JPH10502401A

JPH10502401A - 非抗原性アミン誘導ポリマーおよびポリマー複合体

Info

Publication number: JPH10502401A
Application number: JP8503504A
Authority: JP
Inventors: ビー．グリーンワルド，リチャード; マルチネズ，アンソニー; ペンドリ，アナプルナ
Original assignee: エンゾン，インコーポレーテッド
Priority date: 1994-06-24
Filing date: 1995-06-23
Publication date: 1998-03-03
Also published as: DE69532674D1; EP0769955B1; CA2191726A1; ATE261310T1; WO1996000080A1; US5730990A; US5902588A; US6177087B1; EP0769955A1; AU3129895A; EP0769955A4

Abstract

(57)【要約】ｐＩ及び／又はｐＨを最適化を調製する部分を包含する実質的に非抗原性のポリマーが開示されている。このポリマーは、アミンをベースとしたポリマーの合成及び求核試薬と結合する活性ポリマーの形成に有用である。また、複合体並びにこの複合体を用いて調製及び治療する方法をも開示されている。

Description

【発明の詳細な説明】非抗原性アミン誘導ポリマーおよびポリマー複合体関連出願の相互参照この出願は、1994年6月24日に出願された米国特許出願第08/265,593号の一部継続出願である。発明の背景１．発明の分野本発明は、生物学的活性を有する物質のin vivoでの循環寿命を延ばすのに有用なポリマーに関する。また、本発明は、このポリマーを用いて形成された複合体にも関する。２．先行技術の説明ペプチドまたはポリペプチドをポリ（エチレングリコール）ＰＥＧおよび類似の水溶性ポリ（アルキレンオキシド）と結合するという最初の考え方は、米国特許第4,179,337号に開示されているが、その開示を本明細書中に参考として組み入れる。こうしたポリマーで修飾されたポリペプチドは免疫原性または抗原性の低下を示し、修飾されていないものよりも長く血流中を循環する。ポリ（アルキレンオキシド）を結合するために、ヒドロキシ末端基の一つを反応性官能基に変換する。この過程は、しばしば「活性化」と称され、その生成物は「活性ポリ（アルキレンオキシド）」と呼ばれる。他の実質的に非抗原性のポリマーも同様に「活性化」され、または官能基化される。活性ポリマーを、結合部位として機能する求核性官能基を有する治療薬と反応させる。結合部位として通常使用される求核性官能基の一つは、リジンのイプシロン−アミノ基である。遊離のカルボキシル基、適当に活性化されたカルボニル基、酸化された炭水化物部分、ヒドロキシル基およびメルカプト基も結合部位として用いられている。これまでのポリマー複合体に見られる欠点は、複合体が、非修飾タンパク質、酵素などとは異なるｐＩを有することである。例えば、ポリマーがリジンのアミノ基と結合した結果、等電点が低下し、最適ｐＨ、すなわち最大の生物活性が認められるｐＨが変化する。場合によっては、元のｐＩに戻すことが有益なこともあるし、または生理的ｐＨでの生物活性を最適にするためにポリマー複合体のｐＩ値を変化させることが有益なこともある。本発明はこのような問題を解決する。発明の要約本発明の一つの態様において、下記の式を有するアミンをベースとしたポリマー中間体が与えられる：（Ｉ）Ｒ−Ｂ式中、（Ｒ）は、水溶性で、実質的に非抗原性のポリマー残基であり、（Ｂ）は好ましくは第二級アミンまたは第三級アミンである。適当な第二級アミンは下記の式を有する：（II） −ＮＨ（ＣＨ₂）_nＸ式中、（ｎ）は１−１２までの整数（１、１２も含む）であり；ＸはＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン、アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択される。適当な第三級アミンは下記から選択できる：式中、（ｍ）は０−１２までの整数（０、１２も含む）であり；（Ｘ）はＸはＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン，アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択され；（Ｙ）はＮまたはＣＨであり；及び（Ｚ）はＣ_1-6アルキルである。ポリマーは、約200から約100,000までの分子量を有するポリ（エチレングリコール）のようなポリ（アルキレンオキシド）残基が望ましい。さらに、ポリマーは、Ｂ部分の反対側の（すなわち遠位の）末端をＣ_1-4アルキル基で覆うことが望ましい。本発明の別の態様において、下記の式を有する本質的に非抗原性のポリマーが与えられる：（VII）Ｒ−Ｂ'-Ｗ−Ｌ式中、（Ｒ）は上記の定義のとおりであり；（Ｂ'）はＮＹ（Ｙは、ＨまたはＣ₁ _-6 アルキル若しくはシクロアルキル）であり；（Ｗ）はＣ_1-6アルキルのようなスペーサー基であり、（Ｌ）は求核試薬と結合する能力を有する官能基である。本発明の別の態様は、本文において求核試薬と称される生物学的活性を有する物質を含有するポリマー複合体、ならびに複合体の調製方法を包含する。発明のこのような態様において、複合体は下記の式を有する：［Ｒ−Ｂ'-Ｗ−Ｌ¹］_z−（求核試薬）式中：（Ｒ），（Ｂ'）および（Ｗ）は上記で定義したとおりであり；（Ｌ¹）は（Ｒ−Ｂ'-Ｗ）と求核試薬との共有結合を表し；（ｚ）は求核試薬に結合したポリマーの数を表す。生物学的活性を有する物質は、合成されたか天然から単離されたかに関わらず、タンパク質、ペプチド、酵素、医薬品または有機物部分を包含する。結合方法は、置換反応を受ける能力を有する求核試薬、すなわち生物学的活性を有する物質、を上記ポリマーと接触させることを包含する。反応は、生物学的活性の少なくとも一部は維持しつつ、結合を生じるのに十分な条件下で行われる。また、本発明は、様々な疾病および健康状態を治療する方法をも包含する。