JPH1057049A - 微生物の保存剤及び保存方法 - Google Patents

微生物の保存剤及び保存方法

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JPH1057049A
JPH1057049A JP8216398A JP21639896A JPH1057049A JP H1057049 A JPH1057049 A JP H1057049A JP 8216398 A JP8216398 A JP 8216398A JP 21639896 A JP21639896 A JP 21639896A JP H1057049 A JPH1057049 A JP H1057049A
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JP
Japan
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preservative
salt
acid
carboxylic acid
microorganisms
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JP8216398A
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Seishi Sawaji
聖之 澤路
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Japan Tobacco Inc
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Japan Tobacco Inc
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Publication date
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    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/04Preserving or maintaining viable microorganisms

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  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
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  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
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Abstract

(57)【要約】 【解決手段】 カルボン酸、カルボン酸の塩、もしくは
カルボン酸のエステルと糖類とを有効成分として含有す
る微生物の保存剤、及び当該保存剤に微生物を懸濁し、
該懸濁液を保存することを特徴とする微生物の保存方
法。 【効果】 従来、保存中に急速に活性が低下するため用
途が限られていた微生物の活性を、長期間、維持させる
ことができる。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【発明の属する技術分野】本発明は、かび、酵母、細菌
等の微生物を、活性を保持したまま長期間保存するため
の微生物の保存剤及びそれを用いた微生物の保存方法に
関する。
【0002】
【従来の技術】かび、酵母、細菌等の微生物を低温条件
下で保存する方法は、最も簡便な方法として一般的に用
いられている。また、微生物の細胞、菌体、胞子等を滅
菌蒸留水や燐酸緩衝液等の液体に浸漬し、密栓して室温
(25℃)で保存する方法(微生物の長期保存方法、農林
水産省関連、農林水産省昭和62年10月発行、pp9-10)等
もある。
【0003】しかし、エピコッコソラス属に属する微生
物は、従来法での保存が著しく困難で、一旦培養した菌
体を活性を保持したまま長時間保存する方法の開発が望
まれていた。
【0004】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、かび、酵
母、細菌等の微生物を、活性を保持したまま長時間保存
