JPH10502249A

JPH10502249A - 免疫調節剤

Info

Publication number: JPH10502249A
Application number: JP8503628A
Authority: JP
Inventors: グレンヘイ・ラーセン，クリスチャン; イエセール，ボルバラ
Original assignee: スティーノ・リサーチ・グループ・アクティーゼルスカブ
Priority date: 1994-07-05
Filing date: 1995-06-07
Publication date: 1998-03-03
Also published as: AU2612195A; FI970009A7; EP0769054B1; DE69518156T2; HUT76673A; CN1159830A; WO1996001318A1; PL319429A1; CA2194444C; DE69518156D1; NO970020D0; CN1216992C; GR3034628T3; MX9606537A; RU2218348C2; RO118758B1; AP690A; EE03451B1; ATE195003T1; CA2194444A1

Abstract

(57)【要約】この発明はヒトインターロイキン１０以外のポリペプチドであって、以下の性質のうちの少なくとも１を有するものに関する：ａ）ヒト単球によるＩＬ−８の自発産生阻害の誘導、ｂ）ヒト末梢血液単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−１β誘導性ＩＬ−８産生の阻害の誘導、ｃ）ヒト単球によるインターロイキン−１受容体アンタゴニスト様タンパク質（ＩＲＡＰ）産生の誘導、ｄ）インビトロにおけるＣＤ８＋ヒトＴリンパ球の化学走化性遊走の誘導、ｅ）ｒｈＩＬ−１０に対する非反応を誘導する、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の脱感作、ｆ）ＩＬ−８によるＣＤ４＋ヒトＴ白血球の化学走化反応の抑制、ｇ）ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対するヒト単球の化学走化反応の抑制、ｈ）ヒトＩＬ−１０と異なり、ヒト単球上へのクラスII ＭＨＣの発現を阻害しない、ｉ）正常ヒトＣＤ４＋Ｔ培養細胞のＩＬ−４産生の誘導、ｊ）ヒト混合リンパ球反応におけるＴＮＦαの産生の減少。特に、本発明はノナペプチドAla-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asnおよびその類縁体および変異体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】免疫調節剤発明の分野本発明は、インターロイキン１０（ＩＬ−１０）アゴニストである物質の薬剤としての使用に関する。特に本発明の物質の、免疫抑制性メデイエーター類、特にサイトカイン類の産生および／または機能の低下に関係した、および／または免疫炎症性メディエーター、特にサイトカイン類の産生および／または機能の昂進に関係した疾病の予防または治療のための医薬を製造するための使用に関する。詳細には、本発明は本発明の物質を自己免疫疾患（真性糖尿病、タイプＩ糖尿病；胃腸の炎症性疾患；慢性間接リューマチ）、尿酸性関節炎（痛風）、皮膚アレルギー、皮膚、肺および気管支内のアレルギー性反応（気管支ゼンソクを含む）；低血圧／虚血による組織ダメージ（梗塞；再循環）；アテローム性動脈硬化症；乾癬；肉芽腫症疾患；慢性骨髄性白血病；急性骨髄性白血病；癌；移植片対宿主反応および移植拒絶に関する症状；肺繊維症；肝臓繊維症；肺の慢性非感染性炎症；糸球体腎症；早期分娩；歯根膜炎；ウイルス感染に起因する免疫応答；骨粗鬆症、敗血症ショックなどの疾患の予防および／または治療のための医薬組成物の製造および／または避妊薬の製造に、本発明の物質を用いることに関する。発明の背景この２０年間の研究により、炎症反応の開始、調節および終了は哺乳動物内における増殖と分化の調節と同様に、一般にサイトカインと呼ばれる一群のシグナルポリペプチドによる厳しい制御下にあることが示されて来た。サイトカイン類はポリペプチドであってほとんどの有核細胞により産生され、細胞間の調節シグナルを伝達して、生体内の同じあるいは異なった種類の細胞間のコミュニケーションネットワークを形成している。サイトカイン類は非常に強いメディエーターであり、１０^-15Ｍの低濃度でも活性である。サイトカイン類はまた、細胞の免疫反応の発達の鍵となる因子であり、このため、感染、アレルギー、外傷、移植片対宿主反応および自己免疫疾患に起因する炎症の臨床的な発現の基礎ともなっている。アレルギーおよび自己免疫疾患は免疫系の異常、特にＴ白血球媒介細胞性免疫の異常によって特徴付けられるが、一般に、これらの疾患の病因は不明である。インビトロの研究、動物実験および臨床試験において、サイトカイン類が自己免疫疾患、アレルギー、虚血、再開通手術、外傷、感染、に関する炎症反応に重要な病原性役割を果たしていること、および癌、アテローム性動脈硬化症、妊娠および胎児の成長、骨のホメオスタシスの発達に重要であることがわかっている。サイトカイン類は他の免疫炎症性および増殖性疾患に関与する場合もあり、そのことについては、以下に説明する。このような疾患は通常慢性となり、治療は曠直的、すなわち該疾患に関して処方されるほとんどの薬物が症状を鎮めるためのであって、治療効果の無いものである。他の治療としてはいわば置換療法とでもいうものがあり、患者の内部生産が減少したか、あるいは不十分である物質、例えばホルモンを、一生涯患者に投与し続ける行為を含むものである。かかる治療は不十分なことが多く、望ましくなく、そしてしばしば重篤である副作用をもたらし、疾患の進行を停止させるというより遅らせるだけのものである。従って、より良い治療方法、より良い医薬組成物が高く望まれている。インターロイキン１０（ＩＬ−１０）は近年、天然の内因性免疫抑制性サイトカインとして報告されており、ネズミおよびヒトの両方にて同定されている。ネズミのインターロイキン１０（ｍＩＬ−１０）はもともとはＴＨ₂ヘルパーＴ細胞クローンから放出されるサイトカイン合成抑制因子として報告されたが、この因子はまた、白血球の様々なサブセットに対する増殖作用、例えばＣＤ４^-,８⁺ ネズミ脾臓Ｔ細胞のクローニング効率に対する増強効果（４）を含む、を有することが示された。ヒトインターロイキン１０（ｈＩＬ−１０）は近年配列が決定され、ｍＩＬ−１０とＤＮＡ配列レベルおよび同様にアミノ酸レベルにて高い相同性を保持していることが明らかにされた。さらに、豚のインターロイキン１０が最近配列決定されて、ヒトＩＬ−１０とＤＮＡレベルおよびアミノ酸レベルにて高い相同性を保持していることも明らかにされた（８８）、図２も参照のこと。さらに、ｈＩＬ−１０はエプステイン−バールウイルスゲノム、ＢＣＲＦ１内のオープンリーディングフレームと高いホモロジー有し、ウイルスＩＬ−１０はｈＩＬ−１０と同様のいくつかの活性を示す。図１（５）参照。ヒトＩＬ−１０は活性化Ｔ細胞クローンおよび不死化Ｂ細胞により産生され、いくつかのプロ免疫性サイトカイン類およびコロニー刺激因子の産生を抑制するサイトカイン合成抑制因子（ＣＳＩＦ）活性に加えて、天然のインターロイキン１受容体アンタゴニストタンパク質／ペプチド（ＩＲＡＰ）の単核球による産生を誘導し、これによって間接的にＩＬ−１の活性を抑制する作用も有する。ＩＬ −１０はまた自己の単球による産生をダウンレギュレートし、クラスII ＭＨＣの発現を抑制する作用も有する（１２）。さらに、ｈＩＬ−１０はヒトＴ細胞およびＣＤ４⁺Ｔ細胞クローンの抗原特異的増殖を、抗原提示細胞として単球が用いられた場合に減少させる。ネズミにおけるインビボ実験ではレーシュマニア(L eishmania)感染を克服するのは、応答したＣＤ４⁺Ｔ白血球からのサイトカインプロファイルに依存することが示されている（１３）。レイシュマニア感染抵抗性のＣ５７ＢＬ／６マウスでは、リンパ節から流出するＣＤ４⁺Ｔ細胞がＩＮＦ −γおよびＩＬ−２サイトカインのアップレギュレーションを行う一方、感受性のＢＡＬＢ／ｃマウスでは、リンパ節からの流出物ににＣＤ４⁺反応性Ｔ細胞を含み、これがＩＬ−４およびＩＬ−１０を放出し、このことが疾患の進行と関連付けられることが示されている（１３）。即ち、ＩＬ−１０は免疫反応への強い調節効果を、インビトロ、インビボの両方において示すのである。さらに、ヒトインターロイキン１０はＣＤ８+Ｔ細胞に対して特異的な化学走化因子であるため、ＩＬ−１０は化学運動性に対して非常に強い影響を及ぼす。その一方で、ＩＬ−１０はＴ細胞化学走化性サイトカインＩＬ−８に応答して遊走するＣＤ４+ の活性を阻害するがＣＤ８＋については抑制しない（１４）。ＩＬ−１０はまた、他のケモカイン類、ＭＣＰ−１／ＭＣＡＦおよびＲＡＮＴＥＳ（７５）の化学走化性活性も阻害する。ＩＬ−１０が単球／マクロファージ機能の不活性化剤であり、Ｔｈ１活性の阻害剤であることから、ＩＬ−１０の活性の全部あるいは一部を有する薬物はサイトカイン産生および／または活性の不均衡により特徴付けられる疾患に対する治療効果を有することが期待される。先にｈＩＬ−１０またはｖＩＬ−１０を含有する医薬組成物を調製すること、あるいはｈＩＬ−１０またはｖＩＬ−１０を敗血症性または毒素性ショック、リューマチ性関節炎、移植片対宿主疾患、組織拒絶、糖尿病、自己免疫不全、白血病および癌のごとき様々な疾患の治療のための医薬品の製造のための使用が提案されており、例えばＷＯ９３／０２６９３号およびＷＯ９４／０４１８０号に開示されている。さらに、ＩＬ−１０アンタゴニスト、例えばＩＬ−１０に特異的に結合する抗体が、例えばＥＰ４０５９８０およびＷＯ９４／０６４７３に開示されており、かかる抗体はＨＩＶ感染患者の治療に有用であり得ることが予測されている。発明の要旨本発明は、ヒトインターロイキン−１０以外の物質であって以下のうちの１またはそれ以上の性質：ａ）ヒト単球によるＩＬ−８の自発産生阻害の誘導、ｂ）ヒト末梢血液単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−１β誘導性ＩＬ−８産生の阻害の誘導、ｃ）ヒト単球によるインターロイキン−１受容体アンタゴニスト様タンパク質（ＩＲＡＰ）産生の誘導、ｄ）インビトロにおけるヒトＣＤ８+Ｔリンパ球の化学遊走の誘導、ｅ）ｒｈＩＬ−１０に対する非反応を誘導する、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の脱感作、ｆ）ＩＬ−８によるＣＤ４＋ヒトＴ白血球の化学走化反応の抑制、ｇ）ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対するヒト単球の化学走化性応の抑制、ｈ）ヒトＩＬ−１０と異なり、ヒト単球上へのクラスII ＭＨＣの発現を阻害しない、ｉ）正常ヒトＣＤ４＋Ｔ培養細胞のＩＬ−４産生の誘導、ｊ）ヒト混合リンパ球反応におけるＴＮＦαの産生の減少を有する物質に関する。例えば、Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asnのアミノ酸配列を含むポリペプチドまたはこの配列の類縁体もしくは変異体（ｈＩＬ− １０と配列の相同性を有するノナペプチド、ＩＴ９３０２）、およびその誘導体であって特定の炎症プロセスの予防および／または治療、特に免疫および／またはホルモン系に関与する形の予防および／または治療に有用な物質を提供する。以下の免疫機構の説明にて詳しく述べるように、活性機構は免疫系のメディエーター類の活性への干渉を介するものであり、このメディエーターとしては特にモノカイン、リンホカイン、ケモカインおよびモノカインレセプターアンタゴニストなどが例示されるサイトカイン類である。そして、本発明の物質は特定のサイトカイン類の産生および／活性に対して干渉／抑制することによって、組織のダメージをもたらす病原的プロセスを抑制する、本発明の物質は、天然のモノカインレセプターアンタゴニストの産生を誘導し、これによって特定のサイトカイン類の活性に対して干渉あるいはこれを抑制し、これによって組織のダメージにつながる病気のプロセスを抑制するものである。本発明における重要な態様はしたがって、活性成分として本発明の物質を含有する医薬組成物に関する。本発明の他の態様は、上記ａ）からｇ）の活性のうちの１またはそれ以上を中和できる物質であり、例えば抗体およびかかる物質を含有する医薬組成物が例示される。さらに本発明は、本発明の物質の、サイトカイン関連生理活性を実質的に阻害するための医薬組成物の製造への本発明の物質の使用に関する。すなわち、本発明の物質を、ＩＬ−１レセプターアンタゴニストタンパク質／ペプチド、リンホカイン、モノカイン、インターロイキン、インターフェロン、ケモカインまたはコロニー刺激因子として使用することに関する。他には本発明の物質の、サイトカイン系の障害、例えばＩＬ−１レセプターアンタゴニストタンパク質／ペプチド、リンホカイン、モノカイン、インターロイキン、インターフェロン、ケモカインまたはコロニー刺激因子系の障害に関連する症状の予防または治療のための医薬組成物の製造への使用に関する。他の点において、本発明はまた、サイトカイン系の障害に関連するヒトの症状の治療のための方法にも関する。この方法には、本発明の物質の有効量を患者に投与することを含む。