップルさせる最終残基としての適当な２−ハロ−酢酸を用いるか、または樹脂に結合させたＮ−末端遊離アミノペプチドをＮＭＰ中２−ハロ酢酸／ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドまたはＮＭＰ中２ −ハロ−無水酢酸／ジイソプロピルエチルアミンで処理することにより導入した。適当な場合には、ＨＰＬＣ−精製の２−ハロアセチル化ペプチドを、０.５〜１.０ｍＭのＥＤＴＡと共にまたは無しで、１ないし４８時間、重炭酸塩またはアンモニア干渉駅（ｐＨ８）中、０.１〜１.０ｍｇ／ｍｌ溶液を撹拌することにより環化し、つづいて酢酸で酸性にし、凍結乾燥し、ＨＰＬＣ精製に付した。適当な場合には、Cys-Cysジスルフィド結合環化は、前駆体のシステインを含まないチオールペプチドを０.１ｍｇ／ｍｌにてｐＨ７の緩衝液中、０.００６ＭＫ₃ Ｆe(ＣＮ)₆で、安定な黄色の色が持続するまで処理することにより行った。過剰な酸化剤が過剰なシステインによって還元され、混合物を凍結乾燥し、次いでＨＰＬＣによって精製した。適当な場合には、「Pica」基は、ピコリルアミンを、ジイソプロピルカルボジイミドおよびＮ−ヒドロキシスクシンイミドを用いて、前駆体ペプチドに共役させることにより誘導した。適当な場合には、ＢＡＴリガンドは、ＳＰＰＳの間に共役する最後の残基として適当なＢＡＴ酸を用いるか、あるいはＮＭＰ中で、レジンに結合したＮ−末端遊離アミノペプチドを、ＢＡＴ酸／ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドで処理することにより誘導した。適当な場合には、［ＢＡＭ］は、まず、ペプチドカルボン酸を、ジイソプロピルカルボジイミド／Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、またはＤＭＦ、ＮＭＰまたはＣＨ₂Ｃｌ₂中のＨＢＴＵ／ＨＯＢｔの混合物で活性化することによって共役させ、次いで、ジイソプロピルエチルイミンの存在下、共役させた。共役後、共役物は上記記載のごとく脱保護した。適当には、単一チオール-含有ペプチド(５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ８中の５〜５０ｍｇ/ｍＬ)と、アセトニトリルに予め溶解した０.５モル当量のＢＭＭＥ(ビス-マレイミドメチルエーテル)とを室温にて約１-１８時間反応することによってＢＳＭＥ付加物を調製した。該溶液を濃縮し、生成物はＨＰＬＣによって精製した。適当には、１モル当量のトリエタノールアミンが存在または不存在で、単一チオール-含有ペプチド(ＤＭＦ中の１０〜１００ｍｇ/ｍＬのペプチド、または５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液(ｐＨ８)/アセトニトリルまたはＴＨＦ中の５〜５０ｍｇ/ｍＬ濃度のペプチド)と、アセトニトリルまたはＤＭＦに予め溶解した０.３３モル当量のＴＭＥＡ(トリス(２-マレイミドエチル)アミン；出典明示して本明細書の一部とみなす米国特許第０８/０４４,８２５号に開示されている) とを室温にて約１-１８時間反応することによってＴＳＥＡ付加物を調製した。付加物を含有するかかる反応混合物を濃縮し、ついで、該付加物をＨＰＬＣを用いて精製した。適当な場合には、単一チオール含有ペプチド（５０ｍＭリン酸ナトリウム（ｐＨ８）中２ないし５０ｍｇ／ｍＬのペプチド濃度）を、適当には１〜１８時間室温でアセトニトリルまたはＴＨＦ中に前溶解された０.５モラー当量のＢＡＴ− ＢＭ（Ｎ−［２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル）］ −Ｎ⁹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド；ＵＳ第０８／０４４８２５号（参照により本明細書に記載とみなす）に開示）と反応させることによりＢＡＴ−ＢＳ付加物を調製した。次いで、溶液を蒸発乾固し、［ＢＡＴ−ＢＳ］ペプチド抱合体を１０ｍＬのＴＦＡおよび０.２ｍＬのトリエチルシランで１時間処理することにより脱保護した。溶液を濃縮し、生成した付加物をエーテルで沈殿させ、次いで、ＨＰＬＣにより精製した。 Waters Delta Pak C18カラムおよびアセトニトリルを変化させる水中０.