する手段を提供することを目的とする。
【0005】
【課題を解決するための手段】本発明者は、上記課題を
達成するため、鋭意検討した結果、微生物をカルボン酸
等と糖類とを含む溶液中に懸濁して保存することにより
活性を保持したまま長時間保存できることを見いだし、
本発明を完成した。即ち、本発明は、カルボン酸、カル
ボン酸の塩もしくはカルボン酸のエステルと糖類とを有
効成分として含有することを特徴とする微生物の保存剤
である。また、本発明は、上記記載の保存剤に微生物を
懸濁し、該懸濁液を保存することを特徴とする微生物の
保存方法である。
【0006】以下、本発明を詳細に説明する。最初に本
発明の保存剤について説明する。本発明の保存剤は、カ
ルボン酸、カルボン酸の塩、もしくはカルボン酸のエス
テルと糖類とを有効成分として含有する。本発明に用い
るカルボン酸は、脂肪族カルボン酸(脂肪酸)及び芳香
族カルボン酸のいずれでもよい。
【0007】好ましい脂肪酸もしくは脂肪酸の塩は、下
記の一般式(I) (R−COO) n A (I) で表すことができる。ここで、Rは炭素数2から10の炭
化水素を表し、直鎖状であっても分枝状であってもよ
く、飽和であっても不飽和であってもよい。Aは水素原
子、アルカリ金属、またはアルカリ土類金属を表す。n
は1または2を表す。Rの具体的な例としては、例え
ば、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル
基、ブチル基、イソブチル基などが挙げられる。Aのア
ルカリ金属の具体的な例としては、カリウム、ナトリウ
ムなどが挙げられ、アルカリ土類金属としては、カルシ
ウム、マグネシウムなどが挙げられる。一般式(I)で
表される具体的な化合物としては、例えば、プロピオン
酸、プロピオン酸ナトリウム、プロピオン酸カルシウ
ム、酪酸、吉草酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウムな
どが挙げられる。なかでも、プロピオン酸及びその塩、
ソルビン酸及びその塩を好ましい化合物として例示で
き、更に、プロピオン酸の塩としてはプロピオン酸ナト
リウムを、ソルビン酸の塩としてはソルビン酸カリウム
を、特に好ましい塩として例示できる。
【0008】好ましい芳香族カルボン酸、芳香族カルボ
ン酸の塩、もしくは芳香族カルボン酸のエステルは、下
記の一般式(II)
【0009】
【化2】
【0010】で表すことができる。ここで、R1 は、水
素原子、アルカリ金属、又はアルキル基を表し、R2
水素原子または水酸基を表す。R1 の具体的な例として
は、アルカリ金属としては、例えば、ナトリウム、カリ
ウムなど、アルキル基としては、例えば、メチル基、エ
チル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソ
ブチル基などが挙げられる。一般式(II)で表される具
体的な化合物としては、例えば、安息香酸、安息香酸ナ
トリウム、パラオキシ安息香酸エチル、パラオキシ安息
香酸プロピル、パラオキシ安息香酸イソプロピル、パラ
オキシ安息香酸ブチル、パラオキシ安息香酸イソブチ
ル、サリチル酸などが挙げられる。なかでも、安息香酸
およびその塩が好ましく、安息香酸塩の中でも安息香酸
ナトリウムが特に好ましい。以上例示したカルボン酸等
は、単独で用いてよく、複数の物質を混合して用いても
よい。
【0011】保存剤中のカルボン酸等の濃度は、特に限
定されないが、脂肪酸もしくは脂肪酸の塩の場合は、
0.005%〜10%が好ましく、芳香族カルボン酸、
芳香族カルボン酸の塩、芳香族カルボン酸のエステルの
場合は、0.01%〜5%が好ましい。カルボン酸等と
して、特にプロピオン酸及びその塩を用いた場合には
0.01%〜5%が好ましく、特に好ましくは、0.1
〜5%である。また、ソルビン酸及びソルビン酸カリウ
ムを用いた場合には0.005%〜5%が好ましく、特
に好ましくは、0.01〜0.1%である。さらに、安
息香酸及び安息香酸ナトリウムを用いた場合には0.0
1%〜1%が好ましく、特に好ましくは、0.01〜
0.1%である。
【0012】本発明に用いる糖類は、単糖類、二糖類、
多糖類のいずれでもよく、単糖類としては、五炭糖のア
ラビノース、キシロース、リボースなどが、六炭糖のグ
ルコース、フラクトース、マンノース、ガラクトース、
ラムノースなどが、二糖類としては、マルトース、セロ
ビオース、トレハロース、ゲンチオビオース、ラクトー
