JPH10511111A

JPH10511111A - 免疫原としての野生型サイトカインのミューティンの使用

Info

Publication number: JPH10511111A
Application number: JP9511048A
Authority: JP
Inventors: シリベルト，ジェナロ; サビノ，ロッコ; コルテセ，リカルド
Original assignee: イスチチュートデイリセルシュデイバイオロジアモレコラレピー．アンジェレッティソシエタペルアチオニ
Priority date: 1995-09-01
Filing date: 1996-08-22
Publication date: 1998-10-27
Anticipated expiration: 2016-08-22
Also published as: KR100279539B1; US6706261B1; AU703300B2; CN1198098A; DE69624498D1; KR19990044321A; RU2182014C2; IT1277926B1; DK0858345T3; ITRM950589A0; CN1138562C; WO1997009064A1; PT858345E; ITRM950589A1; ES2183007T3; HK1015708A1; CA2229045A1; JP3157837B2; MX9801550A; CA2229045C

Abstract

(57)【要約】これらは、野生型サイトカインの少なくとも１種のミューティンを有効成分として含有することを特徴とする、特定の野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患を治療又は予防するために用いられる薬剤コンパウンドである。本発明は、その最も広い範囲において、野生型サイトカインに対して誘導され、該野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患において該野生型サイトカインを中和することができる抗体を誘発するための免疫原としての、特定の野生型サイトカインの受容体アンタゴニストでもある、該野生型サイトカインのミューティンの使用にある。図４は、ヒトインターロイキン−６のミューティンによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに発生した抗体が野生型インターロイキン−６を認識し、その生物学的活性を中和することができることを示す。

Description

【発明の詳細な説明】免疫原としての野生型サイトカインのミューティンの使用本発明は、野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患における野生型サイトカインの生物学的活性を中和することができる、野生型サイトカインに対する抗体を誘発するための免疫原としての、野生型サイトカインの受容体アンタゴニストでもある、特定の野生型サイトカインのミューティンの使用に関する。例えば、ヒトインターロイキン６（ｈＩＬ−６）がヘリカル・サイトカインのクラスに属する１８４アミノ酸のポリペプチドであることは、公知の事実である。インターロイキン６は種々な細胞種類によって産生される多官能性サイトカインである。これは、例えば免疫系細胞、肝細胞、腎細胞、造血幹細胞、角質細胞及びニューロンのような、種々な種類の細胞に対して分化増殖因子として作用する。しかし、ｈＩＬ−６の過剰産生は例えば慢性自己免疫障害、全身性エリテマトーデス、黒色腫／プラズマ細胞腫、閉経後骨粗しょう症及び癌悪液質のような、多くの疾患の病因である。したがって、この特定の分野には、一般にサイトカインの、特にｈＩＬ−６の過剰産生を予防と治療の両方に関して抑制する必要性がある。本発明の使用はこの必要性を満たすことを可能にし、同時に、下記から明らかになる他の利点を提供する。本発明の課題は、実際に、この特定の野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療と予防のための薬剤コンパウンド（compound）を製造するための野生型サイトカインの突然変異体の使用である。本発明の他の課題は、野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療のための薬剤コンパウンド又は、この野生型サイトカインの少なくとも１種の突然変異体を有効成分（active principle）として含有する前記疾患の予防のためのワクチンである。本発明による薬剤コンパウンドは、例えば製薬的に受容されるビヒクルの存在を必要とする公知方法によって製剤化することができる。これらのビヒクルと製剤化方法との例は Remington's Pharmaceutical Science に見いだすことができる。有効な投与のために適した製薬的に受容されるコンパウンドを形成するために、これらのコンパウンドは本発明による有効成分の有効量を含有しなければならない。本発明の薬剤コンパウンドは問題の個人の疾患、体重、性別及び年齢に適した量で個人に投与される。他の要素は投与方法を包含する。本発明による薬剤コンパウンドは広範囲な方法で、例えば皮下に、局所に、経口的に、また筋肉内注射によって投与することができる。有効成分として野生型サイトカインの少なくとも１種のミューティン(mutein) を含有する、本発明による薬剤コンパウンドは通常の投与ビヒクルに含めて非常に多様な形式で治療量で投与することができる。例えば、これらは錠剤、カプセル、ピル、粉末、顆粒、エリキシル剤、軟膏、溶液、懸濁液、シロップ及びエマルジョンとして経口的に又は注射によって摂取される用量で投与することができる。同様にして、本発明によるこれらのコンパウンドは静脈内に、腹腔内に、皮下に、密封した若しくは密封なしの局所的に(t opically with or without occlusion)、又は筋肉内に投与することができる。全ての上記投与形は製薬分野に熟練した人に周知である。いずれにせよ、本発明による有効成分の有効な、非毒性量を用いなければならない。この有効成分の一日量は０．０１〜１０００mg／成人／日の広範囲内で変化することができる。本発明による有効成分の有効量は通常は、約０．００１mg／体重kg／日〜約１００mg／体重kg／日の範囲内の用量で与えられる。本発明によると、特定の野生型サイトカインのミューティンから構成される有効成分は典型的には、所望の投与形を留意して選択された、適当な希釈剤、賦形剤又は製薬的ビヒクル（一般には、一般名称“ビヒクル”と呼ばれる）との混合物として投与することができる。本発明によるワクチンの製造法は当業者に公知である。典型的に、これらのワクチンは溶液又は懸濁液のいずれかとして、注射可能な形で製造される。製剤はエマルジョン化することができる、又は有効成分はリポソーム中に封入されることができる。有効な免疫原成分(immungenic ingredient)はしばしば、有効成分と適合しうる製薬的に受容される賦形剤と混合される。