１％トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）のグラジエント溶離を用いて、粗ペプチドを調製用高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精製した。溶離フラクションからアセトニトリルを蒸発させ、次いで、凍結乾燥した。高速原子衝撃質量スペクトル法（ＦＡＢＭＳ）により各生成物の同一性を確認した。実施例３Ｔｃ−９９ｍで放射性ラベルする一般的方法実施例２のように調製した０.１ｍｇのペプチドを、０.１ｍｌの水または５０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝５.６または７.４）に溶解した。Glucosca n vial(イー・アイ・デュポン・ド・ネモール，インコーポレイテッド(E．I．Du pont de Nemours，Inc.))を、Ｔｃ−９９ｍグルセプテートを、２００ｍＣｉを上限として含有する１.０ｍｌのＴｃ−９９過テクネチウム酸ナトリウムで再構成することによって調製し、１５分間室温で放置した。次いで、このペプチドに２５μｌのＴｃ−９９ｍグルセプターゼを添加し、室温または１００℃で１５〜３０分間、反応を進行させた後、０.２μｍフィルターで濾過した。Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドの純度は、以下の条件を用いたＨＰＬＣによって決定した：ウォーターズ・デルタピュア（Waters DeltaPure）ＲＰ−１８、５μ、１５０ｍｍ×３.９ｍｍ分析用カラムに各放射標識ペプチドを装填し、これらペプチドを１ｍＬ／分に相当する溶媒流量で溶出させた。勾配溶出は、１０％溶媒Ａ（０.１％ＣＦ₃ＣＯＯＨ／Ｈ₂Ｏ）から初めて、４０％溶媒Ｂ₉₀（０.１％ＣＦ₃ ＣＯＯＨ／９０％ＣＨ₃ＣＮ／Ｈ₂Ｏ）まで、２０分間にわたって実施した。放射活性な成分は、統合する記録計に接続したイン−ラインのラジオメトリック検出器によって検出した。Ｔｃ−９９ｍグルセプテートおよびＴｃ−９９ｍ過テクネチウム酸ナトリウムは、これらの条件下で１分から４分の間で溶出し、一方でＴｃ−９９ｍ標識ペプチドは非常に時間がたってから溶出された。以下の表は、本明細書中で記載された方法を用いた実施例２に従い調製されたペプチドの成功したＴｃ−９９ｍ標識を例示する。アミノ酸の１文字略記法は、G.Zubay,Biochemistry(2d.ed),1988(MacMillen P ublishing:New York)p33に見いだされる。Ａｃ＝アセチル；Ｐｉｃ＝ピコリノイル（ピリジン−２−カルボニル）＝６−アミノカプロン酸；Ｈｌｙ＝ホモリジン；Ａｃｍ＝アセトアミドメチル；ｐＧｌｕ＝ピログルタミン酸；Ｍｏｂ＝４−メトキシベンジル;Ｐｉｃａ＝ピコリルアミン(２−（アミノメチル）ピリジン);Ａｐｃ＝１−［Ｓ−（３−アミノプロピル）］システイン；Ｆ_D＝Ｄ−フェニルアラニン；Ｗ_D＝Ｄ−トリプトファン；Ｙ_D＝Ｄ−チロシン；Ｃｐａ＝Ｌ−（４−クロロフェニル）アラニン；Ｔｈｐ＝４−アミノ−テトラヒドロチオピラン−４− カルボン酸;ｍａ＝メルカプト酢酸;Ｄ−Ｎａｌ＝Ｄ−２−ナフチルアラニン；Ｄｐｇ＝ジプロピルグリシン；Ｎｌｅ＝ノルロイシン；ＢＡＴ＝Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６,９−ジアザノナン酸；ＢＡＴ酸（保護）＝Ｎ⁹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２− トリフェニルメチルチオプロピル）−６,９−ジアザノナン酸；ＢＡＭ＝Ｎ¹,Ｎ⁴ −ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオプロピル）−１,４,１０−トリアザデカン；［ＢＡＴ−ＢＭ］＝Ｎ−［２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−マレイミドエチル）アミノエチル］−Ｎ⁹−（ｔ−ブトキシカルボニル）−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−トリフェニルメチルチオフェニル）−６,９−ジアザノナンアミド；［ＢＡＴ−ＢＳ］＝Ｎ−［２