JPH10501547A - メロイドギネ（Ｍｅｌｏｉｄｏｇｙｎｅ）属の線虫に対する新しい食線虫剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 国立培養微生物収集所（Collection Nationale des Cultures de Micro-organismes）、パスツール研究所（Institute Pasteure）に寄託番号Ｉ-1425ないしＩ-1430の下に寄託された、アルトロボトリス・コノイデス・ドレクスラー(Arthrobotrys conoides Crechsler)種の６種の菌株(42Ａ，42Ａ'，42Ｂ，42Ｂr，42Ｔ及び42ＶI)から選ばれたものであることを特徴とするメロイドギネ(Meloidogyne)、ヘテロデラ(Heterodera)及びディティレンカス・ミセリオファガス(Ditylenchus Myceliophagus)属の線虫に対抗させるための食線虫剤及びこの食線虫剤を土壌中に導入することから成り、食線虫剤の接種原を予め接種した穀粒により土壌中で培養させる食線虫剤の利用方法。

Description

【発明の詳細な説明】 メロイドギネ(Meloidogyne)属の線虫に対する新しい食線虫剤 技術分野 本発明は、キノコのアルトロボトリス・コノイデス・ドレクスラー(Arthrobot rys conoides Drechsler)の新しい菌株を利用することによってメロイドギネ属 の線虫に対抗することを目的とした新しい食線虫剤に関し、またこれら線虫の増 殖に対抗する方法に関する。 背景技術 草食線虫が栽培作物に年間30億フランにも及ぶ重大な損失を生じさせることは 古くからよく知られてきた。全世界で最も重大な損失を与える最も広がった線虫 の種は、メロイドギネ属に属する。「こぶ線虫」として農業経営者間でよりよく 知られているこの属は、事実感染植物の幼根組織上にこぶの形成の原因となる。 これら非常に多食性の線虫はいずれの植物もほとんど攻撃し、かくして約50〜70 ％の悲惨な収穫損失の原因となる。 特にヘテロデア・カロテー(Heterodea carotae)が多くの地域でニンジン栽培 作物に損害を与え、その刺毛がニンジンに異常な側面支根の生成をもたらす限り 、市場に供給できなくなる。 もう一つの線虫、ディティレンカス・ミセリオファガス(Ditylenchus mycelio phagus)はキノコ栽培床に発生するハラタケ類に重大な損害を与える。 これらの障害と闘うために、農業経営者は可能な幾つかの対抗手段をもってい るが、それらは集約農業においては以下のようになる。 燻蒸剤（臭化メチル、トリクロロニトロメタン、ジクロロプロペン、等）を用 いた栽培前の予防土壌消毒である。非常に広い有効性スペクトルを有するこれら の製品は土壌を痩せさせ、そして生態的均衡を破壊する。更にそれらは軽い土壌 においては地下水に入り、また重い土壌においてはそれらが低拡散のゆえに有効 性が低下する。 又は花卉栽培又は苗木床のような非食用産物用に用いられる樹液で運搬される 浸透性製品（カーバメート又はオリゴ‐リン成分）による作物上の現場治療処理 である。これらの製品は植物に取り込まれそして毒性残余物が残るので、動物及 人間両方に危険である。 両技術ともに土壌の上層30cmにのみ作用する。しかしもっとも深く棲息してい る線虫は次に来るべき栽培時に再び処理領域に感染する。これら終わりのない消 毒を伴う。 更にこれらは人間に毒性であるため、幾つかの殺線虫薬剤はオランダ、スイス 、ドイツのような多くの国 で禁止されている。 発明の概要 従って本発明の目的は、人間及び環境に無害な天然の抗線虫剤を用いることで ある。 