JPH10509958A - トランスフェクション剤としてのリポポリアミン及びその医薬への使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 一般式（Ｉ） ［式中、ｍは２〜６の整数であり；ｎは１〜９、好ましくは１〜５の整数であり、ｎが２〜９であるとき、一般式中には水素以外のただ１個のＲ基が存在し且つｍは基（ａ）及び−（ＣＨ₂）_m−内で同一でも異なってもよく；Ｒは水素原子又は一般式II： の基であり、ここでＸ及びＸ’は同一でも異なってもよく、酸素原子、メチレン基−（ＣＨ₂）_q−（式中、ｑは０、１、２又は３である）、又はアミノ基−ＮＨ−もしくは−ＮＲ’−（式中、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₄アルキル基である）であり；Ｙ及びＹ’は同一でも異なってもよく、メチレン基、カルボニル基又はＣ＝Ｓ基であり；Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は同一でも異なってもよく、水素原子又は場合により置換されたＣ₁〜Ｃ₄アルキル基であり、ｐは０〜５であり；Ｒ₆はコレステロール誘導体又はアルキルアミノ基−ＮＲ₁Ｒ₂（式中、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して直鎖又は分枝鎖の飽和又は不飽和Ｃ₁₂〜Ｃ₂₂脂肪族基である）である］のカチオン性脂質。該脂質を含む医薬組成物、及び細胞に核酸をインビトロ又はインビトロトランスフェクトするためのその使用も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】トランスフェクション剤としてのリポポリアミン及びその医薬への使用 本発明はリポポリアミンファミリーに属する新規化合物、該化合物を含有する 医薬組成物、及び核酸のインビボ及び／又はインビトロトランスフェクションに おける該化合物の使用に関する。 多くの遺伝病は１種以上の核酸の発現欠陥及び／又は異常発現、即ち不十分又 は過剰な発現に関連している。遺伝子治療の主たる目的は、クローン化遺伝子の インビボ又はインビトロ細胞発現によりこの種の遺伝子異常を治療することであ る。 現在、この種の遺伝情報の細胞内送達方法として数種の方法が提案されている 。これらの方法のうちでは、特に化学的又は生化学的ベクターの使用に基づく方 法が挙げられる。合成ベクターはトランスフェクトしようとするＤＮＡを結合す る機能と、ＤＮＡが細胞に結合し、形質膜及び適宜２つの核膜を通過するのを助 長する機能との２つの主要な機能をもつ。 カチオン性脂質の利用に基づく技術の開発に伴い、この方法のトランスフェク ションは著しく進歩した。例えば、正電荷を もつカチオン性脂質である塩化Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピ ル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）は負電荷をもつＤＮ Ａにリポソーム又は小胞の形態で自然干渉し、細胞膜と融合することが可能な脂 質−ＤＮＡ複合体を形成し、ＤＮＡの細胞内送達を可能にすることが立証された 。しかし、この分子はトランスフェクションに関しては有効であるが、非生分解 性であり、細胞に対して毒性であるという欠点がある。 ＤＯＴＭＡ後、この構造モデルで他のカチオン性脂質も開発されており、親油 基は所謂「スペーサー」アームを介してアミノ基と結合している。これらの脂質 のうちでは、特に親油基として２個の脂肪酸又はコレステロール誘導体を含み、 適宜遊離アミノ基として第４級アンモニウム基も含むものが挙げられる。この種 のカチオン性脂質の例としては特にＤＯＴＡＰ、ＤＯＢＴ又はＣｈＯＴＢを挙げ ることができる。ＤＯＳＣやＣｈＯＳＣ等のように、第４級アンモニウム基でな くコリン基をもつ化合物もある。しかし、一般にこれらの化合物のトランスフェ クト活性はまだかなり低い。 別種のカチオン性脂質としてリポポリアミンも報告されてい る。この種の化合物では、カチオン基は２個の第１アンモニウム基と２個の第２ アンモニウム基からなる４個のアンモニウム基を含むＬ−５−カルボキシスペル ミン基に代表される。この種のものとしては特にＤＯＧＳとＤＰＰＥＳが挙げら れる。これらのリポポリアミンは一次内分泌細胞のトランスフェクションに特に 有効である。 実際に、理想的な合成トランスフェクション剤は広範な細胞で高レベルのトラ ンスフェクションを示し、無毒性であるか又は少なくとも使用量で最低限の毒性 であり、更に処理済み細胞に副作用がないように生分解性であることが望ましい 。 本発明の主目的は実際に、細胞のインビトロ及び／又はインビボトランスフェ クション、特に核酸の輸送に有効に使用することが可能な新規化合物を提案する ことである。 本発明の第１の目的は、一般式Ｉ： ［式中、 −ｍは２〜６の整数であり、 −ｎは１〜９の整数であり、より好ましくは１〜５の整数であ り且つ一般式中に水素以外のただ１個のＲ基が存在し且つｍの値は種々の基： 及び−（ＣＨ₂）_m−で同一でも異なってもよく、 −Ｒは水素原子又は一般式II： の基を表し、ここでＸ及びＸ’は相互に独立して酸素原子、メチレン基−（ＣＨ₂ ）_q−（式中、ｑは０、１、２又は３である）、又はアミノ基−ＮＨ−もしくは −ＮＲ’−（式中、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₄アルキル基を表す）を表し、Ｙ及びＹ’は相 互に独立してメチレン基、カルボニル基又はＣ＝Ｓ基を表し、Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅ は相互に独立して水素原子又は置換もしくは非置換Ｃ₁〜Ｃ₄アルキル基を表し、 ｐは０〜５の値をとることができ、Ｒ₆はコレステロール誘導体又はアルキルア ミノ基−ＮＲ₁Ｒ₂（式中、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して直鎖又は 分枝鎖の飽和又は不飽和Ｃ₁₂〜Ｃ₂₂脂肪族基を表す）を表す］により表されるＤ 、Ｌ又はＤＬ形のリポポリアミン及びその塩を提供することである。 