適当な賦形剤は例えば水、デキストロース、グリセロール、エタノール等、及びこれらの混合物である。さらに、必要な場合には、ワクチンは例えば湿潤剤若しくは乳化剤、pH緩衝剤、及び／又はアジュバントのような付加的物質の少量をワクチンの有効性を高めるために含有することができる。本発明によるワクチンは例えば筋肉内又は皮下注射を用いて非経口的に投与することが好ましい。他の投与方法に適した他の製剤は座薬と経口製剤を包含する。これらのコンパウンドは１０〜９５％、好ましくは２５〜７０％の有効成分を含有する。これまでに、本発明を一般的に説明した。次では、下記実施例を用いて、本発明に関する特定の状況を示し、本発明の目的、特徴、利点及び可能な用途をさらに明確に理解されることを目的として、さらに詳細に説明する。図１ａと１ｂは、正常なマウスとＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスとの野生型ｈＩＬ−６による免疫処置の実験結果を示す。図２ａと２ｂは、正常なマウスとＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスとにおけるＳａｎｔｌと略記される突然変異体（mutant form）（突然変異：Ｔｙｒ３１Ａｓｐ、Ｇｌｙ３５Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１１８Ａｒｇ、Ｖａｌ１２１Ａｓｐ、Ｇｌｎ１７５Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１７６Ａｒｇ、Ｇｌｎ１８３Ａｌａを含有し、ｈＩＬ−６のアンタゴニストである）による免疫処置の実験結果を示す。図３は、Ｓａｎｔｌに対してマウスに発生した抗体が野生型ＩＬ−６を認識することもできるか否かを確認することを目的とした実験結果を示す。図４は、野生型インターロイキン６突然変異体Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに発生した抗体が野生型ヒトインターロイキン６の生物学的活性を中和することができるか否かを確認することを目的とした実験結果を示す。図５ａと５ｂは、実施例７においておこなった実験の結果を示す。図６ａと６ｂは、実施例１１においておこなった実験の結果を示す。実施例１ｈＩＬ−６とＳａｎｔｌとを用いた、ｈＩＬ−６に対して免疫寛容を有するＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの免疫処置ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスは、それらのゲノムにヒトインターロイキン６のｃＤＮＡを、ラットニューロン特異的エノラーゼ遺伝子プロモートの制御下で、組み込んでいる。上記ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス（マウス５匹の群）を組換えヒトＩＬ−６によって免疫処置しようと試みることによって、寛容の理論を立証した；対照として、同じ腹子として生まれた、但し導入遺伝子を有さないきょうだいを用いた。５匹のＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの群をＳａｎｔｌと呼ばれるＩＬ−６の突然変異体（ヒト細胞に対する残留生物学的活性を有さず、ｈ−ＩＬ６受容体アンタゴニストとして挙動する）（これは以下に示す７個の突然変異を含有した：Ｔｙｒ３１Ａｓｐ、Ｇｌｙ３５Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１１８Ａｒｇ、Ｖａｌ１２１Ａｓｐ、Ｇｌｎ１７５Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１７６Ａｒｇ、Ｇｌｎ１８３Ａｌａ）によっても免疫処置した。この場合に、同じ腹子からの、但し導入遺伝子を有さない、５匹のきょうだいも対照として用いた。免疫処置プロトコールは次の通りであった：零時点において、血液サンプル（免疫前サンプル）をトランスジェニックと非トランスジェニックの各動物から逐次採取し；次に、各動物を完全フロイントアジュバンド（ＣＦＡ）の存在下で１００μg の抗原（マウスの群によって、ｗｔｈＩＬ−６又はＳａｎｔｌ）によって腹腔内（ＩＰ）免疫処置した。第１回免疫処置後１０日目に、血液サンプルを採取した（サンプル１）。第１回免疫処置後２０日目に、再び１００μg の抗原を用いて、不完全フロイントアジュバンド（ＩＦＡ）の存在下で第２回免疫処置をおこない（第１回追加免疫）、１０日間後に（第１回免疫処置から３０日間）第２回血液サンプルを採取した（サンプル２）。最後に、第１回免疫処置後４０日目に、再び１００μg の抗原を用いて、ＩＦＡの存在下で第３回免疫処置をおこない（第２回追加免疫）、１０日間後に（第１回免疫処置から５０日間）第３回血液サンプルを採取した（サンプル３）。血液サンプルの各々から先行技術（the state of the art）にしたがって、対応血清を調製した。この時点で、“ＥＬＩＳＡ”方法（固相酵素免疫測定法）を用いて、免疫処置に用いた抗原に対する抗体が第２サンプルと第３サンプルとから得られた血清中に存在するか否かを検査した。これをするために、免疫処置に用いた同じ抗原をこの種の実験のために特製した培養プレート（ＥＬＩＳＡプレート）の孔の底部に非共有結合式に結合させた。抗原の固定化はＩＸＰＢＳ中に１０μl ／ｍｌで溶解した抗原の溶液１００μl をコートされるべき各孔において室温において１４時間インキュベートすることによっておこなった（“コーティング”と名付けられた操作）。抗原の固定化後に、孔中のプラスチックをタンパク質でコートし、ＩＸＰＢＳ中の０．８％ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）の溶液を各孔において室温において４時間インキュベートした（“ブロッキング”と名付けられた操作）。“ブロッキング”溶液を除去した後に、適当に希釈した各血清１００μl を単独で各孔において室温で９０分間インキュベートした：この段階中に、血清中に孔の底部に固定化した抗原に対する抗体が存在する場合には、これらは抗原自体と結合して、次に孔の底部に結合する。９０分間のインキュベーション期間後に、血清を孔から取り出し、充分に洗浄した後に、マウス抗体に対するウサギ抗体を含有するＩＸＰＢＳ中０．８％ＢＳＡ１００μl を各孔に加え、室温においてインキュベーションを５０分間続けた。この段階中に、マウス抗体が認識され、これが孔の底部に固定化された抗原に結合するならば、これらのマウス抗体はウサギ抗体によって認識され、結合され、次に、ウサギ抗体が孔の底部に固定化される。さらに、ＤＡＫＯ社によって製造され、分配されるマウス抗体（上記実験のためにＰＢＳ／ＢＳＡ中で１：１００の比に希釈して用いる）に対するウサギ抗体は酵素、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼに共有結合する。