ス、シュークロースなどが、多糖類としては、デキスト
リン、シクロデキストリン(α−、β−、γ−)、可溶
性デンプンなどが、それぞれ挙げられる。これらの中で
も二糖類を用いるのが好ましく、特にシュークロース又
はマルトースを用いるのが好ましい。以上例示した糖類
は、単独で用いてもよく、複数の糖類を混合して用いて
もよい。
【0013】保存剤中の糖類の濃度は、特に限定されな
いが、20%〜70%が好ましく、30%〜60%が更
に好ましく、特に好ましくは40%である。本発明の保
存剤は、上記したカルボン酸等と糖類とを適当な溶媒、
例えば、水に溶解させて調製する。保存剤中のpHは、
3〜10、より好ましくは、4〜8に維持するのが望ま
しい。
【0014】次に、本発明の保存方法について説明す
る。本発明の保存方法は、上記の保存剤中に微生物を懸
濁し、該懸濁液を保存することにより微生物を保存す
る。本発明の対象となる微生物としては、特に制限はな
く、かび、酵母、細菌等の微生物であればいかなるもの
でもよい。好ましい微生物としては、例えば、エピコッ
コソラス属に属する微生物を挙げることができ、それら
の中でも特にエピコッコソラス・ネマトスポラスK−0
35菌株(工業技術院生命工学工業技術研究所寄託FERM
BP-4477、原寄託日平成5年11月25日)等が好ましい。
この微生物の培養は、特別な方法を用いる必要はなく、
微生物一般に適用される培養法を採用することができ
る。培地としては、資化可能な炭素源、例えば、グルコ
ース、シュークロース等、窒素源、例えば、硫酸アンモ
ニウム、無機物、例えば、リン酸塩、マグネシウム塩、
カルシウム塩、硫酸第一鉄および必要な生育促進物質を
適宜含有する培地であれば、合成培地、天然培地のいず
れも用いることができる。培地のpHおよび培養温度は、
微生物が生育できる範囲であれば特に制限はない。培養
後の菌体は、微生物を死滅させないような緩衝液または
水等で洗浄することにより得られる。
【0015】保存時の温度条件は、微生物が生存する温
度であれば特に限定はないが、−10〜30℃が好まし
く、10℃以下が更に好ましい。保存剤1ml当たりの微
生物の数は、1×105 個〜1×108 個程度が好まし
い。
【0016】
【発明の実施の形態】
【0017】
【実施例】
〔実施例1〕プロピオン酸ナトリウム又はソルビン酸カ
リウムと、シュークロース又はマルトースからなる保存
剤1乃至12に、エピコッコソラス・ネマトスポラス K
−035菌株の分生子を懸濁し(K−035菌株分生子
量:1×105 /保存剤1ml当たり)、微生物懸濁液を
調製した。また、生理食塩水及び蒸留水にも上記分生子
を同様に懸濁し、対照とした。微生物懸濁液は5℃で保
存し、2週間後及び8週間後の生存率を測定した。生存
率は、保存した微生物懸濁液を定量寒天培地に分注、塗
布した後、25℃に静置し、培地上に発生したコロニー数
を測定することにより、評価した。この結果を表1に示
す。
【0018】
【表1】
【0019】表1に示すように、対照として用いた生理
食塩水及び蒸留水、並びにプロピオン酸ナトリウム、ソ
ルビン酸カリウム、シュークロース、マルトースの単独
による保存では、生存率が著しく低下したのに対し、保
存剤1乃至12による保存では、生存率の低下がほとんど
みられなかった。
【0020】〔実施例2〕安息香酸ナトリウムと、シュ
ークロース又はマルトースからなる保存剤1乃至6に、
エピコッコソラス・ネマトスポラス K−035菌株の
分生子を懸濁し(K−035菌株分生子量:1×105
/保存剤1ml当たり)、微生物懸濁液を調製した。ま
た、生理食塩水及び蒸留水にも上記分生子を同様に懸濁
し、対照とした。微生物懸濁液は5℃で保存し、2週間
後及び8週間後の生存率を測定した。生存率は、保存し
た微生物懸濁液を定量寒天培地に分注、塗布した後、25
℃に静置し、培地上に発生したコロニー数を測定するこ
とにより、評価した。この結果を表2に示す。
【0021】
【表2】
【0022】対照として用いた生理食塩水及び蒸留水、
並びに安息香酸ナトリウム、マルトース、シュークロー
スの単独による保存では、生存率が著しく低下したのに
対し、保存剤1乃至6による保存では、生存率の低下が
ほとんどみられなかった。
【0023】
【発明の効果】本発明の保存剤及び保存方法を用いるこ
とにより、従来、保存中に急速に活性が低下するため用
途が限られていた微生物の活性を、長期間、維持させる
ことができる。