Ｒが一般式II’： ［式中、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆及びｐは上記と同義であり、Ｘは酸素原子又は−（ ＣＨ₂）_q−基（式中、ｑはゼロである）を表す］により表される化合物が特に有 用である。 このファミリーの化合物は特に内部エステル結合の存在を特徴とし、生分解性 の点で有利である。 本発明による好適リポポリアミンとしては、特にＤ、ＬもしくはＤＬ形の下記 化合物又はその塩の１種を挙げることができる。 本発明の別の目的は、本発明によるリポポリアミンを直接又は医薬組成物とし て任意の治療用途に適用することである。 上述のように、一般式Ｉの化合物は核酸のインビトロ及びインビボトランスフ ェクションに特に有利であることが明らかである。これらの化合物はＤＮＡを有 効に組み込み（compact）可能とし、処理済み細胞に対する毒性が非常に低く、 無毒性の場合もあるという利点がある。更に、特にそのエステル結合の加水分解 により生分解性である。 本発明の組成物で最大の効果を得るためには、目的のリポポリアミンの正電荷 対核酸の負電荷の比Ｒが最適になるように一般式Ｉの化合物と核酸の夫々の比率 を決定することが好ましい。この最適比は特に使用方法、即ちインビボで使用す るのかインビトロで使用するのかと、トランスフェクトしようとする細胞の種類 により異なるので、個々に最適化させる。この最適化は当業者の能力の範囲内で ある。 本発明の組成物では、ポリヌクレオチドはデオキシリボ核酸でもリボ核酸でも よい。核酸の配列は天然起源でも合成起源でもよく、特に、ゲノムＤＮＡ、ｃＤ ＮＡ、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、ハイブリッド配列又は合成もしくは半合 成配列が挙 げられる。これらの核酸はヒト、動物、植物、細菌、ウイルス等に由来し得る。 これらの核酸は当業者に公知の任意の技術により得られ、特にバンクのスクリー ニング、化学的合成、又はバンクのスクリーニングにより得られた配列を化学的 もしくは酵素的に改変することを含む方法の組み合わせ、により得られる。更に 、プラスミドベクター等のベクターに取り込んでもよい。 特にデオキシリボ核酸は１本鎖でも２本鎖でもよい。これらのデオキシリボ核 酸は治療遺伝子、転写又は複製調節配列、改変又は非改変アンチセンス配列、他 の細胞成分との結合領域、等を含み得る。 本発明では治療遺伝子なる用語は、特に治療効果をもつタンパク物質をコード する任意の遺伝子を意味するものとする。このようにコードされたタンパク物質 はタンパク質、ペプチド等であり得る。このタンパク物質は標的細胞と同種でも よい（即ち標的細胞が病変を示さない場合に標的細胞中で通常発現される物質） 。この場合には、タンパク質の発現により、例えば細胞中の不十分な発現、又は 改変によって不活性もしくは弱活性となったタンパク質の発現、又は前記タンパ ク質の過剰発現を 克服することが可能になる。従って、治療遺伝子は安定性を増加したり、活性を 改変した細胞タンパク質の変異体をコードするものでもよい。タンパク物質は標 的細胞と異種でもよい。この場合には、発現されるタンパク質は例えば細胞中で 不足する活性を補充又は供給することができ、病変を抑えたり、免疫応答を刺激 させることが可能になる。 治療物質としては、本発明では特に酵素、血液誘導体、ホルモン、リンホカイ ン、インターロイキン、インターフェロン、ＴＮＦ等（ＦＲ９２／０３１２０） 、成長因子、神経伝達物質又はその前駆物質もしくは合成酵素、栄養因子ＢＤＮ Ｆ、ＣＮＴＦ、ＮＧＦ、ＩＧＦ、ＧＭＦ、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦ、ＮＴ３、ＮＴ５ 、ＨＡＲＰ／プレオトロフィン等、ジストロフィン又はミニジストロフィン（Ｆ Ｒ９１／１１９４７）、膵臓繊維症に関連するＣＦＴＲタンパク質、腫瘍抑制遺 伝子ｐ５３、Ｒｂ、Ｒａｐ１Ａ、ＤＣＣ、ｋ−ｒｅｖ等（ＦＲ９３／０４７４５ ）、凝固に関与する因子をコードする遺伝子、ＤＮＡ修復に関与するVII、VIII 、IX因子遺伝子、自殺遺伝子（チミジンキナーゼ、シトシンデアミナーゼ）、ヘ モグロビン遺伝子又は他の輸送タンパク質の遺伝子、Ａ−Ｉ、Ａ−II、Ａ−IV、 Ｂ、Ｃ−Ｉ、Ｃ− II、Ｃ−III、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｊ及びアポ（ａ）アポリポタンパク質から 選択されるアポリポタンパク型の脂質の代謝に関与するタンパク質に対応する遺 伝子、例えばリポタンパク質リパーゼ、肝リパーゼ、レシチンコレステロールア シルトランスフェラーゼ、７−αコレステロールヒドロキシラーゼ及びホスファ チジン酸ホスファターゼ等の代謝酵素、又はコレステロールエステル輸送タンパ ク質及びリン脂質輸送タンパク質等の脂質輸送タンパク質、ＨＤＬ結合タンパク 質、又は例えばＬＤＬ受容体、キロミクロンレムナント受容体及びスカベンジャ ー受容体等から選択される受容体が挙げられる。 治療核酸はアンチセンス配列でもよいし、標的細胞中で発現されると遺伝子の 発現又は細胞ｍＲＮＡの転写の調節を可能にする遺伝子でもよい。このような配 列はヨーロッパ特許第１４０，３０８号に記載されている方法に従い、例えば標 的細胞中で細胞ｍＲＮＡの相補的ＲＮＡに転写され、したがってタンパク質に翻 訳できなくなる。