この態様において、治療の必要な哺乳動物に、本発明のポリマーに結合するタンパク質、酵素、または有機物部分のような生物学的活性を有する物質を含有する複合体の、有効な量が投与される。本発明の主な利点の一つは、アミン誘導ポリマーによって、ｐＩおよび／またはｐＨを調整する効果が複合体に与えられることである。したがって、複合体に包含される生物活性物質の等電点は、所望の値に調整することができる。このことは、従来の活性ポリマーで観察される影響、すなわち等電点の変化が観察されしばしば最適活性に悪影響を及ぼすこと、と対比されるべきである。さらに、アミンを有する部分の一部分としてアニオン基を包含する本発明の態様において、複合体のin vivoでの循環寿命は腎臓の濾過の減少によりさらに延長される。図面の簡単な説明第１図は、式（Ｉ）Ｒ−Ｂポリマー中間体並びに実施例１および３−６の化合物を調製するために本発明にしたがって実施される合成法の概略図である。第２図は、実施例２および７−９記載の化合物を調製するために本発明にしたがって実施される合成法の概略図である。第３図は、実施例１０−１１において実施される反応の概略図である。第４図は、実施例１２−１６において実施される反応の概略図である。発明の詳細な説明１．ポリマー残基室温で水溶性のポリ（アルキレンオキシド）（ＰＡＯ）から本発明の活性ポリマーを調製することが望ましい。メトキシポリ（エチレングリコール）（ｍＰＥＧ）のようなモノ−置換ポリアルキレンオキシド誘導体、またはＣ₁−Ｃ₄末端基を有するような他の適当なアルキル−置換ＰＡＯ誘導体がこのグループに含まれる。モノメチルＰＥＧホモポリマーのような直鎖非抗原性ポリマーが望ましい。他のポリ（エチレングリコール）ホモポリマーのような別のポリアルキレンオキシド、ポリプロピレングリコール、他のアルキル−ポリ（エチレンオキシド）ブロック共重合体、およびポリ（アルキレンオキシド）のブロック共重合体のコポリマーも有用である。国際公開番号WO95/11924を有する本願出願人のＰＣＴ国際出願に開示されているような分岐鎖ＰＡＯも有用である。WO95/11924の開示を、参考として本明細書中に組み入れる。他の有用なポリマー物質は、デキストランのような物質、ポリビニルピロリドン、ポリアクリルアミド、または他の類似の非免疫原性ポリマーを包含する。当業者ならば、これらのポリマーを官能基化することも可能であり、それらが本発明の範囲に包含されることが分かるであろう。上記は単に例示であって、ここで使用するのに適した非抗原性ポリマーの種類を制限することを意図するものではない。このように、（Ｒ）は水溶性で、実質的に非抗原性のポリマー残基である。（Ｒ）がＰＥＧまたはｍＰＥＧである場合には、約200から約100,000ダルトンまでの分子量が望ましく；約1,000-50,000ダルトンの分子量がさらに望ましく、約2, 500-25,000ダルトンの分子量が最も望ましい。２．活性ポリマーのアミン部分本発明の一つの態様において、アミンをベースとするポリマー中間体が提供される。この中間体のアミン部分は、第二級、第三級または第四級アミン部分でもよく、式（Ｉ）において（Ｂ）として表される。しかしながら、第二級または第三級アミンのいずれかを用いることが望ましい。（Ｂ）として第二級アミンを選択する場合には、式（II）のアミンが望ましい：（II） −ＮＨ（ＣＨ₂）_nＸ式中、（ｎ）は１−１２までの整数（１、１２も含む）であり；ＸはＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン、アリール部分および複素芳香族部分からなる一群から選択される。標準的な有機合成方法を用いてこのような第二級アミン部分を合成することができ、または市販の試薬を用いてそれらを容易に得ることができる。このような基準に合致した第二級アミンは、エタノールアミンのような第一級アミン、ベータ−アラニンエチルエステル、パラメトキシベンジルアミンなどを包含するが、それらに限定されない（Ｂ）として第三級アミンを望むならば、式（III）−（V I）のアミンが望ましい：式中、（ｍ）は０−１２までの整数（１、１２も含む）であり；（Ｘ）はＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン、アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択され；（Ｙ）はＮまたはＣＨであり；（Ｚ）はＣ_1-6アルキルである。標準的な有機合成方法を用いてこの第三級アミン部分を合成することができ、または市販品からそれらを容易に得ることができる。このような基準に合致した第三級アミンは、Ｎ−メチルエタノールアミンのような第二級アミン、ピペリジン-3-メタノール、Ｎ−ヒドロキシプロピルピペラジン、サルコシンエチルエステルなどを包含するが、それらに限定されない。３．ポリマー中間体の合成従来の反応法を用いて、式（Ｉ）のポリマー中間体を合成することができる。例えば、ｍＰＥＧ−ＣｌをAldrichから市販されているエタノールアミンまたは他のあらゆる適当な第一級アミンと、水中、密閉容器内で、約６０℃の温度で反応させて、第二級アミンポリマー中間体を形成することができる。同様に、ｍＰＥＧ−Ｃｌを同様の条件下で、Ｎ−メチルエタノールアミンのような第二級アミンと反応させて、第三級アミンポリマー中間体を形成することができる。本発明のさらに別の態様において、アミンを有する官能基（Ｂ）は、酸部分を包含することができ、酸部分をアルキル部分の一部として包含することが望ましい。適当な酸は、スルホン酸塩、カルボン酸塩、およびホスホン酸塩を包含するがそれらに限定されない。実施例１２−１６に示すように、リジンまたはセリンのような三官能性スペーサー部分を、まず、ＰＥＧ−スクシンイミジルコハク酸エステルまたはＰＥＧ−スクシンイミジル炭酸エステルのような活性ポリマーと反応させる。つぎに、中間体の（Ｂ）部分の残存する官能基のうちの一つを修飾することによって、アニオン基を付加する。クロロエタンスルホン酸ナトリウム塩、ホスホン酸エステル若しくは塩、またはエチルブロモアセタートのような試薬を使用することができる。（エチルブロモアセタートはまずカルボン酸エステルを形成し、次いで、けん化されて塩となる。）