細胞免疫系は感染、炎症および悪性腫瘍に関するような疾患の進行に役割を果たしている。免疫コンピテント細胞およびその産生物は炎症症状の発達の開始、悪化および慢性化に重要な役割を果たしている。これらの不全はしばしば原因が不明であり、真性糖尿病、関節リューマチ、胃腸および皮膚の炎症性疾患のごとき一般的な疾患を含む。これらの例以外に、細胞媒介性免疫もしくは前炎症性メディエーター類、もまた多くの他の炎症性および増殖性疾患に関与している（表２参照）。サイトカイン類：Ｔ−白血球は細胞媒介免疫反応をつかさどり、Ｔ細胞のサイトカイン産生物（リンホカイン類）は免疫反応を開始させ、調節する（１、２）。抗原提示細胞により産生されるリンパ球活性化メディエーター（リンホカイン類）は、サイトカインと呼ばれるポリペプチドのグループに属する。サイトカイン類は生理的条件下および病気の状態の両方に於いて細胞−細胞コミュニケーションの伝達物質であり、免疫系と他の組織および器官とのシグナルを提供するホルモンとしても働いている。サイトカイン類は免疫系外の細胞により産生される場合もあり、一般にはすべての有核細胞が１または複数のサイトカインを産生することができると考えられている。したがって、例えばケラチノサイトやフィブロブラストは強いサイトカイン産生細胞であり、この系においてサイトカインは免疫系から独立して、オートクリンまたはパラクリンホルモンとして機能する(３)。インターロイキン１０：ネズミのインターロイキン１０（ｍＩＬ−１０）はもともと、ＴＨ₂ヘルパーＴ細胞クローンから放出されるサイトカイン合成阻害因子（ＣＳＩＦ）として報告されたが、様々なリンパ球のサブセットに対する増殖作用も有することがわかった。この効果にはＣＤ４−８＋ネズミ脾臓Ｔ細胞のクローニング効率を増強させる効果も含む（４）。ヒトのインターロイキン１０（ｈＩＬ−１０）は最近報告され（５）、エプステインーバールウイルスゲノム、ＢＣＲＦ１のオープンリーディングフレームと高い相同性を有し、ウイルスのＩＬ−１０はｈＩＬ−１０と類似の活性を示す。以下に、ＩＬ−１０の生化学、生物学、生理学及び予測される病原性的役割をまとめる。ＩＬ−１０の構造：マウス（ｍＩＬ−１０）とヒト（ｈＩＬ−１０）のＩＬ−１０の一次構造においては、高率での配列の相同性（＞８０％）が全長にわたって認められる（４、５）。唯一の顕著な違いは、ｈＩＬ−１０ｃＤＮＡクローンの３'−未翻訳領域にヒトAlu繰り返し配列エレメントが挿入されていることである。ｍＩＬ−１０とｈＩＬ−１０のｃＤＮＡは非常に類似した１７８アミノ酸のオープンリーディングフレーム（ＯＲＦ）をコードしているが、このフレームは疎水性リーダー配列を含み、７３％のアミノ酸相同性を示す。ｍＩＬ−１０はネズミ細胞に対して活性を示すがヒトの細胞に対する有意な交差反応性は示さない。ｈＩＬ−１０は１８ｋＤａのポリペプチドであり、検出可能な炭化水素を欠いているが、ｍＩＬ −１０はＮ末端付近の部位がＮ−グリコシル化されている。このグリコシル化部位はｈＩＬ−１０には無い。ｍＩＬ−１０および組換えｈＩＬ−１０（ｒｈＩＬ −１０）は非共有結合性ホモダイマーとして発現される。ｍＩＬ−１０またはｈＩＬ−１０モノマーの生理活性の程度については、まだよくわかっていない。ポリペプチドの「タグ」について、少なくとも８アミノ酸のタグをＮ末端に、少なくとも２１アミノ酸のタグをＣ末端に有する場合に、ｍＩＬ−１０およびｈＩＬ −１０では検出可能な活性の減少は無いことが、ヒトＩＬ−１０の配列を最初に決定したモール（Moore）らの報告に示されている（６）。全長のＩＬ−１０のＣおよびＮ末端にタグをつけることが、必ずしも機能の変化をもたらすというわけではない、というのはタグ付加は臨時のものであるかまたは偶発的なものだからである。以下に説明する、より多くのアミノ酸を機能を欠失させないで置換することができることはまた一方でタグにより機能が変化しないことを支持する。組換えｍＩＬ−１０およびｈＩＬ−１０はＣＤＳ７細胞、マウス骨髄腫細胞、チャイニーズハムスター卵母細胞、バキュロウイルス発現系および大腸菌内に発現されている。これらｒＩＬ−１０タンパク質の生理活性はこれまで分離不可能であった（６）。ｍＩＬ−１０遺伝子は約５．１ｋｂのＤＮＡ上に配された５つのエクソンを有する。染色体クローン自身は発現可能なｍＩＬ−１０タンパク質をコード化する。ｍＩＬ−１０およびｈＩＬ−１０遺伝子はマウスおよびヒトクロモソーム１にある（６、７）。ｍＩＬ−１０およびｈＩＬ−１０は、エプステイン−バールウイルスのオープンリーディングフレームと強いＤＮＡおよびアミノ酸配列のホモロジーを示すが、このホモロジーは成熟タンパク質コード配列に限られており、シグナル配列または５’−または３’−未翻訳配列には認められない（５）。３つの配列のうち、ｍＩＬ−１０とｈＩＬ−１０はＤＮＡレベルでより近接した対の関係を示す（８１％）。一方、成熟ｈＩＬ−１０とＢＣＲＦ１タンパク質をコード化するＤＮＡ配列は７１％の相同性を示す。ＩＬ−１０とＢＣＲＦ１のアミノ酸レベルの相同性は８４％である。ｍＩＬ−１０およびｈＩＬ−１０遺伝子が共通の祖先から進化し、一方ＢＣＲＦ１が進化的加工を受け、細胞のサイトカイン遺伝子を捕らえ、ＢＣＲＦ１タンパク質がｈＩＬ−１０に類似するように構築されたものと予測される。ＢＣＲＦ１はＥＢＶの溶菌サイクルにおいて発現される。ＢＣＲＦ１のＯＲＦは１７ｋＤａ分泌型ポリペプチドをコードするが、このタンパク質はｈＩＬ−１０と同様、ほとんどあるいは全くグリコシル化されていない。ＢＣＲＦ１はいくつかのＩＬ−１０様活性を示し、ウイルス性ＩＬ−１０（ｖＩＬ−１０）と呼ばれている。しかし、その活性の程度はｈＩＬ−１０の１０％であることが認められている。サイトカイン産生に対するＩＬ−１０の活性：ｈＩＬ−１０は数多くのサイトカイン類、例えばインターフェロンγ（ＩＦＮ −γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）、ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２，ＩＬ−６、ＩＬ−８および単球化学走化ポリペプチド−１（ＭＣＰ− １／ＭＣＡＦ）の、単球／マクロファージおよび／またはＴリンパ球による産生を阻害する（４、５）。ＩＬ−１０はまた、単球のケモカインＭＣＰ−１／ＭＣＡＦ応答性遊走能を阻害する（７５）。さらに、ｈＩＬ−１０は内因性天然インターロイキン受容体アンタゴニスト（ＩＲＡＰ）の産生を誘導し（６）、これがＩＬ−１αおよびＩＬ−１βの活性を、受容体結合において競合することによって阻害する。ＩＬ−８はＩＬ−１αおよびＩＬ−１βによって強く誘導されるため、ＩＬ−１０はＩＬ−１受容体アンタゴニストＩＲＡＰの産生を刺激することによるＩＬ−８産生の阻害作用の一部を活性化する。この最後の機構は本発明においてかなり重要であると考えられるため、以下に解説および例を示す。ＩＲＡＰは抗炎症作用を示し（９）、その関節リューマチにおける治療効果が示唆されている（１０）。またＩＲＡＰは敗血症症候群の治療に有用であることが示されており、フィッシャー(Fisher)らの研究により用量依存的な２８日間生存効果がＩＲＡＰ投与群には認められている（ｐ＝０．０１５）（１１）。ＩＲＡＰはまた抗炎症効果の一部をケモカイン産生、例えばＩＬ−８の産生、を抑制することによって発揮し得る。ＩＬ−１０と抗原の発現：ＩＬ−１０はヒト単球上のクラスＩＩＭＨＣの発現を阻害する（８）。構造的、およびＩＬ−４もしくはＩＦＮ−γ誘導性のＨＬＡ−ＤＲ／ＤＰおよびＤＱの発現がｈＩＬ−１０により阻害される（１２）。さらに、単球をＩＬ−１０と共にプレインキュベートしたものは、その後のＩＬ−４またはＩＦＮγによるクラスIIＭＨＣ発現の誘導に抵抗性である。ＩＬ−１０はヒト単球のＬＰＳによる活性化後のクラスＩＩ発現を抑制する（１７、２６）。１から１０ｍｇのＩＬ− １０を致死濃度のＬＰＳと同時に投与した場合、ＢＡＬＢ／ｃマウスは死亡から保護される（６）。ＩＬ−１０は窒素中間体およびスーパーオキシドアニオンを阻害する。ＩＬ− １０はまた、ＩＦＮγによる活性化の後のマクロファージによる反応性窒素中間体（ＮＯ）と同様に反応性酸素中間体（Ｈ₂Ｏ₂）を阻害する。ＩＬ−１０とＴ細胞の活性：ＩＬ−１０はまたＴ細胞の機能／活性の調節効果を有する。即ち、ｈＩＬ−１０は強いＣＤ８＋Ｔリンパ球の化学走化因子であり、一方ｈＩＬ−１０はＣＤ４＋Ｔ細胞に対しては化学走化性を示さない（１４）。さらに、ＩＬ−１０はＣＤ４＋Ｔ細胞のβケモカインＲＡＮＴＥＳおよび同様にα−ケモカインＩＬ−８の化学走化信号に対する応答能を抑制する。ｈＩＬ−１０はまた、直接的にヒト末梢血Ｔ細胞およびＣＤ４＋細胞クローンの増殖を阻害する（１４）。ＩＬ−１０とＢリンパ球：ｈＩＬ−１０はＢ細胞表面Ｉｇの固定化抗ＩｇＭ抗体による架橋により誘導されるＢリンパ球の増殖を活性化し、この効果はＢ細胞が自身のＣＤ４０抗原と抗ＣＤ４０抗体が架橋することによって刺激された場合およびヒトＦｃγＲＩＩ／ＣＤ３２を発現するマウスＬ細胞によって活性化された場合に増強される。ＩＬ −１０の活性化ヒトＢ細胞の増殖および分化に及ぼす効果は、Ｔ細胞がｈＩＬ− １０を発現してＢ細胞応答性を補助することにおいて優れた効果を示すことを説明する。免疫系のホメオスタシーを保持する因子としてのＩＬ−１０：ＩＬ−１０の機能の生理学的な重要性については上記に述べたが、これは免疫系のホメオスタシーをもかなり担っていると考えられている。ＩＬ−１０は明らかにヘルパーＴ細胞の機能を阻害し、そしておそらくＴ細胞のサップレッサー機能を刺激する。したがって、ＩＬ−４と同様、ＩＬ−１０はＴ細胞のＴｈ１とＴｈ２サイトカインの性質の間のバランスを調節しているものと考えられる。特に、ＩＬ−１０はＴｈ１細胞の分化を阻害すると考えられている。Ｔｈ１細胞は細胞性免疫応答に関与するサイトカイン類（ＩＦＮ−γおよびＩＬ−２）の産生に特徴付けられ、Ｔｈ２細胞は、液性応答に関与して、細胞性免疫応答を抑制するサイトカイン類（ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０）の産生に特徴付けられるため、ＩＬ−１０はＴ細胞の媒介する免疫反応、例えば遅延型過敏反応など、を抑制する一方で、液性反応を促進している。上記のごときＩＬ−１０の性質故に、ＩＬ−１０の活性はマクロファージおよびＴｈ１サイトカイン合成の阻害剤として報告されてきた。したがって、ＩＬ− １０産生および／または活性の欠陥が、過剰な細胞性免疫反応がその疾患において重要な要素となっていると考えられている疾患、例えば自己免疫疾患や炎症、において、何らかの役割を果たしているかどうかについて研究されている。抗ＩＬ−１０抗体で処理されたマウスはより強い炎症反応をモノカイン誘導性の炎症に対して示し、モノカイン媒介炎症反応であるＬＰＳ−誘導性敗血症ショックにおいてより死亡率が高い（１６）。また、ＩＬ−１０ノックアウトマウスは自発的に腸の炎症反応および自発的に大腸の潰瘍を生じる（１７）。さらに、ＩＬ− １０が異なった寄生虫、微生物またはウイルス感染において何か役割を果たしているかどうかが調べられ、ＩＬ−１０はシストソーマ・マンソーニ(Schistosoma mansoni )による感染に関与する免疫不全において、病原性の役割を担っていることが明らかにされている（１８）。また、マイコバクテリウム・レプラ(Mycobac terium leprae )の感染における関与も示唆されている。最近、予後のよくないＡＩＤＳ患者において高いレベルの血漿ＩＬ−１０が認められており、ＩＬ−１０がＡＩＤＳにより発生する免疫不全に寄与していることが示唆されている（１９）。治療への適用：インビボの結果／データはＩＬ−１０が細胞媒介性、モノカイン増幅性免疫性炎症の調節においてホメオスタシーを保つのに重要な役割を示していることを示唆し、またＩＬ−１０もしくはＩＬ−１０様活性を有する薬品を減少した／不十分なＩＬ−１０の産生および／または活性に特徴付けられる疾患の治療において広い範囲の治療に適用することができることを示す。本発明の物質を代表するＩＴ９３０２は以下のごときＩＬ−１０様活性を示す：１）ヒト単球のＩＲＡＰ産生を誘導する、２）ヒト単球のＩＬ−８の自発産生を阻害する、３）末梢血単核球（ＰＢＭＣ）のＩＬ−１β刺激によるＩＬ−８の産生を阻害する、４）ヒトＴリンパ球ＣＤ８＋の化学遊走を刺激するが、ＣＤ４＋については刺激しない、５）ＣＤ８＋Ｔ細胞のｒｈＩＬ−１０による化学遊走に対して脱感作する、６）ＩＬ−８誘導性ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞化学走化を阻害する、７）ＭＣＰ−１／ＭＣＡＦ誘導性ヒト単球化学走化を阻害する、８）培養正常ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−４の産生を誘導する、９）ヒト混合リンパ球反応におけるＴＮＦα産生を減少させる。このポリペプチドおよび類縁体はｈＩＬ−１０と同じ治療可能性を有すると考えられる。表３にＩＬ−１０様免疫調節剤またはＩＬ−１０様活性の免疫調節剤が治療効果を示すと考えられる疾患を例示した：発明の詳細な説明ＩＬ−１０様活性を有するＩＬ−１０様ノナペプチドの開発：９アミノ酸長を有するｈＩＬ−１０の一部の配列を、ｖＩＬ−１０とｈＩＬ− １０の間で高いホモロジーを有するが、ｍＩＬ−１０とは可能な限り低いホモロジーであるとの原則に従い選んだ。