従って、本発明はメロイドギネ、ヘテロデラ及びディティレンカス・ミセリオ ファガス属の線虫と対抗させることを目的とした新しい食線虫剤であって、アル トロボトリス・コノイデス・ドレクスラー種のキノコの６株の中から選ばれたも のに関する。 本発明のもう一つの観点は、キノコ接種原をあらかじめ接種した穀粒を用いる ことによって、アルトロボトリス・コノイデス・ドレクスラー種のキノコを栽培 土壌にブレンドすることから成るメロイドギネ・ヘテロデア及びディティレンカ ス・ミセリオファガス属の線虫に対抗する方法である。 図面の簡単な説明 本発明の幾つかの側面を説明する添付図面と関連させた以下の記述によっで本 発明の目的及び特徴を紹介する。 第１図は、本発明に従う株アルトロボトリス・コノイデスの分生子柄及び分生 子を図式的に表す。 第２図は、本発明に従う株アルトロボトリス・コノイデスによって線虫を捕ら えるように形成されたわなの図式的表示である。 第３図は、アルトロボトリス・コノイデスの異なった株を識別するために用い た電気泳動ゲルで得た結果の表である。 発明の詳細な説明 本発明に従うアルトロボトリス・コノイデス・ドレクスラーの６株は異なった 場所から入手した。異なった株が同一種に属するかどうかを照合する主な基準は 分生子（これらキノコの再生器官）の測定である。 第１図に示したように、分生子は分生子柄の上で20又は30の群に集まっている 。分生子柄は、第一分生子の頭部の後に更に成長しそしてある長さ成長後に分生 子の第二群を形成し、追加の５〜６群が成長するまで続く。 株42Ａは、ブルキナ・ファソ（Burkina Faso）のファーダ・ングルマ(Fada N' Gourma)から入手し、区分されたガラス様菌糸から成る菌糸体でつくられている 。 この分生子柄は最後には約20の堅い分生子の頭部に達し、古い培養株上で成長 し続けそして継続的に５〜10の追加群の分生子を産生する。 分生子は基底部に向かってかなり細くなりほとんど円錐形であり、また異なっ た大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは27μｍである。 この株はパスツール研究所のナショナル・コレクション・オブ・マイクロ・オ ーガニズム・カルチャーズ (National Collection of Micro-organism Cultures)（ＣＮＣＭ）にNo.Ｉ-1425 として寄託した。 株42Ａ'は、ブルキナ・ファソのレグエマ(Leguema)から入手した。 この分生子柄は最後には３〜20の堅い分生子の頭部に達し、古い培養株上で成 長し続けそして継続的に３〜５の追加群の分生子を産生する。 分生子は基底部に向かってかなり細くなりほとんど円錐形であり、また異なっ た大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは30μｍである。 この株はＣＮＣＭ（パスツール研究所）にNo.Ｉ-1426として寄託した。 株42Ｂは、オランダのバールン・マシュルーム・コレクション(Baarn Mushroo m Collection)から入手した。 若い培養株（１ヶ月より若い）では、分生子柄はまばらでまた最後には３〜20 の堅い分生子の頭部に達し、分生子の追加群の形成は稀である。 分生子は基底部に向かってかなり細くなりほとんど円錐形であり、また異なっ た大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは28μｍである。 この株はＣＮＣＭ（パスツール研究所）にNo.Ｉ-1427として寄託した。 株42Ｂrは、ブラジルから入手した。 この分生子柄は最後には10〜20の堅い分生子の頭部に達する。これらは成長し 続けそして継続的に５〜10の追加群の分生子を産生する。 