最後に、（Ｂ）の第三の官能基が、下記第４節記載の脱離基（Ｌ）によって修飾される。上記は、中間体を調製するために有用な合成法の単なる例示にすぎない。本発明の意図から外れることなく、他の代わりとなる方法および試薬を使用することができると理解されるべきである。本質的に、個々の（Ｒ）および（Ｂ）は、求核性官能基間の反応によって結合する。個々の（Ｒ）は適当に官能基化され、（すなわちｍＰＥＧ−ＣｌのようなｍＰＥＧ−ハロゲン化物；ＰＥＧ−トシラートのようなＰＥＧスルホン酸エステルなど）、求核置換を受けて（Ｂ）と結合する。ハロゲン化物またはスルホン酸エステルを用いたポリマーの官能基化は、当業者にとって容易であり明白である。４．活性アミンをベースとした誘導ポリマー本発明のまた別の態様において、上記の中間体は、生物学的活性を有する求核試薬との結合に使用できる活性ポリマーの一部として包含される。ポリマーは下記の式を有する：（VII）Ｒ−Ｂ'-Ｗ−Ｌ式中、（Ｒ）は水溶性の実質的に非抗原性のポリマー残基であり；（Ｂ'）はＮＹ（Ｙは、ＨまたはＣ_1-6アルキル若しくはシクロアルキル）であり；（Ｗ）はスペーサー基であり、（Ｌ）は求核試薬と結合する能力を有する官能基である。ポリマーの（Ｒ−Ｂ'）部分は、（Ｒ−Ｂ）に関する上記の記載と同様に調製することができる。式（VII）の（Ｗ）部分は（Ｒ−Ｂ'）と脱離基（Ｌ）との間のスペーサー基を表す。直鎖または分岐鎖の低級アルキルすなわちＣ_1-4，アラルキル、アリールまたはヘテロアリール基を使用できることが見い出された。これに関して、代わりとなる（Ｗ）置換基は、ベンジル、置換ベンジル、フェニルエチル、置換フェニルエチル、フェニル、置換フェニル、チオフェン誘導体、ピリジン誘導体、ヒドロキシアニリン(hydroxyanaline)などを包含する。上記（Ｗ）置換基は、適当な部分の例示であり、これらに限定されるものではないと理解されるべきである。当業者は、上記と機能的に同等なものも（Ｗ）として当てはめられることを認識するであろう。スペーサーは、望ましくない副反応を防ぐために系の幾何配置を調整し、それによって所望のポリマー−求核試薬複合体の収率を増加させる。望ましいスペーサー基（Ｗ）は、１．3-イソシアナートプロピオン酸エチル；および２．2-アミノ酪酸エチルを包含する。スペーサー基は市販されており、または標準的な実験法を用いて合成できる。さらに、スペーサー基を簡単な求核または求電子置換反応によってポリマーの（Ｒ−Ｂ）部分に結合することができる。式（VII）の部分（Ｌ）は、求核試薬との結合のために、本発明のアミンをベースとしたポリマーを「活性化」する脱離基を表す。（Ｌ）は以下から選択できる：Ｉ．下記のような、アミノ基と反応できる官能基：ａ）炭酸エステル、例えばｐ−ニトロフェニルまたはスクシンイミジル；ｂ）カルボニルイミダゾールｃ）アズラクトンｄ）環状イミドチオン；ｅ）イソシアナート若しくはイソチオシアナート；またはｆ）他の活性エステル。 II．下記のような、カルボキシル基および反応性カルボニル基と反応できる官能基：ａ）第一級アミン；またはｂ）ヒドラジンおよびヒドラジド官能基、例えばアシルヒドラジド、カルバゼート(carbazate)、セミカルバゼート、チオカルバゼートなど。 III．不飽和マレイミドのような、メルカプト基と反応できる官能基。５．アミンをベースとした活性ポリマーの合成従来の反応技法を用いて活性ポリマーを形成する。例えば、無水塩化メチレン中、約２５℃の温度で、アルコール型の式（Ｉ）の中間体（Ｒ−Ｂ）または式（ VII）の中間体（Ｒ−Ｂ'-Ｗ）を、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドおよびジイソプロピルカルボジイミド（いずれもAldrichから入手できる）と反応させることができる。トルエン、ＴＨＦなどのような他の不活性有機溶媒を使用することも可能で、温度範囲は１−１００℃まで適用できる。第二級および第三級アミン含有活性ポリマーの両者について、合成反応の概略を第１−４図に示す。６．結合に適した生物学的に活性な物質ポリマーと結合した求核試薬は「生物学的に活性」と記述される。しかしながら、この用語は、生理的活性または薬理的活性に限定されない。たとえば、酵素を含有するような求核試薬複合体は、有機溶媒中で反応を触媒することができる。同様に、コンカナバリンＡ、免疫グロブリンなどのようなタンパク質を含有する本発明のポリマー複合体は、検査室診断としても有用である。すべてのこのような複合体の重要な特徴は、修飾されない生物活性物質に関連する活性の少なくとも一部が維持されることである。本発明の別の態様において、複合体は生物学的に活性であり、多数の治療へ適用される。必要な生物活性物質を含有するポリマー複合体の有効量を投与することによって、生物学的活性物質を包含する治療を必要とする哺乳動物を治療することができる。例えば、酵素補充療法または血液因子を必要とする哺乳動物に、必要な物質を含有するポリマー複合体を与えることができる。発明において、治療上有効な複合体の投与量は当業者に明白であろう。しかしながら、投与量は、複合体中に存在する生物活性物質に基づいて算出されると考えられる。本発明において関心のある生物学的活性を有する求核試薬は、タンパク質、ペプチド、ポリペプチド、酵素、医薬品のような天然の有機分子および合成された有機分子などを包含するが、それらに限定されない。関心のある酵素は、炭水化物特異的酵素、タンパク質分解酵素、酸化還元酵素、転移酵素、加水分解酵素、脱離酵素、異性化酵素および合成酵素を包含する。関心のある酵素の例は、アスパラギナーゼ、アルギナーゼ、アルギニンデアミナーゼ、アデノシンデアミナーゼ、スーパーオキシドジスムターゼ、エンドトキシナーゼ、カタラーゼ、キモトリプシン、リパーゼ、ウリカーゼ、アデノシンジホスファターゼ、チロシナーゼ、およびビリルビンオキシダーゼを包含するが、特定の酵素に限定されない。関心のある炭水化物特異的酵素は、グルコースオキシダーゼ、グルコシダーゼ、ガラクトシダーゼ、グルコセレブロシダーゼ、グルクロニダーゼなどを包含するが、特定の酵素に限定されない。