この戦略はｖＩＬ−１０がｈＩＬ−１０と一部分交差反応をするがｍＩＬ−１０はｈＩＬ−１０と交差反応性が無いということに基づく（上記参照）。従って、ヒトの臓器内のある活性に寄与しているｈＩＬ−１０の配列上のドメインは、ｈＩＬ−１０とｖＩＬ−１０の間では高いホモロジーを示すが、ｍＩＬ−１０とは低いホモロジーである部分であると考えられる。ｈＩＬ−１０のシグナルポリペプチドは最初の１８のアミノ酸からなると考えられている。成熟タンパク質は１９位のアミノ酸（機能性タンパク質の１位、これはセリンである）からはじまり、全タンパク質は１６０のアミノ酸を含有する。ヒトおよびウイルスのＩＬ−１０のＣＯＯＨ末端配列のドメイン、特に１５７位と１５９位のリジンおよびアルギニン残基、がレセプター結合性の一部に寄与していることが見いだされた（図１および２）。化学合成により得た、いくつかの候補のＩＬ−１０様活性のスクリーニングの後、合成ノナペプチドＩＴ９３０２がｈＩＬ−１０に類似した免疫抑制活性を示すことがわかった。このことについては以下の実施例でさらに詳しく紹介する。ＩＴ９３０２はｈＩＬ−１０のＣ末端配列ノナペプチドに該当し、以下のアミノ酸配列を有する：ＩＴ９３０２はｈＩＬ−１０Ｃ末端のアミノ酸の１５２位から１６０位に対して１００％のホモロジーを有している。さらに、このポリペプチド配列中の６アミノ酸はウイルスｖＩＬ−１０の対応する位置において共通している。図１および２参照のこと。これは６／９、即ち６６％のアミノ酸が本明細書の定義により、ホモロガスであることを意味うる。また４アミノ酸がｍＩＬ−１０と共通しており、従って比は４／９または４４％となる。このノナペプチドはｈＩＬ−１０から得られたもしくは誘導された唯一の配列であり、実施例で示された特別な性質を有する今までで唯一の配列でもある。本発明の前に、この配列が機能性ドメインであると示唆した者はいない。最も広い概念としては本発明はｈＩＬ−１０アゴニスト活性を示す物質に関する。すなわち本発明は、ヒトインターロイキン１０以外の物質であって以下に示す１または複数の性質を有するものに関するａ）ヒト単球の自発ＩＬ−８産生阻害の誘導、ｂ）ＩＬ−１βにより誘導される、ヒト末梢血単球のＩＬ−８産生阻害の誘導、ｃ）ヒト単球によるインターロイキン受容体アンタゴニストタンパク質（ＩＲＡＰ）産生の誘導、ｄ）インビトロにおけるヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の化学走化性誘導、ｅ）ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を脱感作し、その結果ｒｈＩＬ−１０に対する応答がなくなる、ｆ）ヒトＣＤ４＋Ｔリンパ球のＩＬ−８に対する化学走化応答の抑制、ｇ）ヒト単球のＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対する化学走化応答の抑制、ｈ）ヒトＩＬ−１０と異なり、ヒト単球上へのクラスII ＭＨＣ分子発現を抑制しない、ｉ）培養正常ヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−４産生の誘導、ｊ）ヒト混合リンパ球反応におけるＴＮＦα産生の減少、これらの活性のうち、ｄ）からｇ）は最もユニークであると考えられる。本発明の一つの重要な態様は、上記のｈＩＬ−１０アゴニスト活性を示す物質であって、アミノ酸配列Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asn、またはその類縁体もしくはこの配列の変異体を有する物質である。この配列および本発明の明細書および請求の範囲に記載の他のすべてのポリペプチド配列は特に言及しない限りは通常通Ｎ末端からＣ末端へ向けて記載している。ノナペプチドＩＴ９３０２は様々な機能を非常に強く誘導し、非常に安定であり、またレセプターと間違って結合することができないと考えられる。ノナペプチドを選んだのは、あるタンパク質内でユニークなのは、一般に９アミノ酸のポリペプチド配列だからである。しかしながら、ｈＩＬ−１０の最末端の６アミノ酸が最も重要なペプチドであることには留意すべきである。本発明にはしたがって、Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile-Arg-Asn（配列番号１）のサブ配列を有する物質もしくはポリペプチドも含まれる。いくつかのアミノ酸置換はここに規定するｈＩＬ−１０アゴニスト活性を、スレオニン、リシンおよびアルギニンが存在し、１つのアミノ酸がこの間で置換されている場合には、失うことがないと考えられる。最も広い観点において本発明は、以下の式：を含有するポリペプチドを提供する。式中、Ｘ₄およびＸ₅は独立してMet、Ile、 Leu、およびValからなる群から選択される。そしてＸ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される。さらなる観点において、本発明は以下の式：を含有するポリペプチドを提供する。式中、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅は独立してMet、 Ile、LeuおよびValからなる群から選択される；Ｘ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される。さらに他の観点から、本発明は以下の式：を含有するポリペプチドを提供する。式中、Ｘ₂はTyrまたはPhe、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅は独立してMet、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される；Ｘ₆はAsp 、GlnおよびGluからなる群から選択される。本発明の好ましい態様は、以下の式：を含有するポリペプチドを提供する。式中、Ｘ₁はAlaまたはGlyである、Ｘ₂はTy rまたはPheである、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅は独立してMet、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される；Ｘ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される。上記のｈＩＬ−１０アゴニスト活性が予測される特定のポリペプチドの例を示す：比較のために、ＩＴ９３０１の名前で呼ばれる他のノナペプチドであってｈＩＬ−１０の配列と１００％のホモロジーを示すものを合成した。このポリペプチドＩＴ９３０１はｈＩＬ−１０のＮ末端から始まるノナペプチドに該当し（１９位から２７位のアミノ酸、成熟タンパク質の最初の９アミノ酸）、以下の配列を有する：このポリペプチドはＩＬ−１０様活性を示さないことが以下に示す手法を用いて判明しているが、ｈＩＬ−１０のもう一方の末端であるというだけで選んだもので、ほとんどネガティブコントロールとして用いる。本発明の化合物は、ｖＩＬ−１０とのホモロジーおよびレセプター結合に適したアミノ酸という、Ｃ末端配列のごとき性質を有していない。ＩＴ９３０１を、ＩＬ−１β誘導性末梢血単核細胞系ＩＬ−８産生について試験したが、この細胞からのＩＬ−８の産生の抑制作用は全く示さなかった。本明細書において、「本発明のｈＩＬ−１０アゴニスト物質」には全ての薬理活性を有し、薬学上許容される物質を含み、該物質はＩＴ９３０２と同一あるいは構造的に類似であり、ＩＴ９３０２に類似した相対的生理活性を示し、ＩＴ９３０２の誘導体、特に薬学上許容されるその塩、エステルおよびソルベート類、および同様にペプチドミメティクスを含むＩＴ９３０２またはＩＴ９３０２誘導体の配合体(conjugates)が例示される。ＩＴ９３０２のＮＨ₂末端が適当な担体、例えばポリエチレングリコールまたは糖と共有結合カップリングしている物質はインビボにおけるポリペプチドの半減期を延長するものと期待される。本明細書においては、以下の定義を用いる。「サイトカイン」は特定の刺激の応答として主に免疫系の細胞から（この細胞に限定されるわけではない）放出されるタンパク質性メディエーターを示す一般的な用語である。特定の刺激としては、特定の抗原またはアロ抗原；または非特異的、ポリクローナル活性化剤、例えばエンドトキシンまたは他のグラム陰性菌の細胞壁成分が例示される。「リンホカイン」は感作されたリンパ球から、刺激剤への応答として放出されるタンパク質性メディエーターとして一般的な用語であり、刺激剤としては例えば特異抗原またはアロ抗原が例示される。または、ポリクローナルな活性剤、例えばエンドトキシンまたは他のグラム陰性菌の細胞壁成分等にチャレンジされたリンパ球からも放出される。「インターロイキン」は、限定はされないが主にマクロファージ、Ｔ細胞、Ｂ細胞またはＮＫ細胞から、刺激剤に応答して産生されるタンパク質性メディエーターである。刺激剤としては、特異抗原またはアロ抗原が例示される；またはポリクローナルな活性剤、例えばエンドトキシンや他のグラム陰性細菌の細胞壁成分によりチャレンジされたリンパ球からも放出される。「モノカイン」は、限定はされないが主に単核貧食細胞（例えば単球、マクロファージまたはクッパー細胞（肝臓）またはランゲルハンス細胞（皮膚））から何らかの刺激に応じて産生されるタンパク質メディエーターを示す一般的な用語である。「ケモカイン」はタンパク質性化学走化性物質および／または白血球活性化メディエーターであって、限定はされないが主に免疫系の細胞から特異的刺激物質、例えば特異的抗原あるいはアロ抗原；または非特異的な、ポリクローナル活性化剤、例えばエンドトキシンや他のグラム陰性菌の細胞壁成分による刺激に応答して放出されるものであって、ケモカインαまたはケモカインβのいずれかの遺伝子ファミリーに属するものを示す一般的な用語である。「インターフェロン」はタンパク質性抗ウイルスおよび／または単球活性化メディエーターであって、限定はされないが主に免疫系の細胞から、ウイルスあるいはポリヌクレオチドのごときインターフェロンインデューザーの刺激に応答して放出されるものを示す一般的用語である。免疫系における特定の細胞が、特異的な刺激剤、例えば特異的抗原あるいはアロ抗原；または非特異的ポリクローナル活性化剤、例えばエンドトキシンまたは他のグラム陰性菌の細胞壁成分の刺激によって放出する。「コロニー刺激因子」は、タンパク質性造血性コロニー刺激メディエーターであって、限定されないが主に免疫系の細胞から特異的刺激剤、例えば特異的抗原またはアロ抗原；または非特異的ポリクローナルな刺激、たとえばエンドトキシンや、他のグラム陰性菌の細胞壁成分による刺激に応答して放出されるものである。本明細書において「ポリペプチド」という語は、少なくとも２個、多くとも１０個のアミノ酸残基からなる短いペプチドを意味する場合にも、オリゴペプチド（１１〜１００アミノ酸残基）を意味する場合にも、またはより長いペプチドを意味する場合にも（通常「ポリペプチド」と言う用語は、長さがアミノ酸残基１００以上を示すものと理解される）、タンパク質を示す場合にも用いられる（少なくとも１のペプチド、オリゴペプチド、ポリペプチドを含有する機能性物質は、グリコシル化、リピド化、あるいはプロステティック基により修飾されていてもよい）。ポリペプチドの定義にはまた、天然のヒトのペプチド／タンパク質および任意の種類の発現ベクターが任意の種類の宿主をトランスフォームして産生させた組み替えタンパク質又はペプチド及び化学合成したペプチドを含む。本発明のある態様は、ヒトＩＬ−１０の配列のサブ配列を有し、ｖＩＬ−１０とのホモロジーが６６％であり、ｍＩＬ−１０とのホモロジーが４４％であるポリペプチドであり、特に配列番号１で示されるものを提供する。「ホモロジー」という語は２またはそれ以上のアミノ酸断片におけるアミノ酸配列と、ポリペプチドのアミノ酸とを同一性および位置に関してマッチさせた場合の同一性を意味する。本明細書において「ホモロジー」と言う用語は、２つのアミノ酸（またはヌクレオチド）配列の間の同一性の尺度を意味するのに使用する。ホモロジーは、２つの配列（長さが異なっていても良い）を並べて比較した場合の、一致アミノ酸（塩基）のパーセンテージを意味する。「並べて比較」という用語は（７６）に定義されている意味で用いる。大まかに言えば、最小数の「ブランク」あるいは「ヌル」塩基の挿入によって両者の間の重複を最大となるようにした２つの配列を、一致塩基（アミノ酸）数が最大となるような並べ方で比較することである。「ホモロガス」という語はすなわちあるポリペプチドを構成するアミノ酸配列と、ＩＴ９３０２のアミノ酸配列とを比較した場合の同一性を表示するのに用いられる。ＩＴ９３０２のアミノ酸配列と比較するアミノ酸配列は、ＤＮＡまたはＲＮＡ配列のごとき核酸配列から演繹したもの、例えば以下に定義するハイブリダイゼーションによって得られる配列、または従来から知られているアミノ酸配列決定方法によって得られる配列であってもよい。ホモロジーの程度は好ましくは成熟ポリペプチドにおいて、すなわち全てのリーダー配列を考慮に入れないで決定する。一般に、ヌクレオチド配列のホモロジーを比較する際にはコード領域のみが比較に用いられる。ｈＩＬ−１０およびｖＩＬ−１０に対する有意なホモロジーが好ましいのであるが、ｈＩＬ−１０のサブ配列のサブ配列であってｖＩＬ−１０に対する低いホモロジー、例えば５０％、５５％または６０％がまた、ｈＩＬ−１０アゴニスト活性を示すこともある。