５０分間のインキュベーション後に、ウサギ抗体を含有する溶液を取り出し、孔を充分に洗浄した。この時点で、ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼに対する基質（ＴＭＢ：３，−３’，−５，−５’−テトラメチル−ベンジジン−ジクロリド）を含有する溶液１００μl を各孔に加えた。酵素が基質を４５０ナノメートルにおいて可視光線を吸光する産物に転化する；このようにして、ＥＬＩＳＡリーダー（reader）を用いて、各単一孔中の４５０nmの吸光度の分光測光的測定によって転化量を算出することができる。この実験を正確におこなうならば、吸光度（即ち、吸収された光の量）は酵素量に比例し、次に、この酵素量はウサギ抗体量に比例し、次に、ウサギ抗体量は血清中に本来（originally）存在する抗原に対するマウス抗体の量に比例する。したがって、吸光度の測定は血清中に存在する抗原に対するマウス抗体の量の推定値を与える。このことは、抗原に対するマウス抗体が上記反応の連鎖を限定するファクターであるならば、事実である。したがって、適当な条件を得るためには、各血清に対して、免疫処置に用いた抗原に対するマウス抗体量が正確に測定されるために充分な大きさであるが、系を飽和するほどの大きさにはならないある一定の希釈度が存在するように、試験すべき各血清の一連の希釈（１：３３から１：８１００まで）を実施することが望ましい。野生型ＩＬ−６（ｗｔＩＬ−６）免疫処置実験の結果を各典型的正常マウスと典型的なＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスとに関して図１ａと１ｂに示す。図１ａから知ることができるように、正常マウスは、血清を１：８１００に希釈するときにさえもシグナルを検出することが可能であるほどに、多量の抗ｗｔＩＬ−６抗体を発生させた。これに反して、図１ｂから知ることができるように、トランスジェニックマウスは非常に低い量の抗体を発生させ：実際に、第２サンプルからの血清を１：３００の比で希釈し、第３サンプルからの血清を１：２７００の比で希釈すると、シグナルは停止する。全ての動物に関して比較可能である目的の測定を実施するために、同じ動物からの免疫前血清の最高読取り値よりも０．５Ｏ．Ｄ．₄₅₀高い読取り値を与える血清希釈度が慣用的に“ 抗体価(titer)”と呼ばれている。図１ａと１ｂは、正常マウスとＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスとに関して、それぞれ、第２サンプルと第３サンプルの抗体価がどのように算出されるかを示す。図２ａと２ｂは、それぞれ、典型的な正常マウスと典型的なＮＳＥ／ｈＩＬ− ６トランスジェニックマウスとの、ＩＬ−６の突然変異体Ｓａｎｔｌを用いた免疫処置に関する実験結果を示す。この場合に、両方のマウスは多量の抗Ｓａｎｔｌ抗体を発生させた。実際に、血清を１：８１００に希釈した場合にも比較的強いシグナルを検出することが可能である。図２ａと２ｂは、正常マウスとトランスジェニックマウスとに関して第２サンプルと第３サンプルの抗体価がどのように算出されるかを示す。表１は、この実験中に接種した全てのマウスに関する第２サンプルと第３サンプルの抗体価データ（上述したように算出）の要約を示す。ｗｔＩＬ−６抗原を接種したマウスに関して、動物毎の変異は別として、平均して、非トランスジェニックマウスがＮＳＥ／ＩＬ−６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答よりも１０〜２０倍強い抗体応答をｗｔＩＬ−６に対して発生させたことを知ることができ、このことはトランスジェニックマウスがヒトｈＩＬ−６の免疫寛容を発生させた事実を立証する。これに反して、抗原Ｓａｎｔｌを接種したマウスに関しては、さらに、動物毎の変異は別として、平均して、非トランスジェニックマウスがＮＳＥ／ｈＩＬ− ６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答に等しい抗体応答を発生させたことを知ることができ、このことは、ｈＩＬ−６中に導入されたときに、Ｓａｎｔｌを形成した７種の突然変異が突然変異体Ｓａｎｔｌを、さもなくばｈＩＬ−６に対して寛容を示す免疫系に対する完全な異種タンパク質(foreignprot ein)にすることを示唆する。実施例２Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６の血清中に発生した抗体はＳａｎｔｌのみでなく、野生型ｈＩＬ−６をも認識することができるこれは、Ｓａｎｔｌに対してマウスによって発生した抗体がＳａｎｔｌ自体のみでなく、野生型ｈＩＬ−６（ｗｔＩＬ−６）をも認識することができるか否かを試験することであった。この仮説をＥＬＩＳＡ試験を用いてさらに試験した。Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス中に発生した抗体が、ＥＬＩＳＡプレート孔の底部に固定化された同じ突然変異体Ｓａｎｔｌを認識し、結合することができるという事実を立証した後に、第２実験では野生型ＩＬ−６をＥＬＩＳＡプレート孔の底部に非共有結合式に結合させた。孔のプラスチックがＢＳＡによって飽和される段階後に、Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたマウスからの血清の希釈物をこれらの孔に加えて、ｗｔＩＬ−６を認識することができる抗体が存在するか否かを立証した。例えば、図３はＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに関する実験の結果を示す。この図から見ることができるように、Ｓａｎｔｌ及び野生型ＩＬ−６に関して得られた抗体応答は極めて類似する。換言すると、第３サンプルの血清中に、この血清を１：８１００の比に希釈する場合にも、孔の底部に固定化したｗｔＩＬ−６に結合した抗体の存在を検出することができる。ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスを野生型ＩＬ−６を用いて直接免疫処置する場合に、野生型ＩＬ −６自体に対する抗体応答が非常に低く：実際に、１：８１００に希釈した血清中に抗ｗｔＩＬ−６抗体を検出することが不可能であることに注目すべきである（図１参照）。他のＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスはこの実施例に例示したマウスの応答と同様な応答を示した。実施例３Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６中に発生した抗体は野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるこの目的は、Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに発生した、但し、野生型ＩＬ−６を認識することができる、これらの抗体が野生型ＩＬ−６自体の生物学的活性を中和することもできるか否かを試験することであった。