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−サクシンイミドエチル）アミノエチル］−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メルカプト−２−メチルプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド；［ＢＭＭＥ］＝ビス−マレイミドメチルエーテル；［ＢＭＳＥ］＝ビス−サクシンイミドメチルエステル；［ＤＴＰＡ］＝ジエチレントリアミンペンタ酢酸；Ａｍｐ＝４−アミジノフェニルアラニン実施例３高コレステロールウサギモデルにおけるＴｃ−９９ｍ標識化合物Ｐ２１５を用いるアテローム動脈硬化プラークの局在化およびインビボイメージング２２匹の両方の性別の、体重２〜３ｋｇのニュージーランドホワイト（ＮＺＷ）ウサギを２群に分ける。対照群のウサギを飼育し、市販のウサギ用エサ（Puri na）を与える。ＨＣ群には、標準化されたコレステロール豊富食（１％ｗ／ｗ濃度のコレステロールと混合したウサギ用エサ）を、７週齢から２８週齢まで与える。すべての動物に水を自由に取らせる。Ｔｃ−９９ｍ標識Ｐ２１５（｛ＢＡＴ｝.ＲＡＬＶＤＴＬＫＦＶＴＱＡＥＧＡＫ.アミド）を実施例１記載のごとく調製する。約２５０〜４００μｇのペプチドを１４０〜１６０ｍＣｉのＴｃ−９９ｍで標識し、０.２ｍＬの投与体積中７〜８ｍＣｉ（１２.５〜２０.０μｇ／ウサギ；６〜７μｇ／ｋｇ）の１回分として調製する。成体ウサギにＴｃ−９９ｍ標識ペプチドを、横側の耳の静脈に濃縮塊注入することにより静脈注射する（約０.１ｍＬ／分）。Ｔｃ−９９ｍ用にセットされ正確に５０００００カウントまたは所望時間のスキャン用にプログラムしたピンホールコリメーター（５ｍｍ離して）およびエネルギー窓を装備したガンマカメラを用いてイメージを得る。イメージング直前に、動物をケタミンおよびキシラジン混合物（５：１、１ｍＬ／ｋｇ筋肉内注射）で麻酔する。心臓のちょうど上方４０〜４５°においてガンマカメラのイメージ（左前方斜位像）を収集する。注射後、１時間、および２時間、場合によっては３時間および５時間においてイメージを得る。各イメージ収集前に適宜補足麻酔を注射する。２.５時間（２時間におけるスキャン後）において、ペントバルビタールを静脈投与して動物を屠殺する。剖検により、動脈を取り、動脈弁から腹部中央部までの分枝血管を切除する。パラレルホールコリメーターを用いて、動脈もex cor poraでイメージングする。次いで、動脈をたてに切開し、SudanIVで染色し、そのことによりアテローム動脈硬化プラークは深紅レンガ色となる。これらの条件下では、脂質不含かつ損傷のない動脈内皮はその正常な光沢のある白みががったピンク色の外観を呈する。 in vivoならびにex corporaでのＴｃ−９９ｍＰ２１５のイメージおよびＨＣ処理ウサギの動脈におけるSudanIVの着色パターンの間の積極的な関連は、この本発明シンチグラフィーイメージング剤はアテローム動脈硬化をイメージングする能力があることを示す。実施例４Ｔｃ−９９ｍ標識化合物Ｐ３５７を用いる、イヌ・モデルにおける深部静脈血栓のインビボイメージング雑種犬（２５〜３５ポンド、一晩絶食）を、ケタミンおよびアセプロザミン混合物を筋肉内注射して鎮静化させ、次いで、ペントバルビタールナトリウムを静脈注射して麻酔する。各動物において、１８ゲージの血管カテーテルを右大腿部静脈の遠位の半分に挿入し、５ｍｍまたは８ｍｍのDacron^Rのからまったステンレス鋼閉塞コイル（Cook Co.,Bloomington IN）を、大腿部のほぼ中央部の大腿部静脈中に入れる。カテーテルを除去し、傷を縫合し、コイルの設置をＸ線で見た。次いで、動物を一晩回復させる。コイル設置１日後、各動物を再麻酔し、各前足にセイライン静脈滴注を行い、尿を集めるために膀胱カテーテルを挿入する。低エネルギー全目的コリメーターを装備したガンマカメラの下に動物をうつむけて置き、Ｔｃ−９９ｍに関してフォトピークする。NucLear Macコンピューターシステムによりイメージを得る。Ｔｃ−９９ｍ標識Ｐ３５７｛１８５〜３７０ｍＢｑ（５〜１０ｍＣｉ）Ｔｃ−９９ｍおよび０.２〜０.４ｍｇＰ３５７｝をそれぞれ、一方の前足の挿入位置において静脈ライン中に注入する。第２のラインを血液の収集のために維持する。