さらに上記のごとく、ｈＩＬ−１０に対するホモロジーの程度が絶対に１００％であることは必要ない。本発明の範囲内には、ｈＩＬ− １０に対するホモロジーが１００％であるものが最も好ましいが、７５％、８０％、８５％、９０％または９５％であるものも含まれる。かかるポリペプチドはノナペプチドとアナロガスであると考え得る。「アナロガスまたはバリアント」の用語は、アミノ酸配列Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ile- Arg-Asn（配列番号１）の完全なものは有していないが、上に定義したｈＩＬ− １０アゴニスト活性を有しているものを意味する。一般に、かかるポリペプチドは後の実施例で述べるＩＴ９３０２と比較した場合に、例えば、アミノ酸組成においてある程度の変化があったり、または翻訳後修飾、例えばグリコシル化やリン酸化を受けたようなポリペプチドであってもよい。「類縁体(analogue)」または「変異体(variant)」という用語は、本明細書においては、ＩＴ９３０２のアミノ酸配列といくらか異なるが、しかしなお同様のアミノ酸配列を有するタンパク質またはポリペプチドを意味し、このなかにはアミノ酸配列の変化、例えば欠損、位置特異的変異、別のアミノ酸の挿入またはこれらの組み合わせによるもの、によって作成したＩＴ９３０２の類縁体ポリペプチドも含まれる。位置特異的変異誘発は天然のタンパク質の保存的アミノ酸置換を行う一つの便利な手法である。これに代えて類縁体を得るために液相または固相合成によって、ポリペプチド配列の内の個々のアミノ酸を連続的にカップリングさせていっても、またはポリペプチドを、個々のアミノ酸をカップリングさせてフラグメントを合成し、各フラグメントを所望のポリペプチドを得るようにさらにカップリングしてもよい。「保存的」という用語は本明細書では（ｉ）変化が構造的に可能な限りニュートラルであるように、すなわち、変異タンパク質の三次構造が、天然タンパク質と比べたときに最小の変化しか示していないようなものであること（ｉｉ）変化が抗原的にも可能な限りニュートラルであること、即ち、天然のタンパク質と比べて変異タンパク質の抗原決定基の変化が最小であることをいう。構造的にニュートラルであることは、生理活性の保存に望ましく、抗原的にニュートラルであるということは、本発明の物質を用いて治療される患者又は動物において、免疫原性応答のトリガーになることを避けるために望ましい。どの変異体が構造的および抗原的にニュートラルであるかという点を絶対的な正確さで選択するのは難しいが、当業者が構造的および抗原性にニュートラルであることを保持したままで変異させるためのガイドとなるルールがあり、例えば（７７）および（７８）に詳しい。重要なルールとしては（１）疎水性残基の置換は抗原性に変化を及ぼしにくい、というのは、これらはタンパク質の内部に存在することが多いからである（例えば、ベルゾフスキー(Berzofsky)(上記引用文献)およびボワイエら(上記引用文献)；（２）物理化学的に同一、すなわちシノニムな（synonymous）、残基による置換は、構造の変化を生じさせにくい、というのは、置換するアミノ酸が置換されるアミノ酸と同一の構造的役割を担うからである；および（３）進化において保存されている配列の変化は、構造に有害な影響を及ぼしやすい、というのは、進化における保存は機能的に重要な配列を示唆するからである。配列の変異についてのこれらの基本的なルールに加えて、活性確認のためおよび操作した分子の配置を調べるためにアッセイも用いられる。本発明の物質のための生物学的アッセイは実施例に詳しく説明する。配置の変化は２つのよく知られたアッセイによって試験することができる：マイクロコンプリメントフィクセーションメソッド、例えば（７９）および（８０）、この手法はタンパク質の三次元構造の進化的研究において広く使用されている：および構造特異的モノクローナル抗体に対するアフィニティーによるもの、例えば（８１）に記載されている。本発明の重要な態様はしたがって、少なくとも１のアミノ酸残基が異なるアミノ酸残基で置換されているポリペプチド、および／または少なくとも１のアミノ酸残基が欠失または付加されいるポリペプチドに関し、これらの変異によって以下に示すように定義されるアミノ酸配列またはサブ配列と異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドであるが、本質的に上記に定義するｈＩＬ−１０アゴニスト活性を有するものを得ることに関する。本発明における興味深い態様には、本発明のポリペプチドの類縁体および／または少なくとも一部を含有するポリペプチドであって、その長さが１０から１００アミノ酸であるもの、例えば少なくとも１２アミノ酸、少なくとも１５アミノ酸、少なくとも２０アミノ酸または３０アミノ酸のものが含まれる。本願の好ましい態様において、物質またはポリペプチドは実質的に純粋な形で用いる。このような、純粋なポリペプチドを得るためには、ポリペプチドの精製が必要となる。ポリペプチドの精製のために採用される手法としては、（ｉ）免疫沈降または抗体によるアフィニティークロマトグラフィー、（ｉｉ）適当なリガンドによるアフィニティークロマトグラフィー、（iii）ゲル濾過、イオン交換または高速液体クロマトグラフィーもしくは上記の操作の変法のごとき他のクロマトグラフィー、（ｉｖ）ポリアクリルアミドゲル電気泳動、変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動、アガロースゲル電気泳動および等電点電気泳動のような電気泳動法、（ｖ）他の全ての特異的可溶化および／または精製手法が挙げられる。本発明の範囲には、上記に定義したごときポリペプチドをコードするヌクレオチドも含まれ、特に配列番号１のアミノ酸配列を含有するか当該配列自身をコードするヌクレオチド配列、例えばヌクレオチド配列GCC TAC ATG ACA ATG AAG AT A CGA AAC（配列番号２３）または該アミノ酸配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列が含まれる。さらに、上記のヌクレオチド配列と少なくとも１のヌクレオチドが欠失、置換または修飾されているか、または少なくとも１つのヌクレオチドが挿入されている点において異なっており、一方でｈＩＬ− １０アゴニスト活性を有するポリペプチドをコードするようなヌクレオチド配列もまた、本発明の範囲内である。本明細書および請求の範囲において、「サブ配列」の語は好ましくは少なくとも１８ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも２１ヌクレオチト、最も好ましくは少なくとも２４ヌクレオチドからなる大きさである配列を示す。本発明の多くの態様において、本発明のヌクレオチド配列のサブ配列または類縁体は少なくとも２７ヌクレオチド、例えば少なくとも３０ヌクレオチドもしくは少なくとも４５ヌクレオチドを含有する。「サブ配列」によりコードされるポリペプチドは少なくとも上記ａ）〜ｇ）の性質のうちの１つを示し、および／または「サブ配列」ヌクレオチドは配列番号２３のヌクレオチド配列と厳しい条件下でハイブリダイズするものである。「厳しい条件下」という語をハイブリダイゼーションの条件に関して用いる場合、この用語は当業者においては融点、Ｔ_mの５〜１０℃以下と定義されている、例えばサンブルックら、1989第11.45〜11.49頁。本明細書において、本発明のＤＮＡフラグメントの「類縁体」という語は、このＤＮＡがコードするポリペプチドと同一または実質的に同一なポリペプチドをコードするヌクレオチド配列を含む。同じアミノ酸が複数のコドンによりコードされることはよく知られている、従って、該ヌクレオチド配列を生物が発現しやすいようにされるのである。すなわち、本発明のＤＮＡフラグメントの１または複数のヌクレオチドまたはコドンは、発現される場合にこのＤＮＡフラグメントによりコードされるものと同一または実質的に同一のポリペプチドになるような、他のものと交換されていてもよい。「類縁体」という用語および「サブ配列」という用語はさらに、配列中に置換、挿入（イントロンを含む）、付加および１または複数のヌクレオチドの再修飾のごとき変化を許容することを意図しており、これらの変化はこのＤＮＡフラグメントまたはそのサブ配列によりコードされるポリペプチドのｈＩＬ−１０アゴニスト活性に影響を及ぼさないものである。本発明はまた配列番号１のアミノ酸配列のサブ配列を有するポリペプチドをコードするヌクレオチド配列も含有する。本発明のポリペプチドは組換えＤＮＡ手法を用いて調製してもよい。本発明の重要な態様において、本発明のヌクレオチド配列を含む発現系を提供する。従って、本発明の範囲には、本発明のヌクレオチド配列を含む発現系、例えばこのヌクレオチド配列を担持し、その発現の媒介をし得る複製可能発現ベクター、を含む。本発明のポリペプチドの産生のために用いられる生物は、高等生物、例えば動物でも、下等生物、例えば大腸菌、酵母、原生動物のごとき微生物もしくは多細胞生物、例えば黴、昆虫細胞、植物細胞、哺乳類細胞またはセルラインから誘導された細胞等であって上記の発現系を有しているものであればよい。用いる生物にかかわりなく、本発明のＤＮＡフラグメントは直接または適当なベクターのいずれかによって当該生物内へ誘導される。または、ポリペプチドは本発明のＤＮＡフラグメントまたはその類縁体もしくはサブ配列を、直接または発現ベクターによって導入した哺乳類のセルラインによって産生させてもよい。本発明のポリペプチドはまた、上述の化学合成により産生してもよい。本発明はさらに、本発明のポリペプチドをコードするかまたはここで定義する融合ポリペプチドをコードするＤＮＡ配列を含有するプラスミドベクターに関する。ある重要な態様においては、本発明のＤＮＡフラグメントまたはその類縁体もしくはサブ配列、またはここに定義する本発明の融合ＤＮＡフラグメントは宿主生物体内またはセイルライン内において複製し得る複製可能発現ベクターによって運ばれる。このベクターは特に、プラスミド、ファージ、コスミド、ミニクロモソームまたはウイルスであってもよい。本発明の興味深い態様においては、ベクターが宿主細胞内に導入された場合に、宿主細胞のゲノムに統合されるものである。上述のように産生されるポリペプチドの翻訳後あるいは合成後修飾を、熱処理、化学処理（ホルムアルデヒド、グルタルアルデヒドなど）または酵素処理（ペプチダーゼ、プロテイナーゼ、およびタンパク質修飾酵素）の処理によって行ってもよい。このポリペプチドはある生物内で産生された場合には、その生物が本来産生するタンパク質と比して異なった方法で加工され得る。例えば、グリコシレーションはしばしばポリペプチドが酵母またはより好ましくは哺乳類のごとき高等生物の細胞に発現される場合に認められる。グリコシレーションは通常アミノ酸残基Ａｓｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒまたはヒドロキシリジンに認められる。本発明のひとつの態様は、以下の工程を有する、上記に定義されるポリペプチドの製法に関する：（ａ）発現ベクター内に上記定義のヌクレオチド配列を挿入する、（ｂ）適当な宿主生物を（ａ）のベクターによって形質転換する、（ｃ）（ｂ）で得られた宿主生物をポリペプチド発現のための適当な培養条件にて培養する、（ｄ）ポリペプチドを収穫する、および（ｅ）所望によりポリペプチドを翻訳後修飾にかける。ｈＩＬ−１０またはｖＩＬ−１０に対して作用するアンタゴニストは、ノナペプチドＩＴ９３０２と特異的に結合する抗体から得られ、そしてこれが高濃度のＩＬ−１０を中和するための治療に使用できることが予測される。従って他の点において、本発明は本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体に関する。「抗体」の語は哺乳類の細胞、またはより正確には哺乳類由来の細胞であって、免疫系に属しているものが本発明のポリペプチド抗原への暴露に応答して産生する物質を意味する。本明細書において「抗体」という用語は、本質的に特異結合基礎ユニットである２つの重鎖と２つの軽鎖により構成されるものであると定義する。抗体の一番広い概念のとしては、しかしながら該基礎ユニットの例えばダイマーまたはペンタマーも含むべきである。抗体のバリアントドメインは、可変および定常配列から構成されている。該ドメインの可変部分は抗体のイディオタイプと呼ばれている。抗体のこの部分は抗原との相互作用、抗原結合を司っている。この文脈において、抗体の語は抗体分子全体または該分子のいずれかのフラグメントとして理解される。抗体は産生の最中および／または後にフラグメント化され得る。抗体を最初にフラグメントの形態に製造して、そのままで、あるいは他のフラグメントと結合させた後に用いるようにしてもよい。特に興味のあるフラグメントは本発明の抗体の結合フラグメント、例えばＦａｂまたはＦａｂ’フラグメントである。抗体のイディオタイプ（抗原結合性）構造は抗原性であり、このイディオタイプ構造に対して指向する特異抗原を発生し得る。イディオタイプに対抗するように生じた抗体は抗イディオタイプ抗体と呼ばれる。かかる抗体はオリジナルの抗原構造のミミックであり得、従ってオリジナルの抗原と同様の機能を有し得る。かかる抗体は、オリジナルの抗原に換えて、本発明のオリジナルポリペプチドの機能、利用性および性質の一部あるいは全てをもたらすことができる。