関心のあるタンパク質、ポリペプチド、およびペプチドは、ヘモグロビン、血清タンパク質（例えば第VII、第VIII、および第IX因子を包含する血液因子）、免疫グロブリン、サイトカイン（例えばインターロイキン、α−、β−およびγ −インターフェロン）、顆粒球コロニー刺激因子を包含するコロニー刺激因子、血小板由来増殖因子並びにホスホリパーゼ−活性化タンパク質（ＰＬＡＰ）を包含するがそれらに限定されない。一般的な生物学上または治療上興味のある他のタンパク質は、インスリン、レクチンやリシンのような植物タンパク質、腫瘍壊死因子および関連の対立遺伝子、組織増殖因子（例えばＴＧＦαまたはＴＧＦβ）や上皮増殖因子のような増殖因子、ホルモン、ソマトメジン、エリスロポイエチン、色素性ホルモン、視床下部放出因子、抗利尿ホルモン、プロラクチン、絨毛性ゴナドトロピン、卵胞刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、組織プラスミノーゲン活性化因子、などを包含する。関心のある免疫グロブリンは、ＩｇＧ，ＩｇＥ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤおよびそれらのフラグメントを包含する。インターロイキン、インターフェロンおよびコロニー刺激因子のようなある種のタンパク質は、通常、組換え技術を利用した結果として、グリコシル化されない形でも存在する。非グリコシル化型も本発明の生物学的に活性な求核試薬に包含される。また、本発明の生物学的に活性な求核試薬は、in vivoで生物活性を示すポリペプチドのあらゆる部分をも包含する。これは、アミノ酸配列、アンチセンス部分など、抗体フラグメント、一本鎖結合抗原（例えば米国特許第4,946,778号参照。その開示を参考として本文に組み入れる。）、抗体またはフラグメントの結合を包含する結合分子、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、触媒抗体、ヌクレオチドおよびオリゴヌクレオチドを包含する。組織培養、動物起源からの抽出、または組換えＤＮＡ技法のような当業者に公知の方法を用いて、タンパク質またはその部分を調製し、または単離することができる。タンパク質、ポリペプチド、アミノ酸配列などのトランスジェニックソースも考えられる。こうした物質は、トランスジェニック動物、すなわちマウス、ブタ、ウシなどから得られ、この場合タンパク質は乳、血液または組織に発現される。トランスジェニック昆虫およびバキュロウイルス発現系も、供給源として考えられる。さらに、変異型のタンパク質、例えば変異ＴＮＦおよび／または変異インターフェロンも、本発明の範囲に包含される。関心のある他のタンパク質は、ブタクサ、Ｅ抗原、ミツバチ毒液、ダニアレルゲンなどのようなアレルゲンタンパク質である。しかしながら、有用な生物学的に活性な求核試薬はタンパク質およびペプチドに限らない。本質的にあらゆる生物学的に活性な化合物が本発明の範囲に包含される。医薬品、すなわち抗腫瘍剤（たとえばタキソール、タキサン、カンプトテシン、アントラサイクリン、メトトレキサートなど）、心臓血管薬、抗腫瘍薬、抗感染症薬、抗不安薬、胃腸薬、中枢神経系活性化剤、鎮痛剤、排卵誘発剤または避妊薬、抗炎症剤、ステロイド剤、抗尿酸血症薬、心臓血管薬、血管拡張剤、血管収縮剤などのような化学療法剤分子は、いずれも本発明のアミン含有ポリマーと結合することができる。上記は、本発明のポリマーとの結合に適した生物学的活性を有する求核試薬の例示である。特に言及されないが適当な求核基を有する生物学的活性物質も意図され、本発明の範囲に包含されると理解されるべきである。７．生物学的に活性な複合体の合成標準的な化学反応によって、一または二以上の活性ポリマーを生物学的に活性な求核試薬に結合することができる。複合体は下記の式で表される：（VIII）［Ｒ−Ｂ'-Ｗ−Ｌ¹］_z−（求核試薬）式中：（Ｒ）は水溶性の実質的に非-抗原性のポリマー残基であり；（Ｂ'）はＮＹ（Ｙは、ＨまたはＣ_1-6アルキル若しくはシクロアルキル）であり；（Ｗ）はスペーサー部分であり、（Ｌ¹）は（Ｒ−Ｂ'-Ｗ）と求核試薬との間の共有結合を表し、及び（ｚ）は求核試薬に結合したポリマーの数を表す。変数（ｚ）は生物学的に活性な求核試薬と結合したポリマー数を表す整数≧１である。（ｚ）の上限は、求核試薬の利用可能な結合部位の数、および当業者の求めるポリマー結合の程度によって決まるであろう。公知の技法を用いて化学量論的反応量を変化させることによって、結合程度を変更することができる。化学量論的に過剰量の活性ポリマーを求核試薬と反応させることによって、一より多くのポリマーを求核試薬に結合することができる。求核試薬のｐＨ必要条件に応じて、緩衝作用のある水性反応溶媒中で、生物学的に活性な求核試薬を活性ポリマーと反応させることができる。反応の最適ｐＨは一般に約６．５から約８．０の間であって、タンパク質性／ポリペプチド性物質に関しては約７．４が望ましい。有機／化学療法薬部分を非−水系で反応させることもできる。求核試薬の安定性や反応効率などにとって最適な反応条件は、当業者の水準の範囲内にある。望ましい温度範囲は、４℃から３７℃の間である。反応溶媒の温度は、求核試薬が変性または分解する可能性のある温度を超えることはできない。求核試薬を過剰量の活性ポリマーと反応させることが望ましい。反応後、例えば、透析濾過、カラムクロマトグラフィー、それらの組み合わせなどによって、複合体を回収し、精製する。本発明の活性化した非抗原性ポリマーは、生物学的に活性な物質との結合において、特に最適ｐＩおよび／またはｐＨの変更が必要である場合には、新規で有用な手段となることが容易に理解されるであろう。実施例以下の実施例は限定的ではなく、本発明の特定の態様を実例として説明する。すべての部および百分率は、特に言及しない限り重量基準であり、すべての温度は摂氏である。実施例中のすべての合成物に付随する番号は、図面中の番号に対応する。材料約5,000の分子量を有するメトキシポリ（エチレングリコール）（ｍ−ＰＥＧ）は、ユニオンカーバイド（Union Carbide）より購入した。すべてのポリエチレングリコールは、特に言及しない限り、分子量5,000である。