分生子は基底部に向かってかなり細くなりほとんど円錐形であり、また異なっ た大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは23μｍである。 この株はＣＮＣＭ（パスツール研究所）にNo.Ｉ-1428として寄託した。 株42Ｔはトゥール・アンドル‐エ‐ロワール（Tours Indre-et-Loire）（フラ ンス）で採集した。 この分生子柄は最後には10〜20の堅い分生子の頭部に達する。古い培養株上で 成長し続けそして継続的に３〜５の追加群の分生子を産生する。 分生子は基底部に向かってかなり細くなりほとんど円錐形であり、また異なっ た大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは28μｍである。 この株はＣＮＣＭ（パスツール研究所）にNo.Ｉ-1429として寄託した。 株42Ｖ1 はビルヌーブ・ルーベ・アルプ‐マリティーム（Villeneuve Loubet Alpes-Maritimes）９（フランス）で採集した。 この分生子柄は最後には10〜20の堅い分生子の頭部に達する。古い培養株上で 成長し続けそして継続的に20〜30の追加群の分生子を産生する。 この分生子は基底部に向かってかり細くなりほとんど円錐形であり、また異な った大きさの二つの小室から成り、合計平均長さは23μｍである。 この株はＣＮＣＭ（パスツール研究所）にNo.Ｉ-1430として寄託した。 食線虫キノコの菌糸体は線虫をわなにかける捕捉器官をつくる能力を有する。 本発明に従った６種のアルトロボトリス・コノイデス株の菌糸体のわなは、第２ 図に示したように、多少錯綜した網目に吻合を通して自己を変態する菌糸ループ の形状を有する。 試験した６株のうち、株42Ａのみが自然にわなを形成する。他の５種について は、成長培地内の線虫の存在がわなの形成を誘導する。両方の場合ともに、この わなは多少錯綜した網目に吻合を通して変態した菌糸ループから成っている。 ６種の株は、ＲＡＰＤ技術を用いたゲノムの研究で明らかになったオリゴヌク レオチドによって明白に識別することができる。 電気泳動ゲルの使用によってバンドを図示し、またＤＮＡ断片の大きさを測る ために対照例を用いた第３図の結果を導いた。 以下に記述するような方法によって、アルトロボトリス・コノイデスの異なっ た株を線虫と対抗するために産業的に用いることができる。キノコを良好な条件 に維持するために、穀粒を基礎とした成長培地が用いられる。キノコが穀粒の内 部に隠れており、かくして外部の攻撃に対して低感受性となる。更に他面に広が った各々の穀粒新しい菌糸体コロニーの出発点である。 穀粒は水に24時間以上浸漬し、その後殺菌消毒する。次に穀粒にキノコ接種原 を接種する。 支持体として最良の種を用いて最も短い時間における最大の成長を可能にする 。第二の基準は、成長頂点で達するグラム当たりの増殖単位数である。この増殖 単位は、最小菌糸体断片又は単独分生子にも対応する。 用いられる支持体種は、イネ科草、マメ科又は油質植物のうちから選択する。 かくして最大成長に達する時間が14日であるハンプ（hamp）、ヒマワリ及び米が 用いられる。オートムギ、モロコシ、オオムギ、コムギ、ヒラマメ、トウモロコ シ、クサヨシの種子、ダイズ、豆、ルピナス、ヒヨコマメ、ソラマメが同様に用 いられる。 上記種のうち、ルピナス、ヒラマメ、トウモロコシ、豆、クサヨシの種子、ヒ ヨコマメ、米によって増殖単位の最大数約3.10⁷/ｇが達成される。 キノコをよく分布させるためには、等しい重量で小穀粒を広げることが推奨さ れる。この理由または他の理由で、クサヨシの種子、ヒラマメ及びトウモロコシ が好ましく用いられる。トウモロコシについては、土 壌１リットル当たり２ｇの比率で満足な混合を可能にする。