本発明の抗体にはポリクローナル抗体もモノクローナル抗体も同様に含まれる。抗体またはそのフラグメントは、単一の特異性を有する（ポリクローナル）種類のものであってよい。単一の特異性を有する抗体は、適当な動物に実質的に純粋な本発明のポリペプチドの調製品を注射することによって得てもよい。次いで１又は複数のブースターを適当な間隔を置いて注射し、最初の採血を行えばよい。各免疫化から約５〜７日後に動物の採血を行う。抗体は所望により血清から標準的な抗体精製方法によって単離すればよい。本発明のポリペプチドに結合する抗体の調製に用いる動物は、好ましくはウサギ、サル、ヒツジ、ヤギ、マウス、ラット、ブタ、ウマおよびモルモットからなる群から選択される。抗体を産生する細胞は脾臓細胞または抹消血リンパ球であってよい。モノクローナル抗体またはそのフラグメントはポリペプチドの重要な成分、すなわちエピトープに対抗するように生じさせてもよい。モノクローナル抗体は従来の方法（ケーラーとミルスタイン、1975）、即ちハイブリドーマセルラインを用いて産生させても、またはそのクローンもしくはサブクローンにより産生させても、あるいは該モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマセルラインからの遺伝子情報を有する細胞に産生させてもよい。モノクローナル抗体は該モノクローナル抗体を産生する細胞と適当なセルラインを融合させ、得られるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞をクローニングすることによって産生させることができる。または、モノクローナル抗体は不死化した融合していないセルラインであって該モノクローナル抗体を産生するものに作らせてもよい。モノクローナル抗体は細胞増殖培地から最終的に回収することができる。モノクローナル抗体を調製するためのハイブリドーマ細胞はインビトロまたは動物の体腔内で増殖させればよい。モノクローナル抗体またはそのフラグメントはまた、リコンビナントＤＮＡ手法を用いて調製してもよい（フセら、１９８８）モノクローナル抗体はまた、適当な動物を本発明のポリペプチドの非精製品により免疫して調製してもよい。得られるモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマクローンを、ポリペプチドまたはその類縁体に対する結合能力によりスクリーニングすればよい。高い特異性が必要でない場合には、抗体はポリクローナル抗体であってもよい。ポリクローナル抗体は、例えばハーボーとインギルド(Harboe and Ingild)が記載するごとく（上記）して得ればよい。より詳細には、ポリクローナル抗体を得ようとする場合には、本発明のポリペプチドまたはその類縁体は、好ましくは、フロインドの不完全あるいは完全アジュバントのごとき、適当なアジュバントを添加した後動物に注射すればよい。動物は例えば１週間の間隔で、常法どおりに採血すればよく、得られた血液は抗体含有血清フラクションに分け、所望により該フラクションをさらなる抗体精製のための従来の方法に供してもよく、および／または精製されたポリペプチドまたはその類縁体を使用した操作により精製してもよい。抗体としてはまた、抗−イディオタイプ抗体に対する抗−抗−イディオタイプ抗体であってもよく、これは該抗原上のエピトープと反応性の抗体の部位を指向する抗体である。抗−イディオタイプ抗体は、上記にモノクローナルまたはポリクローナル抗体を製造するために概説した方法と同様の方法で調製すればよい。本発明の範囲には、上記に定義した物質またはポリペプチドと結合する抗体、特にアミノ酸配列 Ala-Tyr-Met-Thr-Met-Lys-Ils-Arg-Asnを有するポリペプチドと特異的に結合する抗体が含まれる。広い概念では、本発明は従って、ｈＩＬ−１０活性ａ）〜ｊ）のうちの１または複数を中和することができる物質に関する。即ち、ｈＩＬ−１０アンタゴニスト活性を有するこれらの物質の抗体のごとき物質が含まれる。モノクローナル抗体１９Ｆ１（８２）は特異的にＩＬ−１０に結合する公知のものであるが、ＬＰＳ刺激単球により産生される内因性ＩＬ−１０をブロックする事ができるものである。表１を参照せよ（８２）。この抗体は天然の折り畳まれたＩＬ−１０を認識するが、必ずしも機能性ドメインの全体を認識しているわけではなく、この抗体はＩＴ９３０２には特異的に結合することはない。本発明の範囲には、かかる物質を含有する医薬組成物および同様に本発明の物質またはポリペプチドを含む医薬組成物もまた含まれる。本発明の非常に重要な観点においては、本発明は上記に定義したｈＩＬ−１０アゴニスト活性またはｈＩＬ−１０アンタゴニスト活性を有する物質および薬学上許容される賦形剤を含有する医薬組成物に関する。組成物には例えば精製された合成タンパク質あるいは精製された組換えポリペプチド、モノクローナルまたはポリクローナル抗体または他のａ）〜ｊ）の性質を満たすか、またはｈＩＬ− １０アンタゴニスト活性を有する場合には、ａ）〜ｊ）のいずれかの性質を中和することができるいずれかの物質を含有する。本発明において用いられるＩＬ−１０のアゴニストまたはアンタゴニストは、薬学上許容される媒体、例えば生理的食塩水、リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）、リンガー液、デキストロース／セーライン、ハンクス液、およびグルコースなど、とともに処方すればよい。組成物には所望の物性に応じて薬学上許容される助剤、例えばバッファー剤、等張化剤、湿潤剤、界面活性剤のごときものを添加してもよい。添加物にはまた、他の活性成分、例えば抗生物質や、安定化剤を添加してもよい。患者に投与する量は何を投与するか、投与の目的即ち予防なのか治療なのか、宿主の状態および投与方法等に依存して変わる。本発明の医薬組成物は、典型的には経皮あるいは非経口投与、例えば静脈、皮下または筋肉内投与を目的としている。経口投与可能な剤型もまた好ましく、組成物が胃内の環境を迂回できるように修飾してもよい。組成物は予防および／または治療のための処置に用いることができる。好ましくは医薬組成物は静脈内投与する。したがって本発明はＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニスト物質を許容される担体、好ましくは水性担体に溶解もしくは懸濁させたものを含有する医薬組成物を提供する。かかる組成物は従来の滅菌方法により滅菌してもよく、または濾過滅菌によって滅菌してもよい。得られる水性溶液はそのまま使用するために封入してもよく、凍結乾燥してもよい。凍結乾燥した処方は投与に先だって滅菌水性担体と混合すればよい。ＩＬ −１０のアゴニストまたはアンタゴニストはまた、第２の生理活性物質、例えば標準的な化学療法剤、とともに投与してもよい。かかる剤にはビンクリスチン(v incristine)、ダウノルビシン(daunorubicin)、Ｌ−アスパルギナーゼ(L-aspara ginase)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、アムサクリン(amsacrine)などが挙げられるがこれらに限定されない。治療のための投与において、医薬組成物を患者に投与する量は所望の効果が生み出されるのに十分な量とすればよく、これを「治療有効用量」と定義する。ＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストの治療有効用量は、例えば処置を行う対象、投与方法、患者の健康状態および症状および診断した医師の処方箋に従って決定される。例えば持続的点滴のための用量は代表的には７０ｋｇの患者１日あたり約５００ｎｇから約８００μｇ、好ましくは約１０μｇから約３００μｇである。代表的な用量は７００ｎｇ／ｋｇ／日から１６μｇ／ｋｇ／日である。ＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストの医薬処方中の濃度は広い範囲で変えることができる、即ち約１０μｇ／ｍｌから約５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは約１００μｇ／ｍｌから約２ｍｇ／ｍｌである。この濃度は通常、原則的には特定の投与方法を選択し、それに応じた液体の量、粘度などによって選択される。従って、静脈内点滴のための本発明の代表的な医薬組成物は２５０ｍｌのデキストロース／生理的食塩水溶液と２．５ｍｇのＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストを含有するように調製される。固形組成物の調製のため、従来の非毒性固形担体を用いることができる。この担体には例えば薬品等級のマンニトール、ラクトース、スターチ、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカム、セルロース、グルコース、シュークロース、炭酸マグネシウム等が例示される。経口投与のための薬学上許容される非毒性組成物は、通常採用される賦形剤、例えば上述の担体など、および一般に１０〜９５％、好ましくは２５〜７５％の活性成分、即ちＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニスト物質を含んで調製される。エアロゾル投与用には、ＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストは好ましくは界面活性剤と抛射薬と共に細かく分散された状態で供給される。ＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストの典型的な割合は、０．０１〜２０重量％、好ましくは１〜１０重量％である。界面活性剤は当然、非毒性でなくてはならず、好ましくは抛射薬に可溶である。かかる剤の代表としては６から２２炭素原子を有する脂肪酸のエステルまたは部分エステル、他えばカプロン酸、オクタン酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、リノレン酸、オレステリン(olesteric)酸およびオレイン酸と、脂肪族多価アルコールまたはその環状無水物、例えばエチレングリコール、グリセロール、エリスリトール、アラビトール、マンニトール、ソルビトール、ソルビトール由来無水ヘキシトール、ポリオキシエチレンおよびポリオキシプロピレン誘導体、のエステルが例示される。混合エステル、例えば混合あるいは天然グリセライドもまた用い得る。界面活性剤は組成物の０．１〜２０重量％、好ましくは０．２５〜５重量％を占める。組成物の残部は通常の抛射薬である。液体化された抛射薬は典型的には大気中では気体となる、加圧下で圧縮されているものである。好ましい液体化抛射薬には炭素原子数が５までの低級アルケン類、例えばブタンおよびプロパンが例示され；そして好ましくはフッ素化またはフッ素化塩化アルカンが例示される。かかる物質の混合物もまた用い得る。エアロゾルの産生の際は、適当なバルブを取り付けた容器内に、微細に分散されたポリペプチド（類）および界面活性剤を含む適当な抛射薬を投入すればよい。バルブの作用により放出されるまで、内容物には高圧をかけておく。血清内半減期を高めるため、ＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストをカプセルに封入しても、リポソーム内に導入しても、コロイドとして調製してもよく、またはその他のポリペプチドの寿命を延ばすための従来からの技術を採用してもよい。従って、ある態様においてＩＬ−１０アゴニストまたはアンタゴニストはリポソーム内にカプセル化されている。リポソームの調製のために用い得るさまざまな方法は、例えば文献（８３）、（８４）、（８５）および（８６）に記載されている。本発明の重要な態様の一つは高濃度のｈＩＬ−１０および／またはｖＩＬ−１０を減少させるかまたは中和する物質の使用、例えば卵巣癌および／またはＡＩＤＳ（８７、１９）の治療または予防のための医薬組成物の製造のためのｈＩＬ −１０アンタゴニスト様性質を有する物質の使用に関する。本発明の範囲内には、卵巣癌および／またはＡＩＤＳの治療および／または予防方法を含み、この方法には処置が必要な患者に対して治療または予防有効量のｈＩＬ−１０アンタゴニスト物質を投与することが含まれる。同様に、ｈＩＬ− １０アンタゴニスト活性を有する化合物を卵巣癌および／またはＡＩＤＳの処置のための医薬組成物の製造のための使用も本発明の範囲内である。本発明の物質の使用本発明において、ＩＴ９３０２およびその類縁体および変種が、先に記載した疾病症状において病原性であることが知られているサイトカイン類の影響を予防するのに有用であることを見いだしたのは上述の通りである。従って、本発明のポリペプチドまたはその類縁体または誘導体を用いる治療能力はｈＩＬ−１０および／またはＩＲＡＰの治療効果が期待されるすべての疾患について予測され、また調べられるべきである（上記および表３参照）。本発明の非常に重要な態様は、本発明の物質もしくはポリペプチドの、表３に示した疾患のうちの１または複数の疾患の治療または予防のための使用、本発明の物質もしくはポリペプチドの、表３に示した疾患のうちの１または複数の疾患の治療または予防のための医薬組成物の製造のための使用、および本発明の物質もしくはポリペプチドを、処置を必要とする患者に対して治療もしくは予防有効量投与することを含む、表３に示した疾患のうちの１または複数の疾患の治療または予防方法に関する。