溶媒は、ウィスコンシン州ミルウォーキーのアルドリッチケミカル（Aldrich Chemical）から購入した。調製されたそれぞれの生成物を、Ｃ-13 ＮＭＲで構造的に確認した。実施例１ｍ−ＰＥＧ−Ｃｌ：総量１kg（0.2mol）のｍ−ＰＥＧ−ＯＨを高真空下におき、およそ４時間後に気体（Ｈ₂Ｏ）の発生がやむまで、攪拌しながら70℃に加熱した。温度を50℃に下げた後、100ml（1.4mol）の塩化チオニルを添加した。この混合物を窒素中70 ℃で一晩攪拌し、30℃に冷却して、エチルエーテルで滴定し、990g（収率99%）の生成物を得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；ＣＨ₂Ｃｌ，42.3。実施例２ｍ−ＰＥＧピペリジンメタノール（７）：水100ml中のｍ−ＰＥＧ−Ｃｌ25.0g(5.0mmol)および3-ピペリジンメタノール（６）5.75g(50mmol)の混合物を250mlポリプロピレン容器に入れた。容器を密閉し、60℃の水浴中に48時間保持した後、室温まで冷却し、減圧蒸留によって溶媒を除去した。残留物を2-プロパノールから再結晶し、生成物（７）を得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；ＣＨ₂（環）,23.94，26.47;ＣＨＣＨ₂ＯＨ,37.56；ＣＨ₂Ｎ，53.91，56.96，57.38；ＣＨ₃Ｏ，57.93；ＣＨ₂ＯＨ，65.05 。実施例３ｍ−ＰＥＧピペラジンプロパノール（２）：水100ml中のｍ−ＰＥＧ−Ｃｌ25.0g(5.0mmol)およびN-ヒドロキシプロピルピペラジン（１）7.2g(50mmol)の混合物を250mlポリプロピレン容器に入れた。容器を密閉し、60℃の水浴中に48時間保持した後、室温まで冷却し、減圧蒸留によって溶媒を除去した。残留物を2-プロパノールから再結晶し、24.5g（収率96%）の生成物（２）を得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；ＣＨ₂ＣＨ₂ＯＨ,26.8 ５；ＣＨ₂Ｎ（環内），52.19，52.48；ＣＨ₂Ｎ（環外）,56.66，56.81；ＣＨ₃Ｏ，57.90;ＣＨ₂ＯＨ，62.18。実施例４化合物（３ａ）の合成トルエン（240ml）中のｍＰＥＧ−ピペラジンプロパノール（２）（16g,3.1mm ol）を２時間共沸した後、トルエン100mlを除去した。その後、３−イソシアナートプロピオン酸エチル（1.34g,9.36mmol）および二ラウリン酸ジブチルスズ（ 0.99g,1.56mmol）を、室温でこの溶液に添加した。得られた混合物を、30分間60 ℃に加熱した。減圧下で溶媒を除去し、得られた固形物を２−プロパノールから再結晶して、96％の収率で（３ａ）を得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；１ 3.43（ＯＣＨ₂ ＣＨ₃）；25.40（ＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＨ₂）；33.63（ＣＨ₂Ｃ）；35.73 （ＣＮＣＨ₂）；51.56，52.19（ＣＨ₂Ｎ環内）；53.92，56.61（ＣＨ₂Ｎ環外）； 58.11（ＯＣＨ₃）；59-60（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）；62.01（ＣＨ₂ＯＣ）；155.62（ＯＣＮ）；171.14（ＣＯＣ₂Ｈ₅）。実施例５化合物（３ｂ）の合成化合物（３ａ）（15g，2.9mmol）をＨ₂Ｏ（200ml）に溶解し、水酸化リチウム（733mg，125mmol）を添加した。その溶液を１８時間攪拌し、6N ＨＣｌを用いてｐＨを4.0 に調整した。水性溶液を塩化メチレンで抽出し、減圧下で溶媒を除去した。得られた固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂／エーテルから再結晶し、96.6%の収率で（３ｂ）を得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ； 24.21（ＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＨ₂）；33.49（ＣＨ₂Ｃ）；35.94（ＮＨＣＨ₂）；49.71，50.52（ＣＨ₂Ｎ環内）；53. 29，55.79（ＣＨ₂Ｎ環外）；58.12（ＯＣＨ₃）；61.19（ＣＨ₂ＯＣ）；155.49（ＯＣＮ）；172.96（ＣＯＨ）。実施例６Ａ．化合物（４）の合成化合物３ｂ（14g，2.71mmol）を無水塩化メチレン（70ml）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（619mg; 5.4mmol）および1'3 −ジイソプロピルカルボジイミド（683mg，5.42mmol）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌した。得られた固形物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を２−プロパノールから再結晶し、化合物（４）を94% の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃ ）δ；24.84（ＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＨ₂,ＣＨ₂，スクシンイミド）；30.94（ＣＨ₂Ｃ）； 35.74（ＮＣＨ₂）；49.84，49.98，50.05，50.74（ＣＨ₂Ｎ環内）；53.29，55.9 0（ＣＨ₂Ｎ環外）；58.15（ＯＣＨ₃）；61.48（ＣＨ₂ＯＣ）；155.56（ＣＮ）； 166.51（ＣＨ₂ＣＯ）；168.73（Ｃスクシンイミド）．Ｂ．化合物（４）とベンジルアミンとの結合による化合物（５）の合成ベンジルアミン（9μl）をＮＭＲチューブ内の化合物（４）(0.4g)のＣＤＣｌ₃ 溶液に添加した。得られた固形物を緩やかに加熱し、軽くたたいて溶解し、室温で１８時間放置した。得られた溶液の¹³ＣＮＭＲは生成物の形成を示す。