治療遺伝子は更に、標的ＲＮＡを選択的に分解することが可能 なリボザイムをコードする配列も含む（ＥＰ３２１，２０１）。 上述のように、核酸はヒト又は動物で免疫応答を発生するこ とが可能な抗原性ペプチドをコードする１個以上の遺伝子を含んでもよい。この 特定の実施態様では、本発明は特に微生物、ウイルス又は癌に対してヒト又は動 物に投与するワクチン又は免疫治療薬を製造することができる。このようなペプ チドは特にエプスタイン・バールウイルス、ＨＩＶウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス （ＥＰ１８５，５７３）、偽狂犬病ウイルス、シンシチウム形成ウイルス、他の ウイルス又は腫瘍（ＥＰ２５９，２１２）に特異的な抗原性ペプチドであり得る 。 好ましくは、核酸は更に、治療遺伝子及び／又は抗原性ペプチドをコードする 遺伝子を所望の細胞又は臓器で発現させる配列も含む。これらの配列は、感染細 胞で機能できるときに目的遺伝子の発現を自然にもたらす配列であり得る。（他 のタンパク質又は合成物質の発現をもたらす）他の起源の配列でもよい。特に、 真核又はウイルス遺伝子のプロモーター配列であり得る。例えば、感染させよう とする細胞のゲノムに由来するプロモーター配列であり得る。また、ウイルスの ゲノムに由来するプロモーター配列でもよい。このような配列としては、例えば 遺伝子Ｅ１Ａ、ＭＬＰ、ＣＭＶ、ＲＳＶ等のプロモーターを挙げることができる 。更に、活性化配列、調節配列等を付加すること によりこれらの発現配列を改変してもよい。更には誘導又は抑制プロモーターで もよい。 更に、核酸は合成治療物質を標的細胞の分泌経路に導くシグナル配列も特に治 療遺伝子の上流に含んでもよい。このシグナル配列は治療物質の天然シグナル配 列でもよいし、他の機能的シグナル配列、又は人工シグナル配列でもよい。核酸 は更に合成治療物質を細胞の特定のコンパートメントに導くシグナル配列も含ん でもよい。 別の実施態様では、本発明は核酸、本発明のリポポリアミン及びリポポリアミ ン／核酸複合体と結合してそのトランスフェクション能を改善することが可能な アジュバントを含む組成物に関する。本出願人は実際に、リポポリアミン／核酸 複合体と結合することが可能な或る種のアジュバント（例えば脂質又はタンパク 質）の存在下でリポポリアミンのトランスフェクション能を予想外に増加できる ことを実証した。 より好ましくは、本発明の組成物はアジュバントとして１種以上の中性脂質を 含む。このような組成物は、特に比Ｒが低いときに特に有利である。本出願人は 実際に、中性脂質の添加によりヌクレオ脂質粒子の形成を改善することができ、 驚くべき ことに細胞の膜を不安定にすることにより粒子を細胞に侵入し易くできることを 実証した。 より好ましくは、本発明に関して使用する中性脂質は２個の脂肪鎖を含む脂質 である。 生理的条件下で双性イオン性でもよいしイオン電荷をもたなくてもよい天然又 は合成脂質を使用すると特に有利である。脂質は、特にジオレオイルホスファチ ジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、オレオイルパルミトイルホスファチジルエ タノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジ−ステアロイル、−パルミトイル、−ミリスト イルホスファチジルエタノールアミン及び１〜３回Ｎ−メチル化したその誘導体 、ホスファチジルグリセロール、ジアシルグリセロール、グリコシルジアシルグ リセロール、セレブロシド（例えば、特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ 脂質（例えば、特にスフィンゴミエリン）又はアシアロガングリオシド（例えば 、特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）から選択することができる。 これらの種々の脂質は当業者に周知の標準技術により合成するか又は臓器（例 えば脳）もしくは卵から抽出することにより得られる。特に、天然脂質の抽出は 有機溶剤（例えばＬｅｈｎ ｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ参照）を用いて実施することができる。 本発明の組成物は好ましくは一般式Ｉの化合物１当量当たり０．１〜２０当量 、より好ましくは１〜５当量のアジュバントを含む。 本発明の組成物は局所、皮膚、経口、直腸、膣、腸管外、鼻腔内、静脈内、筋 肉内、皮下、眼内、経皮等の投与の目的で処方することができる。本発明の医薬 組成物は、注射用調合物、特に所望の臓器に直接注射又は（皮膚及び／又は粘膜 に）局所投与するのに医薬的に許容可能な賦形剤（vehicle）を含むことが好ま しい。組成物は特に無菌等張溶液でも乾燥組成物でもよく、特に凍結乾燥組成物 に状況に応じて滅菌水又は生理的食塩水を加えて注射用溶液を調製しうる。注射 に使用する核酸の用量及び投与回数は種々のパラメーター、特に使用する投与方 法、対象疾病、発現させる遺伝子、又は所望の治療期間に応じて設定することが できる。特に投与方法については、組織に直接注射してもよいし、培養細胞の処 理後に注射もしくは移植によりインビボ再移植してもよい。 従って、本発明は疾病の治療に特に有利な方法を提供し、該 方法は上記条件下で一般式Ｉの化合物と共に、前記疾病を治療することが可能な 核酸をインビボ又はインビトロ投与することを特徴とする。特に、本方法はタン パク又は核酸物質の欠損に起因する疾病に適用することができ、投与した核酸は 前記タンパク物質をコードするか又は前記核酸物質を含む。 