本発明の重要な態様は、ＩＴ９３０２またはその機能性誘導体の、ヒトにおけるサイトカイン、例えばリンホカイン、インターロイキン、モノカイン、ケモカイン、インターフェロン、コロニー刺激因子、プロスタグランジンおよび／またはロイコトリエンなど、に関係する生理活性を実質的に抑制するための医薬組成物の製造のための使用、およびサイトカイン系、例えばリンホカイン、インターロイキン、モノカイン、ケモカイン、インターフェロンまたはコロニー刺激因子系および／またはプロスタグランジンおよび／またはロイコトリエン系、の乱れに関連する症状の予防または治療のための使用に関する。本明細書において「医薬組成物」という用語には上記に詳述したごときヒトに投与するのに適したすべての組成物を含むものとする。本発明は特に、ＩＴ９３０２またはその機能性誘導体を以下の用途への使用に関する： −ヒトにおいてサイトカインに関与する生理活性を実質的に抑制して、サイトカイン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてリンホカインに関与する生理活性を実質的に抑制して、リンホカイン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてインターロイキンに関与する生理活性を実質的に抑制して、インターロイキン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてモノカインに関与する生理活性を実質的に抑制して、モノカイン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてケモカインに関与する生理活性を実質的に抑制して、ケモカイン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてリンホカインに関与する生理活性を実質的に抑制して、リンホカイン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてインターフェロンに関与する生理活性を実質的に抑制して、インターフェロン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてコロニー刺激因子に関与する生理活性を実質的に抑制して、コロニー刺激因子系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてプロスタグランジンに関与する生理活性を実質的に抑制して、プロスタグランジン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う；および／または −ヒトにおいてロイコトリエンに関与する生理活性を実質的に抑制して、ロイコトリエン系の乱れに関連する症状の予防または治療を行う。図面の簡単な説明図１はｍＩＬ−１、ｈＩＬ−１およびＢＣＲＦ１の予測されるアミノ配列配列の比較を示す。アミノ酸配列の同一部分は縦線で結んだ。図２は９アミノ酸を含むＩＬ−１０のＣ末端ポリペプチド配列を示す。また、豚、ヒト、ＢＣＲＦ１およびマウスのタンパク質を比較している。図３はＩＴ９３０２が純粋培養したヒト単球からのＩＬ−８の自発産生を阻害することを示す図である。図４はＩＴ９３０２がヒト末梢血単核球のＩＬ−１誘導性（１ｎｇ／ｍｌ）ＩＬ−８産生を阻害することを示す図である。図５はＩＴ９３０２で刺激されたヒト単球によるＩＲＡＰ産生を示す説明する。図６はＩＬ−１０で刺激されたヒト単球によるＩＲＡＰ産生を示す説明する。図７はＣＤ８＋Ｔ細胞における、ＩＴ９３０２の化学走化性活性を示す説明する。図８はＣＤ８＋Ｔ細胞がＩＴ９３０２による脱感作により、ＣＤ８＋Ｔ細胞がＩＬ−１０（１０ｎｇ／ｍｌ）誘導化学走化に対して応答しなくなることを示す説明する。図９はＩＴ９３０２によるＩＬ−８活性の抑制を説明する。図１０はＩＴ９３０２がＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１誘導単球化学走化を阻害することを示す図である。図１１はＣＤ４＋Ｔ細胞のサイトゾルフラクションにおけるＩＬ−４の産生を、ＥＣＬ−ウエスタンブロッティングにより示した図である。図１２はヒト混合リンパ球培養物のサイトゾルフラクションにおけるＴＮＦ− αの産生をＥＣＬ−ウエスタンブロッティングにより示したものである。ＴＮＦ −αウエスタンブロッティングは、ウサギ抗ヒトＴＮＦα抗体（ペプロ・テック・インコーポレイテッド(Pepro Tech．Inc．)(英国、ロンドン)とホースラディッシュパーオキシダーゼ標識二次抗体(カタログ番号Ｐ２１７、デンマーク、デコ(Dako))を用いた以外はＩＬ−４について「材料と方法」の欄で説明した通りに行った。図１３はＬＰＳ誘導性ショックおよび白血球減少症がＩＴ９３０２により制御されることを、全リンパ球数により示す図である。実施例材料および方法サイトカインおよび化学誘因物質組換ｈＩＬ-１０をペプロ・テク・インコーポレイテッド（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈＩｎｃ.,）（ニュージャージー）〔Ｃａｔ.Ｎｏ.２００１０〕から入手した。組換体ｈＩＬ-１βおよび組換体ｈＩＬ-８はダイニッポン・ファーマシューティカル（ＤａｉｎｉｐｐｏｎＰｈｅｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）社（大阪、日本）から提供されたものであった。培地はＲＰＭＩ１６４０ＧＩＢＣＯを、リミュラス・アメボサイト・リセイト・アッセイ（ＬｉｍｕｌｕｓＡｍｏｅｂｏｃｙｔｅＬｙｓａｔｅａｓｓａｙ）〔Ｓｉｇｍａ社、Ｅ-ＴＯＸＡＴＥＫｉｔＣａｔ.Ｎｏ.２１０-Ａｌ〕にしたがってＬＰＳフリーとした。ｒｈＭＣＡＦ／ＭＣＰ-１はコウジ・マツシマ教授（金沢、日本）により提供された。白血球化学走化性アッセイＴ細胞化学走化性ＣＤ４またはＣＤ８のいずれかの抗原を発現している特徴をもつＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔリンパ細胞亜群をヘパリンを添加した正常なドナーの血液から精製した。こうして末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）は、ヘパリン添加血液１００ｍｌをハンクス（Ｈａｎｋｓ）の緩衝塩類溶液（ＨＢＳＳ）で１：１に希釈し、次いで「リンフォパック（Ｌｙｍｐｈｏｐａｃ；商標）」〔ニコミット・ファーマ（ＮｙｃｏｍｅｄＰｈａｒｍａ）社、オスロ、ノルウェー）〕上に細胞を層状に分離することにより分離し、そのあと２０００ｒｐｍで２０分間傾斜遠心分離にかけた。単核細胞をＨＢＳＳ中で３回洗い、細胞ペレットを１％ウシ胎児血清を含む４ｍｌのＨＢＳＳで希釈して、ＣＤ４またはＣＤ８抗原に対するモノクローナル抗体を被覆したダイナビーズ（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ）〔ＤｙｎａｂｅａｄｓＭ-４５０ＣＤ４Ｃａｔ.Ｎｏ.１１１.１６、ＤｙｎａｂｅａｄｓＭ-４５０ＣＤ８Ｃａｔ.Ｎｏ.１１１.０８、ＤＥＴＡＣＨａＢＥＡＤＣａｔ.Ｎｏ.１２５.０４〕を用いて４℃で類別した。ビーズ：細胞の比は１０：１で、インキュベーション時間は１時間であった。ビーズはメーカーの指示にしたがってポリクローナルアンチ-マウス抗体を加えてはずした。化学走化性アッセイは上記（７４；参考文献３および１４参照）のように４８ -ウェルミクロチャンバー法〔ニューロプローブ社、ロックビル、メリーランド〕を用いた。化学誘引物質をＲＰＭＩ１６４０〔ＧＩＢＣＯ社、Ｃａｔ.Ｎｏ.６１８７０-０１０〕中で、滅菌濾過した１％のウシ胎児血清で希釈し、下部の２５μｌチャンバーに入れた。Ｔ細胞化学走化性を測定する場合は、Ｔ細胞（５× １０⁶／ｍｌ）を培地中に懸濁し、その５０μｌを、タイプIVコラーゲン〔Ｓｉｇｍａ社、Ｃａｔ.Ｎｏ.Ｃ０５４３〕を被覆したポリビニルピロリドンを含まないポアサイズ５μｍのポリカーボネートフィルターで下部チャンバーと分離された上部チャンバーへ入れた。細胞は５％炭酸ガス雰囲気中で３７℃で２時間自由に移動させた。次いでフィルターを注意深く取り除き、７０％メタノール中に固定し、クーマッシー（Ｃｏｏｍａｓｓｉｅ）のブリリアントブルー中で５分間染色した。フィルターの下部表面に付着した細胞の数を、ディジタル解析用コンピューターシステムに接続し、化学走化的遊走という目的評価用のソフトウエアーを備えた顕微鏡のビデオカメラを用いて計測した。Ｔ細胞の約５％（１２,０００〜１３,０００に相当）が自発遊走した；これは日によって変わるかもしれないが、同一日の実験ではほとんど変わらない。以前に（参考文献３および１４）記載されているように、試料および自発遊走を反映する負のコントロールとの遊走細胞数の比として結果を報告することにした。この比率はケモタクティックインデックス（ＣＩ）と呼ばれる。すべての試料は３回解析し、各ウェルの細胞遊走を３つの場で測定した後、面積の中間値を評価した。いくつかの実験では化学走化性膜はコラーゲンで被覆していなかった、したがって本アッセイでは遊走した細胞は化学走化性試験チャンバーの下部のウェルの底へ落下するであろう。第１の実験では、ＣＤ８＋Ｔ細胞に及ぼすＩＴ９３０２の化学走化活性を、下部チャンバーへ加えたＩＴ９３０２の一連の希釈物を試験し、上記の方法で化学走化性を評価して調べた。第２の実験では、ｒｈＩＬ-１０（１０ｎｇ／ｍｌ）に対する応答としてのＣＤ８＋Ｔ細胞の移動を鈍らせるＩＴ９３０２の能力の研究を、化学走化を行う３０分前に標的細胞へＩＴ９３０２を加えることにより行った。ＩＴ９３０２は一連の濃度のものを加え、ｒｈＩＬ-１０の化学走化性応答性を上記のようにして評価した。第３の実験では、ｒｈＩＬ-８（１０ｎｇ／ｍｌ）に対するＣＤ４＋Ｔ細胞の化学走化性応答性を抑制するＩＴ９３０２の能力の研究は化学走化を実施する３０分前にＩＴ９３０２を標的細胞へ添加することにより行った。ＩＴ９３０２は一連の濃度のものを加え、ｒｈＩＬ-８の化学走化性応答性を上記のようにして評価した。単球の化学走化性単球化学走化性はＴ細胞について上記で記載したと同じボイデン（Ｂｏｙｄｅｎ）のチャンバー装置を用いて測定した。化学誘引物質であるＭＣＡＦ／ＭＣＰ -１をＲＰＭＩ１６４０培地中で０.５％ＢＳＡで希釈し、濃度１０ｎｇ／ｍｌで下部チャンバーに添加した。正常な人のＰＢＭＣから標準プラスチック接着技術によって精製し、上記のようにして得られた単球を、ＲＰＭＩ１６４０媒体中で０.５％ＢＳＡにより懸濁し、次いで異なる濃度のＩＴ９３０２の存在下で３０分間インキュベートした。次に細胞を１０⁶細胞／ｍｌの濃度で上部化学走化性試験チャンバーへ加えた。上部と下部のチャンバーはポリビニルピロリドンを含まないポアサイズ８μｍのポリカーボネートフィルター〔ヌクレオポア（Ｎｕｃｌｅｏｐｏｒｅ）社製；プレザントン（Ｐｌｅａｓａｎｔｏｎ）、カリフォルニア〕により分離されていた。チャンバーは３７℃で９０分インキュベートした。移動細胞を含む膜を上記のように処理し、ケモタクティックインデックスを上記の方法で計算した。正常な人末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ-８の産生ＰＢＭＣは正常な人から提供されたヘパリン添加血液から精製した。リンホプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ：商標）〔ニコミッド．ファーマ社製；オスロ、ノルウェー〕によって傾斜遠心分離したのち、単核細胞を、１％の滅菌濾過した熱脱活ウシ胎児血清とペニシリン（１０,０００ＩＥ／ｍｌ）、ストレプロマイシン（１０ｍｇ／ｍｌ）およびジェンタマイシン（２.５ｍｇ／ｍｌ）を含むＬＰＳを含まないＲＰＭＩ１６４０媒体〔ギブコ社製；Ｃａｔ.Ｎｏ.６１８７-０１０〕中で２×１０⁶細胞／ｍｌに希釈した。細胞を２４ウエルのナンク・ミクロ・プレート（ＮｕｎｃＭｉｃｒｏＰｌａｔｅｓ）〔ナンク社製；デンマーク〕中で、種々の濃度（０.１μｇ、１００ｎｇ、１０ｎｇ、１ｎｇ、０.１ｎｇ、０.０１ｎｇ／ｍｌ）のＩＴ６３０２の存在下で２４時間培養した。２４時間培養後、ＩＴ６３０２をもう一度添加し、１時間後細胞培養物にｒｈＩＬ-１β（１ｎｇ／ｍｌ）を加えた。全４８時間の培養後、浮遊物を集め、分泌されたＩＬ -８の濃度をＩＬ-８エリサキット（ＥＬＩＳＡＫｉｔ）〔ダイニッポン・ファーマシューティカル（株）製；大阪、日本〕を用いてＩＬ-８エリサにより測定した。簡単には、標準物質と細胞浮遊物とをマイクロプレートシェーカ上で２０ ℃で１時間培養し、それを２回繰り返した。次に、洗浄後、第２の抗体を１時間かけて添加し、それからパーオキシダーゼで標識したヤギの抗-ラビットＩｇＧとともに１時間培養した。洗浄後、オルトフェニレンジアミンを加えて反応を進めた。３０分後１.６規定硫酸により反応を停止した。４９０ｎｍの光学密度（ＯＤ）をエリサ読み取り機で測定した。ＩＬ-８の濃度を、標準ＩＬ-８の濃度と未知吸光度との間のカリブレーションカーブを用いて測定した。ＩＲＡＰ濃度の決定ＰＢＭＣを上記のようにして精製した。ＰＢＭＣを１０％の滅菌した熱脱活したウシ胎児血清（ペニシリン１０,０００ＩＥ／ｍｌ、ストレプトマイシン１０ｍｇ／ｍｌ、ジェンタマイシン２.