このように、本発明のアミンをベースとしたポリマーは容易に求核試薬と反応し、複合体を生成することが明らかである。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ； 24.6 7（ＣＨ₂ ＣＨ₂ＣＨ₂）；24.58（ＣＨ₂遊離スクシンイミド）；34.87（ＣＨ₂Ｃ）；36.50（ＨＮＣＨ₂）；42.31，42.81（ＣＨ₂ベンジル）；50.76，51.18（ＣＨ₂ Ｎ環内）；53.58，56.16（ＣＨ₂Ｎ）；58.12（ＣＨ₃Ｏ）；61.50（ＣＨ₂ＯＣ）；126.77〜138.11（Ｃベンゼン環）；155.67（ＣＮ）；170.77（ＣＨ₂ ＣＯＮ）；172.55（ＣＯ遊離スクシンイミド）．実施例７化合物（８ａ）の合成ｍＰＥＧ−ピペリジンメタノール（７）(5g,1mmol)をトルエン(75ml)中で２時間共沸した後、トルエン30mlを除去した。この溶液に、３−イソシアナートプロピオン酸エチル(421mg,2.9mmol)および二ラウリン酸ジブチルスズ（310mg,0.49m mol)を室温で添加し、得られた混合物を３０時間６０℃に加熱する。減圧下で溶媒を除去し、得られた固形物を2-プロパノールから再結晶し、（８ａ）を91％の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；13.30（ＯＣＨ₂ ＣＨ₃）；23.32（ＣＨ₂環）;33.47（ＣＨ₂Ｃ）；35.65（ＮＣＨ₂）;34.75（ＣＨ₂環）；53.37,56. 32（ＣＨ₂Ｎ）;57.94（ＯＣＨ₃）；59.42（ＯＣＨ₂ＣＨ₃）;66.17（ＣＨ₂ＯＣ）；155.49（ＣＮ）；170.92（ＣＨ₂ ＣＯ）。実施例８化合物（８ｂ）の合成化合物(８ａ)(4.5g,0.86mmol)をＨ₂Ｏ（60ml）に溶解し、水酸化リチウム（21 6mg，5.15mmol）を添加した。その溶液を１８時間攪拌し、6N ＨＣｌを用いてｐＨを4.0 に調整した。水性溶液を塩化メチレンで抽出し、減圧下で溶媒を除去した。得られた固形物をＣＨ₂Ｃｌ₂／エーテル混合物から再結晶し、（８ｂ）を98 %の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ； 21.23，24.19（ＣＨ₂環）； 32.95（ＣＨ₂Ｃ）；133.88 （ＣＨ環）;36.12（ＮＣＨ₂）；57.99（ＯＣＨ₃）；64.90（ＣＨ₂ＯＣ）；155.27（ＯＣＮ）；173.56（Ｃ−ＯＨ）実施例９Ａ．化合物（９）の合成化合物（８ｂ）(2g,0.38mmol)を無水塩化メチレン(10ml)に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（88.3mg,0.77mmol）および1,3 −ジイソプロピルカルボジイミド（96.7mg，0.77mmol）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌した。得られた固形物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を２−プロパノールから再結晶し、化合物（９）を88％の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃ ）δ；21.67,24.65（ＣＨ₂環）；24.50（ＣＨ₂スクシンイミド）；30.62（ＣＨ₂ Ｃ）；33.36（ＣＨ環）；35.58（ＮＣＨ₂）；52.64,54.98,55.06（ＣＨ₂Ｎ）；5 7.94（ＯＣＨ₃）；155.32（ＯＣＮ）；166.31（ＣＨ₂ＣＯ）；168.60（スクシンイミド）。Ｂ．化合物（９）とベンジルアミンとの結合による化合物（１０）の合成ベンジルアミン（9.1μl）をＮＭＲチューブ内の化合物（９）(0.4g)のＣＤＣｌ₃溶液に添加した。得られた固形物を緩やかに加熱し、軽くたたいて溶解し、室温で１８時間放置した。得られた溶液の¹³ＣＮＭＲは生成物（１０）の形成を示す。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ； 21.80,21.49（ＣＨ₂環）；24.39 （ＣＨ₂スクシンイミド）；33.44（ＣＨ₂Ｃ）；36.39（ＣＨ₂Ｎ）；34.72（ＣＨ環）；42.08，42.65（ＣＨ₂ベンジルアミン）；52.51,55.07,55.98（ＣＨ₂Ｎ）；57.91（ＯＣＨ₃）；126.06〜138.03（Ｃベンゼン環）；155.53（ＯＣＮ）； 170.56（ＣＨ₂ ＣＮ）；172.31（Ｃスクシンイミド）。実施例１０ｍＰＥＧサルコシン（１２）の合成ｍＰＥＧ-Ｃｌ(25g,4.98mmol)をＮ−メチルグリシン（サルコシン）（１１）のＮａＯＨ溶液（150ml,0.33M）に添加し、その混合物を密閉ポリプロピレン容器に入れて、４日間７５℃に加熱した。この反応混合物を室温まで冷却し、希塩酸を用いてｐＨを6.0/6.5に調整した。この水性溶液をＣＨ₂Ｃｌ₂で抽出し、溶媒を減圧下で除去した。得られた固形物を2-プロパノールから再結晶して、化合物（１２）を77％の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；41.31（ＮＣＨ₃）；54.57（ＣＨ₂Ｎ）；57.85（ＣＨ₂Ｃ）；58.04（ＯＣＨ₃）；167.98（ＣＯ）。実施例１１Ａ．化合物（１３）の合成ｍＰＥＧサルコシン（１２）（18g，3.55mmol）を無水塩化メチレン（90ml）に溶解し、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（612mg,5.32mmol）およびジイソプロピルカルボジイミド（671mg，5.32mmol）を添加した。この混合物を室温で一晩攪拌した。得られた固形物を濾過し、溶媒を減圧下で除去した。粗生成物を２− プロパノールから再結晶し、化合物（１３）を94％の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；24.73（ＣＨ₂スクシンイミド）；41.60（Ｎ-ＣＨ₃）；54.5 7（ＮＣＨ₂）；54.44（ＣＨ₂Ｃ）；58.11（ＯＣＨ₃）；165.13（ＣＯ）；168.48 （Ｃスクシンイミド）．