成長頂点を達成する ことが要求されるときには、キノコとその支持体を植えつけ15日前に混合するこ とが推奨される。 異なった株のアルトロボトリス・コノイデスは同様に凍結乾燥物の形態でも用 いることができる。凍結乾燥はここでは、あらかじめ凍結によって固化した組織 の溶液又は懸濁液液中に含まれる氷の昇華による乾燥技術である。この技術はナ ショナル・マッシュルーム・コレクションズ（National Mashroom Corections） において微生物を保存するのに普通に用いられている。これは厳密な操作条件、 すなわち ・生成物の凍結を確実にする低温、 ・氷の昇華を確実にする低圧 ・氷昇華時の侵入液体の不存在 を含んでいる。 これらの条件を満たすためには、蒸気を吸引しながら温度を上げることによっ て、凍結乾燥する生成物の圧力及び温度の間の不均衡をつくりだすことである。 菌糸体は温度及び圧力変化に感受性が高く、菌糸体についてはキノコを凍結乾燥 してはならない。従って凍結乾燥を遂行できるようにするには、抵抗性組織とし て挙動する分生子を得るようにキノコを増殖させなければならない。分生子を使 用する必要性は、同時に液 体培地の使用を不要にする。このキノコは寒天大豆粉末系培地で生育する。 寒天の存在及び培地の重量によってもたらされる不便をなくすために、セロハ ンフィルムを寒天培地とキノコ接種原の間に挿入する。このフィルムはキノコを 培地から分離するが、このことはキノコがフィルム表面を通して自身を送り込む ことを特徴としている。菌糸体が一旦成長培地の全表面を侵略したら、フィルム を引き抜きそしてビタミン及び微量元素に富んだ液体に浸漬する。菌糸体及び分 生子をセロハンフィルムから離す。菌糸体、分生子、ビタミン及び微量元素を次 に一緒に凍結乾燥する。ビタミン及び微量元素の存在は土壌での活動開始を助け る。 この技術は、菌画分を成長に用いる栄養培地からあらかじめ分離している点で 斬新である。この凍結乾燥したキノコはかくして粉末状であり、水溶性でそして 従って農業経営者にとって使用し易い。キノコはこの形状で、化学薬品のように 機械散布によって用いられる。この方法では土壌に散布される生成物量がかなり 低減され、また生成物は良好にそして長く保存される。成長頂点に達する必要時 間が長いために、キノコのアルトロボトリス・コノイデスは好ましくは植えつけ 約15日前に処理土壌と混合される。 種々の株のアルトロボトリス・コノイデスがメロイ ドギネ、ヘテロデア及びディティレンカス・ミセリオフォガスと戦いこれに対抗 する有効性は、最初にペトリ皿の上で生体外で試験した。これら生体外試験のた めに、ペトリ皿上の寒天培地（トウモロコシ粉培地：１、寒天：１）で異なった 株のアルトロボトリス・コノイデスを生育した。キノコがすべての寒天に侵入し たら、寒天培地のみを含有する対照試験用皿を含めて、200匹の線虫をキノコの 各皿に無菌的に入れた。１、２、８及び24時間後に、真下にある他のもう一つの 皿に含まれる水の表面に底が位置する 100μｍメッシュ篩の上で皿を逆さにする 。この状況下でキノコに捕捉されていない線虫は、篩を通して水に到達する。次 に線虫を捕捉して顕微鏡で数える。 メロイドギネ及びディティレンカス・ミセリオフォガスの場合は、６つの株を 二つの群に分けたか、株Ａ、Ａ'及びＢは24時間に60〜100％を捕捉し、他の三つ の株は有効性が低い。 ヘテロデア・カロテーの場合は、６株が24時間に50〜75％線虫を捕捉する。 一方、キノコの成長が速いことを観察した（平均1.5cm／24時間）。かくして これは、農業及び花卉栽培、同様に苗床の植物用の食線虫剤として実用的にそし て満足な結果で用いることができる。 食線虫キノコの新しい菌株の生態系に関連した試験 の枠内で、この新しい株は塩分が３g/ｌを越えない土壌で良好に成長することを 観察した。 