本発明は細胞のインビボ又はインビトロトランスフェクションにおける本発明 のリポポリアミンのあらゆる使用を包含する。 以下、実施例により本発明をより詳細に説明するが、以下の実施例は非限定的 な例示とみなすべきである。略記及び記号 ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル ＢＯＰ：ベンゾトリアゾール−１−イルオキシトリス（ジメチルアミノ）ホスホ ニウムヘキサフルオロホスフェート ＤＣＣ：ジシクロヘキシルカルボジイミド ＤＣＵ：ジシクロヘキシル尿素 ＤＭＡＰ：４−ジメチルアミノピリジン ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド ＤＯＤＡ：ジオクタデシルアミン ＰＥ：石油エーテル ＥｔＯＨ：エタノール Ｅｔ₃Ｎ：トリエチルアミン Ｒｆ：前端保持係数 ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸 ＴＨＦ：テトラヒドロフラン ＴＭＳ：テトラメチルシラン ＵＶ：紫外線。装置及び方法 Ａ．使用製品 ＤＯＤＡ、Ｅｔ₃Ｎ、ＴＦＡ、Ｌ−オルニチン、水酸化テトラメチルアンモニ ウム、ラネーニッケル及び無水ジグリコール酸はＦｌｕｋａ製品であり、ＢＯＰ はＰｒｏｐｅｐｔｉｄｅ Ｆｒａｎｃｅ製品であり、ＤＭＡＰ、クロロギ酸イソ ブチル及びＮ−メチルモルホリンはＡｌｄｒｉｃｈ製品である。ＴＨＦはＭｅｒ ｃｋ製品であり、使用した他の全溶媒はＲＰ Ｐｒｏｌａｂｏ製品である。Ｎａ Ｃｌ及びＮａＨＣＯ₃溶液は飽和溶液であり、ＫＨＳＯ₄溶液は０．５Ｍである。Ｂ．物理的測定 プロトン核磁気共鳴スペクトル（¹Ｈ ＮＭＲ）はＢｒｕｋｅｒスペクトロメ ーターで記録した。 化学シフトはＴＭＳに対するｐｐｍで表す。Ｃ．シリカクロマトグラフィー 厚さ０．２ｍｍのＭｅｒｃｋシリカゲルプレートで薄層クロマトグラフィー（ ＴＬＣ） を実施した。可視化はＵＶ（２５４ｎｍ）を利用し、ニンヒドリンのエ タノール溶液（４０ｍｇ／１００ｍｌ ＥｔＯＨ）を噴霧（温和な噴霧）して１ ５０℃まで加熱することによりアミン又はアミドを可視化し、フルオレサミンの 溶液（４０ｍｇ／１００ｍｌアセトン）を噴霧することにより第１アミンを可視 化し、更にヨウ素を用いてプレートをヨウ素粉末で被覆した。 粒径０．０６３〜０．２００ｍｍのＭｅｒｃｋ ６０シリカゲルでカラムクロ マトグラフィー を実施した。実施例１ ２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンチル（ジオクタデシルカルバモ イルメトキシ）アセテートの合成 １．ａ ２，５−ビス（２−シアノエチルアミノ）ペンタン酸テトラメチルアン モニウム（１．ａ）の製造 （Ｓ）−２，５−ジアミノペンタン酸（Ｌ−オルニチン）一塩酸塩（６．７４ ｇ，４０ｍｍｏｌ）と水酸化テトラメチルアンモニウム・５水和物（１４．４８ ｇ，８０ｍｍｏｌ）をメタノール（２０ｍｌ）に溶かす。形成された水とメタノ ールを（油圧ポンプを用いて）減圧蒸発させ、乾燥残渣を得る。 得られた上記塩にＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）を加える。混合 物を窒素で脱ガスした後、１０分間激しく撹拌し、２，５−ジアミノペンタン酸 テトラメチルアンモニウムを可溶化させる（塩化テトラメチルアンモニウムはＤ ＭＦに懸濁したままである）。 アクリロニトリル（６ｍｌ，８５．６ｍｏｌ）を滴下し、フラスコを温和に加 温する。反応混合物を窒素下に室温で１時間 放置する。次いで塩化テトラメチルアンモニウムを濾別する。ＤＭＦを減圧蒸発 させる。得られた残渣は油状液体であり、ロータリーエバポレーターから取り出 すと固化する。アセトニトリル（１００ｍｌ）を加え、透明溶液が得られるまで フラスコを温和に加温する。濁った溶液が得られるまでＴＨＦを加える。フラス コをフリーザーで２日間保存し、Ｌ−２，５−ビス（２−シアノエチルアミノ） ペンタン酸のテトラメチルアンモニウム塩を白色固体として濾取する。シンター 上でＴＨＦで濯いだ後、Ｐ₂Ｏ₅で乾燥する。収率４９％（粗）に等価の６．０６ ｇが得られる。 １．ｂ ２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンタン酸のテトラメチル アンモニウム塩（１．ｂ）の製造 生成物１．ａをエタノール（１８ｍｌ）、水（２ｍｌ）及び２Ｍ水酸化カリウ ム（５ｍｌ）の混合物に溶かす。溶液をアルゴンでフラッシする。ラネーニッケ ル（Ｆｌｕｋａ懸濁液２ｍｌ）を加える。窒素でフラッシしたオートクレーブで ２６℃で水素化を行う。３時間で圧力は５０．６バールから４４．７バールまで 低下した後、１時間以上安定する。オートクレーブは容量２５０ｍｌであり、反 応混合物は３０ｍｌである。得られ た懸濁液を濾過し、水で濯ぎ、ロータリーエバポレーターに入れる。黄色油状物 が得られる。フルオレサミン試験は陽性である。 １．ｃ ２，５−ビス｛第３ブトキシカルボニル［３−（第３ブトキシカルボニ ルアミノ）プロピル］アミノ｝ペンタン酸（１．ｃ）の製造 生成物１．ｂをジオキサン（３０ｍｌ）に溶かす。ジ第３ブチルジカーボネー ト（１７．４６ｇ，８０ｍｍｏｌ）を滴下する。混合物を一晩撹拌する。ジオキ サンを蒸発させて除き、ＫＨＳＯ₄を加える。生成物をＣＨＣｌ₃（３×１００ｍ ｌ）で抽出する。次いで有機相をＮａＨＣＯ₃（ｐＨ＝７．５）、ＮａＣｌで順 次洗浄した後、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、減圧蒸発させる。生成物１０ｇが得られる （オルニチンに対して３９％の収率に等価の１５．４ｍｍｏｌ）。 ＨＰＬＣ： ＭｅＣＮ／Ｈ₂Ｏ：０→３分５０％ＭｅＣＮ、３→２０分５０→１ ００％ＭｅＣＮ、２０→４０分１００％ＭｅＣＮ、Ｋ’＝７．