ガンマカメライメージングを注入と同時に開始する。最初の１０分間において動的研究として心臓上の腹側のイメージを得て、次いで、注入後１、２、３および４時間目に静的イメージを得る。注入後約１０〜２０分、次いで、約１、２、３および４時間目に足の上の腹側のイメージを５０００００カウントまたは２０分間（いずれか短い方）得た。膀胱上に配置した鉛シールドを用いて足のイメージを収集する。最後のイメージを集めた後、ペントバルビタールで各動物を深く麻酔する。ヘパリン処理シリンジを用いて２つの血液試料を収集した後、心臓内または濃縮塊静脈注射により安楽死量の塩化カルシウム飽和溶液を投与する。次いで、血栓を含んでいる大腿部静脈、対側（対照）の足の静脈の同様の部分、血栓に近い部分の血管の部分、およびふとももの筋肉の試料を注意深く切除する。次いで、血栓、コイルおよびコイル状Dacronファイバーを血管から切除する。血栓、セイライン洗浄した血管試料、コイルおよびコイル状Dacron^Rファイバーを分離し、前以て秤量しておいた試験管に各試料を入れる。試料を秤量し、注入量のわかっているフラクションとともに、Ｔｃ−９９ｍチャンネル中のガンマウェルカウンターでカウントする。新鮮血栓を秤量し、安楽死直前に血栓および血液中の注入量パーセント値（％ＩＤ）／ｇ得て、血栓／血液および血栓／筋肉比を決定する。コンピューターに蓄えたイメージから、血栓および隣接する筋肉上に描かれた対象領域において測定されたカウント数／ピクセルの分析により、血栓／バックグラウンド比を決定する。これらの結果を用いて、深部静脈血栓を迅速かつ効果的にインビボで位置決めすることができることが示される。実施例５Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチドのシンチグラフィーイメージングおよび生体分配上記Ｔｃ−９９ｍ標識試薬の有効性を示すために、ヌイージーランドホワイト（New Zealand White）ウサギの左ふくらはぎに、イー・コリ（E.coli）の有効株を筋肉内注射した。２４時間後、ケタミンおよびキシラジンを筋肉内注射することにより動物を鎮静化させ、次いで、Ｔｃ−９９ｍ標識ペプチド（≦１５０μ ｇ、２〜１０ｍＣｉ）を静脈注射した。ガンマカメラ（ＬＥＡＰコリメーター／Ｔｃ−９９ｍに関してフォトピーク）の視野内に動物を仰向けに置き、注射後半時間かけてイメージを得て、次いで、注射後３時間まで約１時間間隔でイメージを得た。イメージを得るまでの間に動物を回復させ、そして再麻酔した。最終イメージを得た後、過剰のフェノバルビタール静脈注射により各動物を屠殺し、切開して血液および感染筋肉組織および対照筋肉組織の試料を得た。組織試料を秤量し、標準量の注射量とともにガンマカウンターを用いてカウントし、組織中に残存する注射量のパーセント値（組織１グラムあたり）を決定した。感染組織対非感染筋肉組織のグラム当たり、および感染筋肉組織対血液の注射量の割合を各ペプチドについて計算した。ホルミルＭＬＦＫ(ＢＡＴ).アミドなる式を有する本発明Ｔｃ−９９ｍ標識試薬に関するこれらの結果を下表に示す。実施例６ラットにおけるソマトスタチン受容体（ＳＳＴＲ）発現腫瘍の局在化およびインビボでのイメージングラット・所要細胞により発現されるソマトスタチン受容体のインビボでのイメージングを、実質的にはBakker et al.(1991,Life Sciences 49:1593〜1601)により記載されてようにして行った。凍結物を融解して得た腫瘍ブライであるＣＡ２０９４８ラット・膵臓腫瘍細胞を、０.０５〜０.１ｍＬ／動物の懸濁液として、６週齢のLewisラットの右後ろ足のふとももに筋肉内移植した。腫瘍を増殖させて約０.５ないし２ｇとし、収集し、腫瘍ブライを用いて２回目の無処理のLewisラットのセットに移植した。このやり方で継代を繰り返して、連続した世代の腫瘍保有動物を得た。インビボ研究に用いる腫瘍保有動物は、通常は、３代ないし５代継代したものであり、０ .２ないし２ｇの腫瘍を保有していた。腫瘍における放射性トレーサーの局在化の特異性の研究のために、放射性トレーサー注射３０分前に、選択された動物にＳＳＴＲ遮断量（４ｍｇ／ｋｇ）のオクトレオチドを皮下注射した（このプロトコールはBakker et al.により示され、¹¹¹Ｉｎ−[ＤＴＰＡ]オクトレオチドの腫瘍への取り込みを４０％低下させる）。