考慮中の野生型ＩＬ−６の生物学的活性は、ヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞中のＣ−反応性タンパク質遺伝子プロモーターによる転写を刺激する能力であった。転写の刺激の効果は先行技術によって測定した（Gregory，B.，Savino，R．及びCiliberto，G．，J ．Immunological Methods，１７０，４７〜５６，１９９４）。２匹のＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス＃４と＃５（両方ともＳａｎｔｌによって免疫処置）からの第３サンプル中で得られた血清の連続希釈物の存在下で、ヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞を４ng／mlの野生型ＩＬ−６によって刺激した。この実験の結果は図４に示す。１：１００に希釈した両方の血清がヒトヘパトーム細胞に対する４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性をほぼ完全に阻害することを見ることができる。この時点において、野生型ｈＩＬ−６に対するこの交差反応性抗体応答の発生が、Ｓａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの血清中で測定された野生型ｈＩＬ−６のレベルを変化させることができるか否かに関して、研究をおこなった。ｈＩＬ−６レベルは先行技術に従い、“ サンドイッチ”ＥＬＩＳＡ試験によって、“Ｒ＆Ｄ System”社によって製造される商業的に入手可能なキットを用いて、製造者の指示に綿密に従って測定した。免疫前サンプルと第３サンプルの両方に見い出されるｈＩＬ−６レベルをＳａｎｔｌによって免疫処置された４匹のトランスジェニックマウスに関して測定した。結果は表２に要約する。この表から知ることができるように、Ｓａｎｔｌを用いて、Ｓａｎｔｌ自体とｗｔＩＬ−６の両方を認識する強い抗体応答を発生させる免疫処置は、Ｒ＆Ｄ Systemによって製造されたＥＬＩＳＡ“サンドイッチ”キットを用いてＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスの血清中で検出することができるｈＩＬ−６レベルを５００分の１より大きく平均的に低下させる。実施例４Ｓａｎｔｌを予防接種したＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスに発生した抗体はin viv oにおいても野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することができるＩＬ−６が肝臓による一連のタンパク質（“急性期タンパク質”と呼ばれる）の産生を誘導することは周知である。血清アミロイドＡ（以下ではＳＡＡと略記）は急性イベント中に大きい、迅速な増加を示す。この目的は、Ｓａｎｔｌを予防接種したＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに発生した、ｗｔＩＬ−６と交差反応することができる、これらの抗体が、ｈＩＬ−６の注入後のマウスＳＡＡ（ｍＳＡＡ）の増加の阻害として測定された、in vivo での野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるか否かを試験することであった。この目的のために、非免疫処置（対照）ＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスから、免疫処置されたｗｔｈＩＬ−６から、及びＳａｎｔｌ免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスから血液サンプル（以下では注入前サンプルと呼ぶ）を採取した。動物が採血から回復した後に、これらの動物に１０ μg のｗｔｈＩＬ−６を腹腔内注入した。この注入の９時間後に、両群の動物から第２血液サンプル（以下では、注入後サンプルと呼ぶ）を採取した。注入前サンプルと注入後サンプルの両方においてｍＳＡＡレベルを、先行技術に従い、 “サンドイッチ”ＥＬＩＳＡ試験によって、“Biosource International”社によって製造される商業的に入手可能なキットを用いて、製造者の指示に綿密に従って測定した。結果は表３に要約する。表から知ることができるように、動物毎の変異は別として、平均して、非免疫処置マウスでは１０μg のｈＩＬ−６の注入が血清ＳＡＡレベルの有意な増加を決定し、この増加は同量のｈＩＬ−６を注入されたＳａｎｔｌ接種マウスには存在しなかった。それ故、Ｓａｎｔｌによる予防接種は、Ｓａｎｔｌ自体とｗｔｈＩＬ−６の両方を認識する強い抗体応答を発生させるばかりでなく、ヒトヘパトーム細胞での in vitro でのｗｔＩＬ− ６生物学的活性を中和することができ、ｈＩＬ−６の注入によって誘導されたｍＳＡＡレベルの増加をin vivo で防止する、換言すると、in vivo においてもｈＩＬ−６の生物学的活性を中和する。注目すべきことに、野生型ｈＩＬ−６による免疫処置は少量の抗ｈＩＬ−６抗体の産生を誘導するが（実施例１参照）、これはｈＩＬ−６の注入によって誘導されるｍＳＡＡレベルの増加をin vivo で防止することができない、というのは、野生型ｈＩＬ−６によって免疫処置されたマウスは免疫処置されなかった対照マウスに観察された血清ＳＡＡレベルに匹敵する血清ＳＡＡレベルの増加を示すからである。実施例５異なるアジュバント、水酸化アルミニウム中で製剤化した、ｈＩＬ−６とＳａｎｔｌとによるＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの免疫処置異なる抗原が、異なるアジュバント中で製剤化されたときに、異なって挙動することは周知である（Gupta，R．K.と Siber，G．R.，Vaccine，１３，１２６３〜１２７６，１９９５）。実施例１に述べた免疫処置実験に用いた完全（又は不完全）フロイント・アジュバントは、副作用、主として、例えば肉芽腫及び嚢胞形成のような、注入部位における局所反応のために、ヒトに用いることができない（Gupta，R．K.と Siber，G．R.，Vaccine，１３，１２６３〜１２７６，１９９５）。この目的は、Ｓａｎｔｌに対する及びｗｔｈＩＬ−６にも対する高い抗体価での同じような免疫反応を、ヒトの予防接種に一般に用いられるアジュバントを用いて、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに起こすことができるかどうかを知ることであった。この目的のために、水酸化アルミニウムを選択した、というのは、水酸化アルミニウムが安全性の優れたトラックレコードを有し、現在ヒト使用のために一般的なアジュバンドであるからである(Gupta，R. K.