９６（ＲＰ−１８ カラム、流速＝１ｍｌ／ｍｉｎ）。 ＴＬＣ：Ｒｆ（ＣＨＣｌ₃：ＥｔＯＡｃ＝９５：５（ｖ：ｖ））＝０．２８。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１．３（ｍ，８Ｈ，Ｎ＋ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨＮ＋Ｃ ＯＯ／２×Ｎ＋ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ＋）；２．７〜３．０（ｍ，１０Ｈ，５×Ｎ ＋ＣＨ₂）；３．８（ｔ，１Ｈ，Ｎ＋ＣＨＣＯＯ）。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝６４７，ＭＷ＝６４６。 １．ｄ ２，５−ビス｛第３ブトキシカルボニル［３−（第３ブトキシカルボニ ルアミノ）プロピル］アミノ｝ペンタン−１−オール（１．ｄ）の製造 Ｌ−５−カルボキシテトラ第３ブトキシカルボニルスペルミン（１．９４ｇ，３ ｍｍｏｌ）をＴＨＦ３０ｍｌに溶かす。マイクロピペットを使用してＮ−メチル モルホリン３７０ｍｌ（３．０ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物を窒素下に（ｃ ａｒｄｉｃｅとエチレングリコールの浴で）−１５℃まで冷却した後、クロロギ 酸イソブチル３９０ｍｌ（３．１ｍｍｏｌ）を加える。３分後に、４℃の水２０ ｍｌに溶かしたＮａＢＨ₄（２ｇ）を入れたビーカーに反応混合物を注ぐ。ＴＨ Ｆを蒸発させる。（ｐＨ＝７まで）ＫＨＳＯ₄を加える。生成物をＥｔＯＡ ｃで抽出し、ＮａＨＣＯ₃、ＮａＣｌで濯ぎ、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過した後、 蒸発させる。収率６１％に等価の１．１５ｇが得られる。 ＴＬＣは２個のスポットを生じるので、同一溶離剤を用いてシリカカラムで分 離すると、生成物０．９７ｇ（黄色油状物）が得られる。分離収率は８４％であ る。 還元収率は５１％である。 ＴＬｃ： Ｒｆ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１（ｖ：ｖ））＝０．２４。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１．４２（ｓ，４×Ｂｏｃ）；１．５〜１．７（ｍ，８Ｈ， Ｎ＋ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨ₂−ＣＨＮ／２×Ｎ＋ＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ）；２．８５〜 ３．２（ｍ，１０Ｈ，５×ＮＣＨ₂）；３．４（ｍ，１Ｈ，ＮＣＨＣＨ₂ＯＨ）； ３．７（ｄ，２Ｈ，ＣＨ₂ＯＨ）；６．８（ｍ，２Ｈ，ＮＨ）。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝６３３，ＭＷ＝６３２。 １．ｅ ２，５−ビス［３−（第３ブトキシカルボニルアミノ）プロピル−｛第 ３ブトキシカルボニルアミノ｝ペンチルオキシカルボニルメトキシ酢酸（１．ｅ ）の製造 生成物１．ｄ ０．５１ｇ（０．８０６ｍｍｏｌ）をＣＨ₂ Ｃｌ₂ １０ｍｌに溶かし、無水ジグリコール酸２当量（１．５３５ｍｍｏｌ， ０．１７８ｇ）、トリエチルアミン２．２当量（１．６８７ｍｍｏｌ，２３５μ ｌ）及びＤＭＡＰ ５ｍｇを加える。１時間後にアルコールが反応し終わったこ とをＴＬＣが示したらＣＨ₂Ｃｌ₂を加えた、次いで混合物をＫＨＳＯ₄ ３×５ ０ｍｌ、ＮａＣｌ ３×５０ｍｌで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、濾過後、蒸発 させる。収率４３％に等価の０．２６ｇの固体が得られる。 ＴＬＣ：Ｒｆ（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ＝９０：８：２（ｖ：ｖ：ｖ） ）＝０．７５。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝７４９，ＭＷ＝７４８。 １．ｆ ２，５−ビス｛第３ブトキシカルボニル［３−（第３ブトキシカルボニ ルアミノ）プロピル］アミノ｝ペンチルジオクタデシルカルバモイルメトキシ） アセテート（１．ｆ）の製造 上記生成物０．１２３ｇ（０．１６４ｍｍｏｌ）、ジオクタデシルアミン１当 量（０．０８５６ｇ）、トリエチルアミン３当量（６８．４ｍｌ）及びＢＯＰ １．１当量（０．０７９８ ｇ）をＣＨＣｌ₃に溶かす。反応混合物を室温で撹拌する。２時間後にＣＨ₂Ｃｌ₂ １００ｍｌを加えた後、混合物を（ｐＨ＝７まで）ＫＨＳＯ₄、ＮａＨＣＯ₃、 ＮａＣｌ ３×１００ｍｌで洗浄し、乾燥後、蒸発させる。収率６３％に等価の ０．１３ｇの生成物が得られる。 ＴＬＣ： Ｒｆ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１（ｖ：ｖ））＝０．６２。ヨウ素、 ニンヒドリン及びフルオレサミンで可視化。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：０．９０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ，ＣＨ₃），１．２０ 〜１．７５（ｍ，１０８Ｈ，ＣＨ₂／Ｃ（ＣＨ₃）₃），３．０５〜３．３５（ｍ ，１４Ｈ，ＣＨ₂Ｎ），４．１５〜４．３５（ｍ，３Ｈ，ＮＣＨＣＨ₂ＯＣＯ）， ４．２３〜４．２７（２ｓ，２×２Ｈ，ＯＣＨ₂ＣＯ），４．５〜５．５（広幅 ｍ，２Ｈ，ＮＨ）。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝１２５２，ＭＷ＝１２５１。 