また、食線虫キノコによる培地の侵食は、キノコを高用量で混合したときにず っと激しいことを認めた。更にキノコは10容量％土壌の用量でも、かなり培地に コロニーをつくる。 異なった株のアルトロボトリス・コノイデス42の捕食活性は幾つかの実際的試 験によって確認できるが、それらの結果を次に示す。 Ｉ．メロイドギネに対する室温試験管試験 試験する株をそれらの捕捉能力によって二つの範疇に分けたが、平均でＡ、Ａ ’及びＢは24時間当たり80％線虫を捕捉し、Ｂr、Ｔ及びＶ1 は24時間当たりわ ずか30％メロイドギネを捕捉する。 この試験を実際に行うために、各範疇の最も代表的な株すなわちＡ及びＶ1 を 選んだ。試験は30ml土壌を含有する50ml試験管中で行った。殺菌消毒し、加熱し そして粉砕したトウモロコシ系培地上で生育したキノコ株を100g/ｍ²の比率で土 壌に混合した。 試験管は以下のように処理した。 Ｄ日目に、30匹のメロイドギネ幼虫を各試験管に入れた。24時間後に、一連の 試験管を取り出しそれらの線虫含量を分析し、どれだけの線虫が捕捉されたかを 測定した。この実験をすべての線虫が捕捉されるまで毎日繰り返した。 結果を次の表に示した。いずれのアルトロボトリス・コノイデス株についても 、キノコを植えつけ15日前に混合したときに（従って宿主植物による線虫の活性 化前に）捕捉速度が最初の日にかなり変化するが、しかしこの相違は急速に減少 した。 II．メロイドギネ・ハプラ(Meloidogyne Hapla)に対する温室ミニポット試験 この試験はメロイドギネ・ハプラに対するキノコのアルトロボトリス・コノイ デスの作用を明らかにし、またｍ²当たりの生成物の使用量を特定することを目 的とした。アルトロボトリス・コノイデスの６株をこの線虫で試験した。300ｇ 土壌を含有するミニポットで実験を行い、選択した植物は線虫に非常に感受性で あるサン・ピエール（Saint Pierre）トマトとした。各ポットに土壌 100ｇ当た り 100匹の線虫を感染させたが、これは平均農場感染の上限に相当する。結果の 読みは、根をエオシンで着色することによって示した。この生物組織の染料着色 は、幼根組織を通して浸透する幼虫感染から起こる第一世代の多量の卵を数える の に役立つ。 アルトロボトリス・コノイデスは、線虫が存在しないときには、有機化合物を 消化する（腐食性）ことによって土壌中で生き続けることができる捕食性キノコ である。このことが、無菌の有機富栄養化剤（微生物を含まない）を無菌生育土 壌に加える理由である。これは実験の最初の15日間キノコの良好な成長を助ける 。 処理用量の計算。基準は10⁸増殖単位／ｍ²土壌に等しい増殖単位の数である。 ６種のアルトロボトリス・コイノデス株について、この数値は平均して15ｇのオ ートクレーブで消毒し、粉砕したトウモロコシ系の調合物で達成される。試験に 余裕をもたせるために、６株で試験した平均通常用量を40g/ｍ²とし、そして第 二の用量をこれの２倍すなわち80g/ｍ²にした。各株及び各用量について５つの 重複分を調製し、キノコのない対照物も加えた。 結果。６株に共通な40g/ｍ²に相当する平均用量については、結果は以下の如 くである。 株Ａが最良の結果を与える。 80g/ｍ²の２倍用量では、結果は以下の如くであった。 40g/ｍ²の用量に関しては、株Ａが最良の結果を与えたが、しかし株Ｖ1 も同 様にこの用量で有効であった。迅速に信頼性ある結果を得るためには、加熱しそ して 粉砕したトウモロコシ系の培地上で生育するときに80g/ｍ²の用量で株Ａを用い ることがよい。 III．ヘテロデア・カロテーで攻撃されるニンジン栽培に関するポット試験 株Ａ、Ｂ、Ｔ及びＶ1 を用いてこの実験を行った。