５ｍｇ／ｍｌを含有する）を含むＲＭＰＩ１６４０中で培養し、細胞濃度は５×１０⁶細胞／ｍｌであった。次いで単球を標準プラスチック接着法により精製した。次に単球を、２％のＦＣＳ（２.５×１０⁶細胞／ｍｌ）と共に、および希釈度の異なるｒｈＩＬ-１０またはＩＴ９３０２と共にＲＭＰＩ１６４０中で培養した。細胞を２４時間刺激し、ＩＲＡＰを測定するために浮遊物を集めた。ＩＲＡＰエリサを、アール・アンド・ディー・システムズ・ユアロップ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓＥｕｒｏｐｅ）社〔Ｃａｔ. Ｎｏ.ＤＲＡ００；アビングドン（Ａｂｉｎｇｄｏｎ）、オキソン（Ｏｘｏｎ）、英国〕のヒューマン・ＩＬ-１ｒａ・クァンティキン・イミュノアッセイ・キット（ＱｕａｎｔｉｋｉｎＩｍｍｕｎｏａｓｓａｙＫｉｔ）を用いて行った。単球上でのクラスIIＭＨＣ抗原発現の測定ＰＢＭＣを上記のようにして精製し、単球をプラスチック接着法により単離した。次いで単球を、ペニシリン１０,０００ＩＥ／ｍｌ、ストレプロマイシン１０ｍｇ／ｍｌ、ジェンタマイシン２.５ｍｇ／ｍｌを含む２％ＦＣＳとともに、細胞濃度３×１０⁶／ｍｌで、ＲＭＰＩ１６４０中で培養した。細胞を１００ｎｇ／ｍｌのｒｈＩＬ-１０または１μｇ／ｍｌ、１００ｎｇ／ｍｌ、１０ｎｇ／ｍｌのＩＴ９３０２とともにマイクロウエルズ〔ナンク社；デンマーク〕中で４０時間刺激した。刺激が終了した時点で、浮遊物を取り除き、−２０℃で２０分間冷凍して細胞をプラスチックからはずした。細胞を、１％ＦＣＳとともに冷ＨＢＳＳ１ｍｌ中に集めて、ＨＬＡクラスIIβ-鎖〔Ｃａｔ.Ｎｏ.２１０.０３〕用モノクローナル抗体を被覆した５０μｌ／ｍｌのダイナビーズＭ４５０を用いて２０℃で類別した。２０分間のインキュベーションの後、細胞を１％ＦＣＳを含む冷ＨＢＳＳで３回洗浄し、磁気分離装置上に集めた。細胞を上記緩衝液中に希釈し、メチレンブルーで染色し、次いでロゼット細胞（ＨＬＡクラスIIｍＡｂをもつダイナビーズを付けた細胞）を計数した。ＣＤ４＋Ｔリンパ細胞によるＩＬ４の産生の測定細胞培養ＣＤ４＋Ｔリンパ細胞をヘパリン添加正常ヒト血液から精製した。「リンフォプレップ（Ｌｙｍｐｈｏｐｒｅｐ；商標）」〔ニコミット・ファーマ（ＮｙｃｏｍｅｄＰｈａｒｍａ）社、オスロ、ノルウェー〕による傾斜遠心分離にかけたのち、単核細胞を更にモノクローナル抗-ＣＤ４抗体を被覆したダイナビーズ〔ダイナル（Ｄｙｎａｌ）社製、ノルウェイ〕を用いて４℃で類別した。ポリクローナル抗-マウス抗体〔ダイナル社製、ノルウェイ〕を添加してビーズをはずした。ポジティブとして選択された細胞の純度はＦＡＣＳ解析により判定して９９％以上であった。ＩＬ-８-刺激したＴ細胞によるＩＬ４の新規（ｄｅｎｏｖｏ）産生物を評価するに当たり、Ｔ細胞を５×１０⁶細胞／ｍｌ濃度で、１％の滅菌濾過した、熱失活したウシ胎児血清（ＦＣＳ）、ペニシリン（１０,０００ＩＵ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１０ｍｇ／ｍｌ）およびジェンタマイシン（２.５ｍｇ／ｍｌ）を含むＬＰＳフリーのＲＰＭＩ１６４０中で培養した。Ｔ細胞を、ｒＩＬ-８（１００ｎｇ／ｍｌ）、ｒＩＬ-１０（１００ｎｇ／ｍｌ）、ＩＴ９３０２（１０ｎｇ／ｍｌ）およびＩＦＮ-γ（１０ｎｇ／ｍｌ）を用いて３日間刺激した。組換体ヒトＩＬ-８（ｒｈＩＬ-８）はダイニッポンファーマシューティカルズ社から提供されたものであり、ＩＦＮ-γはベーリンガー・インゲルヘイム・アム・ライン（ＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒＩｎｇｅｌｈｅｉｍＡｍＲｈｅｉｎ）社（独）からの購入品であった。ＩＬ-８刺激の特異的な阻害を行うために、中和するモノクローナル抗ＩＬ-８抗体（ＷＳ.４）はドクター・ケイ・マツシマ（日本）からのものを使用した。組換体ＩＬ-１０はプロプ・テク（Ｐｒｏｐ.Ｔｅｃｈ.）社（ロンドン、英国）からの購入品であった。細胞原料およびゲル電気泳動用培養浮遊物の調製培養したＴ細胞と培地とを２０００ｒｐｍ、５分の遠心分離により分離した。浮遊物は凍結乾燥し、次いで１００μｌの溶解バッファー中に溶解した。細胞を１００μｌのゲル溶解バッファー（９）中に直接再懸濁した。物質は次の試験まで−８０℃で保存した。ＣＤ４＋Ｔ細胞誘導蛋白質のＥＣＬ-ウェスタンブロッティング細胞または凍結乾燥した細胞培養浮遊物をＩＬ-４蛋白質含量評価用として使用した。一次元１５％ＳＤＳ-ＰＡＧＥゲルからの蛋白質をブロッティングによりＨｙｂｏｎｄ-ＥＣＬニトロセルロース膜〔アマーシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）社、ＲＰＮ２０２０Ｄ、英国〕上に転移させ、０.１％ツィーン-２０（Ｔｗｅｅｎ-２０）を含むトリス緩衝液（Ｔｒｉｓｂａｆｆｅｒｓａｌｉｎｅ）ｐＨ７.８中で５％のウシ血清アルブミン（シグマ社）でブロックした。それからそのブロットをポリクローナルヤギ抗ヒトＩＬ-４抗体〔Ｒ＆Ｄシステムズ、英国〕とともに、統いて西洋ワサビパーオキシダーゼで標識した第二の抗体〔Ｃａｔ.Ｎｏ.ＲＰＮ２１０６ＥＣＬ、アマーシャム、英国〕とともにインキュベートし、フィルム〔コダック社製、「Ｘ-ＯＭＡＴ-Ｓ」、米国〕を９０秒間さらすことにより免疫染色が検出された。ＩＴ９３０２アミノ酸配列の特異性他の既知の蛋白質とのＩＴ９３０２配列の同一性を調べるために、ドクター・ヘンリック．レファーズ（Ｄｒ．ＨｅｎｒｉｃＬｅｆｆｅｒｓ）、インスティチュート・フォー・メディカル・バイオケミストリー（ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｆｏｒＭｅｄｉｃａｌＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、アールハス（Ａａｒｈｕｓ）大学（デンマーク）の親切な助力を得てＥＭＢＯ蛋白質データベースにより調査を行った。ＩＴ９３０２のアミノ酸配列特異性１９９４年６月１０日に完成したＥＭＢＯ蛋白質データベース（ハイデルベルク）からの情報によれば、ＩＴ９３０２はヒトＩＬ-１０の配列とは１００％一致しており、ｖＩＬ-１０と同一のエプシュタイン−バールウィルス（Ｅｐｓｔｅｉｎ−Ｂａｒｒｖｉｒｕｓ）誘導蛋白質の配列とは７５％一致している。ファージＴ７およびトマト黄葉カールウィルスのような他のウィルス蛋白質はそれぞれ７５％および８５％の同一性を有することが解明した。結果発明の概念は１９９２年１０月および１１月になされ、そのときＩＴ９３０２と名付けたノナペプチドを上記で概要を説明した方法にしたがってデザインし、第１のプロトタイプ（ＩＴ９３０２）の化学合成は１９９２年１１月２７日に決定され、注文された。このノナペプチドは、ある程度ＩＬ-１０の活性に類似した免疫調節活性を発現するはずであると期待され、以下の対照実験（実施例）もこの期間に計画された。ＩＴ９３０２の化学合成は自動ポリペプチド合成装置を用いて、発明者により依頼されたカールバイオテク（Ｃａｒｌｂｉｏｔｅｃｈ）社（デンマーク）によって行われた。その後に、蛋白質はＨＰＬＣによって精製され、純度はＨＰＬＣにより９５％を越えることが確認された。これにより合成生成物は１９９２年１０月および１１月に発明者によって指定されたＩＴ９３０２と同一であることが確認された。実施例１ヒト単球による自発ＩＬ-８産生のＩＴ９３０２による阻害「正常なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ-８の産生」に記載されたようにして試験を行った。単球はプラスチック接着法により精製し、３.０× １０⁶細胞／ｍｌを４０時間刺激した。図３に示すように、ＩＴ９３０２は単球によるＩＬ-８の産生を阻害し、０.１ｎｇ／ｍｌのＩＴ９３０２でＩＬ-８の産生は、インビトロでの自発産生の３５％に抑制された。通常、細胞の生存率は培養１日後に８０％を越え、本実施例や以下の実施例において、ＩＴ９３０２が０ .１から１０００ｎｇ／ｍｌの濃度範囲ではＩＴ９３０２は生存率に影響を及ぼさなかった（ＩＴ９３０２分子量：１,１２７ダルトン、ｒｈＩＬ-１０の予想分子量：１８,４００ダルトン）。実施例２ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ-１β誘導ＩＬ-８産生のＩＴ９３０２による阻害「ヒト正常末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるＩＬ-８の産生」に記載されたようにして試験を行った。図４に示したように、ＩＴ９３０２は、投与量に依存して、インビトロでのヒト末梢血単核細胞によるＩＬ-１β誘導ＩＬ-８産生を阻害した。ＩＬ-８産生の抑制はＩＴ９３０２濃度が０.０１〜１００ｎｇ／ｍｌのところで一定値に達した。実施例３ヒト単球によるインターロイキン−１受容体拮抗蛋白質（ＩＲＡＰ）のＩＴ９３０２誘導産生試験は「ＩＲＡＰ濃度の決定」中に記載されたようにして行った。図５に示すように、ＩＴ９３０２はヒト単球によるＩＲＡＰの産生を投与量依存的に誘導した。ＩＴ９３０２を１０ｎｇ／ｍｌより高い濃度で使用したとき産生量は著しく増加した。図６はｒｈＩＬ-１０によるＩＲＡＰの誘導を示しており、ＩＴ９３０２より約２０倍大きいため、ＩＴ９３０２の１０ｎｇ／ｍｌはモル数ではｒｈＩＬ-１０の２００ｎｇ／ｍｌに等しい。したがってＩＴ９３０２とｒｈＩＬ− １０の能力は低濃度ではＩＲＡＰの誘導に関して同等であり、ほぼ等しい。１０ｎｇ／ｍｌをこえるＩＴ９３０２濃度では、ＩＲＡＰの産生量は著しく増加し、約７００ｎｇ／ｍｌのレベルに達した。実施例４ヒトＣＤ８＋Ｔリンパ細胞に及ぼすＩＴ９３０２の化学走化性効果試験は「白血球化学走化性アッセイ」に記載されているようにして行った。図７に示すように、ＩＴ９３０２はインビトロでＣＤ８＋ヒトＴリンパ細胞の化学走化的移動を誘導し、一方ＣＤ４＋Ｔ細胞（データは示されていない）には影響がなかった。この試験において示されたＩＴ９３０２の能力は、やはり先に示した（引用文献１４）ｒｈＩＬ-１０のそれに匹敵する。実施例５ＩＴ９３０２はヒトＣＤ８＋Ｔ細胞を脱感作し、その結果ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞はｒｈＩＬ-１０に応答しなくなる試験は、「白血球化学走化性アッセイ」に記載されたようにして行った。ＣＤ８＋Ｔ細胞のｒｈＩＬ-１０に対する化学走化性応答性を試験する３０分前に、ＩＴ９３０２をＣＤ８＋Ｔ細胞の懸濁液中に加えた。図８に示すように、細胞をあらかじめＩＴ９３０２とともにインキュベートしておくことによって、ＣＤ８＋Ｔ細胞はｒｈＩＬ−１０に対して応答性が低下する。これは、ＩＴ９３０２がｒｈＩＬ-１０のＩＬ-１０受容体への結合に影響する可能性があることを示している。実施例６ＩＴ９３０２はＩＬ−８に対するＣＤ４＋Ｔリンパ細胞の化学走化性応答性を低下する試験は「白血球化学走化性アッセイ」に記載のようにして行った。図９に示すように、ヒトＣＤ４＋Ｔリンパ細胞懸濁液に添加することにより、添加量に依存して、ＣＤ４＋Ｔ細胞のＩＬ−８に対する応答性を阻害する。実施例７ＩＴ９３０２はＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対するヒト単球の化学走化応答性を抑制する試験は「単球の化学走化性」に記載のようにして行った。図１０に示すように、ヒト単球の懸濁液に添加することにより、添加量に依存してＩＴ９３０２はＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対する単球の化学走化性応答性を阻害する。実施例８ＩＴ９３０２はクラスIIＭＨＣ分子のヒト単球上での発現を阻害しない試験は「材料と方法」に記載されたようにして行ない、ｒｈＩＬ-１０がクラスIIＭＨＣ発現を阻害するが、表４に示すようにＩＴ９３０２は阻害しないことを示している。試験に関する議論本データは、ＩＬ−８の産生および単球および／またはＴ細胞遊走を含む前炎症活性を反映するプロセスに及ぼす合成ノナペプチドであるＩＴ９３０２の投与量依存的阻害作用を示している。このように、ＩＴ９３０２は終夜にわたって培養したヒト単球によるＩＬ−８の自発産生を抑制することができた。これは、ＩＬ−８ｍＲＮＡ産生および／または続く蛋白質産生および／または放出に及ぼす直接の阻害作用として説明することができる。もうひとつの機構は、インビトロで培養された単球がＩＬ−１を発現および産生するであろうこと、そしてそれが今度はＩＬ-８の産生を誘導するとの事実によって説明することができる。これは、ＩＴ９３０２が単球からのＩＲＡＰの産生を強く誘導することが示されているという事実によって支持される。したがってＩＴ９３０２はまたＩＬ−１の活性に干渉することによりＩＬ−８の自発産生を阻害するのかもしれない。培養物に添加されたＩＴ９３０２はＩＬ−１の誘導によるＩＬ−８の産生に抗する作用をするが、それは培養物にＩＬ−１を添加する少なくとも１６時間前に添加された場合だけであるから、観察されたＩＴ９３０２によるＩＲＡＰの誘導は、生物学的に活性なＩＲＡＰを誘導するように見える。これは、ＩＴ９３０２がＩＲＡＰの生産を誘導し、それが次に受容体を介してＩＬ−１の活性を遮蔽することによってＩＬ−１誘導によるＩＬ−８の産生を阻害することを意味するとすることができる。