元素分析：Ｃ₇₁Ｈ₁₃₇Ｎ₅Ｏ₁₂の理論値（％）：Ｃ６８．０６，Ｈ１１．０２，Ｎ ５．５９； 実測値（％）：Ｃ６７．１４，Ｈ１１．９３，Ｎ５．８６。 １．ｇ ２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンチル（ジオクタデシル カルバモイルメトキシ）アセテート（１．ｇ）の製造 生成物１．ｆ ０．０２５ｇ（０．０２ｍｍｏｌ）を１．５ｍｌ「Ｅｐｐｅｎ ｄｏｒｆ（登録商標）」管に入れてＴＦＡ１ｍｌを加え、室温で１時間放置する 。ＴＦＡを蒸発させる。 エタノール５００μｌを加えると、生物学的試験に必要な４０ｍＭ溶液が得ら れる。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝８５２，ＭＷ＝８５１。実施例２ １，３−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−２−プロピル（ジオクタデシルカ ルバモイルメトキシ）アセテート（２．ｆ）の製造 ２．ａ １，３−ビス（２−シアノエチルアミノ）プロパン−２−オール（２． ａ）の製造 １，３−ジアミノプロパン−２−オール３．６ｇ（４０ｍｍｏｌ）をメタノー ル７５ｍｌに溶かす。アクリロニトリル５．７６ｍｌ（８０ｍｍｏｌ）を１５分 間かけて加える。フルオレサミン試験は陽性である。反応混合物は無色のままで ある。反応混合物を室温で一晩撹拌下に放置する。こうするとフルオレサミン試 験は陰性になる。メタノールを蒸発させる。生成物７．９ｇが得られる（粗生成 物の収率１００％）。 ２．ｂ １，３−ビス（３−アミノプロピルアミノ）プロパン−２−オール（２ ．ｂ）の製造 窒素でフラッシしたオートクレーブで２７℃で水素化を実施する。 生成物２．ａをメタノール１５ｍｌ、エタノール１０ｍｌ及びＫＯＨ（２Ｍ） ５ｍｌの混合物に溶かす。溶液をアルゴンでフラッシし、ラネーニッケル懸濁液 ４ｍｌをオートクレーブに加える。 ３時間３０分間で圧力は５１．６バールから３７．６バールまで低下した後、 １時間以上安定化する。オートクレーブは容 量２５０ｍｌであり、反応混合物は３０ｍｌである。得られた懸濁液を濾過し、 水で濯ぎ、ロータリーエバポレーターに入れる。黄色油状物が得られる。フルオ レサミン試験は陽性である。 ２．ｃ １，３−ビス｛３−第３ブトキシカルボニルアミノ（第３ブトキシカル ボニルアミノプロピル）−２−プロパン−２−オール（２．ｃ）の製造 生成物２．ｂを１．ｃと同様に保護する。ＣＨ₂Ｃｌ₂１００ｍｌを加える。ジ 第３ブチルジカーボネート３９．２ｇ（１７９ｍｍｏｌ）をジオキサン１００ｍ ｌに溶かして滴下する。溶液を７２時間撹拌下に放置する。溶媒を蒸発させ、Ｋ ＨＳＯ₄を加える。生成物をＥｔＡＯｃ（３×１００ｍｌ）で抽出し、相をあわ せてＫＨＳＯ₄、ＮａＨＣＯ₃、ＮａＣｌで濯ぎ、ＭｇＳＯ₄で乾燥し、蒸発させ る。２０ｇが得られる（初期生成物に対する収率８３％）。 生成物はＰＥから結晶化する。 ＴＬＣ： Ｒｆ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１（ｖ：ｖ））＝０．２３。Ｒｆ（Ｐ Ｅ：ＥｔＯＡｃ＝１：２（ｖ：ｖ））＝０．６３。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１．４（２ｓ，３６Ｈ，４×（ＣＨ₃）₃） ；１．６５（ｑｔ，４Ｈ，２×ＮＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂ＮＨ）；２．９５（ｑ，４Ｈ ，２×ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂）；３．１（２ｄ，４Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨＣＨ₂Ｎ）；３．２ （ｔ，４Ｈ，ＮＣＨ₂ＣＨ₂）；３．８５（ｍ，１Ｈ，ＯＨ）；５．９（ｓ，２Ｈ ，ＮＨ）。 ＭＳ： ＭＨ⁺＝６０５。ＭＷ＝６０４。 ２．ｄ １，３−ビス｛３−第３ブトキシカルボニルアミノ（第３ブトキシカル ボニルアミノプロピル｝−２−プロピル−２−エトキシカルボニルメトキシ酢酸 （２．ｄ）の製造 生成物２．ｃ ６０４ｍｇ（１ｍｍｏｌ）をＣＨ₂Ｃｌ₂２０ｍｌに溶かす。無 水物２当量（２ｍｍｏｌ；０．２３２ｇ）、Ｅｔ₃Ｎ２．２当量（３０７μｌ、 次いで１００μｌ）及びＤＭＡＰ ６．５ｇを導入する。室温で２４時間撹拌後 、ＣＨ₂Ｃｌ₂を加え、混合物をＫＨＳＯ₄、ＮａＣｌで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥 し、濾過後、蒸発させる。生成物０．１５６ｇが得られる（収率２２％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ＝９０：８：２（ｖ：ｖ：ｖ） ）＝０．７１。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：１．２〜１．４（２ｓ，３６Ｈ，４×（Ｃ Ｈ₃）₃）；１．５（ｍ，４Ｈ，２×ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ）；２．８５（ｑ， ４Ｈ，２×ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂）；３．１（ｍ，８Ｈ，４×ＮＣＨ₂）；３．９〜４ ．２（２ｓ，４Ｈ，２×ＯＣＨ₂ＣＯＯ）；５．２５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ₂ＣＨＣＨ₂ ）；６．７（２Ｈ，ＮＨ）。 ＭＳ：ＭＨ⁺＝７２１，ＭＷ＝７２０。 ２．