とSiber，G．R.，Vaccine，１３，１２６３〜１２７６，１９９５）。８〜１０匹のＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス（これに加えて、対照として用いた、同じ腹子として生まれた１０匹の非トランスジェニックきょうだい）の群を、実施例１に述べたプロトコールと同じ免疫処置プロトコールを用いて、各注入に対して１mg／mlにおいて水酸化アルミニウム中で製剤化した１００μg の抗原（Ｓａｎｔｌ又は野生型ｈＩＬ−６のいずれか）を総量１００μ l（１００μg の水酸化アルミニウム）で腹腔内免疫処置した。次に、第２血液サンプル（第２回注入又は第１回追加免疫後に採取）と第３血液サンプル（第３回注入又は第２回追加免疫後に採取）とを、実施例１に述べた“ＥＬＩＳＡ”によって、免疫処置のために用いた抗原に対する抗体の存在に関して試験した。全ての動物に関して比較可能である、目的の測定を実施するために、同じ動物からの免疫前血清の最高読取り値よりも０．５Ｏ．Ｄ．₄₅₀高い読取り値を与える血清の希釈度が慣用的に“抗体価”と呼ばれている。抗体価は野生型ｈＩＬ −６及びＳａｎｔｌによって免疫処置された正常マウスとトランスジェニックマウスの両方に関して、図１ａ、１ｂ、２ａ及び２ｂに示したように測定した。結果は表４に報告する。一般に、この免疫処置実験で得られた、抗原に対する抗体量（抗体価）は、実施例１に述べた免疫処置実験において得られた抗体量に比べて高い；実際に、アルミニウムアジュバンドが血清抗体の誘導のために選択されたアジュバンドであるという事実は先行技術の一部である（Gupta，R．K.と Siber，G．R.，Vaccine ,１３，１２６３〜１２７６，１９９５）。さらに詳しくは、ｗｔｈＩＬ−６抗原によって免疫処置されたマウスに関して、（動物毎の変異を別として）、平均して、非トランスジェニックマウスが、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答よりも１２〜１８倍強い、ｗｔｈＩＬ−６に対する抗体応答を発生したことを再び見ることができる、このことは、トランスジェニックマウスが、この抗原をアジュバントとしての水酸化アルミニウム中で製剤化された状態で注入されたときにも、ヒトＩＬ−６に対して免疫寛容を発生させたという事実の証拠である。これに反して、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌで免疫処置されたマウスに関しては、この場合にも、平均して、非トランスジェニックマウスが、実施例１に述べた免疫処置実験におけると同様に、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答に等しい抗体応答を発生したことを知ることができ、このことは７種の突然変異（ｈＩＬ−６中に導入されたときにＳａｎｔｌを形成した）がこの突然変異体を水酸化アルミニウム中で製剤化されたときにも完全な異種タンパク質にしたことを示唆する。実施例６水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスの血清中に発生した抗体はＳａｎｔｌのみでなく野生型ｈＩＬ− ６をも認識することができるこれは、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥマウス中でＳａｎｔｌに対して発生した抗体が野生型ｈＩＬ−６（ｗｔｈＩＬ−６）と交差反応することができるかどうかを試験することであった。このことをさらに、実施例２に述べた同じ方法を用いて、“ＥＬＩＳＡ”によって試験した。抗体価は既述し、図１ａ、１ｂ、２ａ及び２ｂに示したように算出し、得られたデータを表５に報告する。水酸化アルミニウムを免疫処置のためのアジュバンドとして用いる場合にも、再び、Ｓａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６とに対する抗体価は同じである。この場合にも、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスを野生型ｈＩＬ−６によって免疫処置したときに、野生型ｈＩＬ−６自体に対する抗体応答が非常に低いことに注目すべきである：例えば、第３血液サンプルでは、Ｓａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス群における２２８００のｗｔｈＩＬ−６に対する平均抗体価（１３倍高い）に比べて、ｗｔｈＩＬ−６によって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス群ではｗｔｈＩＬ−６に対する平均抗体価は７３７である（実施例５参照）。実施例７水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス中に発生した抗体は野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるこの目的は、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス中に発生した、野生型ｈＩＬ− ６を認識することができる、これらの抗体が、野生型ｈＩＬ−６自体の生物学的活性を中和することもできるか否かを試験することであった。考慮中の野生型ＩＬ−６の生物学的活性はヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞におけるＣ−反応性遺伝子プロモーターによる転写を刺激する能力であった。転写刺激効果は先行技術によって測定した（Gregory，B.，Savino，R．及び Ciliberto ,G.，J．Immunological Methods，１７０，４７〜５６，１９９４）。ヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞を４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６によって刺激し、この刺激度を１００％と見なした、又はＳａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６の両方によって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスからの第３血液サンプルから得られた血清の連続希釈物の存在下での４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６によって刺激した；後者の場合に、転写刺激度を４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６のみと共にインキュベートした細胞中で得られた刺激の％として表現した。この実験の結果は図５ａと５ｂに示す。