この試験を準備するために 、加熱しそして粉砕したトウモロコシ系の培地上で種々の株を生育した。常に同 数の増殖単位／リットル土壌（10⁸増殖単位／100Ｌ）が存在するように、収穫し たキノコ量を各株に厳格に適応させる。Ａ及びＢ株については、接種量を60g/10 0Ｌ土壌とした。株Ｔについては、接種量を190g/100ｇ土壌とした。株Ｖ1 につ いては、接種量は少なくとも80ｇ/100Ｌ土壌とした。ニンジン栽培は未処理のま までも保持し、対照物として加えた。 この試験中に、感染幼虫発生から放出されるヘテロデア・カロテーの包のうの 数を数えた。 株Ａ及びＶ1 が、メロイドギネ・ハプラによる場合と同様に、ヘテロデア・カ ロテーでも最良の結果を与えることが分かる。 IV．室温トマト栽培に関する試験 この試験はアルトロボトリス・コノイデス42Ａを用いて農場環境の温室で行っ た。地面に散布する捕食キノコの必要用量を特定することを目的とした。 この試験には、粉砕したトウモロコシ系の培地でキノコを生育した。培地の含 量は10⁷増殖単位／ｇである。 ここで処置した耕地区域は 120ｍ²の広さである。より良く隔離するために厚 板によって分離した各々40ｍ²の３区画に分けた。第一の区画は対照物であり、 次の区画は株42Ａの50g/ｍ²調合物で処理し、また最後の区画は100g/ｍ²調合物 で処理した。 試験を準備する前に、現行の培養株（サラダ）からとった土壌を分析した。 線虫の存在を証明するために、若い高感受性のトマト苗木（サン・ピエール変 種）を土壌に植えて試験を行った。植えつけ１ヶ月後、根をメチルブルー・ラク トフェノール（GUIRAN，1966）で着色した。着色はトマトの根を浸透した若いメ ロイドギネを示した。 平均感染に相当する10gの根当たり620匹のメロイド ギネの幼虫を認めた。 この平均感染率は食線虫キノコを試験するのに十分なものである。事実、すべ ての生物学的攻撃手段と同様にキノコは非常にゆっくりと作用し、ただ一回のみ の栽培活動で高過ぎる線虫の増殖を抑制することはできない。 トマトの植えつけ15日前にアルトロボトリス・コノイデス42Ａを散布した。こ の15日の期間は捕食キノコに土壌にコロニーをつくる機会を与え、植えつけ時に 使用できるようになる。実際にトマト苗木は、若い幼虫を根に導くことを助ける ある程度の根滲出液を地下に生成する。 トマト苗木は二つの中間配列で（周辺効果を回避するため）４列に分布させ、 10本のトマト苗木（サン・ピエール変種）を植えた。これを引き抜いて分析用と した。試料は栽培の終期に採取した。この感受性植物を引き抜きそしてその根を 分析した。 この目的のため、いったん幼根組織を洗浄してから、12°塩素滴定時に次亜塩 素酸カルシウムの１％溶液中で粉砕する。この混合物を一連の篩に通し、植物組 織の断片を除く。根から発生するメロイドギネの卵を５μｍメッシュ篩に集め、 顕微鏡で数える。これらは以後の培養株の襲撃能を構成する。 幾つかの項目は特筆すべきである。すなわち ‐メロイドギネの雌は気候条件によって300〜500個の卵を産むことができる。 ‐10ｇの根当たりの幼虫数が 100〜1000匹であるときは、感染は平均感染と考 えられる。 対照区域及び 100g/ｍ²のアルトロボトリス・コノイデス42Ａで処理した区域 で、襲撃能の低下（半分を越える）が顕著である。 ランプ（集塊）、ポット又はコンテナーで輸送される植物については、食線虫 キノコをランプ、ポット又はコンテナーに直接混合される。 捕食キノコは、市場植物用に用いられる圧縮ランプに初期に播種される。この ような方法では、ランプ中で新たにほぐされた植物が温暖湿潤環境下の温室で成 長する20〜30日内に、キノコは成長しそして全ランプに侵入し、次に栽培中に植 えつけられると接種原として挙動するようである。