ｅ １，３−ビス｛３−第３ブトキシカルボニルアミノ（第３ブトキシカル ボニルアミノプロピル｝−２−プロピル（ジオクタデシルカルバモイルメトキシ ）アセテート（２．ｅ）の製造 生成物２．ｄ ０．２１６ｍｍｏｌをＣＨＣｌ₃ ３ｍｌに溶かす。ＤＯＤＡ １当量（０．１１３ｇ）、Ｅｔ₃Ｎ ３当量（１００μｌ）及びＢＯＰ １． １当量（０．１１ｇ）を加える。反応混合物を室温で２４時間撹拌する。ＣＨＣ ｌ₃を蒸発させる。ＥｔＯＡｃ １００ｍｌを加える。有機相をＨＣｌ（０．５ Ｍ）、ＮａＨＣＯ₃、ＮａＣｌでｐＨ＝７まで洗浄し、ＭｇＳＯ₄で乾燥した後、 蒸発させる。０．１８５ｇが得られる（収率７０％）。シリカでカラムクロマト グラフィーを行う。生成物１１０ｍｇを集める（収率４２％）。 ＴＬＣ：Ｒｆ（ＣＨＣｌ₃：ＭｅＯＨ：ＡｃＯＨ＝９０：８：２（ｖ：ｖ：ｖ） ）＝０．８１。Ｒｆ（ＰＥ：ＥｔＯＡｃ＝１：１（ｖ：ｖ））＝０．６７。 ＮＭＲ（ｐｐｍ）：０．８５（ｔ，６Ｈ，２×ＣＨ₃）；１．２０〜１．５５（ ｍ，１００Ｈ，ＣＨ₂／Ｃ（ＣＨ₃）₃）；１．６（ｍ，４Ｈ，２×ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ ＣＨ₂Ｎ）；３．０５〜３．４（ｍ，１６Ｈ；２×ＮＨＣＨ₂ＣＨ₂ＣＨ₂Ｎ／Ｎ ＣＨ₂ＣＨＣＨ₂Ｎ／２×ＣＨ₂Ｎ）；４．１（ｓ，２Ｈ，ＮＣＯＣＨ₂Ｏ）；４． １５（ｓ，２Ｈ，ＯＣＨ₂ＣＯＯ）；５．２５（ｍ，１Ｈ，ＣＨ₂ＣＨＣＨ₂）； ６．１５（ｍ，２Ｈ，ＮＨ）。 ＭＳ：ＭＨ⁺＝１２２４，ＭＷ＝１２２３。 ２．ｆ １，３−ビス｛３−第３ブトキシカルボニルアミノ（第３ブトキシカル ボニルアミノプロピル｝−２−プロピル（ジオクタデシルカルバモイルメトキシ ）アセテート（２．ｆ）の製造 生成物２．ｅ ０．０２４７ｇ（０．０２１ｍｍｏｌ）を１．５ｍｌ「Ｅｐｐ ｅｎｄｏｒｆ（登録商標）」管に入れてＴＦＡ １ｍｌを加え、混合物を室温で １時間放置する。ＴＦＡ を蒸発させる。 エタノール５０５μｌを加えると、生物学的試験に必要な４０ｍＭ溶液が得ら れる。 ＭＳ：ＭＨ⁺＝８２４，ＭＷ＝８２３。実施例３ ２−（３−アミノプロピルアミノ）−１−（３−アミノプロピルアミノメチル） エチル（Ｎ，Ｎ−ジオクタデシル）スクシナメートの製造 この化合物はジグリコール酸の代わりにコハク酸を使用する以外は上記実施例 ２に記載した手順に従って製造する。 こうして得られた生成物の質量スペクトル分析は、予想質量に一致する８０８ のＭＨ⁺フラグメントを示す。遺伝子材料のインビトロトランスフェクションにおける本発明のリポポリアミン の使用 Ａ．インビトロ遺伝子導入用プラスミド プラスミドｐＣＭＶ−ＬＵＣを使用する。これは、プラスミドｐＧＬ２基本ベ クター（Ｐｒｏｍｅｇａ）又はプラスミドｐＧＬ２コントロールベクター（Ｐｒ ｏｍｅｇａ）に由来する、「ルシフェラーゼ」レポーター遺伝子を含む構築物で あり、ベクタープラスミドｐｃＤＮＡ３（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）から抽出した ヒトサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）のプロモーターを含むフラグメントＭｌｕ Ｉ−ＨｉｎｄIIIが挿入されている。 Ｂ．トランスフェクション用溶液の調製手順 上記実施例に従って製造したリポポリアミンを濃度４０ｍＭまでエタノールに 溶かした後、１０％未満のエタノール濃度を維持するようにエタノール／水混合 物で希釈する。 トランスフェクトしようとする核酸の溶液を生理的食塩水（０．１５Ｍ Ｎａ Ｃｌ）で希釈した後、１／１比（ｖ／ｖ）でリポポリアミン溶液に加える。ボー ルテックス（vortex）で均一化し及び室温で１５分間インキュベートした後、Ｄ ＮＡ／リポポリアミン溶液を最終濃度９％（ｖ／ｖ）でウェルに分配 し、細胞を無タンパク培地（血清）で洗浄した。実施例４ トランスフェクション効率に及ぼす配合比（アミン／リン酸）の影響 ２ｃｍ²に指数増殖期のＮＩＨ ３Ｔ３細胞１×１０⁵個の試料を、５％ＣＯ₂ で３７℃で可変配合比のリポポリアミン／ｐＣＭＶ−ＬＵＣ溶液で４時間処理す る。各試料に１μｇの核酸を加える。最終濃度８％までウシ胎児血清を加えた後 、ＣＯ₂オーブンで４０時間インキュベーション後にレポーター遺伝子の発現を 調べる。 ルシフェリン、補酵素Ａ及びＡＴＰの存在下で２０秒間発光［ＲＬＵ＝相対光 単位］によりルシフェラーゼ活性を測定し、細胞溶解後に得られる上清中のタン パク質１μｇ当たりの値として表す。得られた結果を表１に示す。 各値は独立して行った３回の試験の平均である。 この実験は、本発明によるリポポリアミンが遺伝子の発現に必要な条件下で遺 伝子を導入できることを明示している。実施例５ ＤＮＡ／リポポリアミン混合物中の核酸の濃度の影響 上記実施例に記載したと同一の手順に従い、種々の濃度のＤＮＡを同一配合比 で使用する条件下でＮＩＨ ３Ｔ３細胞をＤＮＡ／リポポリアミン混合物で処理 する。この場合には、２．５×１０³個の細胞が処理され、ルシフェラーゼ活性 を２０秒間測定する。結果を表II及びIIIに示す。 各値は独立して行った３回の試験の平均である。 括弧内の数値は変動係数であり、％として表す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，Ｍ Ｃ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ， ＴＤ，ＴＧ)，ＡＭ，ＡＵ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＦＩ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ， ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 シエルマン，ダニエル フランス国、エフ−75645・パリ・セデツ クス・13、リユ・ドユ・デイスク、50