Claims (17)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】 カルボン酸、カルボン酸の塩、もしくは
    カルボン酸のエステルと糖類とを有効成分として含有す
    ることを特徴とする微生物の保存剤。
  2. 【請求項2】 カルボン酸もしくはカルボン酸の塩が、
    脂肪酸もしくは脂肪酸の塩であることを特徴とする請求
    項1記載の微生物の保存剤。
  3. 【請求項3】 脂肪酸もしくは脂肪酸の塩が、下記の一
    般式(I) (R−COO) n A (I) (Rは炭素数2から10の炭化水素を表し、直鎖状であっ
    ても分枝状であってもよく、飽和であっても不飽和であ
    ってもよい。Aは水素原子、アルカリ金属、またはアル
    カリ土類金属を表す。nは1または2を表す。)で表さ
    れることを特徴とする請求項2記載の微生物の保存剤。
  4. 【請求項4】 脂肪酸もしくは脂肪酸の塩が、プロピオ
    ン酸もしくはプロピオン酸の塩、又はソルビン酸もしく
    はソルビン酸の塩であることを特徴とする請求項2記載
    の微生物の保存剤。
  5. 【請求項5】 プロピオン酸もしくはプロピオン酸の塩
    の保存剤中の濃度が、0.01〜5%であることを特徴
    とする請求項4記載の微生物の保存剤。
  6. 【請求項6】 プロピオン酸の塩が、プロピオン酸ナト
    リウムであることを特徴とする請求項4又は5記載の微
    生物の保存剤。
  7. 【請求項7】 ソルビン酸もしくはソルビン酸の塩の保
    存剤中の濃度が、0.005〜5%であることを特徴と
    する請求項4記載の微生物の保存剤。
  8. 【請求項8】 ソルビン酸の塩が、ソルビン酸カリウム
    であることを特徴とする請求項4又は7記載の微生物の
    保存剤。
  9. 【請求項9】 カルボン酸、カルボン酸の塩、もしくは
    カルボン酸のエステルが、芳香族カルボン酸、芳香族カ
    ルボン酸の塩、もしくは芳香族カルボン酸のエステルで
    あることを特徴とする請求項1記載の微生物の保存剤。
  10. 【請求項10】 芳香族カルボン酸、芳香族カルボン酸
    の塩、もしくは芳香族カルボン酸のエステルが、下記の
    一般式(II) 【化1】 (R1 は水素原子、アルカリ金属又はアルキル基を表
    し、R2 は水素原子又は水酸基を表す。)で表されるこ
    とを特徴とする請求項9記載の微生物の保存剤。
  11. 【請求項11】 芳香族カルボン酸もしくは芳香族カル
    ボン酸の塩が、安息香酸もしくは安息香酸の塩であるこ
    とを特徴とする請求項9記載の微生物の保存剤。
  12. 【請求項12】 安息香酸の塩が、安息香酸ナトリウム
    であることを特徴とする請求項11記載の微生物の保存
    剤。
  13. 【請求項13】 安息香酸ナトリウムの保存剤中の濃度
    が、0.01〜1%であることを特徴とする請求項12
    記載の微生物の保存剤。
  14. 【請求項14】 糖類が、シュークロースまたはマルト
    ースであることを特徴とする請求項1乃至13に記載の
    微生物の保存剤。
  15. 【請求項15】 シュークロースまたはマルトースの保
    存剤中の濃度が、30〜60%であることを特徴とする請求
    項14記載の微生物の保存剤。
  16. 【請求項16】 請求項1乃至15に記載の保存剤に微
    生物を懸濁し、該懸濁液を保存することを特徴とする微
    生物の保存方法。
  17. 【請求項17】 微生物が、エピコッコソラス属に属す
    る微生物であることを特徴とする請求項16記載の微生
    物の保存方法。
JP8216398A 1996-08-16 1996-08-16 微生物の保存剤及び保存方法 Pending JPH1057049A (ja)

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JP2001129580A (ja) * 1999-11-02 2001-05-15 Kl Plant Kk 油脂含有排水の処理装置

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