３代ないし５第継代したＣＡ２０９４８腫瘍保有Lewisラットを拘束し、０.２〜０.４ｍＬ中３ないし８μｇのペプチドに相当する量の０.１５〜０.２０ｍＣｉの^99mＴｃ−標識ペプチドを、尾の背側の静脈から注射した。選択された時間において、頸部脱きゅうにより動物を屠殺し、選択された剖検を行った。集めた組織試料を秤量し、ガンマウェルカウンターで注射量の一部とともにカウントした。選択された放射性標識ペプチドの９０分における生体分配結果を表Ｉに示す。^99m Ｔｃ−Ｐ５８７、^99mＴｃ−Ｐ６１７、^99mＴｃ−Ｐ７２６、および^99mＴｃ− Ｐ７３６は、高い腫瘍取り込みおよび腫瘍／血液比を明確に示し、標的（腫瘍）組織へのそれらの高い特異的取り込みが示された。図１は、腫瘍保有ラットにおける^99mＴｃ−Ｐ５８７のイメージを示す。下肢（矢印）の腫瘍における高い取り込みがはっきりと見える。ラットの腫瘍への^99mＴｃ−Ｐ５８７取り込みを、インビボでソマトスタチン受容体に結合することが知られているソマトスタチンアナログであるオクトレオチドでの前注射の有無について比較した。これらの実験において、^99mＴｃ−Ｐ５８７投与前のオクトレオチド投与による受容体遮断により、放射性標識したペプチドの腫瘍への特異的な取り込みが７６％減少した。これらの結果により、インビボにおいて^99mＴｃ−Ｐ５８７はＳＳＴＲ特異的であることが確認された。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者マックブライド，ウィリアムアメリカ合衆国03102ニューハンプシャー州マンチェスター、ゴルフビュー・ドライブ110番 (72)発明者リスター−ジェイムズ，ジョンアメリカ合衆国03110ニューハンプシャー州ベッドフォード、オールド・ストーン・ウェイ25番 (72)発明者シビテロ，エドガー・アールアメリカ合衆国03054ニューハンプシャー州マリマック、キンバリー・ドライブ17 −32番

Claims

【特許請求の範囲】１．３〜１００個のアミノ酸からなるアミノ酸配列を有する特異的な結合ペプチドと、それに共有結合した放射標識結合部分とからなり、該放射標識結合部分が該特異的な結合ペプチドのアミノ酸残基の側鎖に共有結合している、哺乳動物の体内部位をイメージ化するシンチグラフィックイメージ化剤を製造するための試薬。２．前記特異的な結合ペプチドおよび放射標識結合部分および放射標識結合部分がリシン残基またはホモシステイン残基を介して共有結合している請求項１記載の試薬。３．放射標識錯体形成部分が放射標識に結合している請求項１記載の試薬からなるシンチグラフィックイメージ化剤。４．前記放射標識が、テクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１またはガリウム−６８である請求項３記載の試薬。５．前記放射標識結合部分がＩ．Ｃｐ（ａａ）Ｃｐ［式中、Ｃｐは保護化されたシステイン、（ａａ）は任意の第一α−またはβ− アミノ酸であるが、チオール基を含有しない］；および［式中、Ｘ＝Ｈまたは保護基；（アミノ酸）＝任意の第一α−またはβ−アミノ酸であるが、チオール基を含有しない］；［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、ＣＨ₃またはＣ₂Ｈ₅；各（ｐｇｐ）⁵は、独立して、チオール保護基またはＨ；ｍ、ｎおよびｐは、独立して２または３；Ａ＝線状または環式の低級アルキル、アリール、ヘテロ環式、それらの組合せまたは置換誘導体；Ｘ＝特異的な結合化合物である］；および［式中、各Ｒ⁵は、独立して、Ｈ、炭素数１〜６の低級アルキル、フェニル、または、低級アルキルもしくは低級アルコキシで置換されたフェニル；ｍ、ｎおよびｐは、独立して１または２；Ａ＝線状または環式の低級アルキル、アリール、ヘテロ環式、それらの組合せまたは置換誘導体；Ｖ＝Ｈまたは−ＣＯ−特異的な結合化合物；Ｒ⁶＝Ｈまたは特異的な結合化合物である；ただし、Ｖ＝Ｈのとき、Ｒ⁶＝特異的な結合化合物であり、Ｒ⁶＝Ｈのとき、Ｖ＝ −ＣＯ−特異的な結合化合物である］からなる群から選択される式で示される請求項１記載の試薬。６．