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一般式Ｉ： ［式中、 −ｍは２〜６の整数であり、 −ｎは１〜９、より好ましくは１〜５の整数であり、ｎが２〜９であるとき、一 般式中には水素以外のただ１個のＲ基が存在し且つｍの値は種々の基： 又は−（ＣＨ₂）_m−内で同一でも異なってもよく、 −Ｒは水素原子又は一般式II： の基を表し、ここでＸ及びＸ’は相互に独立して酸素原子、メ チレン基−（ＣＨ₂）_q−（式中、ｑは０、１、２又は３である）、又はアミノ基 −ＮＨ−もしくは−ＮＲ’−（式中、Ｒ’はＣ₁〜Ｃ₄アルキル基を表す）を表し 、Ｙ及びＹ’は相互に独立してメチレン基、カルボニル基又はＣ＝Ｓ基を表し、 Ｒ₃、Ｒ₄及びＲ₅は相互に独立して水素原子又は置換もしくは非置換Ｃ₁〜Ｃ₄ア ルキル基を表し、ｐは０〜５の値をとることができ、Ｒ₆はコレステロール誘導 体又はアルキルアミノ基−ＮＲ₁Ｒ₂（式中、Ｒ₁及びＲ₂は相互に独立して直鎖又 は分枝鎖の飽和又は不飽和Ｃ₁₂〜Ｃ₂₂脂肪族基を表す）を表す］により表される ことを特徴とするＤ、ＬもしくはＤＬ形のリポポリアミン又はその塩。 ２．Ｒが好ましくは一般式II’： ［式中、Ｒ₃、Ｒ₄、Ｒ₅、Ｒ₆及びｐは請求項１と同義であり、Ｘは酸素原子又は −（ＣＨ₂）_q−基（式中、ｑはゼロで ある）を表す］により表されることを特徴とする請求項１に記載のリポポリアミ ン。 ３．Ｄ、ＬもしくはＤＬ形の下記化合物： 又はその塩の１種であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリポポリアミ ン。 ４．Ｄ、ＬもしくはＤＬ形の下記化合物： 又はその塩の１種であることを特徴とする請求項１又は２に記 載のリポポリアミン。 ５．Ｄ、ＬもしくはＤＬ形の下記化合物： 又はその塩の１種であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリポポリアミ ン。 ６．Ｄ、ＬもしくはＤＬ形の下記化合物： 又はその塩の１種であることを特徴とする請求項１又は２に記載のリポポリアミ ン。 ７．請求項１から６のいずれか一項に記載の少なくとも１種のリポポリアミンと 少なくとも１種の核酸を含むことを特徴とする医薬組成物。 ８．核酸がデオキシリボ核酸であることを特徴とする請求項７に記載の組成物。 ９．核酸がリボ核酸であることを特徴とする請求項７に記載の組成物。 １０．核酸が化学的に改変されていることを特徴とする請求項７から９のいずれ か一項に記載の組成物。 １１．核酸がアンチセンス核酸であることを特徴とする請求項７から１０のいず れか一項に記載の組成物。 １２．核酸が治療遺伝子を含むことを特徴とする請求項７から１０のいずれか一 項に記載の組成物。 １３．治療遺伝子が、Ａ−Ｉ、Ａ−II、Ａ−IV、Ｂ、Ｃ−Ｉ、Ｃ−II、Ｃ−III 、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｊ及びアポ（ａ）アポリポタンパク質から選択されるア ポリポタンパク等の脂質の代謝に関与するタンパク質、リポタンパク質リパーゼ 、肝リパーゼもしくは他のリパーゼ、レシチンコレステロールアシルトランスフ ェラーゼ、７−α−コレステロールヒドロキシラーゼ及 びホスファチジン酸ホスファターゼ等の酵素、コレステロールエステル輸送タン パク質及びリン脂質輸送タンパク質等の脂質輸送タンパク質、ＨＤＬ結合タンパ ク質、又は例えばＬＤＬ受容体、キロミクロンレムナント受容体及びスカベンジ ャー受容体等から選択される受容体をコードすることを特徴とする請求項１２に 記載の組成物。 １４．核酸、請求項１から６のいずれか一項に記載のリポポリアミン、及びリポ ポリアミン／核酸複合体と結合してそのトランスフェクション能を改善すること が可能なアジュバント、を含むことを特徴とする医薬組成物。 １５．アジュバントが１種以上の中性脂質であることを特徴とする請求項１４に 記載の組成物。 １６．中性脂質が生理的条件下で双性イオン性でもよいしイオン電荷をもたなく てもよい合成又は天然脂質から選択されることを特徴とする請求項１５に記載の 組成物。 １７．中性脂質が２個の脂肪鎖を含む脂質であることを特徴とする請求項１６に 記載の組成物。 １８．中性脂質がジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、 オレオイルパルミトイルホスファチジルエタ ノールアミン（ＰＯＰＥ）、ジ−ステアロイル、−パルミトイル、−ミリストイ ルホスファチジルエタノールアミン類及び１〜３回Ｎ−メチル化したその誘導体 、ホスファチジルグリセロール、ジアシルグリセロール、グリコシルジアシルグ リセロール、セレブロシド（例えば、特にガラクトセレブロシド）、スフィンゴ 脂質（例えば、特にスフィンゴミエリン）並びにアシアロガングリオシド（例え ば、特にアシアロＧＭ１及びＧＭ２）から選択されることを特徴とする請求項１ ７に記載の組成物。 １９．リポポリアミン１当量当たり０．１〜２０当量、より好ましくは１〜５当 量のアジュバントを含むことを特徴とする請求項１４から１８のいずれか一項に 記載の組成物。 ２０．注射用調合物に医薬的に許容可能な賦形剤を含むことを特徴とする請求項 ７から１９のいずれか一項に記載の組成物。 ２１．皮膚及び／又は粘膜に投与するのに医薬的に許容可能な賦形剤を含むこと を特徴とする請求項７から１９のいずれか一項に記載の組成物。 ２２．細胞のインビボ又はインビトロトランスフェクションにおける請求項１か ら６のいずれか一項に記載のリポポリアミンの使用。