もしＩＴ９３０２が直接ＩＬ−８の産生を阻害するのであれば、ＩＬ−１の添加１時間前に培養物にＩＴ９３０２を添加すればＩＬ−８の産生を阻害することが予想されたであろうが、実際はそうではない（データは示していない）。したがって、ＩＴ９３０２による観察されたＩＬ−８産生の阻害はＩＬ −８産生を直接阻害するというよりもＩＲＡＰの産生を誘導したことによるように思われる。ＩＴ９３０２のこれらの作用はまた、ｈＩＬ−１０についても見いだされており、ＩＴ９３０２がＩＬ−１０と同様の活性を有することを示している。ＩＴ９３０２はまたＣＤ４＋Ｔ細胞がＩＬ−８に対する応答として遊走する能力を抑制する点でもＩＬ−１０活性と類似している。ＩＬ−８は多くの異なる炎症状態に関係しており、ＣＤ＋４Ｔ細胞は、皮膚アレルギーのようなＴ細胞-媒介免疫性炎症の初期の浸潤物中に現れるので、この性質は、Ｔ細胞媒介免疫性炎症をコントロールするための重要な治療価値を有することが証明されるかもしれない。また示されたＩＴ９３０２のＣＤ８＋Ｔ細胞化学走化性活性はＩＬ−１０のそれと平行しており、したがってＩＴ９３０２はＴ細胞媒介免疫性炎症の終結に寄与する抑制活性をもったＴ細胞集団を活性化するかもしれない。したがって、ＩＬ−１０および／またはＩＲＡＰも治療的価値を有している病気の場合には、上記で示した実施例のＩＴ９３０２は、治療的価値を有している。加えて、ＩＬ −１０および／またはＭＣＡＦまたはＩＬ−１が発病性役割を有している病気の場合には、ＩＴ９３０２は治療的価値を有しているかもしれない。実施例９ＩＴ９３０２およびＩＬ−１０はＣＤ４＋Ｔリンパ細胞におけるＩＬ-４の産生を誘導する背景ＩＬ−１０と同様、ＩＬ−４はＴ_H２タイプのＣＤ４＋Ｔ細胞の産生物である。組換体ヒトＩＬ−１０は培養されたヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−４の産生を誘導することが観察された。これは、それ自身の免疫抑制機能に加えて、ＩＬ−１０はまた他の免疫抑制物質サイトカイン、ＩＬ−４の産生を誘導することを意味する。したがって、ＩＴ９３０２もまたＣＤ４＋Ｔ細胞によるＩＬ−４の産生を誘導するかどうかを試験した。このように、「Ｔ細胞化学走化のための方法」に記載されたようにして精製し、 “ＣＤ４＋Ｔリンパ細胞によるＩＬ−４産生の測定”のセクションに記載されたようにして培養したＣＤ４＋Ｔ細胞をＩＴ９３０２（１０ｎｇ／ｍｌ）またはＩＬ−１０（１００ｎｇ／ｍｌ）によって３日間刺激した。サイトゾルフラクションを集めて、ウェスタン・ブロッティング（図１１）およびヤギの抗-ヒトＩＬ−４ポリクローナル抗体を用いてそのＩＬ−４含量を解析した。図１１に示されているように、ＩＬ−１０およびＩＴ９３０２は、培養された正常なヒトＣＤ４＋Ｔ細胞によりＩＬ−４の産生を誘導することが観察された。実施例１０ＩＴ９３０２は混合白血球反応（ＭＬＲ）中のＴＮＦ-αの産生を阻害する混合白血球反応は部分的に、反応中のＴＮＦ-αの産生に依存することが示されてきている。ＩＴ９３０２はＭＬＲをそれほど減少させないで、ＭＬＲ中のＴＮＦ-αの産生をかなり減少させることがわかった。このように、ＭＬＲは、ヒト白血球を精製し次いで同種異系のドナーからの細胞１００万個／ｍｌを４日間培養して行った。培養が完了する前に、ひとつの細胞群を２分間β線照射した。サイトゾル蛋白質フラクションを「ＣＤ４＋Ｔリンパ細胞によるＩＬ−４産生の測定」のセクションに記載されたようにして精製し、うさぎの抗−ヒトＴＮＦ-α抗体を用いてウェスタン・ブロッティングを行った。図１２に示されているように、ヒト混合白血球反応中にＴＮＦ-αの産生におけるかなりの減少が観察された。実施例１１ブタのＬＰＳ誘導ショックおよび白血球減少症のＩＴ９３０２を用いた調節ＩＴ９３０２が、ＴＮＦ-αおよびＩＬ-８を含むサイトカイン産生を調節することが見いだされ、ブタのＩＬ-１０の公表された配列（ブランコ（Ｂｏｌａｎｃｈｏ）他、１９９５年）（参照：ＣＯＯＨ末端ペプチドに対する同一性に関する図２）によって支持されて以来、ＩＴ９３０２がブタにおけるＬＰＳ誘導白血球減少症の過程を調節することができるかどうかを試験した（図１３）。予備試験では、０.１ｍｇ／ｋｇのＩＴ９３０２を静脈注射することにより、２μｇ／ｋｇのＬＰＳをブタ（Ｎ＝３）に静脈注射した作用をどのように調節されるかを試験した。ＩＴ９３０２はＬＰＳ注射の３０分前に注射し、図１３に記載の通り血液試料を抜き出した。全白血球数および微分細胞数を測定し、好中球白血球の全数をこれらの結果から計算した。示したように、ＬＰＳ注射により一時的なロイコペニアが起こることが観察された。しかし図に示されるように、ＩＴ９３０２の注射により白血球減少が予防された。実施例１２合成ポリペプチドＩＴ９３０２に対する抗体合成ポリペプチドＩＴ９３０２の９５％以上の高純度のものをケム・エン・テック（Ｋｅｍ-Ｅｎ-Ｔｅｃ）社〔コペンハーゲン、デンマーク〕から購入した。このポリペプチドはまたメーカーによりキーホール・リンペット・ヘモシアニン（ＫｅｙｈｏｌｅＬｉｍｐｅｔＨｅｍｏｃｙａｎｉｎ；ＫＬＨ）に結合されている。可溶性のＩＴ９３０２／ＫＬＨはポリペプチド単独よりもより免疫原性があり（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎｉｃ）、ＥＬＩＳＡまたはウェスターンブロッティングのコントロール蛋白質として用いることもできる。ウサギの免疫ＫＬＨに結合し、完全なフロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）の補助薬と一緒にエマルジョンとした２５０μｇのＩＴ９３０２を、腹孔内および皮下注射用として用いた。注射は２週間間隔で４回繰り返し、ウサギはその後８日目と１２日目に採血した。その後、不完全フロイント補助薬中にＩＴ９３０２／ＫＬＨの２５０μｇを補助注射として、皮下注射で１カ月間隔で投与した。ドット-ブロットイミュノアッセイまたはウェスタン・ブロッティングによりＩＴ９３０２抗体の形成を試験した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/395 9356−4ＨＣ０７Ｋ 16/24 9358−4ＢＣ１２Ｐ 21/08 Ｃ０７Ｋ 7/06 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 ＡＤＵ 14/52 ＡＢＤ 16/24 ＡＤＹ // Ｃ１２Ｐ 21/08 ＡＥＤ (Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡＣ１２Ｒ 1:91） (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．ヒトインターロイキン１０以外のポリペプチドであって、以下の性質：ａ）ヒト単球によるＩＬ−８の自発産生阻害の誘導、ｂ）ヒト末梢血液単核球（ＰＢＭＣ）によるＩＬ−１β誘導性ＩＬ−８産生の阻害の誘導、ｃ）ヒト単球によるインターロイキン−１受容体アンタゴニスト様タンパク質（ＩＲＡＰ）産生の誘導、ｄ）インビトロにおけるＣＤ８+ヒトＴリンパ球の化学走化性遊走の誘導、ｅ）ｒｈＩＬ−１０に対する非反応を誘導する、ヒトＣＤ８＋Ｔ細胞の脱感作、ｆ）ＩＬ−８によるＣＤ４＋ヒトＴ白血球の化学走化反応の抑制、ｇ）ＭＣＡＦ／ＭＣＰ−１に対するヒト単球の化学走化性反応の抑制、ｈ）ヒトＩＬ−１０と異なり、ヒト単球上へのクラスII ＭＨＣの発現を阻害しない、ｉ）正常ヒトＣＤ４＋Ｔ培養細胞のＩＬ−４産生の誘導、ｊ）ヒト混合リンパ球反応におけるＴＮＦαの産生の減少の少なくとも一つを有するポリペプチド。２．下式：（式中、Ｘ₄およびＸ₅はそれぞれ独立してMet、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される、Ｘ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される）で示される構造を有するポリペプチド。３．下式：（式中、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅はそれぞれ独立してMet、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される、Ｘ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される）で示される構造を有するポリペプチド。４．下式：（式中、Ｘ₂はTyrまたはPheである、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅はそれぞれ独立してMet 、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される、Ｘ₆はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される）で示される構造を有するポリペプチド。５．下式：（式中、Ｘ₁はAlaまたはGlyである、Ｘ₂はTyrまたはPheである、Ｘ₃、Ｘ₄およびＸ₅はそれぞれ独立してMet、Ile、LeuおよびValからなる群から選択される、Ｘ₆ はAsp、GlnおよびGluからなる群から選択される）で示される構造を有するポリペプチド。６．Ｘ₁がＡｌａである、請求項２〜５いずれかに記載のポリペプチド。７．Ｘ₁がＧｌｙである、請求項２〜５いずれかに記載のポリペプチド。８．Ｘ₂がＴｙｒである、請求項２〜７いずれかに記載のポリペプチド。９．Ｘ₂がＰｈｅである、請求項２〜７いずれかに記載のポリペプチド。１０．Ｘ₃がＭｅｔである、請求項２〜９いずれかに記載のポリペプチド。１１．Ｘ₃がＩｌｅである、請求項２〜９いずれかに記載のポリペプチド。１２．Ｘ₃がＬｅｕである、請求項２〜９いずれかに記載のポリペプチド。１３．Ｘ₃がＶａｌである、請求項２〜９いずれかに記載のポリペプチド。１４．Ｘ₄がＭｅｔである、請求項２〜１３いずれかに記載のポリペプチド。１５．Ｘ₄がＩｌｅである、請求項２〜１３いずれかに記載のポリペプチド。１６．Ｘ₄がＬｅｕである、請求項２〜１３いずれかに記載のポリペプチド。１７．Ｘ₄がＶａｌである、請求項２〜１３いずれかに記載のポリペプチド。１８．Ｘ₅がＭｅｔである、請求項２〜１７いずれかに記載のポリペプチド。１９．Ｘ₅がＩｌｅである、請求項２〜１７いずれかに記載のポリペプチド。２０．Ｘ₅がＬｅｕである、請求項２〜１７いずれかに記載のポリペプチド。２１．Ｘ₅がＶａｌである、請求項２〜１７いずれかに記載のポリペプチド。２２．Ｘ₆がＡｓｐである、請求項２〜２１いずれかに記載のポリペプチド。２３．Ｘ₆がＧｌｎである、請求項２〜２１いずれかに記載のポリペプチド。２４．Ｘ₆がＧｌｕである、請求項２〜２１いずれかに記載のポリペプチド。２５．請求項２〜２４いずれかに記載のアミノ酸配列を有する物質またはポリペプチド。２６．ヒトＩＬ−１０のサブ配列または配列を含有し、ｖＩＬ−１０に対するホモロジーが６６％であり、ｍＩＬ−１０に対するホモロジーが４４％である、ポリペプチド。２８．以下の群：からなる群より選択される、ポリペプチド。２９．実質的に純粋な形態である、請求項１〜２８いずれかに記載の物質またはポリペプチド。３０．請求項２〜２９いずれかに記載のポリペプチドをコードするヌクレオチド配列。３１．請求項１〜２９いずれかに記載の物質またはポリペプチドに対して特異的に結合する抗体。３２．配列番号１のアミノ酸配列を有するポリペプチドに特異的に結合する抗体。３３．ポリクローナル抗体である、請求項３１または３２いずれかに記載の抗体。３４．モノクローナル抗体である、請求項３１または３２いずれかに記載の抗体。３５．請求項１のａ）からｇ）に記載の活性の１または複数を中和することができる請求項３１〜３４いずれかに記載の抗体。３６．請求項１のａ）からｊ）に記載の活性の１または複数を中和することができ、モノクローナル１９Ｆ１ではない物質。３７．請求項３６記載の物質を含有する医薬組成物。３８．請求項３６記載の物質の、高濃度のｈＩＬ−１０および／またはｖＩＬ −１０を減少もしくは中和するための使用。３９．卵巣癌および／またはエイズの治療または予防のための医薬組成物を製造するための請求項３６記載の物質の使用。４０．卵巣癌および／またはエイズの処置が必要な患者に対して、請求項３６記載の物質の治療または予防有効量を投与することを含む、卵巣癌および／またはエイズを予防および／または治療する方法。４１．ｈＩＬ−１０アンタゴニスト活性を有する物質の、卵巣癌および／またはエイズの治療または予防のための医薬組成物の製造のための使用。４２．卵巣癌および／またはエイズの処置が必要な患者に対して、ｈＩＬ−１０アンタゴニスト活性を有する物質の治療または予防有効量を投与することを含む、卵巣癌および／またはエイズを予防および／または治療する方法。４３．請求項１〜２９いずれかに記載の物質またはポリペプチドを含有する医薬組成物。４４．表３に示した疾患の１または複数の治療への、請求項１〜２９いずれかに記載の物質またはポリペプチドの使用。４５．表３に示した疾患の１または複数を治療するための医薬組成物の製造のための、請求項１〜２９いずれかに記載の物質またはポリペプチドの使用。４６．卵巣癌および／またはエイズの処置が必要な患者に対して、請求項１〜２９いずれかに記載の物質またはポリペプチドの治療または予防有効量を投与することを含む、卵巣癌および／またはエイズを予防および／または治療する方法。