ランプ、ポット、コンテナー 又は類似のもので輸送される植物に適用できる本発明のこの別の形態は、以下の ような明確な利点を示す。 普通ランプを調製するには中性pHの腐植質に富んだ 土壌が用いられ、そしてこれはアルトロボトリス・コノイデス42Ａの成長に特に 好ましい。更に植物幼根組織は完全に菌糸体フェルトに包まれ、しかも菌糸体フ ェルトは幼根の成長を全く阻害しない。強く襲撃された土壌にランプを植えつけ たときでも、幼根組織はかくて線虫に対して保護される。このようにして植物が 線虫の攻撃に最も傷つきやすい期間を通して、若い植物が成長開始と同時に保護 される。 別の試験は、ランプが重要な接種原をつくり、それからキノコが周囲の土壌に 非常に容易に広がることを証明した。 かかるランプ、ポット、コンテナー又は類似のものを調製することは、また使 用においても植物の作成においても、何ら困難を伴わない。穀粒を例えばホッパ ーを用いて土壌混合物に単に入れるだけである。このような方法で作成された植 物の植えつけは通常通り行うことができる。 結論すると本発明方法は、幾つかはメロイドギネ線虫に感受性ではないが、市 場園芸、花卉培養種又は苗木床用植物に適用できる。これは同様にヘテロデア・ カロテーに感受性であるニンジン培養株を処理するために、又は栽培キノコのア ガリカス・ビスポラス(Agaricus Bisporus)の場合のディティレンカス・ミセリ オフォガスに対抗させるためにも用いることがで きる。後者の場合は、食線虫キノコを殺菌後の堆肥に添加する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項 【提出日】１９９６年４月２９日 【補正内容】 補正請求の範囲 １．メロイドギネ(Meloidogyne)、ヘテロデア(Heterogea)及びディティレンカ ス(Ditylenchus)属の線虫と対抗することを目的とした食線虫剤であって、各々 Ｉ-1245、Ｉ-1426、Ｉ-1427、Ｉ-1428、Ｉ-1429、Ｉ-1430の番号でナショナル・ コレクション・オブ・マイクロオーガニズム・カルチャーズ(National Collecti on of Micro-organism Culturse)（パスツール研究所）に寄託したアルトロボト リス・コノイデス・ドレクスラー(Arthrobotrys conoides Drechsler)の５株か ら選択したことを特徴とする食線虫剤。 ２．請求の範囲第１項記載の食線虫剤を栽培土壌に混合することから成る、培 養株中のメロイドギネ、ヘテロギア及びディティレンカス・ミセリオフォガス(D itylenchus myceliophagus)属の成虫と対抗する方法。 ３．該食線虫剤の接種原をあらかじめ接種した穀粒を用いて該食線虫剤を土壌 と混合した、請求の範囲第２項記載の方法。 ４．該穀粒をクサヨシの種子、ヒラマメ及びトウモロコシより成る群から選択 する、請求の範囲第３項記載の方法。 ５．粉砕トウモロコシ系培地に食線虫剤をあらかじ め接種し、少なくとも１ｇ当たり10⁷増殖単位を含有する、請求の範囲第４項記 載の方法。 ６．粉砕、加熱及び消毒したトウモロコシ系の培地に食線虫剤をあらかじめ接 種し、該接種培地を次に80g/ｍ²の比率で土壌に混合する、請求の範囲第４又は ５項記載の方法。 ７．粉砕、加熱及び消毒したトウモロコシ系の培地に食線虫剤をあらかじめ接 種し、該接種培地を次に２g/リットルの比率で土壌に混合する、請求の範囲第４ 又は５項記載の方法。 ８．食線虫剤をあらかじめ凍結乾燥し、次に粉末状で土壌に混合する請求の範 囲２項記載の方法。 ９．食線虫剤を培地に入れて成長させ、凍結乾燥前に分生子を発生させる、請 求の範囲第３項記載の方法。 10．