１：４００に希釈した、全てのマウスの血清がヒトヘパトーム細胞に対する４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を殆ど完全に阻害することを見ることができる。それ故、ヒトヘパトーム細胞に対する、外因的に加えられたｈＩＬ−６の生物活性(bioactivity)を中和する能力は、ＣＦＡによって免疫処置された動物の場合におけるよりも水酸化アルミニウムによって免疫処置された動物の血清に関していっそう高かった（実施例３を参照し、図５ａを図４と比較すること）。ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスを野生型ｈＩＬ−６によって免疫処置された場合には、得られた非常に少量の抗ｈＩＬ−６抗体はヒトヘパトーム細胞に対する野生型ｈＩＬ−６生物学的活性を阻害するために充分ではない（図５ｂ参照）。この場合にも、野生型ｈＩＬ−６に対するこの交差反応性免疫応答の発生が、Ｓａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６の両方によって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ− ６トランスジェニックマウスの血清中で測定された野生型ｈＩＬ−６のレベルを変化させることができるか否かに関して、研究をおこなった。ｈＩＬ−６・レベルを両群のマウスの免疫前サンプルと第３サンプルの両方において実施例３に述べたように測定した。結果は表６に要約する。表から知ることができるように、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを用いた、Ｓａｎｔｌ自体と野生型ｈＩＬ−６の両方を認識する強い抗体応答を出現させる予防接種はまた、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの血清中で検出されることができるｈＩＬ−６のレベルを約１，４００分の１に平均的に低下させる。同じアジュバント中で製剤化された野生型ｈＩＬ−６自体を用いた免疫処置は血清中で検出されることができるｈＩＬ−６レベルをごく軽度に低下させる（１，４００分の１に比べて３分の１）。実施例８水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス中に発生した抗体は、in vivo においてもｗｔｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるこの目的は、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス中に発生した、ｗｔＩＬ−６を認識することができる、これらの抗体が、実施例４に述べたように、ｈＩＬ−６の注入によってマウス中に誘導されたマウスＳＡＡ（ｍＳＡＡ）血清レベルの増加として測定される、in vivo での野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるか否かを試験することである。この実験は、免疫処置されない（対照）ＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスと、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌによって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスに対して、実施例４に述べたように、おこなった。結果は表７に要約する。表から知ることができるように、動物毎の変異を別として、免疫処置されないマウスにおいて、再び平均して、１０μg のｈＩＬ−６の注入が血清ＳＡＡレベルの５倍〜６倍の増加を決定した。同量のｈＩＬ−６を注入された、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたマウスでは、この増加が得られなかった。それ故、Ｓａｎｔｌによる予防接種は、Ｓａｎｔｌ自体とｗｔｈＩＬ−６の両方を認識し、ヒトヘパトーム細胞において in vitro でｗｔｈＩＬ−６生物学的活性を中和することができる、強い抗体応答を出現させるばかりでなく、ｈＩＬ−６の注入によって誘導されるｍＳＡＡレベルの増加をin vivo 防止する、換言すると、in vivo においてもｈＩＬ−６の生物学的活性を中和する。実施例９皮内投与ルートによる水酸化アルミニウム中で製剤化されたｈＩＬ−６とＳａｎｔｌによるＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの予防接種上記実施例５、６、７及び８は、さもなくばｗｔｈＩＬ−６に対して寛容である動物に、ヒト使用に適合しうるアジュバント（水酸化アルミニウム）中で製剤化されたｈＩＬ−６の突然変異体（Ｓａｎｔｌ）を用いることによって、in v itro とin vivo の両方においてｈＩＬ−６生物活性を中和することができる、ｗｔｈＩＬ−６自体に対する強い抗体応答を得ることが可能であることを示す。しかし、実施例５に述べた免疫処置実験では、ヒトにおける免疫処置に一般に用いられる投与ルートではない腹腔内ルートによって、抗原を注入した。この目的は、Ｓａｎｔｌに対して及びｗｔｈＩＬ−６に対しても高抗体価の抗体による同じような免疫応答を、ヒトの予防接種に用いた投与ルートを用いて、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスに惹起することができるかどうかを知ることであった。８〜９匹のＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス（これに加えて、対照として用いた、同じ腹子として生まれた１０匹の非トランスジェニックきょうだい）の群を、先行技術に述べられたように、数種類のワクチンの投与のために現在用いられるヒトにおける皮下（Ｓ．Ｃ．）投与ルートに相当する、マウスにおける皮内（Ｉ．Ｄ．）投与ルートによって、免疫処置した。この場合にも、実施例１に述べたプロトコールと同じ免疫処置プロトコールを用いて、１mg／mlにおいて水酸化アルミニウム中で製剤化した１００μg の抗原（Ｓａｎｔｌ又は野生型ｈＩＬ−６のいずれか）を総量１００μl（１００μg の水酸化アルミニウム）で、各注入に対して用いた。次に、第２血液サンプル（第２回注入又は第１回追加免疫後に採取）と第３血液サンプル（第３回注入又は第２回追加免疫後に採取）とを、実施例１に既に述べた方法と同じの“ＥＬＩＳＡ”方法によって、免疫処置のために用いた抗原に対する抗体の存在に関して試験した。全ての動物に関して比較可能である、目的の測定を実施するために、同じ動物からの免疫前血清の最高読取り値よりも０．５Ｏ．Ｄ．₄₅₀高い読取り値を与える血清の希釈度が慣用的に“抗体価”と呼ばれている。抗体価は野生型ｈＩＬ −６及びＳａｎｔｌによって免疫処置された正常マウスとトランスジェニックマウスの両方に関して、図１ａ、１ｂ、２ａ及び２ｂに示したように測定した。結果は表８に報告する。