Ｂ．化合物（１３）とベンジルアミンとの結合による化合物（１４）の合成ベンジルアミン（41.45mg，0.39mmol）を無水ＣＨ₂Ｃｌ₂(5ml)中の化合物（１３）(1g，0.19mmol)に添加した。反応混合物を室温で一晩放置した。溶媒を減圧下で除去し、残留物を2-プロパノールから再結晶して、化合物（１４）を80％の収率で得た。¹³ＣＮＭＲ：（ＣＤＣｌ₃）δ；41.94（ＮＣＨ₃）；42.65（ＣＨ₂ ベンジルアミン）；56.32（ＮＣＨ₂）；58.12（ＯＣＨ₃）；60.22（ＣＨ₂Ｃ）； 126.32〜137.99（Ｃベンゼン環）；169.70（ＣＯ）。実施例１２Ｎ−イプシロン−Ｂｏｃリジン（１５）(0.246g,1mmol)及びＰＥＧ5,000-Ｎ- ヒドロキシスクシンイミドエステル（１６）(5g,1mmol)をｐＨ８のホウ酸バッファー（30ml）に添加する。この混合物を室温で約３時間攪拌した後、希塩酸で中和する。この水性溶液をジクロロメタン(3x20ml)で抽出した。有機層を乾燥し（無水Ｎａ₂ＳＯ₄）、減圧下で蒸発させ、79％の収率でＬ−リジンのＮ−イプシロン−tert.-ブトキシカルボニル−αＰＥＧカルバメート（１７）４．１ｇを得た。実施例１３Ｌ−リジンのＮ−イプシロン−tert.-ブトキシカルボニル−αＰＥＧカルバメート（１７）(5.2g;1.0mmol)をトリフルオロ酢酸およびジクロロメタン（1:2,30 ml)に溶解し、室温で１時間放置する。その溶液を減圧で蒸発乾固させ、残留物を無水エーテルで粉砕して濾過し、エーテルで洗浄し、減圧乾燥して、リジン− Ｎ−α−ＰＥＧカルバメート（１８）(3g,60％)を得た。実施例１４水20ml中のリジン−Ｎ−α−ＰＥＧカルバメート（１８）(5.1g,1mmol)とクロロエタンスルホン酸ナトリウム塩(1.84g,10mmol)との混合物を10mlポリプロピレン容器に入れる。容器を密閉し、６０℃の水浴中に４８時間保持し、その後室温まで冷却して減圧蒸留によって溶媒を除去する。残留物を2-プロパノールから再結晶して、化合物（１９）(5.5g,80％)を得た。実施例１５化合物（１９）(5.2g,1mmol)およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド(115mg,1mm ol)の無水ジクロロメタン溶液を氷水浴中で冷却し、ジイソプロピルカルボジイミド(0.126g,1mmol)を攪拌しながら添加する。この混合物を冷蔵庫中に一晩放置する。溶媒を除去し、得られた固形物を2-プロパノールから再結晶して、4.3gの生成物（２０）（収率80％）を得た。実施例１６以下の手順は、１０％ＮａＣｌ存在下で１８倍モル過剰のピペリジンｐＩＰＥＧ（９）を用いた、ウシヘモグロビン（Ｈｂ）9.8 ％溶液の結合を詳述する。ジャケット付きの反応容器（０℃）中でピペリジンｐＩＰＥＧ（９）1.461g,2 .842x10^-4Mを2mlのｐＨ７．０リン酸バッファー(0.1M)に溶解し、１０分間攪拌した。10mlのＨｂ溶液をピペットでとって別のジャケット付き反応容器（８℃）にＮａＣｌ2.3gとともに入れる。ｐＨを７．８に調整する。ｐＩＰＥＧ溶液をＨｂを入れた反応容器に添加し、その容器を2x0.5mlのpH7.0バッファーで洗浄する。次に、その洗液をＨｂの容器に移す。7mlのpH7.8リン酸バッファーを添加し、ｐＨを1.0N ＮａＯＨで７．８に調整する。反応混合液をｐＨは７．８に維持したまま８℃で約２時間均等にゆっくりと攪拌する。２時間後、反応をシステインＨＣｌ(0.105g)およびグリシン溶液(2.25x10^-4M) 124μlで終了させる。ｐＨを2N ＮａＯＨで７．８に調整する。なお、この複合体は４−６℃の冷蔵庫に保存できる。容易に認識されるように、本発明から逸脱することなく、請求の範囲に記載されるような非常に多くの上記特徴の変更および組み合わせを利用することが可能である。こうした変更は、本発明の意図および範囲から逸脱すると考えるべきでなく、すべてのこうした変更は、下記の請求の範囲に包含されることを意図する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号庁内整理番号ＦＩＡ６１Ｋ 39/44 9356−4ＨＣ０７Ｋ 16/00 47/48 9356−4Ｈ 17/14 Ｃ０７Ｋ 16/00 7824−4ＪＣ０８Ｆ 20/54 17/14 7824−4Ｊ 26/10 Ｃ０８Ｆ 20/54 9051−4ＣＡ６１Ｋ 37/02 26/10 9051−4Ｃ 37/48 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者ペンドリ，アナプルナアメリカ合衆国 07747 ニュージャージー州マタワン，ウィンストンドライブ 108番地【要約の続き】

Claims

【特許請求の範囲】１．式：（Ｉ）Ｒ−Ｂ（式中、（Ｒ）は、水溶性で実質的に非抗原性のポリマー残基であり；（Ｂ）は第二級アミンまたは第三級アミンである）を含んでなる実質的に非抗原性のポリマー。２．前記第二級アミンが式：（II） −ＮＨ（ＣＨ₂）_nＸ（式中、（ｎ）は１−１２までの整数（１、１２も含む）であり；（Ｘ）はＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン；アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択される）を含んでなる、請求項１記載のポリマー。３．前記第三級アミンが、（式中、（ｍ）は０−１２までの整数（０、１２も含む）であり；（Ｘ）はＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン；アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択され；（Ｙ）はＮまたはＣＨであり；（Ｚ）はＣ_1-6アルキルである）からなる群から選択される式を含んでなる、請求項１記載のポリマー。４．前記ポリマーがポリ（アルキレンオキシド）残基である、請求項１記載のポリマー。