成長させる食線虫剤と培地との間にセロファンフィルムを挿入し、該セロ ファンフィルムを液体に浸漬することによって分生子を含有する該食線虫剤の部 分を採集する、請求の範囲第９項記載の方法。 11．植物を苗木床又は市場園芸に輸送するために用いられる土壌ランプ、ポッ ト又はコンテナーに食線虫剤を直接混合する。請求の範囲第２項記載の方法。 12．該食線虫剤を植えつけ約15日前に土壌に混合する、請求の範囲第２〜11項 いずれかに記載の方法。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)， ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，Ｃ Ｈ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ， ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，Ｍ Ｗ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ ，ＳＥ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．メロイドギネ(Meloidogyne)属の線虫と対抗することを目的とした食線虫 剤であって、株42Ａ、42Ａ'、42Ｂ、42Ｂr、42Ｔ及び42Ｖ1から成る６株のアル トロボトリス・コノイデス・ドレクスラー（Arthrobotrys conoides Drechsler ）の群から選択されたことを特徴とする食線虫剤。 ２．６株の該群が各々Ｉ-1245、Ｉ-1426、Ｉ-1427、Ｉ-1428、Ｉ-1429、Ｉ-14 30 の番号でナショナル・コレクション・オブ・マイクロオーガニズム・カルチ ャーズ（National Collection of Micro-organism Culturse）（パスツール研究 所）に寄託した株を含むことを特徴とする請求の範囲第１項記載の食線虫剤。 ３．請求の範囲第１又は２項記載の食線虫剤を栽培土壌に混合することから成 る、培地のメロイドギネ、ヘテロギア(Heterodea)及びディティレンカス・ミセ リオフォガス(Ditylenchus myceliophagus)属の成虫と対抗する方法。 ４．該食線虫剤の接種原をあらかじめ接種した穀粒によって該食線虫剤を土壌 と混合した、請求の範囲第３項記載の方法。 ５．該穀粒をクサヨシの種子、ヒラマメ及びトウモロコシより成る群から選択 する、請求の範囲第４項記 載の方法。 ６．粉砕トウモロコシ系培地に食線虫剤をあらかじめ接種し、少なくとも１ｇ 当たり10⁷増殖単位を含有する、請求の範囲第５項記載の方法。 ７．粉砕、加熱及び消毒したトウモロコシ系の培地に食線虫剤をあらかじめ接 種し、該接種培地を次に100g/ｍ²の比率で土壌に混合する、請求の範囲第５又は ６項記載の方法。 ８．粉砕、加熱及び消毒したトウモロコシ系の培地に食線虫剤をあらかじめ接 種し、該接種培地を次に２g/リットルの比率で土壌に混合する、請求の範囲第５ 又は６項記載の方法。 ９．食線虫剤をあらかじめ凍結乾燥し、次に粉末状で土壌に混合する請求の範 囲第３項記載の方法。 10．食線虫剤を培地に入れて成長させ、凍結乾燥前に分生子を発生させる、請 求の範囲第４項記載の方法。 11．成長させる食線虫剤と培地との間にセロファンフィルムを挿入し、該セロ ファンフィルムを液体に浸漬することによって分生子を含有する該食線虫剤の部 分を採集する、請求の範囲第10項記載の方法。 12．植物を苗木床又は市場園芸に輸送するために用いられる土壌ランプ、ポッ ト又はコンテナーに食線虫剤を直接混合する。請求の範囲第３項記載の方法。 13．該食線虫剤を植えつけ約15日前に土壌に混合す る、請求の範囲第３〜12項いずれかに記載の方法。