式Ｉで示される前記放射標識錯体形成部分の保護化されたシステインが、式 −ＣＨ₂−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ［式中、Ｒは炭素数１〜６の低級アルキル、２−、３−、４−ピリジル、フェニル、または、低級アルキル、ヒドロキシ、低級アルコキシ、カルボキシ、もしくは低級アルコキシカルボニルで置換されたフェニルである］で示される保護基を有する請求項５記載の試薬。７．式Ｃｐ（ａａ）Ｃｐの前記放射標識錯体形成部分が、式：で示される請求項５記載の試薬。８．前記放射標識錯体形成部分が放射標識に結合している請求項５記載の試薬からなるシンチオグラフィックイメージ化剤。９．前記放射標識が、テクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１またはガリウム−６８である請求項８記載の試薬。１０．前記放射標識錯体形成部分が、式： II．Ａ−ＣＺ（Ｂ）−｛Ｃ（Ｒ¹Ｒ²）｝_n−Ｘ［式中、Ａは、Ｈ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；Ｂは、Ｈ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）、またはＲ⁴；Ｘは、Ｈ、ＳＨ、−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）、またはＲ⁴；Ｚは、ＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは低級の直鎖もしくは分枝鎖もしくは環式のアルキル；ｎは、０、１または２；（ペプチド）は、２〜約１０個のアミノ酸からなるペプチドであり；Ｂが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）である場合、ＸはＳＨおよびｎは１または２；Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）である場合、ＢはＳＨおよびｎは１または２；ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨ、およびｎは０または１；ＡがＨまたはＲ⁴の場合、ＢがＳＨのとき、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³） −（アミノ酸またはペプチド）、および、ＸがＳＨのとき、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）；ＸがＨまたはＲ⁴の場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣおよびＢはＳＨ；Ｚがメチルの場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨおよびｎは０；ＢがＳＨおよびＸがＳＨの場合、ｎは０でない；また、チオール部分は還元された形態であり、（アミノ酸）は任意の第一α− またはβ−アミノ酸であるが、チオール基を含有しない］で示される単一チオール含有部分からなる請求項１記載の試薬。１１．前記放射標識錯体形成部分が、式： IIａ．-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}、 IIｂ．-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(アミノ酸)²、 IIｃ．-{第一α,ω-またはβ,ω-ジアミノ酸)-(アミノ酸)¹-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ (Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}、または IIｄ．-{Ａ-ＣＺ(Ｂ)-{Ｃ(Ｒ¹Ｒ²)}_n-Ｘ}-(アミノ酸)¹-(第一α,β-またはβ, γ-ジアミノ酸) ［式中、（アミノ酸）¹および（アミノ酸）²は、各々独立して、任意の天然に存在する、修飾された、置換された、または、改変された、α−またはβ−アミノ酸であるが、チオ基を含有しない；Ａは、Ｈ、ＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣまたはＲ⁴；Ｂは、Ｈ、ＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；Ｘは、ＳＨまたは−ＮＨＲ³、−