この場合にも、ｗｔｈＩＬ−６抗原によって免疫処置されたマウスに関して、（動物毎の変異を別として）、平均して、非トランスジェニックマウスが、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答よりも４０〜５０倍強い、ｗｔｈＩＬ−６に対する抗体応答を発生したことを再び見ることができる、このことは、トランスジェニックマウスが、この抗原を水酸化アルミニウム中で製剤化されて、皮内投与ルートを介して注入されたときにも、ヒトＩＬ−６に対して免疫寛容を発生させたという事実の証拠である。これに反して、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌで免疫処置されたマウスに関しては、この場合にも、平均して、非トランスジェニックマウスが、実施例１と５に述べた免疫処置実験におけると同様に、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスにおいて得られた抗体応答に等しい抗体応答を発生したことを知ることができ、このことは７種の置換（ｈＩＬ−６中に導入されたときにＳａｎｔｌを形成した）がこの突然変異体を水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内投与ルートを介して注入されたときにも完全な異種タンパク質にしたことを示唆する。実施例１０水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスの血清中に発生した抗体はＳａｎｔｌのみでなく野生型ｈＩＬ− ６をも認識することができるこれは、水酸化アルミニウム中で製剤化されたＳａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥマウス中でＳａｎｔｌに対して発生した抗体が野生型ｈＩＬ−６（ｗｔｈＩＬ−６）と交差反応することができるかどうかを試験することであった。このことをさらに、実施例２に述べた同じ方法を用いて、“ＥＬＩＳＡ”によって試験した。抗体価は既述し、図１ａ、１ｂ、２ａ及び２ｂに示したように算出し、得られたデータを表９に報告する。再び、今度は皮内投与ルートによって、水酸化アルミニウムを免疫処置のためのアジュバンドとして用いる場合にも、Ｓａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６とに対する抗体価は極めて類似する。さらに、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスを野生型ｈＩＬ−６によって免疫処置したときに、野生型ｈＩＬ−６自体に対する抗体応答が非常に低いことに注目すべきである：例えば、第３血液サンプルでは、Ｓａｎｔｌを予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス群における９４００のｗｔｈＩＬ−６に対する平均抗体価（７０倍高い）に比べて、ｗｔｈＩＬ−６によって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス群ではｗｔｈＩＬ −６に対する平均抗体価は１３９である（実施例９参照）。実施例１１水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス中に発生した抗体は野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することもできるこの目的は、水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス中に発生した、これらの抗体が、野生型ｈＩＬ−６自体の生物学的活性を中和することもできるか否かを試験することであった。再び、考慮中の野生型ＩＬ−６の生物学的活性はヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞におけるＣ−反応性遺伝子プロモーターによる転写を刺激する能力であった。転写刺激効果は先行技術によって測定した（Gregory，B.，Savino，R．及びCili berto，G.，J．Immunological Methods，１７０，４７〜５６，１９９４）。実施例７におけると同様に、ヒトＨｅｐ３Ｂヘパトーム細胞を４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６によって刺激し、この刺激度を１００％と見なした、又はＳａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６の両方によって皮内的に免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスからの第３血液サンプルから得られた血清の連続希釈物の存在下での４ng／ mlの野生型ｈＩＬ−６によって刺激した；後者の場合に、転写刺激度を４ng／ml の野生型ｈＩＬ−６のみと共にインキュベートした細胞中で得られた刺激の％として表現した。この実験の結果は図６ａと６ｂに示す。１：４００に希釈した、全てのマウスの血清がヒトヘパトーム細胞に対する４ng／mlの野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性の８０％以上を阻害することを見ることができる。再び、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスを野生型ｈＩＬ−６によって免疫処置する場合には、得られた非常に少量の抗ｈＩＬ−６抗体はヒトヘパトーム細胞に対する野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性を阻害するために充分ではないことに注目すべきである（図６ｂ参照）。この場合にも、野生型ｈＩＬ−６に対するこの交差反応性免疫応答の発生が、Ｓａｎｔｌと野生型ｈＩＬ−６の両方によって免疫処置されたＮＳＥ／ｈＩＬ− ６トランスジェニックマウスの血清中で測定された野生型ｈＩＬ−６のレベルを変化させることができるか否かに関して、研究をおこなった。ｈＩＬ−６・レベルを両群のマウスの免疫前サンプルと第３サンプルの両方において実施例３に述べたように測定した。結果は表１０に要約する。表から知ることができるように、水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによる予防接種は、Ｓａｎｔｌ自体と野生型ｈＩＬ−６の両方を認識する強い抗体応答を出現させるばかりでなく、ＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウスの血清中で検出されることができるｈＩＬ−６のレベルを約３５０分の１に平均的に低下させる。これに反して、同じアジュバント中で製剤化された野生型ｈＩＬ−６自体を用いた免疫処置は、血清中で検出されることができるｈＩＬ−６レベルをごく軽度に低下させる（３５０分の１に比べて２．４分の１）。