５．前記ポリ（アルキレンオキシド）残基が、前記（Ｂ）部分の反対側をＣ_1-4 アルキル基で覆われる、請求項４記載のポリマー。６．前記ポリ（アルキレンオキシド）残基が、ポリ（エチレングリコール）ホモポリマー、アルキル化ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（アルキレンオキシド）のブロック共重合体のコポリマーからなる群から選択される、請求項５記載のポリマー。７．前記ポリ（アルキレンオキシド）が約200から約100,000までの分子量を有する、請求項６記載のポリマー。８．前記ポリ（アルキレンオキシド）が約1,000から約50,000までの分子量を有する、請求項７記載のポリマー。９．前記ポリ（エチレングリコール）ホモポリマーが約2,500から約25,000までの分子量を有する、請求項８記載のポリマー。１０．（Ｒ）がポリ（エチレングリコール）である、請求項５記載のポリマー。１１．式：（VII）Ｒ−Ｂ'-Ｗ−Ｌ（式中、（Ｒ）は水溶性で実質的に非抗原性のポリマー残基であり；（Ｂ'）はＮＹ（Ｙは、ＨまたはＣ_1-6アルキル若しくはシクロアルキル）であり；（Ｗ）はスペーサー部分であり、（Ｌ）は求核試薬と結合する能力を有する官能基である）を含んでなる実質的に非抗原性のポリマー。１２．前記第二級アミンが式：（II）ＮＨ−（ＣＨ₂）_nＸ（式中、（ｎ）は１−１２までの整数（１、１２も含む）であり；（Ｘ）はＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン；アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択される）を含んでなる、請求項１１記載のポリマー。１３．前記第三級アミンが、（式中、（ｍ）は１−１２までの整数（１、１２も含む）であり；（Ｘ）はＸはＨ；ＯＨ；ＣＯ₂Ｒ₁（Ｒ₁はＨまたはＣ_1-6アルキル）；ハロゲン、アリール部分および複素芳香族部分からなる群から選択され；（Ｙ）はＮまたはＣＨであり；（Ｚ）はＣ_1-6アルキルである）請求項１１記載のポリマー。からなる群から選択される式を含んでなる、１４．前記ポリマーがポリ（アルキレンオキシド）残基である、請求項１１記載のポリマー。１５．前記ポリ（アルキレンオキシド）残基が、前記（Ｂ'）部分の反対側をＣ₁ _-4 アルキル基で覆われる、請求項１４記載のポリマー。１６．前記ポリ（アルキレンオキシド）残基が、ポリ（エチレングリコール）ホモポリマー、アルキル化ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（アルキレンオキシド）のブロック共重合体のコポリマーからなる群から選択される、請求項１４記載のポリマー。１７．前記ポリ（アルキレンオキシド）が約200から約100,000までの分子量を有する、請求項１６記載のポリマー。１８．前記ポリ（アルキレンオキシド）が約1,000から約50,000までの分子量を有する、請求項１７記載のポリマー。１９．前記ポリ（エチレングリコール）ホモポリマーが約2,500から約25,000までの分子量を有する、請求項１８記載のポリマー。２０．（Ｗ）が直鎖または分岐鎖のＣ_1-4アルキル，アラルキル、アリールまたはヘテロアリール部分からなる群から選択される部分である、請求項１１記載のポリマー。２１．前記部分（Ｗ）が3-イソシアナートプロピオン酸エチルおよび2-アミノ酪酸エチルからなる群から選択される、請求項２０記載のポリマー。２２．（Ｌ）が、アミノ基と反応できる官能基；カルボキシル基と反応できる官能基；反応性カルボニル基と反応できる官能基；およびメルカプト基と反応できる官能基、からなる群から選択される部分である、請求項１１記載のポリマー。２３．（Ｌ）が炭酸スクシンイミジルまたは炭酸ｐ−ニトロフェニル活性エステルである、請求項２２記載のポリマー。２４．式：［Ｒ−Ｂ'-Ｗ-Ｌ¹］_z−（求核試薬）（式中（Ｒ）は水溶性で実質的に非抗原性のポリマー残基であり；（Ｂ'）はＮＹ（Ｙは、ＨまたはＣ_1-6アルキル若しくはシクロアルキル）であり；（Ｗ）はスペーサー部分であり、（Ｌ¹）は（Ｒ−Ｂ'-Ｗ）と求核試薬との間の共有結合を表し、（ｚ）は求核試薬に結合したポリマーの数を表す）を含んでなる、ポリマー複合体。２５．Ｒがポリ（アルキレンオキシド）である、請求項２４の複合体。２６．前記ポリ（アルキレンオキシド）残基が前記共有結合（Ｌ¹）の反対側をＣ_1-4アルキル基で覆われる、請求項２５記載の複合体。２７．前記ポリ（アルキレンオキシド）が、ポリ（エチレングリコール）ホモポリマー、アルキル化ポリ（エチレンオキシド）、およびポリ（アルキレンオキシド）のブロック共重合体のコポリマーからなる群から選択される、請求項２６記載の複合体。２８．前記ポリ（エチレングリコール）ホモポリマーが約200から約100,000までの分子量を有する、請求項２４記載の複合体。２９．前記ポリ（アルキレンオキシド）が約1,000から約50,000までの分子量を有する、請求項２８記載の複合体。３０．前記ポリ（エチレングリコール）ホモポリマーが約2,500から約25,000までの分子量を有する、請求項２９記載の複合体。３１．Ｒがポリ（エチレングリコール）ホモポリマーである、請求項２４記載の複合体。３２．前記求核試薬がタンパク質、ペプチド、酵素およびポリペプチドからなる群から選択される、請求項２４記載の複合体。３３．前記酵素がグルコセレブロシダーゼである、請求項３２記載の複合体。３４．前記タンパク質が抗体、モノクローナル抗体、抗体フラグメントおよび一本鎖結合抗原からなる群から選択される、請求項３２記載の複合体。３５．前記求核試薬が抗腫瘍薬、抗感染症薬、抗不安薬、胃腸薬、中枢神経系活性化剤、鎮痛剤、排卵誘発剤、避妊薬、抗炎症剤、ステロイド剤、抗尿酸血症薬、心臓血管薬、血管拡張剤、血管収縮剤からなる群の一つである、請求項２４記載の複合体。３６．前記抗腫瘍薬がタキソール、タキサン、カンプトテシン、アンスラサイクリン、メトトレキサートからなる群から選択される、請求項３５記載の複合体。３７．治療の必要な哺乳動物に治療上有効な量の請求項２４記載のポリマー複合体を投与することを含んでなる治療法。