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）またはＲ⁴；Ｚは、ＨまたはＲ⁴；Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³およびＲ⁴は、独立して、Ｈまたは直鎖もしくは分枝鎖もしくは環式の低級アルキル；（ペプチド）は、２〜約１０個のアミノ酸からなるペプチド；ｎは、０、１または２のいずれかである整数であり；Ｂが-ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）である場合、ＸはＳＨおよびｎは１または２；Ｘが−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）である場合、ＢはＳＨおよびｎは１または２；ＢがＨまたはＲ⁴である場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＸはＳＨおよびｎは０または１；ＡがＨまたはＲ⁴の場合、ＢがＳＨのとき、Ｘは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³） −（アミノ酸またはペプチド）、および、ＸがＳＨのとき、Ｂは−ＮＨＲ³または−Ｎ（Ｒ³）−（アミノ酸またはペプチド）；ＸがＨまたはＲ⁴の場合、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣおよびＢはＳＨ；Ｚがメチルの場合、Ｘはメチル、ＡはＨＯＯＣ、Ｈ₂ＮＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＮＨＯＣ、（アミノ酸またはペプチド）−ＯＯＣ、ＢはＳＨおよびｎは０；ＢがＳＨおよびＸがＳＨの場合、ｎは０でない；また、チオール部分は還元された形態である］で示される放射標識部分からなる群から選択される請求項１０記載の試薬。１２．前記放射標識錯体形成部分が放射標識に結合している請求項１０記載の試薬からなるシンチグラフィックイメージ化剤。１３．前記標識が、テクネチウム−９９ｍ、インジウム−１１１またはガリウム−６８である請求項１２記載の試薬。１４．前記特異的な結合ペプチドが、アミノ酸配列：を有するペプチドからなる群から選択される請求項１記載の試薬。１５．前記試薬が、さらに、特異的な結合化合物の多重度に共有結合し、かつ、放射標識結合部分の多重度にも共有結合した多価連結部分を含有して、多量体多価シンチグラフィックイメージ化剤を製造するための試薬を構成し、該多量体多価シンチグラフィックイメージ化剤の分子量が約２０,０００ダルトン未満である請求項１記載の試薬。１６．前記多価連結部分が、ビス−スクシンイミジルメチルエステル、４−（２,２−ジメチルアセチル）安息香酸、Ｎ−｛２−（Ｎ',Ｎ'−ビス（２−スクシンイミド−エチル）アミノエチル）］−Ｎ⁶,Ｎ⁹−ビス（２−メチル−２−メルカプトプロピル）−６,９−ジアザノナンアミド、トリス（スクシンイミジルエチル）アミン、トリス（アセトアミドエチル）アミン、ビス−（アセトアミドエチル）エーテル、ビス−（アセトアミドメチル）エーテル、α,ε−ビスアセチルリシン、リシンおよび１,８−ビス−アセトアミド−３,６−ジオキサ−オクタン、またはそれらの誘導体である請求項１５記載の試薬。１７．請求項１記載の試薬を還元剤の存在下でテクネチウム−９９ｍと反応させることによって形成した錯体。１８．前記還元剤が、亜二チオン酸イオン、第１スズイオン、または第１鉄イオンである請求項１７記載の錯体。１９．請求項１記載の試薬を、予め製造されたテクネチウム−９９ｍ錯体のリガンド交換によって、テクネチウム−９９ｍで標識することによって形成した錯体。２０．放射性薬剤を製造するためのキットであって、所定量の請求項１記載の試薬と、該試薬をテクネチウム−９９ｍで標識するのに充分な量の還元剤とからなるキット。２１．哺乳動物の体内部位をイメージ化するための請求項１記載の試薬（ここで、該試薬はテクネチウム−９９ｍで標識されている）の使用。２２．請求項１記載の試薬を製造する方法であって、前記ペプチドがインビトロで化学的に合成される方法。２３．請求項２２記載のペプチドを製造する方法であって、前記ペプチドが固相ペプチド合成によって合成される方法。２４．前記特異的な結合ペプチドが環状ペプチドである請求項１記載の試薬。