実施例１２水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウス中に発生した抗体はin vivo においてもｗｔｈＩＬ−６の生物学的活性を中和することができるこの目的は、水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６トランスジェニックマウス中に発生した、これらの抗体が、実施例４に述べたように、ｈＩＬ−６の注入によってマウス中に通常誘導されるマウスＳＡＡ（ｍＳＡＡ）血清レベルの増加である、in vivo での野生型ｈＩＬ−６の生物学的活性の１種を中和することもできるか否かを試験することであった。この実験は、水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたＮＳＥ／ｈＩＬ−６マウスに対して、実施例４に述べたように、おこなった。得られた値を実施例４（表３）と実施例８（表７）に述べた実験の対照の免疫処置されないマウスと比較した。結果は表１１に要約する。表から知ることができるように、動物毎の変異を別として、再び平均して、免疫処置されないマウスにおいてｈＩＬ−６注入によって惹起されたＳＡＡレベルの７倍の増加は、水酸化アルミニウム中で製剤化され、皮内注入されたＳａｎｔｌによって予防接種されたマウスでは、存在しなかった。それ故、ヒトにおける使用に適合可能な、アジュバントと投与ルートとによっておこなわれた、Ｓａｎｔｌによる予防接種は、Ｓａｎｔｌ自体とｗｔｈＩＬ −６の両方を認識し、ヒトヘパトーム細胞に対する in vitro でのｗｔｈＩＬ −６生物学的活性を中和することができる、強い抗体応答を出現させるばかりでなく、ｈＩＬ−６の注入によって誘導されるｍＳＡＡレベルの増加を in vivo防止する、換言すると、in vivo においてもｈＩＬ−６の生物学的活性を中和する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月１４日【補正内容】請求の範囲１．サイトカインの受容体アンタゴニストでもある、野生型サイトカインのミューティンの、特定の野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療又は予防のための薬剤組成物を製造するための免疫原としての使用。２．野生型サイトカインがヒトインターロイキン−６である、請求項１記載の野生型サイトカインのミューティンの使用。３．例えば慢性自己免疫障害、全身性エリテマトーデス、黒色腫／プラズマ細胞腫、閉経後骨粗しょう症及び癌悪液質のような、野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療又は予防のための、請求項２記載のヒトインターロイキン−６のミューティンの使用。４．その過剰産生が疾患を惹起する野生型サイトカインに対する免疫処置のためのワクチンであって、希釈剤、賦形剤又は製薬的に受容されるビヒクル中に薬剤的有効量で、該サイトカインの受容体アンタゴニストでもある、該サイトカインの少なくとも１種のミューティンを有効成分として含有するワクチン。５．その過剰産生が例えば慢性自己免疫障害、全身性エリテマトーデス、黒色腫／プラズマ細胞腫、閉経後骨粗しょう症及び癌悪液質のような疾患を惹起するヒトインターロイキン−６に対する免疫処置のための、請求項４記載のワクチン。６．突然変異：Ｔｙｒ３１Ａｓｐ、Ｇｌｙ３５Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１１８Ａｒｇ、Ｖａｌ１２１Ａｓｐ、Ｇｌｎ１７５Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１７６Ａｒｇ、Ｇｌｎ１８３Ａｌａを含有する、Ｓａｎｔｌと呼ばれるヒトインターロイキン−６（ｈＩＬ−６）のミューティンを有効成分として含有する、請求項５記載のワクチン。７．１回の注入につきミューティン０．１〜１００μg の量で３回皮下注入されるべき、水酸化アルミニウム中で１mg／mlにおいて製剤化されたミューティンＳａｎｔｌを有効成分として含有する、請求項６記載のワクチン。８．ｈＩＬ−６をｈＩＬ−６受容体アンタゴニストにすることができるアミノ酸置換を含有する、任意のバージョンのｈＩＬ−６を有効成分として含有する、請求項５記載のワクチン。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者コルテセ，リカルドイタリア国アイ − 00144 ローマ, ビアマッシミリアノマッシモ，16

Claims

【特許請求の範囲】１．サイトカインの受容体アンタゴニストでもある、野生型サイトカインのミューティンの、特定の野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療又は予防のための薬剤組成物を製造するための免疫原としての使用。２．野生型サイトカインがヒトインターロイキン−６である、請求項１記載の野生型サイトカインのミューティンの使用。３．例えば慢性自己免疫障害、全身性エリテマトーデス、黒色腫／プラズマ細胞腫、閉経後骨粗しょう症及び癌悪液質のような、野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療又は予防のための、請求項２記載のヒトインターロイキン−６のミューティンの使用。４．野生型サイトカインの過剰産生によって惹起される疾患の治療又は予防のための薬剤コンパウンドであって、該野生型サイトカインの少なくとも１種のミューティンを有効成分として薬理学的有効量で含有することを特徴とする薬剤コンパウンド。５．必要である投与形態を留意して、適当に選択され、添加された希釈剤、賦形剤又は製薬的ビヒクルを含有する、請求項４記載の薬剤製剤。６．その過剰産生が疾患を惹起する野生型サイトカインに対する免疫処置のための請求項４記載のワクチンであって、希釈剤、賦形剤又は製薬的受容されるビヒクル中に製薬的有効量で該サイトカインの少なくとも１種のミューティンを有効成分として含有する前記ワクチン。７．その過剰産生が例えば慢性自己免疫障害、全身性エリテマトーデス、黒色腫／プラズマ細胞腫、閉経後骨粗しょう症及び癌悪液質のような疾患を惹起するヒトインターロイキン−６に対する免疫処置のための、請求項６記載のワクチン。８．突然変異：Ｔｙｒ３１Ａｓｐ、Ｇｌｙ３５Ｐｈｅ、Ｓｅｒ１１８Ａｒｇ、Ｖａｌ１２１Ａｓｐ、Ｇｌｎ１７５Ｉｌｅ、Ｓｅｒ１７６Ａｒｇ、Ｇｌｎ１８３Ａｌａを含有する、Ｓａｎｔｌと呼ばれるヒトインターロイキン−６（ｈＩＬ−６）のミューティンを有効成分として含有する、請求項７記載のワクチン。９．１回の注入につきミューティン０．１〜１００μg の量で３回皮下注入されるべき、水酸化アルミニウム中で１mg／mlにおいて製剤化されたミューティンＳａｎｔｌを有効成分として含有する、請求項８記載のワクチン。 10．ｈＩＬ−６をｈＩＬ−６受容体アンタゴニストにすることができるアミノ酸置換を含有する、任意のバージョンのｈＩＬ−６を有効成分として含有する、請求項７記載のワクチン。